CN108444988B - 甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒 - Google Patents

甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒，所述试剂盒包括试剂1和试剂2，所述试剂1包括缓冲液、磁微粒、生物素标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体和多羟基醇；和所述试剂2包括缓冲液、吖啶酯标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体和多羟基糖。本发明的甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒灵敏度高、准确度好并且能降低检测成本。

Description

甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂领域，具体涉及一种甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒。
背景技术
甲状腺球蛋白(Thyroglobulin,TG)是由甲状腺滤泡上皮分泌的一种碘化糖蛋白，分子量约为660KD。甲状腺球蛋白在促甲状腺激素(TSH)的作用下，由甲状腺细胞合成，并运输到甲状腺滤泡中，作为甲状腺素和碘化甲腺原氨酸的前提储存。甲状腺球蛋白在甲状腺过氧化物酶(TPO)的水解作用下生成甲状腺素(T4)和三碘甲腺原氨酸(T3)释放进入血液中。TG在血清中的含量可由多种甲状腺相关疾病影响，包括桥本氏症(甲状腺炎)，格雷夫斯病(毒性弥漫性甲状腺肿)，亚急性甲状腺炎，甲状腺功能亢进以及甲状腺瘤等。在先天性甲状腺功能缺陷的患者中，甲状腺球蛋白含量的检测可以鉴别甲状腺完全缺失、甲状腺发育不全以及其他病理情况。另外，甲状腺滤泡壁的损伤也可导致大量的TG进入血液，也被认为是甲状腺体形态完整性的特殊标志物。甲状腺被认为是甲状腺球蛋白的唯一来源。因此，对接受甲状腺全切除手术患者血清中TG水平的检测，在预示疾病的复发情况上有着重要的作用。
目前，甲状腺球蛋白的检测方法主要有：酶联免疫吸附分析法(ELISA)、时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)、电化学发光法(ECLIA)和化学发光免疫分析(CLIA)等。RIA和ELISA由于污染性、灵敏度低、时间长等缺点，已不再居主导地位。CLIA和ECLIA由于灵敏度高、动力学范围宽、适于自动化操作等优点，被多数厂家采用，成为当前甲状腺球蛋白检测最主要的发展技术。时间分辨荧光技术，也能达到与CLIA相当的灵敏度，但由于其检测模块较复杂，目前的市场应用不如化学发光。
CLIA是化学物质在化学反应过程中，由基态跃迁到激发态，再由不稳定的激发态回到基态，化学能转变为光能释放出来。将高灵敏度的化学发光与高特异度的免疫分析结合起来，通过检测光信号，即可以知道待检测的生物活性分子的含量。按化学反应类型分类，可分为酶促化学发光和非酶促化学发光两类。其中酶促化学发光主要包括辣根过氧化物酶(HRP)系统、黄嘌呤氧化酶系统、碱性磷酸酶(ALP)系统等。但其应用于化学发光免疫分析(CLIA),需要使用催化剂及增强剂,这将导致背景发光增强,使测量本底升高,从而限制了这一技术的灵敏度和它的应用及发展。非酶促发化学发光包括吖啶酯系统、草酸酯系统、三价铁-鲁米诺系统等，而其中吖啶酯因发光效率高而被广泛应用，其优点主要表现为：易与蛋白质联结且联结后光子产率不减少；不需要加入催化剂，发光释放快速集中，且信号稳定；对温度和pH不敏感；干扰因素少，本底信号低等特点。将高灵敏度的化学发光物质吖啶酯与高特异性的免疫分析结合起来，通过检测光信号，即可以知道待检测的生物活性分子的含量。
在国内，甲状腺球蛋白检测在临床上主要以化学发光免疫分析法为主，但由于具有自主知识产权的国产甲状腺检测试剂盒目前还比较少，而且灵敏度较低，试剂成本高，目前一般只在三甲医院有开展，在三甲以下医院开展较少，因此有待开发对甲状腺检测灵敏度高、准确度好并且能降低检测成本的检测技术。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒，所述试剂盒包括试剂1和试剂2，所述试剂1包括缓冲液、磁微粒、生物素标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体和多羟基醇；和所述试剂2包括缓冲液、吖啶酯标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体和多羟基糖。
在一种实施方式中，所述试剂1包括0.2mg/mL～0.6mg/mL磁微粒、4μg/mL～12μg/mL生物素标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体和5g/L～50g/L甘露醇或山梨糖醇；和所述试剂2包括2.0μg/mL～6.0μg/mL吖啶酯标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体和5g/L～50g/L海藻糖或蔗糖。
在一种实施方式中，所述试剂1包括缓冲液、0.2mg/mL～0.6mg/mL磁微粒、4μg/mL～12μg/mL生物素标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体和5g/L～50g/L甘露醇或山梨糖醇；和所述试剂2包括缓冲液、2.0μg/mL～6.0μg/mL吖啶酯标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体和5g/L～50g/L海藻糖或蔗糖。在一些实施方式中，可以是0.3mg/mL～0.5mg/mL磁微粒；可以是6μg/mL～10μg/mL生物素标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体；和10g/L～40g/L甘露醇或山梨糖醇、20g/L～30g/L甘露醇或山梨糖醇。
在一些实施方式中，缓冲液是pH6.0～H8.0、5mM～100mM的PBS缓冲液。在一些实施方式中，缓冲液可以是pH7.0～7.5、20mM～80mM的PBS缓冲液、20mM～60mM、20mM～40mM的PBS缓冲液。
在一些实施方式中，所述试剂1还包括1g/L～50g/L牛血清白蛋白、5mL/L～20mL/L丙三醇、0.05mL/L～0.2mL/L TritonX-100、10mg/L～50mg/L 4-氨基安替比林和0.5mL/L～5mL/L proclin-300。在一些实施方式中，可以是5g/L～40g/L牛血清白蛋白、10g/L～30g/L牛血清白蛋白、15g/L～25g/L牛血清白蛋白；10mL/L～15mL/L丙三醇；0.1mL/L～0.2mL/LTritonX-100、0.15mL/L～0.2mL/L TritonX-100；20mg/L～40mg/L 4-氨基安替比林、15mg/L～30mg/L 4-氨基安替比林；和1mL/L～5mL/L proclin-300、2mL/L～4mL/L proclin-300。试剂中各组份是组合起来发挥作用，有效降低了试剂背景信号，提高了试剂的灵敏度、稳定性。
在一些实施方式中，试剂1包括0.4mg/mL磁微粒、8μg/mL生物素标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体、20mM pH7.4PBS缓冲溶液、10g/L牛血清白蛋白、20g/L甘露醇或山梨糖醇、10mL/L丙三醇、0.1mL/L TritonX-100、20mg/L 4-氨基安替比林和3mL/L proclin-300。
