METODO VETERINARIO PARA ADMINISTRAR UN DERIVADO Y FORMULACIÓN DE LA VITAMINA E Descripción de la Invención La presente invención se refiere generalmente a la administración de vitamina E a animales monogástricos de recría tales como cerdos y aves de corral, pero también peces y camarones. La vitamina E, o d-a-tocoferol, es encontrada principalmente en la naturaleza en aceites vegetales; la misma es obtenida al final de diferentes rutas de síntesis en la forma racémica d, 1-oc-tocoferol (abreviado como Tol) . En el estado natural, la vitamina E es un líquido lipofílico aceitoso que es miscible en cualesquiera proporciones en cualquier fase hidrofílica o de lípidos. La misma es extremadamente inestable y se puede oxidar fácilmente y pierde el volumen de su actividad biológica cuando la misma está en el estado de oxidación. Su biodisponibilidad en animales no excede 50 % cuando es administrada por la ruta oral, puesto que, a causa de su rápida oxidación, es absorbida en su mayor parte en una forma inactiva, oxidada. En consecuencia, cuando la misma es administrada por la ruta oral, la vitamina E está en la forma de un derivado más estable, seleccionado generalmente de los ésteres, por ejemplo el acetato, y las sales, de la vitamina E. Antes que el arte previo el cual es más cercano a la Re .172153 invención, y los problemas encontrados por este arte previo, sean tratados, y la invención sea presentada, una definición de biodisponibilidad como la misma es entendida en el resto de la descripción es dada en seguida. La biodisponibilidad de la vitamina E o de un derivado de vitamina E está representada por la concentración de la vitamina E que es liberada en la sangre con relación a la concentración de la vitamina E que está presente en la ración del animal o con relación a la concentración, expresada en equivalentes de la vitamina E, del derivado de vitamina E introducido en la ración del animal, cuando un derivado de la vitamina es administrado. Esta representación de la biodisponibilidad de la vitamina E toma en cuenta por lo tanto la absorción de la vitamina E, o del derivado de la vitamina E, en el intestino durante el paso por el aparato digestivo. De acuerdo con T. Julianto et al., International Journal of Pharmaceutics , 200 (2000) pp 53-57, los autores prepararon una solución de la vitamina E en aceite de palma, con esta solución que es emulsionada en una mezcla de emulsionantes; después que la solución ha sido diluida en agua, los autores examinaron entonces la biodisponibilidad, en seres humanos, de la vitamina E en tal solución cuando se compara con la biodisponibilidad de la vitamina E cuando es suministrada en forma de cápsulas. De acuerdo con estos autores, la biodisponibilidad de la vitamina E es tres veces más grande cuando la vitamina E es suministrada en la solución descrita anteriormente. Considerando la inestabilidad de la vitamina E en la forma no esterificada, una solución de esta naturaleza no puede ser utilizada en un suplemento alimenticio. Una variedad de suplementos alimenticios para animales, en particular comercializados por el solicitante, ya es conocida, en la cual la vitamina E es administrada en la forma de acetato de vitamina E, o acetato de d,l-oc-tocoferilo (Tac) , sobre diferentes soportes, como por ejemplo, mientras que es adsorbida en sílice, o en formas físicas diferentes, por ejemplo, mientras que está en la forma de emulsión de aceite en agua. Puesto que de la publicación de H. E. Gallo-Torres, Lipids (1970) vol . 5, No. 4, pp. 379-384, ya se sabe que Tac no es asimilado directamente en los seres humanos o animales sino que es hidrolizado de hecho a la vitamina E en el tracto gástrointestinal por la acción de las enzimas pancreáticas llamadas colesterol éster hidrolasas (abreviadas como CEHs) , con la vitamina E que es absorbida finalmente a través de la pared intestinal. Sin embargo, Tac solamente tiene una biodisponibilidad limitada, por ejemplo cuando mucho de 40 %, en cualquier animal en cuestión. El objeto de la presente invención es, por lo tanto, mejorar la biodisponibilidad de los derivados de la vitamina E, en particular de Tac.
Se descubrió, de manera totalmente sorprendente, que la presencia de un emulsionante particular hace posible incrementar significativamente la biodisponibilidad de un derivado de vitamina E, con el derivado que es capaz de ser hidrolizado en la forma asimilable de la vitamina E. Este emulsionante es alimenticio y es seleccionado de los esteres no etoxilados de sorbitol y ácidos grasos. La patente rusa SU-1 616 572 describe una composición que comprende acetato de vitamina E, un emulsionante polietoxilado y etanol. El mismo es agregado al agua de beber de las aves de corral en una proporción que asegure una absorción diaria de vitamina E del orden de 3 mg durante periodos dados de tiempo. Los autores, observan una capacidad de asimilación de la vitamina E, una tasa de supervivencia y un incremento en el peso de las aves de corral que son ligeramente mayores que aquellos obtenidos con las composiciones convencionales . El problema de la biodisponibilidad de la vitamina E en animales de recría, cuando es administrada en sus raciones, subsiste a causa de que los niveles obtenidos con las composiciones conocidas son demasiado bajos. El solicitante ha demostrado un efecto de un emulsionante, de acuerdo con la invención, sobre la biodisponibilidad de la vitamina E de una composición de acuerdo con la invención la cual es apreciablemente superior, particularmente cuando se compara con un emulsionante polietoxilado . El solicitante ha descubierto adicionalmente que el emulsionante promueve la hidrólisis, en el tracto gastrointestinal, del derivado de vitamina E en su forma asimilable, con este fenómeno teniendo una influencia favorable sobre la liberación de la vitamina E biodisponible. La invención es explicada, posteriormente con mayor detalle; sus ventajas serán ilustradas entonces en los ejemplos, en particular en los ejemplos comparativos. De acuerdo con una variante preferida de la invención, el emulsionante es seleccionado de los esteres de ácidos grasos de cadena larga, por ejemplo aquellos que tienen una cadena de hidrocarburos saturada o insaturada de al menos 11 átomos de carbono. Por consiguiente, la invención se refiere primeramente a un método veterinario que hace posible administrar, a los animales monogástricos de recría, una formulación de un derivado de vitamina E en la cual, de una vez y al mismo tiempo, la vitamina E es protegida hasta que la misma alcanza su sitio de absorción y está biodisponible a un grado elevado. El método de acuerdo con la