JPS6071958A - 酵素免疫測定法 - Google Patents
酵素免疫測定法Info
- Publication number
- JPS6071958A JPS6071958A JP17991083A JP17991083A JPS6071958A JP S6071958 A JPS6071958 A JP S6071958A JP 17991083 A JP17991083 A JP 17991083A JP 17991083 A JP17991083 A JP 17991083A JP S6071958 A JPS6071958 A JP S6071958A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- galactosidase
- solution
- enzyme
- antigen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/581—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with enzyme label (including co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or substrates)
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、酵素免疫測定法における新規な手法であり、
更に詳しくはβ−Ｄ−ガラクトシダーゼを標識酵素とし
て使用する酵素免疫法における定量を、発光法によって
行なう手法に関する。
更に詳しくはβ−Ｄ−ガラクトシダーゼを標識酵素とし
て使用する酵素免疫法における定量を、発光法によって
行なう手法に関する。
抗原抗体反応を利用して、生体内の微量の物質を定量す
る方法としては、螢光免疫測定法（ＦＩＡ） 、放射免
疫測定法（ＲＩＡ） 、酵素免疫測定法（ＫＩＡ）など
種々の方法が使用されていた。なかでも高感度で定量で
きるＲＩＡが広く使用されていた。しかしながら、同位
元素標識化合物に不安定なものが多いこと、人体に対す
る危険性および環境汚染の立場からその取り扱いが厳し
く廃棄が困難であることなど、問題点が多い。
る方法としては、螢光免疫測定法（ＦＩＡ） 、放射免
疫測定法（ＲＩＡ） 、酵素免疫測定法（ＫＩＡ）など
種々の方法が使用されていた。なかでも高感度で定量で
きるＲＩＡが広く使用されていた。しかしながら、同位
元素標識化合物に不安定なものが多いこと、人体に対す
る危険性および環境汚染の立場からその取り扱いが厳し
く廃棄が困難であることなど、問題点が多い。
４駄＼
そこで最近になり、安全性に問題がなく実験室の制約も
なく、また測定に使用される物質も比較的安定で保存で
き、操作も比較的容易であるＦＩＡが注目された。とく
に、標識として使用される酵素の活性の測定において、
ＲＩＡに匹敵する高感度の測定法、即ち螢光反応や発光
反応を利用する方法が開発されるに到り、更に重要視さ
れてきた。
なく、また測定に使用される物質も比較的安定で保存で
き、操作も比較的容易であるＦＩＡが注目された。とく
に、標識として使用される酵素の活性の測定において、
ＲＩＡに匹敵する高感度の測定法、即ち螢光反応や発光
反応を利用する方法が開発されるに到り、更に重要視さ
れてきた。
β−Ｄ−ガラクトシダーゼは、酵素免疫法における標識
酵素として広く使用されているが、その測定は比色法お
よび螢光法であった。
酵素として広く使用されているが、その測定は比色法お
よび螢光法であった。
本発明者は、β−Ｄ−ガ２クトシダーゼを標識酵素とす
る手法に、グルコース−グルコースオキシダーゼ系を組
み合せることによって、発光法による定量ができること
を見出して本発明を完成した。
る手法に、グルコース−グルコースオキシダーゼ系を組
み合せることによって、発光法による定量ができること
を見出して本発明を完成した。
