JP2007508834A - ビタミンe誘導体を投与する動物の飼育方法及び製剤 - Google Patents
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Abstract
Description
(monogastric animal)及び更に魚類及びエビにビタミンEを投与する方法に関する。
(Tolと略記される)として得られる。本来の状態では、ビタミンEは任意の疎水性相又は脂質相と任意の割合で混和する油状の親油性液体である。ビタミンEは極めて不安定であり、容易に酸化され、酸化された状態ではその生物学的活性の大部分を失う。動物におけるその生体利用性(bioavailability)は、経口的に投与した場合、50%を越えない;その理由は、ビタミンEは急速に酸化されるため、その大部分が酸化された、不活性な形で吸収されるからである。従って、経口的に投与する場合、ビタミンEは、一般的には、ビタミンEのエステル、例えば酢酸エステル及び塩から選ばれた、より安定な誘導体の形である。
equivalent)で表される濃度に関連して、血液中に放出されるビタミンEの濃度によって表される。従って、このビタミンEの生体利用性の表現では、消化の進行中の腸管内のビタミンE又はビタミンE誘導体の吸収が考慮されている。
Tacはヒト又は動物において、直接、同化されず(assimilate)、実際には、コレステロールエステルヒドロラーゼ(CEHと略記される)と呼ばれる膵臓酵素の作用によって胃腸管内でビタミンEに加水分解され、このビタミンEは腸管を経て最終的に吸収されることが知られている。しかしながら、Tacは、問題の動物が何であれ、極めて限られた、例えば、最良でも40%の生体利用性しか有していない。
(SMS)、モノオレエート(SMO)及びトリステアレートから選ばれる。モノオレエートが好ましい。
に加水分解することができるものである。
適当な細胞モデルについての生体外での評価を実施することにより、ビタミンE当量で表した、細胞によって固定されたTacの量の測定を下記の方法、即ち、一方では、Tacだけの存在下で、他方では、Tacと本発明に従った消化性乳化剤の1種又はそれ以上との存在下で対応する細胞培養物(cell culture)をインキュベートすることにより行った。
(ATCC)からHTB-37の参照番号で入手又はアクセスされる親細胞系である。
Tacの量を、一方では、前記培養物中に乳化剤を導入することなしに測定し、他方では、
0.05%(m/v)の量の乳化剤SM0(ソルビタン モノオレエ−ト)の存在下で測定した;このパーセンテージは培養物中に導入された乳化剤の質量を、同一の培養物中に導入されたミセルの容量で割ることによって得られる。
Tacの量と、nmol/cm2で表されるインキュベートTacの量との比較を示している;空白カラムはSMOなしに導入されたミセルに関するものであり、ハッチカラムは0.05%のSMOと共に導入されたミセルに関するものである。対応するビタミンE当量で表される量により、最終評価において、乳化剤SMOを使用した場合に6倍大きい細胞によるTacの固定の程度が、観察した時点まで、インキュベートされるTacの量に比例して増大することが判る。
2.1) 実験プロトコール:
吸収評価試験は、前記と同様の細胞系を使用して、この細胞を腸管媒体に類似するかつコレステロールエステルヒドロラーゼ(CEH)、動物内でTacをビタミンEに加水分解する膵臓酵素及び胆汁酸塩に相当するタウロコール酸ナトリウムを含有する生理的媒体中で3時間インキュベートすることにより行った。この媒体は、水中油型エマルジョンの形で、即ち、ミセルの形で入手され、商業的にM20の商品番号で識別される。Tac及び、適当な場合には、試験される乳化剤をこの媒体中に導入した。各々のウエル中にTacの形で導入された、ビタミンE当量で表される濃度は156μMである。
この評価試験によれば、M20媒体中に導入された乳化剤の濃度は、M20の容量当たりの乳化剤の質量で表して、0.05%である;この比は、M20のTacに対する添加された乳化剤の重量比の6に概略、相当する。
1) M20、単独、ウエル1個当たり、M20 2mMの割合;従って、Tacは単独であり、乳化剤を使用していない;
2) M20 + SML(ソルビタン モノラウレート)乳化剤;
3) M20 + SMP(ソルビタンン モノパルミテート)乳化剤;
4) M20 + ESML(ポリオキシエチル化ソルビタン モノラウレート)乳化剤;
5) M20 +156μMのTac及び156μMの d、l-α-トコフェロールの混合物;
6) 分析を確証するための、Rac(レチニルアセテート)と称する内部対照。
nmolで表して、図2に示すグラフは、下記のものを示す:
