JPH04301764A - 被分析物質の測定方法 - Google Patents
被分析物質の測定方法Info
- Publication number
- JPH04301764A JPH04301764A JP3337431A JP33743191A JPH04301764A JP H04301764 A JPH04301764 A JP H04301764A JP 3337431 A JP3337431 A JP 3337431A JP 33743191 A JP33743191 A JP 33743191A JP H04301764 A JPH04301764 A JP H04301764A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- particles
- reagent
- solid phase
- analyte
- magnetic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 239000000463 material Substances 0.000 title description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 56
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 42
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 27
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 16
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 2
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 2
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Substances CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Substances OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 claims 1
- 229910001488 sodium perchlorate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 abstract description 17
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 abstract description 11
- 238000003795 desorption Methods 0.000 abstract description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 8
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical class C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 6
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 5
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 3
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- HUDPLKWXRLNSPC-UHFFFAOYSA-N 4-aminophthalhydrazide Chemical compound O=C1NNC(=O)C=2C1=CC(N)=CC=2 HUDPLKWXRLNSPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N iron(II,III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 230000007073 chemical hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000011246 composite particle Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013198 immunometric assay Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
- G01N33/54333—Modification of conditions of immunological binding reaction, e.g. use of more than one type of particle, use of chemical agents to improve binding, choice of incubation time or application of magnetic field during binding reaction
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/76—Human chorionic gonadotropin including luteinising hormone, follicle stimulating hormone, thyroid stimulating hormone or their receptors
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/80—Fluorescent dyes, e.g. rhodamine
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/804—Radioisotope, e.g. radioimmunoassay
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/805—Optical property
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は液体・固相間の標識物質
分配を測定する分析方法に関する。アッセイには微粒状
あるいはモノリスの例えばコーティングされたチューブ
であってよい固相試薬が包含される。このタイプのアッ
セイは自体当業者に知られ、そしてイムノアッセイおよ
びイムノメトリックアッセイを含有する。
分配を測定する分析方法に関する。アッセイには微粒状
あるいはモノリスの例えばコーティングされたチューブ
であってよい固相試薬が包含される。このタイプのアッ
セイは自体当業者に知られ、そしてイムノアッセイおよ
びイムノメトリックアッセイを含有する。
【０００２】
【従来の技術】多くの場合において、試薬をインキュベ
ートした後には、液相からの固相分離が伴う（いわゆる
不均一または固相イムノメトリック測定）。微粒状固相
は沈降、遠心分離、濾過または磁場により液相から除く
ことができる。
ートした後には、液相からの固相分離が伴う（いわゆる
不均一または固相イムノメトリック測定）。微粒状固相
は沈降、遠心分離、濾過または磁場により液相から除く
ことができる。
【０００３】かかるイムノアッセイに用いる固相も同じ
く当業者に知られており、また文献に知られている。例
えば、ＶＯＬＬＥＲ， Ａ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｕｌｌ
． Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇ． ５３， ５
５〜６５ （１９７６）を参照されたい。
