JP2006501225A - 酵素含有組成物、かかる組成物を製造する方法およびその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
プロナーゼ:1単位は、基質としてカゼインを使用する場合、40℃、pH7.5で1分間あたり25μgのチロシンへの変換に対応する。
コラゲナーゼ:1単位は、基質としてコラーゲンを使用する場合、37℃およびpH7.5で5時間で1mmolのL−ロイシンへの変換に対応する。
ペプシン:1単位は、TCAによる変換されたヘモグロビンのA280nm、37℃での0.01のΔEに対応する。
リゾチーム:1単位は、pH6.24、25℃で1分間あたり0.001の活性を生じる。2.6mlの検出容積で、基質としてM.リソデイクチス(M.lysodeikticus)細胞を使用する。
デキストラナーゼ:基質としてデキストランを使用する場合、37℃、pH6.0で1分間あたり25μmolのイソマルトースへの変換に対応する。
α−アミラーゼ:1単位は、基質としてデンプンを使用する場合、20℃、pH6.9で3分間における1mgのマルトースの変換に対応する。
プロテイナーゼK:1Anson単位は、基質としてヘモグロビンを使用する場合、pH7.5、35℃での1μmolのフォリン陽性アミノ酸に対応する。
・5,000〜200,000U/ml溶媒、好ましくは、10,000〜150,000U/ml溶媒、より好ましくは、70,000〜100,000U/ml溶媒の範囲のリゾチーム、ならびに
・10〜1,000U/ml溶媒、好ましくは50〜500U/ml溶媒、およびより好ましくは90〜250U/ml溶媒の範囲のデキストラナーゼ
を有する。
ペプシン:約0.1〜約1.0重量%
リン酸二水素ナトリウム:約0.6〜約2.4重量%
水酸化ナトリウム:約0.001〜約0.5重量%
ヒドロキシエチルセルロース:約0.2〜約1.0重量%
メチルパラベン:約0.005〜約0.05重量%
プロピルパラベン:約0.005〜約1.0重量%
水:添加して100重量%とする。
リン酸二水素ナトリウム:約10〜約20重量%
リン酸:約5〜約10重量%
ポリエチレングリコール:約2〜約5重量%
ヒドロキシエチルセルロース:約0.2〜約1.0重量%
水:添加して100重量%とする。
pH値:約1.5〜約3.5
粘度:約10〜約50mPas
ペプシン活性:約1,000〜約10,000
緩衝能:約0.5〜約2.0。
酵素ペプシン、コラゲナーゼ、リゾチーム、プロナーゼ、デキストラナーゼ、およびα−アミラーゼは、SIGMA社から購入した。酵素プロテイナーゼKは、ICN社から購入した。
本発明に従う溶液の効力の決定に関する試験を、抽出したカリエス歯によりインビトロで行った。
必要であれば、カリエス領域を被覆するエナメル質層を、高速回転ドリルで除去した。
概略的浄化は必ずしも必要ではないが、歯科医師の治療の効果の試験を容易にする。エキスカベーターまたはカリエススプーンにより、カリエス病巣の概略的浄化を実施した。
a)20秒間 100μlの溶液1
b)リンス
c)20秒間 100μlの溶液1
d)リンス
e)20秒間 100μlの溶液2
f)リンス
g)以後、必要に応じて充填療法
カリエス病巣の感染した硬い歯質を除去するための酵素溶液を、要件に従って適用した後、抽出および治療した歯を通気し、包埋塊(サイトフィックス(cytofix)、シュトルヤーズ(Struers)社)に固定した。内部ホールソーにより、カリエス病巣を介する歯セクションを段階的に作製した。歯セクションを被覆包埋材料から解放し、それぞれを細菌に対する1mlの生/死染料溶液(ライブ/デッド・バックライト(Live/Dead BacLight)、モレキュラー・プローブス(Molecular Probes)社)中にインキュベートした。インキュベーション中、歯セクションを光から保護して、貯蔵した。蛍光顕微鏡(ツァイス(Zeiss)社、アキシオプラン(Axioplan)2)により、反射光下、24FITCフィルター、630および1000の拡大倍数で注目した細菌について研究した。同じ条件下の非治療サンプルにおいて細菌ベッドを観察したところ、本発明に従って治療したサンプルは、細菌が全く認められなかった。より低い程度で、カリエスにより崩壊した歯材料の場合、本発明に従うただ1種の溶液または1種のペプシン含有溶液のそれまでの1回の適用により、カリエスに先に冒された歯の細菌が認められない領域が生じ得る。