invención es un método no terapéutico que consiste en la administración, por la ruta oral, a los animales monogástricos de recría, de un derivado estable de vitamina E ya sea por sí mismo o mezclado con un aditivo y/o con forraje, con el derivado que es hidrolizable en la forma asimilable de la vitamina E, en la presencia de al menos un emulsionante alimenticio seleccionado de los esteres no etoxilados de sorbitol y ácidos grasos . Un ácido graso de acuerdo con la invención se entiende preferentemente que es un ácido monocarboxílico que comprende una cadena de hidrocarburos que tiene n átomos de carbono, con n que es un número entero que varía desde 0 hasta 30 y la cadena está saturada o insaturada. De acuerdo con una variante más ventajosa, los ácidos grasos de acuerdo con la invención tienen una cadena de hidrocarburos saturada o insaturada de al menos 11 átomos de carbono. De acuerdo con el método de la invención, el derivado de vitamina E y el emulsionante pueden ser administrados al animal de manera concomitante o consecutiva, por ejemplo con el emulsionante que es suministrado al animal antes que el derivado de vitamina E. Por consiguiente, el derivado de vitamina E y/o el (los) emulsionante (es) puede (n) ser mezclado (s) con el forraje. La invención también se refiere a una formulación alimenticia para la nutrición animal que hace posible, en particular, implementar el método anterior, en donde tal formulación comprende un derivado estable de la vitamina E, con el derivado siendo hidrolizable en la forma asimilable de la vitamina E, y al menos un emulsionante alimenticio seleccionado de los esteres no etoxilados de sorbitol y ácidos grasos. De acuerdo con una variante de la invención, es preferible utilizar dos emulsionantes alimenticios que corresponden a la definición anterior. Un formulación de acuerdo con la invención preferentemente satisface al menos una de las siguientes características . La relación en peso del emulsionante, o . de los emulsionantes con respecto al derivado de vitamina puede variar desde 10/1 hasta 1/200; ventajosamente, la misma está entre 1/5 y 1/100. El derivado de vitamina E es preferentemente un éster de vitamina E, en particular acetato de vitamina E. Un emulsionante preferido es un éster de sorbitol seleccionado del monolaurato (SML) , el monopalmitato (SMP) , el monoestearato (SMS) , el monooleato (SMO) y el triestearato . Se prefiere el monooleato. Como los ejemplos lo demostrarán posteriormente, una formulación ventajosa de acuerdo con la invención comprende el acetato de vitamina E y al menos un emulsionante seleccionado del monolaurato de sorbitol y monooleato de sorbitol . Otra parte de la materia objeto de la invención es el uso de un emulsionante alimenticio seleccionado de los esteres no etoxilados de sorbitol y ácidos grasos para preparar una formulación alimenticia para nutrición animal que está basada en un derivado de la vitamina E, con los ácidos grasos que corresponden ventajosamente a la definición mencionada anteriormente. Todavía, otra parte de la materia objeto de la invención es el uso de un emulsionante alimenticio descrito anteriormente para incrementar la biodisponibilidad de la vitamina E en un animal monogástrico de recría, con el derivado siendo hidrolizable en la forma asimilable de la vitamina E. Los ejemplos que se dan posteriormente ilustran la influencia de un emulsionante, de acuerdo con la invención, sobre la biodisponibilidad de un derivado de vitamina E, su efecto superior cuando se compara con aquel de los emulsionantes conocidos, y su influencia sobre la hidrólisis del derivado de la vitamina E, con el apoyo de las figuras en las cuales: la figura 1 es una gráfica que muestra la cantidad, en equivalentes de vitamina E, en nmoles/cm2, la cual es fijada por un cultivo celular dependiendo de la cantidad, en nmoles/cm2, de Tac incubado, con el Tac que es incubado sin SMO (columnas vacías) y con 0.05 % de SMO (columnas sombreadas con rayas) . La figura 2 y la figura 3 son gráficas que muestran la cantidad fija, en equivalentes de vitamina E, que corresponde al acetato de retinilo (Rae, una referencia interna) , en las columnas de color negro, hasta Tac en las columnas sombreadas con rayas y hasta d, 1-oc-tocoferol en las columnas vacias, dependiendo de la ausencia o presencia, y de la naturaleza, del emulsionante que es incubado con el Tac.
De acuerdo con la figura 2, la relación del equivalente del emulsionante/vitamina E es de 6 mientras que la misma es de 1 de acuerdo con la figura 3. La figura 4 muestra el grado de hidrólisis de Tac en Tol dependiendo del tiempo de incubación y bajo las condiciones descritas en el ejemplo 5, 5.2) . La figura 5 muestra el grado de hidrólisis de Tac en
Tol dependiendo del tiempo de incubación y bajo las condiciones descritas en el e emplo 5, 5.1) . La figura 6 representa los niveles de vitamina ? en el plasma después de la infusión id de un bolo único de 800
IU como vitamina E estándar o como el emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-oc-tocoferilo + 45 % de sílice +
% de monooleato de sorbitán) . La figura 7 representa Los niveles de vitamina E en el plasma de los pollos tiernos alimentados con niveles graduados de vitamina E estándar o el emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) La figura 8 muestra los niveles de vitamina E en los hígados de los pollos tiernos alimentados con niveles graduados de vitamina E estándar o el emulsionador de la invención (50 % acetato de dl- -tocoferilo + 45 % de sílice +. 5 % de monooleato de sorbitán) . La figura 9 muestra el efecto de incrementar las dosis de vitamina E estándar sobre los niveles de vitamina E ^g/g) en las yemas del huevo. La figura 10 muestra el efecto de incrementar las dosis de vitamina E estándar sobre los contenidos de vitamina E (mg) en las yemas del huevo. La figura 11 es un esquema de muestreo para contener las muestras de plasma. La figura 12 representan niveles de vitamina E en el plasma de niveles graduados en la alimentación de pollos de la vitamina E estándar o un emulsionador de la invención. Ejemplo 1: influencia de los emulsionantes sobre la absorción del acetato de vitamina E (Tac) en un sistema celular in vitro Por medio de efectuar los ensayos in vitro sobre un modelo celular apropiado, la cantidad de Tac, expresada en equivalentes de vitamina E, la cual es fijada por la célula, es medida por la incubación de un cultivo celular correspondiente en la presencia de Tac sobre sí mismo, por una parte, y, por otra parte, en la presencia de Tac conjuntamente con uno o más emulsionantes alimenticios de acuerdo con la invención.
