JP2007536233A - ポリカチオン抗菌薬による治療 - Google Patents
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Abstract
Description
Wright, et al., Wounds 2003, 15, 133-42 及び本明細書において引用された文献には、包帯の抗菌薬として使用するために、ナノ結晶性銀及びPHMBの使用が記載されている。米国特許第6,180,584号;第6,030,632号;第6,284,936号;第6,126,931号;第5,869,073号;第5,681,468号及び第5,490,938号、並びに類似した外国出願及び特許;WO 01/17357;WO 00/15036;WO 99/40791;WO 98/18330及びWO 95/17152には、特に塗料としてポリビグアナイド及び金属抗菌薬の使用が記載されている。Charmer and Gilbert, J Appl Bacteriol 1989, 66, 253-8 にはプロビデンシア スチュアルティイに対するバントシルの使用が記載されている。Chantler, et al., Symp Soc Exp Biol 1989, 43, 325-6 には、殺精子剤としてバントシルが報告されている。Broxton, et al., J Appl Bacteriol 1984, 57, 115-24 には、大腸菌の膜に対する活性としてバントシル及びPHMBが報告されている。Pluss, Helv Odontol Acta 1975, 19, 61-4 には、バントシルがプラークを抑制し、歯を染色することが報告されている。Larkin, et al., Ophthalmology 1992, 99, 185-91 には、患者がアカントアメーバの角膜炎を有している場合に、PHMBの使用が報告されている。また、Messick, et al., J Antimicrob Chemother 1999, 44, 297-8 を参照されたい。J. Clin. Periodontology 29, 392-9 には、0.12%の溶液が口内洗浄剤として報告されている。ラバセプト(登録商標)は、ビグアナイド及びポリエチレングリコールの組み合わせであり、消毒薬として手術に有用であると報告されている(Willeneger, Roth and Ochsner, 2003, Fresenius AG., D-61350 Bad Homburg)。
A. コスモシルCQ(Zeneca, Biocides, Wilmington, Del.)20g、ヨウ化銀(AgI)4g、ヨウ化カリウム(KI)2g及びN,N-ジメチルホルムアミド(DMF)80mlをフラスコ中で同時に15分間混合した。得られた溶液(淡黄色)の容量をDMFで100mlに調整した。結果として得られた溶液は、10%(w/v)の固体を含んだ。適用に先立って、原液をDMF及びエタノールの1:1(v/v)混合液で、10倍に希釈し、1%(w/v)の最終固体含有率にした。
0.027g 硝酸銀
0.057g ヨウ化カリウム
1.786g 30% PVP溶液
0.5g グリセリン
5g エタノール
20%PHMB水溶液5g、ヨウ化カリウム0.057g、硝酸銀0.027g、30%のPVP K30水溶液(BASF.)1.786g、グリセリン0.50g及びエタノール5gを組み合わせて、反応させた。得られた溶液は、無色透明で水と同等の粘度を有した。成分の重量百分率における重量比は、下記の通りである。PHMB, 1.00;エタノール, 5.00;PVP K30, 0.536;ヨウ化銀, 0.057;硝酸カリウム, 0.027;水, 92.88。pHは7.0に調整され、約280のオスモル濃度を有した。
適切な混合容器中に、表1に詳細に示すPVP溶液7.3グラムを加える。この溶液に、添付の表に詳細に示した硝酸銀溶液を加えて、その混合物を5分間攪拌する。混合物を計算された量の無水エタノールで希釈し、別に5分間攪拌した。この混合物に対し、ヨウ化カリウム溶液を緩徐に添加した後、完成した混合物を別に15分間攪拌した。この時点では残ったままの沈殿物は存在しないはずである。沈殿物が残存する場合、全ての沈殿物が溶解するまで混合を続ける。次に、分画したPHMBをこの溶液に添加し、その後に30分間攪拌し、あらゆる沈殿した物質を溶解する。溶液は1ミクロンフィルターを通して濾過され、使える状態にある。