く当業者に知られており、また文献に知られている。例
えば、ＶＯＬＬＥＲ， Ａ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｕｌｌ
． Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇ． ５３， ５
５〜６５ （１９７６）を参照されたい。
【０００４】懸濁され得るが液相には不溶である磁化可
能な粒子には磁場において液相から速かに取り出せると
いう利点がある。
能な粒子には磁場において液相から速かに取り出せると
いう利点がある。
【０００５】磁性粒子を用いた被分析物質（ａｎａｌｙ
ｔｅ）の測定方法は例えば米国特許第４，５５４，０８
８号、同第３，９３３，９９７号、および欧州特許出願
ＥＰ ０ １３６ １２６に記載されている。ラジオア
イソトープで標識された物質がこれらの方法で被分析物
質を測定するために用いられている。
ｔｅ）の測定方法は例えば米国特許第４，５５４，０８
８号、同第３，９３３，９９７号、および欧州特許出願
ＥＰ ０ １３６ １２６に記載されている。ラジオア
イソトープで標識された物質がこれらの方法で被分析物
質を測定するために用いられている。
【０００６】これら前述の方法には、潜在的な害が知ら
れ、従って取扱いおよび廃棄物処理が困難なラジオアイ
ソトープの使用に限られるという重大な欠点がある。
れ、従って取扱いおよび廃棄物処理が困難なラジオアイ
ソトープの使用に限られるという重大な欠点がある。
【０００７】ラジオアイソトープを標識として用いる代
わりに今では酵素、従って酵素イムノアッセイが広く用
いられている。この方法では、標識されるべき試薬は酵
素に連結され、そして固相レセプター／被分析物質複合
体または固相レセプター／被分析物質／レセプター複合
体の形成後、その酵素の基質とインキュベートされる。 その段階で酵素反応により、有色の、発光性のまたは蛍
光性の基質誘導体が生成する。反応完了後に、放射活性
の代わりに測定されるのは吸収、発光または蛍光である
。
わりに今では酵素、従って酵素イムノアッセイが広く用
いられている。この方法では、標識されるべき試薬は酵
素に連結され、そして固相レセプター／被分析物質複合
体または固相レセプター／被分析物質／レセプター複合
体の形成後、その酵素の基質とインキュベートされる。 その段階で酵素反応により、有色の、発光性のまたは蛍
光性の基質誘導体が生成する。反応完了後に、放射活性
の代わりに測定されるのは吸収、発光または蛍光である
。
【０００８】磁気的に除去自在の適切な粒子は例えば酸
化鉄粒子を含んでいる故に固有の色を有している。それ
らは、それらのサイズおよびそれらのマグネタイト含量
の関数として光を吸収する。この粒子による固有の吸収
は吸収、発光または蛍光の測定における信号を非特異的
に減少させてしまう。吸光度は、就中、磁性粒子の使用
量に依存する。
化鉄粒子を含んでいる故に固有の色を有している。それ
らは、それらのサイズおよびそれらのマグネタイト含量
の関数として光を吸収する。この粒子による固有の吸収
は吸収、発光または蛍光の測定における信号を非特異的
に減少させてしまう。吸光度は、就中、磁性粒子の使用
量に依存する。
【０００９】さらに、もちろんのことではあるが、前述
の依存性は、程度の差はあるが、磁力による引力を受け
ない粒子にもあてはまる。
の依存性は、程度の差はあるが、磁力による引力を受け
ない粒子にもあてはまる。
【００１０】特許出願ＥＰ ０ １７７ １９１は、固
相としての磁性粒子、酵素／被分析物質接合体および信
号発出試薬としての発色原性基質を用いた不均一酵素イ
ムノアッセイを記載している。吸収を測定する前に磁性
粒子を除去しなければならない。この方法の欠点は信号
を発生させるために通常２０〜６０分というさらなるイ
ンキュベーション段階を付加的に踏む必要がある点であ
る。すなわちこの方法は、ラジオアイソトープを用いる
相当する方法よりも時間および労力の消費が相当に大き
くならざるを得ない。もう一つの欠点は、この方法が直
接の化学発光または蛍光標識を用いる不均一イムノアッ
セイには使用できない点である。
相としての磁性粒子、酵素／被分析物質接合体および信
号発出試薬としての発色原性基質を用いた不均一酵素イ
ムノアッセイを記載している。吸収を測定する前に磁性
粒子を除去しなければならない。この方法の欠点は信号
を発生させるために通常２０〜６０分というさらなるイ
ンキュベーション段階を付加的に踏む必要がある点であ
る。すなわちこの方法は、ラジオアイソトープを用いる
相当する方法よりも時間および労力の消費が相当に大き
くならざるを得ない。もう一つの欠点は、この方法が直
接の化学発光または蛍光標識を用いる不均一イムノアッ
セイには使用できない点である。
【００１１】このことは、文献に開示されそして例えば
特許出願ＥＰ ０ １４９ ５６５に用いられているよ
うな酵素−強化発光系においては不可能である。その場
合にはレミノール型の基質を刺激して発光させるのにペ
ルオキシダーゼが用いられる。この方法においてレセプ
ターと酵素の複合体を担持する粒子を除去することは、
化学発光発生がもはや可能でなくなる、つまり信号も全
く測定できないことを意味している。
特許出願ＥＰ ０ １４９ ５６５に用いられているよ
うな酵素−強化発光系においては不可能である。その場
合にはレミノール型の基質を刺激して発光させるのにペ
ルオキシダーゼが用いられる。この方法においてレセプ
ターと酵素の複合体を担持する粒子を除去することは、
化学発光発生がもはや可能でなくなる、つまり信号も全
く測定できないことを意味している。
【００１２】米国特許第４，５７６，９１２号は蛍光団
を担体分子を介して特異結合パートナーに結合させる方
法を開示している。その蛍光団は未結合接合体を除去し
た後に担体分子の化学的または酵素的加水分解によって
遊離され、またこの加水分解は典型的には６０分間かか
る。化学発光標識はこの特許では考慮されていない。
を担体分子を介して特異結合パートナーに結合させる方
法を開示している。その蛍光団は未結合接合体を除去し
た後に担体分子の化学的または酵素的加水分解によって
遊離され、またこの加水分解は典型的には６０分間かか
る。化学発光標識はこの特許では考慮されていない。
【００１３】ＥＰ ０ １４９ ５６５に記載の方法は
、技術水準を代表している。この特許出願は懸濁磁性粒
子の存在下の化学発光および蛍光の測定を記載している
。光の吸収にかかわらずアッセイの実施が可能な磁性粒
子の狭い濃度範囲がそこに示されている（図１も参照）
。しかしながら、本発明が示すように、これだからとい
って表面積が大きく拡散行程（ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｐ
ａｔｈｗａｙ）が短いといった磁性粒子技術の利点が消
尽しているわけではない。
、技術水準を代表している。この特許出願は懸濁磁性粒
子の存在下の化学発光および蛍光の測定を記載している
。光の吸収にかかわらずアッセイの実施が可能な磁性粒
子の狭い濃度範囲がそこに示されている（図１も参照）
。しかしながら、本発明が示すように、これだからとい
って表面積が大きく拡散行程（ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｐ
ａｔｈｗａｙ）が短いといった磁性粒子技術の利点が消
尽しているわけではない。
【００１４】
【課題を解決するための手段】今般、驚くべきことに、
適切な物質を添加することにより標識試薬の信号を、該
標識を脱着させそして固相の除去後に干渉なく測定でき
ることを見出した。測定された信号は被分析物質の使用
濃度に対し厳密な関係を示す。
適切な物質を添加することにより標識試薬の信号を、該
標識を脱着させそして固相の除去後に干渉なく測定でき
ることを見出した。測定された信号は被分析物質の使用
濃度に対し厳密な関係を示す。
【００１５】本発明による方法により、ＥＰ ０ １４
９ ５６５に記載の方法よりも著しく大きい信号収率（
