JP2005529589A - HIF−1α発現を調節するオリゴマー化合物 - Google Patents
HIF−1α発現を調節するオリゴマー化合物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2005529589A JP2005529589A JP2003582288A JP2003582288A JP2005529589A JP 2005529589 A JP2005529589 A JP 2005529589A JP 2003582288 A JP2003582288 A JP 2003582288A JP 2003582288 A JP2003582288 A JP 2003582288A JP 2005529589 A JP2005529589 A JP 2005529589A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- compound
- lna
- group
- hif
- compound according
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
- C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/331—Universal or degenerate base
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/334—Modified C
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/334—Modified C
- C12N2310/3341—5-Methylcytosine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/335—Modified T or U
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
Abstract
Description
本特許出願は2002年4月5日に出願された米国仮出願第60/370,126号の継続出願であり、当該仮出願の全文が本明細書中に参照として取り込まれている。
本発明は、オリゴマー化合物、特にLNAアンチセンスオリゴヌクレオチドを対象にしたもので、それらはHIF−1αをコードする核酸を標的にし、HIF−1αの発現を調節する。本発明のオリゴマー化合物を含有する医薬及び他の組成物も供される。さらに、当該細胞又は組織を本発明のオリゴマー化合物又は組成物の1種又はそれ以上と接触させることよりなる、細胞又は組織内でのHIF−1α発現を調節する方法が供される。また、本発明のオリゴマー化合物又は組成物の1種又はそれ以上の治療又は予防に有効な量を投与することにより、HIF−1αの発現に関連する病気又は症状があるか又はその傾向にある動物又はヒトを治療する方法も開示されている。さらに、HIF−1αの発現阻害及びこれらHIF−1αに関連した病気の治療のためのオリゴマー化合物の使用法が供される。そのような病気の例には、異なった種類の癌、特に一般的な例えば原発性及び転移性の乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、他の胃腸癌、肺癌、子宮頸癌、卵巣癌、及び脳腫瘍が、さらに子癇前症、炎症性内臓疾患及びアルツハイマー病も同様に挙げられる。他の癌の例には、大腸癌、肝臓癌、胸腺癌、腎臓癌、睾丸腫瘍、胃癌、小腸癌、腸癌、食道癌、脊髄癌、血脈洞癌、膀胱癌又は尿路癌などがある。
本明細書で使われる用語「標的核酸」は、低酸素症誘発性因子又は低酸素症誘発性因子-1α(HIF−1α)をコードするDNA、このようなDNAから翻訳されたRNA(pre−mRNA及びmRNAを含む)、及びこのようなRNAから誘導されるcDNAを包含する。
用語「チオ−LNA」は、スキーム2中のX又はYの少なくとも1つがS又は−CH2−S−から選択される固定されたヌクレオチドを意味する。チオ−LNAはベータ−D及びアルファ−Lの両方の配位をとることができる。
用語「エナ−LNA」は、スキーム2中のYが−CH2−O−の固定されたヌクレオチドを意味する。
用語「LNA誘導体」は、スキーム2のベータ−D−メチレンLNAを除くすべての固定されたヌクレオチド、例えば、チオ−LNA、アミノ−LNA、アルファ−L−オキシ−LNA及びエナ−LNAを意味する。
本発明には、HIF−1αをコードする核酸分子の機能の調節に用いるオリゴマー化合物、特にアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いる。調節は最終的には産生されるHIF−1αの量の変化である。一つの実施態様において、これはHIF−1αをコードする核酸と特異的にハイブリッドを形成するアンチセンス化合物を提供することにより達成される。調節は、好ましくはHIF−1αの発現の阻害であり、生産される機能性蛋白質の数を減少させることである。HIF−1は、赤血球増殖、細胞増殖、鉄代謝、グルコース及びエネルギー代謝、pH制御、組織浸潤、アポトーシス、多剤耐性、細胞ストレス応答又は間充質代謝に関与すると同じように、血管新生にも関与する。
本発明の1つの実施態様において、オリゴマー化合物は少なくとも1ユニットのLNA(固定された核酸:Locked Nucleic Acid)と命名された化合物を含んでいる。
LNAモノマーの代表的な引用は、国際公開第WO99/14226号公報及び続く出願の国際公開第WO00/56746号、同第WO00/56748号、同第WO00/66604号、同第WO00/125248号、同第WO02/28875号、同第WO02/094250号公報及び国際出願第PCT/DK02/00488号に記載されている二環式ヌクレオシド類縁体であり、これらの特許はすべて参照としてここに取り込まれる。好ましいLNAモノマー構造をスキーム2に例示する。
このヌクレオチド間結合は、‐O‐P(O)2‐O‐、‐O‐P(O,S)‐O‐、‐O‐P(S)2‐O‐、‐S‐P(O)2‐O‐、‐S‐P(O,S)‐O‐、‐S‐P(S)2‐O‐、‐O‐P(O)2‐S‐、‐O‐P(O,S)‐S‐、‐S‐P(O)2‐S‐、‐O‐PO(RH)‐O‐、‐OPO(OCH3)‐O‐、‐O‐PO(NRH)‐O‐、‐O‐PO(OCH2CH2S‐R)‐O‐、‐O‐PO(BH3)‐O‐、‐O‐PO(NHRH)‐O‐、‐O‐P(O)2‐NRH‐、‐NRH‐P(O)2‐O‐、‐NRH‐CO‐O‐であってよく、ここで、RH基は水素とC1‐4‐アルキル基から選ばれる。