KI溶液 30%w/w水溶液
硝酸銀溶液 30%w/w水溶液
ポリビニルピロリドン(PVP)溶液(MW 30kDa) 30%w/w水溶液
PHMBポリマーの限外濾過による分画は、必要とされるフィルタ区域用に適切な大きさにしたホルダー、回転ローブポンプもしくは蠕動ポンプ又は必要とされる流量及び圧力を送達することが可能なあらゆる他のポンプ、並びに流量を制御するための適切な圧力計及びバルブを用いることにより達成される。システムは、ステンレス鋼取付け部品及び管又はサイラスティックチューブと共に接続される。例えば、5kの分子量カットオフを有するザルトリウス社製ハイドロサルト(Hydrosart)膜を用いることができる。ハイドロサルトは、親水性で広いpH範囲で安定な安定化セルロース膜である。
A.目的
この実験の目的は、非粘性水溶液及びゲルとしてのネオシル(登録商標)の予防的抗菌効果を試験することであった。
水溶液の説明
PHMB 1.000%
エタノール 5.000%
PVP K30 0.536%
ヨウ化カリウム 0.057%
硝酸銀 0.027%
グリセリン 0.500%
水 92.880%
合計 100.000%
pH 7.00
オスモル濃度 280.00
ゲルの種類
PHMB 1.000%
エタノール 5.000%
PVP K30 0.536%
ヨウ化カリウム 0.057%
硝酸銀 0.027%
グリセリン 2.531%
K4M 2.024%
水 88.826%
合計 100.000%
pH 7
オスモル濃度 280
試験施設の標準的な作業手順に従い、ブタを落ち着かせて麻酔をかけた。次に、ブタは気管内に挿管され、大気中にイソフルラン0.5〜2.5%の状態の手術が可能な段階の麻酔下で維持された。背中と腹の毛を切り取り、皮膚をアルコールで消毒した。ベタジン(登録商標)製品を使用しなかった。
標準化した部分層火傷を、アルミニウムシリンダーを用いて確実に1度の火傷を生じる適用強度と持続時間、即ち70℃、9秒間で、約1インチの円の中に作った。(Singer et al. Standardized burn model using a multiparametric histologic analysis of burn depth, Acad Emerg Med. 2000 Jan;7(1):1-6.)
A.物質及び方法
マウス
5週間の雌のCD-1マウスをチャールスリバーラボラトリーから購入した。マウスを五匹の群で籠に置かれた。マウスの免疫反応を抑制し、粘膜感染の形成を可能にするため、5-FUを、2日目に始めて7日毎に1度静脈内に与えた。抗生物質をオートクレーブボトル内の飲用水に与えて、混乱の可能性のある細菌の二次感染を低減した。0.2mg/mlのジェンタマイシン、1mg/mlのクリンダマイシン、1mg/mlのバンコマイシンを無菌飲用水に添加した。ボトルと飲用水を毎日変えた。イミペネムを5mg/マウスで与える(IP,QD)。抗生物質は3日目に始めた。
C. アルビカンス#5を-80℃の貯蔵庫から移し、クロラムフェニコール添加サブローデキストロース寒天培地プレート上に分離のため線状に塗った。該プレートを35℃で48時間培養した。生物体をそれぞれが100mlのSAAMFブロスを含有する無菌ボトルで培養し、旋回シェーカー上35℃で48時間培養した。C. アルビカンスを、ブロス培養液を無菌の50ml遠心分離管に移し、2000RPMで15分間遠心分離することにより収集した。細胞を生理食塩水で一度洗浄した後、生理食塩水中に懸濁させた。細胞の数を血球計を用いて計算した。接種材料の希釈液は滅菌水で作られた。最終の接種材料は、2×108細胞/mlの抗生物質を加えた飲用滅菌水であった。クロラムフェニコール添加SDAプレート上に連続の希釈液を蒔くことにより決定された接種材料の生存率は、1ml当たり1.85×108細胞であった。プレートは、接種材料の数を検証するため、35℃で一晩培養された。