El modelo celular que es seleccionado es una linea celular original que está designada como CaCo-2 y que está disponible o accesible, bajo la referencia HTB-37, de el American Type Culture Collection (ATCC) . De acuerdo con este ensayo, un cultivo celular de la línea celular identificada previamente es incubado durante 3 horas en la presencia de micelas que consisten de una suspensión de Tac en agua. La cantidad de micelas que es introducida en el cultivo celular es medida en nmoles de Tac/cm2 y varía desde 4 hasta 60 nmoles/cm2. Para cada concentración de Tac que ha sido introducida en el cultivo celular, la cantidad de Tac que es fijada por el cultivo celular, y que está expresada en equivalentes de vitamina E en nmoles/cm2, es medida por una parte sin el emulsionante que ha sido introducido en el cultivo y por otra parte medida en la presencia de una cantidad de 0.05 % (m/v) de SMO del emulsionante (monooleato de sorbitán) , con este porcentaje que es obtenido dividiendo la masa del emulsionante, que ha sido introducida en el cultivo, entre el volumen de micelas, que ha sido introducido en el mismo cultivo. La gráfica mostrada en la figura 1 ilustra la cantidad de Tac fijo, expresado en el equivalente de vitamina E en nmoles/cm2, cuando se compara con la cantidad de Tac incubado, expresado en nmoles/cm2, con las columnas vacías que se refieren a las micelas que fueron introducidas sin SMO y las columnas sombreadas se refieren a las micelas que fueron introducidas con 0.05 % de SMO. Se puede observar que la cantidad del equivalente de vitamina E correspondiente se incrementa en proporción a la cantidad de Tac que es incubada, hasta el punto de observar, en el ensayo final, un grado de fijación de. Tac por las células que es 6 veces más grande cuando el emulsionante SMO es utilizado. Ejemplo 2: Influencia de los emulsionantes sobre la absorción del acetato de vitamina E (Tac) , y sobre la absorción de la vitamina E, en un sistema celular in vitro. 2.1) Protocolo experimental: Los ensayos de absorción son llevados a cabo utilizando la misma linea celular que aquella descrita anteriormente, por la incubación de las células durante 3 horas en un medio fisiológico que es semejante al medio intestinal y que contiene la colesterol éster hidrolasa (CEH) , la enzima pancreática que hidroliza al Tac en la vitamina E en el animal, y taurocolato de sodio, que representa las sales biliares. Este medio llega a estar en la forma de una emulsión de aceite en agua, es decir, en la forma de micelas, y es identificado comercialmente bajo la referencia M20. El Tac, y en donde sea apropiado, el emulsionante que es probado, son colocados en este medio. La concentración, en equivalentes de vitamina E, que es introducida en cada cavidad en la forma de Tac es de 156 µ?. Tres placas de seis cavidades (que representan en el caso de cada cavidad, un área de 9.6 cm2) , que contienen el medio mencionado anteriormente junto con los emulsionantes diferentes respectivamente, son utilizadas para cada ensayo. Cada experimento es llevado a cabo por lo tanto tres veces . 2.2) Relación en peso del emulsionante agregado al Tac (en equivalentes de vitamina E) de M20 = aproximadamente 6: De acuerdo con el presente ensayo, la concentración del emulsionante que es introducido en el medio M20 es de 0.05 %, expresado en la masa del (de los) emulsionante (es) por volumen de M20, con esto que corresponde aproximadamente a una relación en peso del emulsionante agregado con respecto al Tac del M20 de aproximadamente 6. Seis experimentos son llevados a cabo, con cada uno siendo repetido tres veces, utilizando un protocolo que comprende tres horas de incubación, como sigue: 1) M20 por sí mismo, en la tasa de 2 mM de M20 por cavidad; el propio Tac está por lo tanto sin emulsionante; 2) emulsionante de M20 + S L (monolaurato de sorbitán) ; 3) emulsionante de M20 + S P (monopalmitato de sorbitán) ; 4) emulsionante de M20 + ESML (monolaurato de sorbitán polioxietilado) ;
) M20 + una mezcla de 156 µ? de Tac y 156 µ? de d,l-a-tocoferol ; 6) un Rae (acetato de retinilo) denominado como referencia interna para verificar el análisis. Para cada ensayo, y expresado en nmoles de equivalente de vitamina E fijados por cavidad, la gráfica mostrada en la figura 2 ilustra: - la cantidad de Rae, mostrada en las columnas coloreadas de negro, - la cantidad de Tac fijada por las células, mostrada en las columnas sombreadas con rayas, y - la cantidad de vitamina E que ha sido obtenida por hidrólisis y luego fijada, mostrada en las columnas vacías . Como se demuestra por los ensayos 2) y 3) , la cantidad de vitamina E absorbida por el cultivo celular es incrementada aproximadamente 50 % cuando se compara con aquella absorbida de M20 sobre sí mismo. En contraste, se observa con el ensayo 4) , cuando se compara con el ensayo 1) sin emulsionante, que el emulsionante ESML, que corresponde al emulsionante etoxilado 2) (SML) , tiene una tendencia a prevenir la absorción de Tac y de la vitamina E. Inesperadamente, se encontró que la etoxilación del emulsionante inhibe la · influencia favorable de un emulsionante de acuerdo con la invención sobre la absorción de Tac y de la vitamina E. 2.3) Relación en peso del emulsionante agregado con respecto al Tac (en equivalentes de vitamina E) del M20 =¦ aproximadamente 1 : De acuerdo con el -presente ensayo, la concentración del emulsionante que es introducido en el medio de M20 es de 0.01 %, expresado en la masa de (de los) emulsionante (es) cuando se compara con el volumen de M20, con esto que corresponde aproximadamente a una relación en peso del emulsionante agregado con respecto al Tac del M20 de aproximadamente 1. Seis experimentos son llevados a cabo, con cada uno siendo repetido tres veces, utilizando un protocolo que comprende tres horas de incubación, como sigue: 1) El propio M20, en la tasa de 2 mM del M20 por cavidad; esto representa por lo tanto el taurocolato de sodio y el propio Tac; 2) emulsionante de M20 + SML (monolaurato de sorbitán) ; 3) emulsionante de M20 + SMP (monopalmitato de sorbitán) ; 4) emulsionante de M20 + SML y emulsionante de SMP; 5) emulsionante de M20 + SMO (monooleato de sorbitán) ; 6) la referencia interna, es decir Rae, para verificar el análisis . Para cada ensayo, y expresada en nmoles de equivalentes de vitamina E fijados por cavidad, la gráfica mostrada en la figura 3 ilustra: - la cantidad de Rae, mostrada en las columnas coloreadas de negro,
