JP2007537231A - ジペプチジルペプチダーゼｉｖインヒビターとしてのプロリン誘導体およびそれらの使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、式（Ｉ）
【化１】

（ここでＲ¹、Ｒ²、Ｒ³、ＨＥＴ、ｎ、Ｑ、Ｘ、ＹおよびＺは、本明細書中に記載される通りである）の化合物、それらのプロドラッグおよび立体異性体、ならびに該化合物、プロドラッグおよび立体異性体の薬学的に受容可能な塩；それらの組成物；糖尿病性合併症（糖尿病性神経障害、糖尿病性ネフロパシー、糖尿病性細小血管症などを含む）の治療におけるそれらの使用を提供する。

Description

本発明は、酵素ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）の選択的インヒビター、それらの医薬組成物およびＤＰＰ−ＩＶによって処理されやすいタンパク質に関連する疾患および症状を治療するためのそれらの使用に関する。

ＤＰＰ−ＩＶ（ＥＣ３.４.１４.５）は、２位にプロリンまたはアラニンを有するタンパク質からＮ末端ジペプチドを優先的に加水分解するセリンプロテアーゼである。ＤＰＰ−ＩＶは、とりわけ、糖尿病、耐糖能、肥満、食欲調節、脂質血症、骨粗鬆症、神経ペプチド代謝およびＴ細胞活性化に関与していると考えられている。従って、インビボでのＤＰＰ−ＩＶインヒビターの投与は、基質ペプチドのＮ末端分解を抑制し、それによってこのようなペプチドのより高い循環濃度およびこのように増大した濃度に関連する治療利益をもたらす。

その基質にインクレチンペプチドグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）および胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）を含むことから、ＤＰＰ−ＩＶはグルコース恒常性の制御に関与している。これらのペプチドからＮ末端アミノ酸が切断されると、これらは機能的に不活性となる。ＧＬＰ−１は、２型糖尿病患者において効果的な抗糖尿病療法であり、そして１型糖尿病患者において食事に関連したインスリン要求を低減することが示されている。ＧＬＰ−１および／またはＧＩＰは、満腹、脂質血症および骨形成を調節していると考えられている。外因性ＧＬＰ−１は、急性冠症候群、狭心症および虚血性心疾患を患っている患者のための治療薬として提案されている。

インビボでのＤＰＰ−ＩＶインヒビターの投与により、ＧＬＰ−１およびＧＩＰのＮ末端分解が抑制され、これらのペプチドのより高い循環濃度、インスリン分泌の増加および耐糖能の改善をもたらす。これらの観察に基づいて、ＤＰＰ−ＩＶインヒビターは、２型糖尿病、耐糖能が関与している疾患を治療するための薬剤とみなされる。さらに、ＤＰＰ−ＩＶインヒビターでの治療により、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）、種々の中枢神経系状態に関連しているペプチドならびに潰瘍、過敏性腸疾患および炎症性腸疾患のような胃腸症状に関連しているペプチドＹＹの分解が抑制される。

インスリンの早期発見、それに続く糖尿病治療における広範な使用およびスルホニル尿素（例えば、クロルプロパミド、トルブタミド、アセトへキサミド）、ビグアニド（例えば、フェンホルミン）、メトホルミン、チアゾリジンジオン（例えば、ロシグリタゾン）およびピオグリタゾンのその後の発見ならびに経口血糖降下薬としてのそれらの使用にもかかわらず、糖尿病の治療はまだ不十分なままである。

１型糖尿病患者および現在利用可能な経口血糖降下薬が無効である約１０％の２型糖尿病患者に必要とされるインスリンの使用は、通常は自己注射による毎日の複数回投与を必要とする。インスリンの適切な投薬量を決定するには、尿または血中のブドウ糖濃度を頻繁に測定する必要がある。過剰な用量のインスリンが投与されると、低血糖症が引き起こされ、軽度な血糖値の異常から、昏睡または場合によっては死亡にさえ至る結果を伴う。

２型糖尿病の治療としては、通常、治療食、運動、経口薬剤、より重度な場合においてはインスリンの併用を包含する。しかし、臨床的に利用可能な血糖降下薬は、それらの使用を限定する副作用を有し得る。副作用がより少ないかまたは他のもので失敗した場合に成功し得る血糖降下薬に対する必要性が継続していることは、明白である。

コントロールの不十分な高血糖症は、進行性の２型糖尿病を特徴付ける多数の合併症（白内障、神経症、ネフロパシー、網膜症、心筋症）の直接的な原因である。さらに、２型糖尿病は、高脂血症、アテローム性動脈硬化症および高血圧と頻繁に混同される合併疾患であり、これらの疾患による総罹患率および死亡率全体を著しく上昇させる。

疫学的証拠により、アテローム性動脈硬化症に起因する心疾患（「ＣＶＤ」）の主要な危険因子として高脂血症が確証されている。アテローム性動脈硬化症は、米国および西ヨーロッパにおいて死の主要な原因であると認識されている。少なくとも一部で、この集団において耐糖能異常、左心室肥大および高血圧症のような複数の独立した危険因子が存在するので、ＣＶＤは、糖尿病対象の間で特に蔓延している。従って、通常の集団、特に糖尿病対象における高脂血症の治療の成功は、医学的に非常に重要である。

高血圧症（または高血圧）は、原因となる因子または状態が未知である多くの患者において起こり得る症状である。このような「本態性」高血圧症は、しばしば、肥満、糖尿病およびトリグリセリド過剰血のような状態に関連しており、そして高血圧症は、心不全、腎不全および発作と確実に関連していることが承知されている。高血圧症はまた、アテローム性動脈硬化症および冠状動脈疾患の発症にも寄与し得る。高血圧症は、インスリン抵抗性および高脂質血症とともに、インスリン抵抗性症候群（「ＩＲＳ」）およびＸ症候群としても公知である代謝症候群を特徴付ける一連の症状を含む。

肥満は、アテローム性動脈硬化症、高血圧症および糖尿病の発症に関して周知でかつ共通の危険因子である。肥満の発生およびそれらに関連する続発症は、世界的に増加している。現在、有効でかつ容認できる脂肪過多症を減少させる薬剤はほとんど利用可能でない。

骨粗鬆症は、低い骨密度および骨組織のマイクロ構造上の変質によって特徴付けられる進行性全身疾患であり、結果として、骨の脆弱性および骨折のしやすさの増大を伴う。骨粗鬆症および損なわれた骨強度の結果は、脆弱性および増加した罹患率および死亡率の明らかな原因である。

心疾患は、全世界での主要な健康問題である。心筋梗塞は、心疾患を有する個人に共通して死の重大な原因である。急性冠症候群は、急性心筋梗塞（ＭＩ）を有するか、または発症する高い危険性を有する患者を示している。

糖尿病、高血糖症、高脂血症、高血圧症、肥満症および骨粗鬆症の治療に利用可能である療法は存在しているが、代替的な改善された療法に対する必要性は存在し続けている。

ＤＰＰ−ＩＶインヒビターに関する種々の指摘が以下に議論されている：Ａｕｇｕｓｔｙｎｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍ．，６，３１１（１９９９）；Ｏｈｎｕｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｔｕｒｅ，１９９９，２４，６６５−６７０（１９９９）；Ｖｉｌｌｈａｕｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３６．１９１−２００（２００１）；Ｄｒｕｃｋｅｒ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，１２，８７−１００（２００３）；およびＷｅｉｄｅｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，４，４１２−４２０（２００３）。

国際出願ＷＯ ０２／１４２７１に開示されるもののようなＤＰＰ−ＩＶを阻害する経口投与用化合物が、最近製造されている。

ＷＯ ０２／１４２７１に開示されるもののようなＤＰＰ−ＩＶインヒビターは、天然ホルモン（ＧＬＰ−１およびＧＩＰ）の分解を阻害することによって作用すると考えられている。従って、ＤＰＰ−ＩＶインヒビターの適切な濃度がそれらのＧＬＰ−１およびＧＩＰホルモンの分泌と同時にＤＰＰ−ＩＶを阻害するために血漿中で利用可能であることが重要である。このような血漿濃度に達成するために、ＷＯ ０２／１４２７１に開示されるもののような他のＤＰＰ−ＩＶインヒビター化合物に期待されるよりも長期にわたってＤＰＰ−ＩＶインヒビター化合物がより高い血漿濃度を維持することが好ましい。

従って、同等のＤＰＰ−ＩＶの阻害活性またはより高い阻害活性を有し、かつ長期にわたってより高い血漿濃度を維持する経口投与用ＤＰＰＩ−ＩＶインヒビター化合物が必要である。

本発明は、式（Ｉ）：

の構造を有する化合物もしくはそれらのプロドラッグ、または前記化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または前記化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物に関し、ここで：
Ｒ¹が、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、−（Ｃ_l−Ｃ₆）アリールアルキル、−ＮＲ^aＲ^b、ヒドロキシ、シアノ、アリールまたはヘテロアリールであり、ここで、前記−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル、前記アリールまたは前記ヘテロアリールは、場合によって、１〜３個の以下：−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^aＲ^b、シアノ、ハロゲン、ニトロ、トリフルオロメチル、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、−（Ｃ₃−Ｃ₆）シクロアルキルまたはフェニルで独立して置換され、ここで、Ｒ^aおよびＲ^bが独立して、水素、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル、アリールまたはヘテロアリールであるか、またはＲ^aおよびＲ^bが、それらが結合する窒素原子と一緒になって、４〜６員の複素環式環を形成し、ここで前記環は、場合によって、さらに１〜２個の窒素、酸素または硫黄環ヘテロ原子を組み込み；
Ｒ²およびＲ³が、独立して、水素、ハロゲン、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルまたは−（Ｃ₃−Ｃ₈）シクロアルキルであり；
Ｑが、共有結合、−Ｃ（Ｏ）−または−ＳＯ₂−であり；
ＨＥＴが、場合によって（Ａ）１〜６個のハロゲン原子、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシもしくは−ＮＲ^aＲ^bで場合によって置換されている１〜４個の−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルまたは（Ｂ）１〜６個のハロゲン原子、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシもしくは−ＮＲ^aＲ^bで場合によって置換されている−（Ｃ₁−Ｃ₆）アリールアルキルで置換されている、ヘテロシクロアルキル環部分であり；
ｎが０または１であり；
Ｘが−ＣＨ₂−、−ＣＨＦ−または−ＣＦ₂−であり、かつＹが−ＣＨ₂−、−ＣＨＦ−または−ＣＦ₂−であり（但しｎが１である場合、ＸおよびＹの両方が−ＣＨ₂−でなく、
そしてｎが０である場合、Ｘが−ＣＨ₂−である）；そして
Ｚが水素またはシアノである。

本発明はまた、治療有効量の本発明の化合物もしくはそれらのプロドラッグ、または化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物、ならびに薬学的に受容可能な担体、ビヒクル、希釈剤または賦形剤を含有する医薬組成物に関する。

本発明は、さらに糖尿病の治療方法に関し、このような治療が必要な哺乳動物に治療有効量の本発明の化合物もしくはそれらのプロドラッグ、または化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物を投与する工程を包含する。好ましくは、治療される糖尿病の種類は、２型糖尿病である。

本発明は、さらに哺乳動物におけるジペプチジルペプチダーゼＩＶによって媒介される症状の治療方法に関し、このような治療が必要な前記哺乳動物に治療有効量の本発明の化合物もしくはそれらのプロドラッグ、または前記化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または前記化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物を投与する工程を包含する。

本発明の化合物および医薬組成物は、糖尿病、好ましくは２型糖尿病を治療するのに有用である。

本発明の化合物および医薬組成物はまた、ジペプチジルペプチダーゼＩＶの関連症状を治療するのに有用であり、これらとして以下が挙げられるが、これらに限定されない：２型糖尿病；１型糖尿病、耐糖能異常、高血糖症、代謝症候群（Ｘ症候群および／またはインスリン抵抗症候群）、糖尿、代謝性アシドーシス、関節炎、白内障、糖尿病性神経障害、糖尿病性ネフロパシー、糖尿病性網膜症、糖尿病性心筋症、肥満症、肥満症によって悪化する症状、高血圧症、高脂質血症、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症、骨減少症、脆弱化、骨損失、骨折、急性冠症候群、成長ホルモン欠損症に起因する小人症、多嚢胞性卵巣症候群に起因する不妊症、不安、うつ病、不眠症、慢性疲労、てんかん、摂食障害、慢性疼痛、アルコール依存症、腸運動に関連する疾患、潰瘍、過敏性腸症候群、炎症性腸症候群；短小腸症候群；および２型糖尿病における疾患の増悪の予防。

本発明を記載するために使用される用語は、本明細書中で以下の意味を有する。
語句「薬学的に受容可能な」とは、設計された担体、ビヒクル、希釈剤、賦形剤および／または塩が、一般的に、製剤を含む他の成分と化学的および／または物理的に適合し、そしてそれらの受容体と生理的に適合することを表す。

本明細書中の種々の炭化水素含有部分の炭素原子含有量は、その部分における炭素原子の最小数および最大数を接頭語の指定によって表し得、例えば、接頭語（Ｃ_a−Ｃ_b）アルキルおよびＣ_a-bアルキルは、整数「ａ」〜「ｂ」個の炭素原子を含むアルキル部分を表す。従って、例えば、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルおよびＣ_1-6アルキルとは、１〜６個の炭素原子を含むアルキル基をいう。

用語「アルキル」とは、炭素原子の直鎖または分枝鎖を意味し、ここでアルキル基は、場合によって、１つまたはそれ以上の二重結合もしくは三重結合、または二重結合および三重結合の組み合わせを組み込む。アルキル基の例としては、以下が挙げられる：メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ビニル、アリル、２−メチルプロペニル、２−ブテニル、１，３−ブタジエニル、エチニル、プロパギルなど。

用語「アルコキシ」とは、コア構造に連結する酸素原子に結合した炭素原子の直鎖もしくは分枝鎖の一価の飽和脂肪族鎖をいう。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、イソ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどが挙げられる。

