JP2007178193A - 浮遊細胞の検査方法 - Google Patents
浮遊細胞の検査方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2007178193A JP2007178193A JP2005375195A JP2005375195A JP2007178193A JP 2007178193 A JP2007178193 A JP 2007178193A JP 2005375195 A JP2005375195 A JP 2005375195A JP 2005375195 A JP2005375195 A JP 2005375195A JP 2007178193 A JP2007178193 A JP 2007178193A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fluorescence
- cells
- ctc
- stained
- fluorescent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
【解決手段】浮遊細胞の検査方法は、細胞表面抗原が蛍光染色された浮遊細胞を、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション法に供し、次いで細胞の核にピントを合わせて核を蛍光顕微鏡で観察することを含む。
【選択図】なし
Description
上記した市販のECKIT(商品名)を用い、その添付文書に記載された通りの操作を行い末梢血中のCTC数を測定した。すなわち、キットに含まれる専用採血管で乳癌患者から末梢血10mlを採血した。次に、採血した血液7.5mlをチューブに移し、キットに含まれる希釈バッファー6.5mlを加えた。その後、転倒混和をおこない、800g、10分間、室温で遠心した。遠心後、チューブをCellTracks (商品名)AutoPrep Systemの機器にかけた。機器の操作は、機器使用説明書に従った。ここで、上記した、磁性ビーズへのCTCの結合、PE標識抗サイトケラチンモノクローナル抗体及びAPC標識抗CD45モノクローナル抗体による細胞表面の蛍光染色並びにDAPIによる核の染色が自動的に行なわれる。次にCellTracks(商品名) AnalyzerIIを用いて、機器手順書に従い操作し、CTC数を計測した。ここでは、磁気ビーズ上に結合し、細胞表面がPE標識抗サイトケラチンモノクローナル抗体で染色され、APC標識抗CD45モノクローナル抗体で染色されず、核がDAPIで染色された細胞が自動的に計数される。
CTC計数後、専用カートリッジからサンプルをピペットでとり、サイトスピン法で固定した。すなわち、CTC計数後、専用カートリッジからサンプルをピペットでとり、サイトスピン専用カートリッジに入れた。1400rpm、10分間室温で遠心し、細胞をスライドガラス上に貼り付けた。遠心後、細胞をドライヤーで乾燥した。
FISH法は、EGFR遺伝子を検出するための、上記した市販のキットである「LSI EGFR/CEP 7 Dual Color Probe」(商品名)を用い、キットの添付文書に従って行なった。すなわち、細胞を固定したスライドを73-74℃の70%ホルムアミド/2xSSC溶液中に入れ、2分間静置した。直ちに、スライドを氷温の70%エタノールに中に入れ、5分間静置した。次に、スライドを氷温の100%エタノールに入れ替え、5分間以上静置した。スライドをドライヤーで乾燥させた。スライド1枚につき、キットに含まれるEGFR DNAプローブとCEP7 DNAプローブの溶液2μLを0.5mlのマイクロチューブに加え、恒温槽で75℃、5分間暖めた。マイクロチューブを直ちに氷中に移し、5分間以上静置した。このプローブ溶液をスライドに固定されている細胞に2μLを滴下した。気泡が入らないように注意して、カバーガラスを載せた。次に、カバーガラスより一回り大きいパラフィルム(商品名)を載せ、ボンドで封入した。モイスト・チェンバーにスライドを移し、37℃のインキュベーターで一晩反応させた。パラフィルム(商品名)を剥がし、室温の2xSSC溶液に入れ、カバーガラスが自然に剥がれるのを待った。45-47℃の50% Formamid/2xSSC溶液で15分間洗浄した。続いて、45-47℃の2xSSC溶液で10分間、45-47℃の2xSSC/0.1%Tween 20溶液で5分間洗浄した。洗浄後、ドライヤーで乾燥させた。乾燥させたスライドに、DAPI封入剤で封入した。なお、FISH法は、CTC計数から24時間経過後に操作を開始した。
解析は、蛍光顕微鏡で、倍率1000倍で観察することにより行なった。核はDAPIにより弱い青色に染色され、EGFR DNAプローブ及びCEP7 DNAプローブがハイブリダイズした位置は、細胞表面の蛍光標識に妨害されることなく明瞭に観察することができた。
Claims (9)
- 細胞表面抗原が蛍光染色された浮遊細胞を、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション法に供し、次いで細胞の核にピントを合わせて核を蛍光顕微鏡で観察することを含む、浮遊細胞の検査方法。
- 前記浮遊細胞が、血液中を循環している癌細胞である請求項1記載の方法。
- 前記癌細胞が乳癌細胞である請求項2記載の方法。
- 前記表面抗原がサイトケラチンである請求項3記載の方法。
- 前記蛍光インサイチューハイブリダイゼーション法に用いるプローブが、EGFR遺伝子とハイブリダイズする、EGFR/遺伝子検出用プローブ又はHER-2/neu遺伝子とハイブリダイズする、HER-2/neu遺伝子検出用プローブである請求項3又は4記載の方法。
- 前記蛍光染色された浮遊細胞は、核酸と特異的に結合する蛍光試薬によりその核も染色されたものであり、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション法で用いる核酸プローブの蛍光標識は、核の染色に用いる上記蛍光試薬とは目視により識別できる程度に異なる色の蛍光を発する蛍光色素である請求項1ないし5のいずれか1項に記載の方法。
- 前記蛍光顕微鏡による観察は、蛍光顕微鏡を最大倍率にして行なう請求項1ないし6のいずれか1項に記載の方法。
- 倍率を1000倍にして行なう請求項7記載の方法。
- 前記蛍光インサイチューハイブリダイゼーション法における観察を、細胞表面抗原の蛍光染色後15時間以上経過した後に行なう請求項1ないし8のいずれか1項に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005375195A JP4986449B2 (ja) | 2005-12-27 | 2005-12-27 | 浮遊細胞の検査方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005375195A JP4986449B2 (ja) | 2005-12-27 | 2005-12-27 | 浮遊細胞の検査方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2007178193A true JP2007178193A (ja) | 2007-07-12 |
JP4986449B2 JP4986449B2 (ja) | 2012-07-25 |
Family
ID=38303543