末端基は、水素、アジド基、ハロゲン基、シアノ基、ニトロ基、ヒドロキシル基、Prot‐O‐基、Act‐O‐基、メルカプト基、Prot‐S‐基、Act‐S‐基、C1‐6‐アルキルチオ基、アミノ基、Prot‐N(RH)‐基、Act‐N(RH)‐基、モノ又ジ(C1‐6‐アルキル)アミノ基、置換されていてもよいC1‐6‐アルコキシ基、置換されていてもよいC1‐6‐アルキル基、置換されていてもよいモノリン酸エステル基、モノチオリン酸エステル基、ジリン酸エステル基、ジチオリン酸エステル基、トリリン酸エステル基、トリチオリン酸エステル基の中から独立して選ばれる。ここでProt基は各々、‐OH基、‐SH基、及び‐NH(RH)基に対する保護基であり、Act基は各々、‐OH基、‐SH基、及び‐NH(RH)基に対する活性基でありそして、RH基は水素とC1‐6‐アルキル基から選ばれる。
当業者は、LNAを含むオリゴマー化合物が多くの異なる原理によるHIF−1α関連疾病の治療に使うことが出来ることを理解するであろうし、従ってそれは本発明の意図するところである。
本発明の1つの実施態様において、オリゴマー化合物は適切なアンチセンス薬剤である。強力で安全なアンチセンス薬剤の設計に求められることは、様々なパラメーターの微調節、例えば、親和性/特異性、体液中での安定性、細胞の組込み、作用機作、薬物動態学的特性及び毒性などである。
アンチセンスオリゴヌクレオチドの臨床的な効果は、薬物動態学、例えば吸収、分配、細胞組込み、代謝及び排泄に大きく左右される。次に、これらのパラメーターはオリゴヌクレオチドの基礎を成す化学物質、サイズと3次元構造からはっきりと導き出される。
薬理学的性質は、オリゴマー組込の改善、オリゴマーの分解に対する抵抗性増大などにより生物学的安定性の増大、及び/又は、例えばmRNA配列のような標的配列とオリゴヌクレオチドとのハイブリッド形成の特異性及び親和性の向上などをもたらすことにより本発明に従って強化される。
アンチセンスオリゴに伴う毒性には基本的に2つの種類、すなわち塩基配列を含む配列依存の毒性と配列非依存性でクラス関連の毒性がある。生来のCpG配列モチーフによる免疫刺激に関する問題を除いては、アンチセンスオリゴヌクレオチド由の開発において最も顕著な毒性は、配列には関係のない、例えばオリゴヌクレオチドの化学的性質及び投与の量、方法、頻度及び期間に関するものである。オリゴヌクレオチドのホスホロチオエート部類は特によく特性評価がされており、補体活性化、PPT(部分的トロンボプラスチン時間)の延長、血小板減少症、肝毒性(肝酵素の上昇)、心臓毒性、脾腫及び細網内皮細胞の過形成など多くの副作用を誘導することが知られている。
本発明のオリゴ−及びポリヌクレオチドは、有機化学の当業者によく知られた核酸化学の重合方法を使って製造することが出来る。一般に、ホスホロアミダイト法の標準のオリゴメリゼーションサイクルが用いられる(S.L.Beaucage and R.P.Iyer,Tetrahedron,49、6123(1993);S.L.Beaucage and R.P.Iyer,Tetrahedron,48、2223(1992))、しかし、例えば、H−ホスホネートやホスホロトリエステルの化学反応も使うことが出来る。
本発明に基づく医薬組成物は多くの異なる病気の治療に使われる。例えば、種々のヒトの固形癌及びそれらの転移癌、例えば乳房、結腸直腸、前立腺、膵臓、脳、肺、卵巣、胃腸、頭頚部、肝臓、膀胱及び子宮頚部などの癌において、HIF−1αが過剰発現されていることが見出されている(Zhong,H.ら,Cancer Research,59,5830−5835(1999);Talks,K.L.ら、American Journal of Pathology,157(2)、411−421(2000))。
本発明は、活性成分として少なくとも1つの本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド構成物を含有する医薬組成物にも関連することであると理解される。本発明に基づく医薬組成物は所望ならば薬剤担体を含有し、そして医薬組成物はさらに所望ならばアンチセンス化合物、化学療法化合物、抗炎症化合物、抗ウイルス化合物及び/又は免疫調節化合物を含有すると理解される。
本発明に包含されるオリゴマー化合物は、製薬上許容される種々の塩として用いることが出来る。本明細書で使われる用語の塩類とは、本発明で確認された化合物の必要な生物学的活性を保ち、好ましくない毒性作用が最少である塩を指す。限定されない例として、このような塩は有機アミノ酸で形成され、そして塩基付加塩は例えば亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム、ナトリウム、カリウムなどの金属カチオンで、又はアンモニア、N,N−ジベンジルエチレン−ジアミン、D−グルコサミン、テトラエチルアンモニウム又はエチレンジアミン由来のカチオンで;又は(a)及び(b)を組合せた(c)の例えばタンニン酸亜鉛などで形成される。
本発明の1つの実施態様において、オリゴマー化合物はプロドラッグの形態をとることが出来る。オリゴヌクレオチド類は幸いに負に荷電したイオンである。細胞膜は親油性であるため、オリゴヌクレオチドの細胞内組込みは、中性又は親油性のものに比べて低い。この極性障害は、プロドラッグ法により排除できる(例えば、Crooke,R.M.(1998)in Crooke,S.T,Antisense Research and Application.Springer−Verlag,Germany,vol.131,pp.103−140を参照))。この方法では、オリゴヌクレオチドは保護された形で調製されるので、投与されるときのオリゴは中性である。それらの保護グループは除かれた後、オリゴが細胞に組込まれる様に設計される。その様な保護基の例として、S−アセチルチオエチル基(SATE)又はS−ピバロイルチオエチル基(t−ブチル−SATE)が挙げられる。これらの保護基はヌクレアーゼに抵抗性であり、細胞内で選択的に除去される。
