JP2006521291A

JP2006521291A - 肝保護のためのピニトールまたはカイロイノシトールの使用

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Publication number: JP2006521291A
Application number: JP2005518772A
Authority: JP
Inventors: シン、ヨン・チュル; ジョン、ヨン・ジョン; キム、ジョン・ジン
Original assignee: アミコーゲンインコーポレイテッド
Priority date: 2003-03-26
Filing date: 2004-03-26
Publication date: 2006-09-21
Anticipated expiration: 2024-03-26
Also published as: EP1605926A1; EP1605926B1; WO2004084875A1; EP1605926A4; US20070098826A1; JP4422685B2; KR20040084168A; ATE549026T1

Abstract

【課題】肝を保護することによって肝疾患を予防および治療するための薬理学的活性物質の提供。
【解決手段】本発明は、肝保護のためのピニトールまたはカイロイノシトールの使用に関する。

Description

本発明は、ピニトール（Ｃ_７Ｈ_１４Ｏ_６、分子量１９４．１８）、カイロイノシトール（Ｃ_６Ｈ_１２Ｏ_６、分子量１８０．１６）、またはピニトールまたはカイロイノシトールを含む植物抽出物の肝保護のための使用に関する。

近来、食生活の変化とストレス、飲み過ぎ、および／または肝毒性物質によって様々な形態の肝疾患患者が急増している。特に、アルコール、薬物、化学物質、ウイルス性肝炎、胆道疾患のような代謝性疾患、自家免疫性疾患などによって発病する肝硬変は、肝血流量および代謝酵素活性の低下、および血中タンパク質の質および胆汁流量の変化などをもたらして全般的な肝機能を抑制する。

アルコールまたは脂肪含量の高い食品の過剰摂取、またはＢ型またはＣ型肝炎ウイルスの感染によって肝機能が悪化すると、肝炎、肝硬変または肝癌に発展し得る。特に、脂肪含有食品およびアルコールの過剰摂取は脂肪肝を誘発して、血中ＧＯＴ（glutamate-oxaloacetate transaminase）、ＧＰＴ（glutamate-pyruvate transaminase）およびγ−ＧＴＰ（γ-glutamyl transpeptidase）の数値が増加するようになる。

また、酸化的ストレス（oxdative stress）は、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、ウイルス性肝疾患に重要な原因として作用すると知られている（Arteel GE, Gastroenterology, 2003, 124: 778-90; Loguercio CおよびFederico A. Free Radic. Biol. Med., 2003, 1; 34(1):1-10; Mehta Kら、Nutr. Rev., 2002, 60(9):289-93; Gebhardt R. Planta Med., 2002, 68(4): 289-96; Adachi Mら、Free Radic. Biol. Med., 2002, 15, 32(6):487-91; Parola Mら、J. Hepatol., 2001, 35(2):297-306）。抗酸化酵素であるスーパーオキサイド・ディスムターゼ（superoxide dismutase, SOD）は酸化的ストレスを緩和することによって肝疾患の予防または治療に関与する。また、グルタチオンは非酵素的抗酸化剤であって、ラジカルによる細胞損傷を保護し、タンパク質またはＤＮＡの合成、物質輸送および酵素反応に重要な役割をすると知られている。

体内でカイロイノシトールに分解されるピニトールは、肥満、高脂血症および高血圧の治療または予防に効果的であると報告されている（米国特許第５，５５０，１６６号）。しかし、肝疾患の予防または治療においてピニトールまたはカイロイノシトールの薬理学的活性は報告されていない。
米国特許第５，５５０，１６６号公報 Arteel GE, Gastroenterology, 2003, 124:778-90 Loguercio CおよびFederico A. Free Radic. Biol. Med., 2003, 1; 34(1):1-10 Mehta Kら著、Nutr. Rev., 2002, 60(9):289-93 Gebhardt R.著、 Planta Med., 2002, 68(4):289-96 Adachi Mら著、 Free Radic. Biol. Med., 2002, 15, 32(6):487-91 Parola Mら著、 J. Hepatol., 2001, 35(2):297-306

