JP2006122012A - 細胞組織体マイクロデバイス - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 細胞を保持するための細胞保持チャンバーを有し、前記細胞保持チャンバーは、少なくとも一つの組織体形成領域30を含む底面20と、当該細胞保持チャンバーに培養液を流入させるための流入口と、当該細胞保持チャンバーから当該培養液を流出させるための流出口と、を有し、前記組織体形成領域30は、細胞接着性を示す1つの第一領域32と、当該第一領域32を囲み、当該第一領域32に比べて低い細胞接着性を示す第二領域34と、を含む細胞組織体マイクロデバイスとする。
【選択図】 図2
Description
次に本マイクロデバイス1を用いて細胞組織体を形成させた実施例について説明する。
本実施例においては、本マイクロデバイス1の基板10として、ポリメチルメタクリレート製の平板(24mm×24mm、厚さ400μm)を用いた。すなわち、このポリメチルメタクリレート平板の表面の一部に、マシニングセンタ(卓上型NC微細加工機、株式会社ピーエムティー製)を用いたフライス加工処理により、図5に示すような底面20と流入口22と流出口24とをもつ細胞保持チャンバー12と、一端に開放された送液流入口15を形成し、他端が当該流入口22に連通する流入路14と、一端に開放された送液流出口17を形成し、他端が当該流出口24に連通する流出路16と、の組を1つ形成した。この細胞保持チャンバー12は、図5に示すように、長手方向長さL1が5mm、幅W1が5mmの矩形領域と、当該矩形領域の長手方向両端に連なる長さL2が2.5mmのテーバー領域とを含む底面20を有し、深さが200μmとなるよう形成した。なお、このテーパ−領域を設けることにより、流入口22から当該細胞保持チャンバー12内に流入させる培養液の当該細胞保持チャンバー幅方向の流速分布を、簡易的に比較的均一なものとすることができる。また、図5に示すように、この細胞保持チャンバー12に連通する流入路14と流出路16とは、幅W2が300μm、深さが200μmとなるよう形成した。
次に、このように作製した本マイクロデバイス1の細胞保持チャンバー12に培養液を灌流させるための培養システムを作製した。すなわち、ガラス瓶内に保持した培養液(30mL)をこの細胞保持チャンバー12内に灌流させることができるよう、一端が当該ガラス瓶内に挿入されたシリコン製のチューブ(内径0.5mm、外形1.0mm、長さ30cm)の他端を当該細胞保持チャンバー12に連通する流入路14の送液流入口15に接続するとともに、一端が当該ガラス瓶内に挿入された他のシリコンチューブの他端を当該細胞保持チャンバー12に連通する流出路16の送液流出口17に接続し、当該シリコンチューブの一部をポンプ(マイクロチューブポンプ、EYELA社製)にセットした。すなわち、本マイクロデバイス1を含む灌流培養システムは、ポンプを駆動させることにより、細胞保持チャンバー12に連通する流入路14の送液流入口15に接続したシリコンチューブを介して、ガラス瓶内の培養液を当該細胞保持チャンバー12内に所定流量で流入させるとともに、当該細胞保持チャンバー12に連通する流出路16の送液流出口17に接続したシリコンチューブを介して、当該細胞保持チャンバー12から当該培養液を当該所定流量で流出させ、再び当該ガラス瓶内に戻すことにより、当該培養液を灌流させながら培養を行うことができるものとして作製した。
本実施例においては、細胞として、ラットの肝臓から公知のコラゲナーゼ灌流法を用いて調製した初代肝細胞を用いた。ここで、この肝細胞の調製法について簡単に説明する。すなわち、まず、7週齢のウィスター系ラット(体重250g)の門脈(肝臓につながる血管の一つ)にカニューレを挿入し、当該カニューレから肝臓に所定の組成の脱血液を導入した後、コラゲナーゼ(和光純薬社製)を0.5mg/mLの濃度で溶解した消化液を灌流し、肝臓内における肝細胞同士の結合等を切断する消化処理を行った。そして、この消化処理された肝臓を摘出し、メスやピペット等を用いた分散処理と培養液等を用いた洗浄処理により、分散状態の肝細胞を得た。
このようにして得た肝細胞を、5.0×105個/mLの密度となるように培養液に分散した。そして、この細胞分散液の一部を、上記滅菌処理後の本マイクロデバイス1の細胞保持チャンバー12内に100μL加え、5%炭酸ガス、95%空気の雰囲気下、37℃にて静置状態で2時間培養を行った。また、この細胞分散液の他の一部を、対照実験用マイクロデバイスの細胞保持チャンバー12内に100μL加え、本マイクロデバイス1と同様に静置培養を行った。
Claims (10)
- 細胞を保持するための細胞保持チャンバーを有し、
前記細胞保持チャンバーは、少なくとも一つの組織体形成領域を含む底面と、当該細胞保持チャンバーに培養液を流入させるための流入口と、当該細胞保持チャンバーから当該培養液を流出させるための流出口と、を有し、
前記組織体形成領域は、細胞接着性を示す1つの第一領域と、当該第一領域を囲み、当該第一領域に比べて低い細胞接着性を示す第二領域と、を含む、
ことを特徴とする細胞組織体マイクロデバイス。 - 前記細胞保持チャンバー底面は、前記組織体形成領域を囲み、前記第二領域に比べて低い細胞接着性を示す第三領域を含む、
ことを特徴とする請求項1に記載の細胞組織体マイクロデバイス。 - 前記細胞保持チャンバー底面は、前記組織体形成領域を複数含むとともに、当該複数の組織体形成領域を互いに離隔させ、前記第二領域に比べて低い細胞接着性を示す第三領域を含む、
ことを特徴とする請求項1に記載の細胞組織体マイクロデバイス。 - 前記細胞保持チャンバー底面は、細胞保持キャビティを含み、
前記細胞保持キャビティの底面は、前記組織体形成領域を1つ含む、
ことを特徴とする請求項1乃至3のいずれか一項に記載の細胞組織体マイクロデバイス。 - 前記組織体形成領域の径は、前記細胞の径の2〜50倍の範囲である、
ことを特徴とする請求項1乃至4のいずれか一項に記載の細胞組織体マイクロデバイス。 - 前記第一領域は、前記組織体形成領域の中央付近に形成される、
ことを特徴とする請求項1乃至5のいずれか一項に記載の細胞組織体マイクロデバイス。 - 前記第一領域には、生体から取得され若しくは合成された細胞接着性物質又はこれらの誘導体が固定化されている、
ことを特徴とする請求項1乃至6のいずれか一項に記載の細胞組織体マイクロデバイス。 - 前記第一領域に細胞組織体が保持されている、
ことを特徴とする請求項1乃至7のいずれか一項に記載の細胞組織体マイクロデバイス。 - 請求項1乃至7のいずれか一項に記載の細胞組織体マイクロデバイスの前記細胞保持チャンバーに細胞を播種する工程と、
前記流入口から、前記細胞が播種された前記細胞保持チャンバー内に培養液を流入するとともに、当該培養液を前記流出口から流出させて、当該細胞保持チャンバー内の前記組織体形成領域の前記第一領域において細胞組織体を形成させる工程と、
を含むことを特徴とする細胞組織体形成方法。 - 前記細胞を、前記組織体形成領域あたり、2〜1.5×105個の範囲で播種する、
ことを特徴とする請求項9に記載の細胞組織体形成方法。
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