接種材料の調製の前の朝、飲用ボトルは、C. アルビカンスの接種材料懸濁液との交換の8時間前に取り外された。マウスは、この懸濁液から24時間飲むことができ、その後、接種材料の懸濁液を取り外し、抗生物質を含有する飲用水と交換した(0日目)。
PHMB 3.000%
PVP K30 1.607%
ヨウ化カリウム 0.171%
硝酸銀 0.080%
EtOH 30.000%
グリシン 5.000%
水 60.141%
合計 100.000%
pH 7
オスモル濃度 280
口腔の粘膜カンジダ症のマウスモデルは、免疫反応を抑制されたマウスで証明された。比較治療レジメンにおける生存及びマウスから回収されたCFUの結果をそれぞれ図7A及びBに示す。そのモデルは、抗真菌治療を与えない群(未治療対照)について予期された通り実施された。動物は、試験の間で死んだものはなく、舌から回収されたCFUの中央値は前のデータに相当する約log104.5であった。陽性の対照群、PEG400中に1%クロトリマゾールは、一匹を死亡させた。この群は、CFUにおいて未治療対照(P=0.014)と比較すれば約30倍の減少を示した。PEG400対照群は、60%を死亡させて、CFUの見かけの変化は無かった。また、サーファシン D希釈液群と3%サーファシン D治療群も、死を発生させた。サーファシン希釈液群では、マウスの80%が死んで、一方、サーファシン D群では40%が死んだ。サーファシン希釈液群の最初の死が感染の13日目に発生したのに対し、3%サーファチン D群の最初の死が感染後7日目で発生したことに注意すべきである。それぞれの群における多数の死が、CFUの比較を困難にさせるが、図7Bに示す通り、サーファシン D治療のCFU幅が、未治療の動物の幅を包囲した。クロトリマゾールが治療に最も効果的であり、また、いずれの群の動物も粘膜表面上に検出可能なC. アルビカンスを含まないことが検出されなかった。
A.目的
この研究の目的は、犬の口臭に関する試験液の効果を評価することであった。二つの試験群は、実験用リンス及びプラセボリンスからなる。
リサーチコンプライアンスは、保存要求、有効期限及びあらゆる他の適用される要求に責任があった。この研究を達成するために、約450mlの各試験リンスが必要とされた。
このプログラムは、口臭を軽減することにより犬の口腔内の健康を改善する可能性を有し得るレジメンを評価するために設計された。適した生体外でのモデルが、この種類の研究には存在しない。従って、犬を適切なモデルとした。この研究は、縦断的研究設計を用いるスクリーニング研究として設計された。使用した動物の数は、OHRIコロニーの現在の個体群に限定された(雄雌混合された24匹の犬)。
プロトコルが、研究の開始に先立って所内動物実験委員会により視察され承認された。
実験手順は、GLPガイドラインを用いて行われた。犬には、毎日、栄養的に完全な市販の乾燥ドッグフードが与えられた。試験液を、毎日、午前半ばに投与した。
1.動物の種類
雄雌混合した大人のビーグル犬。犬の年齢は、3歳から11歳に及んだ。
全部で24匹の犬であった。
動物の本来の出所が、USDAの規定に従い得られた。全ての犬は、OHRIコロニーとして維持された。
全ての犬は、耳の入墨としてその動物特有の識別番号を与えられた。また、その数字は、犬の籠に取り付けられたタグにも付けられた。
全ての犬は、AAALAC公認の設備における個別の籠に収容された。室温は、72°F(±6°F)に維持され、1時間当たり10〜15回空気を交換し、12時間の光サイクルであった。
全ての動物の管理手順は、試験設備の標準的な作業手順に従い提供された。動物の健康は、日常CBC検査及び化学特性で保証された。動物の受け取りの際にこれらを得られ、その後は年に一度であった。動物は、毎日職員によって観察され、毎週健康問題のあらゆる徴候について付き添いの獣医によって観察された。
1.層別化
動物は、12匹の犬の2群へのブロックデザインにより均等に階層化された。動物は、実験段階の研究開始に先立ってベースラインの口臭スコアに基づいてバランスされた。