したがって、本発明の目的は、肝を保護することによって肝疾患を予防および治療するための薬理学的活性物質を提供することである。

本発明の一実施態様によって、本発明は、哺乳動物において肝を保護するためのピニトールまたはカイロイノシトールの使用を提供する。

また、本発明の他の実施態様によって、本発明は、哺乳動物において肝を保護するためのピニトールまたはカイロイノシトールを含む植物抽出物の使用を提供する。

以下、本発明をさらに詳細に説明する。

本発明に使用され得る植物としては、大豆、マツ、ケンポナシ、エゾウコギ、イナゴマメなどがあり、大豆およびイナゴマメが好ましい。

本発明のピニトールまたはカイロイノシトールを含む植物抽出物は、前記植物を水または低級アルコール、アセトン、クロロホルム、塩化メチレン、エーテル、酢酸エチル、ヘキサンまたはこれらの混合溶媒などのような有機溶媒を用いて製造され得る。低級アルコールとしてはメタノール、エタノール、プロパノールおよびブタノールを使用してもよく、エタノールが好ましい。

本発明の抽出工程に用いられる植物は乾燥粉末の形態であり得る。具体的に、乾燥植物粉末に５〜１５倍、好ましくは１０倍の水を加えて１０〜８０℃、好ましくは３０〜５０℃で１〜２４時間、好ましくは２〜５時間抽出した後、濾過して植物の水抽出物を製造してもよい。植物の有機溶媒抽出物は植物粉末に１〜１５倍、好ましくは１０倍の有機溶媒を加えて室温で抽出して製造してもよい。前記抽出工程は必要に応じて２回以上繰り返して行ってもよく、濾過後減圧下で溶媒を除去して抽出物を粉末の形態で得られる。

肝疾患を予防および治療するために、または肝を保護するために、ピニトール、カイロイノシトール、またはピニトールまたはカイロイノシトールを含む植物抽出物は医薬組成物、食品組成物または飲料組成物を含む組成物の形態で哺乳動物に投与され得る。

本発明の医薬組成物は、ピニトールまたはカイロイノシトールを組成物の総重量に対して１〜１００重量％、好ましくは５〜５０重量％の量で含んでもよく、ピニトールまたはカイロイノシトールを含む植物抽出物を組成物の総重量に対して１〜５０重量％、好ましくは５〜３０重量％の量で含む。

本発明による医薬組成物は、血中ＧＯＴ、ＧＰＴおよびγ−ＧＴＰの数値を低下させ、スーパーオキサイド・ディスムターゼの活性を増加させるだけでなく、肝中のグルタチオンの濃度を増加させることによって肝を効果的に保護できる。

前記のような効能があるうえに、ピニトールまたはカイロイノシトール、またはピニトールまたはカイロイノシトールを含む植物抽出物を含有する本発明の医薬組成物は動物実験において毒性を示さず、肝機能に副作用を示さない。

医薬剤形は、通常の方法に従って製造することができる。剤形の製造において、活性成分を担体とともに混合または希釈するか、カプセル、サシェット（sachet）またはその他容器形態の担体に封入することが好ましい。担体が希釈剤として働く場合には、活性成分に対するビヒクル、賦形剤または媒質として作用する固体、半固体または液状物質であり得る。したがって、剤形は、錠剤、丸剤、粉末、サシェット、エリキシル、懸濁液、エマルジョン、溶液、シロップ、エーロゾル、軟質または硬質ゼラチンカプセル、滅菌注射溶液、滅菌粉末などの形態であり得る。

適切な担体、賦形剤および希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよびミネラル油などを挙げることができる。剤形は、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤、防腐剤などをさらに含むことができる。本発明の組成物は、哺乳動物に投与された後、活性成分の迅速、遅速または遅延放出を提供するために当業界で公知の方法を用いて剤形化することができる。

さらに、本発明の薬剤学的組成物は、経口、経皮、皮下、静脈または筋肉内投与を含む種々の経路を通じて投与され得る。ヒトの場合、ピニトールまたはカイロイノシトールの通常の１日投与量は０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり、１回または数回に分けて投与し得る。しかし、活性成分の実際投与量は治療する疾患、選択された投与経路、患者の年齢、性別および体重、および患者の症状を含む色々な関連因子を考慮して決定され、したがって、前記投与量は本発明の範囲を制限しない。

また、本発明は、有効量のピニトールまたはカイロイノシトール、またはピニトールまたはカイロイノシトールを含む植物抽出物を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物における肝疾患を予防または治療する方法を提供する。