- la cantidad de Tac fijada por las células, mostrada en las columnas sombreadas con rayas, y - la cantidad de vitamina E, obtenida por hidrólisis y luego fijada, mostrada en las columnas vacías. Aún a una proporción inferior del emulsionante con respecto a la cantidad de Tac (cuando se compara con 2.2)), se puede observar que un emulsionante de acuerdo con la invención tiene una influencia sobre la absorción de Tac y de la vitamina E. Ejemplo 3: Comparación de la influencia de los emulsionantes de acuerdo con la invención y de los emulsionantes etoxilados correspondientes sobre la absorción de Tac y de la vitamina E en un sistema celular in vitro 3.1) Protocolo experimental Las condiciones experimentales generales del protocolo descrito en el ejemplo 2, 2.1) son idénticas aparte del hecho de que el área de las cavidades y la concentración de Tac introducida en el medio de M20 son diferentes. El área de las cavidades es de 6.5 cm2 y la concentración de Tac es de 23.7 µ?/cm2. 3.2) Comparación de SML, SMP y ESML: Cuatro experimentos son llevados a cabo con cada uno siendo repetido tres veces, utilizando un protocolo que comprende una hora de incubación a 37 °C, como sigue: 1) el propio M20, a la tasa de 2 mM; el Tac está por lo tanto por si mismo sin emulsionante; 2) emulsionante de 20 + SML (monolaurato de sorbxtán) ; 3) emulsionante de M20 + SMP (monopalmitato de sorbitán) ; 4) M20 + ES L (monolaurato de sorbitán etoxilado) . En el caso de cada uno de los ensayos 2) , 3) y 4) , la proporción en peso del emulsionante agregado al Tac (en equivalentes de vitamina E) es de 1:6.9. Los resultados obtenidos son mostrados en la tabla 1 que se da en seguida: Tabla 1
Con el apoyo de estos resultados, se debe apreciar que los emulsionantes, de acuerdo con la invención, incrementan la absorción de Tol o de Tac, en equivalentes de la vitamina E, en un factor de 1.9 en el caso de SML, y en un factor de 1.78 en el caso de SMP, cuando se compara con el ensayo de control 1) sin el emulsionante.
Por el- contrario, se observa que el emulsionante etoxilado (MLSE) redujo la absorción de la vitamina E en un factor de 0.76 · cuando se comparó con el ensayo 1) . ¦ . 3.3) Comparación de SML, SMP y MOSE: Se llevan a cabo cuatro experimentos, con cada uno siendo repetido tres veces, utilizando un protocolo que comprende una hora de incubación a 37 °C, como sigue: 1) el propio M20; el Tac por lo tanto está por si mismo sin emulsionante; 2) emulsionante de M20 + SML (monolaurato de sorbitán) ; 3) emulsionante de 20 + SMP (monopalmitato de sorbitán) ; 4) M20 + MOSE (monooleato de sorbitán etoxilado) . En el caso de cada uno de los ensayos 2), 3) y 4), la proporción en peso del emulsionante agregado al Tac (en equivalentes de vitamina E) fue de 1 : 6.9. Los resultados que son obtenidos son mostrados en la tabla 2 que se da en seguida: Tabla 2
Absorción (nmol/cm ) Tol Tac Vitamina E 1) Control 1.29 2.31 3.60 Tabla 2 (Cont . )
Con el apoyo de estos resultados, se aprecia una vez más que los emulsionantes de acuerdo con la invención, incrementan apreciablemente la absorción de Tol y Tac, en equivalentes de la vitamina ?,· en un factor de 1 . 92 en el caso de SML, y en un factor de 1 . 81 en el caso de SMP, cuando se compara con el ensayo de control 1 , sin el emulsionante. También se observó que el emulsionante etoxilado (MOSE) incrementó ligeramente la absorción de la vitamina E cuando se comparó con el ensayo 1 ) . Ejemplo 4: Influencia de un emulsionante de acuerdo con la invención sobre la liberación de Tac desde su soporte El presente ejemplo , prueba el efecto de un emulsionante de acuerdo con la invención, es decir SMO (monooleato de sorbitán) , sobre la liberación de Tac que está fijado al sílice. Para este fin, se hace uso de Tac sobre un soporte de sílice, en una relación en peso de 1 : 1 , para el ensayo sin emulsionante, y de Tac + emulsionante (SMO) sobre sílice en una relación en peso de 50 : 5 : 45.
g de Tac (en donde sea apropiado + SMO) sobre el sílice anterior (que está a una concentración final de Tac de 10 mM) son incubados durante 2.5 horas, mientras que se agita y a 38 °C, bajo condiciones de pH diferentes en las siguientes soluciones. ya sea 35 mM de fosfato, pH 6.5, 0.15 mM de NaCl o 35 mM de HCl/glicina, pH 2.5 Los- resultados agrupados en la Tabla 3 posterior, son obtenidos: Tabla 3
A pH 2.5, la adición de SMO incrementó la liberación de Tac desde su soporte (sílice) en un factor de 1.18, que es mayor que 18%. A pH 6.5, este incremento es de 1.21 (que es mayor que el 21%) . Ejemplo 5: Influencia de un emulsionante de acuerdo con la invención sobre la hidrólisis in vitro de Tac a Tol 5.1) Influencia de SMO El presente ejemplo prueba el efecto de un emulsionante de acuerdo con la invención, es decir SMO (monooleato de sorbitán) , sobre la hidrólisis de Tac a Tol . Para este fin, se hace uso de Tac, para el ensayo sin el emulsionante, y de Tac + SMO en una relación en peso de 10 : 1. 0.5 g de Tac (en donde sea apropiado + SMO), es decir una concentración final de Tac de 10 mM, es incubada durante 16 horas, mientras que se agita y a 38 °C, en la siguiente solución: fosfato 35 mM, pH 6.5, NaCl 0.15 mM, pancreatina en una proporción en peso de pancreatina : Tac de 2 : 1, y las sales biliares en una relación en peso de las sales biliares : Tac de 5 : 1. La pancreatina es un extracto pancreático que comprende, en particular, colesterol éster hidrolasa, y las sales biliares comprenden activadores de CEH. El grado de liberación de la vitamina E, cuando se compara con la cantidad inicial de Tac, es medida en diferentes tiempos de incubación bajo las condiciones mencionadas anteriormente. Las curvas mostradas en la figura 4 muestran el grado de hidrólisis expresado como la concentración, en % (p/p) , de Tol en la solución dependiendo del tiempo de incubación. Se señala que SMO (¦) incrementó el grado de hidrólisis de Tac a Tol en 22 % (calculado de la relación de las pendientes de las curvas de hidrólisis) cuando se compara con el ensayo sin emulsionante (?) . 5.2) Influencia de SMO dependiendo de la concentración de los ácidos biliares en la solución de incubación El presente ensayo prueba el efecto de un emulsionante de acuerdo con la invención, es decir SMO (monooleato de sorbitán) , sobre la hidrólisis de Tac a Tol . Para este propósito, se hace uso de Tac, para el ensayo sin emulsionante, y de Tac + SMO en una proporción en peso de 10 : 1. 4 mg de Tac (en donde sea apropiado + SMO) , es decir una concentración final de Tac de 8.45 µ?, son incubados durante 3 horas, mientras que se agita y a 37 °C, en la siguiente solución: Fosfato 35 mM, pH 6.5, NaCl 0.15 mM, 2 mg de pancreatina, que está a una proporción en peso de pancreatina : Tac de 1 : 2, y las sales biliares a concentraciones variables . Los siguientes ensayos con llevados a cabo: 1) Tac sin emulsionante, con 10 mM de sales biliares 2) Tac + SMO, con 10 mM de sales biliares 3) Tac sin emulsionante, con 20 mM de sales biliares 4) Tac + SMO, con 20 mM de sales biliares · 5) Tac sin emulsionante, con 50 mM de sales biliares 6) Tac + SMO, con 50 mM de sales biliares.