即ち、本発明に係る酵素免疫測定法は、標識酵素として
β−Ｄ−ガラクトシダーゼを使用する酵素免疫測定法に
おいて、基質としてラクトースを使用し、標識酵素であ
るβ−Ｄ−ガラクトシダーゼによって分解生成されるグ
ルコースにグルコースオキシダーゼを作用させ、生成す
る過酸化水素を化学発光法によって測定することを特徴
とするものである。
β−Ｄ−ガラクトシダーゼを使用する酵素免疫測定法に
おいて、基質としてラクトースを使用し、標識酵素であ
るβ−Ｄ−ガラクトシダーゼによって分解生成されるグ
ルコースにグルコースオキシダーゼを作用させ、生成す
る過酸化水素を化学発光法によって測定することを特徴
とするものである。
本発明の測定方法に使用される化学発光法は通常使用さ
れる発光法、例えばルミノール、イソルミノール、アミ
ノナフチルヒドラジド等を発光物質とするルミノール法
およびビス（トリクロロフェニル）蓚酸エステル（’ｒ
Ｐｃｏ）等ヲ使用するバーオキジオギザレート法（蓚酸
エステル法）等限定なくいずれも使用することができる
。
れる発光法、例えばルミノール、イソルミノール、アミ
ノナフチルヒドラジド等を発光物質とするルミノール法
およびビス（トリクロロフェニル）蓚酸エステル（’ｒ
Ｐｃｏ）等ヲ使用するバーオキジオギザレート法（蓚酸
エステル法）等限定なくいずれも使用することができる
。
本発明の方法において、β−Ｄ−ガラクトシダーゼによ
る酵素免疫反応は、全く常法によって行なわれる。例え
ば、抗原が低分子の成分の場合には、検体例えば血清ま
たは血漿とβ−り一ガラクトシダーゼ標識抗原および抗
体を接触させることにより、また抗原が高分子のときＫ
は、抗体として第１抗体および第２抗体を使用し、夫々
常法によって反応させる。次に、これを化学発光系に誘
導するために、反応によって得られた抗体と結合したβ
−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識抗原に、ラクトースとグル
コースオキシダーゼとを加えて、過酸化水素を発生させ
る。
る酵素免疫反応は、全く常法によって行なわれる。例え
ば、抗原が低分子の成分の場合には、検体例えば血清ま
たは血漿とβ−り一ガラクトシダーゼ標識抗原および抗
体を接触させることにより、また抗原が高分子のときＫ
は、抗体として第１抗体および第２抗体を使用し、夫々
常法によって反応させる。次に、これを化学発光系に誘
導するために、反応によって得られた抗体と結合したβ
−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識抗原に、ラクトースとグル
コースオキシダーゼとを加えて、過酸化水素を発生させ
る。
このようにして発生した過酸化水素が、前記発光法の常
法によって定量される。
法によって定量される。
次に実施例をあげて本発明の方法を更に具体的に説明す
るが、本発明はこれによって限定されるものではない。
るが、本発明はこれによって限定されるものではない。
なお実施例においては、抗原物質の標準液を使用してい
るが、検体（例えば抗原物質を含む血清或いは血漿等）
を使用して全く同様に実施できる。
るが、検体（例えば抗原物質を含む血清或いは血漿等）
を使用して全く同様に実施できる。
実施例１ β−Ｄ−ガラクトシダーゼ（β−Ｇａｔ）の
化学発光法による定量 Ａ法） 種々の濃度のβ−Ｇａ ｔ〔バーリンガー社製
：（ｏ−ニトロフェニル−β−ガ２クトシドを基質とし
て）１，５，１０，２５，５０゜１００＋ｎｖ／１１１
〕の０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５゜０．１チ牛血
清アルブミン含有）溶液５０μｔに、グルコースオキシ
ダーゼ（５ｖ／ｄ）の０．０１ Ｍリン酸緩衝液（同上
）溶液５０μｔおよび０．１ Ｍ ：）クトースの０．
０１ Ｍリン酸緩衝液（同上）溶液１００μｔを加え、
３１℃で２時間反応させた後、その反応液５０μｔを採
り、これに、２００μｆ／ｍｌ濃度の８−アニリノナフ
タレン−１−スルホンＭ （Ａｌ１）の０．２Ｍバルビ
ッール酸緩衝液（１）Ｈ９０、０，１％牛血清アルブミ
ン含有）溶液１００ｐＬおよび、５ｍＭのビス（２，４
，６−テト２りロフェニル）オキザレー） （ＴＣＰＯ
）の酢酸エチル溶液２００μｔを加え、２秒間混和して
、アロカルミネセンスリーダー（アロカ社製）で発光強
度を測定した（ Ｗａｉｔｉｎｇ ｔｉｍｅ １５秒ｊ
ｒｎｔｅｇ、ｔｉｍｅ６秒）。その結果が第１図である
。以下ＡＮ８− ＴＰＣＯ発元系ではこの装置を使用し
た。
化学発光法による定量 Ａ法） 種々の濃度のβ−Ｇａ ｔ〔バーリンガー社製
：（ｏ−ニトロフェニル−β−ガ２クトシドを基質とし
て）１，５，１０，２５，５０゜１００＋ｎｖ／１１１
〕の０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５゜０．１チ牛血
清アルブミン含有）溶液５０μｔに、グルコースオキシ
ダーゼ（５ｖ／ｄ）の０．０１ Ｍリン酸緩衝液（同上
）溶液５０μｔおよび０．１ Ｍ ：）クトースの０．
０１ Ｍリン酸緩衝液（同上）溶液１００μｔを加え、
３１℃で２時間反応させた後、その反応液５０μｔを採
り、これに、２００μｆ／ｍｌ濃度の８−アニリノナフ
タレン−１−スルホンＭ （Ａｌ１）の０．２Ｍバルビ
ッール酸緩衝液（１）Ｈ９０、０，１％牛血清アルブミ
ン含有）溶液１００ｐＬおよび、５ｍＭのビス（２，４
，６−テト２りロフェニル）オキザレー） （ＴＣＰＯ
）の酢酸エチル溶液２００μｔを加え、２秒間混和して
、アロカルミネセンスリーダー（アロカ社製）で発光強
度を測定した（ Ｗａｉｔｉｎｇ ｔｉｍｅ １５秒ｊ
ｒｎｔｅｇ、ｔｉｍｅ６秒）。その結果が第１図である
。以下ＡＮ８− ＴＰＣＯ発元系ではこの装置を使用し
た。
Ｂ法） 種々ノ濃度のβ−ｏａｚ（ｏ、ｏｓ 、 ０．
１２５ 、０．２５ 、０．５ 、１ 、２ｍｖ／ｉｆ
）の０．１Ｍリン酸緩衝液（同上）溶液５０μｔに、グ
ルコースオキシダーゼ（６，２５ｖ／ｍ／）溶液（同上
）′２０μｔおよび０．２５ Ｍラクトース溶液（同上
）２０μＬを加えて混和し、３１℃で２時間反応させた
後、ＡＮ８溶液１００ ｔｉＬオよびＴＣＰＯ溶液２０
０μｔを加え、Ａ法と同様にして発光強度を測定した。
１２５ 、０．２５ 、０．５ 、１ 、２ｍｖ／ｉｆ
）の０．１Ｍリン酸緩衝液（同上）溶液５０μｔに、グ
ルコースオキシダーゼ（６，２５ｖ／ｍ／）溶液（同上
）′２０μｔおよび０．２５ Ｍラクトース溶液（同上
）２０μＬを加えて混和し、３１℃で２時間反応させた
後、ＡＮ８溶液１００ ｔｉＬオよびＴＣＰＯ溶液２０
０μｔを加え、Ａ法と同様にして発光強度を測定した。
その結果が第２図である。
Ｃ法） 上記Ｂ法において、Ａｌ１−Ｔ（！ＰＯを使用
する代りにルミノール−ミクロパーオキシダーゼ液（後
記）１００μＬを使用し、発光強度をオート・ピコライ
ト−６０００型（Ａｕｔｏ−Ｐｉｃｏｌｉｔｅｓｏｏｏ
、パラカード社＃）で行なった以外は、全くＢ法と同様
にして操作した。結果が第３図である。
する代りにルミノール−ミクロパーオキシダーゼ液（後
記）１００μＬを使用し、発光強度をオート・ピコライ
ト−６０００型（Ａｕｔｏ−Ｐｉｃｏｌｉｔｅｓｏｏｏ
、パラカード社＃）で行なった以外は、全くＢ法と同様
にして操作した。結果が第３図である。
ルミノール−ミクロパーオキシダーゼ液とは、５０ ｍ
Ｍ ＣＡＲ８緩衝液（シクロへキシルアミノスルホン酸
緩衝液、ｐＨ９゜５）に９．２ｍＭ濃度でルミノールを
溶かした溶液１０ｔｎｌと、ミクロパーオキシダーゼの
ｌ ｍＭ濃度の水溶液０．３ ｍＡ！とを混合した溶液
である。
Ｍ ＣＡＲ８緩衝液（シクロへキシルアミノスルホン酸
緩衝液、ｐＨ９゜５）に９．２ｍＭ濃度でルミノールを
溶かした溶液１０ｔｎｌと、ミクロパーオキシダーゼの
ｌ ｍＭ濃度の水溶液０．３ ｍＡ！とを混合した溶液
である。
実施例２ 市販のキットを利用したジギトキシンの定置
比色定量用に調製された、市販のツギトキシン定量用キ