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005375195A Expired - Fee Related JP4986449B2 (ja) | 2005-12-27 | 2005-12-27 | 浮遊細胞の検査方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4986449B2 (ja) |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010071114A1 (ja) | 2008-12-18 | 2010-06-24 | シスメックス株式会社 | 血液試料中の癌細胞の検出方法 |
WO2010090279A1 (ja) | 2009-02-06 | 2010-08-12 | 株式会社オンチップ・バイオテクノロジーズ | 使い捨てチップ型フローセルとそれを用いたフローサイトメーター |
JP2011172509A (ja) * | 2010-02-24 | 2011-09-08 | Ihi Corp | 微生物検出方法 |
EP2450457A1 (en) | 2010-11-09 | 2012-05-09 | Olympus Corporation | Method of analyzing genetically abnormals cells |
WO2013146993A1 (ja) | 2012-03-28 | 2013-10-03 | 株式会社オンチップ・バイオテクノロジーズ | 末梢循環腫瘍細胞単位の悪性度の検出方法及びそのキット |
EP2677317A1 (en) | 2012-06-20 | 2013-12-25 | ARKRAY, Inc. | Method for treating a blood component containing sample |
US9341550B2 (en) | 2010-11-19 | 2016-05-17 | On-Chip Biotechnologies Co., Ltd. | Method for detecting low concentrations of specific cell from high concentrations of cell populations, and method for collecting and analyzing detected cell |
JP2016174578A (ja) * | 2015-03-20 | 2016-10-06 | 東ソー株式会社 | 微小粒子選別装置および前記装置を備えた微小粒子回収装置 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002529704A (ja) * | 1998-10-29 | 2002-09-10 | セル ワークス インコーポレイテッド | 単一細胞の複数マーカー特徴付け |
WO2004076643A2 (en) * | 2003-02-27 | 2004-09-10 | Immunivest Corporation | CIRCULATING TUMOR CELLS (CTC’s): EARLY ASSESSMENT OF TIME TO PROGRESSION SURVIVAL AND RESPONSE TO THERAPY IN METASTATIC CANCER PATIENTS |
-
2005
- 2005-12-27 JP JP2005375195A patent/JP4986449B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002529704A (ja) * | 1998-10-29 | 2002-09-10 | セル ワークス インコーポレイテッド | 単一細胞の複数マーカー特徴付け |
WO2004076643A2 (en) * | 2003-02-27 | 2004-09-10 | Immunivest Corporation | CIRCULATING TUMOR CELLS (CTC’s): EARLY ASSESSMENT OF TIME TO PROGRESSION SURVIVAL AND RESPONSE TO THERAPY IN METASTATIC CANCER PATIENTS |
Cited By (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010071114A1 (ja) | 2008-12-18 | 2010-06-24 | シスメックス株式会社 | 血液試料中の癌細胞の検出方法 |
WO2010090279A1 (ja) | 2009-02-06 | 2010-08-12 | 株式会社オンチップ・バイオテクノロジーズ | 使い捨てチップ型フローセルとそれを用いたフローサイトメーター |
EP3907488A1 (en) | 2009-02-06 | 2021-11-10 | On-chip Biotechnologies Co., Ltd. | Disposable chip-type flow cell and flow cytometer using same |
JP2011172509A (ja) * | 2010-02-24 | 2011-09-08 | Ihi Corp | 微生物検出方法 |
EP2450457A1 (en) | 2010-11-09 | 2012-05-09 | Olympus Corporation | Method of analyzing genetically abnormals cells |
JP2012103077A (ja) * | 2010-11-09 | 2012-05-31 | Olympus Corp | 遺伝子異常細胞の解析方法 |
US9341550B2 (en) | 2010-11-19 | 2016-05-17 | On-Chip Biotechnologies Co., Ltd. | Method for detecting low concentrations of specific cell from high concentrations of cell populations, and method for collecting and analyzing detected cell |
US9506927B2 (en) | 2010-11-19 | 2016-11-29 | On-Chip Biotechnologies Co., Ltd. | Method for detecting low concentrations of specific cell from high concentrations of cell populations, and method for collecting and analyzing detected cell |
EP3441767A1 (en) | 2012-03-28 | 2019-02-13 | On-chip Biotechnologies Co., Ltd. | Apparatus for detecting degree of malignancy of circulating tumor cell unit, and kit for same |
WO2013146993A1 (ja) | 2012-03-28 | 2013-10-03 | 株式会社オンチップ・バイオテクノロジーズ | 末梢循環腫瘍細胞単位の悪性度の検出方法及びそのキット |