Antes de la incubación, y después de 1 hora y 3 horas, respectivamente, de incubación bajo las condiciones mencionadas anteriormente, el grado de liberación de vitamina E, cuando se compara con la cantidad inicial de Tac, es medido . La gráfica en la Figura 4 muestra, para cada ensayo, el grado de hidrólisis, expresado en la concentración, en % (p/p) , de Tol en la solución. Se señala otra vez que SMO incrementa fuertemente el grado de hidrólisis de Tac a Tol mediante la activación de CEH. Este incremento depende de la concentración de las sales biliares: por consiguiente, la misma es duplicada cuando la concentración de las sales biliares es de 50 mM, multiplicada por 4.1 cuando la concentración es de 20 mM, y multiplicada por 4.7 cuando la concentración es de 10 mM. Ejemplo 6: Influencia de un emulsionante de acuerdo con la invención sobre la biodisponibilidad de la vitamina E a partir de Tac, como se mide por la influencia combinada del emulsionante durante la liberación de Tac desde su soporte y de la hidrólisis de Tac liberado a Tol El presente ej emplo prueba el efecto de un emulsionante de acuerdo con la invención, es decir SMO (monooleato de sorbitán) . Para este propósito, se hace uso de Tac sobre el soporte de sílice, en una proporción en peso de 1:1, para el ensayo sin el emulsionante, y de Tac + emulsionante (SMO) sobre sílice, en una proporción en peso de 50 : 5 : 45. 8 mg de Tac (en donde sea apropiado + SMO) sobre el sílice anterior (que es una concentración final de Tac de 16.9 µ?) son incubados durante 3 horas, mientras que se agita y a 37 °C, en las siguientes soluciones: Fosfato 35 mM, pH 6.5, NaCl 0.15 rtiM, pancreatina (2 mg) y sales biliares (20 mM) . Antes de la incubación, y después de 1 hora y 3 horas, respectivamente, de incubación bajo las condiciones mencionadas anteriormente, la concentración de vitamina E en la solución es medida en comparación con la cantidad inicial de Tac. Los resultados agrupados en la Tabla 4 posterior son obtenidos: Tabla 4
La adición de SMO mejora la biodisponibilidad de Tac, como es evaluada por la eficacia de la liberación de Tac desde su soporte de sílice y por la eficacia de la hidrólisis de Tac a Tol. Este incremento alcanza más del 90 % después de 3 horas de incubación, que resulta de una liberación mejorada y de una hidrólisis acelerada. Ejemplo 7: Influencia de los emulsionantes sobre la excreción de vitamina E en gallos cecectomizados Dos series de pruebas se llevaron a cabo sobre gallos cecectomizados. Las primeras series comprendieron 32 gallos mientras que las segundas comprendieron 51 gallos. Los mismos fueron alimentados, por "cebadura húmeda", con una alimentación que incorporó Tac (acetato de vitamina E) o Tac combinado, en diferentes proporciones, con uno o dos emulsionantes alimenticios de acuerdo con la invención. El Tac o el Tac combinado fueron formulados en cápsulas de gelatina, que fueron obtenidas utilizando una pipeta para depositar una cantidad predeterminada de Tac o Tac combinada en una mitad de la cubierta de la cápsula y luego se cierra la cápsula con la otra mitad de la cubierta. 48 horas después de la ingestión de alimentos desde un tazón, las heces son colectadas y la excreción de la vitamina en este material es determinada. Para este fin, la vitamina E es extraída con un solvente de vitamina E, por ejemplo hexano, y la cantidad extraída es determinada entonces por cromatografía de CLAR. La proporción de vitamina E que ha sido digerida es deducida de la proporción que ha sido excretada. 7.1) Primeras series Tabla 5
Se observa que el método de acuerdo con la invención puede incrementar la digestibilidad de la vitamina E en hasta 31 % cuando se compara con el control. 7.2) Segundas Series Tabla 6
Como en la primera serie, la digestibilidad de la vitamina E se observa que se incrementa cuando la vitamina E es administrada de acuerdo con la invención. Este incremento puede alcanzar 40.5 % de la digestibilidad obtenida con el propio Tac. Ejemplo 8: Influencia de los emulsionantes sobre la hidrólisis de los derivados de vitamina E 8.1) Las condiciones bajo las cuales son llevadas a cabo las pruebas, son como sigue: Modelo celular: Células de CaCo 2 Area de las cavidades: 6.5 cm2 Cantidad de Tac: 67 nmol/cm2 Solución empleada: micelas de M40 de acuerdo con
Mathias et al. (Mathias, P.M., Harries, J.T., Muller, D.P. . (1981) : Optimization and validation of assays to estímate pancreatic ester activity using well-characterized micellar solutions of cholesteryl oléate and tocopheryl acétate. Journal of Lipid Research 22, 177-184), asociadas con 1.34 nmol de colesterol éster hidrolasa (EC 3.1.1.13) /cm2. Tratamientos : A: Sin emulsionante B: Con emulsionante (mezcla de SML + SMS; relación l/l) , relación de Tac/emulsionante 100/1 C: Con emulsionante (mezcla de SMP + SMO; relación l/l) , relación de Tac/emulsionante 100/1 Periodo de incubación: 1 hora a 37 °C Análisis: análisis de Tac en el medio para calcular el grado de hidrólisis. Los resultados son presentados en la Tabla 7 que se da enseguida: Tabla 7
De acuerdo con esta tabla, la presencia de los emulsionantes duplicó la hidrólisis del Tac. Los emulsionantes de acuerdo con la invención mejoraron las condiciones de la hidrólisis para la colesterol áster hidrolasa . 8.2) Las condiciones bajo las cuales las pruebas fueron llevadas a cabo son como sigue: Modelo celular: Células de CaCo-2 Area de las cavidades: 4.2 cm2 Cantidad de Tac: 67 nmol/cm2 Solución empleada: micelas de M40 de acuerdo con Mathias et al. Tratamientos :
A: Sin emulsionante B: Con emulsionante (mezcla de SMP + SMO; relación 1/1) relación de Tac/emulsionante 100/1 Periodo de incubación: 2 horas a 37 °C Análisis: Análisis de Tac en el medio arriba de las célula con el propósito de calcular el grado de hidrólisis. Los resultados son presentados en la Tabla 8 que s da enseguida: Tabla 8