在一些实施方式中，所述试剂2还包括5g/L～20g/L酪蛋白、5mL/L～20mL/L丙三醇、0.05mL/L～0.2mL/L TritonX-100、0.5mL/L～5mL/L proclin-300和10mg/L～50mg/L4-氨基安替比林。在一些实施方式中，所述试剂2可以包括5g/L～10g/L酪蛋白、10g/L～15g/L酪蛋白、15g/L～20g/L酪蛋白；5mL/L～20mL/L丙三醇、5mL/L～100mL/L丙三醇、10mL/L～20mL/L丙三醇；0.05mL/L～0.2mL/L TritonX-100、0.05mL/L～0.1mL/L TritonX-100、0.1mL/L～0.2mL/L TritonX-100；0.5mL/L～5mL/L proclin-300、0.5mL/L～1mL/Lproclin-300、1mL/L～2mL/L proclin-300、2mL/L～4mL/L proclin-300；和10mg/L～20mg/L 4-氨基安替比林、20mg/L～30mg/L 4-氨基安替比林、30mg/L～40mg/L 4-氨基安替比林、40mg/L～50mg/L 4-氨基安替比林。试剂中各组份是组合起来发挥作用，有效降低了试剂背景信号，提高了试剂的灵敏度、稳定性。
在一些实施方式中，所述试剂2包括4.0μg/mL吖啶酯标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体、20mM pH7.4PBS缓冲溶液、10g/L酪蛋白、10g/L海藻糖或蔗糖、10mL/L丙三醇、0.1mL/L TritonX-100、1mL/L proclin-300和20mg/L4-氨基安替比林。在一些实施方式中，所述试剂盒还包括校准品，所述校准品包括PBS缓冲液、甲状腺球蛋白抗原、酪蛋白、牛血清白蛋白、海藻糖或蔗糖、丙三醇、TritonX-100、proclin-300和4-氨基安替比林。
在一些实施方式中，所述校准品包括1ng/mL和100ng/mL甲状腺球蛋白抗原、5mM～100mM、pH6.0～8.0PBS缓冲溶液、5g/L～20g/L酪蛋白、20g/L～100g/L牛血清白蛋白、5g/L～50g/L海藻糖或蔗糖、5mL/L～20mL/L丙三醇、0.05mL/L～0.2mL/L TritonX-100、0.5mL/L～5mL/L proclin-300和10mg/L～50mg/L 4-氨基安替比林。在一些实施方式中，可以是10g/L～20g/L酪蛋白、15g/L～20g/L酪蛋白；30g/L～80g/L牛血清白蛋白、40g/L～60g/L牛血清白蛋白；10g/L～40g/L海藻糖或蔗糖、20g/L～30g/L海藻糖或蔗糖；5mL/L～10mL/L丙三醇、10mL/L～20mL/L丙三醇、15mL/L～20mL/L丙三醇；0.1mL/L～0.2mL/L TritonX-100、0.1mL/L～0.15mL/L TritonX-100；1mL/L～4mL/L proclin-300、2mL/L～4mL/L proclin-300；和10mg/L～40mg/L 4-氨基安替比林、20mg/L～40mg/L 4-氨基安替比林、30mg/L～40mg/L 4-氨基安替比林
在一些实施方式中，所述校准品包括20mM pH7.4PBS缓冲液、10g/L酪蛋白、50g/L牛血清白蛋白、20g/L海藻糖或蔗糖、10mL/L丙三醇、0.1mL/L TritonX-100、1mL/Lproclin-300和20mg/L 4-氨基安替比林。
在一些实施方式中，所述试剂盒还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液；所述A液为H2O2溶液，所述B液为NaOH溶液。
本发明中通过试剂1和试剂2中各个组分的选择，不仅使本发明试剂盒在使用中信号背景大大降低，而且信号强度显著增加；试剂盒的灵敏度、准确性和重复性显著增加。特别是试剂1中甘露醇或山梨糖醇和试剂2中海藻糖或蔗糖的存在，显著增加了本发明试剂盒的灵敏度。
具体实施方式
为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合下面结合实施例对本发明作进一步说明，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都应当属于本申请保护的范围。
实施例一：抗甲状腺球蛋白抗体包被的亲和素化的磁微粒(试剂1)的制备1.生物素化的抗甲状腺球蛋白抗体制备
取1.0mg抗甲状腺球蛋白抗体，用磷酸盐缓冲液稀释至1.0mg/mL，然后加入3.33μL浓度为10mM/L的生物素酯，室温下反应30min，再加入10μL浓度为1M的Tris溶液，室温下反应10min，最后用20mM、pH为7.4的磷酸盐缓冲液透析16-24小时，取透析后的液体即得到生物素化的抗甲状腺球蛋白抗体。