用語「シクロアルキル」とは、飽和の単環式または二環式のシクロアルキル基を意味する。シクロアルキル基は、場合によって、ベンゼンのような脂肪族炭化水素に縮合され、インダニルなどのような縮合シクロアルキル基を形成し得る。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルなどが挙げられる。

用語「ハロゲン」または「ハロ」とは、クロロ、ブロモ、フルオロおよびヨードの原子ならびに置換基をいう。

用語「アリール」とは、単環式または多環式の芳香族炭化水素基を意味し、これらとしては、例えば、アントラセニル、フルオレニル、ナフチル、フェナントレニル、フェニルなどが挙げられる。

用語「アリールアルキル」とは、本明細書中上で定義されるように、アルキル基を意味し、ここで、それらの少なくとも１個の水素原子は、本明細書中の上で定義されるように、アリール基で置換されている。アリールアルキル基の例としては、とりわけベンジル基が挙げられる。

本明細書中の上記のＨＥＴに関して利用される場合、用語「ヘテロシクロアルキル」とは、場合によって、５または６員の芳香族環系または複素環式環系に縮合されている４〜８員の飽和複素環式環系をいう。ヘテロシクロアルキル基の例としては、以下が挙げられる：ホモピペラジニル、ピペラジニル、ピペリジル、ピロリジニル、アゼチジニル、２−アザ−ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、３−アザ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、２，５−ジアザ−ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、５，６，７，８−テトラヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピラジニル、５，６，７，８−テトラヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジニル、４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジニル、５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジル、５，６，７，８−テトラヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジル、オクタヒドロピロロ［３，４−ｂ］ピロリル、オクタヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピロリル、６−アザビシクロ［３．２．１］オクタニル、３，８−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタニル、２，３−ジヒドロスピロ［インデン−１，４’−ピペリジル］、スピロ［インデン−１，４’ピペリジン］、１−オキサ−８−アザスピロ［４．５］デカニル、８−アザビシクロ［３．２．１］オクタニル、２，３，４，５−テトラヒドロベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピニル、ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イソチアゾリル−１，１−ジオキシド、２，７−ジアザスピロ［４．４］ノナニル、６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｇ］［１，４］ジアゼピニル、５，６−ジヒドロ−８Ｈ−イミダゾ［ｔ，２−ａ］ピラジニル、５，６−ジヒドロ−８Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジニル、７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［４，３−ａ］ピリミジル、７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジル、ピリゾロ［１，５−ａ］ピリミジルなど。

用語「ヘテロアリール」とは、単環式または多環式の芳香族複素環式環系を意味する。ヘテロアリール基の例としては、以下が挙げられる：ベンゾイソチアゾリル、ベンゾイソキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンズイミダゾリル、シンノリニル、フラニル、フロピリジル、イミダゾロピリミジル、イミダゾリル、インダゾリル、インドリル、イソキノリル、イソチアゾリル、イソキサジアゾリル、イソキサゾリル、オキサゾロピリジル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、フタラジニル、プテリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピロロピリミジル、ピロロピリジル、ピラゾロピリミジル、ピラゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、キノキサリニル、テトラゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、チアゾロピリジル、チエノピリジル、チエニル、トリアジニル、トリアゾリル、１，１−ジオキソ−１Ｈ−１，２−ベンゾイソチアゾリル、オキサゾロピリジルなど。

用語「オキソ」とは、炭素原子および酸素原子の組み合わせによって形成されるカルボニル基を意味する。

用語「置換」とは、分子上の水素原子が異なる原子または分子で置き換えられていることを意味する。水素原子を置き換える原子または分子は、「置換基」を意味する。

記号「−」は、共有結合を表す。

語句「不活性溶媒」とは、溶媒または溶媒混合物をいい、出発物質、試薬、中間体または製品とそれらの所望される特性に悪影響を与える様式において、相互作用しないことを意味する。

本明細書中で利用される場合、用語「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療した（ｔｒｅａｔｅｄ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、予防的（例えば、予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ））、緩和的および治癒的な使用または結果を包含する。

語句「治療有効量」とは、（ｉ）特定の疾患、症状または状態を治療または予防するか、（ｉｉ）特定の疾患、症状または状態の１つまたはそれ以上の症候を軽減、改善または除去するか、（ｉｉｉ）本明細書中に記載される特定の疾患、症状または状態の１つまたはそれ以上の症候の発症を予防または遅延させる本発明の化合物の量を意味する。

用語「哺乳動物」は、分類学による分類の哺乳綱の一員である個々の動物である。分類哺乳綱としては、例えば、ヒト、サル、チンパンジー、ゴリラ、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットが挙げられる。本発明において、好ましい哺乳動物はヒトである。

好ましくは、本発明の化合物は、式（Ｉ）の構造を有し、ここで：
Ｒ¹が、独立して、１〜３個のシアノ、ハロゲン、ニトロ、トリフルオロメチル、−（Ｃ_l−Ｃ₆）アルキル、−（Ｃ_l−Ｃ₆）アルコキシ、−（Ｃ₃−Ｃ₆）シクロアルキルまたはフェニルで場合によって置換されているアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ²が、−Ｈまたは−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルであり；
Ｒ³が、−Ｈ−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルであり；そして
ＨＥＴが、アゼチジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、５，６−ジヒドロ−８Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−７−イル、５，６−ジヒドロ−８Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７−イルまたは７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［４，３−ａ］ピリミジン−６−イルである。

より好ましくは、本発明の化合物は、式（ＩＡ）：

の構造を有し、ここで：
Ｒ¹が、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾロピリジル、ピラジニル、ピリジニル、ピリミジニル、キノリニル、キノキサリニル、チアジアゾリル、トリアジニルまたは１，１−ジオキソ−１Ｈ−１，２−ベンゾイソチアゾリルである。

本発明において、式（ＩＡ）の化合物について、Ｒ¹がピリジニルまたはピリミジニルであることが好ましく、そしてＲ¹がピリジニルまたはピリミジニルであり、ｎが１であり、Ｘが−ＣＦ₂−であり、かつＹが−ＣＨ₂−であることがより好ましい。

本発明において、化合物（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−（ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）ピロリジン−２−イル）メタノンもしくはそれらのプロドラッグ、または前記化合物もしくは前記プロドラッグの薬学的に受容可能な塩が最も好ましい。

代替的な実施形態において、以下からなる群から選択される化合物もしくはそれらのプロドラッグ、または前記化合物もしくは前記プロドラッグの薬学的に受容可能な塩が好ましい：
（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル）ピロリジン−２−イル）−（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−メタノン、
（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−（オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）ピロリジン−２−イル）−メタノン、
（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−（４−メチルピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）ピロリジン−２−イル）−メタノン、
（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（２−（トリフルオロメチル）−７，８−ジヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−６（５Ｈ）−イル）ピロリジン−２−イル）−（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−メタノン、
（（Ｓ）−３−フルオロ−ピロリジン−１−イル）−｛（２Ｓ，４Ｓ）−４−［４−（３−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−ピロリジン−２−イル｝−メタノン、
（（Ｓ）−３−フルオロ−ピロリジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（２−トリフルオロメチル−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ピロリジン−２−イル］−メタノン、
（３，３−ジフルオロ−ピロリジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−オキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−２−イル−ピペラジン−１−イル）−ピロリジン−２−イル］−メタノン、
［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（２−シクロプロピル−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ピロリジン−２−イル］−（３−フルオロ−アゼチジン−１−イル）−メタノン、

（３，３−ジフルオロ−ピロリジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（２−エトキシ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ピロリジン−２−イル］−メタノン、
２−｛４−［（３Ｓ，５Ｓ）−５−（３−フルオロ−アゼチジン−１−カルボニル）−ピロリジン−３−イル］−ピペラジン−１−イル｝−ニコチノニトリル、
（（Ｓ）−３−フルオロ−ピロリジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル−ピペラジン−１−イル）−ピロリジン−２−イル］−メタノン、
（３−フルオロ−アゼチジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（２−トリフルオロメチル−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ピロリジン−２−イル］−メタノン、
２−｛４−［（３Ｓ，５Ｓ）−５−（（Ｓ）−３−フルオロ−ピロリジン−１−カルボニル）−ピロリジン−３−イル］−ピペラジン−１−イル｝−ニコチノニトリル、
（３−フルオロ−アゼチジン−１−イル）−｛（２Ｓ，４Ｓ）−４−［４−（２−トリフルオロメチル−キノリン−４−イル）−ピペラジン−１−イル］−ピロリジン−２−イル｝−メタノン、
（（３Ｒ^*，４Ｓ^*）−３，４−ジフルオロ−ピロリジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（２−トリフルオロメチル−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ピロリジン−２−イル］−メタノンおよび
（（３Ｒ^*，４Ｓ^*）−３，４−ジフルオロ−ピロリジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル−ピペラジン−１−イル）−ピロリジン−２−イル］−メタノン。

本発明の化合物は、全てが少なくとも２つの立体中心（特に、（２Ｓ，４Ｓ）ピロリジン−２−イル、以下の式（Ｉ）：

に示される立体中心）を含むことを包含する。

本発明の化合物は、例えば、結晶化によって、分離され得るジアステレオ異性体の形成；例えば、結晶化、ガス液体クロマトグラフィーまたは液体クロマトグラフィーによって分離され得るジアステレオ異性体の誘導体または複合体の形成；エナンチオマー特異的試薬を用いる一方のエナンチオマーの選択的反応（例えば、酵素エステル化）；またはキラル環境中で（例えば、キラル支持体（例えば、結合キラルリガンドを有するシリカ）上で）またはキラル溶媒の存在下、ガス液体クロマトグラフィーまたは液体クロマトグラフィーによる、当業者に公知の方法によって純粋なエナンチオマーに分割され得る。所望の立体異性体が上記の分離手順の１つによって別の化学実体に変換され、さらなる工程により所望の鏡像異性体形態を遊離させる必要があると理解される。あるいは、特定の立体異性体が光学活性出発物質を使用することによって、光学活性試薬、基質、触媒または溶媒を使用する不斉合成によって、または不斉変換によって一方の立体異性体を他方に変換することによって合成され得る。

前記化合物は、１種またはそれ以上の追加的な立体中心を含み、本明細書中に例証され、そして議論される本化合物のジアステレオ異性体およびジアステレオ異性体混合物の全てが、本発明の範囲に包含されることを当業者は理解する。これらのジアステレオ異性体は、当業者に公知の方法（例えば、結晶化、ガス液体クロマトグラフィーまたは液体クロマトグラフィー）によって単離され得る。あるいは、合成に過程での中間体は、ラセミ混合物として存在し得、そして当業者に公知の方法によって［例えば、結晶化によって分離され得るジアステレオ異性体塩の形成；例えば、結晶化、ガス液体クロマトグラフィーまたは液体クロマトグラフィーによって分離され得るジアステレオ異性体の誘導体または複合体の形成；エナンチオマー特異的試薬を用いる一方のエナンチオマーの選択的反応（例えば、酵素エステル化）；またはキラル環境中で（例えば、キラル支持体（例えば、結合キラルリガンドを有するシリカ）上で）またはキラル溶媒の存在下、ガス液体クロマトグラフィーまたは液体クロマトグラフィーによって］分解に供され得る。所望の立体異性体を上記の分離手順の１つによって別の化学実体に変換する場合は、さらなる工程により所望の鏡像異性体形態を遊離させる必要があると理解される。あるいは、特定の立体異性体が光学活性試薬、基質、触媒または溶媒和物を使用する不斉合成によってか、または不斉変換によって一方の立体異性体を他方に変換することによって合成され得る。

式（Ｉ）の特定の化合物は、分離可能な異なる安定した配座形態で存在し得る。不斉単結合についての束縛回転に起因して（例えば、立体障害または環ひずみが原因で）、ねじれ非対称が異なる配座異性体の分離を可能にし得る。本発明は式（Ｉ）の化合物およびそれらの混合物の各々の配座異性体を包含する。式（Ｉ）の特定の化合物は、互変異性形態として存在してもよく、すなわち、互いに迅速に平衡状態になる２つの異性体間に平衡が存在することを専門家は理解する。互変異性の一般的な例は、ケト−エノール互変異性、すなわち、

である。

本発明のこのような化合物の例としては、とりわけ、ヒドロキシピリジン（ピリドン）およびヒドロキシピリミジン（ｈｙｄｒｏｘｙｐｙｒｍｉｄｉｎｅ）（ピリミドン）が挙げられる。特に、
本発明のヒドロキシピリジンが２つの分離した互変異性体、例えば、

として存在し得ることを、当業者は理解する。

一方の互変異性体が他方を上回って存在する程度は、置換パターンおよび溶媒の種類を含む種々の因子に依存する。本発明に従う他の例は、当業者によって理解される。式（Ｉ）の互変異性形態の全てが、特許請求の範囲に記載されている発明の範囲に包含される。

本発明の化合物は、未溶媒和形態、ならびに水、エタノールなどのような薬学的に受容可能な溶媒との溶媒和形態で存在してもよく、本発明は、未溶媒和形態、溶媒和形態および溶媒和形態の混合物を包含することが意図される。

式（Ｉ）の特定の化合物ならびにそれらの塩および溶媒和物は、１より多い結晶形で存在してもよい。式（Ｉ）によって表される化合物の多形体は本発明の一部を形成し、そして異なる条件下、式（Ｉ）の化合物の結晶化によって製造され得る。例えば、再結晶のための異なる溶媒または異なる溶媒混合物；異なる温度での結晶化；冷却の種々の様式（結晶の間の非常に速い〜非常に遅い冷却範囲）を使用する。多形体はまた、式（Ｉ）の化合物を加熱するかまたは溶融し、次いで徐々にまたは急速に冷却することによって得ることができる。多形体の存在は、固体プローブｎｍｒ分光法、ｉｒ分光法、示差走査熱量測定法、粉末Ｘ線回折法またはこのような他の技術によって測定され得る。