La presencia de los emulsionantes mejoró la hidrólisis del Tac en 44%. Como en 8.1), los emulsionantes mejoraron las condiciones de la hidrólisis para la colesterol éster hidrolasa. Ejemplo 9: Efecto de un emulsionador de la invención sobre los niveles en el plasma de lechones cuando son infusionados intraduodenalmente El efecto de 'un emulsionador de la invención (50% de acetato de dl-cc-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) sobre el nivel de vitamina E en el plasma de lechones fue probado. Para excluir las influencias o impactos gástricos del portador, el emulsionador de la invención fue. infusionado intraduodenalmente en la forma líquida (aceite) . Tres lechones destetados (BW inicial 12 kg) fueron equipados quirúrgicamente con un catéter de silicio en la vena yugular así como con una cánula de silicio en el duodeno proximal de acuerdo con el procedimiento descrito por Thaela et al. (1995) . Una dieta para animal destetado estándar sin suplemento de vitamina E fue alimentada a los lechones. Los animales fueron alimentados con una permisibilidad de alimentación diaria que corresponde a 2.0 x W0'75, distribuida dos veces en alimentos molidos iguales (08.00 h y 16.00). Los animales fueron adaptados durante 7d a la dieta basal . En D8 , con los alimentos de la mañana, la vitamina E en la forma del aceite de vitamina E estándar (acetato de dl- -tocoferilo) o como el aceite de un emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitan) fue administrado directamente de acuerdo con el siguiente diseño experimental. 2 tratamientos x 3 lechones x 2 repeticiones (procedimiento cruzado) Tratamientos Rl : 800 IU de aceite estándar de vitamina E infusionadas como un bolo único intraduodenalmente R2 : 800 IU del aceite emulsionador (50 % acetato de dl-oc-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) , infusionadas como un bolo único intraduodenalmente . Las muestras de sangre fueron tomadas a las 4, 8, 12, 16, 20 y 24h prostprandialmente, el plasma fue obtenido y las muestras fueron agrupadas. Después del experimento, los animales fueron adaptados nuevamente a la dieta basal durante 7d antes que la 2/a. repetición se hiciera de acuerdo con esto. El contenido de vitamina E en el plasma fue determinado por CLAR de acuerdo con el método por Gastan et al. (2005) . Los datos fueron analizados utilizando el procedimiento ANOVA de Statview. Resultados y Discusión Como se presentó en la figura 6, la administración intraduodenal (id) de 800 IU de vitamina E estándar condujo a un nivel en el plasma total de 5.72 nmol/ml (+ 0.36) mientras que después de la administración de 800 IU del emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) se observó un nivel de vitamina E en el plasma de 8.08 nmol/ml (+ 0.47) . La variabilidad baja en la prueba (CV 6.2 y 5.8 para la vitamina E estándar y el emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) , respectivamente) refleja una buena repetibilidad y por lo tanto una prueba válida. Se puede observar que los cerdos que reciben el tratamiento emulsionador tuvieron un nivel de vitamina E en el plasma más elevado (P<0.001), significativo, cuando se comparó con lechones que reciben el tratamiento estándar de vitamina E (5.72 nmol/ml y 8.08 nmol/ml para la vitamina E estándar y el emulsionador de la invención, respectivamente) . Cuando se considera el incremento relativo, se puede establecer que el nivel en el plasma de los cerdos que reciben el emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbítán) fue 42% más elevado cuando se compara con los cerdos que reciben la vitamina E estándar . Se puede concluir que el emulsionador de aceite de la presente invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) fue al menos 40 % más absorbido que la vitamina E estándar. Ejemplo 10: Efecto de incrementar las .dosis de un emulsionador de la invención en formulaciones de alimentación sobre los niveles de vitamina E en el hígado y el plasma de pollos tiernos Protocolos y dietas El efecto de un emulsionador de la dieta de la invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) sobre el nivel de vitamina E en el plasma y los hígados de los pollos en crecimiento fue determinado de acuerdo con el siguiente protocolo: 6 tratamientos x 50 pollos tiernos l : control R2 : control + 40 IU/kg de vit. E estándar (en la forma de acetato de dl-oc-tocoferilo) R3 : control + 120 IU/kg de vit. E estándar R4 : control + 200 IU/kg de vit E estándar R5 : control + 40 IU/kg del emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-oc-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) R6 : control + 120 IU/kg del emulsionador de la invención (50
% acetato de dl-oc-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) Trescientos pollos tiernos macho Ross fueron divididos en 6 grupos y alojados en 6 corrales. De dO hasta dl4, todos los animales fueron alimentados con la misma dieta basal , libre de vitamina E. Los animales recibieron las dietas experimentales convertidas en pelotillas (Rl - R6) ad libitum desde D15 hasta d34. En d35, 15 pollos tiernos por tratamiento, los cuales estuvieron más cercanos al peso corporal promedio, fueron seleccionados . Las muestras de plasma fueron colectadas por punción intracardiaca . Las aves fueron sacrificadas entonces por inyección de pentobarbital . Los hígados fueron diseccionados, mantenidos en congelamiento en nitrógeno liquido y se molieron inmediatamente. Los niveles de vitamina E en el plasma o los hígados fueron determinados por CLAR de acuerdo con el método por Castan et al (2005) . Los datos fueron analizados utilizando el procedimiento ANOVA de Statview. Tabla 9: Composición y características de la dieta de control (calculada)
Ingredientes (%) Características (calculadas) Trigo 18.46 AME (MJ/kg) 12.8
Maíz 37.00 Proteína cruda (%) 21.00
Harina de Soya 35.54 Metionina (%) 0.53
Aceite de Soya 4.60 Premezcla Mineral 4.4