本発明の1つの実施態様において、オリゴマー化合物は配位子/抱合体と連結される。それはアンチセンスオリゴヌクレオチドの細胞内組込みを増すための方法である。この抱合は5’/3’−OHの末端位置で起きるが、配位の場合は糖及び/又は塩基部位で起こる。特に、アンチセンスオリゴヌクレオチドと抱合する増殖因子はトランスフェリン又は葉酸がよい。トランスフェリン−ポリリジン−オリゴヌクレオチド複合体又は葉酸−ポリリジン−オリゴヌクレオチド複合体は高レベルのトランスフェリン又は葉酸受容体を発現している細胞による組込みのために調製され得る。他の抱合体/配位子の例には、コレステロール部分、アクリジン及びポリ−L−リジンのような二重挿入体、1個以上の例えばホスホロモノチオエートなどのようなヌクレアーゼ抵抗の連結グループを有する末端キャッピングなどが挙げられる。
本発明には、ここに開示する1つ以上のオリゴヌクレオチド化合物の製剤が含まれる。医薬品として容認される結合剤及びアジュバントは製剤した薬品の一部に含まれる。カプセル、錠剤、丸薬などは、例えば次のような化合物を含んでいる:微細結晶セルロース、結合剤としてのガム又はゼラチン;賦形剤としてのデンプン又は乳糖;潤滑剤としてのステアリン酸塩、種々の甘味又は香味剤。カプセルには、処方単位に脂肪油のような液状の担体が含まれる。同じように、糖衣剤又は腸溶剤は処方単位の一部である。オリゴヌクレオチド製剤は、薬剤活性成分と脂肪でミセル状のエマルジョンを形成した乳剤とすることが出来る。
本発明の医薬組成物は、局所的な治療か全身的か、及び治療すべき部位がどこかによって、いろいろな投与方法がとられる。投与法には、(a)経口、(b)経肺、例えば吸入、又は噴霧器による気管内又は鼻腔内吹込みを含めた粉末あるいはエアゾールの吹込み、(c)局所で、表皮、皮内、眼、膣を含めた粘膜及び直腸送達、又は(d)非経口で、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、又は筋肉内注射又は注入が含まれる。又は頭蓋内例えば鞘内又は脳内室投与が挙げられる。1つの実施態様において、活性のあるオリゴは、静脈内(iv)、腹腔内(ip)、経口、局所又は静脈ボーラスとして投与されるか、又は標的器官に直接投与される。
本発明の医薬組成物には、溶液、乳剤、及びリポソーム含有製剤が含まれるが、これらに限定されない。これらの組成物は、前調製液体、自己乳化固形物及び自己乳化半固形物を含むがこれに限定されない種々の成分から生成される。腫瘍組織への薬剤の送達は担体が介在する輸送により促進され、その担体にはカチオン性リポゾーム、シクロデキストリン、ポルフィリン誘導体、分岐鎖デンドリマー、ポリエチレンイミン ポリマー、ナノ粒子及びミクロスフェアー(Dass, G.R.,J.Pharm.Pharmacol,54(1),3−27(2002))が含まれるがこれらに限定されるものではない。
本発明のオリゴヌクレオチドは、前立腺癌のアンドロゲン回収療法で起こる急性低酸素症によって誘導されるHIF−1αの影響を排除するために使用できる。
投与量は、治療する病状の重篤度と感応性、及び数日から数ヶ月間にわたる治療過程、又は回復又は病気状態がなくなるまでの期間に依存する。最適な投薬計画は、患者体内の薬剤蓄積量の測定から計算される。
本発明のLNA含有オリゴマー化合物は、診断薬、治療薬及び予防薬のための研究試薬として使用することができる。研究では、アンチセンスオリゴヌクレオチドが細胞内及び実験動物内のHIF−1α遺伝子合成の特異的阻害剤として使われ、それによって標的物の機能解析又は治療的介入のための標的としての有用性評価が容易になる。診断薬においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、細胞内及び組織内のHIF−1α発現をノーザンブロット法、ハイブリッド形成法又は類似の技術によって検出及び定量するために使われる。治療薬としては、HIF−1α発現の調節により治療できる病気又は疾患の疑いのある動物又はヒトが、本発明に基づくアンチセンス化合物の投与によって治療を受ける。さらに、HIF−1α発現に伴う病気又は状態の疑いのある又はそれに罹りやすいヒトの治療又は動物、特にマウス及びラットの治療に、治療的又は予防的に有効な量の1つ以上の本発明のアンチセンス化合物又は組成物を投与する方法が提供される。
本発明の方法は、好ましくは、1つの病気によって引起こされる病気の治療又は予防のために利用される。本発明の1つの実施態様は、細胞又は組織内のHIF−1αの発現を阻害する方法で、HIF−1αの発現が阻害されるように当該細胞又は組織を本発明の化合物と接触することよりなる。さらに、他の実施態様は、病気に関与する遺伝子の発現を調節する方法で、遺伝子のDNA又はRNAをオリゴマー化合物と接触させることからなる。当該オリゴマー化合物は配列番号 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114又は115の少なくとも8核酸塩基部分を含む配列を有し、それによって遺伝子発現が調節される。これらの化合物は1つ以上のLNAユニットを含む。その化合物は遺伝子のメッセンジャーRNAとハイブリッドを形成しその発現を阻害する。他の実施態様は、癌疾患に罹っているか罹りやすい哺乳類の治療法で、HIF−1αを標的とし1個以上のLNAユニットを含むオリゴヌクレオチドの治療的に有効な量を哺乳類に投与することからなる。上記記載の方法は子癇前症、炎症性腸疾患及びアルツハイマー病と同様、一般の癌、例えば原発性及び転移性の乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、他の胃腸癌、肺癌、子宮癌、卵巣癌、脳腫瘍、頭頸部癌、子宮頸癌、大腸癌、肝臓癌、胸腺癌、腎臓癌、睾丸腫瘍、胃癌、小腸癌、腸癌、食道癌、脊髄癌、血脈洞癌、膀胱癌、及び尿路癌などを標的にすることができる。記載の方法は、赤血球増殖、細胞増殖、鉄代謝、グルコース及びエネルギー代謝、pH制御、組織侵害、アポトーシス、多剤耐性、細胞ストレス応答又は間充質代謝に関与すると同じように血管新生を調節する方法で、細胞が本発明の請求範囲のアンチセンス化合物と接触し、その結果細胞が調節されることからなる。
本発明が、いくつかの好ましい実施態様に従って特異性と共に記載される。それゆえに、以下の実施例は、本発明を例示するためにのみ役立つものであって、これらに限定することを意図するものではない。
