JP2006143660A - コラーゲン合成促進剤及び皮膚外用剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】α−トコフェリルリン酸、又はそのリン酸基をエーテル化、エステル化、ポリオキシエチレン化した誘導体/又はその塩とコラーゲンペプチドとを含有するコラーゲン合成促進剤及び皮膚外用剤。これら誘導体又はその塩とコラーゲンペプチドとの混合物は、コラーゲン合成促進効果に優れ、シワやタルミの改善に有用である。
【選択図】なし
Description
コラーゲンタンパクとして、ヒラメ皮より調製したゼラチン30gを蒸留水300mLに加温溶解した。ペプシン(日本バイオコン社製)300mgを加えて、酸にてpH3.5に調整した後50℃で1時間放置した。反応終了後、反応液を中和し、100℃で15分間加熱して酵素を失活させた。次いで活性炭素処理後、凍結乾燥して平均分子量5000のコラーゲンペプチドを得た。
製造例1における活性炭素処理液を蒸留水で平衡化したBio−Gel P−2(BIO−RAD社製)によるゲル濾過クロマトグラフィーを行い、平均分子量が280、500、1000の画分を凍結乾燥した。
コラーゲンタンパクとして、鮭皮より調製したゼラチン30gを蒸留水300mLに加温溶解した。パパイン(天野エンザイム社製)300mgを加え、アンモニア水にてpH7.0に調製した後50℃で1時間放置した。反応終了後、反応液を100℃で15分間加熱し、酵素を失活させた。次いで活性炭素処理後、凍結乾燥し平均分子量10000のコラーゲンペプチドを得た。
製造例3の活性炭素処理液を蒸留水で平衡化したBio−Gel P−2(BIO−RAD社製)によるゲル濾過クロマトグラフィーを行い、平均分子量が500、2000の画分を凍結乾燥した。
コラーゲンタンパクとして、鯛鱗より調製したゼラチン30gを蒸留水300mLに加温溶解した。コラゲナーゼタイプI(Worthington Biochemical Corp製)300mgを加え、アンモニア水にてpH7.5に調製した後37℃で1時間放置した。反応終了後、反応液を100℃で15分間加熱し、酵素を失活させた。次いで活性炭素処理後、凍結乾燥し平均分子量1000のコラーゲンペプチドを得た。
製造例5の活性炭素処理液を蒸留水で平衡化したBio−Gel P−2(BIO−RAD社製)によるゲル濾過クロマトグラフィーを行い、平均分子量400の画分を凍結乾燥した。
コラーゲンタンパクとして、カレイ皮より調製したゼラチン30gを蒸留水300mLに加温溶解した。パパイン(天野エンザイム社製)、バチラス属の微生物が産生するプロテアーゼ(天野エンザイム社製)を各300mg加え、アンモニア水にてpH7.5に調製した後50℃で3時間放置した。反応終了後、反応液を100℃で15分間加熱し、酵素を失活させた。次いで活性炭素処理後、凍結乾燥し平均分子量3000のコラーゲンペプチドを得た。
製造例7の活性炭素処理液を蒸留水で平衡化したBio−Gel P−2(BIO−RAD社製)によるゲル濾過クロマトグラフィーを行い、平均分子量800の画分を凍結乾燥した。
処方 配合量
1.コラーゲンペプチド(平均分子量500、製造例4) 10.0重量%
2.dl−α−トコフェリルリン酸ナトリウム 1.0
3.スクワラン 5.5
4.オリーブ油 3.0
5.ステアリン酸 2.0
6.ミツロウ 2.0
7.ミリスチン酸オクチルドデシル 3.5
8.ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) 3.0
9.ベヘニルアルコール 1.5
10.モノステアリン酸グリセリン 2.5
11.香料 0.1
12.1,3−ブチレングリコール 8.5
13.パラオキシ安息香酸エチル 0.05
14.パラオキシ安息香酸メチル 0.2
15.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分3〜10を加熱溶解して混合し、70℃に保ち油相とする。成分1、2および12〜15を加熱溶解して混合し、75℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、45℃で成分11を加え、さらに30℃まで冷却して製品とする。
処方例1において、dl−α−トコフェリルリン酸ナトリウムを精製水に置き換えたものを従来のクリームとした。
処方 配合量
1.コラーゲンペプチド(平均分子量800、製造例8) 2.0重量%
2.d−α−トコフェリルリン酸ナトリウム 0.5
3.1,3−ブチレングリコール 8.0
4.グリセリン 2.0
5.キサンタンガム 0.02
6.クエン酸 0.01
7.クエン酸ナトリウム 0.1
8.エタノール 5.0
9.パラオキシ安息香酸メチル 0.1
10.ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油(40E.O.) 0.1
11.香料 適量
12.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分1〜7および12と、成分8〜11をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
処方 配合量
1.コラーゲンペプチド(平均分子量500、製造例4) 5.0重量%
2.dl−α−トコフェリルリン酸ジナトリウム 2.0
3.スクワラン 5.0
4.オリーブ油 5.0
5.ホホバ油 5.0
6.セタノール 1.5
7.モノステアリン酸グリセリン 2.0
8.ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) 3.0
9.ポリオキシエチレンソルビタン
モノオレエート(20E.O.) 2.0
10.香料 0.1
11.プロピレングリコール 1.0
12.グリセリン 2.0
13.パラオキシ安息香酸メチル 0.2