US11280792B2 (en) | 2012-03-28 | 2022-03-22 | On-Chip Biotechnologies Co., Ltd. | Apparatus for detecting the degree of malignancy of each of circulating tumor cells |
EP2677317A1 (en) | 2012-06-20 | 2013-12-25 | ARKRAY, Inc. | Method for treating a blood component containing sample |
US9816994B2 (en) | 2012-06-20 | 2017-11-14 | Arkray, Inc. | Method for treating a blood component containing sample |
US9429501B2 (en) | 2012-06-20 | 2016-08-30 | Arkray, Inc. | Method for treating a blood component containing sample |
JP2016174578A (ja) * | 2015-03-20 | 2016-10-06 | 東ソー株式会社 | 微小粒子選別装置および前記装置を備えた微小粒子回収装置 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP4986449B2 (ja) | 2012-07-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4986449B2 (ja) | 浮遊細胞の検査方法 | |
KR101764597B1 (ko) | 생물학적 샘플에서 희귀 사건 분석을 위한 고감도 다중매개변수 방법 | |
ES2886600T3 (es) | Procedimientos de identificación de células inmunitarias en tejido tumoral positivo para PD-L1 | |
JP5752688B2 (ja) | 抗原賦活プロセスのための方法及び装置 | |
JP2008209419A (ja) | 少なくとも2種の異なる分子マーカーを同時に測定することによって腫瘍およびそれらの前駆体段階を検出する場合に臨床的特異性を増強する方法 | |
BR112013014360B1 (pt) | método para detectar um alvo em uma amostra e kit | |
JP2002296274A (ja) | 子宮頸部塗抹標本における腫瘍細胞およびそれらの前駆体の検出方法 | |
CN114127562A (zh) | 一种肿瘤细胞表面标志分子pd-l1的检测方法 | |
JP2009530621A (ja) | 共有結合フルオロフォアを使用して免疫染色およびfishを組み合わせるための方法。 | |
CN113348356A (zh) | 用于针对形态学特征和生物标志物表达而制备和分析细胞样品的方法和系统 | |
WO2021213292A1 (zh) | 一种检测前列腺癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法 | |
KR101969847B1 (ko) | 동일 검체에서 여러 항원을 검출하기 위한 순차적 다중 면역염색법 | |
Heninger et al. | Live cell molecular analysis of primary prostate cancer organoids identifies persistent androgen receptor signaling | |
KR20190045200A (ko) | 방광암용 바이오마커로서의 케라틴 17 | |
JP6626097B2 (ja) | 乳がんにおける腫瘍内her2不均質性の意義及びそのための使用 | |
Zeppa et al. | Fine-needle cytology: technical procedures and ancillary techniques | |
WO2017204674A1 (ru) | Биочип для мультиплексного анализа и способ исследования клеток при диагностике онкологических заболеваний | |
CN104458375A (zh) | 核酸适体及其衍生物的用途及对组织冰冻切片的快速成像方法 | |
RU2490635C1 (ru) | Усовершенствованный способ приготовления препаратов фиксированных клеток для флуоресцентной in situ гибридизации | |
JP2017531797A (ja) | ポリマー及びポリマーを含むコンジュゲート | |
JP2008541019A (ja) | 組織学のための異種移植組織の対照 | |
RU2789782C1 (ru) | Способ определения гипердиплоидии с помощью морфометрического анализа при множественной миеломе | |
Bravaccini | Fluorescence in situ hybridization in urine samples (UroVysion Kit) | |
CN210071844U (zh) | 基于pd-l1受体的癌症检测装置 | |
RU197681U1 (ru) | Биочип для мультиплексного анализа |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20081215 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110726 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110926 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20111025 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120124 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120326 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120417 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20120329 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120424 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4986449 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150511 Year of fee payment: 3 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150511 Year of fee payment: 3 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |