JP2008143796A - メラニン輸送及び/又は放出抑制剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】カゼイン加水分解物を有効成分として含有するメラニン輸送及び/又は放出抑制剤を提供する。前記カゼイン加水分解物は、乳カゼインを麹菌由来のタンパク質分解酵素で分解して調製することが好ましい。さらに好ましい実施形態において、前記カゼイン加水分解物は、全窒素量に対するアミノ態窒素量の百分率で示される分解率が少なくとも20%、又は少なくとも40%であることを特徴とする。
【選択図】図2
Description
カゼイン濃度を4%又は8%になるように市販のカゼインNaを溶解後、それぞれについて水酸化ナトリウムを用いてpHを7.0に調製した。これらの溶液を滅菌後、液温を50℃に保持した状態で酵素(麹菌酵素:新日本化学工業社製)を4wt%添加した。経時的に(0時間〜65時間)サンプリングし、95℃で10分間加熱して酵素を失活させ凍結乾燥し、カゼイン加水分解物を得た。得られたカゼイン加水分解物の分解率(%)は、バンスライク法による各試料中のアミノ態窒素量及びケルダール法による全窒素量の値から次式により算出した。
分解率(%)=100×(アミノ態窒素量÷全窒素量)
B16メラノーマをDMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)(高グルコース、血清10%含有)にて培養した。コンフルエントになった細胞を、トリプシンにて剥がし、6ウェルプレートに播種した。翌日、細胞がプレートに接着後、サンプルを0.5wt%添加したDMEMに培地を交換し、3日間培養した。3日後、培地をエッペンチューブに採取し、培地中のメラニン量を分光光度計(450nm)にて定量した。細胞はPBS(Phosphate Buffered Saline)にて洗浄後、水酸化ナトリウム水溶液を加え、60℃で2時間加熱後、溶解したメラニン量を同様に分光光度計(450nm)にて定量評価した。評価するカゼイン分解物は、2wt%になるようにDMEMに溶解し、遠心分離後、ろ過し、このろ液を2wt%のサンプル溶液とした。評価はこの2wt%サンプルを、DMEMにて4倍に希釈し0.5wt%に調製し行った。また、メラニン輸送及び/又は放出抑制効果の確認は、培地中、細胞中のメラニン量をそれぞれの6ウェル中の細胞蛋白量で規格化し、単位蛋白量当たりのメラニン量に変換したのち行った。図1に示す様に、カゼイン分解率が高くなるに従い、細胞から培地中に放出されるメラニン量が低下することが判明した。さらに、細胞内に存在するメラニン量と培地中に放出されたメラニン量を足し合わせたメラニン総量についても、カゼイン分解率が高くなると低下することが分かった。
角層、表皮層を持ち表皮層にはケラチノサイトとメラニン合成を行うメラノサイトを含む三次元培養ヒト皮膚モデルを用い、実施例1で調製したサンプルIIIのカゼイン分解物(0.05wt%)、L−アスコルビン酸−2−グルコシド、天然ビタミンE、カンゾウフラボノイド、アミノ酸数種類を配合したクリームAを角層表面に150μl塗布した。コントロールとしてはリン酸バッファー(PBS)を同様に、それぞれ150μl角層表面に塗布した。皮膚モデルの基底膜側(下側)には皮膚モデル用培地を張り、培地は2日に1回、交換した。サンプルを塗布後、皮膚モデルは、5%CO2、飽和水蒸気下、37℃のインキュベータにて培養した。サンプル塗布後11日目に、上層のサンプル、下層の培地を取り除き、水でリンス後、皮膚を剥がし、エッペンチューブに移した。トリスEDTAバッファー(1%SLS含有)にて皮膚を浸潤させた後、プロテアーゼKを添加、一晩45℃で処置した。翌日、プロテアーゼKを追加添加し、45℃で4時間処置後、攪拌、遠心処理した。炭酸Na水溶液、30%過酸化水素水を添加後、80℃で30分間加熱処置した。室温まで下がった後、クロロホルム-メチルアルコールを添加し攪拌、上澄み(水層)をマイクロプレートリーダー(405nm)にてメラニン量を評価した。図2に示す様に、クリームA塗布群ではコントロールに比べ、約50%の美白効果を示した。
以下に示した配合例に従って種々の化粧料を製造した。尚、配合量は重量%で表した。
配合例1 軟膏
(1)カゼイン加水分解物 0.05%
(2)塩化ベンザルコニウム 0.1%
(3)尿素 20.0%
(4)白色ワセリン 15.0%
(5)軽質流動パラフィン 6.0%
(6)セタノール 3.0%
(7)ステアリルアルコール 3.0%
(8)モノステアリン酸グリセリル 5.0%
(9)香料 適量
(10)防腐剤 適量
(11)緩衝剤 1.0%
(12)精製水 残部
上記(4)〜(8)の油相成分を75℃で溶解し、均一に分散させた。得られた油相成分、(1)〜(3)及び(9)〜(12)の水相成分を75℃で溶解して均一化したものを添加し、ホモミキサーで乳化した。更に、得られた乳化物を冷却し、目的とする軟膏を得た。
カゼイン加水分解物 0.03%
グリコール酸 5.0%
グリセリン 3.0%
ソルビトール 2.0%
ポリオキシエチレン(20)オレイルエーテル 1.0%
エタノール 15.0%
パラフェノールスルホン酸亜鉛 0.2%
緩衝剤 0.1%
香料 0.2%
防腐剤 適量
精製水 残部
カゼイン加水分解物 0.1%
乳酸 0.1%
フルーツ酸 0.1%
グリセリン 4.0%
カオリン 1.0%
カラミン 0.7%
カンフル 0.2%
エタノール 14.0%
香料 適量
精製水 残部
カゼイン加水分解物 0.1%
天然ビタミンE 0.1%
カンゾウフラボノイド 0.005%
固形パラフィン 5.0%
ミツロウ 10.0%
ワセリン 15.0%
流動パラフィン 41.0%
1,3−ブチレングリコール 4.0%
モノステアリン酸グリセリン 2.0%
モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20) 2.0%
各種アミノ酸 1.0%
ホウ砂 0.2%
防腐剤 適量
香料 適量
酸化防止剤 適量
精製水 残部
カゼイン加水分解物 0.02%
乳酸 2.0%
ステアリルアルコール 0.5%
硬化パーム油 3.0%
流動パラフィン 35.0%
ジプロピレングリコール 6.0%
ポリエチレングリコール(400) 4.0%
セスキオレイン酸ソルビタン 1.6%
ポリオキシエチレン(20)オレイルエーテル2.4%
カルボキシビニルポリマー 1.5%
水酸化カリウム 0.1%
キレート剤 適量
防腐剤 適量
香料 適量
精製水 残部
カゼイン加水分解物 0.1%
フルーツ酸 0.5%
ジプロピレングリコール 5.0%
ポリエチレングリコール(400) 5.0%
エタノール 10.0%
カルボキシビニルポリマー 0.5%
アルギン酸ナトリウム 0.5%
水酸化カリウム 0.2%
モノステアリン酸ポリオキシエチレン(20)ソルビタン 1.0%
モノオレイン酸ソルビット 0.5%
オレイルアルコール 0.5%
プラセンタエキス 0.2%
酢酸dl−α−トコフェロール 0.2%
香料 適量
防腐剤 適量
褪色防止剤 適量
精製水 残部
Claims (10)
- カゼイン加水分解物を有効成分として含有することを特徴とするメラニン輸送及び/又は放出抑制剤。
- 前記カゼイン加水分解物は、乳カゼインを麹菌由来のタンパク質分解酵素で分解してなることを特徴とする請求項1に記載のメラニン輸送及び/又は放出抑制剤。
- 前記カゼイン加水分解物は、全窒素量に対するアミノ態窒素量の百分率で示される分解率が少なくとも20%、又は少なくとも40%である請求項1又は2に記載のメラニン輸送及び/又は放出抑制剤。
- 前記分解率が、47%〜58%である請求項3に記載のメラニン輸送及び/又は放出抑制剤。
- 前記分解率が、50%〜58%である請求項3に記載のメラニン輸送及び/又は放出抑制剤。
- 請求項1〜5何れか記載のメラニン輸送及び/又は放出抑制剤を含有することを特徴とする哺乳動物の美白剤。
- アスコルビン酸、コウジ酸、トコフェロール、アルブチン、エラグ酸、ルシノール、システイン、シスチン、グルタチオン、カンゾウフラボノイド、納豆エキス、酵母エキス及びそれらの誘導体並びにそれらの塩から選択される1種以上の成分をさらに含む請求項6に記載の美白剤。
- 請求項6又は7に記載の美白剤を含有することを特徴とする化粧料。
- 請求項1〜5何れか記載のメラニン輸送及び/又は放出抑制剤を含有することを特徴とする経口投与用の美容食品及び飲料、機能性食品及び飲料、又は健康補助食品及び飲料。
- 乳カゼインを麹菌由来のタンパク質分解酵素で分解する工程と、当該加水分解物を膜処理、及び活性炭処理する工程とを含むことを特徴とする請求項1〜5何れか記載のメラニン輸送及び/又は放出抑制剤の製造方法。
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