ット〔大日本製薬（株）製、マーキットジギトキシン〕
を使用して以下の実験を行なった。
ット〔大日本製薬（株）製、マーキットジギトキシン〕
を使用して以下の実験を行なった。
各種濃度のジギトキシン標準液（夫々３．７５ 。
７．５ 、 １ ５ 、 ３０ 、 ６０ｎｇ／ｍｊ）
２５ μｔにβ−り一ガラクトシダーゼ標識抗原液１０
０μｔを加えて混和する。これに抗体液１００μｔを攪
拌下に加えた後、３１℃で３０分間インキュベートする
。
２５ μｔにβ−り一ガラクトシダーゼ標識抗原液１０
０μｔを加えて混和する。これに抗体液１００μｔを攪
拌下に加えた後、３１℃で３０分間インキュベートする
。
混合物に０．８％食塩水２ｄを加え遠心分離する（３０
００ｒｐｍ、１０分間）。デカンテーションにて上清を
除き、沈降物に０．１ Ｍリン酸緩衝液（実施例１と同
じ） ｓ ｏ μｔ、 ６．２ＳＶ／−グルコースオキ
シダーゼ溶液（実施例１参照）２０μｔ、および０．２
５ Ｍラクトース溶液（実施例１参照）２０μｔを加え
て混和し、３１℃で２時間インキュベートする。混合物
にＡＮ８溶液１００μｔおよびＴＣＰＯ溶液２００μｔ
を加え、実施例１（Ａ、鰺）と同様にして発光強度を測
定した。その結果が第４図である。
００ｒｐｍ、１０分間）。デカンテーションにて上清を
除き、沈降物に０．１ Ｍリン酸緩衝液（実施例１と同
じ） ｓ ｏ μｔ、 ６．２ＳＶ／−グルコースオキ
シダーゼ溶液（実施例１参照）２０μｔ、および０．２
５ Ｍラクトース溶液（実施例１参照）２０μｔを加え
て混和し、３１℃で２時間インキュベートする。混合物
にＡＮ８溶液１００μｔおよびＴＣＰＯ溶液２００μｔ
を加え、実施例１（Ａ、鰺）と同様にして発光強度を測
定した。その結果が第４図である。
実施例３ 市販のキットを利用したフェニトインの定量
比色定量用に調製された、市販のフェニトイン定量用キ
ット〔大日本製薬（株）Ｊｌｌ！、マーキットフエニト
インコを使用して以下の実験を行なった。
ット〔大日本製薬（株）Ｊｌｌ！、マーキットフエニト
インコを使用して以下の実験を行なった。
マーセントチューブに各種濃度のフェニトイン標準液（
夫々０．２５ 、０．５ 、１．０．２、θ、４．ａμ
ｔ７ｙ）ｓ ｏμｔ１β−ガラストンダーゼ標識抗原液
１００μｔおよび抗体液（１，５倍希釈） ｓ ｏ ｐ
ｔを加え、攪拌混和して、３１℃で１時間インキ、：Ｌ
ヘ−トｆる。マーセントチューブにゴムキャップを装
着し、２〜３秒間攪拌混和した後、倒置して１０分間１
０００〜１５０（ｌで遠心分離する。静かに元の状態に
戻し、沈澱が液中に落ちないように注意してゴムキャッ
プをはずす。チューブ中の透明な液５０μｔを他のチュ
ーブにとり、６．２５ ｖ／Ｒ１グルコースオキシダー
ゼ溶液２０μＬ、 ０．２５ Ｍ ９クトース溶液２０
μｔ、 ＡＮ８溶液１００μｔおよびＴＣＰＯ溶・液２
００μｔを使用して、実施例２と全く同様にして発光強
度を測定した。
夫々０．２５ 、０．５ 、１．０．２、θ、４．ａμ
ｔ７ｙ）ｓ ｏμｔ１β−ガラストンダーゼ標識抗原液
１００μｔおよび抗体液（１，５倍希釈） ｓ ｏ ｐ
ｔを加え、攪拌混和して、３１℃で１時間インキ、：Ｌ
ヘ−トｆる。マーセントチューブにゴムキャップを装
着し、２〜３秒間攪拌混和した後、倒置して１０分間１
０００〜１５０（ｌで遠心分離する。静かに元の状態に
戻し、沈澱が液中に落ちないように注意してゴムキャッ
プをはずす。チューブ中の透明な液５０μｔを他のチュ
ーブにとり、６．２５ ｖ／Ｒ１グルコースオキシダー
ゼ溶液２０μＬ、 ０．２５ Ｍ ９クトース溶液２０
μｔ、 ＡＮ８溶液１００μｔおよびＴＣＰＯ溶・液２
００μｔを使用して、実施例２と全く同様にして発光強
度を測定した。
その結果が第５図である。
実施例４ 市販のキットを利用したα−フェトプロティ
ンの定量 比色定量用に調製された、市販のα−フェトプロティン
定量用キット〔大日本製薬（株）製、マーキットα−フ
ェトプロティン〕を使用して以下の実験を行なった。
ンの定量 比色定量用に調製された、市販のα−フェトプロティン
定量用キット〔大日本製薬（株）製、マーキットα−フ
ェトプロティン〕を使用して以下の実験を行なった。
各種濃度のα−フェトプロティン標準液（１０，３０，
１００，３００ｎｆ／ｍｊ）５０ μｍおよびα−フェ
トプロティン抗体液５０μｔを混和し、゛ ｓｒ℃で３
時間インキュベートする。混合物にβ−ガラクトシダー
ゼ標標識α−フェトプロティ液液５０μｔ加え、３７℃
で３０分間インキュベートした後、不溶化ウサギ１ｇＧ
抗体液１００μｔを加え、３１℃で１時間インキュベー
トする。
１００，３００ｎｆ／ｍｊ）５０ μｍおよびα−フェ
トプロティン抗体液５０μｔを混和し、゛ ｓｒ℃で３
時間インキュベートする。混合物にβ−ガラクトシダー
ゼ標標識α−フェトプロティ液液５０μｔ加え、３７℃
で３０分間インキュベートした後、不溶化ウサギ１ｇＧ
抗体液１００μｔを加え、３１℃で１時間インキュベー
トする。
混合物を遠心分離（３０ＱＯｒｐｍ、１０分間）し、デ
カンテーションで上清を除いた後、沈降物を実施例２に
おけると同じようにグルコースオキシダーゼを使用した
発光系に接続して発光強度を測定した。その結果を第６
図に示す。
カンテーションで上清を除いた後、沈降物を実施例２に
おけると同じようにグルコースオキシダーゼを使用した
発光系に接続して発光強度を測定した。その結果を第６
図に示す。
実施例５ 市販のキットを利用したヒト甲状腺刺激ホル
モン（ヒ） Ｔ８Ｈ）の定量 螢光強度定量用に調製された、市販の〒８Ｈ定量用キッ
ト〔富士臓器製薬（株）、イムザインスクリー二ングｒ
ｓＨ）を使用して以下の実験を行なった。
モン（ヒ） Ｔ８Ｈ）の定量 螢光強度定量用に調製された、市販の〒８Ｈ定量用キッ
ト〔富士臓器製薬（株）、イムザインスクリー二ングｒ
ｓＨ）を使用して以下の実験を行なった。
種々の菫のヒ） Ｔ８Ｈ標準血液ろ紙ディスク（１０，
２０，４０，８０，１６０μＩＶ／ｄ）各２枚を夫々ガ
ラス試験管（１０Ｘ７５ｍ）に入れ、これに第１抗体液
（抗ヒ）ＴＢＨウサギ免疫血清、１／２稀釈１）１０θ
μＬを加え、１０分間振とり混和した後、３Ｆ’Ｃで１
６時間インキュベートする。混合物に、β−Ｄ−ガンク
トシダーゼ標識ヒトＴＳＨ（抗原） ｌ ２００ Ａｔ
を加え、混和した後、第２抗体不溶化ビーズ（抗つサギ
ＩｆＧヤギ特異抗体のポリアセタールビーズ不溶化体）
１個を入れ、十分振とうした後、３７℃で４時間インキ
ュベートする。混合物より液を除き、ビーズをリン酸緩
衝１（１％アジ化ナトリウム含有）で３度洗った後、ビ
ーズのみ他の試験管に移す。
２０，４０，８０，１６０μＩＶ／ｄ）各２枚を夫々ガ
ラス試験管（１０Ｘ７５ｍ）に入れ、これに第１抗体液
（抗ヒ）ＴＢＨウサギ免疫血清、１／２稀釈１）１０θ
μＬを加え、１０分間振とり混和した後、３Ｆ’Ｃで１
６時間インキュベートする。混合物に、β−Ｄ−ガンク
トシダーゼ標識ヒトＴＳＨ（抗原） ｌ ２００ Ａｔ
を加え、混和した後、第２抗体不溶化ビーズ（抗つサギ
ＩｆＧヤギ特異抗体のポリアセタールビーズ不溶化体）
１個を入れ、十分振とうした後、３７℃で４時間インキ
ュベートする。混合物より液を除き、ビーズをリン酸緩
衝１（１％アジ化ナトリウム含有）で３度洗った後、ビ
ーズのみ他の試験管に移す。
ビーズの入った試験管に、０．１Ｍリン酸緩衝液（実施
例１−Ａと同じ’） １００ ｆｉｔ、 ５Ｖ／ｒａｔ
グルコースオキシダーゼ溶液（同上）１００μｔおよび
０、１ Ｍ ？クトース溶液（同上）２００μｔを加え
、３７℃で２時間インキュベートした後、その１００μ
ｔをとり、ＡＮ８溶液（実施例１と同じ）１００μｔお
よび’１’ａｐｏ溶液（同上）２００μｔを加え、実施
例１−Ａ法と同様にして発光強度を測定した。その結果
を第７図に示す。
例１−Ａと同じ’） １００ ｆｉｔ、 ５Ｖ／ｒａｔ
グルコースオキシダーゼ溶液（同上）１００μｔおよび
０、１ Ｍ ？クトース溶液（同上）２００μｔを加え
、３７℃で２時間インキュベートした後、その１００μ