2.生物素化抗体包被亲和素磁微粒
取100mg亲和素化的磁微粒悬浮液，磁分离去上清，用连接缓冲液(20mM PBS，10g/L BSA，20g/L甘露醇，10mL/L丙三醇，0.1mL/L TritonX-100，3mL/L proclin-300，20mg/L4-氨基安替比林)清洗三次，然后用50mL连接缓冲液重悬，加入1.0mg生物素化的抗甲状腺球蛋白抗体，室温下混悬30min，磁分离去上清，用连接缓冲液清洗一次后再重悬至50mL，然后加入5mL磁微粒封闭液(10μM/mL生物素，50％(体积)丙三醇，50％(体积)二甲基亚砜)室温下混悬15min，磁分离去上清，用连接缓冲液清洗三次后重悬至250mL，即得到0.4mg/mL抗甲状腺球蛋白抗体包被的亲和素化的磁微粒。
依照此方法也制备了0.2mg/mL和0.6mg/mL抗甲状腺球蛋白抗体包被的亲和素化的磁微粒。同时也制备了4μg/mL、8μg/mL和12μg/mL生物素标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体。
实施例二：吖啶酯标记的抗甲状腺球蛋白抗体(试剂2)制备
取0.5mg抗甲状腺球蛋白抗体，用20mM磷酸盐缓冲液稀释至1.0mg/mL，然后加入2.5μL浓度为10mM/L的吖啶酯，室温下避光混匀反应30min，然后加入50μL浓度10mg/mL的赖氨酸溶液，室温下避光混匀反应10min，然后用脱盐柱离心脱盐纯化。收集离心管中的液体，即得到吖啶酯标记的抗甲状腺球蛋白抗体。将吖啶酯标记的抗甲状腺球蛋白抗体用标记物缓冲液(20mM PBS，10g/L酪蛋白，10g/L海藻糖，10mL/L丙三醇，0.1mL/L TritonX-100，3mL/L proclin-300，20mg/L 4-氨基安替比林)按1/1000的比例稀释配制成吖啶酯标记物工作液。
依此方法，制备了包括2.0μg/mL、4.0μg/mL和6.0μg/mL吖啶酯标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体的试剂2。
实施例三：甲状腺球蛋白校准品制备
用校准品稀释液(20mM PBS，10g/L酪蛋白，20g/L海藻糖，10mL/L丙三醇，0.1mL/LTritonX-100，3mL/L proclin-300，20mg/L 4-氨基安替比林)将甲状腺球蛋白抗原配制成浓度为1ng/mL、100ng/mL的校准品1和校准品2。甲状腺球蛋白校准品可溯源至欧洲共同体标准物质局(BCR)的有证参考物质(CRM)457。
实施例四：甲状腺球蛋白测定试剂盒的性能测试
采用全自动化学发光免疫分析仪扫描读取试剂盒的校准信息，通过使用校准品1和2校正该项目的校准主曲线，校准检测系统。
检测方法：仪器依次加入50μL样品，50μL抗甲状腺球蛋白抗体包被的亲和素化的磁微粒(试剂1)、50μL标记缓冲液，反应15min后，磁分离、清洗，加入100μL吖啶酯标记的抗甲状腺球蛋白抗体(试剂2)，反应15min后，磁分离、清洗，加入发光底物液A液(A液是0.10mol/L H2O2溶液)、B液(B液是0.15mol/L NaOH溶液)检测放光信号。化学发光免疫分析仪例如可以是迈克生物的型号的以下仪器：maccura i3000、maccura i3000L、maccurai3000S、maccura i2000、maccura i2000L、maccura i2000S、maccura i1000、maccurai1000L、maccura i1000S。
1.试剂盒的灵敏度实验
试剂灵敏度是根据最低检测限(LOB)来确定的，最低检测限按下述实验方法进行。检测零浓度校准品20次，得到20次测定结果的信号值(RLU)，计算其平均值M和标准差SD，得出M+2SD所对应的RLU值，根据零浓度校准品与0.2ng/mL相邻浓度校准品之间的浓度-RLU值结果进行两点回归拟合得出一次方程，将M+2SD所对应的RLU值带入上述方程中，计算得出对应的浓度，即最低检测限(LOB)。以下表1中是一次实验的具体数据，按上述方法检测试剂最低检测限(LOB)均低于0.1ng/mL，根据此结果确定试剂灵敏度可达到0.020ng/mL。