本発明はまた、式（Ｉ）の記載されるものと同一であるが、実際は、１つまたはそれ以上の原子が、天然に通常見出される原子量又は質量数とは異なる原子量又は質量数を有する原子で置き換えられている同位体標識された化合物をも含む。本発明の化合物内に取り込まれ得る同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、硫黄およびフッ素の同位体（例えば、それぞれ、²Ｈ、³Ｈ、¹³Ｃ、¹⁴Ｃ、¹⁵Ｎ、¹⁸Ｏ、¹⁷Ｏ、³⁵Ｓ、³⁶Ｃｌ、¹²⁵Ｉ、¹²⁹Ｉおよび¹⁸Ｆ）が挙げられる。前記同位体および／または他の原子の他の同位体を含む本発明の化合物、それらのプロドラッグおよび化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩は、本発明の範囲内である。特定の同位体標識された本発明の化合物（例えば、³Ｈおよび¹⁴Ｃのような放射性同位体を取り込んだ化合物）は、薬物および／または基質組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム化（すなわち、³Ｈ）および炭素−１４（すなわち、¹⁴Ｃ）同位体は、製造および検出が容易なので、特に好ましい。さらに、ジューテリウム（すなわち、²Ｈ）のようなより重い同位体を用いる置換は、より大きい代謝安定性をもたらす特定の治療的利点（例えば、インビボ半減期の増加または必要投薬量の減少）を得ることができ、従って、ある状況において好ましいものであり得る。本発明の式（Ｉ）の同位体標識された化合物およびそれらのプロドラッグは、一般的に、同位体で標識されていない試薬を、容易に入手可能な同位体標識された試薬に置き換えることによって、以下のスキームおよび／または実施例に開示される手順を実施することによって製造され得る。

本発明の化合物に関して、本明細書中で使用される場合、薬学的に受容可能な塩は、前記化合物の薬学的に受容可能な無機塩および有機塩を包含する。これらの塩は、化合物の最終的な単離および精製の間にインサイチュで製造され得るか、または化合物またはプロドラッグを適切な有機酸または無機酸と別々に反応させ、そしてこのようにして形成された塩を単離することによって製造され得る。典型的な塩としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、シュウ酸塩、ベシレート、パルミチン酸塩、パモエート、マロン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トシレート、ギ酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチレート、メシレート、グルコヘプトネート、ラクトビオネートおよびラウリルスルホン酸塩など。これらとしては、アルカリ金属およびアルカリ土類金属（例えば、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど）に基づくカチオン、ならびに非毒性のアンモニウム、四級化アンモニウム、およびアミンのカチオンが挙げられ、これらの非毒性のアンモニウム、四級化アンモニウム、およびアミンのカチオンとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：アンモニウム、テトラメトチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなど。さらなる例としては、例えば、Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１−１９（１９７７）を参照のこと。

本発明の化合物を単離し、そしてそれ自体またはそれらの薬学的に受容可能な塩または溶媒和物の形態で使用され得る。本発明に従って、多数の塩基性窒素原子と共に化合物は、酸の価数の変更を伴って塩を形成し得る。全てのこのような塩は本発明の範囲内に包含されることが専門家によって理解される。

式（Ｉ）の化合物のプロドラッグは、アミノ基、ヒドロキシル基またはカルボキシル基のような化合物の官能基を用いて慣用的な様式で形成され得る。用語「プロドラッグ」とは、インビボで変換され、式（Ｉ）の化合物または化合物の薬学的に受容可能な塩もしくは溶媒和物を得る化合物を意味する。変換は血液中での加水分解のような種々の機構によって起こり得る。プロドラッグの使用の議論は、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ ａｎｄ Ｗ．Ｓｔｅｌｌａ，「Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ」Ｖｏｌ．１４ ｏｆ ｔｈｅ Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ，ａｎｄ ｉｎ Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，ｅｄ．Ｅｄｗａｒｄ Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，１９８７によって提供される。

例えば、本発明の化合物がアミン官能基を組み込む場合、プロドラッグは、以下のような基を用いてアミン基中の水素原子を置き換えることによって形成され得る：Ｒ−カルボニル、ＲＯ−カルボニル、ＮＲＲ’−カルボニル（ここでＲおよびＲ’は、独立して、各々（Ｃ₁−Ｃ₁₀）アルキル、（Ｃ₃−Ｃ₇）シクロアルキル、ベンジルであるか、またはＲ−カルボニルは天然のα−アミノアシルまたは天然のα−アミノアシル−天然のα−アミノアシルである）、−Ｃ（ＯＨ）Ｃ（Ｏ）ＯＹ’（ここで、Ｙ’はＨ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルまたはベンジルである）、−Ｃ（ＯＹ₀）Ｙ₁（ここで、Ｙ₀は（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキルであり、そしてＹ₁は（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル、カルボキシ（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル、アミノ（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキルまたはモノ−Ｎ−もしくはジ−Ｎ，Ｎ−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルアミノアルキルである）、−Ｃ（Ｙ₂）Ｙ₃（ここで、Ｙ₂はＨまたはメチルであり、そしてＹ₃はモノ−Ｎ−もしくはジ−Ｎ，Ｎ−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルアミノである）、モルホリノ、ピペリジン−１−イルまたはピロリジン−１−イル。

同様に、本発明の化合物がアルコール官能基を含む場合、プロドラッグは、以下のような基を用いてアルコール基の水素原子を置き換えることによって形成され得る：（Ｃ₁−Ｃ₆）アルカノイルオキシメチル、１−（（Ｃ₁−Ｃ₆）アルカノイルオキシ）エチル、１−メチル−１−（（Ｃ₁−Ｃ₆）アルカノイルオキシ）エチル、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシカルボニルオキシメチル、Ｎ−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシカルボニルアミノメチル、サクシノイル、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルカノイル、α−アミノ（Ｃ₁−Ｃ₄）アルカノイル、アリールアシルおよびα−アミノアシルもしくはα−アミノアシル−α−アミノアシル（ここで、各α−アミノアシル基は、独立して、天然に存在するＬ−アミノ酸、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）₂、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル）₂またはグリコシルから選択される）（基は、炭水化物のヘミアセタール形態のヒドロキシル基を除去することによって得られる）。

本発明の化合物がカルボン酸官能基を含む場合、プロドラッグは、以下のような基を用いて酸基の水素原子を置き換えることによって形成されたエステルを包含し得る：（Ｃ₁−Ｃ₈）アルキル、（Ｃ₂−Ｃ₁₂）アルカノイルオキシメチル、４〜９個の炭素原子を有する１−（アルカノイルオキシ）エチル、５〜１０個の炭素原子を有する１−メチル−１−（アルカノイルオキシ）−エチル、３〜６個の炭素原子を有するアルコキシカルボニルオキシメチル、４〜７個の炭素原子を有する１−（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、５〜８個の炭素原子を有する１−メチル−１−（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、３〜９個の炭素原子を有するＮ−（アルコキシカルボニル）アミノメチル、４〜１０個の炭素原子を有する１−（Ｎ−（アルコキシカルボニル）アミノ）エチル、３−フタリジル、４−クロトノラクトニル、γ−ブチロラクトン−４−イル、ジ−Ｎ，Ｎ−（Ｃ₁−Ｃ₂）アルキルアミノ（Ｃ₂−Ｃ₃）アルキル（例えば、β−ジメチルアミノエチル）、カルバモイル−（Ｃ₁−Ｃ₂）アルキル、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ_l−Ｃ₂）アルキルカルバモイル−（Ｃ_l−Ｃ₂）アルキルおよびピペリジノ−、ピロリジノ−もしくはモルホリノ（Ｃ₂−Ｃ₃）アルキル。

一般的に、本発明の式（Ｉ）の化合物は、特に本明細書中に含まれる説明を考慮に入れて、化学分野で公知のプロセスを包含する方法によって製造され得る。本発明の式（Ｉ）の化合物の製造のための特定のプロセスは、以下の反応スキームによって例証される。他のプロセスは、実施例の節に記載される。本発明のスキームおよび実施例に開示される方法は、本発明を例証する目的のために意図され、そして任意の様式においてそれらに限定されるように解釈されない。

スキームおよび実施例に記載される反応についてのいくつかの出発化合物は、本明細書に例証されるように製造される。全ての他の出発化合物は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯのような一般的な商業的供給源から得ることができる。

以下の議論において、以下の略語を使用する：ＢＯＣ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）、Ｃｂｚ（ベンジルオキシカルボニル）、ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）、ＮＭＰ（Ｎ−メチル−２−ピロリジノン）、ＤＭＡＣ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）、ＤＭＥ（ジメトキシエタン）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＥｔＯＡＣ（酢酸エチル）、ＥｔＯＨ（エタノール）、ＭｅＯＨ（メタノール）、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）、ＴＦＡＡ（トリフルオロ酢酸無水物）、ＴＥＡ（トリエチルアミン）、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、ＤＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）、ＥＤＣ（１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−カルボジイミド））、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＣＤＩ（１，１’−カルボニルジイミダゾール）、ＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＨＯＡＴ（１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール）、ＨＯＢＴ（Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール）およびＥＥＤＱ（２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン）。

式（Ｉ）の化合物を製造するための一般的な方法は、本明細書中以下のスキーム１に描かれる。

スキーム１において、スキーム２に記載されるように製造した式（ＩＩ）の化合物（ここで、Ｐは窒素保護基を表す）は、公知の方法に従って脱保護される。ＰがＢＯＣを表す場合、典型的に、まずＥｔＯＡｃ、エーテルジオキサンまたは水のような溶媒に溶解した（ＩＩ）を、場合によって、約０℃のような適切な温度に冷却しながら、約５分〜約１時間のような適切な時間、酸（例えば、塩化水素）を用いて処理することによって脱保護をもたらす。溶液を室温（ＲＴ）まで温め、次いでさらなる時間（典型的にさらに３０分〜約１６時間）撹拌する。好ましくは、反応混合物を約１５分間撹拌し、室温にし、次いでさらに３０分間撹拌する。あるいは、（ＩＩ）をＴＦＡに溶解し、そして適切な時間（例えば、約３０分〜約２４時間）の後、過剰なＴＦＡを真空で除去し、そして残りの生成物をエーテルのような溶媒で摩砕する。ＰがＣｂｚを表す場合、１０％パラジウムまたは水酸化パラジウムのような触媒の存在下、ＥｔＯＨまたはＥｔＯＡＣのような適切な溶媒中、約３０ｐｓｉ〜約６０ｐｓｉの圧力で、十分な時間（通常、一晩）、約２０℃〜約８０℃の温度にて、水素添加分解によって脱保護を行い得る。好ましくは、約４５ｐｓｉの圧力で室温にて、水素添加分解をもたらす。

本明細書中以下のスキーム２に描かれるように、適切に置換したカルボン酸誘導体（ＩＩＩ）と適切に置換したアミン誘導体（ＩＶ）とをカップンリングすることによって、式（ＩＩ）の化合物を製造し得る。

典型的に、反応不活性溶媒、好ましくは、アセトニトリル、ジクロロメタン、ＤＭＦ、ＴＨＦまたはクロロホルムのような非プロトン性溶媒中、（ＩＩＩ）と（ＩＶ）とを合わせることによってカップリングを達成する。次いで、場合によって、ＴＥＡまたはピリジンのような塩基およびＨＯＢＴまたはＨＯＡＴのような任意の補助剤の存在下、ＥＤＣ、ＨＡＴＵ、ＤＣＣ、ＥＥＤＱ、ＣＤＩ、塩化ピバロイルまたはジエチルホスホリルシアニドのようなカップリング試薬を添加する。典型的に、カップリングは、約０℃〜約５０℃の温度にて、適切な時間（例えば、約１時間〜約２４時間、例えば約１６時間）でもたらされる。カルボン酸をカップリングするのに有用な他の条件の議論については、Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，Ｖｏｌ．ＸＶ，ＰａｒｔＩＩ，Ｅ．Ｗｕｎｓｃｈ，Ｅｄ．，Ｇ．Ｔｈｅｉｍｅ Ｖｅｒｌａｇ，（１９７４），Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ；Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｋｙ，「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ Ｂｅｒｌｉｎ（１９８４）；および「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ｅ．ＧｒｏｓｓおよびＪ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編），Ｖｏｌｓ．１−５（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ＮＹ １９７９−１９８３）を参照のこと。式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）の化合物は、公知の方法または本明細書中以下に記載される例示的な製造手順に従って製造され得る。式（ＩＶ）アミンの例示的な製造について、ＰＣＴ国際出願公開番号ＷＯ ２００３／１０１９５８および米国特許番号第６,７１０,０４０号を参照のこと（これらの開示は本明細書中に参照によって加入される）。

また、式（ＩＩ）の化合物は、以下のスキーム３に記載されるように製造され得る。

スキーム３において、適切に置換したヘテロシクロアルキルアミン（ＶＩ）を用いて、本明細書中以下のスキーム４に記載されるように製造した保護化ケトン（Ｖ）を還元アミノ化することによって、式（ＩＩ）の化合物を製造する。このようなアミノ化反応は当業者に周知である。例えば、Ａ．Ｆ．Ａｂｄｅｌ−Ｍａｇｉｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６１，３８４９（１９９６）；Ｒ．Ｆ．Ｂｏｒｃｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，９３，２８９７（１９７１）；およびＳ．Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｌｅｔｔ，１０７９（１９９５）を参照のこと。式（ＶＩ）アミンは従来技術において周知であり、そして市販されるか、または公知の方法によって製造され得る。例えば、Ｄ．Ａ．Ｈｏｒｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，１０３，８９３−９３０（２００３），Ｈ．Ｆｕｋｕｉ，ｅｔ ａｌ，Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，５６，２５７−２６４（２００２），Ｍ．Ｙ．Ｃｈｕ−Ｍｏｙｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６０，５７２１−５７２５（１９９５），およびＪ．Ｐ．Ｙｅｖｉｃｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２９，３５９−３６９（１９８６）を参照のこと。

典型的に、水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素テトラメチルアンモニウムまたは水素のような還元剤の存在下、触媒（１０％ Ｐｄ／Ｃ、酸化白金など）の存在下、場合によって、酸（例えば、酢酸（ＡｃＯＨ）、塩酸など）の存在下、（Ｖ）および（ＶＩ）を縮合させる。カップリングは、１，２−ジクロロエンタン、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＥｔＯＨまたはＭｅＯＨのような反応不活性溶媒中で通常もたらされる。０〜５０℃のような適切な温度にて、約１〜約２４時間（例えば、約１６時間）のような適切な時間で、反応を行う。