さらに、本発明の前記ピニトールまたはカイロイノシトール、またはピニトールまたはカイロイノシトールを含む植物抽出物は肝を保護するために添加剤または補助剤として食品または飲料に添加してもよい。この際、食品または飲料中のピニトールまたはカイロイノシトールの量は健康食品の場合、全食品重量に対して０．１〜５０重量％、好ましくは１〜１０重量％の量で、健康飲料の場合、１００ｍｌを基準に０．０１〜１０ｇ、好ましくは０．１〜１ｇの量で添加してもよい。

本発明の健康飲料組成物は通常の飲料と同様に種々の甘味料および天然炭水化物などを追加の成分として含有してもよい。甘味料としては、タウマチン、ステビア抽出物（たとえば、レバウジオシドＡ、グリチルリチンなど）のような天然甘味料、およびサッカリン、アスパルテームなどの合成甘味料を使用してもよい。前記天然炭水化物の例としては、ブドウ糖、果糖などの単糖類；マルトース、スクロースなどの二糖類；デキストリン、シクロデキストリンなどの通常の多糖類およびキシリトール、ソルビトール、エリトリトールなどの糖アルコールがある。前記天然炭水化物は本発明の飲料組成物１００ｍｌ当り１〜２０ｇ、好ましくは５〜１２ｇの量で使用してもよい。

前記の他に本発明の食品または飲料組成物に追加され得る成分としては、種々の栄養剤、ビタミン、鉱物、合成香料、着色剤、ペクチン酸およびその塩、アルギン酸およびその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に用いられる炭酸化剤などがある。このような添加剤は本発明の組成物１００重量部当たり０〜２０重量部の量で添加され得る。

さらに、ピニトール、カイロイノシトール、またはピニトールまたはカイロイノシトールを含む植物抽出物および健康補助食品の開発のための付加的な薬草抽出物を含む食品としては各種の食品類、飲料類、ゴム類、ビタミン複合剤などがある。

（実施例）
以下、本発明を下記実施例によってさらに詳細に説明する。ただし、これらは本発明を例示するためのものであり、本発明の範囲を制限しない。

ピニトールを含む植物抽出物の製造および分析
大豆、松葉、ケンポナシおよびエゾウコギを各々室温で乾燥した後、粉末化した。乾燥粉末１０ｇに蒸留水１００ｍｌを加え、２５℃で６時間抽出した。

各抽出物中のピニトールの含量はDionex Carbopak MA-1カラムおよび溶離液として１０ｍＭＮａＯＨ溶液を用いて高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で測定し、その結果を下記表１に示す。

ピニトールの経口毒性実験
特定病原体がない（specific pathogens free）６週齢の雌スプラーグ・ドーリー（Sprague-Dawley）ラット１５匹（体重１３０〜１４７ｇ）と雄ラット１５匹（体重１１０〜１２３ｇ）を温度２３±３℃、相対湿度５５±１５％および光周期１２Ｌ／１２Ｄの存在下で飼育した。実験動物用飼料（Harlan、米国）および飲料水は滅菌した後でラットに摂取させた。ピニトールの経口投与する前にラットを１週間の間順応させた。

ピニトールを注射用生理食塩水に溶かした後、各ラットに５，０００ｍｇ／ｋｇ体重ずつ１回経口投与した。投与後６時間ごとに副作用または致死について観察し、その後毎日１回以上２週間観察した。また、投与後１日、３日、７日および１４日に各ラットの体重を測定してピニトールの効果を調査した。また、１４日目に生存しているラットを犠牲して内部の臓器を肉眼で観察した。

すべてのラットは１４日目まで生存しており、ピニトールは５，０００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で毒性を示さなかった。解剖結果、ラットは特別な病理的異常を示さず、１４日間の試験期間中、体重減少は観察されなかった。したがって、ピニトールを動物に経口投与する場合、毒性を示さないことが分かった。

四塩化炭素（ＣＣｌ_４）によって損傷した肝に対する保護活性
スプラーグ・ドーリーラット（体重１８０〜２００ｇ）８０匹を２３±３℃、相対湿度５５±１５％および光周期１２Ｌ／１２Ｄの条件下で飼育し、実験動物用飼料（Harlan、米国）および飲料水は滅菌した後ラットに摂取させた。