表1本发明试剂盒的灵敏度测定结果1
Figure BDA0001613804150000071
当将试剂1中甘露醇替换为山梨糖醇，试剂盒中其它成分保持不变时，根据上述相同方法得当的试剂盒灵敏度为0.0727ng/mL；当将试剂中海藻糖替换为蔗糖，试剂盒中其它成分保持不变时，试剂盒灵敏度为0.0571ng/mL，如下表所示。
表2本发明试剂盒的灵敏度测定结果2
Figure BDA0001613804150000072
2.试剂盒的重复性实验
检测两个浓度水平的样本，各重复10次，计算变异系数(CV)，分别计算每个样本的变异系数(CV)，结果表明该试剂盒变异系数CV均小于10％。
表3本发明试剂盒的重复性测定结果
Figure BDA0001613804150000073
Figure BDA0001613804150000081
3.本发明试剂盒的准确度实验
检测浓度为10ng/mL和100ng/mL两个浓度的甲状腺球蛋白国际标准品，分别计算检测值与理论值得偏差，结果表明该试剂盒检测国际标准品偏差均小于10％。
表4本发明试剂盒的重复性测定结果
Figure BDA0001613804150000082
4.本发明试剂盒的线性实验
将接近线性范围上限的高值样品按一定比例稀释为至少5种浓度，其中低值浓度的样品须接近线性范围的下限，每一浓度的样本均重复测定3次，计算其平均值，用线性回归方法计算结果平均值和对应浓度的相关系数r。以下表格中三个批次实验结果表明本发明试剂可直接检测的样本浓度为：本试剂盒在0.2-500ng/mL范围内，线性相关系数r为0.9994。
表5本发明试剂盒的线性测定结果
Figure BDA0001613804150000083
5.本发明试剂盒的特异性实验
检测浓度为1000mIU/L TSH,200ng/mL FSH,10,000ng/mL T3,10000ng/mL T4，具体结果如表所示，交叉验证结果均＜0.1ng/mL，说明本试剂盒检测高浓度TSH/FSH/T3/T4样本无交叉反应，具有很高的特异性。
表6本发明试剂盒的特异性实验测定结果
Figure BDA0001613804150000091
实施例四：甲状腺球蛋白测定试剂盒不同组分对性能的影响实验
1.试剂1中甘露醇对试剂盒灵敏度影响的实验
具体实验方案与试剂盒的灵敏度实验方案类似，根据实验结果可以得出在试剂1中加入甘露醇后试剂的灵敏有明显提高，下表为试剂1不含甘露醇或山梨糖醇时检测LOB为0.3028ng/mL，而在上述试剂灵敏实施例中LOB均小于0.1ng/mL。
表7本发明的试剂1不含甘露醇时灵敏度检测结果
Figure BDA0001613804150000092
依照上述方法，当试剂盒中其它组分不变时，改变试剂1中甘露醇浓度时，试剂盒灵敏度数据如下：
表8本发明的试剂1含不同浓度甘露醇时灵敏度检测结果
Figure BDA0001613804150000093
由以上结果可见，当甘露醇浓度为5g/L～50g/L时，试剂盒灵敏度较好。
2.试剂1中BSA浓度对于试剂性能的影响实验
分别选用BSA浓度为0.5g/L、1g/L、10g/L、50g/L、100g/L的缓冲液配制的免疫磁微粒。用含不同浓度的BSA缓冲体系配制的免疫磁微粒测定主校准品A、B选择最佳的BSA浓度缓冲体系。
表9本发明的试剂1中BSA浓度对灵敏度检测结果的影响
Figure BDA0001613804150000101
结论：根据结果表明，BSA浓度为0.5g/L-50g/L时校准品A和校准品B的信噪比较好，10g/L时最大，因此选择BSA浓度为10g/L的磁微粒缓冲液作为配制免疫磁微粒的最佳PBS缓冲液体系。
3.试剂1中TritonX-100浓度对于试剂性能的影响实验
分别选用TritonX-100浓度为0.025mL/L、0.05mL/L、0.1mL/L、0.2mL/L、0.4mL/L的缓冲液配制免疫磁微粒。用含不同浓度的TritonX-100缓冲体系配制的免疫磁微粒测定主校准品A、B，选择最佳的TritonX-100浓度缓冲体系。
表10本发明的试剂1中TritonX-100浓度对灵敏度检测结果的影响
Figure BDA0001613804150000102