Y及びXが−O−、及びZ及びZ*が保護されている−O−である、スキーム2に示したモノマーの製造が、文献に詳細に記載されている。Koshkinら、J.Org.Chem.2001,66,8504−8512;Sorensenら、J.Am.Chem.Soc.2002,124(10),2164−2176;Pedersenら、Synthesis,2002,6,802−809及びこれらに見出される引用文献に示されている。ここにおいて、Z及びZ*の保護基は、それぞれ、オキシ−N,N−ジイソプロピル−O−(2−シアノエチル)ホスホロアミダイト及びジメトキシトリチルオキシである。Xが−O−で、Yが−S−及びN(CH3)−であるスキーム2のモノマーの製造が、Rosenbohmら、Org.Biomol.Chem.2003,1,655−663に記載されている。
全てのオリゴヌクレオチド合成は、MOSS Expedite機器プラットホームにおいて1μモルスケールで実行される。合成手順は、本質的には機器のマニュアルに記載されたようにして実行される。使用されたLNAモノマーは、Koshin,A.A.ら、J.Org.Chem.2001,66,8504−8512に従って合成された。
5’−O−Dmt−3’−ヒドロキシ−LNAモノマー500mg)、無水コハク酸(1.2当量)及びDMAP(1.2当量)を、DCM(35ml)に溶解した。反応液を一夜室温で撹拌した。NaH2PO4、0.1M、pH5.5(2回)及び食塩水(1回)で抽出した後、有機層をさらに無水Na2SO4で乾燥し、濾過し、蒸発した。ヘミエステル誘導体が収率95%で得られ、さらに精製することなく使用された。
上記で調製されたヘミエステル誘導体(90μモル)を、DMFの最小量に溶解し、DIEA及びpyBOP(90μモル)を加え、共に1分間混合した。この前もって活性化した混合物を手動合成機内で、LCAA−CPG(500Å、80−120メッシュ、300mg)と混合し、撹拌した。室温で1.5時間おいた後、支持体を濾過して除き、DMF、DCM及びMeOHで洗浄した。乾燥後、充填物を定量した結果、57μモル/gであった。
CPG(多孔質ガラスビーズの固相担体、controlled pore glass)に結合した5’−O−Dmt[A(bz)、C(bz)、G(ibu)及びT]を、ジクロロメタン溶液中の3(v/v)%トリクロロ酢酸を用いて脱保護した。樹脂をアセトニトリルで洗浄した。ホスホロアミダイト[A(bz)、G(ibu)、5−メチル−C(bz)又はT−β−シアノエチルホスホロアミダイト]のカップリングは、アセトニトリル中5’−O−Dmt保護アミダイトの0.08M溶液を使用することによって実行され、活性化は、アセトニトリル(0.25M)中DCI(4,5−ジシアノイミダゾール)を使用することによって行われた。カップリングは2分間行われた。チオール化は、Beaucage試薬(アセトニトリル中0.05M)を使用することによって実行され、3分間反応させた。支持体をアセトニトリルで完全に洗浄し、続いてキャップ形成は、無水酢酸のTHF溶液(CAP A)及びN−メチルイミダゾール/ピリジン/THF(1:1:8)(CAP B)を用いて未反応の5’−ヒドロキシル基にキャップ形成した。キャップ形成ステップを繰り返し、アセトニトリル洗浄でサイクルを終了した。
CPG(controlled pore glass)に結合した5’−O−Dmt[locA(bz)、locC(bz)、locG(ibu)又はlocT]を、上記と同じ手順を用いて脱保護した。カップリングは、5’−O−Dmt[locA(bz)、locC(bz)、locG(ibu)又はlocT]−β−シアノエチルホスホロアミダイト(アセトニトリル中0.1M)を使用して実行され、活性化はDCI(アセトニトリル中0.25M)によって行われた。カップリングは、7分間に延長された。キャップ形成は、無水酢酸のTHF溶液(CAP A)及びN−メチルイミダゾール/ピリジン/THF(1:1:8)の溶液(CAP B)を用いて30秒間行われた。亜リン酸トリエステルは、I2及びピリジンのTHF溶液を30秒間使用することによって、より安定なリン酸トリエステルに酸化される。支持体は、アセトニトリルで洗浄され、キャッピングステップが繰り返される。サイクルは、アセトニトリル洗浄によって終了した。略語:Dmt:ジメトキシトリチル、DCI:4,5−ジシアノイミダゾール。
オリゴマーは、支持体から切断され、β−シアノエチル保護基は、室温にて1時間、35%NH4OHで支持体を処理することによって除かれた。支持体は、濾去され、塩基の保護基は、65℃で4時間加熱することによって除かれた。次いで、オリゴ溶液が蒸発乾固された。
オリゴ体は、(逆相)RP−HPLC又は(アニオン交換)AIEによって精製される。
RP−HPLC:
カラム: VYDACTM、カタログNo.218TP1010(vydac)
流速: 3mL/分
バッファー: A 0.1M酢酸アンモニウム、pH7.6
B アセトニトリル
グラジエント:
時間 0 10 18 22 23 28
B% 0 5 30 100 100 0
IE:
カラム: ResourceTM15Q(Amersham Pharmacia Biotech社製)
流速: 1.2mL/分
バッファー: A 0.1M NaOH
B 0.1M NaOH、2.0M NaCl
グラジエント:
時間 0 1 27 28 32 33
B% 0 25 55 100 100 0
略語
Dmt: ジメトキシトリチル
DCI: 4,5−ジシアノイミダゾール
DMAP: 4−ジメチルアミノピリジン
DCM: ジクロロメタン
DMF: ジメチルホルムアミド
THF: テトラヒドロフラン
DIEA: N,N−ジイソプロピルエチルアミン
PyBOP: ベンゾトリアゾール−1−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸
Bz: ベンゾイル
Ibu: イソブチリル
Beaucage: 3H−1,2−ベンゾジチオール−3−オン−1,1−ジオキサイド
A(bz)、C(bz)、G(ibu)又はT:LNA−単量体(LNA:ロックされた核酸)
アンチセンス化合物及び標的核酸の発現におけるそれらの効果は、標的核酸又はタンパク質が測定し得るレベルにあるように供された細胞の種々の型の何れにおいても測定することができる。これは、例えば、RT−PCR又はノーザン・ブロット又はウエスタンブロット分析を用いて常法で測定することができる。以下の細胞型は、図示の目的のために提供されるものであるが、しかし、その他の型も通常に使用することができる。ただし標的が、選ばれた細胞型において発現されることが条件である。
U87−MG:ヒト神経膠芽細胞腫細胞株U87−MGは、エール塩(Earle's salt)及び10%ウシ胎仔血清(FCS)を含む改変イーグル培地(MEM)で培養された。
U373:ヒト神経膠芽細胞腫細胞株U373は、エール塩及び10%ウシ胎仔血清(FCS)を含む改変イーグル培地(MEM)で培養された。
15PC3:ヒト前立腺癌細胞株15PC3は、Dr.F.Baas、Neurozintuigen Laboratory、AMC、オランダ国によって供与され、DMEM(Sigma)+10%ウシ胎仔血清(FBS)+GlutamaxI+ゲンタマイシン中で培養された。
低酸素条件下でのHIF発現の変化を監視するため、細胞を、化学的にO2を結合するために加えたAnaerocult(Merck)と共にインキュベーションバッグ(Merck)中で、0.1−1.5%のO2レベルでの嫌気的条件下で培養した。嫌気的条件は、1−2時間内に得られた。細胞を、6又は18時間、無酸素にした。
(上記した)細胞を、トランスフェクション伝達手段として陽イオン性リポソーム処方LipofectAMINE2000(Gibco)を用いてオリゴヌクレオチドで処理した。細胞を100mm×20mm細胞培養ペトリ皿(Corning)又は6穴プレート(NUNC)に播種し、90%コンフルエントまで処理した。使用したオリゴ濃度は、1nMから400nM最終濃度までの範囲であった。オリゴ−脂質複合体の処方は、無血清MEM及び総容積6ml中5μg/mlの最終脂質濃度を用い、メーカーの指示書に従って行った。細胞を、37℃、4又は24時間インキュベートし、オリゴ含有培地を除去することによって処理を停止した。細胞を洗浄し、血清含有MEMを加えた。オリゴ処理の後、細胞を6時間の低酸素処理する前18時間回復させるか、直接18時間の低酸素処理した。
総RNAは、RNeasyミニキット(例えば、QiagenカタログNo.74104)を使用するか、又はTrizol試薬(例えば、Life TechnologiesカタログNo.15596)を使用するか、のいずれかで単離された。細胞株からRNAを単離するために、RNeasyは好ましい方法であり、組織サンプルには、Trizolは好ましい方法である。総RNAは、メーカーによって提供されたプロトコールに従ってRNeasyミニキット(Qiagen)を使用して、細胞株から単離された。組織サンプルは、UltraTurraxT8ホモジナイザー(例えば、IKA Analysen Technik)を使用してホモジナイズされ、総RNAは、メーカー提供のTrizol試薬プロトコールを使用して単離された。
第一鎖cDNAの合成は、メーカーの指示書に従ってOmniScript逆転写酵素キット(カタログ#205113、Qiagen)を使用して実施された。各サンプルにつき、総RNA0.5μgを、RNaseフリーH2Oで各12μlに調節し、ポリ(dT)12−18(2.5μg/ml)(Life Technologies,GibcoBRL,Roskilde,DK)2μl、dNTPmix(dNTP各5mM)2μl、10×バッファRT2μl、RNAguardTMRnaseINHIBITOR(33.3U/ml)(カタログ#27−0816−01、Amersham Pharmacia Biotech,Hoersholm,DK)1μl、及びOmniScript逆転写酵素(4U/μl)1μlと混合し、次いで、37℃、60分のインキュベーション及び酵素の加熱不活化を93℃、5分間行った。
HIF−1α発現のアンチセンス調節は、公知の種々の方法でアッセイすることができる。例えば、HIF−1αmRNAレベルは、ノーザン・ブロット法、拮抗ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)、又はリアルタイムPCRによって定量化することができる。リアルタイム定量PCRが、現在では好ましい。RNA分析は、総細胞RNA又はmRNAについて実行することができる。
mRNAレベルの定量化は、メーカーの指示書に従って、iQ多色リアルタイムPCR検出システム(BioRAD)を使用するリアルタイム定量PCRによって決定された。
前進プライマー:5’CTCATCCAAGAAGCCCTAACGTGTT3’(アッセイにおける最終濃度:0.9μM)(配列番号116)、逆行プライマー:5’GCTTTCTCTGAGCATTCTGCAAAGC3’(アッセイにおける最終濃度:0.9μM)(配列番号117)、及びPCRプローブは:5’FAM−CCTCAGGAACTGTAGTTCTTTGACTCAAAGCGACA−TAMRA3’ (アッセイにおける最終濃度:0.1μM)(配列番号118)であった。
実施例8に記載されたようにして実行された第一鎖合成からのcDNAは、2から20回希釈され、リアルタイム定量PCRによって分析された。プライマー及びプローブを、2×プラチナ定量PCRスーパーミックスUDG(カタログ#11730、Invitrogen)と混合し、最終容積25μlになるようcDNA3.3μlを加えた。各サンプルは、三回分析された。関係するRNAを発現する細胞株から精製された材料について調製されたcDNAの2倍希釈をアッセイして、アッセイ用標準曲線を作成した。滅菌水が、鋳型のない対照としてcDNAの代わりに使用された。PCRプログラム:50℃2分、95℃10分その後続いて95℃で40サイクル、15秒、60℃、1分。
HIF−1αタンパク質レベルは、免疫沈降、ウェスタンブロット分析(免疫ブロッティング)、ELISA、RIA(ラジオイムノアッセイ)又は蛍光標示式細胞分取(FACS)のような、周知技術の種々の方法で定量することができる。HIF−1α指向の抗体は、Upstate Biotechnologies(Lake Placid,USA)、Novus Biologicals(Littleton, Colorado)、 Snata Cruz Biotechnology(Santa Cruz,California)のような、種々のソースから同定され、得ることができ、又は通常の抗体生成法により調製することができる。
上記により調製されたタンパク質サンプルを、氷で解凍後、10分間70℃で変性した。