本発明に従う2成分系を以下の通りに調製した。
a)20秒間 100μlの溶液
b)濯ぐ
c)20秒間 100μlの溶液
d)濯ぐ
e)20秒間 100μlの溶液
f)濯ぐ
g)以後、必要に応じて充填療法
カリエス病巣の感染した硬い歯質を除去するための酵素溶液を、要件に従って適用した後、抽出および治療した歯を通気し、包埋塊(サイトフィックス(cytofix)、シュトルヤーズ(Struers)社)に固定した。内部ホールソーにより、カリエス病巣を介する歯セクションを段階的に作製した。歯セクションを被覆包埋材料から解放し、それぞれを細菌に対する1mlの生/死染料溶液(ライブ/デッド・バックライト(Live/Dead BacLight)、モレキュラー・プローブス(Molecular Probes)社)中にインキュベートした。インキュベーション中、歯セクションを光から保護して、貯蔵した。蛍光顕微鏡(ツァイス(Zeiss)社、アキシオプラン(Axioplan)2)により、反射光下、24FITCフィルター、630および1000の拡大倍数で注目した細菌について研究した。同じ条件下の非治療サンプルにおいて細菌ベッドを観察したところ、本発明に従って治療したサンプルは、細菌が全く認められなかった。より低い程度で、カリエスにより崩壊した歯材料の場合、上記の本発明に従う溶液のそれまでの1回の適用により、カリエスに先に冒された歯の細菌が認められない領域が生じ得る。
Claims (33)
- 少なくとも1種の生物学的に活性なプロテアーゼと、
少なくとも1種の生物学的に活性なグリコシダーゼと、
少なくとも1種の緩衝液と、を含む組成物であって、
プロテアーゼとグリコシダーゼの活性比は、1,000,000:1〜1:1,000,000であり、総酵素活性は少なくとも2U/mlである、組成物。 - 前記組成物は、プロテアーゼとして、プロテイナーゼK、コラゲナーゼもしくはプロナーゼのうち少なくとも1種、または2種あるいは3種の混合物を含む、請求項1に記載の組成物。
- 前記組成物は、グリコシダーゼとして、リゾチーム型、α−アミラーゼ型もしくはデキストラナーゼ型のグリコシダーゼのうち少なくとも1種、または2種あるいは3種の混合物を含む、請求項1または2に記載の組成物。
- 前記組成物は、少なくとも2種のプロテアーゼと、少なくとも1種のグリコシダーゼとを含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物は、プロテイナーゼK、コラゲナーゼ、リゾチーム、およびデキストラナーゼを含む、請求項1〜4のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物は、少なくとも1種の溶媒を含む、請求項1〜5のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物は、少なくとも1種の極性溶媒を含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物は、濃度が約0.001〜約10mol/lである緩衝液を少なくとも1種含む、請求項1〜7のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物は、少なくとも1種のリン酸緩衝液を含む、請求項1〜8のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物は、以下の群のアジュバント:
i. 錯化剤
ii. 酵素基質
iii. 酵素エフェクター
iv. 増粘剤
v. 保存剤
vi. 安定化剤
の1種もしくはそれ以上から選択されるアジュバントを少なくとも1種含む、請求項1〜9のいずれか1項に記載の組成物。 - 前記少なくとも1種の酵素は、pH1〜10の範囲で酵素活性を有する、請求項1〜10のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記少なくとも1種の酵素は、pH5〜8の範囲で酵素活性を有する、請求項1〜11のいずれか1項に記載の組成物。