ｓｉｇｎａｌ ｙｉｅｌｄ）および信号ダイナミクスの
向上が達成される（図２も参照）。
９ ５６５に記載の方法よりも著しく大きい信号収率（
ｓｉｇｎａｌ ｙｉｅｌｄ）および信号ダイナミクスの
向上が達成される（図２も参照）。
【００１６】これによって特定の作用機構を明記したい
わけではないが、本発明による物質は固相との標識担持
複合体をスプリットさせ、そして標識を適切な形で遊離
させるものと推定される。
わけではないが、本発明による物質は固相との標識担持
複合体をスプリットさせ、そして標識を適切な形で遊離
させるものと推定される。
【００１７】今般、本発明により固相を高濃度で用いる
ことができる。さらに表面積が増大するために、被分析
物質に比べ大過剰で固相レセプターを用いることができ
る。さらにまた、拡散行程が相当短くなる。それら二つ
の作用は平衡の位置およびアッセイの反応速度に有益な
影響を与える。
ことができる。さらに表面積が増大するために、被分析
物質に比べ大過剰で固相レセプターを用いることができ
る。さらにまた、拡散行程が相当短くなる。それら二つ
の作用は平衡の位置およびアッセイの反応速度に有益な
影響を与える。
【００１８】
【詳細な記述】本発明は、方法中に以下の段階を含む液
体媒質中の被分析物質を測定するための不均一免疫化学
的方法に関する： −被分析物質含有検体を、磁気的に引きつけ自在の固相
試薬と、及び発光団（ｌｕｍｉｎｏｐｈｏｒｅ）または
蛍光団（ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ）で標識された試薬と
反応容器内でインキュベートして標識された試薬を被分
析物質濃度の関数として液相と磁気的に引きつけ自在の
粒子との間に分配させる。 −固相粒子から液相を除去する。 −粒子を試薬Ａに再懸濁し、該粒子を除去する。 −上清中の発光（ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）または蛍
光反応を生起させそして測定する。（ここで試薬Ａは標
識を固相から脱着させるのに適している。）
体媒質中の被分析物質を測定するための不均一免疫化学
的方法に関する： −被分析物質含有検体を、磁気的に引きつけ自在の固相
試薬と、及び発光団（ｌｕｍｉｎｏｐｈｏｒｅ）または
蛍光団（ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ）で標識された試薬と
反応容器内でインキュベートして標識された試薬を被分
析物質濃度の関数として液相と磁気的に引きつけ自在の
粒子との間に分配させる。 −固相粒子から液相を除去する。 −粒子を試薬Ａに再懸濁し、該粒子を除去する。 −上清中の発光（ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）または蛍
光反応を生起させそして測定する。（ここで試薬Ａは標
識を固相から脱着させるのに適している。）
【００１９】適切な場合には、洗浄段階を個々の段階の
間にはさむこともできる。
間にはさむこともできる。
【００２０】この方法は、原則として、例えば酵素活性
または放射活性をマーカーとして測定する系に対しても
適しているが、蛍光または化学発光標識に関連して用い
るのが特に有利であり、そして化学発光標識が好ましい
。
または放射活性をマーカーとして測定する系に対しても
適しているが、蛍光または化学発光標識に関連して用い
るのが特に有利であり、そして化学発光標識が好ましい
。
【００２１】文献には様々な化学発光系が記載されてい
るが、これらのうち、ルミノール、イソルミノールおよ
びアクリジニウム誘導体が主として重要なものとなって
いる。ルミノールおよびイソルミノール誘導体はＨ．Ｒ
． Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ． “Ｍｅｔｈｏ
ｄｓｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ” Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｖｏｌ
ＬＶＩＩ ４２４ ｅｔ ｓｅｑ．に記載されている。 標識付与物質としてのアクリジニウム誘導体の使用はＷ
ｅｅｋｓ ｅｔ ａｌ．（Ｃｌｉｎ． Ｃｈｅｍ ２９
／８， １９８３， １４７４〜１４７９）に記載され
ている。アクリジニウム誘導体の化学発光はアルカリ性
Ｈ２Ｏ２の添加により開始させることができ、また数秒
以内に測定できる。
るが、これらのうち、ルミノール、イソルミノールおよ
びアクリジニウム誘導体が主として重要なものとなって
いる。ルミノールおよびイソルミノール誘導体はＨ．Ｒ
． Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ． “Ｍｅｔｈｏ
ｄｓｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ” Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｖｏｌ
ＬＶＩＩ ４２４ ｅｔ ｓｅｑ．に記載されている。 標識付与物質としてのアクリジニウム誘導体の使用はＷ
ｅｅｋｓ ｅｔ ａｌ．（Ｃｌｉｎ． Ｃｈｅｍ ２９
／８， １９８３， １４７４〜１４７９）に記載され
ている。アクリジニウム誘導体の化学発光はアルカリ性
Ｈ２Ｏ２の添加により開始させることができ、また数秒
以内に測定できる。
【００２２】これら化合物には、酵素強化発光系とは対
照的に、信号を誘出するために更なるインキュベーショ
ン段階が不要であるという標識付与試薬としての利点が
ある。さらにまたアクリジニウム化合物は本発明に使用
される諸試薬に対して安定である。
照的に、信号を誘出するために更なるインキュベーショ
ン段階が不要であるという標識付与試薬としての利点が
ある。さらにまたアクリジニウム化合物は本発明に使用
される諸試薬に対して安定である。
【００２３】好ましい化学発光標識はＥＰ ０ ２５７
５４１およびＥＰ ０ ３３０ ０５０に記載のアク
リジニウム化合物である。
５４１およびＥＰ ０ ３３０ ０５０に記載のアク
リジニウム化合物である。
【００２４】本発明に用いる磁気的に引きつけ自在の粒
子の厳密な構成は自体、当業者に知られていて本発明に
ついては実質的に重要ではないが、有利には複合粒子ま
たは純マグネタイト粒子として設計できる超常磁性粒子
が好ましい。さらに原則として磁化できない粒子を用い
ることもできるが、その場合にはその分離方法は、例え
ば遠心分離またはクロマトグラフィーなど特定の粒子に
適切なものでなければならない。かかる微粒状固相も、
例えば有色または無色のいずれでもよいラテックス粒子
など、当業者に知られている。
子の厳密な構成は自体、当業者に知られていて本発明に
ついては実質的に重要ではないが、有利には複合粒子ま
たは純マグネタイト粒子として設計できる超常磁性粒子
が好ましい。さらに原則として磁化できない粒子を用い
ることもできるが、その場合にはその分離方法は、例え
ば遠心分離またはクロマトグラフィーなど特定の粒子に
適切なものでなければならない。かかる微粒状固相も、
例えば有色または無色のいずれでもよいラテックス粒子
など、当業者に知られている。
【００２５】前記粒子は好ましくは、０．１〜５．０μ
ｍのサイズを有し、また０．２〜２．５μｍの範囲が特
に好ましく、０．２〜１．０μｍが格別に好ましい。
ｍのサイズを有し、また０．２〜２．５μｍの範囲が特
に好ましく、０．２〜１．０μｍが格別に好ましい。
【００２６】粒子全質量が同じ場合に全体として数も表
面積も多い小粒子をアッセイに用いるのが有利である。 粒子数が多いということは、所与の容量における粒子間
距離が極めて小さいことを意味し、その結果、溶存非分
析物質の、および標識物質の粒子表面積への拡散行程が
極めて小さいものとなる。従って、固相に結合したレセ
プター複合体の形成に導く反応の速度が増加する。さら
に、固相の総表面積が大きいためにレセプター濃度を増
加させることができるようになる。レセプター濃度が高