電気泳動後、分離されたタンパク質を、セミドライブロッティングによってポリ二フッ化ビニリデン(PVDF)膜に転移した。膜に吸着されるまで、膜をNuPageTransferBufferで平衡化させた。ブロッティング処理は、メーカーの指示書に従ってTrans−blotSDSemi−Dry転移細胞(BioRAD)中で行われた。膜を、次の使用まで4℃で保存した。
所望のタンパク質を検出するために、膜をタンパク質に対するポリクローナル又はモノクローナル抗体とインキュベートした。膜を、ブロッキングバッファ[TSバッファ(150mMNaCl、10mMトリス塩基、pH7.4)に溶解した2.5%脱脂乳粉末及び5%BSA]で、1時間撹拌してブロックした。次いで、膜を室温にてTSバッファで2×15分洗浄し、0.1%NaN3を含むTS−Tween20バッファ中、4℃にて一夜、一次抗体とともにインキュベートした。以下の一次モノクローナル抗体及び濃度/希釈が使用された:マウス抗Glut1(T.Ploug,The Panum Institute,Copenhagenより入手)1:20、マウス抗HIF−1α(H72320、Transduction Laboratories)1μg/ml、マウス抗α−チューブリン(T−9026,Sigma)1:10,000。一次抗体とインキュベーションの後、膜をTS−Tween20バッファで15分洗浄し、次いで室温で撹拌しつつ各5分間の2回追加洗浄を行った。引き続いて、膜を、二次抗体、ペルオキシダーゼ共役ポリクローナルヤギ抗マウス免疫グロブリン(P0447,DAKO A/S)、の1:5000希釈で、室温にて1時間インキュベートした。次いで、膜をTS−Tween20バッファで15分間洗浄し、さらに撹拌しつつ室温で5分間の3回追加洗浄を行った。最終洗浄の後、膜を、ECL+Plus(Amersham)で5分間インキュベートし、引き続いてSTORM840(Molecular Dynamics Inc.)で直ちにスキャンした。膜を除去バッファ(stripping buffer)(100mMの2−メルカプトエタノール、2%のSDS、62.5mMのトリス塩基)pH6.7で、50℃、30分間低撹拌のインキュベーションによって除去処置をした。室温で2×10分間、TS−Tween20バッファで洗浄後、膜を乾燥し、プラスチックバッグに封入して、4℃で保存した。タンパク質発現レベルを、ImageQuant、ver5.0ソフトウエア(MolecularDynamics Inc.)を使用して、ハウスキーピングタンパク質の発現に関して定量した。
本発明に従って、一連のオリゴヌクレオチドが、公開されている配列(GenBankアクセスNo.NM_001530、ここにおいて配列番号1及び図7として取入れられている)を用いて、ヒトHIF−1αRNAの異なった領域を標的とするために設計された。長さ16ヌクレオチドのオリゴヌクレオチドが表1に示され、配列番号を有している。オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドとして、特にLNA又はホスホロチオエートなどのような人工ヌクレオチドを使用して合成されたとき、とくに効力があるように設計されている。「標的部位」は、オリゴヌクレオチドが結合している特定の標的配列上の第一のヌクレオチド番号を指している。化合物は、ここで他の実施例において記載されているようにウエスタンブロット分析によるHIF−1αタンパク質に対する効果について解析された。
本発明に従って、アンチセンスオリゴヌクレオチドの第二シリーズも合成された(表2)。これらの化合物シリーズは、完全修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、完全修飾LNAオリゴヌクレオチド、又は二つの異なった部位を標的とする長さが16ヌクレオチドのキメラオリゴヌクレオチドである。キメラオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート(PS)から構成される領域で、一方又は両方の部位でLNAセグメントに隣接している領域からなる、「ギャップマー」(GM)、「ヘッドマー」(WM5)又は「テールマー」(WM3)である。これらの領域はオキシLNAヌクレオチドからなる。オリゴヌクレオチドには蛍光色素(FAM)で標識されたものもある。ミスマッチオリゴヌクレオチドもまた設計された(MM)。オキシ−LNAの全てのシトシンは核酸塩基のC5部位でメチル化されている。化合物は、他の実施例に記載のようにウェスタンブロット分析によってHIF−1αタンパク質レベルに対する効果が分析された。「標的部位」は、オリゴヌクレオチドが結合する特定の標的配列での第一のヌクレオチド番号を示している。
ヌードマウスにおける腫瘍異種移植片の増殖に対するオリゴヌクレオチド治療の効果が、異なった腫瘍細胞株を使用して測定することができる。そのような細胞株の例としては、ヒト腫瘍細胞株U87(神経膠芽細胞腫)、U373(神経膠芽細胞腫)、15PC3(前立腺癌)及びCPH54A(小細胞肺癌)、及びネズミ腫瘍細胞株B16(メラノーマ)がある。
腫瘍細胞を皮下移植し、次いで3連続移植による連続継代した。腫瘍断片1mmを、NMRIヌードマウスにトロカール針を使って皮下に移植した。別に、癌細胞を典型的には、マトリゲル(BD Bioscience)300μlに懸濁した106細胞をNMRIヌードマウスのわき腹に皮下注射した。
日 P値
4 0.0477
5 0.0156
6 0.0354
7 0.0461
カプラン・マイヤー解析
最終結果: 腫瘍サイズ150mm3:
群 No. 打ち切り 結果 平均生存日数
PBS 5 0 5 5
Cur813 5 1 4 7
生存分布の同等性についてのログランク検定: P=0.0138
腫瘍細胞を、NMRIヌードマウスに頭蓋内移植し、オリゴヌクレオチド治療を移植後1週間に開始する。マウスを、オリゴヌクレオチドの種々の投与量、最大投与量2mg/kgの腹腔内又は皮下注射で、又はPBS投与によって治療する。治療回数は、対照群における腫瘍増殖によって決められる。実験は、いずれかの群の腫瘍が最大許容サイズに達するか、又はいずれかの群において死亡が確実になるときに終了される。治療効果は、慢性神経損傷に至るまでの時間として測定される。オリゴヌクレオチド治療マウスは、最終オリゴヌクレオチド注射後24時間に殺処分される。