本明細書中以下のスキーム４に記載されるように、必要に応じて、市販のカルボン酸（ＶＩＩ）、ケトカルボン酸（ＩＸ）またはケトエステル（Ｘ）を用いて開始し、式（Ｖ）の化合物を製造し得る。

スキーム４の工程１において、本明細書中上のスキーム２に記載されるように、保護化酸（ＶＩＩ）をアミン（ＩＶ）とカップリングして、アルコール（ＶＩＩＩ）を得る。

スキーム４の工程２において、反応不活性溶媒中で酸化剤を用いて（ＶＩＩＩ）を処理することによってアルコール（ＶＩＩＩ）をケトン（Ｖａ）に酸化する。適切な酸化剤の例としては、ＤＭＳＯ中ピリジン／三酸化硫黄；臭化ナトリウムおよびＴＥＭＰＯ（２，２，６，６−テトラメチル−１−ピペリジニルオキシ）遊離基触媒の存在下、次亜塩素酸ナトリウム溶液；三酸化クロム、重クロム酸ピリジニウムまたはクロロクロム酸ピリジニウムのようなクロムベースの試薬；および第三級アミンの存在下、ＤＭＳＯ中塩化オキサリルが挙げられる。反応不活性溶媒の例としては、ジクロロメタン、ＥｔＯＡｃ、トルエンまたはピリジンが挙げられる。典型的に、約−７８℃〜約５０℃の温度にて、約１〜約２４時間（例えば、約１６時間）酸化を行う。このような酸化は当業者に周知である。例えば、Ｍ．Ｔａｍａｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６６，３５９３（２００１）およびＸ−Ｉ．Ｑｉｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６７，７１６２（２００２）を参照のこと。

スキーム４の工程３において、本明細書中上のスキーム２に記載されるように、保護化ケトカルボン酸（ＩＸ）を先ずアミン（ＩＶ）とカップリングし、（Ｖａ）を得、次いでアルキル化し、ケトン（Ｖ）を得る。典型的に、先ずケトン（Ｖａ）と第二級アミン（例えば、ピロリジン、ピペリジンまたはモルホリン）を反応させることによってエナミンを形成させ、次いで、場合によって、炭酸カリウムのような塩基の存在下、アルキル化剤で処理することによって、アルキル化をもたらす。典型的に、ベンゼン、トルエン、アセトニトリルまたはジオキサンのような溶媒中で、反応はもたらされる。このような変換は、当業者に周知である。例えば、Ｇ．Ｓｔｏｒｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５，２０７（１９６３）；Ｍ．Ｗ．Ｈｏｌｌａｄａｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３４，４５５（１９９１）；およびＰ．Ｂａｒｒａｃｌｏｕｇｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５１，４１９５（１９９５）を参照のこと。

スキーム４の工程５において、保護化ケトエステル（Ｘ）（ここでＲは、アルキルまたはアリールアルキル部分を表す）を、工程４の以前に記載された条件下、アルキル化し、ケトエステル（ＸＩ）を得る。

スキーム４の工程６において、本明細書中のスキーム２に上記されるように、ケトエステル（ＸＩ）を鹸化し、工程７において、適切に置換したアミン（ＩＶ）とカップリングさせ、対応するカルボン酸を得る。典型的に、水酸化リチウムまたは水酸化ナトリウムのような塩基の存在下、ＭｅＯＨまたはＥｔＯＨと水のような水混和性溶媒中に（ＸＩ）を溶解し、鹸化工程を達成する。約０℃〜約１００℃のような適切な温度にて（好ましくは、室温）、適切な時間（例えば、約１〜約２４時間、例えば、約１６時間）で鹸化をもたらす。

好ましくは、本発明の医薬組成物は、治療有効量の式（ＩＡ）の化合物もしくはそれらのプロドラッグ、または化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物、ならびに薬学的に受容可能な担体、ビヒクル、希釈剤または賦形剤を含有する。

より好ましくは、本発明の医薬組成物は、治療有効量の化合物（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−（ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）ピロリジン−２−イル）メタノンもしくはそれらのプロドラッグ、または前記化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または前記化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物；ならびに薬学的に受容可能な担体、ビヒクル、希釈剤、賦形剤を含有する。

本発明の化合物と薬学的に受容可能な担体、ベヒクルまたは希釈剤との組合せによって形成される医薬組成物は、次いで、錠剤、散剤、トローチ剤、シロップ剤、注射溶液などのような様々な投与形態で容易に投与される。これらの医薬組成物は、所望の場合、香味剤、結合剤、賦形剤などのような付加的な成分を含有し得る。

従って、経口投与用に、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウムおよび／またはリン酸カルシウムのような種々の賦形剤を含有する錠剤を、デンプン、アルギン酸および／または特定の複合ケイ酸塩のような種々の崩壊剤と、ポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチンおよび／またはアラビアゴムのような結合剤と共に利用してもよい。さらに、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルクのような滑沢剤が、錠剤化の目的のために、しばしば有用である。同様のタイプの固体組成物をまた、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤とし利用してもよい。このための好ましい材料として、ラクトースもしくは乳糖および高分子量ポリエチレングリコールが挙げられる。水性懸濁液またはエリキシルが経口投与用に望ましい場合、その中の活性薬剤を、種々の甘味剤または香味剤、着色料または染料、および所望の場合、乳化剤または懸濁剤、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリンおよび／またはそれらの組合せのような希釈剤と共に組み合わせてもよい。

非経口投与用に、ゴマ油もしくはラッカセイ油、水性プロピレングリコール中の、または無菌水溶液中の本発明の化合物または組成物の溶液を利用してもよい。このような水溶液は、必要な場合、適切に緩衝化されるべきであり、そして液体希釈剤は、十分な生理食塩水またはグルコースを用いて先ず等張にされる。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下および腹腔内投与に特に適している。これに関連して、利用される無菌水性媒体は、当業者に公知の標準的技術によって全て容易に利用可能である。

鼻腔内投与または吸入による投与用に、本発明の化合物または組成物は、患者により圧迫されるか、またはポンプで空気を入れるポンプスプレー容器から溶液または懸濁液の形態で、または、適切な高圧ガス（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガス）を用いた加圧容器又はネブライザーからのエアロゾルスプレー状態として、便利に送達される。加圧エアロゾルの場合、定量を送達するバルブを提供することにより、投与量単位を決定し得る。加圧容器またはネブライザーは、本発明の化合物の溶液または懸濁液を含んでもよい。吸入器（ｉｎｈａｌｅｒ）またはインサフレーター（ｉｎｓｕｆｆｌａｔｏｒ）に使用するためのカプセルおよびカートリッジ（例えば、ゼラチン製）は、本発明の化合物とラクトースまたはデンプンのような適切な粉体基剤との混合粉体を含んで処方されてもよい。

特定量の活性成分を含む種々の医薬組成物の製造方法は公知であるか、または本開示の観点から当業者に明らかである。医薬組成物の製造方法の例については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，第１９編（１９９５）」を参照のこと。

別の局面において、本発明は治療有効量の式（Ｉ）の第一の化合物、それらのプロドラッグまたは化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩；以下から選択される抗糖尿病薬である第二の化合物を含有する医薬組成物に関する：インスリンおよびインスリンアナログ；インスリノトロピン；ビグアニド；α₂−アンタゴニストおよびイミダゾリン；グリタゾン；アルドースレダクターゼインヒビター；グリコーゲンホスホリラーゼインヒビター；ソルビトールデヒドロゲナーゼインヒビター；脂肪酸酸化インヒビター；α−グルコシダーゼインヒビター；β−アゴニスト；ホスホジエステラーゼインヒビター；高脂血症治療薬；抗肥満薬；バナジウム酸塩およびバナジウム錯体およびペルオキソバナジウム錯体；アミリンアンタゴニスト；グルカゴンアンタゴニスト；成長ホルモン分泌促進薬；糖新生インヒビター；ソマトスタチンアナログ；抗脂肪分解薬；抗糖尿病薬のプロドラッグ、または抗糖尿病薬およびプロドラッグの薬学的に受容可能な塩。

別の局面において、本発明は、式（Ｉ）の化合物もしくはそれらのプロドラッグ、または化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物を含有する、第一の投薬形態；およびインスリンおよびインスリンアナログ；インスリノトロピン；ビグアニド；α₂−アンタゴニストおよびイミダゾリン；グリタゾン；アルドースレダクターゼインヒビター；グリコーゲンホスホリラーゼインヒビター；ソルビトールデヒドロゲナーゼインヒビター；脂肪酸酸化インヒビター；α−グルコシダーゼインヒビター；β−アゴニスト；ホスホジエステラーゼインヒビター；高脂血症治療薬；抗肥満薬；バナジウム酸塩およびバナジウム錯体およびペルオキソバナジウム錯体；アミリンアンタゴニスト；グルカゴンアンタゴニスト；成長ホルモン分泌促進薬；糖新生インヒビター；ソマトスタチンアナログ；抗脂肪分解薬；抗糖尿病薬のプロドラッグ、または抗糖尿病薬およびプロドラッグの薬学的に受容可能な塩から選択される抗糖尿病薬を含有する、第二の投薬形態；ならびに前記第一の投薬量（ａ）および前記第二の投薬量（ｂ）を含むための容器、を備えるキットに関する。キットの好ましい実施形態において、第一および第二の投薬形態の両方は、独立して、薬学的に受容可能な担体または希釈剤を含有する。

別の局面において、本発明は、ジペプチジルペプチダーゼＩＶを阻害するための治療方法に関し、このような治療が必要な哺乳動物に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物もしくはそれらのプロドラッグ、または化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物を、単独または上記のような抗糖尿病薬と組み合わせて投与する工程を包含する。

別の局面において、本発明は、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害によって媒介される症状の治療方法に関し、このような治療が必要な哺乳動物に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物もしくはそれらのプロドラッグ、または化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物を、単独または上記のような抗糖尿病薬と組み合わせて投与する工程を包含する。

１つの実施形態において、治療される症状は、２型糖尿病、１型糖尿病、耐糖能異常、高血糖症、代謝症候群（Ｘ症候群および／またはインスリン抵抗症候群）、糖尿、代謝性アシドーシス、関節炎、白内障、糖尿病性神経障害、糖尿病性ネフロパシー、糖尿病性網膜症、糖尿病性心筋症、肥満症、肥満症によって悪化する症状、高血圧症、高脂質血症、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症、骨減少症、脆弱化、骨損失、骨折、急性冠症候群、成長ホルモン欠損症に起因する小人症、多嚢胞性卵巣症候群に起因する不妊症、不安、うつ病、不眠症、慢性疲労、てんかん、摂食障害、慢性疼痛、アルコール依存症、腸運動に関連する疾患、潰瘍、過敏性腸症候群、炎症性腸症候群；短小腸症候群；および２型糖尿病における疾患の増悪の予防である。

好ましい実施形態において、治療される症状は、２型糖尿病である。

別の局面において、本発明は、糖尿病のためのインスリン分泌促進薬の同定方法に関し、断食した糖尿病のＫＫ／Ｈ１Ｊの症状を示すマウスに式（Ｉ）の薬剤を投与する工程；および続く経口グルコースチャレンジに対するマウスの応答を評価する工程（ここで、前記マウスが症状の改善を示した場合、前記薬剤は、２型糖尿病、１型糖尿病、耐糖能異常、高血糖症、代謝症候群（Ｘ症候群および／またはインスリン抵抗症候群）、糖尿、代謝性アシドーシス、関節炎、白内障、糖尿病性神経障害、糖尿病性ネフロパシー、糖尿病性網膜症、糖尿病性心筋症、肥満症、肥満症によって悪化する症状、高血圧症、高脂質血症、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症、骨減少症、脆弱化、骨損失、骨折、急性冠症候群、成長ホルモン欠損症に起因する小人症、多嚢胞性卵巣症候群に起因する不妊症、不安、うつ病、不眠症、慢性疲労、てんかん、摂食障害、慢性疼痛、アルコール依存症、腸運動に関連する疾患、潰瘍、過敏性腸症候群、炎症性腸症候群；短小腸症候群；および２型糖尿病における疾患の増悪の予防のための治療薬として同定される）を包含する。

本発明はまた、哺乳動物（ヒトを含む）における上記の症状を治療または予防するための治療方法に関し、ここで本発明の式（Ｉ）の化合物は、治療利益を得るために設計された適切な投与計画の一部として投与される。適切な投与計画、投与される各用量および化合物の投薬間隔は、使用される本発明の式（Ｉ）の化合物、使用される医薬組成物の種類、治療される対象の特性および症状の重篤度に依存する。

一般的に、本発明の化合物に対する有効投薬量は、単回用量または分割用量で、活性化合物の０.０１ｍｇ／ｋｇ／日〜３０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０.０１ｍｇ／ｋｇ／日〜５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。しかし、治療される対象の症状に依存して、必然的に、投薬量において多少の変化が生じる。いずれにしろ、投与に関して責任のある個人が、個々の対象に適切な用量を決定する。「ｋｇ」とはキログラムで測定された患者の体重をいうことを専門家は理解する。

本発明の化合物または組成物は、単回用量（例えば、一日当たり１回）もしくは複数用量でまたは持続注入によって投与されてもよい。本発明の化合物はまた、単独または薬学的に受容可能な担体、ビヒクルまたは希釈剤と組み合わせて、単回用量または複数用量で投与されてもよい。適切な薬学的担体、ビヒクルおよび希釈剤としては、不活性な固形希釈剤または充填剤、無菌水溶液、および種々の有機溶媒が挙げられる。

本発明の化合物または組成物は、種々の慣用的な投与経路（経口および非経口（例えば、静脈内、皮下または髄内）を含む）によって、治療が必要な対象に投与されてもよい。さらに、本発明の医薬組成物を、鼻腔内、坐剤としてまたは「フラッシュ」製剤（すなわち、水を用いることなく口腔内で医薬を溶解させることが可能である）を用いて、投与されてもよい。