いと被分析物質の結合が広範囲となり、また同じく反応
速度も増加する。
面積も多い小粒子をアッセイに用いるのが有利である。 粒子数が多いということは、所与の容量における粒子間
距離が極めて小さいことを意味し、その結果、溶存非分
析物質の、および標識物質の粒子表面積への拡散行程が
極めて小さいものとなる。従って、固相に結合したレセ
プター複合体の形成に導く反応の速度が増加する。さら
に、固相の総表面積が大きいためにレセプター濃度を増
加させることができるようになる。レセプター濃度が高
いと被分析物質の結合が広範囲となり、また同じく反応
速度も増加する。
【００２７】しかしながら、磁気的に除去自在の複合小
粒子は、実用的な時間内に反応溶液から除去できるよう
にするには、大きな割合の磁化可能な材料を必要とする
。粒子懸濁液による光の吸収は、特に、その性質、サイ
ズ、磁性材料の含量および粒子使用濃度に依存する。 従来の技術に記載されているように、懸濁粒子の存在下
に信号を測定すると、例えば血清中のＴＳＨを測定する
ためのアッセイにおける測定可能信号は、混合物あたり
の粒子数の増加に伴い最大値を通過する。これらの条件
下において至適である粒子量を超えると、光の吸収量の
増加が標識試薬結合の増加により得られる付加的化学発
光を超えてしまう（図１）。
粒子は、実用的な時間内に反応溶液から除去できるよう
にするには、大きな割合の磁化可能な材料を必要とする
。粒子懸濁液による光の吸収は、特に、その性質、サイ
ズ、磁性材料の含量および粒子使用濃度に依存する。 従来の技術に記載されているように、懸濁粒子の存在下
に信号を測定すると、例えば血清中のＴＳＨを測定する
ためのアッセイにおける測定可能信号は、混合物あたり
の粒子数の増加に伴い最大値を通過する。これらの条件
下において至適である粒子量を超えると、光の吸収量の
増加が標識試薬結合の増加により得られる付加的化学発
光を超えてしまう（図１）。
【００２８】従って、本発明による方法によってのみ、
磁気的に除去自在の粒子を十分に広い濃度範囲で用いる
ことができるようになる。
磁気的に除去自在の粒子を十分に広い濃度範囲で用いる
ことができるようになる。
【００２９】本発明に用いられる脱着試薬は次の要件を
満たす： −水素結合およびイオン性、疎水性およびファン・デル
・ワールス相互作用より本質的に成る少くとも一つの分
子間結合を除去する。 −光の吸収による化学発光反応の障害がない。 −発光団の励起状態のクエンテングがない。 −アルカリ性Ｈ２Ｏ２溶液と反応しない。 −磁性粒子の磁気による除去自在性が障害されない。 −磁性粒子を溶解したり凝集したりしない。
満たす： −水素結合およびイオン性、疎水性およびファン・デル
・ワールス相互作用より本質的に成る少くとも一つの分
子間結合を除去する。 −光の吸収による化学発光反応の障害がない。 −発光団の励起状態のクエンテングがない。 −アルカリ性Ｈ２Ｏ２溶液と反応しない。 −磁性粒子の磁気による除去自在性が障害されない。 −磁性粒子を溶解したり凝集したりしない。
【００３０】これらの条件に満たす試薬には、例えば、
カオトロピック試薬、イオン性洗剤、一部の有機溶媒、
およびｐＨを１．５〜３の範囲に調節するのに適した緩
衝物質が包含される。下記において例示として挙げられ
る試薬のほか、前述の要件を満たす極めて多くの他の試
薬およびそれらの組合せが考えられる。それらの一部は
実施例に用いられている。
カオトロピック試薬、イオン性洗剤、一部の有機溶媒、
およびｐＨを１．５〜３の範囲に調節するのに適した緩
衝物質が包含される。下記において例示として挙げられ
る試薬のほか、前述の要件を満たす極めて多くの他の試
薬およびそれらの組合せが考えられる。それらの一部は
実施例に用いられている。
【００３１】
【表１】
【００３２】これらの試薬は単独であるいは組合せとし
て用いることができる。
て用いることができる。
【００３３】基本的に当業者は各種濃度を用いたいくつ
かの実験によって特定の物質または物質の組合せについ
ての至適条件を容易に確立することができる。
かの実験によって特定の物質または物質の組合せについ
ての至適条件を容易に確立することができる。
【００３４】実施例に示された具体例は特に好ましい。
【００３５】本発明は原則として標識試薬の液相・固相
間分配を測定する方法に用いることができる。
間分配を測定する方法に用いることができる。
【００３６】この方法の過程において、固相、被分析物
質および標識試薬は同時にまたは逐次的に適当な時間イ
ンキュベートされる。インキュベーションの後、固相を
除去し、次いで脱着試薬に懸濁しそして短時間インキュ
ベートする。粒子を再び除去し、そして上清を測定する
。多数の検体を同時に検査するときのステップ順序は典
型的には次のとおりである：
質および標識試薬は同時にまたは逐次的に適当な時間イ
ンキュベートされる。インキュベーションの後、固相を
除去し、次いで脱着試薬に懸濁しそして短時間インキュ
ベートする。粒子を再び除去し、そして上清を測定する
。多数の検体を同時に検査するときのステップ順序は典
型的には次のとおりである：
【００３７】Ａ． 懸濁された磁気的に引きつけ自在
の粒子、検体、標準および標識試薬をピペットで反応容
器に移す。 Ｂ． 反応混合物を含む容器を所要の温度で規定時間
インキュベートする。 Ｃ． 使用容器に適したマグネット装置を用いて磁性
粒子を除去する。 Ｄ． 適切なピペット、ポンプまたは真空で吸引する
ことにより上清を除去する。 Ｅ． 洗浄用緩衝液の添加および吸引除去を反復する
。 Ｆ． 磁化可能な粒子の除去に用いた磁場を除去また
はスイッチ・オフし、そして磁性粒子を脱着試薬に再懸
濁する。 Ｇ． マグネット系を用いて粒子を除去し、その上清
を適当な容器に移しそして標識を測定する。
の粒子、検体、標準および標識試薬をピペットで反応容
器に移す。 Ｂ． 反応混合物を含む容器を所要の温度で規定時間
インキュベートする。 Ｃ． 使用容器に適したマグネット装置を用いて磁性
粒子を除去する。 Ｄ． 適切なピペット、ポンプまたは真空で吸引する
ことにより上清を除去する。 Ｅ． 洗浄用緩衝液の添加および吸引除去を反復する
。 Ｆ． 磁化可能な粒子の除去に用いた磁場を除去また
はスイッチ・オフし、そして磁性粒子を脱着試薬に再懸
濁する。 Ｇ． マグネット系を用いて粒子を除去し、その上清
を適当な容器に移しそして標識を測定する。
【００３８】特許請求の範囲も開示の一部を形成する。
【００３９】以下の実施例は本発明の例示に役立つもの
であるが、それをいささかも限定するものではない。特
に断りのない限り、ローヌ・プーラン（Ｒｈｏｎｅ Ｐ
ｏｕｌｅｎｃ）社により供給されたＥｓｔａｐｏｒＲ
粒子（０．３５μｍ）が磁気的に除去自在の粒子として
用いられる。
であるが、それをいささかも限定するものではない。特
に断りのない限り、ローヌ・プーラン（Ｒｈｏｎｅ Ｐ
ｏｕｌｅｎｃ）社により供給されたＥｓｔａｐｏｒＲ
粒子（０．３５μｍ）が磁気的に除去自在の粒子として
用いられる。
【００４０】実施例１
従来技術によるヒト甲状腺刺激ホルモンの測定（懸濁液
中の測定）以下の試薬をポリスチレンチューブ中で共に
インキュベートした： −モノクローナル抗−ｈＴＳＨ抗体でコーティングされ
た磁気的に除去自在の粒子、０．００６ｍｇ、０．０１
３ｍｇ、０．０１９ｍｇ、０．０２５ｍｇ、０．０５０
ｍｇ、０．０７５ｍｇ、０．１ｍｇおよび０．１２５ｍ
ｇ。 −ヒト血清中の５０μＩＵ／ｍｌ ｈＴＳＨ溶液１００
μｌ。 −アクリジニウム誘導体に接合されたモノクローナル抗
体の溶液４０μｌ。 −粒子を懸濁させる。 −その懸濁液を３７℃で１５分間インキュベートする。 −Ｇｅｎｅ−Ｔｒａｋ社により供給される分離系を用い
て粒子を除去し、そして上清を吸引により除去する。 −３００μｌの洗浄用緩衝液を除去された粒子に４回添
加しその都度再び吸引除去する。 −次いで粒子を１００μｌの洗浄用緩衝液に再懸濁させ
る。 −そしてポリプロピレンチューブ（１ｍｌ）に移す。こ
れらチューブをポリスチレンチューブ（５ｍｌ）に入れ