ラットを８群に分けた後、正常群を除く各群に実験１日目と５日目に四塩化炭素を０．５ｍｌ／ｋｇの量で皮下注射した。実験２日目に水１０ｍｌに溶かしたピニトールまたはカイロイノシトールを実験群のラットに各々５〜２０ｍｇ／ｋｇ体重の量で経口投与した。正常群および対照群にはピニトールの代わりに蒸留水１０ｍｌを投与した。８日目に各ラットの眼窩静脈層から血液を採取して血液分析器（Vitros DT-60,Johnson & Johnson）を用いて血中ＧＯＴおよびＧＰＴ濃度を測定し、その結果を下記表２に示す。血中ＧＯＴおよびＧＰＴ濃度の低下率（％）は下記式に従って算出した。

前記表２から分かるように、対照群においてはＧＯＴおよびＧＰＴ濃度が正常群に比べて著しく増加した。ピニトールを投与した実験群においては血中ＧＯＴおよびＧＰＴ濃度が各々４９．７〜７３．４％および５４．６〜８０．３％と正常群に比べて低く、カイロイノシトールを投与した実験群においては各々４４．０〜７６．１％および４５．０〜７８．２％と低かった。したがって、ピニトールおよびカイロイノシトールは別個の肝保護活性を示すことが分かる。

肝におけるＳＯＤ活性の測定
実験動物として６週齢のスプラーグ・ドーリーラット７０匹を用いて温度２３±３℃、湿度５５±１５％、光周期１２Ｌ／１２Ｄ（午前８時〜午後８時）および照度１５０〜３００ＬＵＸの条件下で飼育し、実験動物用飼料（Harlan、米国）および飲料水は滅菌した後で摂取させた。

ラットを７群に分けた後、水１０ｍｌに溶かしたピニトールを実験群のラットに各々２００〜１，０００ｍｇ／ｋｇ体重の量で毎日１回４日間経口投与した。比較群にはシリマリン（Sigma）を２００ｍｇ／ｋｇ体重の量で、正常群および対照群には各々蒸留水１０ｍｌを投与した。実験４日目には正常群を除く各群に四塩化炭素と大豆油の１：１（v/v）混合物０．５ｍｌ／ｋｇをピニトール投与９０分後に投与した。２４時間後、各ラットから肝組織を切り出してＳＯＤの活性をNeootら（Methods Enzymol., 186:209-219, 1993）の方法に従って測定し、student-t Testでデータの有意義性を検証し、その結果を下記表３に示す。

前記表３から分かるように、比較群および実験群１のラットのＳＯＤ活性は対照群に比べて各々１８％および７％減少したのに対し、実験群２〜４においては各々２４％、４４％および３５％増加した。したがって、ピニトール３００ｍｇ／ｋｇ以上の経口投与は肝においてＳＯＤの活性を増加させることが分かる（ｐ＜０．０５）。

肝におけるグルタチオン含量の測定
ラットに糖尿を誘発するために、０．０１Ｍシトレート緩衝溶液（ｐＨ４．５）に溶かしたストレプトゾトシン（streptozotocin, Sigma Chemical Co.、米国）を４５ｍｇ／ｋｇ体重の量で８週齢のスプラーグ・ドーリーラットの腹腔に注射した。３日後、各ラットの尻尾から静脈血を採取して血糖を測定し、血糖が２５１±７ｍｇ／ｄｌ以上のラットを糖尿ラットとして分類した。糖尿ラットを各１２〜１５匹ずつ３群に分け、そのうち２群のラットに水１０ｍｌに溶かしたピニトールまたはカイロイノシトールを１０ｍｇ／ｋｇ体重の量で毎日４日間経口投与した（実験群１および２）。正常群および対照群（糖尿群）のラットには各々蒸留水１０ｍｌを投与した。ラットを犠牲させる前に１８時間絶食させた後、エチルエーテルで麻酔した後、犠牲させて肝を切り出した後、冷たい生理食塩水で洗浄した。エルマン（Ellman）の方法（Arch. Biochem. Biophy., 70-77 (1959)）に従って肝均質液中のグルタチオン含量を測定し、その結果を下記表４に示す。

前記表４から分かるように、対照群（糖尿群）ラットのグルタチオン含量は正常群に比べて著しく減少（３８％）したのに対し、実験群１（ピニトール投与）および実験群２（カイロイノシトール投与）のグルタチオン含量は正常群に比べて若干減少した９６％および８５％の高い値を示した。