〔実施例〕
ほかに記載されない限り、全ての反応物は市販されていた。
フラッシュクロマトグラフィーを、Ｗ．Ｃ．Ｓｔｉｌｌ ｅｔ ａｌ．のＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９７８，４３，２９２３によって記載される方法に従って行った。

製造実施例
本発明の化合物および中間体は、一般的にＮｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ ＣｈｅｍｉｓｔｒｙおよびＣＡＳ ＩｎｄｅｘルールのＩＵＰＡＣ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ ｆｏｒ Ｐｕｒｅ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）勧告に従って命名された。

製造１
（２Ｓ）−２−［（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）カルボニル］−４−オキソピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
工程１ （２Ｓ，４Ｒ）−２−［（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）カルボニル］−４−ヒドロキシピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ＴＥＡ（０.７７ｍＬ、５.５ｍｍｏｌ）を、３，３−ジフルオロピロリジン塩酸塩（０.７９ｇ、５.５ｍｍｏｌ；Ｓｙｎｌｅｔｔ，５５（１９９５））のジクロロメタン懸濁液（１０ｍＬ）に添加した。５分後、（４Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（１.１６ｇ、５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０.７４ｇ、５.５ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（１.０５ｇ、５.５ｍｍｏｌ）を添加した。反応系を一晩撹拌した後、混合物を飽和重炭酸ナトリウムおよびブラインで連続して洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ^(R)Ｆｌａｓｈ ４０Ｓ（Ａ Ｄｙｎａｘ Ｃｏｒｐ．；Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，ＶＡ）、９：１ジクロロメタン：メタノール）によって精製し、淡いピンク色の発泡体（１.０７ｇ）を得た。水層のジクロロメタン抽出を繰り返してさらなる生成物（０.２６ｇ）を得、全体で１.３３ｇ（８３％）の収量を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ３２１（ＭＨ⁺）。

工程２
ジクロロメタン（３ｍＬ）中のＤＭＳＯ（０.５７ｍＬ、８ｍｍｏｌ）を−６５℃の塩化オキサリル（０.３８ｍＬ、４.４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１０ｍＬ）に滴下した。５分後、工程１の生成物（１.２８ｇ、４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）を添加した。１５分後、ＴＥＡ（２.７９ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をＲＴまで温めた。２時間後、混合物を氷上に注いだ。有機層を分離し、１０％ ＮａＨＣＯ₃溶液およびブラインで連続して洗浄し、乾燥させ（ＭｇＯ₄）、そして濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ^(R)Ｆｌａｓｈ ４０Ｓ，９５：５ジクロロメタン：ＭｅＯＨ）によって精製し、表題化合物（７６５ｍｇ、６０％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ３１９（ＭＨ⁺）。

また、（２Ｓ）−２−［（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）カルボニル］−４−オキソピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを、以下の手順に従って製造し得る。

１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−オキソ−Ｌ−プロリン（６.８８ｇ、３０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（４.４６ｇ、３３ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（６.３２６ｇ、３３ｍｍｏｌ）および３，３−ジフルオロピロリジン塩酸塩（４.５２ｇ、３１.５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、そして反応混合物を氷浴中で０℃に冷却し、ＴＥＡ（８.４ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、反応混合物をＲＴまで温めた。一晩撹拌した後、飽和重炭酸ナトリウム（１００ｍＬ）を添加し、そして水層をジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ^(R)Ｆｌａｓｈ ４０Ｍ、１：１０ジクロロメタン：ヘキサンで溶出する）によって精製し、表題化合物（７.８５ｇ、８２％収率）を得た。ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ ３１９.３（ＭＨ⁺）。

製造２
（２Ｓ）−２−｛［（３Ｒ^*−４Ｓ^*）−３，４−ジフルオロピロリジン−１−イル］カルボニル｝−４−オキソピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
工程１ （２Ｓ，４Ｒ）−２−｛［（３Ｒ^*，４Ｓ^*）−３，４ジフルオロピロリジン−１−イル］カルボニル｝−４−ヒドロキシピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
製造１の工程１に記載されるのと類似の様式で、（４Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（２.３１ｇ、１０ｍｍｏｌ）を、（３Ｒ，４Ｓ）−ｒｅｌ−３，４−ジフルオロピロリジン塩酸塩（１.４４ｇ、１０ｍｍｏｌ、製造４）とカップリングし、オフホワイトの発泡体として表題化合物（２.１５ｇ、６７％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ３２１（ＭＨ⁺）。
工程２
製造１の工程２に記載されるのと類似の様式で、工程１の生成物（１.９７ｇ、６.１５ｍｍｏｌ）を酸化し、淡黄色固体として表題化合物（０.７４ｇ、３８％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ３１９（ＭＨ⁺）。

製造３
（４Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（４−ピリミジン−２−イルピペラジン−１−イル）−Ｌ−プロリン
１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−オキソ−Ｌ−プロリン（１.０ｇ、４.４ｍｍｏｌ）、２−ピペラジン−１−イルピリミジン（０.７３ｇ、４.４ｍｍｏｌ）および酢酸（２７５μＬ、４.６ｍｍｏｌ）を無水１，２−ジクロロエタン（２０ｍＬ）に溶解し、そしてトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１.８５ｇ、８.７ｍｍｏｌ）を添加した。ＲＴにて２４時間撹拌した後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ₃でクエンチした。固体ＮａＨＣＯ₃および濃ＨＣｌの添加によってｐＨをｐＨ７に調節し、混合物をジクロロメタンで抽出し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、そして濃縮し、粗物質（１.０、６１％）を得、これはさらに使用するために十分に純粋であった。ＭＳ ｍ／ｚ ３７８（ＭＨ⁺）。

製造４
（３Ｒ，４Ｓ）−ｒｅｌ−３，４−ジフルオロ−ピロリジン塩酸塩
工程１ ２，５−ジヒドロ−ピロール−１−カルボン酸ベンジルエステル
３−ピロリン（１０ｇ、０.１４５ｍｏｌ）をトルエン（１００ｍＬ）中の重炭酸ナトリウム（１４ｇ、０.１７ｍｏｌ）のスラリーに添加した。混合物を０℃に冷却し、そしてクロロギ酸ベンジル（２３ｍＬ、０.１６ｍｏｌ）を滴下した。一晩撹拌した後、溶液をジクロロメタンで希釈し、冷水およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして黄白色油状物になるまで濃縮し、真空で蒸留した。Ｂｐ １１９〜１２６℃（０.３２ｍｍ）。

工程２ ６−オキサ−３−アザ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−カルボン酸ベンジルエステル
工程１の表題化合物（３.０ｇ、１５ｍｍｏｌ）を、エチレンジアミン四酢酸、ジナトリウム塩二水和物（１１ｍｇ、０.０３ｍｍｏｌ）を含有するアセトニトリル（１００ｍＬ）および水（７０ｍＬ）の混合物に溶解した。溶液を０℃に冷却し、そして１，１，１−トリフルオロアセトン（１４.５ｍＬ、１６０ｍｍｏｌ）を１０分かけて添加した。重炭酸ナトリウムを添加することによってｐＨを７に維持しながら、ペルオキソ一硫酸カリウム（４５ｇ、７４ｍｍｏｌ）を数滴ずつ４０分かけて添加した。混合物を０℃にて１.５時間撹拌し、次いで水に注ぎ、そしてジクロロメタンで抽出した。合わせた抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして無色の油状物になるまで濃縮した（３.４５ｇ、１００％）。

工程３ （３ＲＳ，４ＲＳ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル
ＴＥＡトリヒドロフルオリド（１.９５ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）と工程２の表題化合物（２.６２ｇ、１２ｍｍｏｌ）の混合物を１５５℃にて３時間加熱し、冷却し、そして水とジクロロメタンとの間で分配した。水層を再びジクロロメタンで抽出し、そして合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン中１％メタノール）によって精製し、青白い油状物として表題化合物（１.１４ｇ、４０％）を得た。

工程４ （３Ｒ，４Ｓ）−ｒｅｌ−３，４−ジフルオロ−ピロリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル
工程３の表題化合物のジクロロメタン溶液（１５ｍＬ）を−５０℃に冷却し、そして［ビス（２−メトキシエチル）アミノ］三フッ化硫黄（１.３ｍＬ、６.９ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を室温まで１８時間かけて温め、次いで水とＥｔＯＡｃとの間で分配した。水層を再びＥｔＯＡｃで抽出し、そして合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン）によって精製し、茶色油状物として生成物（１.１４ｇ、４０％）を得た。

工程５
工程４の表題化合物（６７５ｍｇ、２.８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（１０ｍＬ）（１０％ Ｐｄ／Ｃ（２００ｍｇ）を含有する）を、４０ｐｓｉにてＰａｒｒ装置中で１８時間かけて水素化した。溶液を珪藻土で濾過し、そして濾液を乾燥状態まで濃縮し、黄色固体（４００ｍｇ、１００％）を残した。

製造５
（Ｓ）−２−（３−フルオロ−アゼチジン−１−カルボニル）−４−オキソ−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
工程１ ベンズヒドリル−３−フルオロ−アゼチジン塩酸塩
１−ベンズヒドリル（ｂｅｎｚｙｈｙｄｒｙｌ）−アゼチジン−３−オール（５.０ｇ、２０.９ｍｍｏｌ）をベンゼン（５０ｍＬ）に溶解し、溶液を１５℃まで冷却し、そして（ジエチルアミノ）三フッ化硫黄（１０.１ｇ、６２.７ｍｍｏｌ）を滴下した。室温にて一晩撹拌した後、飽和重炭酸ナトリウムを添加した。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ^(R)４０Ｓ、１０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製した。生成物をＥｔＯＡｃに溶解し、ＨＣｌ（１５ｍＬ、エーテル中２Ｎ）で処理し、簡潔に加熱し、そして濃縮した。固体をエーテルで摩砕し、濾過し、そして乾燥させ、表題化合物（２.５８ｇ）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ２４２.３（ＭＨ⁺）。

工程２ ３−フルオロ−アゼチジン塩酸塩
工程１の生成物（２.５８ｇ、９.３ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（３０ｍＬ）（１０％ Ｐｄ／Ｃ（０.３８ｇ）を含有する）を３０〜５０ｐｓｉにてＰａｒｒ装置中で６０時間かけて水素化した。溶液を珪藻土で濾過し、そして濾液を乾燥状態まで濃縮した。固体をＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃから再結晶化させ、表題化合物（０.６２ｇ、６０％）を得た。

工程３
Ｎ−ｔｅｒｔ−Ｂｏｃ−４−オキソ−Ｌ−プロリン（９１７ｍｇ、４ｍｍｏｌ）、工程２の表題化合物（４４６ｍｇ、４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１.６７３ｇ、４.４ｍｍｏｌ）を、窒素下、無水塩化メチレン中で混合した。溶液を氷浴中で冷却し、ＤＩＥＡ（１.４ｍＬ、８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をＲＴまで温め、そして一晩撹拌した。飽和重炭酸ナトリウムを添加し、層を分離し、そして水層を塩化メチレンで抽出した。合わせた有機部分をブラインで洗浄し、そして硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗生成物（２.１１ｇ）をクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ^(R)Ｆｌａｓｈ ４０Ｓ、９５：５ ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ）によって精製し、淡いピンク色の発泡体として表題化合物（１.０６ｇ、９２％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ２８７.３（ＭＨ⁺）。

製造６
（Ｓ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−ピロリジン−１−カルボニル）−４−オキソ−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
Ｎ−ｔｅｒｔ−Ｂｏｃ−４−オキソ−Ｌ−プロリン（２.２９ｇ、１０ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−３−フルオロピロリジン塩酸塩（１.３８ｇ、１１ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（２.０９ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）を、窒素下、無水塩化メチレン（３０ｍＬ）中で混合した。ＨＯＢＴ（２.０３ｇ、１５ｍｍｏｌ）を添加し、そして混合物を氷浴中で０℃に冷却し、ＥＤＣ（２.１０、１１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をＲＴまで温め、そして一晩撹拌した。混合物を飽和重炭酸ナトリウムおよびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗物質（３.１５ｇ）をヘキサン：ＥｔＯＡｃ（２：１）から再結晶化させ、淡黄色針状晶として表題化合物（２.１８ｇ、７３％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ３０１.３（ＭＨ⁺）。

製造７
（２Ｓ，４Ｓ）−２−（３．３−ジフルオロ−ピロリジン−１−カルボニル）−４−ピペラジン−１−イル−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
工程１ ４−［（３Ｓ，５Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−（３，３−ジフルオロ−ピロリジン−１−カルボニル）−ピロリジン−３−イル］− ピペラジン−１−カルボン酸ベンジルエステル
製造１の表題化合物（１.５９ｇ、５ｍｍｏｌ）および１−（ベンジルオキシカルボニル）ピペラジン（１.２１ｇ、５.５ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（２０ｍＬ）にＡｃＯＨ（０.３ｍＬ、１.０５当量）を添加し、次いでトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（２.１１９ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をＲＴにて４時間撹拌した。飽和重炭酸ナトリウムを添加し、そして生成物を塩化メチレンで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、そして硫酸マグネシウムで乾燥させた。エバポレーションの後、粗生成物（２.２８ｇ黄色発泡体）を、ＥｔＯＡｃを用いて溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、白色発泡体として表題化合物（１.２８ｇ、４９％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ５２３.３（ＭＨ⁺）。

工程２
工程１の生成物（１ｇ、１.９１ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（５０ｍＬ）に溶解し、そして１０％ Ｐｄ／Ｃ（１ｇ、１当量ｗ／ｗ）を慎重に添加し、次いで１，４−シクロヘキサジエン（１.８１ｍＬ、１０当量）を添加した。混合物をＲＴにてしっかりと蓋の付いたフラスコ中で一晩穏やかに撹拌した。反応混合物を珪藻土に通して濾過し、そして濃縮し、黄色の半固体として生成物（７５８ｍｇ、１００％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ３８９.４（ＭＨ⁺）。