る。 ３００μｌの０．１Ｎ硝酸および０．５％Ｈ２Ｏ２およ
び３００μｌの０．２５Ｎ水酸化ナトリウム溶液の添加
により化学発光を生起させそしてＢｅｒｔｈｏｌｄ社に
より供給される発光測定装置（型式ＬＢ ９５２ Ｔ）
で測定する（図１参照）。
中の測定）以下の試薬をポリスチレンチューブ中で共に
インキュベートした： −モノクローナル抗−ｈＴＳＨ抗体でコーティングされ
た磁気的に除去自在の粒子、０．００６ｍｇ、０．０１
３ｍｇ、０．０１９ｍｇ、０．０２５ｍｇ、０．０５０
ｍｇ、０．０７５ｍｇ、０．１ｍｇおよび０．１２５ｍ
ｇ。 −ヒト血清中の５０μＩＵ／ｍｌ ｈＴＳＨ溶液１００
μｌ。 −アクリジニウム誘導体に接合されたモノクローナル抗
体の溶液４０μｌ。 −粒子を懸濁させる。 −その懸濁液を３７℃で１５分間インキュベートする。 −Ｇｅｎｅ−Ｔｒａｋ社により供給される分離系を用い
て粒子を除去し、そして上清を吸引により除去する。 −３００μｌの洗浄用緩衝液を除去された粒子に４回添
加しその都度再び吸引除去する。 −次いで粒子を１００μｌの洗浄用緩衝液に再懸濁させ
る。 −そしてポリプロピレンチューブ（１ｍｌ）に移す。こ
れらチューブをポリスチレンチューブ（５ｍｌ）に入れ
る。 ３００μｌの０．１Ｎ硝酸および０．５％Ｈ２Ｏ２およ
び３００μｌの０．２５Ｎ水酸化ナトリウム溶液の添加
により化学発光を生起させそしてＢｅｒｔｈｏｌｄ社に
より供給される発光測定装置（型式ＬＢ ９５２ Ｔ）
で測定する（図１参照）。
【００４１】実施例２
ヒト甲状腺刺激ホルモン（ｈＴＳＨ）の測定以下の試薬
をポリスチレンチューブ中で共にインキュベートした： −モノクローナル抗−ｈＴＳＨ抗体でコーティングされ
た磁気的に除去自在の粒子０．０２５ｍｇ、０．１２５
ｍｇおよび０．２５０ｍｇ。 −ヒト血清中の５０μＩＵ／ｍｌ溶液１００μｌ。 −アクリジニウム誘導体に接合されたモノクローナル抗
体の溶液４０μｌ。 −粒子を懸濁させる。 −その懸濁液を３７℃で１５分間インキュベートする。 −Ｇｅｎｅ−Ｔｒａｋ社により供給された分離系により
粒子を除去し、そしてその上清を吸引により除去する。 −除去された粒子に３００μｌの洗浄用緩衝液を４回添
加しそしてその都度吸引により除去する。 −次にそれら粒子を１００μｌの除去試薬に再懸濁し、
そして次に、 ａ） その懸濁液を測定に用いる、 ｂ） 脱着させた磁性粒子を除去しそしてその上清を
測定に用いる、 ｃ） ｂ）で除去された磁性粒子を１００μｌの洗浄
用緩衝液に再懸濁しそしてこの懸濁液を測定に用いる。 −測定に用いられる検体をポリプロピレンチューブ（１
ｍｌ）に移す。それらチューブをポリスチレンチューブ
（５ｍｌ）に入れる。３００μｌの０．１Ｎ硝酸および
０．５％Ｈ２Ｏ２および３００μｌの０．２５Ｎ水酸化
ナトリウム溶液の添加により化学発光を生起させそして
測定する。
をポリスチレンチューブ中で共にインキュベートした： −モノクローナル抗−ｈＴＳＨ抗体でコーティングされ
た磁気的に除去自在の粒子０．０２５ｍｇ、０．１２５
ｍｇおよび０．２５０ｍｇ。 −ヒト血清中の５０μＩＵ／ｍｌ溶液１００μｌ。 −アクリジニウム誘導体に接合されたモノクローナル抗
体の溶液４０μｌ。 −粒子を懸濁させる。 −その懸濁液を３７℃で１５分間インキュベートする。 −Ｇｅｎｅ−Ｔｒａｋ社により供給された分離系により
粒子を除去し、そしてその上清を吸引により除去する。 −除去された粒子に３００μｌの洗浄用緩衝液を４回添
加しそしてその都度吸引により除去する。 −次にそれら粒子を１００μｌの除去試薬に再懸濁し、
そして次に、 ａ） その懸濁液を測定に用いる、 ｂ） 脱着させた磁性粒子を除去しそしてその上清を
測定に用いる、 ｃ） ｂ）で除去された磁性粒子を１００μｌの洗浄
用緩衝液に再懸濁しそしてこの懸濁液を測定に用いる。 −測定に用いられる検体をポリプロピレンチューブ（１
ｍｌ）に移す。それらチューブをポリスチレンチューブ
（５ｍｌ）に入れる。３００μｌの０．１Ｎ硝酸および
０．５％Ｈ２Ｏ２および３００μｌの０．２５Ｎ水酸化
ナトリウム溶液の添加により化学発光を生起させそして
測定する。
【００４２】
【表２】
【００４３】脱着試薬：
１） グアニジウムＨＣｌ ３ｍｏｌ／リット
ル、ｐＨ４２） 尿素 ５ｍｏｌ／リットル
、ｐＨ４３） ＳＤＳ １ｇ／１００ｍｌの１０
ｍｍｏｌ／リットル リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６ ４） ＤＭＦ ６０％（ｗ／ｖ）これらのデータ
は図２にグラフとして示されている。
ル、ｐＨ４２） 尿素 ５ｍｏｌ／リットル
、ｐＨ４３） ＳＤＳ １ｇ／１００ｍｌの１０
ｍｍｏｌ／リットル リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６ ４） ＤＭＦ ６０％（ｗ／ｖ）これらのデータ
は図２にグラフとして示されている。
【００４４】実施例３
ヒト甲状腺刺激ホルモン（ｈＴＳＨ）の測定以下の試薬
をＦｌｏｗチューブ内で共にインキュベートした： −モノクローナル抗−ｈＴＳＨ抗体でコーティングされ
た磁気的に除去自在の粒子、０．１２５ｍｇ。 −ヒト血清中のｈＴＳＨの標準溶液１００μｌ。 −アクリジニウム誘導体に接合されたモノクローナル抗
体の溶液４０μｌ。 −粒子を懸濁させる。 −その懸濁液を３７℃で１５分間インキュベートする。 −Ｇｅｎｅ−Ｔｒａｋ社により供給された分離系を用い
て粒子を除去し、そして上清を吸引により除去する。 −除去された粒子に３００μｌの洗浄用緩衝液を４回添
加した。 −次にそれら粒子を１００μｌの除去試薬に再懸濁し、
次いで前記分離系に２分間置いた。 −その上清を除去しそしてＦｌｏｗチューブに移す。そ
れらＦｌｏｗチューブをＳａｒｓｔｅｄｔチューブに入
れる。３００μｌの０．１Ｎ硝酸および０．５％Ｈ２Ｏ
２および３００μｌの０．２５水酸化ナトリウム溶液の
添加により化学発光を生起させそして発光測定装置で測
定する。
をＦｌｏｗチューブ内で共にインキュベートした： −モノクローナル抗−ｈＴＳＨ抗体でコーティングされ
た磁気的に除去自在の粒子、０．１２５ｍｇ。 −ヒト血清中のｈＴＳＨの標準溶液１００μｌ。 −アクリジニウム誘導体に接合されたモノクローナル抗
体の溶液４０μｌ。 −粒子を懸濁させる。 −その懸濁液を３７℃で１５分間インキュベートする。 −Ｇｅｎｅ−Ｔｒａｋ社により供給された分離系を用い
て粒子を除去し、そして上清を吸引により除去する。 −除去された粒子に３００μｌの洗浄用緩衝液を４回添
加した。 −次にそれら粒子を１００μｌの除去試薬に再懸濁し、
次いで前記分離系に２分間置いた。 −その上清を除去しそしてＦｌｏｗチューブに移す。そ
れらＦｌｏｗチューブをＳａｒｓｔｅｄｔチューブに入
れる。３００μｌの０．１Ｎ硝酸および０．５％Ｈ２Ｏ
２および３００μｌの０．２５水酸化ナトリウム溶液の
添加により化学発光を生起させそして発光測定装置で測
定する。
【００４５】
【表３】
これらのデータは図３にグラフとして示されている。
【００４６】
【図１】ｈＴＳＨアッセイに用いた粒子量と信号との相
関例（従来技術）を示す図である。
関例（従来技術）を示す図である。
【図２】ｈＴＳＨアッセイにおける信号検出前の磁性粒
子分離例を示す図である。
子分離例を示す図である。
【図３】ｈＴＳＨアッセイにおける信号検出前の磁性粒
子分離例（標準曲線）を示す図である。
子分離例（標準曲線）を示す図である。
Claims (4)
- 【請求項１】 方法中に以下の段階、すなわち、−被
分析物質含有検体を引きつけ自在の微粒状固相試薬と、
そして標識された試薬と反応容器内でインキュベートし
て標識された試薬を被分析物質濃度の関数として液相と
固相試薬との間に分配させる、 −固相粒子から液相を除去する、 −粒子を試薬Ａに再懸濁し、該粒子を除去する（試薬Ａ
は固相から標識を脱着させるのに適している）、−発光
または蛍光反応を生起させそして測定する段階を含む、
液体媒質中の被分析物質を測定するための不均一免疫化
学的方法。 - 【請求項２】 微粒状固相が磁気的に引きつけ自在で