−Racの量;黒色カラムに示されている;
−細胞によって固定されたTacの量;ハッチカラムに示されている;及び
−加水分解によって得られついで固定されたビタミンEの量;空白カラムに示されてい る。
この評価試験によれば、M20媒体中に導入される乳化剤の濃度は、M20の容量と比較した乳化剤の質量として表して0.01%である;この比は、M20のTacに対する添加された乳化剤の重量比の1に概略、相当する。
1) M20、単独、ウエル1個当たり、M20 2mMの割合;従って、これは、タウロコール酸及びTac単独を表す;
2) M20 + SML(ソルビタン モノラウレート)乳化剤;
3) M20 + SMP(ソルビタンン モノパルミテート)乳化剤;
4) M20 + SML乳化剤及びSMP乳化剤;
5) M20 + SMO(ソルビタン モノオレエート)乳化剤;
6) 分析を確証するため内部対照、即ち、Rac。
nmolで表して、図3に示すグラフは、下記のものを示す:
−Racの量;黒色カラムに示されている;
−細胞によって固定されたTacの量;ハッチカラムに示されている;及び
−加水分解によって得られついで固定されたビタミンEの量;空白カラムに示されてい る。
3.1) 実験プトトコール
一般的な実験条件は、ウェルの面積とM20媒体中に導入されたTacの濃度が異なること以外、実施例2、2.1)に記載したプロトコールと同一である。ウェルの面積は6.5cm2であり、Tacの濃度は23.7μM/cm2である。
4種の試験を行った;各々の試験を3回反復し、37℃で1時間、インキュベーションを行うことからなるプロトコ−ルを使用して、下記のごとく行った:
1) M20単独、2mMの割合;従って、Tac単独であり、乳化剤は使用していない;
2) M20 + SML(ソルビタン モノラウレート)乳化剤;
3) M20 + SMP(ソルビタンン モノパルミテート)乳化剤;
4) M20 + ESML(エトキシル化ソルビタン モノラウレート)。
4種の試験を行った;各々の試験を3回反復し、37℃で1時間、インキュベーションを行うことからなるプロトコ−ルを使用して、下記のごとく行った:
1) M20、単独、;従って、Tac、単独であり、乳化剤は使用していない;
2) M20 + SML(ソルビタン モノラウレート)乳化剤;
3) M20 + SMP(ソルビタンン モノパルミテート)乳化剤;
4) M20 + MOES(エトキシル化ソルビタン モノラウレート)。
この実施例においては、シリカに結合したTacの開放に対する、本発明に従った乳化剤、即ち、SMO(ソルビタンモノオレエート)の影響を試験した。この目的のために、乳化剤を使用しない試験については、重量比で1:1のTacとシリカ支持体及び重量比で50:5:45のTac+乳化剤(SMO)+シリカを使用した。
5.1) SMOの影響
この実施例では、TacのTolへの加水分解に対する、本発明に従った乳化剤、即ち、SMO
(ソルビタンモノオレエート)の影響を試験した。この目的のために、乳化剤を使用しない試験についてはTacを使用し、また、10:1の重量比のTac+SMOを使用した。
この実施例では、TacのTolへの加水分解に対する、本発明に従った乳化剤、即ち、SMO
(ソルビタンモノオレエート)の影響を試験した。この目的のために、乳化剤を使用しない試験についてはTacを使用し、また、10:1の重量比のTac+SMOを使用した。
2) Tac+SMO;10mMの胆汁酸塩を使用;
3) Tac;乳化剤を使用せず;20mMの胆汁酸塩を使用;
4) Tac+SMO;20mMの胆汁酸塩を使用;
5) Tac;乳化剤を使用せず;50mMの胆汁酸塩を使用;
6) Tac+SMO;50mMの胆汁酸塩を使用。
への加水分解の影響の両者を測定することにより得られた、TacからのビタミンEの生体利用性に対する、本発明に従った乳化剤の影響;
この実施例では、本発明に従った乳化剤、即ち、SMO(ソルビタンモノオレエート)の影響を検討した。この目的のために、乳化剤を使用しない試験では、重量比で1:1のシリカ支持体上のTacを使用し、また、重量比で50:5:45の、Tac+乳化剤(SMO)及びシリカを使用した。
インキュベーション前及び前記条件下でインキュベーションを行ってから1時間及び3時間後、溶液中のビタミンEの放出の濃度を測定し、Tacの当初の量と比較した。
盲腸切除した(caecectomized)オンドリについて2系列の試験を行った。第一の系列では32羽のオンドリを使用し、第二の系列では51羽のオンドリを使用した。オンドリに
Tac(ビタミンEアセテート)、又は、本発明に従った消化性乳化剤の1種又は2種と種々の割合で組合せたTacを配合した食餌を“乾燥摂食”(“dry gavage“)により投与した。
8.1)
試験を行った条件は下記の通りである:
細胞モデル:CaCo 2 細胞
ウェルの面積:6.5cm2:
Tacの量:67nmol/cm2:
使用した溶液:Mathias等によるM40ミセル(Mathias,P.M.,Harries,J.T.,Muller,
D.P.R.(1981):Optimization and validation of assays to estimate pancreatic
ester activity using well-characterized micellar solutions of cholesteryl oleateand tocooheryl asetate.Journal of Lipid Research 22,177-184);1.34 nmolのコレステロールエステルヒドロラーゼと併用 (EC 3.1.1.13)/cm2。
A:乳化剤を使用しない
B:乳化剤を使用 (SML+SMS混合物;比率1/1)、Tac/乳化剤比 100/1
C:乳化剤を使用 (SMP+SM0混合物;比率1/1)、Tac/乳化剤比 100/1
インキュベーション時間:37℃で1時間。
試験を行った条件は下記の通りである:
細胞モデル:CaCo 2 細胞
ウェルの面積:4.2cm2:
Tacの量:67nmol/cm2:
使用した溶液:Mathias等によるM40ミセル
処理:
A:乳化剤を使用しない
B:乳化剤を使用 (SMP+SM0混合物;比率1/1)、Tac/乳化剤比 100/1
インキュベーション時間:37℃で2時間。
Claims (16)
- 同化し得る形のビタミンEに加水分解することができる安定なビタミンE誘導体を、単独で又は添加剤及び/又は飼料物質と混合して、飼育される単胃動物に経口的に投与することからなる非治療的な動物の飼育方法において、上記ビタミンE誘導体をソルビトールと脂肪酸との非エトキシル化エステルから選ばれた消化性乳化剤の少なくとも1種の存在下で上記動物に投与することを特徴とする非治療的な動物の飼育方法。
- ビタミンE誘導体と前記の少なくとも1種の乳化剤とを同時に動物に投与する、請求項1に記載の方法。
- ビタミンE誘導体を動物に投与する前に前記の乳化剤を動物に投与する、請求項1に記載の方法。
- ビタミンE誘導体及び/又は前記の少なくとも1種の乳化剤を飼料物質と混合する、請求項2又は3に記載の方法。
- 前記の少なくとも1種の乳化剤は、ソルビトールと、少なくとも11個の炭素原子を有する飽和又は不飽和炭化水素鎖を有する脂肪酸とのエステルから選ばれる、請求項1〜4のいずれか一つに記載の方法。
- 同化し得る形のビタミンEに加水分解することができる安定なビタミンEの誘導体を含有する動物の栄養用消化性製剤であって、ソルビトールの非エトキシルかエステルから選ばれた、少なくとも1種の消化性乳化剤を更に含有することを特徴とする消化性製剤。
- ソルビトールと脂肪酸の非エトキシルかエステルから選ばれた2種の消化性乳化剤を含有する、請求項6に記載の製剤。
- 1種又は2種以上の乳化剤とビタミンE誘導体の重量比は10/1〜1/200である、請求項6又は7に記載の製剤。
- 1種又は2種以上の乳化剤とビタミンE誘導体の重量比は1/5〜1/100である、請求項6又は7に記載の製剤。
- 前記の少なくとも1種の乳化剤は、ソルビトールと、少なくとも11個の炭素原子を有する飽和又は不飽和炭化水素鎖を有する脂肪酸とのエステルから選ばれる、請求項6〜9のいずれか一つに記載の製剤。
- ビタミンE誘導体はビタミンE エステルである、請求項6〜10のいずれか一つに記載の製剤。
- ビタミンE誘導体はビタミンE アセテートである、請求項6〜10のいずれか一つに記載の製剤。
- 前記の少なくとも1種の乳化剤は、モノラウレエート、モノパルミテート、モノステアレエート、モノオレエート及びトリステアレートから選ばれたソルビトールエステルである、請求項6〜12のいずれか一つに記載の製剤。
- ビタミンE アセテートと、ソルビトール モノラウレエート及びソルビトール モノオレエートから選ばれた少なくとも1種の乳化剤とを含有する、請求項6〜13のいずれか一つに記載の製剤。
- ソルビトールと脂肪酸との非エトキシル化エステルから選ばれた消化性乳化剤の、ビタミンE誘導体に基づく動物の栄養用消化性製剤の調製における使用。
- 同化し得る形のビタミンEに加水分解することができる安定なビタミンEの誘導体と、ソルビトールと脂肪酸との非エトキシル化エステルから選ばれた栄養性乳化剤との組合の、飼育される単胃動物におけるビタミンEの生体利用性を増大させるための使用。
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