Resultados y discusión La adición de vitamina E estándar a la dieta de control condujo a un incremento lineal de los niveles de vitamina E en el plasma (figura 7) así como en el hígado (figura 8). La adición del emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) también condujo a un incremento lineal de los niveles en el plasma. Para ambas preparaciones de vitamina E, los incrementos lineales fueron altamente correlacionados, lo cual puede observarse de los coeficientes de regresión muy "elevados (R2>0.98) para los niveles tanto en el hígado como en el plasma (figuras 7 y 8) . La pendiente de la curva indica la biodisponibilidad de la vitamina E. Para el plasma, la pendiente del emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-cc-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) es de 0.1647, en donde la misma es de 0.1211 para la vitamina E estándar (figura 7) lo cual significa un incremento en la biodisponibilidad del 38% para los niveles del plasma. Para el almacenamiento en el hígado, el incremento alcanza 43% con pendientes de 0.2715 y 0.1896 para el emulsionador de la invención (y la' vitamina E estándar, respectivamente (figura 8) . De este ensayo se puede concluir, que un emulsionador que contiene 50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán está 40 % más biodisponible que la vitamina E estándar. De ambas figuras, también se puede calcular que para obtener el mismo nivel en el plasma o el hígado con la vitamina E estándar comparado con el emulsionador de la presente invención, los animales necesitan ser alimentados con 167 y 171 ppm de vitamina E estándar comparado con solamente 120 ppm de un emulsionador que contiene 50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán.
El emulsionador que contiene 50 % acetato de di-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán mejoró significativamente el nivel de vitamina E en el plasma (+ 38%) asi como los niveles de vitamina E en el hígado (+ 43%) de los pollos tiernos alimentados con una dieta a base de maíz-trigo. Ejemplo 11. Efecto de incrementar las dosis de un emulsionador de la invención en ormulaciones de alimentación sobre los niveles de vitamina E en huevos El efecto del siguiente emulsionador: 50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán sobre el nivel de vitamina E en el huevo fue estudiado . Protocolo y dietas 4 tratamientos x 10 capas Rl : Alimentación basal + 10 mg/kg de Vit. E estándar (en la forma de acetato de dl-a-tocoferilo) R2 : Alimentación basal + 100 mg/kg de Vit. E estándar R3 : Alimentación basal + 200 mg/kg de Vit. E estándar R4 : Alimentación basal + 100 mg/kg del emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice +
% de monooleato de sorbitán.) Cuarenta gallinas que ponen huevos cafés ISA, de 23 semanas de edad, fueron divididas igualmente en 4 grupos y se alojaron individualmente en jaulas. Los animales recibieron las dietas experimentales de comida (Rl - R4) ad libitum durante 21 dias. Los huevos depositados en D20 a 21 fueron colectados, pesados y almacenados a -4 °C. Los niveles de vitamina E en la yema del huevo fueron determinados por CLAR de acuerdo con el método pos Castan et al (2005) . Los datos fueron analizados utilizando el procedimiento ANOVA de Statview. Tabla 10: Composición y características de la dieta basal (calculada)
Ingredientes (%) Características (calculadas) Maíz 51.50 ME (MJ/kg) 11.46
Harina de Soya 20.30 Proteína cruda (%) 17.00
Semillas de soya extraídas 7.50 Metionina (%) 0.37
Salvado de trigo 7.00 Lisina 0.91
Carbonato de calcio 8.00 Fósforo disponible 0.33
Aceite de palma 2.5 Calcio 3.47
Premezcla de Mineral 3.2 y Vitamina
Resultados y discusión El suplemento de vitamina E afectó (P<0.001) el nivel de vitamina E en los huevos así como el contenido total de vitamina E en las yemas del huevo. Las dosis crecientes de la vitamina E estándar permiten el cálculo de la curva de regresión del tipo y = a * x + b. el valor obtenido para el emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) puede ser insertado en esta ecuación y por lo tanto la equivalencia de este emulsionador con relación a la vitamina E estándar puede ser calculada. Como se puede observar en la figura 9, para el nivel de vitamina E en los huevos (expresado en g/g) , el nivel de regresión para la vitamina E estándar reveló la siguiente ecuación: y = 1.6102 * x + 88.44. Para el emulsionador de interés (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) , suplementado a 100 mg/kg, un nivel de vitamina E de 297 (+ 53.1) fue encontrado. Colocando este valor en la ecuación, se puede observar que 100 mg/kg del emulsionador de la invención tienen la misma eficacia que 130 mg/kg de Vit. E estándar. Para volver a hacer el cálculo del contenido de vitamina E de la yema, los pesos de las yemas (g) han sido fijados con relación al nivel de vitamina E (µ'3/g) . El mismo cálculo que para el nivel de vitamina E ha sido hecho para este parámetro y la siguiente ecuación fue obtenida: y = 0.0258*x + 1.2892 (figura 10) . Ajustando el valor obtenido para el emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-oc-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) (4.78 mg + 0.96) en la ecuación, la equivalencia es de 138 mg/kg de vitamina E estándar para 100 mg/kg del emulsionador' de la invención. Además, al nivel de suplemento de 100 mg/kg, el emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) condujo a yemas con el contenido significativamente más elevado (P<0.05) en vitamina E (4.07 mg + 0.57 para la vitamina E estándar, 4.78 mg +¦ 0.96 para el emulsionador de la invención) . Se puede concluir que el suplemento de una alimentación de capas a base de maíz con 100 mg/kg del emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-cc-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) conduce al mismo contenido de vitamina E de las yemas del huevo que el suplemento con 138 mg/kg de vitamina estándar E. El suplemento de una alimentación de capas a base de maíz con 100 mg/kg del emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-oc-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) conduce al mismo contenido de vitamina E de las yemas del huevo que el suplemento con 138 mg/kg de vitamina E estándar. Ejemplo 12: Efecto del emulsionador de la invención sobre las características cinéticas en el plasma en pollos Protocolo y dietas El efecto de un emulsionador de la invención (50 % acetato de dl- -tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) sobre las características cinéticas del plasma de la vitamina E en pollos fue probado de acuerdo con el siguiente protocolo: 2 tratamientos x 