ある請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 試薬Ａが水性溶液中に以下の試薬群の
うちの一つ、または少くとも二物質の組合せを含有する
請求項１記載の方法： −カオトロピック試薬 −イオン性洗剤 −有機溶媒 −ｐＨ域１．５〜３の緩衝剤。 - 【請求項４】 試薬Ａが水性溶液中に以下の試薬群の
うちの一つ、または少くとも二物質の組合せを含有する
請求項１記載の方法。 −ＫＳＣＮ −塩酸グアニジニウム −ＣａＣｌ２ −ＮａＣｌＯ４ −テトラ−Ｎ−ブチル−アンモニウムクロライド−テト
ラメチルアンモニウムクロライド−尿素 −ＳＤＳ −プロピオン酸 −エチレングリコール −ＤＭＦ −ｐＨ域１．５〜５のグリシン。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4041080A DE4041080A1 (de) | 1990-12-21 | 1990-12-21 | Verfahren zur bestimmung eines analyten |
| DE40410803 | 1990-12-21 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04301764A true JPH04301764A (ja) | 1992-10-26 |
| JP3290193B2 JP3290193B2 (ja) | 2002-06-10 |
Family
ID=6420957
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33743191A Expired - Lifetime JP3290193B2 (ja) | 1990-12-21 | 1991-12-20 | 被分析物質の測定方法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7029856B1 (ja) |
| EP (1) | EP0492499B1 (ja) |
| JP (1) | JP3290193B2 (ja) |
| AT (1) | ATE145480T1 (ja) |
| AU (1) | AU657719B2 (ja) |
| CA (1) | CA2058175C (ja) |
| DE (2) | DE4041080A1 (ja) |
| DK (1) | DK0492499T3 (ja) |
| ES (1) | ES2094784T3 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07159407A (ja) * | 1993-12-06 | 1995-06-23 | Olympus Optical Co Ltd | 光学的免疫測定方法及びこれに用いられる免疫測定装置 |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0488152A3 (en) * | 1990-11-30 | 1992-11-25 | Hitachi, Ltd. | Method for immunoassay and apparatus therefor |
| DE4041080A1 (de) * | 1990-12-21 | 1992-06-25 | Behringwerke Ag | Verfahren zur bestimmung eines analyten |
| US5856194A (en) | 1996-09-19 | 1999-01-05 | Abbott Laboratories | Method for determination of item of interest in a sample |
| US5795784A (en) | 1996-09-19 | 1998-08-18 | Abbott Laboratories | Method of performing a process for determining an item of interest in a sample |
| JP5553615B2 (ja) * | 2007-03-01 | 2014-07-16 | アボット・ラボラトリーズ | プロゾーン現象の低減を示すイムノアッセイ |
| US20100267055A1 (en) * | 2007-10-21 | 2010-10-21 | Abbott Laboratories | One-step immunoassays exhibiting increased sensitivity and specificity |
| US20090104634A1 (en) * | 2007-10-21 | 2009-04-23 | Abbott Laboratories | One-step immunoassays exhibiting increased sensitivity and specificity |
| US8222048B2 (en) | 2007-11-05 | 2012-07-17 | Abbott Laboratories | Automated analyzer for clinical laboratory |
| CN113125740B (zh) * | 2021-05-17 | 2022-03-01 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 化学发光免疫分析技术中磁微粒活化效率的鉴定方法 |
Family Cites Families (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3933997A (en) | 1974-03-01 | 1976-01-20 | Corning Glass Works | Solid phase radioimmunoassay of digoxin |
| US4041146A (en) * | 1975-05-01 | 1977-08-09 | General Electric Company | Method for detection of biological particles |
| US4018886A (en) | 1975-07-01 | 1977-04-19 | General Electric Company | Diagnostic method and device employing protein-coated magnetic particles |
| US3970518A (en) | 1975-07-01 | 1976-07-20 | General Electric Company | Magnetic separation of biological particles |
| SE404553B (sv) | 1977-03-04 | 1978-10-09 | Pharmacia Diagnostics Ab | Sett vid bestemningsmetoder involverande biospecifika affinitetsreaktioner |
| US4576912A (en) * | 1978-11-30 | 1986-03-18 | Technicon Instruments Corporation | Fluoroimmunoassaying |
| US4297337A (en) | 1979-04-13 | 1981-10-27 | Corning Glass Works | Solid-phase immunoassays using magnetic glass |
| EP0030087A1 (en) | 1979-11-13 | 1981-06-10 | Technicon Instruments Company Limited | Immunoassay method and apparatus and kit for carrying out the method |