製造８
（Ｓ）−２−（３，３−ジフルオロ−アゼチジン−１−カルボニル）−４−オキソ−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
Ｎ−ｔｅｒｔ−ＢＯＣ−４−オキソ−Ｌ−プロリン（４５８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）、３，３−ジフルオロアゼチジン塩酸塩（２５８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）（ＷＯ ２０００／４７５８２に記載されるように製造した）およびＤＩＰＥＡ（０.３５ｍＬ、２ｍｍｏｌ）を無水塩化メチレン（１０ｍＬ）中で混合し、そして０℃に冷却した。次いで、ＨＯＢＴ（４０５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を一度に添加し、次いでＥＤＣ塩酸塩（４２２ｍｇ、２.２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物をＲＴまで温め、一晩撹拌した。飽和重炭酸ナトリウムを添加し、有機層を分離し、そして水層を塩化メチレンで抽出した。合わせた有機抽出物を２回ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。粗生成物（５７０ｍｇ）をヘキサン：塩化メチレン（１０：１）で摩砕し、濾過し、そして真空オーブン中で乾燥させ、明るいオレンジ粉末として表題生成物（５１０ｍｇ、８４％収率）を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０５.１（ＭＨ⁺）。

製造９
（２Ｓ，４Ｓ）−４−フルオロ−ピロリジン−２−カルボニトリル塩酸塩
工程１ （２Ｓ，４Ｓ）−４−フルオロ−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−ｔｅｒｔ−ブチルエステル１−（２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル）エステル
Ｎ−ｔｅｒｔ−ＢＯＣ−シス−４−フルオロ−Ｌ−プロリン（７００ｍｇ、３ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ溶液（８ｍＬ）に０℃のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（３８０ｍｇ、３.３ｍｍｏｌ）を一度に添加し、次いで少量ずつ１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（３９１ｍｇ、３.１ｍｍｏｌ）を添加した。反応系をＲＴまで温め、そして一晩撹拌した。混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、沈殿物を回収し、冷水で洗浄し真空オーブン中で一晩かけて乾燥させた。生成物（１.０９３ｇ）をさらに精製することなく使用した。ＭＳ ｍ／ｚ ３３１.３（ＭＨ⁺）。

工程２ （２Ｓ，４Ｓ）−２−カルバモイル−４−フルオロ−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
工程１の表題化合物（１.０３ｇ、３.１２ｍｍｏｌ）をＲＴのジオキサン（１２ｍＬ）に溶解し、そして溶液を濃水酸化アンモニウム溶液（１０ｍｍｏｌ）の液滴で処理した。得られた濃厚な溶液をＲＴにて３時間撹拌し、次いで６Ｎ ＨＣｌでｐＨ４〜５まで酸性化し、そして塩化メチレン（２×）で抽出した。合わせた抽出物を飽和重炭酸ナトリウムおよびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮し、透明な油状物（５６２ｍｇ、７８％収率）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ２３３.３（ＭＨ⁺）。

工程３ （２Ｓ，４Ｓ）−２−シアノ−４−フルオロ−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
０℃の工程２の表題化合物（５５０ｍｇ、２.３７ｍｍｏｌ）および乾燥ピリジン（０.４ｍＬ、２当量）の無水塩化メチレン溶液（１５ｍＬ）に、窒素下、ＴＦＡＡの塩化メチレン溶液（２ｍＬ）を添加した。溶液を０℃にて２時間撹拌し、次いでＲＴにて１時間撹拌した。反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。残留物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、固まった状態の油状物（４５８ｍｇ、９０％収率）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ２１５.３（ＭＨ⁺）。

工程４
工程３の表題化合物（４００ｍｇ）を乾燥アセトニトリル（８ｍＬ）に溶解し、そして窒素下、ジオキサン中４Ｎ ＨＣｌ（０.５ｍＬ）を添加した。得られた溶液をＲＴにて一晩撹拌し、そして形成された白色沈殿物を濾過し、真空オーブン中で乾燥させ、表題化合物（１２８ｍｇ、４６％収率）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ １１５.１（ＭＨ⁺）。さらなる生成物が濾過によって得ることができた。

製造１０
（２Ｓ）−４，４−ジフルオロ−ピロリジン−２−カルボニトリル塩酸塩
工程１ Ｎ−ｔｅｒｔ−ＢＯＣ−４，４−ジフルオロピロリジン−２−カルボニトリル
０℃のＮ−ｔｅｒｔ−ＢＯＣ−４，４−ジフルオロピロリジン−Ｌ−プロリンアミド（２５０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）および乾燥ピリジン（９７μＬ、１.２当量）の無水塩化メチレン溶液に、ＴＦＡＡ（２５２ｍｇ、１.２当量）の無水塩化メチレン溶液（１ｍＬ）を添加した。溶液をＲＴまで温め、そして３６時間撹拌した。反応を飽和塩化アンモニウムを用いてクエンチし、有機層を１Ｎ ＨＣｌ、飽和重炭酸ナトリウムおよびブラインで連続して洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮し、白色の半固体（２５２ｍｇ）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ２３３.１（ＭＨ⁺）。

工程２
工程１の表題化合物（２４５ｍｇ）を乾燥アセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解し、そして４Ｎ ＨＣｌ（０.５ｍＬ）を添加した。得られた溶液をＲＴにて５時間撹拌し、そして溶媒を除去した。残留物をＥｔＯＡｃ摩砕し、固体を濾過し、次いで高真空下で乾燥させ、白色固体として表題化合物（１０５、５９％収率）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ １３３.２（ＭＨ⁺）。

式（Ｉ）の化合物、それらの立体異性体、および化合物および立体異性体の薬学的に受容可能な塩が、以下の実施例に記載されるように製造され得る。本発明の遊離塩基化合物は、本明細書中の実施例１１３に開示されるような慣用の手段によってそれらの塩形態から得ることができる。

実施例１
（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピペラジン−１−イル）ピロリジン−２−イル）−（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−メタノンジヒドロクロリド
工程１ （２Ｓ，４Ｓ）−２−［（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）カルボニル］−４−｛４−［３−（トリフルオロメチル） フェニル］ピペラジン−１−イル｝ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
製造１の表題化合物（９６ｍｇ、０.３ｍｍｏｌ）、１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］ピペラジン（７０ｍｇ、０.３ｍｍｏｌ）およびＡｃＯＨ（１８μＬ、０.３ｍｍｏｌ）を無水１，２−ジクロロエタン（８ｍＬ）に溶解した。トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１２７ｍｇ、０.６ｍｍｏｌ）を添加した。反応系をＲＴにて３時間撹拌した後、反応系を飽和重炭酸ナトリウムでクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。粗物質をクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ^(R)Ｆｌａｓｈ ４０Ｓ、９５：５ジクロロメタン：ＭｅＯＨ）によって精製し、白色発泡体として表題化合物（１２６ｍｇ、７９％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ５３３（ＭＨ⁺）。

工程２
工程１の生成物（１２０ｍｇ、０.２２５ｍｍｏｌ）をジオキサン（５ｍＬ）中４Ｎ ＨＣｌで処理した。ＲＴにて２時間後、混合物を乾燥状態まで濃縮し、エーテルで摩砕し、濾過し、そして真空で乾燥させ、白色固体として表題化合物（９２ｍｇ）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ４３３（ＭＨ⁺）。

適切な出発物質を使用して、本明細書中以下の表１に開示される実施例２〜１１２の化合物の塩酸塩を、実施例１に記載するのと類似の様式で製造した。

実施例１１３
（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−（（２Ｓ−４Ｓ）−４−（４−（ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）ピロリジン−２−イル）−メタノン

工程１ （Ｓ）−２−（３，３−ジフルオロ−ピロリジン−１−カルボニル）−４−オキソ−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−４−オキソ−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（６.６ｋｇ、１.０当量）を反応装置に充填し、次いでジクロロメタン（１５体積）を添加した。反応混合物を０℃に冷却した。トリエチルアミン（４.８２リットル、１.２当量）を３０分かけて添加した。トリエチルアミンの添加が終わると、混合物は懸濁液から透明溶液に変化した。混合物を０℃〜５℃で１０分間維持した。反応温度を０℃〜５℃に維持しながら、塩化ピバロイル（３.６５ｋｇ、１.０５当量）をゆっくりと添加した。反応混合物はスラリーに戻った。反応混合物を１時間、０℃〜５℃に維持した後、完了についてＨＰＬＣ（誘導体化するためにジエチルアミンを使用する）でサンプリングした。−１０℃〜０℃にて、３，３−ジフルオロピロリジン塩酸塩（４.１３ｋｇ、１.０当量）を上記の混合物に１０分かけて充填した。−１０℃〜０℃にて、トリエチルアミン（４.０リットル、１.０当量）を７０分かけてゆっくりと導入した。トリエチルアミンの添加が完了すると、混合物を０〜５℃にて１時間撹拌した。反応はＨＰＬＣアッセイ（約１％の出発物質）で完了した。反応を０℃〜５℃の水（１０体積）でクエンチした。混合物を２０℃〜２５℃に加熱した。層を分離し、そして有機層を０.５Ｍ ＨＣｌ（５体積）で洗浄した。有機層を再び５％ ＮａＨＣＯ₃（２体積）と半飽和ブライン溶液（１.６４Ｍ、３体積）との組合せで洗浄した。有機溶液を低量の撹拌可能な体積（約２０リットル）まで大気中で濃縮した。酢酸エチル（１２.６体積、８２.８リットル）を添加し、溶液を約６体積まで大気中で濃縮した。混合物を６０℃〜６５℃にて２時間維持し、そして３時間かけて室温まで冷却した。混合物を２０℃〜２５℃にて８時間維持した。ヘプタン（８体積）を添加し、混合物を最低２時間粒状化した。固体を濾過し、２：１ ヘプタン／酢酸エチル（１体積）でリンスし、そして２５℃〜３５℃の棚型乾燥機中で最低１２時間乾燥させた。収量：７.２６ｋｇ、７９％。ＨＰＬＣ純度：９９.７％。部分真空下、６５℃〜７０℃にて、母液（８６リットル）を１２リットルまで濃縮した。混合物を６０℃〜６５℃に冷却した。酢酸エチル（４.０リットル）を１５分かけてゆっくりと添加した。混合物を２時間かけて２０℃〜２５℃に冷却し、そしてその温度で少なくとも２時間維持した。固体を濾過し、そしてヘプタン／酢酸エチル（３：１ ｖ／ｖ、１.７リットル）でリンスした。棚型乾燥機中で１２時間、３５℃〜４５℃にて乾燥させ、生成物（４３５グラム）を得た。ＨＰＬＣ純度：９６.４％。

工程２ （２Ｓ，４Ｓ）−２−（３，３−ジフルオロ−ピロリジン−１−カルボニル）−４−（４−ピリミジン−２−イル−ピペラジン−１−イル）−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
反応装置にＴＨＦ（２０体積）、２−ピペラジン−１−イル−ピリミジン（２.１７ｋｇ、１.０５当量）および工程１からの生成物（４.００ｋｇ、１.０当量）を充填した。全ての物質が３０分かけて溶解するまで、混合物を２０℃〜２５℃に維持した。酢酸（０.７９２ｋｇ、１.０５当量）を添加した。反応混合物が濁ってくるまでの間、混合物を１時間撹拌した。反応混合物を３０分間還流させ、次いで系から水の除去が完了したことを示す６６.９℃の安定した温度がオーバーヘッドで観察されるまで、６０℃〜７０℃にて濃縮した。必要な場合に、さらなるＴＨＦを添加した。最後に、反応装置中の全量を試薬（ｌｉｍｉｔ ｒｅａｇｅｎｔ）の１５体積となるようにＴＨＦを添加した。反応混合物を−３℃〜７℃に冷却し、そしてＨＰＬＣ（イミンを還元するためにトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムを使用する）によってイミンの完全な形成についてサンプリングした。−５℃〜１５℃にてトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（５.３３ｋｇ、２.０当量）を懸濁液に数滴ずつ添加した。反応混合物を２０℃〜２５℃に加熱し、そして１２時間維持した。反応が９９.８％で完了したことを、ＨＰＬＣ結果で確認した。重炭酸ナトリウム水溶液（１０％ ｗ／ｗ、１０体積）を添加した。スラリーを部分真空下３０℃〜６０℃にて濃縮して、ＴＨＦ（１０体積）を除去した。２０℃〜２５℃に冷却した後、酢酸エチル（１０体積）を懸濁液に添加した。有機層を分離し、そして水層をＨＰＬＣでチェックした。２％未満の生成物が含まれていた。有機層を、水（５体積）、飽和ブライン溶液（５体積）で洗浄し、部分真空下、４５℃〜５０℃にて少量（２体積）になるまで濃縮した。スラリーに４５℃〜５０℃のヘプタン（１０体積）を３０分かけて添加した。混合物を２０℃〜２５℃まで冷却し、そして２時間粒状化した。固体を濾過によって回収し、ヘプタン（２体積）でリンスした。棚型乾燥機中で１２時間、３５℃〜４５℃にて乾燥させ、生成物（５.３５ｋｇ、９１.３％）を得た。