肝保護活性試験
血清ＧＯＴまたはγ−ＧＴＰが５０ＩＵ／Ｌ以上の成人男性７名および女性８名（平均年齢：５１．８歳）に一日６００ｍｇのピニトールを２ヶ月間経口投与した。ピニトール投与前後の血中ＧＯＴ、ＧＰＴおよびγ−ＧＴＰ数値を測定し、その結果を下記表５に示す。

前記表５から分かるように、ピニトール投与後、血中ＧＯＴ、ＧＰＴおよびγ−ＧＴＰは各々４５．３％、５１．８％および４１．１％減少した。

（製剤例）
本発明の組成物は、活性成分を薬剤学的賦形剤とともに混合して通常の方法に従って様々な医薬剤形の形態で製剤化できる。以下、製剤例を例示するが、本発明はこれらに限定されない。

製剤例１：散剤の製造

前記成分を混合し、気密容器に封入して散剤を製造した。

製剤例２：錠剤の製造

前記成分を混合した後通常の方法に従って打錠して錠剤を製造した。

製剤例３：カプセル剤の製造

前記成分を混合した後、通常の方法に従ってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。

製剤例４：注射剤の製造

前記活性成分を注射用蒸留水に溶かした後、ｐＨを約７．５に調整した。反応溶液を通常の方法に従って注射用蒸留水とともに２ｍｌ容量のアンプルに充填し、滅菌させて注射剤を製造した。

＜健康飲料の製造＞
ピニトールまたはカイロイノシトール１〜１０重量％、砂糖５〜１０重量％、クエン酸０．０５〜０．３重量％、カラメル０．００５〜０．０２重量％およびビタミンＣ０．１〜１重量％を混合し、蒸留水を加えてシロップを製造した。このようにして得られたシロップを８５〜９８℃で２０〜１８０秒間殺菌し、冷却水と１：４の比率で混合した後、炭酸ガス０．５〜０．８２％を注入してピニトールまたはカイロイノシトールを含有する炭酸飲料を製造した。

また、ピニトールまたはカイロイノシトールを液状果糖（０．５％）、オリゴ糖（２％）、砂糖（２％）、食塩（０．５％）および水（７５％）と均質に混合して瞬間殺菌して健康飲料を製造した。

Claims

哺乳動物において肝を保護するためのピニトールまたはカイロイノシトールの使用。
前記ピニトールまたはカイロイノシトールがスーパーオキサイド・ディスムターゼ（superoxide dismutase, SOD）の活性を増加させることを特徴とする請求項１記載の使用。
前記ピニトールまたはカイロイノシトールが肝のグルタチオン濃度を増加させることを特徴とする請求項１記載の使用。
前記哺乳動物がヒトであることを特徴とする請求項１記載の使用。
前記ピニトールまたはカイロイノシトールがそれを含む組成物の形態で哺乳動物に投与され、前記組成物は医薬組成物、食品組成物および飲料組成物からなる群から選ばれることを特徴とする請求項１記載の使用。
哺乳動物において肝を保護するためのピニトールまたはカイロイノシトールを含有する植物抽出物の使用。
前記ピニトールまたはカイロイノシトールを含有する植物抽出物がスーパーオキサイド・ディスムターゼの活性を増加させることを特徴とする請求項６記載の使用。
前記ピニトールまたはカイロイノシトールを含有する植物抽出物が肝のグルタチオン濃度を増加させることを特徴とする請求項６記載の使用。
前記哺乳動物がヒトであることを特徴とする請求項６記載の使用。
前記植物が、大豆、マツ、ケンポナシ、エゾウコギおよびイナゴマメからなる群から選ばれることを特徴とする請求項６記載の使用。
前記植物抽出物が水または有機溶媒抽出物であることを特徴とする請求項６記載の使用。
前記植物抽出物が、該植物の粉末に５〜１５倍の水を加え、１０〜８０℃で１〜２４時間抽出した後、濾過して得られることを特徴とする請求項１１記載の使用。
前記植物抽出物がそれを含む組成物の形態で哺乳動物に投与され、前記組成物が医薬組成物、食品組成物および飲料組成物からなる群から選ばれることを特徴とする請求項６記載の使用。
有効量のピニトール、カイロイノシトール、またはピニトールまたはカイロイノシトールを含有する植物抽出物を哺乳動物に投与することを含む、肝疾患を予防または治療する方法。
前記ピニトールまたはカイロイノシトールの有効量が０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日であることを特徴とする請求項１４記載の方法。