5 pollos Rl : 40 IU/ave de vitamina E estándar (en la forma de acetato de dl-oc-tocoferilo) R2: 40 IU/ave del emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-a~tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) Diez pollos adultos fueron alojados en jaulas metabólicas individuales y se distribuyeron en 2 grupos. Previo al experimento, las aves fueron mantenidas en ayuno durante 24 h. Para el experimento, las aves fueron alimentadas forzosamente con una cápsula de gelatina que contiene las preparaciones de vitamina E (Rl y R2) en la forma de aceite de vitamina E . Las muestras en el plasma fueron obtenidas de la vena del ala de los animales de acuerdo con el esquema de muestreo presentado en la figura 1. Los niveles de vitamina E en el plasma fueron determinados por CLAR de acuerdo con el método por Castan et al. (2005) . Los datos fueron analizados utilizando ANOVA. Resultados y discusión El nivel basal de vitamina E fue determinado para que sea capaz de hacer el cálculo de incremento por medio de diferenciación. El nivel basal se encontró que va a ser de 8.2 nmol/ml . Cuando se calcula la cantidad de vitamina E absorbida por el cálculo del área bajo la curva, se puede observar que después que los animales reciben el siguiente emulsionador: 50 % acetato de dl-a-tocoferilo - 45 % de sílice - 5 % de monooleato de sorbitán, tuvo 121% más de Vit . E absorbida en comparación con los animales a los que se les proporcionó el aceite de vitamina E estándar. Después de 16h todavía existió 69% más vitamina E absorbida; después de 24h una cantidad adicional de 41% fue encontrada. Estos descubrimientos demuestran una absorción mayor de vitamina E cuando se proporciona en la forma del emulsionador de la presente invención. Las diferencias entre los tratamientos son más pronunciados al inicio del ensayo; después de 24h los mismos llegan a ser más pequeños debido al hecho de que los anímales no han sido alimentados y están en estado de ayuno . Se puede concluir de este estudio que el aceite de vitamina E en la forma de un emulsionador de la presente invención es cuando mínimo del 0% más biodisponible que el aceite de vitamina E estándar. Ejemplo 13: Efecto de un emulsionador de la dieta de la invención en los niveles de Vitamina E en el hígado y los músculos de los lechones El efecto de un emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) sobre el nivel de vitamina E en los hígados así como en el músculo (pernil) fue probado de acuerdo con el siguiente protocolo: 3 tratamientos x 10 lechones Rl : Dieta basal + 20 IU/kg Vit . E estándar (en la forma de acetato de dl-a-tocoferilo) R2: Control + 150 IU/kg de Vit. E estándar R3 : Control + 150 IU/kg del emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) Treinta lechones destetados híbridos (8.0 kg de peso en vivo) fueron divididos en tres grupos (Rl, R2, R3) , mantenidos individualmente y distribuidos de acuerdo con un diseño de bloques distribuidos de manera completamente aleatoria. Los lechones fueron alimentados ad libitum durante 14 días con una dieta a base de maíz-trigo (Tabla 11) . La dieta fue suplementada con ya sea 20 IU/kg (Rl) o 150 IU/kg (R2) de acetato de DL-a-tocoferilo estándar. Los lechones de R3 fueron alimentados con una dieta suplementada con 150 IU/kg del emulsionador que contiene 50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán. El día 15 del experimento los animales fueron sacrificados y su hígado diseccionado, se congeló inmediatamente bajo nitrógeno líquido y se molió hasta un polvo. Las muestras de músculo (muscularis glutaeus maximus) de aproximadamente 9 cm2 fueron obtenidos de la pierna trasera izquierda y se congelaron inmediatamente . El contenido de vitamina E de las muestras fue determinado por CLAR (Gastan et al. 2005) y los datos fueron analizados estadísticamente utilizando ANOVA de una via. Tabla 11: Composición y características de la dieta de control (calculada)
Ingredientes (%) Características (calculadas) Trigo 15.00 DE (kcal/kg) 3400
Maíz 35.00 Lys (%) 1.5
Harina de Soya 25.00 Polvo de leche desnatada 15.0 Azúcar 5.0 Premezcla mineral 5.0
Resultados y discusión Agregando un emulsionador de la invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) a la dieta, se incrementó el contenido de vitamina E en el hígado en 81% (P<0.02) y en el músculo en 44% (P<0.01) cuando se compara con los contenidos en lechones alimentados con 20 Iü/kg de acetato de DL-oc-tocoferilo. Los contenidos de vitamina E se incrementaron en el hígado (51%) y el músculo (35%) cuando el acetato de DL-oc-tocoferilo fue incrementado desde 20 Iü/kg hasta 150 IU/kg en la dieta (P<0.05). La comparación relativa de las pendientes de las curvas de regresión hace posible una evaluación de la biodisponibilidad de la vitamina E desde las dos fuentes. Por lo tanto, una curva de regresión se ha hecho para ambas fuentes de vitamina E utilizando tanto el punto a 20 IU/kg como el punto correspondiente a 150 IU/kg (Rl y R2 para el acetato de DL-c- tocoferilo estándar y para Rl y R3 para 50 % acetato de di - a- tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbit n) . La división de las pendientes de las curvas proporciona una evaluación de la diferencia en la biodisponibilidad. La comparación de las pendientes de las curvas para los contenidos de la vitamina E en los hígados (1.89 para el acetato de DL-a- tocoferilo estándar y 3.00 para el emulsionador de la invención) sugiere un incremento en la biodisponibilidad relativa para el emulsionador de la invención del 37%. Para las muestras de músculo, las pendientes de las curvas fueron de 0.89 para el acetato de DL-oc-tocoferilo estándar y 1.61 para el emulsionador de la invención. Como resultado, un incremento en la biodisponibilidad relativa del emulsionador de la invención del 44 % fue estimado (figura 12) . A partir de este ensayo se puede concluir que un emulsio ador de la invención (50 % acetato de dl-a-tocoferilo + 45 % de sílice + 5 % de monooleato de sorbitán) está 40 % más biodisponible que la vitamina E estándar. Se hace constar que con relación a esta fecha el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.