工程３ （３，３−ジフルオロ−ピロリジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−ピリミジン−２−イル−ピペラジン−１−イル）−ピロリジン−２−イル］−メタノン
水（１９リットル、２体積）を反応装置に充填し、次いで工程２の生成物（９.５７ｋｇ、１.０当量）を充填した。スラリーに２０℃〜３０℃の濃ＨＣｌ（水中３７ｗｔ％、１９.１リットル、２体積）を４時間かけてゆっくりと添加した。ＨＣｌ（１２リットル）を添加した後、スラリーを溶液に投入した。添加が完了した後、反応系をＨＰＬＣアッセイで完了した。反応混合物を５℃〜１５℃まで冷却した。ｐＨ１０〜ｐＨ１１にて、撹拌しながら混合物に５０％ ＮａＯＨ水溶液をゆっくりと添加した。厳密に中性になるようにｐＨをｐＨメーターでモニターした。添加した５０％ ＮａＯＨの全量は、１２.４５リットルであった。混合物を２０℃〜２５℃に温め、そして酢酸エチル（それぞれ、１１５リットル、１２体積および５７リットル、６体積）で２回抽出した。２回の抽出の後、水層からのサンプルをＨＰＬＣによって分析し、そしてその水溶液中に１％の生成物のみを示した。有機層を合わせ、そして硫酸マグネシウム（５ｋｇ）で１時間処理した。混合物を濾過した。濾過ケーキを酢酸エチル（１０リットル）でリンスした。スペックフリー操作のための０.２ミクロンのインラインフィルターによって、濾液を反応装置に戻した。（以下の操作は、スペックフリー条件下で行った。）部分真空下、５０℃〜６０℃にて溶液を２０リットル（２体積）になるまで濃縮した。混合物を３０分かけて２０℃〜２５℃まで冷却した。室温まで冷却する際、結晶が生じた。混合物を３０分間維持した。ヘキサン（２０リットル、２体積）を１時間かけてゆっくりと添加した。混合物を２時間粒状化した。固体生成物を濾過によって回収し、そしてヘキサン／酢酸エチル（１０リットル、１：１ｖ／ｖ）でリンスした。フィルターを最低２時間窒素と共に乾燥させた。生成物を４４℃にて１２時間棚型乾燥機中で乾燥させた。収量：５.７ｋｇ、７５.９％。ｍ．ｐ．１５６℃。ＭＳ ｍ／ｚ ３６７（ＭＨ⁺）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，Ｄ₂Ｏ）：δ８.１５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５.０Ｈｚ，ピリミジンのＣＨ），６.５５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４.８Ｈｚ，ピリミジンのＣＨ），３.８７−３.８１（ｄｄ，１Ｈ，プロリンのＨ_2b、回転異性（ｒｏｔｏｍｅｒｉｃ）），３.７８−３.５０（ｍ，４Ｈ，ピロリジドのＮ−ＣＨ₂），３.５５−３.４０（ｍ，４Ｈ，ピペラジンのＮ−ＣＨ₂），２.９７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０.２，６.６ Ｈｚ，プロリンのＨ_5a），２.８５−２.７５（ｍ，１Ｈ，プロリンのＨ_4b），２.６９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０.０，９.１Ｈｚ，プロリンのＨ_5b），２.５５−２.２０（ｍ，７Ｈ，ピペラジンの重複Ｎ−ＣＨ₂，ピロリジンのＣＨ₂およびプロリンのＨ_3b），１.４７−１.３８（ｍ，１Ｈ，プロリンのＨ_3a）。

あるいは、表題化合物のジヒドロクロリド塩を実施例１の方法に従って製造した。

実施例１１４
｛（２Ｓ，４Ｓ）−［４−（４−ピリミジン−２−イル−ピペラジン−１−イル）−ピロリジン−２−イル］｝−（３，３，４，４−テトラフルオロ−ピロリジン−１−イル）−メタノンジヒドロクロリド
工程１ （２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−ピリミジン−２−イルピペラジン−１−イル）−２−［（３，３，４，４−テトラフルオロピロリジン−１−イル）カルボニル］ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ＤＩＰＥＡ（２６１ｍＬ、１.５ｍｍｏｌ）を製造３の表題化合物（１１４ｍｇ、０.３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１２８ｍｇ、０.３３ｍｍｏｌ）および３，３，４，４−テトラフルオロピロリジン塩酸塩（５４ｍｇ、０.３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン懸濁液（５ｍＬ）に滴下した。一晩撹拌した後、飽和重炭酸ナトリウム溶液を添加し、混合物をジクロロメタンで抽出し、抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ^(R)Ｆｌａｓｈ ４０Ｓ、ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ５０３（ＭＨ⁺）。

工程２
工程１の生成物のＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ溶液をジオキサン（約５ｍＬ）中４Ｍ ＨＣｌで処理した。１８時間後、溶媒を除去し、そして残留物をアセトニトリルに取り上げ、そして濃縮した。固体をヘキサン中に取り上げ、濾過し、そして乾燥させ、表題化合物（５０ｍｇ、３３％、２工程）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ４０３（ＭＨ⁺）。

適切な出発物質を使用して、表２に開示される実施例１１５〜１２２の化合物の塩酸塩を、実施例１１４に記載されるのと類似の様式で製造した。

実施例１２４
（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−４−（４−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−３−メチルピロリジン−２−イル）（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）メタノンジヒドロクロリド
工程１
製造１の表題化合物（５.６ｇ、２０ｍｍｏｌ）を４Åモレキュラーシーブ（７.９ｇ）を含むベンゼン（５０ｍＬ）に溶解し、そしてピロリジン（２.０ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）で処理した。溶液を濾過し、そして乾燥状態まで濃縮し、オレンジ色の発泡体（７.０ｇ、１００％収率）を残した。

工程２
工程１の生成物（７.０ｇ、２０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（１００ｍＬ）を破砕した炭酸カリウム（５.２ｇ、３８ｍｍｏｌ）に添加し、ヨウ化メチル（１.５ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を９０℃まで１６時間加熱し、ＲＴまで冷却し、そして濃縮した。残留物をクロロホルム（１５０ｍＬ）に取り上げ、そしてＡｃＯＨ（５ｍＬ）および水（４５ｍＬ）の混合物を添加した。ＲＴにて３時間後、層を分離し、水層をクロロホルム（３×２５ｍＬ）で抽出し、そして合わせた有機層を飽和重炭酸ナトリウム（２×２５ｍＬ）およびブラインで洗浄し、そして茶色の油状物まで濃縮した。油状物をエーテル（７５ｍＬ）に溶解し、濾過し、そして薄茶色の固体になるまで濃縮した（０.９７ｇ、１６％収率）。

工程３
ＭｅＯＨ（１ｍＬ）中の工程２の生成物（７４ｍｇ、０.２５ｍｍｏｌ）、１−（３−トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル−ピペラジン（６３ｍｇ、０.２８ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ（１６μＬ）および酢酸ナトリウム（２３ｍｇ、０.２８ｍｍｏｌ）の混合物に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（２１ｍｇ、０.２８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＲＴにて６５時間撹拌し、次いで濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に取り上げ、そして溶液を１Ｎ水酸化ナトリウム（２×３ｍＬ）およびブライン（５ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして乾燥状態まで濃縮した。残留物を分取用ＨＰＬＣ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＭＤ；３０×５０ｃｍ Ｗａｔｅｒｓ−Ｘｔｅｒｒａ^(R)Ｃ１８カラム−Ｗａｔｅｒｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ；０.１％水酸化アンモニウムを含む１５％アセトニトリルの３０ｍＬ／分勾配、１０分間）によって精製し、無色の固体（３５.７ｍｇ、２６％収率）を得た。

工程４
ジオキサン（０.５ｍＬ）中ＨＣｌ（４Ｍ）を、工程３の生成物（３５ｍｇ、０.０６４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（１ｍＬ）に添加した。１６時間後、混合物を乾燥状態まで濃縮し、そして残留物をエーテル（２ｍＬ）で摩砕した。表題化合物を固体として得た（３２ｍｇ、９６％収率）。ＭＳ ｍ／ｚ ４４８.４（ＭＨ⁺）。

適切な出発物質を使用して、本明細書中以下の表３に開示される実施例１２５〜１２７の化合物の塩酸塩を、実施例１２４に記載されるのと類似の様式で製造した。

実施例１２８
（２,４−ジフルオロ−フェニル）−（４−［（３Ｓ，５Ｓ）−５−（３,３−ジフルオロ−ピロリジン−１−カルボニル）−ピロリジン−３−イル）−ピペラジン−１−イル）−メタノンジヒドロクロリド
工程１ （２Ｓ，４Ｓ）−４−［４−（２，４−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−２−（３，３−ジフルオロ−ピロリジン−１−カルボニル）−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
製造７の表題化合物（９７ｍｇ、０.２５ｍｍｏｌ）、２，４−ジフルオロ安息香酸（４０ｍｇ、０.２５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（９５ｍｇ、０.３ｍｍｏｌ）を窒素下、無水塩化メチレン中で混合し、そして氷浴中０℃まで冷却し、ＤＩＥＡ（３２ｍｇ、４５μＬ、０.３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をＲＴまで温め、そして一晩撹拌した。反応系を飽和重炭酸ナトリウムでクエンチし、そして水層を塩化メチレンで抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。塩化メチレン：ＭｅＯＨ（９５：５）を使用するフラッシュクロマトグラフィーによって粗生成物を精製し、白色粉末として最終生成物（１３２ｍｇ、１００％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ５２９.４（ＭＨ⁺）。

工程２ 工程１の生成物（１２０ｍｇ）のアセトニトリル溶液をジオキサン（１ｍＬ）中４Ｎ ＨＣｌで処理した。反応系をＲＴにて一晩撹拌し、そしてエバポレートした。残留物を水に溶解し、濾過し、そして一晩凍結乾燥させ、白色粉末として表題化合物（１１０ｍｇ、９６％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ４２９.２（ＭＨ⁺）。

適切な出発物質を使用して、表４に開示される実施例１２９〜１３３の化合物の塩酸塩を、実施例１２８に記載されるのと類似の様式で製造した。

生物学的方法論
本明細書中上に列挙された哺乳動物の症状の治療または予防における、式（Ｉ）の化合物、それらのプロドラッグおよび立体異性体、ならびに化合物、プロドラッグおよび立体異性体の薬学的に受容可能な塩の有用性は、当業者に公知の慣用的なアッセイ（以下に記載されるインビボおよびインビトロアッセイを含む）において実証され得る。このようなアッセイはまた、式（Ｉ）の化合物、それらのプロドラッグおよび立体異性体、ならびに化合物、プロドラッグおよび立体異性体の薬学的に受容可能な塩の活性を、他の化合物の活性と比較し得る手段を提供する。

ＤＰＰ−ＩＶ阻害に関するインビトロアッセイ
ＤＰＰ−ＩＶ阻害は、Ｓｃｈａｒｐｅ，ｅｔ ａｌ．，Ａ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，２２９９（１９８８）およびＬｏｄｊａ，Ｚ．Ｃｚｅｃｈｏｓｌｏｖａｋ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１８１（１９８８）の方法から改変される以下のアッセイによってインビトロで実証され得る。酵素基質溶液（１５０μＬ）を、ポリスチレン９６ウェルプレートのマイクロタイターウェルにピペット注入し、そして４℃に維持する。酵素基質溶液は、０.１Ｍの塩化ナトリウム、０.１％（ｖ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎおよび５０μＵ／ｍＬ ＤＰＰ−ＩＶ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、Ｌｉｖｅｒｍｏｒｅ、ＣＡ；ＤＰＰ−ＩＶ ５ｍＵ／ｍＬストック）を含む５０ｍＭのＴｒｉｓアッセイ緩衝液（ｐＨ７.３）中の５０μＭのＧｌｙ−Ｐｒｏ−４−メトキシ−β−ナフチルアミド塩酸塩を含む。式（Ｉ）の化合物（５μＬ／ウェル）を添加し、式（Ｉ）の化合物の最終濃度を、１ウェル当り３μＭ〜１０ｎＭにする。

対照
試薬ブランクとして、４つのウェルから酵素を除去する。３ｍＭのＤｉｐｒｏｔｉｎ Ａ（５μＬ）（Ｂａｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．；Ｋｉｎｇ ｏｆ Ｐｒｕｓｓｉａ，ＰＡ）を正の性質対照として４つのウェルに添加し、１００μＭの最終Ｄｉｐｒｏｔｉｎ Ａ濃度を得る。式（Ｉ）の任意の化合物に影響することなく、全酵素活性（即ち、負の対照）を測定するために、蒸留水（５μＬ）を４つのウェルに添加する。

全アッセイを、３７℃で一晩（約１４〜１８時間）インキュベーションする。Ｆａｓｔ Ｂｌｕｅ Ｂ溶液（１０μＬ）（０.１Ｍの酢酸ナトリウム（ｐＨ４.２）および１０％（ｖ／ｖ）のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有する緩衝液中Ｆａｓｔ Ｂｌｕｅ Ｂ ０.５ｍｇ／ｍＬ）を各ウェルに添加することにより、反応をクエンチし、次いで室温にて約５分間振とうする。Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ；Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）または同等の装置で、プレートを分析し得る（５２５ｎｍでの吸収最大）。１０ｎＭ〜３μＭの化合物濃度の範囲にわたってＤＰＰ−ＩＶ活性を測定することにより、化合物のＩＣ₅₀データを得ることができる。

ブドウ糖低下に関するインビボアッセイ
式（Ｉ）の化合物を含むＤＰＰ−ＩＶインヒビターの血糖低下作用を、経口ブドウ糖負荷試験において４〜６週齢ＫＫ／Ｈ１Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ；Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）で示し得る。

経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）は、Ｐｉｎｃｕｓ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．，７８２（１９３４）によって記載されるようにヒトにおいて、少なくとも１９３０年代から使用されており、ヒト糖尿病を診断する際に日常的に使用されているが、患者における治療薬の効果を評価するためには使用されていない。

ＫＫマウスを使用して、以下を評価する：（ｉ）グリタゾン（Ｆｕｊｉｔａ ｅｔ ａｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，８０４（１９８３）；Ｆｕｊｉｗａｒａ ｅｔ ａｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，１５４９（１９８８）；およびＩｚｕｍｉ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ Ｄｕｒｇ．Ｄｉｓｐｏｓ．，２４７（１９９７））；（ｉｉ）メトホルミン（Ｒｅｄｄｉ，ｅｔ ａｌ．Ｄｉａｂｅｔ．Ｍｅｔａｂｌ．，４４（１９９３））；（ｉｉｉ）グルコシダーゼインヒビター（Ｈａｍａｄａ，ｅｔ ａｌ．Ｊａｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（１９８８）；およびＭａｔｓｕｏ，ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．，３１４Ｓ（１９９２））；および（ｉｖ）スルホニル尿素の膵臓外効果（Ｋａｍｅｄａ，ｅｔ ａｌ．Ａｒｚｅｎｉｍ．Ｆｏｒｓｃｈ．／Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．，３９０４４（１９８２）およびＭｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｈｏｒｍ．Ｍｅｔａｂｌ．Ｒｅｓ．，４６９（１９９０））。