结论：根据结果表明，TritonX-100浓度为0.05mL/L-0.2mL/L时的信噪比较大，0.1mL/L时，校准品A和校准品B的信噪比最大，因此选择TritonX-100浓度为0.1mL/L的缓冲液作为配制免疫磁微粒的最佳TritonX-100浓度缓冲液体系。
4.试剂2中缓冲液对于试剂盒性能影响的实验
分别选用20mM磷酸盐缓冲液、20mM Tris缓冲液和20mM HEPES缓冲液配制免疫标记物。用不同缓冲体系配制的免疫标记物测定主校准品A、B选择最佳的缓冲液条件。
表11本发明的试剂2不同缓冲液筛选的结果
Figure BDA0001613804150000111
根据结果表明，20mM磷酸盐缓冲液配制的标记物缓冲液，校准品A和校准品B的信噪比最大，因此选择20mM磷酸盐作为配制免疫标记物的最佳缓冲液。
5.试剂2中不同蛋白对于试剂盒性能影响的实验
分别选用含牛血清白蛋白或者含酪蛋白的缓冲液配制免疫标记物。用不同蛋白缓冲体系配制的免疫标记物测定主校准品A、B选择最佳的蛋白缓冲液条件。
表12本发明的试剂2不同蛋白筛选的结果
Figure BDA0001613804150000112
根据结果表明，含酪蛋白的缓冲液配制的标记物缓冲液，校准品A和校准品B的信噪比最大，因此选择含酪蛋白的缓冲液。
6.试剂2中不同表面活性剂对于试剂盒性能影响的实验
分别选用含TritonX-100或者含Tween-20的缓冲液配制免疫标记物。用不同表面活性剂缓冲体系配制的免疫标记物测定主校准品A、B选择最佳的表面活性剂缓冲液条件。
表13本发明的试剂2不同表面活性剂的结果
Figure BDA0001613804150000113
结论：根据结果表明，含Tween-20表面活性剂的标记物缓冲液，校准品A和校准品B的信噪比最大，因此选择Tween-20作为配制免疫标记物的最佳表面活性剂。
7.试剂2中不同PBS缓冲液浓度对试剂性能影响的实验
分别选用浓度为1mM、5mM、20mM、100mM、200mM的PBS缓冲液配制免疫标记物。用不同浓度的PBS缓冲体系配制的免疫标记物测定主校准品A、B选择最佳的PBS浓度缓冲体系。
表14本发明的试剂2不同PBS缓冲液浓度的结果
Figure BDA0001613804150000121
结论：根据结果表明，PBS浓度为5-20mM的标记物缓冲液，校准品A和校准品B的信噪比较好，20mM时最大，因此选择PBS浓度为20mM的标记物缓冲液作为配制免疫标记物的最佳PBS缓冲液体系。
8.试剂2中海藻糖对试剂灵敏度影响的实验
用去掉海藻糖的标记物缓冲液(20mM PBS，10g/L酪蛋白，10mL/L丙三醇，0.1mL/LTritonX-100，3mL/L proclin-300，20mg/L 4-氨基安替比林)配制免疫标记物(试剂2)，检测试剂盒灵敏度；没有海藻糖的试剂盒降低了灵敏度。
表15试剂2中不含海藻糖时灵敏度检测结果
Figure BDA0001613804150000122
依照上述方法，当试剂盒中其它组分不变时，改变试剂2中海藻糖浓度时，试剂盒灵敏度数据如下：
表16试剂2中含不同浓度海藻糖时灵敏度检测结果
Figure BDA0001613804150000131
由以上结果可见，当海藻糖浓度为5g/L～50g/L时，试剂盒灵敏度较好。
应该理解到披露的本发明不仅仅限于描述的特定的方法、方案和物质，因为这些均可变化。还应理解这里所用的术语仅仅是为了描述特定的实施方式方案的目的，而不是意欲限制本发明的范围，本发明的范围仅受限于所附的权利要求。
本领域的技术人员还将认识到，或者能够确认使用不超过常规实验，在本文中所述的本发明的具体的实施方案的许多等价物。这些等价物也包含在所附的权利要求中。

Claims (6)

1.一种甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括试剂1和试剂2，所述试剂1包括缓冲液、0.2mg/mL～0.6mg/mL磁微粒、4μg/mL～12μg/mL生物素标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体和5g/L～50g/L甘露醇或山梨糖醇；和所述试剂2包括缓冲液、2.0μg/mL～6.0μg/mL吖啶酯标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体和5g/L～50g/L海藻糖或蔗糖；