腫瘍を、溶解バッファ[20mMトリスC1(pH7.5);2%TritonX−100;1/100容プロテアーゼインヒビターカクテルセットIII(Calbiochem);1/100容プロテアーゼインヒビターカクテルセットII(Calbiochem)]中で、4℃にてモーター駆動ホモジナイザーを使用してホモジナイズした。腫瘍組織100mg当たり溶解バッファ500μlを適用した。腫瘍溶解物を、13,000Gで5分間、4℃にて遠心分離し、組織砕片を分離した。腫瘍抽出物のタンパク質濃度は、BCAタンパク質アッセイ試薬キット(Pierce,Rockford)を使用して測定された。標的タンパク質発現のウェスタンブロット分析は、実施例8に記載されたようにして実行された。
Claims (36)
- HIF−1αを調節する、長さが8から50核酸塩基の化合物で、配列番号 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114又は115の少なくとも8核酸塩基部分を含む配列を有する化合物。
- HIF−1αをコードする核酸分子を標的とする、長さが8から50核酸塩基の化合物であって、当該化合物は、HIF−1αをコードする核酸と特異的にハイブリダイズし、HIF−1αの発現を阻害し、そして該化合物は、配列番号 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114又は115の少なくとも8核酸塩基部分を含む配列を有する化合物。
- アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項1又は2のいずれか1項に記載の化合物。
- 少なくとも一つのヌクレオチドが、少なくとも一つの核酸類縁体を含む、請求項1から3のいずれか1項に記載の化合物。
- 少なくとも一つのヌクレオチドが、少なくとも一つのロックされた核酸(LNA)単位を含む、請求項1から4のいずれか1項に記載の化合物。
- ヌクレオシド間結合が、−O−P(O)2−O−、−O−P(O,S)−O−、−O−P(S)2−O−、−S−P(O)2−O−、−S−P(O,S)−O−、−S−P(S)2−O−、−O−P(O)2−S−、−O−P(O,S)−S−、−S−P(O)2−S−、−O−PO(RH)−O−、−O−PO(OCH3)−O−、−O−PO(NRH)−O−、−O−PO(OCH2CH2S−R)−O−、−O−PO(BH3)−O−、−O−PO(NHRH)−O−、−O−P(O)2NRH−、−NRH−P(O)2−O−、−NRH−CO−O−(式中、RHは水素及びC1−4アルキルから選ばれたものである)からなる群より選ばれる、請求項4から7に記載の化合物。
- 修飾されたヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項8に記載の化合物。
- 核酸塩基が、5−メチルシトシン、イソシトシン、シュードイソシトシン、5−ブロモウラシル、5−プロピニルウラシル、6−アミノプリン、2−アミノプリン、イノシン、ジアミノプリン、2−クロロ−6−アミノプリンからなる群より選ばれた修飾核酸塩基である、請求項4から9に記載の化合物。
- LNA単位が、D−β又はL−α立体配置のいずれかのオキシLNA、チオLNA、アミノLNAである、請求項4から10のいずれか1項に記載の化合物。
- アンチセンスオリゴヌクレオチドが、キメラオリゴヌクレオチドである、請求項1から11のいずれか1項に記載の化合物。
- アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ギャップマー(gapmer)、ヘッドマー(headmer)又はテールマー(tailmer)である、請求項12に記載の化合物。
- アンチセンスオリゴヌクレオチドが、13、14、15、16、17、18、19、20又は21−マー(-mer)である、請求項1から13のいずれか1項に記載の化合物。
- LNA単位の数が、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20又は21である、請求項1から14のいずれか1項に記載の化合物。
- 少なくとも、4ヌクレオチドがLNAである、請求項1から15のいずれか1項に記載の化合物。
- HIF−1αをコードする核酸分子を標的とする、長さが8から50核酸塩基の化合物であって、当該化合物は、HIF−1αをコードする核酸と特異的にハイブリダイズし、HIF−1αの発現を阻害するものであり、そして当該化合物は、配列番号 2、3、12、22、23、53、54、55、56、59、60、61、89、90、93、94、95、97、100、105、106、107、108、109、110、111、112、114又は115の少なくとも8核酸塩基部分を含む配列を有する化合物。
- 請求項1から17に記載の化合物及び薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む組成物。
- 薬学的に許容される担体を更に含む、請求項1から18のいずれか1項に記載の化合物を含む医薬組成物。
- 化合物が薬学的に許容される塩として使用される、請求項1から18のいずれか1項に記載の化合物を含む医薬組成物。
- 抱合体又は調剤を更に含む、請求項1から18のいずれか1項に記載の化合物を含む医薬組成物。
- 化合物がプロドラッグである、請求項1から18のいずれか1項に記載の化合物を含む医薬組成物。
- 他のオリゴマー化合物、化学療法化合物、抗炎症性化合物及び/又は抗ウイルス性化合物を更に含む、請求項1から18のいずれか1項に記載の化合物を含む医薬組成物。
- HIF−1αの発現を阻害するために、細胞又は組織を、請求項1から23のいずれか1項に記載の化合物と接触させることを含む、細胞又は組織において、HIF−1αの発現を阻害する方法。
- 遺伝子又は遺伝子からのRNAを、配列番号2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114又は115の少なくとも8核酸塩基部分を含む配列を有するオリゴマー化合物と接触させて遺伝子の発現を調節することよりなる、疾病に関係する遺伝子の発現を調節する方法。
- 化合物が、一つ又はそれ以上のLNA単位を含む、請求項25に記載の方法。
- 化合物が、遺伝子のメッセンジャーRNAとハイブリダイズし、その発現を阻害する、請求項25又は26に記載の方法。