14.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分3〜9を加熱溶解して混合し、70℃に保ち油相とする。成分1、2および11〜14を加熱溶解して混合し、75℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、45℃で成分10を加え、さらに30℃まで冷却して製品とする。
処方 配合量
1.コラーゲンペプチド(平均分子量1000、製造例5) 0.5重量%
2.d−α−トコフェリルリン酸カリウム 0.3
3.エタノール 5.0
4.パラオキシ安息香酸メチル 0.1
5.ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 0.1
6.香料 適量
7.1,3−ブチレングリコール 5.0
8.グリセリン 5.0
9.キサンタンガム 0.1
10.カルボキシビニルポリマー 0.2
11.水酸化カリウム 0.2
12.精製水にて全量を100とする
成分3〜6と、成分1、2および7〜12をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
処方 配合量
1.コラーゲンペプチド(平均分子量1000、製造例2) 5.0重量%
2.dl−α−トコフェリルリン酸ナトリウム 0.1
3.ポリオキシエチレンセチルエーテル(30E.O.) 2.0
4.モノステアリン酸グリセリン 10.0
5.流動パラフィン 5.0
6.セタノール 6.0
7.パラオキシ安息香酸メチル 0.1
8.プロピレングリコール 10.0
9.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分3〜6を加熱溶解して混合し、70℃に保ち油相とする。成分1、2および7〜9を加熱溶解して混合し、75℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化し、かき混ぜながら30℃まで冷却して製品とする。
処方 配合量
1.コラーゲンペプチド(平均分子量500、製造例4) 3.0重量%
2.dl−α−トコフェリルリン酸カリウム 0.2
3.ポリビニルアルコール 12.0
4.エタノール 5.0
5.1,3−ブチレングリコール 8.0
6.パラオキシ安息香酸メチル 0.2
7.パラオキシエチレン硬化ヒマシ油(20E.O.) 0.5
8.クエン酸 0.1
9.クエン酸ナトリウム 0.3
10.香料 適量
11.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分1〜11を均一に溶解し製品とする。
処方 配合量
1.コラーゲンペプチド(平均分子量1000、製造例2) 1.0重量%
2.d−α−トコフェリルリン酸ジナトリウム 0.05
3.ステアリン酸 2.4
4.ポリオキシエチレンソルビタン
モノステアレート(20E.O.) 1.0
5.ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) 2.0
6.セタノール 1.0
7.液状ラノリン 2.0
8.流動パラフィン 3.0
9.ミリスチン酸イソプロピル 6.5
10.パラオキシ安息香酸ブチル 0.1
11.カルボキシメチルセルロースナトリウム 0.1
12.ベントナイト 0.5
13.プロピレングリコール 4.0
14.トリエタノールアミン 1.1
15.パラオキシ安息香酸メチル 0.2
16.二酸化チタン 8.0
17.タルク 4.0
18.ベンガラ 1.0
19.黄酸化鉄 2.0
20.香料 適量
21.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分3〜10を加熱溶解し、80℃に保ち油相とする。成分21に成分11をよく膨潤させ、続いて、成分1、2および12〜15を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分16〜19を加え、冷却し、45℃で成分20を加え、かき混ぜながら30℃まで冷却して製品とする。
処方 配合量
1.コラーゲンペプチド(平均分子量1000、製造例5)20.0重量%
2.dl−α−トコフェリルリン酸ナトリウム 0.1
3.炭酸水素ナトリウム 50.0
4.黄色202号 適量
5.香料 適量
6.無水硫酸ナトリウムにて全量を100とする
[製造方法]成分1〜6を均一に混合し製品とする。
コンフルエントな状態の正常ヒト皮膚線維芽細胞に30mJ/cm2の紫外線B波を処置し、試料を添加したEagle's MEM培地にてさらに24時間培養した後、総RNAの抽出を行った。正常ヒト皮膚線維芽細胞から抽出した総RNAを基にRT−PCR法によりコラーゲンmRNA発現量の測定を行った。RT−PCR法にはTaKaRa RNA PCR Kit(AMV)Ver.2.1を用いた。また、内部標準としてはGAPDHを用いた。その他の操作は定められた方法に従い、PCR反応液をアガロースゲル電気泳動に供し、コラーゲン及びGAPDHのmRNA発現をバンドとして確認した。これらのバンドをポラロイドカメラにて撮影してデンシトメーターを用いて定量化し、コラーゲンmRNAの発現量を内部標準であるGAPDH mRNA発現量に対する割合として求めた。合成促進率の計算は、この例では、用いたデンシトメーターの数値を利用して、次式により計算した。その結果、表1および2に示すように、化学式(1)で表される化合物および/またはそれらの塩とコラーゲンペプチドの混合物は、コラーゲンペプチドのみと比較して優れたコラーゲン合成促進効果を示した。なお、化学式(1)で表される化合物および/またはそれらの塩自体には、100μMでコラーゲン合成促進効果はない。
A:試料を添加した場合のデンシトメーターの数値
B:試料を添加しない場合のデンシトメーターの数値
処方例1のクリーム及び比較例1のクリームを用いて、各々女性30人(31〜50才)を対象に2ヶ月間の使用試験を行った。使用後、シワ、たるみ、肌の弾力についてのアンケート調査を行って、老化防止効果を判定した。
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