CN111505268A - 一种自身免疫抗体检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医学检验技术领域，公开了一种自身免疫抗体检测方法，包括以下步骤：分离待测血液样本的血清样本；在血清样本加入稀释液混匀得到待测试液体；将待测试液体用于多个项目的检测或者在同一个项目进行多次检测。本发明将血清样本稀释一次可用于多个项目检测或者一个项目检测多次，在满足单个项目多次检测的同时，又可以对不同的项目进行检测，节省样本消耗量，减少样本稀释次数和操作误差，方便快捷。
Description
技术领域
本发明属于医学检验技术领域，具体涉及一种自身免疫抗体检测方法。
背景技术
自身免疫性疾病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。目前许多疾病被相继认定为自身免疫性疾病，根本原因是免疫耐受丧失和隐蔽抗原暴露等各种原因引起免疫耐受丧失，对自身组织抗原产生免疫应答，基因遗传、感染微生物、外伤、感染等激发隐蔽抗原也能引起自身免疫疾病。引发自身发热、面部红斑、关节痛等现象。自身免疫疾病分为器官特意性自身免疫病和系统性自身免疫病，常见疾病有系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、系统性血管炎、甲状腺功能亢进、胰岛素依赖型糖尿病等。就目前检测自身免疫疾病的方法有胶体金法、电化学发光法、酶联免疫法等方法。其中磁微粒化学发光检测方法，既有灵敏度高，特异性强，通量大、速度快、自动化程度高等明显的优点成为了主要的检测方法之一。
目前大多数自身免疫病项目检测需要同时检测多个项目，例如抗核抗体检测中，需要测定13项或者15项，ENA检测需要同时检测7项，通常一例样本稀释一次检测一个项目。此种样本检测方式在检测不同项目时需要反复稀释样本，增加样本、稀释液和耗材的消耗量，仪器对样本稀释增加检测时间，操作复杂不便，对医务人员带来很多不便。
发明内容
为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种自身免疫抗体检测方法。
本发明所采用的技术方案为：
一种自身免疫抗体检测方法，包括以下步骤：
分离待测血液样本的血清样本；
在血清样本加入稀释液混匀得到待测试液体；
将待测试液体用于多个项目的检测或者在同一个项目进行多次检测。
优选地，所述血清样本与稀释液的比例为1:(4-99)。
优选地，所述血清样本与稀释液的比例为1:19。
优选地，该检测方法基于磁微粒化学发光检测原理。
磁微粒化学发光检测原理，即磁微粒化学发光法，应用了纳米级磁性微粒做固相载体，增加了吸附面积，使抗原、抗体最大限度结合，并使其结合反应在近似液相的条件下进行，兼具化学发光与酶免疫技术的优点，其发光原理主要包含用辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(ALP)或吖啶酯直接标记抗体 (抗原)，与待测标本中应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体 -待测抗原-HRP/ALP/吖啶酯标记复合物，然后在催化剂或氧化剂作用下，促使复合物分解发光。该方法具有灵敏度高、稳定性强、特异性强、线性范围宽、简单快速、安全无毒、自动化程度高等优点，容易实现自动化定量检测患者抗体，其灵敏度和线性范围超过以往技术。
本发明的有益效果为：
本发明所提供的一种自身免疫抗体检测方法，基于磁微粒化学发光检测原理，将血清样本稀释一次可用于多个项目检测或者一个项目检测多次，在满足单个项目多次检测的同时，又可以对不同的项目进行检测，节省样本消耗量，减少样本稀释次数和操作误差，方便快捷。同时该检测方法适用于所有抗体检测项目。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明自身免疫抗体检测方法的原理图。
图2是本发明磁微粒化学发光检测基本原理图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
如图1和图2所示，本实施例提供一种自身免疫抗体检测方法，包括以下步骤：
分离待测血液样本的血清样本；
在血清样本加入稀释液混匀得到待测试液体；
将待测试液体用于七个项目的检测或者在同一个项目进行七次检测。
血清样本与稀释液的比例为1:(4-99)，比例优选为1:19，自身免疫抗体检测过程中，血清样本一次只需要15uL样本，需要稀释液285uL，只需要一个稀释反应杯。
该检测方法基于磁微粒化学发光检测原理。
磁微粒化学发光检测包括间接法、捕获法、固相抗原竞争法和双抗体夹心法。
间接法就是包被抗原，然后用酶标记的抗抗体检测样本中抗体，适合于检测对象是自身抗体的情况。间接法的优点：相对较方便，只要变换包被抗原就可以检测不同的项目。间接法的缺点：标本中的特异性抗体会竞争性的结合抗原，使结果出现假阴性。
间接法的操作步骤：
a)磁性微球表面固定抗原。
b)加入样本(含目标抗体)孵育，清洗。
c)加入酶标抗抗体孵育，清洗。
d)加发光底物，检测信号。
血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰 IgM抗体的测定，因此测定IgM抗体多用捕获法。先将所有血清IgM(包括异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上，去除IgG后测定特异性IgM。
捕获法的操作步骤：
a)将抗人IgM抗体连接在固相载体上形成固相抗人IgM，洗涤。
b)加入稀释的血清标本中的IgM抗体被固相抗体捕获洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。
c)加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合洗涤。
d)加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合洗涤。
e)加底物显色，检测信号。
固相抗原竞争法是指受检抗体和酶标抗体竞争性的与磁珠表面抗原结合。结合于固相载体的酶标抗体与受检抗体的量呈反比。若受检样本中无抗体，酶标抗体能够顺利与抗原结合，出现强信号。若受检样本中有抗体，则竞争性的占去了酶标抗体与抗原的结合，酶标抗体的结合力减弱，信号强度减弱。
固相抗原竞争法的操作步骤：
a)磁珠表面固定特异性抗原。
b)加受检标本和酶标抗原的混合液孵育。
c)加发光底物，检测信号。
双抗体夹心法(二步法)是检测抗原最常用的方法，双抗体夹心法(二步法)的操作步骤：
a)将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂。
b)加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时问，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
c)加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量成正相关。
d)加发光底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
双抗夹心法(一步法)在一步法测定中，应注意钩状效应(hook effect)，类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。
采用双抗夹心法(一步法)进行化学发光检测，当样本中抗原量较多是，容易出现假阴性。
采用双抗夹心法(一步法)的操作步骤：
a)磁珠表面固定一抗。
b)加样本和酶标二抗孵育，清洗。
c)加发光底物，检测信号。
本发明不局限于上述可选的实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品。上述具体实施方式不应理解成对本发明的保护范围的限制，本发明的保护范围应当以权利要求书中界定的为准，并且说明书可以用于解释权利要求书。
Claims (4)
1.一种自身免疫抗体检测方法，其特征在于包括以下步骤：
分离待测血液样本的血清样本；
在血清样本加入稀释液混匀得到待测试液体；
将待测试液体用于多个项目的检测或者在同一个项目进行多次检测。
2.根据权利要求1所述的自身免疫抗体检测方法，其特征在于：所述血清样本与稀释液的比例为1:(4-99)。
3.根据权利要求1或2所述的自身免疫抗体检测方法，其特征在于：所述血清样本与稀释液的比例为1:19。
4.根据权利要求1所述的自身免疫抗体检测方法，其特征在于：该检测方法基于磁微粒化学发光检测原理。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20200807 |