ｔをとり、ＡＮ８溶液（実施例１と同じ）１００μｔお
よび’１’ａｐｏ溶液（同上）２００μｔを加え、実施
例１−Ａ法と同様にして発光強度を測定した。その結果
を第７図に示す。
【図面の簡単な説明】
第１図乃至第３図は、β−Ｄ−ガラクトシダーゼの化学
発光法による検量線である。 第４図乃至第７図はβ−Ｄ−ガラクトシダーゼを標識抗
素として使用した場合の次の各抗原に対する検量線であ
って、第４図はジギトキシン、第５図はフェニトイン、
第６図はα−フェトプロティン、第７図はヒト甲状腺刺
戟ホルモンに対するものである。いずれも、縦軸は発光
強度、横軸は濃度である。 特許出願人 辻 章 夫 代理人弁理士 樫 出 庄 治 竿２ 図 泊ＩＪ／ｍＡ 譚 １＋ 図 ηｇ／ｍＬ
発光法による検量線である。 第４図乃至第７図はβ−Ｄ−ガラクトシダーゼを標識抗
素として使用した場合の次の各抗原に対する検量線であ
って、第４図はジギトキシン、第５図はフェニトイン、
第６図はα−フェトプロティン、第７図はヒト甲状腺刺
戟ホルモンに対するものである。いずれも、縦軸は発光
強度、横軸は濃度である。 特許出願人 辻 章 夫 代理人弁理士 樫 出 庄 治 竿２ 図 泊ＩＪ／ｍＡ 譚 １＋ 図 ηｇ／ｍＬ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）標識酵素としてβ−Ｄ−ガラクトシダーゼを使用す
る酵素免疫測定法において、基質としてラクトースを使
用し、標識酵素であるβ−Ｄ−ガラクトシダーゼによっ
て分解生成されるグルコースにグルコースオキシダーゼ
を作用させ、生成する過酸化水素を化学発光法で測定す
ることを特徴とする酵素免疫測定法。 ２）化学発光法がバーオキジオギザレート発光法である
特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３）化学発光法がルミノール発光法である特許請求の範
囲第１項記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17991083A JPS6071958A (ja) | 1983-09-28 | 1983-09-28 | 酵素免疫測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17991083A JPS6071958A (ja) | 1983-09-28 | 1983-09-28 | 酵素免疫測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6071958A true JPS6071958A (ja) | 1985-04-23 |
Family
ID=16074047
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17991083A Pending JPS6071958A (ja) | 1983-09-28 | 1983-09-28 | 酵素免疫測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6071958A (ja) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS51146925A (en) * | 1975-06-11 | 1976-12-16 | Sasuke Ogata | Writing device for writing display device utilizing magnetism |
| JPS54136896A (en) * | 1978-04-05 | 1979-10-24 | Syva Co | Method of analyzing chemically produced fluorescence immunity |
-
1983