所述缓冲液是pH6.0～8.0、5mM～100mM的PBS缓冲液；
所述试剂1还包括1g/L～50g/L牛血清白蛋白、5mL/L～20mL/L丙三醇、0.05mL/L～0.2mL/L TritonX-100、10mg/L～50mg/L 4-氨基安替比林和0.5mL/L～5mL/L proclin-300；
所述试剂2还包括5g/L～20g/L酪蛋白、5mL/L～20mL/L丙三醇、0.05mL/L～0.2mL/LTritonX-100、0.5mL/L～5mL/L proclin-300和10mg/L～50mg/L 4-氨基安替比林。
2.根据权利要求1所述的甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒，所述试剂1包括0.4mg/mL磁微粒、8μg/mL生物素标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体、20mM pH7.4 PBS缓冲溶液、10g/L牛血清白蛋白、20g/L甘露醇或山梨糖醇、10mL/L丙三醇、0.1mL/L TritonX-100、20mg/L4-氨基安替比林和3mL/L proclin-300。
3.根据权利要求1所述的甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒，所述试剂2包括4.0μg/mL吖啶酯标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体、20mM pH7.4PBS缓冲溶液、10g/L酪蛋白、10g/L海藻糖或蔗糖、10mL/L丙三醇、0.1mL/L TritonX-100、1mL/L proclin-300和20mg/L 4-氨基安替比林。
4.根据权利要求1-3任一所述的甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒，所述试剂盒还包括校准品，所述校准品包括PBS缓冲液、甲状腺球蛋白抗原、酪蛋白、海藻糖或蔗糖、丙三醇、TritonX-100、proclin-300和4-氨基安替比林；所述校准品包括1ng/mL或100ng/mL甲状腺球蛋白抗原、5mM～100mM、pH6.0～8.0PBS缓冲溶液、5g/L～20g/L酪蛋白、5g/L～50g/L海藻糖或蔗糖、5mL/L～20mL/L丙三醇、0.05mL/L～0.2mL/L TritonX-100、0.5mL/L～5mL/Lproclin-300和10mg/L～50mg/L 4-氨基安替比林。
5.根据权利要求4所述的甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒，所述校准品包括1ng/mL或100ng/mL甲状腺球蛋白抗原、20mM pH7.4 PBS缓冲液、10g/L酪蛋白、20g/L海藻糖或蔗糖、10mL/L丙三醇、0.1mL/L TritonX-100、3mL/L proclin-300和20mg/L 4-氨基安替比林。
6.根据权利要求1-3任一所述的甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒，所述试剂盒还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液；所述A液为H2O2溶液，所述B液为NaOH溶液。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7547329B2 (ja) * 2019-05-24 2024-09-09 富士レビオ株式会社 サイログロブリンの測定方法及び測定試薬
CN111896754B (zh) * 2020-08-04 2023-07-18 四川沃文特生物技术有限公司 一种pct校准品缓冲溶液
CN112881691A (zh) * 2020-12-24 2021-06-01 杭州百殷生物科技有限公司 一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫细胞化学标记显色试剂盒