| AU543007B2 (en) * | 1980-04-15 | 1985-03-28 | Technicon Instruments Corportion | Agglutination immunoassay |
| FR2480764B1 (fr) | 1980-04-18 | 1985-10-04 | Rhone Poulenc Spec Chim | Latex de polymeres magnetiques et procede de preparation |
| NO155316C (no) | 1982-04-23 | 1987-03-11 | Sintef | Fremgangsmaate for fremstilling av magnetiske polymerpartikler. |
| US4554088A (en) | 1983-05-12 | 1985-11-19 | Advanced Magnetics Inc. | Magnetic particles for use in separations |
| US4628037A (en) | 1983-05-12 | 1986-12-09 | Advanced Magnetics, Inc. | Binding assays employing magnetic particles |
| CA1220168A (en) | 1983-09-09 | 1987-04-07 | Henry J. Rahn | Magnetic separator for solid phase immunoassays |
| GB8401368D0 (en) | 1984-01-19 | 1984-02-22 | Amersham Int Plc | Assay method |
| US4687734A (en) * | 1984-06-07 | 1987-08-18 | Chester Samuel J | Immunoassay for the detection of human colon cancer using a polyclonal antibody derived from a capillary culture of tumor cells |
| GB8422452D0 (en) | 1984-09-05 | 1984-10-10 | Serono Diagnostics Ltd | Assay |
| AU603342B2 (en) | 1985-10-15 | 1990-11-15 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Chemiluminescent methods and kit |
| US4780421A (en) | 1986-04-03 | 1988-10-25 | Sclavo Inc. | Cleavable labels for use in binding assays |
| DE3645292C2 (de) | 1986-08-22 | 1997-12-11 | Hoechst Ag | Chemilumineszenzimmunoassays und ein Verfahren zu ihrer Herstellung |
| US4891324A (en) | 1987-01-07 | 1990-01-02 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Particle with luminescer for assays |
| CA1339446C (en) | 1987-03-02 | 1997-09-09 | Norman C. Nelson | Polycationic supports for nucleic acid purification, separation and hybridization |
| US4971904A (en) | 1987-06-26 | 1990-11-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Heterogeneous immunoassay |
| US4927769A (en) | 1987-07-08 | 1990-05-22 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Method for enhancement of chemiluminescence |
| DE3842125A1 (de) * | 1987-12-14 | 1989-06-29 | Hitachi Ltd | Immunoassay-verfahren und vorrichtung zur durchfuehrung des verfahrens |
| DE3844954C2 (de) | 1988-02-20 | 1998-07-16 | Hoechst Ag | Spezielle chemilumineszierende Acridinderivate und ihre Verwendung in Lumineszenzimmunoassays |
| US6002007A (en) | 1988-02-20 | 1999-12-14 | Dade Behring Marburg Gmbh | Special chemiluminescent acridine derivatives and the use thereof in luminescence immunoassays |
| US5268306A (en) | 1988-02-29 | 1993-12-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Preparation of a solid phase matrix containing a bound specific binding pair |
| DE3806431A1 (de) * | 1988-02-29 | 1989-09-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur herstellung einer festphasenmatrix |
| DE3840462A1 (de) | 1988-12-01 | 1990-06-07 | Berthold Lab Prof R | Verfahren und vorrichtung zur messung der chemilumineszenz |
| JPH02198361A (ja) | 1989-01-28 | 1990-08-06 | Eiji Ishikawa | 迅速・超高感度測定法 |
| US5279936A (en) * | 1989-12-22 | 1994-01-18 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Method of separation employing magnetic particles and second medium |
| EP0488152A3 (en) * | 1990-11-30 | 1992-11-25 | Hitachi, Ltd. | Method for immunoassay and apparatus therefor |
| DE4041080A1 (de) * | 1990-12-21 | 1992-06-25 | Behringwerke Ag | Verfahren zur bestimmung eines analyten |
-
1990
- 1990-12-21 DE DE4041080A patent/DE4041080A1/de not_active Withdrawn
-
1991
- 1991-12-20 AU AU89896/91A patent/AU657719B2/en not_active Expired