- 少なくとも1種の生物学的に活性なプロテアーゼと、少なくとも1種の生物学的に活性なグリコシダーゼを、プロテアーゼとグリコシダーゼの活性比が1,000,000:1〜1:1,000,000であり、総酵素活性が少なくとも2U/mlであるように混合する、請求項1〜12のいずれか1項に記載の組成物を製造する方法。
- 少なくとも2種の酵素を含むキットであって、前記酵素は、請求項1〜12のいずれか1項に記載の組成物を得るために混和可能である、キット。
- 前記キットは分離された溶媒を含む、請求項14に記載のキット。
- 請求項1〜12のいずれか1項に記載の少なくとも1種の組成物と、少なくとも1種の処理溶液とを含むキットであって、前記処理溶液は、pH4未満の酸性範囲にタンパク質分解触媒作用の至適値を有する少なくとも1種のプロテアーゼを含む、キット。
- カリエスを除去するための治療剤を製造するための請求項1〜12のいずれか1項に記載の組成物の使用。
- 水、酸、ペプシンおよび流動性添加物を含む4.0もしくはそれ以下のpH値を有する組成物であって、前記ペプシンの濃度は1〜50,000U/mgであり、前記組成物の粘度は10〜1000mPasである、組成物。
- さらに、ポリエーテルグリコール、もしくは両性イオン界面活性剤、またはポリエーテルおよび両性イオン界面活性剤の混合物が含まれる、請求項18に記載の組成物。
- 前記組成物は阻害剤を含有することを特徴とする、請求項18または19に記載の組成物。
- 2種の成分AおよびBを含む組成物であって、
a)成分Aは、水と、ペプシンの活性が最も高いpH値より大きなpH値を提供する緩衝系と、流動性添加物とを含み、
b)成分Bは、水と、ペプシンの活性が最も高いpH値より小さなpH値を提供する酸と、増粘剤と、ポリエーテル、もしくは両性イオン界面活性剤、またはポリエーテルおよび両性イオン界面活性剤の混合物と、を含む組成物。 - 前記成分Aは50,000U/ml未満のペプソン活性を有することを特徴とする、請求項21に記載の組成物。
- 前記成分Aは20mg/ml未満のペプシンを含有することを特徴とする、請求項21または22に記載の組成物。
- 前記成分AはpH5〜6のリン酸緩衝液を含有することを特徴とする、請求項21〜23のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記成分BはpH1.5〜4.0のリン酸を含有することを特徴とする、請求項21〜24のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記成分Aは増粘剤として多糖を含有することを特徴とする、請求項21〜25のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記成分Bはポリエチレングリコールもしくはベタインまたはその両方を含有することを特徴とする、請求項21〜26のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記成分Bは流動性添加物を含有することを特徴とする、請求項21〜27のいずれか1項に記載の組成物。
- カリエスを除去するための治療剤を製造するための、pH7未満の範囲でタンパク質分解活性を有する酵素の使用。
- 前記酵素は、最大でもpH4までの範囲に触媒作用の至適値を有する、請求項29に記載の使用。
- 前記酵素はペプシンである、請求項29または30に記載の使用。
- カリエスを除去するための治療剤を製造するためのグリコシダーゼの使用。
- 少なくとも1種のチャンバは成分Aを含有し、少なくとも1種のチャンバは成分Bを含有し、ここで、前記成分Aは水と、ペプシンの活性が最も高いpH値より大きなpH値を提供する緩衝系と、流動性添加物とを含み、前記成分Bは、水と、ペプシンの活性が最も高いpH値よりも小さなpH値を提供する酸と、流動性添加物と、ポリエーテル、もしくは両性イオン界面活性剤、またはポリエーテルおよび両性イオン界面活性剤と、の混合物を含むことを特徴とする、液体を貯蔵および分配するためのマルチチャンバデバイス。
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