CN113588949A (zh) * 2021-08-17 2021-11-02 广州艺得诺生物科技有限公司 一种犬冠状病毒化学发光检测试剂的制备及使用方法
CN114778816A (zh) * 2022-04-07 2022-07-22 南京颐兰贝生物科技有限责任公司 一种吖啶酯标记复合物及制备方法
CN115754299A (zh) * 2022-10-31 2023-03-07 南京岚煜生物科技有限公司 一种同型半胱氨酸检测试剂盒

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103018465A (zh) * 2012-12-16 2013-04-03 北京利德曼生化股份有限公司 一种人胱抑素c化学发光定量检测方法
CN105277689A (zh) * 2015-11-17 2016-01-27 苏州浩欧博生物医药有限公司 纳米磁微粒化学发光法检测血清总IgE的试剂盒及方法
CN105548565A (zh) * 2015-12-30 2016-05-04 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 一种用于检测克氏锥虫抗体的试剂盒及其制备和应用
CN105929172A (zh) * 2016-04-20 2016-09-07 北京中航赛维生物科技有限公司 一种抗PM-Scl抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒及制备和检测方法
CN106053826A (zh) * 2016-05-12 2016-10-26 威海威高生物科技有限公司 Ⅲ型前胶原n端肽定量测定试剂盒及其制备方法
CN107703314A (zh) * 2017-11-15 2018-02-16 迈克生物股份有限公司 一种促肾上腺皮质激素溶液及其应用
CN107831163A (zh) * 2017-10-31 2018-03-23 太原瑞盛生物科技有限公司 一种甲状腺球蛋白的化学发光检测试剂盒及其制备方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105628914B (zh) * 2016-02-04 2019-01-08 广州科方生物技术股份有限公司 一种能使吖啶酯抗原抗体结合物稳定的稀释液及其制备方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103018465A (zh) * 2012-12-16 2013-04-03 北京利德曼生化股份有限公司 一种人胱抑素c化学发光定量检测方法
CN105277689A (zh) * 2015-11-17 2016-01-27 苏州浩欧博生物医药有限公司 纳米磁微粒化学发光法检测血清总IgE的试剂盒及方法
CN105548565A (zh) * 2015-12-30 2016-05-04 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 一种用于检测克氏锥虫抗体的试剂盒及其制备和应用
CN105929172A (zh) * 2016-04-20 2016-09-07 北京中航赛维生物科技有限公司 一种抗PM-Scl抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒及制备和检测方法
CN106053826A (zh) * 2016-05-12 2016-10-26 威海威高生物科技有限公司 Ⅲ型前胶原n端肽定量测定试剂盒及其制备方法
CN107831163A (zh) * 2017-10-31 2018-03-23 太原瑞盛生物科技有限公司 一种甲状腺球蛋白的化学发光检测试剂盒及其制备方法
CN107703314A (zh) * 2017-11-15 2018-02-16 迈克生物股份有限公司 一种促肾上腺皮质激素溶液及其应用

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