- 1983-09-28 JP JP17991083A patent/JPS6071958A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS51146925A (en) * | 1975-06-11 | 1976-12-16 | Sasuke Ogata | Writing device for writing display device utilizing magnetism |
| JPS54136896A (en) * | 1978-04-05 | 1979-10-24 | Syva Co | Method of analyzing chemically produced fluorescence immunity |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0247796A1 (en) | Solid phase immunoassay method | |
| JPH0453518B2 (ja) | ||
| JPH11503829A (ja) | 抗体検出用化学発光イムノアッセイ | |
| CN108444988B (zh) | 甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒 | |
| JP2000508075A (ja) | 発光特異的結合アッセイ | |
| EP0270206A1 (en) | Assays | |
| CN106645689A (zh) | 一种促甲状腺激素受体抗体化学发光免疫测定试剂盒及其制备方法 | |
| Takayasu et al. | Chemilumiscent enzyme immunoassay using β-D-galactosidase as the label and the bis (2, 4, 6-trichlorophenyl) oxalate-fluorescent dye system | |
| JPH0667960B2 (ja) | 結合蛋白質に結合した分析質を分離する方法及び血清中のビタミンｂ１２測定用試料準備試薬 | |
| US8900882B2 (en) | Method of assaying complex and kit to be used therefor | |
| JPH04301764A (ja) | 被分析物質の測定方法 | |
| WO1986007462A1 (en) | Enzyme assay of body fluids | |
| EP0682254B1 (en) | Enzyme linked chemiluminescent assay | |
| EP0125368B1 (en) | A method of immunoassay detection by reaction-rate potentiometry using fluoride ion-selective electrode | |
| JPS6071958A (ja) | 酵素免疫測定法 | |
| JP3711543B2 (ja) | 化学発光測定試薬及び測定方法 | |
| JP4455688B2 (ja) | 分析物遊離段階を可能にするアッセイ用表面 | |
| JP3632990B2 (ja) | 化学発光測定試薬及び化学発光測定方法 | |
| JP2006126162A (ja) | サンプル中の被験物質の定量法 | |
| EP0925507B1 (en) | Prevention of probe coating on automated analyzers using a non-denaturing surfactant | |
| JPH052107B2 (ja) | ||
| JPH07146293A (ja) | 免疫測定法 | |
| US20040121416A1 (en) | Assay | |
| JP2002207042A (ja) | 固相に固定された物質の測定方法 | |
| JP2005049264A (ja) | 標的物質の測定方法および測定試薬 |