動物は、毎日ほぼ同時にえさを与えられた。与えられた食事の量は、個々の動物に基づいて計算された(18g/kg)。この量は、必要に応じて安定した体重を維持するために調整された。あらゆる残った食料を、翌日の摂食に先立って重さを量り、記録した。
犬には、自由に水道水を与えた。淡水を一日に二度与えた。水を、試験リンスの投与の後、約1.5時間与えなかった。
研究開始の一日前と研究終了時に犬の重さを量った。
試験リンスは、スポンサーによって供給された2コード化の製品であった。この試験的な研究を行うため、450mlの各リンスが必要とされた。スポンサーは、組成物、純度、強さ、安定性、保存要求、有効期限及びあらゆる他の適用される要求に責任があった。
ベースラインの層別化に続いて、治療段階を開始した。試験リンスを、毎日ほぼ同じ時間に(22〜23時間の間隔で)3日間継続して投与した。各治療群は、その治療のためにのみ名付けられたコード化ビーカーを有した。各試験群は、コード化された試験群に対応するように、動物の籠に付け、色分けされたタグを有した。全ての飲用水は、治療に先立って動物の籠から取り外され、治療後少なくとも90分間戻されなかった。試験液を、割り当てられた治療群において、全ての上顎と下顎の歯に塗布した。10cc注射器を用いて該液を塗布した。具体的には、各四分円に2.5ccを塗布した。(適切な群の中で)試験リンスを、歯を越えて各片顎(hemijaw)に均一に分散し、評価して、下顎部位に溜めることができる。動物が過剰な量の該液を嚥下することを防ぐため、特別注意をとった。
a.処置
口臭を、計測器(Appendix A)の使用のみならず人間の知覚(Appendix B)によって評価した。三つの口臭を読取った。揮発性硫黄計測器(ハリメーター、インタースキャン コーポレイション(登録商標))を利用して読取った。口臭(ppb-VSC)を下記の時間に評価した。
・1日目 ベースライン読み
・3日目 試験リンス投与後90分
試験リンス投与後8時間
・4日目 試験リンス投与後23時間
人間の嗅覚評価
ハリメーター
c.口臭評価法
口臭(ハリメーター) Appendix A
人間の嗅覚評価 Appendix B
長期的な研究設計を用いた。この期間は、3日の治療試験段階に加えて試験後23時間の評価からなっていた。各試験期間の全体の所要時間は4日間であった。研究の終了後に、犬をバイオリサーチファシリティコロニーに戻した。
SAS統計パッケージによって、データを、ベースラインのスコアと治療群について効果を含むANOVAモデルを用いて分析した。計算・分析されたデータの特定のタイプは、Jであった。
嗅覚&VSCppb(平均値±標準誤差)
ベースライン
3番目の治療後1.5時間
3番目の治療後8時間
3番目の治療後23時間
体重
開始重量
最終重量
重量変化
開始重量、体重増加及びベースラインの口臭の差について二つの群間での比較を、二標本t検定を利用して行った。一つの群内での体重変化についての試験の比較を、対応のあるt検定を利用して行った。口臭ハリメーター測定の変化の差について群間での比較を、共分散分析を利用して行った。モデルには、共変量としてベースラインの口臭、時間、群、及び時間と群の相互作用が含まれる。無作為の犬の効果には、一匹の犬の多重測定と相互関係を示すことが挙げられた。シダック法が、一対の試験の全体の有意水準を制御するために利用された:調整されたp値=1−[1−未調整のp値]#試験。また、ベースラインからの変化の重要性について郡内での比較を、共分散分析の中で試験した。順序分類応答用のマンテル−ヘンツェルのカイ二乗検定を、ベースラインの口臭の人間嗅覚評価の差について群を比較するために利用した。また、マンテル−ヘンツェル検定を、嗅覚評価の変化の差について群を比較するためにも利用した。一つの群内での嗅覚評価の変化についての試験の比較を、ウィルコクソンの符号順位検定を利用して行った。
全ての記録(プロトコル、修正、層別化、データシート及び最終報告)を、OHRIラボラトリーアーカイブの一環として本研究用に指定された本に保存した。
本研究で観察された結果について、下記に示すそれぞれの表を用いて議論する。述べたとおり、群Bの動物を治療するのに用いた試験液は、プラセボ液で治療した群Aの動物と比較した硫黄含有化合物の計器による測定と人間の嗅覚試験による評価によれば、口臭を著しく軽減した。口臭の軽減の大きさは、治療後8時間で最大であった。