ＫＫマウスは、Ｋｏｎｄｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｕｌｌ．Ｅｘｐ．Ａｎｉｍ．，１０７（１９５７））により初めて確立され記載された近交系に由来する。これらのマウスは、多遺伝子性糖尿病の遺伝性形態を自然に発症し、これは、進行して、ヒト糖尿病対象で見られるものと同様の腎臓、網膜および神経系の合併症を誘発するが、このマウスは、生存のためのインスリンまたは他の薬物を必要としない。

本発明の別の局面は、経口ブドウ糖負荷試験において、インスリン分泌促進薬の効果を評価するためのＫＫマウスの使用に関する。マウスを一晩（約１４〜約１８時間）絶食するが、水は自由に摂取させる。絶食後（時間「ｔ」＝０）、血液（２５μＬ）を、眼窩後方の洞から採取し、そして氷の上の０.０２５％ヘパリン処理生理食塩水（１００μＬ）に添加する。次いで、マウス（１群あたり１０匹）に、式（Ｉ）の化合物の０.５％のメチルセルロース溶液（０.２ｍＬ／マウス）を経口投薬する。２つの対照群には、０.５％のメチルセルロースのみを与える。ｔ＝１５分の時点で、マウスから上記のように採血し、次いで、蒸留水中の１ｍｇ／ｋｇグルコースを投薬する（０.２ｍＬ／マウス）。第１の対照群には、グルコースを投薬する。第２の対照群には、水を投薬する。ｔ＝４５分の時点で、マウスから上記のように再び採血する。血液サンプルを遠心分離し、血漿を回収し、Ｒｏｃｈｅ−Ｈｉｔａｃｈｉ ９１２グルコース分析器（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ．；Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）でグルコース含有量について分析する。データは、２つの対照群に対するグルコース可動域の阻害パーセント（％）として示し得る（すなわち、グルコースを受けたが、試験化合物を受けていない動物におけるグルコースレベルは、阻害０％を示し、そして水のみを受けた動物におけるグルコース濃度は、阻害１００％を示す）。

式（Ｉ）の化合物は、阻害活性をおおむね示し、＜１,０００ｎＭであるＤＰＰ−ＩＶに対するＩＣ₅₀として表される。おおむね好ましい化合物は＜１００ｎＭのＩＣ₅₀を有する。例えば、（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−（３−シアノピラジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）ピロリジン−２−イル）−（（３Ｒ^*，４Ｓ^*）−３，４−ジフルオロピロリジン−１−イル）−メタノンジヒドロクロリドは、３.５ｎＭのＩＣ₅₀を有する。

比較ラット薬物動態学的実験
ラット薬物動態学的実験を行って、国際出願ＷＯ ０２／１４２７１に一般に開示される構造的に類似した先行技術の化合物と比較して、本発明の化合物についての長期にわたって維持される血漿濃度の改善を実証した。特に、長期にわたる血漿濃度を、（ａ）（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−（ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）ピロリジン−２−イル）−メタノンのジヒドリクロリド塩（本明細書以下「ＣＰＤ １１３」）（実施例１１３に記載されるように製造した）および（ｂ）比較のための（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−（ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）ピロリジン−２−イル）（ピロリジン−１−イル）メタノンのジヒドロクロリド塩（本明細書以下「比較物（ｃｏｍｐａｒａｔｏｒ）」）（実施例１またはＷＯ０２／１４２７１に一般に記載される方法に従って製造し得る）を投与したラットについて測定した。

この実験において、頚静脈カニューラ（ＪＶＣ）を移植した雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２００〜２５０グラム）を、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手した。各化合物を２匹のラットに経口強制飼養によって投与した。経口用量は、１０ｍＬ／ｋｇの用量を含む０.５％メチルセルロース溶液として投与した。投与される各化合物の量は、５ｍｇ／体重ｋｇであった。血液サンプル（０.２５ｍＬ）を０〜２４時間の複数の時点で回収し、そしてリチウムヘパリン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ^(R)）を含むチューブに入れた。次いで、血液サンプルを１２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。血漿アリコートを化合物血漿濃度の決定のために取り出した（薬物動態分析）。血漿サンプルを分析するまで−７０℃に凍結した。

ラットの血漿サンプルをＬＣ／ＭＳ／ＭＳ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＡＰＩ ４０００質量分析計）によって化合物濃度について分析した。要するに、化合物標準曲線を１.０〜２０００ｎｇ／ｍＬのダイナミックレンジを用いて対照ラット血漿を作成した。標準およびサンプルの両方のアリコート（０.０２ｍＬ）を９６ウェルブロック中のＭａｒｓｈ^TMチューブに入れた。０.１μｇ／ｍＬの内部標準を含むアセトニトリル（０.１ｍＬ）の添加によってタンパク質を沈殿させた。９６ウェルブロックを渦混合し、次いで３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。得られた上清を除去し、そして新しい９６ウェルブロックに入れ、そして窒素ストリーム下、５０℃にて乾燥状態にした。残留物を移動層中で再構成した（６０％ ５ｍＭ 酢酸アンモニウムおよび４０％ アセトニトリル）。次いで、アリコート（０.０１ｍＬ）を分析のためにＬＣ／ＭＳ／ＭＳに注入した。

測定された平均血漿濃度を、以下の表に提供する。

それらのそれぞれの（ｄｅｓｐｅｃｔｉｖｅ）血漿濃度によって示されるように、ＣＰＤ１１３は比較化合物よりも有意に高い血漿濃度に達成し、そして維持した。

Claims (14)

1. 式（Ｉ）：
   

   

   〔Ｒ¹が、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、−（Ｃ_l−Ｃ₆）アリールアルキル、−ＮＲ^aＲ^b、ヒドロキシ、シアノ、アリールまたはヘテロアリールであり、ここで、該−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル、該アリールまたは該ヘテロアリールは、場合によって、１〜３個の以下：−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^aＲ^b、シアノ、ハロゲン、ニトロ、トリフルオロメチル、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、−（Ｃ₃−Ｃ₆）シクロアルキルまたはフェニルで独立して置換され、ここで：
   Ｒ^aおよびＲ^bが独立して、水素、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル、アリールまたはヘテロアリールであるか、または
   Ｒ^aおよびＲ^bが、それらが結合する窒素原子と一緒になって、４〜６員の複素環式環を形成し、ここで該環は、場合によって、さらに１〜２個の窒素、酸素または硫黄環ヘテロ原子を組み込み；
   Ｒ²およびＲ³が、独立して、水素、ハロゲン、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルまたは−（Ｃ₃−Ｃ₈）シクロアルキルであり；
   Ｑが、共有結合、−Ｃ（Ｏ）−または−ＳＯ₂−であり；
   ＨＥＴが、場合によって（Ａ）１〜６個のハロゲン原子、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシもしくは−ＮＲ^aＲ^bで場合によって置換されている１〜４個の−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルまたは（Ｂ）１〜６個のハロゲン原子、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシもしくは−ＮＲ^aＲ^bで場合によって置換されている−（Ｃ₁−Ｃ₆）アリールアルキルで置換されている、ヘテロシクロアルキル環部分であり；
   ｎが０または１であり；
   ｎが０である場合、Ｘが−ＣＨ₂−であり、かつＹが−ＣＨ₂−、−ＣＨＦ−または−ＣＦ₂−であるか；
   またはｎが１である場合、Ｘが−ＣＨ₂−、−ＣＨＦ−または−ＣＦ₂−であり；かつＹが−ＣＨ₂−、−ＣＨＦ−または−ＣＦ₂−であるが、但しＸおよびＹの両方が−ＣＨ₂−でなく；そして
   Ｚが水素またはシアノである〕
   の化合物もしくはそれらのプロドラッグ、または該化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または該化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物。
2. Ｒ¹が、１〜３個のシアノ、ハロゲン、ニトロ、トリフルオロメチル、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル、−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、−（Ｃ₃−Ｃ₆）シクロアルキルまたはフェニルで場合によって独立して置換されている、アリールまたはヘテロアリールであり；
   Ｒ²が−Ｈまたは−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルであり；
   Ｒ³が−Ｈまたは−（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルであり；そして
   ＨＥＴが、アゼチジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、５，６−ジヒドロ−８Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−７−イル、５，６−ジヒドロ−８Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７−イルまたは７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［４，３−ａ］ピリミジン−６−イルである、
   請求項１に記載の化合物。
3. Ｒ¹が、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾロピリジル、ピラジニル、ピリジニル、ピリミジニル、キノリニル、キノキサリニル、チアジアゾリル、トリアジニルまたは１，１−ジオキソ−１Ｈ−１，２−ベンゾイソチアゾリルであり；
   Ｒ²およびＲ³が−Ｈであり；
   Ｑが共有結合であり；そして
   ＨＥＴがピペラジニルである、
   請求項１に記載の化合物。
4. Ｒ¹がピリジニルまたはピリミジニルである、請求項３に記載の化合物。
5. ｎが１であり、Ｘが−ＣＦ₂−であり、かつＹが−ＣＨ₂−である、請求項４に記載の化合物。
6. 以下：
   （（２Ｓ，４Ｓ）−４−（３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル）ピロリジン−２−イル）−（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−メタノン、
   （３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−（オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）ピロリジン−２−イル）−メタノン、
   （３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−（４−メチルピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）ピロリジン−２−イル）−メタノン、
   （（２Ｓ，４Ｓ）−４−（２−（トリフルオロメチル）−７，８−ジヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−６（５Ｈ）−イル）ピロリジン−２−イル）−（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−メタノン、
   （（Ｓ）−３−フルオロ−ピロリジン−１−イル）−｛（２Ｓ，４Ｓ）−４−［４−（３−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−ピロリジン−２−イル｝−メタノン、
   （（Ｓ）−３−フルオロ−ピロリジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（２−トリフルオロメチル−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ピロリジン−２−イル］−メタノン、
   （３，３−ジフルオロ−ピロリジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−オキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−２−イル−ピペラジン−１−イル）−ピロリジン−２−イル］−メタノン、
   ［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（２−シクロプロピル−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［４，３ｄ］ピリミジン−６−イル）−ピロリジン−２−イル］−（３−フルオロ−アゼチジン−１−イル）−メタノン、
   （３，３−ジフルオロ−ピロリジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（２−エトキシ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ピロリジン−２−イル］−メタノン、
   ２−｛４−［（３Ｓ，５Ｓ）−５−（３−フルオロ−アゼチジン−１−カルボニル）−ピロリジン−３−イル］−ピペラジン−１−イル｝−ニコチノニトリル、
   （（Ｓ）−３−フルオロ−ピロリジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル−ピペラジン−１−イル）−ピロリジン−２−イル］−メタノン、
   （３−フルオロ−アゼチジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（２−トリフルオロメチル−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）ピロリジン−２−イル］−メタノン、
   ２−（４−［（３Ｓ，５Ｓ）−５−（（Ｓ）−３−フルオロ−ピロリジン−１−カルボニル）−ピロリジン−３−イル］−ピペラジン−１−イル）−ニコチノニトリル、
   （３−フルオロ−アゼチジン−１−イル）−｛（２Ｓ，４Ｓ）−４−［４−（２−トリフルオロメチル−キノリン−４−イル）−ピペラジン−１−イル］−ピロリジン−２−イル｝−メタノン、
   （（３Ｒ^*，４Ｓ^*）−３，４−ジフルオロ−ピロリジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（２−トリフルオロメチル−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ピロリジン−２−イル］−メタノンおよび
   （（３Ｒ^*，４Ｓ^*）−３，４−ジフルオロ−ピロリジン−１−イル）−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル−ピペラジン−１−イル）−ピロリジン−２−イル］−メタノン；
   からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物もしくはそれらのプロドラッグ、または該化合物もしくは該プロドラッグの薬学的に受容可能な塩。
7. （３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−（ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）ピロリジン−２−イル）メタノン、それらのプロドラッグ、またはそれらの薬学的に受容可能な塩、または該プロドラッグの薬学的に受容可能な塩。
8. 治療に使用するための、請求項１〜５または７に記載の化合物もしくはそれらのプロドラッグ、該化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または該化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物。
9. （ａ）請求項１〜５または７に記載の化合物もしくはそれらのプロドラッグ、該化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または該化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物；および
   （ｂ）薬学的に受容可能な担体、ビヒクル、希釈剤または賦形剤
   を含有する、医薬組成物。
10. 哺乳動物におけるジペプチジルペプチダーゼＩＶの阻害方法であって、このような治療が必要な該哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜５または７に記載の化合物もしくはそれらのプロドラッグ、該化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または該化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物を投与することを包含する、上記方法。
11. 哺乳動物におけるジペプチジルペプチダーゼＩＶによって媒介される症状の治療方法であって、このような治療が必要な該哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜５または７に記載の化合物もしくはそれらのプロドラッグ、該化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または該化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物を投与することを包含する、上記方法。
12. 治療する症状が、２型糖尿病、１型糖尿病、耐糖能異常、高血糖症、代謝症候群（Ｘ症候群および／またはインスリン抵抗症候群）、糖尿、代謝性アシドーシス、関節炎、白内障、糖尿病性神経障害、糖尿病性ネフロパシー、糖尿病性網膜症、糖尿病性心筋症、肥満症、肥満症によって悪化する症状、高血圧症、高脂質血症、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症、骨減少症、脆弱化、骨損失、骨折、急性冠症候群、成長ホルモン欠損症に起因する小人症、多嚢胞性卵巣症候群に起因する不妊症、不安、うつ病、不眠症、慢性疲労、てんかん、摂食障害、慢性疼痛、アルコール依存症、腸運動に関連する疾患、潰瘍、過敏性腸症候群、炎症性腸症候群；短小腸症候群；および２型糖尿病における疾患の進行の防止である、請求項１１に記載の方法。
13. 治療する症状が２型糖尿病である、請求項１２に記載の方法。
14. 糖尿病を治療する方法であって、このような治療が必要な哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜５または７に記載の化合物もしくはそれらのプロドラッグ、該化合物もしくはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、または該化合物、プロドラッグもしくは塩の溶媒和物を投与することを包含する、上記方法。