- 1991-12-20 DE DE59108366T patent/DE59108366D1/de not_active Revoked
- 1991-12-20 EP EP91121935A patent/EP0492499B1/de not_active Revoked
- 1991-12-20 ES ES91121935T patent/ES2094784T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-12-20 CA CA002058175A patent/CA2058175C/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-12-20 DK DK91121935.0T patent/DK0492499T3/da active
- 1991-12-20 JP JP33743191A patent/JP3290193B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1991-12-20 AT AT91121935T patent/ATE145480T1/de not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-06-06 US US08/466,881 patent/US7029856B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2006
- 2006-02-16 US US11/355,316 patent/US7700298B2/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07159407A (ja) * | 1993-12-06 | 1995-06-23 | Olympus Optical Co Ltd | 光学的免疫測定方法及びこれに用いられる免疫測定装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE59108366D1 (de) | 1997-01-02 |
| US7700298B2 (en) | 2010-04-20 |
| AU8989691A (en) | 1992-06-25 |
| ES2094784T3 (es) | 1997-02-01 |
| EP0492499B1 (de) | 1996-11-20 |
| EP0492499A2 (de) | 1992-07-01 |
| EP0492499A3 (en) | 1992-11-19 |
| CA2058175C (en) | 2004-03-02 |
| CA2058175A1 (en) | 1992-06-22 |
| ATE145480T1 (de) | 1996-12-15 |
| DE4041080A1 (de) | 1992-06-25 |
| US7029856B1 (en) | 2006-04-18 |
| DK0492499T3 (da) | 1997-05-05 |
| AU657719B2 (en) | 1995-03-23 |
| JP3290193B2 (ja) | 2002-06-10 |
| US20070026459A1 (en) | 2007-02-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10024861B2 (en) | Electrochemiluminescence immunoassay method | |
| US7700298B2 (en) | Methods for determination of an analyte | |
| JP3611579B2 (ja) | 抗体検出用化学発光イムノアッセイ | |
| US5798083A (en) | Apparatus for improved luminescence assays using particle concentration and chemiluminescence detection | |
| JPH08240590A (ja) | 特異的結合アッセイ用試薬およびそのキット | |
| EP0247796A1 (en) | Solid phase immunoassay method | |
| JPH0670630B2 (ja) | 分析法 | |
| CN113419059B (zh) | 用于化学发光免疫分析方法的封闭剂 | |
| CN110988368A (zh) | 一种游离甲状腺素发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| Lövgren | Time-resolved fluoroimunoassay of steroid hormones | |
| JP4407022B2 (ja) | ビオチンを含む洗浄液、反応試薬および特異的結合アッセイ方法 | |
| JP4455688B2 (ja) | 分析物遊離段階を可能にするアッセイ用表面 | |
| JP3718267B2 (ja) | 特異的結合反応を行うための再生可能な固相 | |
| US5164321A (en) | Process for the removal of non-specific turbidities | |
| WO1992016839A1 (en) | Time resolved lanthanide chelate fluorometric assay | |
| JPH02275360A (ja) | 酵素触媒作用の抑制による磁気イムノアッセイにおける信号の増強 | |
| JP2002238544A (ja) | 固相に固定された物質の発光による測定方法 | |
| CN117871871A (zh) | 一种基于亚微米磁力化学发光法检测人岩藻糖基化蛋白lcn2的方法及检测试剂盒 | |
| JP2003057243A (ja) | 新規の固相分析方法 | |
| JP4359416B2 (ja) | 微小粒子固相上に固定化された物質の測定法 | |
| AU676665B2 (en) | Methods and apparatus for improved luminescence assays usingparticle concentration and chemiluminescence detection | |
| JP2003232793A (ja) | 高濃度磁性ビーズ固相迅速測定法 | |
| JP2002196000A (ja) | 類縁体に起因する非特異反応を抑制した新規測定法 | |
| JP2002040025A (ja) | 検体測定方法 | |
| JPH07146293A (ja) | 免疫測定法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090322 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100322 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100322 Year of fee payment: 8 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100322 Year of fee payment: 8 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100322 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110322 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110322 Year of fee payment: 9 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120322 Year of fee payment: 10 |