両群の犬は、研究の間体重を減らした(群Aについてはp=0.0379;群Bについてはp=0.0331)。しかしながら、開始重量(p=0.59)又は重量変化(p=0.87)について群間で差がなかった。また、群は、著しく異なるベースラインの口臭のハリメーター測定(p=0.98)又はベースラインの口臭の人間嗅覚評価(p=0.80)を有していなかった。
採点方法
ハリメーターを用いて揮発性硫黄化合物(VSC)を測定する。該メーターは、使用に先立って少なくとも20分間作動させる。試料採取管を、口腔内上顎P4に沿って置く。頬の粘膜を試料採取管の末端から離して、動物の口を閉じる。安定化期間(10〜15秒)後の最高読みを記録する。右、左及び舌の先の区域をサンプリングする。
動物のスコアは、読取りの平均値である。
採点方法
0- 感知できない口臭
1- 弱い−開いた唇から6”を検出できない臭い
2- 中程度−口の近くで強く、犬の口から6〜12”が検出可能である臭い
3- 激しい−口の近くで激しく、犬の口から>12”が検出可能である臭い
動物の唇(右又は左側)を引っ込める。次に、試験者は、最も遠い測定点>12”から始める犬の息を嗅ぐ。各動物のスコアを記録する。
Claims (19)
- 細胞微生物の増殖を抑制するための該細胞微生物による感染の影響を受け易い粘膜又は開放創の組織の治療方法であって、
前記組織に、かかる細胞微生物を抑制するのに有効な量で、かかる抑制に有効な組成物を塗布することを備え、
前記組成物が、有効成分として錯体の0〜20重量%の抗菌金属物質と錯体を作る抗菌ポリカチオンポリマーを含む治療方法。 - 前記ポリカチオンポリマーが、少なくとも4つのビグアナイド単位を有するポリビグアナイドである請求項1に記載の方法。
- 前記ポリカチオンポリマーが、前記ポリカチオンポリマーの親水性を低減するアニオンを含む請求項2に記載の方法。
- 前記組織が、粘膜組織又は皮膚組織である請求項1に記載の方法。
- 塗布は、分散液、スプレー、クリーム、ローション、フォーム、軟膏又はゲルの使用を含む請求項1に記載の方法。
- 細胞微生物の増殖を抑制するための該細胞微生物による感染の影響を受け易い粘膜又は開放創の組織の治療方法であって、
前記組織に、かかる細胞微生物を抑制するのに有効な量で、かかる抑制に有効な組成物を塗布することを備え、
前記組成物が、有効成分として錯体の少なくとも1重量%の抗菌水不溶性の銀又は銀塩と錯体を作る抗菌ポリビグアナイドポリマーを含む治療方法。 - 前記銀が銀ナノ粒子である請求項6に記載の方法。
- 前記銀塩がヨウ化銀又は臭化銀である請求項6に記載の方法。
- 前記ポリビグアナイドポリマーが少なくとも4つのビグアナイド基を有する請求項8に記載の方法。
- 前記組織が開放創である請求項6に記載の方法。
- 治療は、ざ瘡、膿痂疹、火傷、真菌感染症又は皮膚糸状菌用である請求項6に記載の方法。
- 治療は、膣感染症用である請求項6に記載の方法。
- 前記方法は、局所治療を用いる請求項6に記載の方法。
- 細胞微生物の増殖を抑制するための該細胞微生物による感染の影響を受け易い粘膜又は開放創の組織の治療方法であって、
前記組織に、かかる細胞微生物を抑制するのに有効な量で、かかる抑制に有効な組成物を塗布することを備え、
前記組成物が、有効成分として錯体の少なくとも1重量%の抗菌水不溶性のヨウ化銀と錯体を作る少なくとも4つのビグアナイド基を有する抗菌ポリビグアナイドポリマーを含む治療方法。 - 前記開放創の組織が火傷である請求項14に記載の方法。
- 前記開放創の組織が角質層の除去から生じる請求項14に記載の方法。
- 前記粘膜の組織が口腔内にある請求項14に記載の方法。
- 塗布は、水性分散液としてである請求項14に記載の方法。
- 1.5kamu〜20kamuの範囲の分子量を有し、0〜20%の銀又はその塩を有する少なくとも90重量%のポリビグアナイドを含む医薬品組成物。
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