- 一つ又はそれ以上のLNA単位を含むHIF−1αを標的とするオリゴヌクレオチドの治療上有効な量を哺乳動物に投与することよりなる、ガン疾病に罹患している、又は罹りやすい哺乳動物を治療する方法。
- 疾病が、普通のガン、例えば、原発性及び転移性の、乳腺、結腸直腸、前立腺、膵臓、その他の胃腸(GI)癌、肺、子宮頚、卵巣、脳、頭頚部、頚部、大腸(colon)、肝臓、甲状腺、腎、精巣、胃、腸、大腸(bowel)、食道、脊髄、静脈洞、膀胱又は尿管癌、また子癇前症、炎症性腸疾患及びアルツハイマー病、である請求項25から28のいずれか1項に記載の方法。
- 細胞を調節するために、細胞を請求項1から18のアンチセンス化合物と接触させることよりなる、血管形成及び赤血球増殖、細胞増殖、鉄代謝、グルコース及びエネルギー代謝、pH調節、組織浸潤、アポトーシス、多剤耐性、細胞ストレス応答又はマトリックス代謝を調節する方法。
- 細胞をインビトロで請求項1から18に記載のアンチセンス化合物の有効量と接触させ、それによって細胞の増殖を阻害することよりなる、細胞の増殖を阻害する方法。
- 細胞がガン細胞である請求項31に記載の方法。
- アポトーシスを調節するために、細胞を請求項1から18に記載のアンチセンス化合物と接触させることよりなる、細胞におけるアポトーシスを調節する方法。
- アポトーシスの調節が、アポトーシス刺激に対する感作である請求項33に記載の方法。
- アポトーシス刺激が細胞傷害性化学療法剤である請求項33又は34に記載の方法。
- 細胞を化学療法剤と接触させることを更に含む、請求項35に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US37012602P | 2002-04-05 | 2002-04-05 | |
PCT/IB2003/001758 WO2003085110A2 (en) | 2002-04-05 | 2003-04-04 | Oligomeric compounds for the modulation hif-1alpha expression |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009125880A Division JP2009189372A (ja) | 2002-04-05 | 2009-05-25 | HIF−1α発現を調節するオリゴマー化合物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2005529589A true JP2005529589A (ja) | 2005-10-06 |
JP4338527B2 JP4338527B2 (ja) | 2009-10-07 |
Family
ID=28792033
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2003582288A Expired - Fee Related JP4338527B2 (ja) | 2002-04-05 | 2003-04-04 | HIF−1α発現を調節するオリゴマー化合物 |
JP2009125880A Pending JP2009189372A (ja) | 2002-04-05 | 2009-05-25 | HIF−1α発現を調節するオリゴマー化合物 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009125880A Pending JP2009189372A (ja) | 2002-04-05 | 2009-05-25 | HIF−1α発現を調節するオリゴマー化合物 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US7737264B2 (ja) |
EP (2) | EP2264172B1 (ja) |
JP (2) | JP4338527B2 (ja) |
AU (1) | AU2003225495B2 (ja) |
CA (1) | CA2480311C (ja) |
CY (1) | CY1119614T1 (ja) |
DK (1) | DK2264172T3 (ja) |
ES (1) | ES2649817T3 (ja) |
HU (1) | HUE037352T2 (ja) |
PT (1) | PT2264172T (ja) |
SI (1) | SI2264172T1 (ja) |
WO (1) | WO2003085110A2 (ja) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006520195A (ja) * | 2003-01-28 | 2006-09-07 | レクサーン・コーポレイション | Hif−1発現を抑制するアンチセンスオリゴヌクレオチド |
JP2007119396A (ja) * | 2005-10-28 | 2007-05-17 | Hosokawa Funtai Gijutsu Kenkyusho:Kk | 核酸化合物封入ナノ粒子を含む経肺投与用医薬製剤 |
US8513400B2 (en) | 2002-11-23 | 2013-08-20 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of HIF1α and HIF2α expression |
JP2015093853A (ja) * | 2013-11-12 | 2015-05-18 | 学校法人東京理科大学 | ボラノホスフェート化合物、及び核酸オリゴマー |
JP2016105703A (ja) * | 2007-11-26 | 2016-06-16 | エンゾン ファーマシューティカルズ,インコーポレーテッド | アンドロゲン受容体を標的化するlnaアンタゴニスト |
Families Citing this family (114)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
HUE037352T2 (hu) | 2002-04-05 | 2018-08-28 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | A HIF-1alfa expresszálódását módosító oligomer vegyületek |
MXPA04010283A (es) * | 2002-04-18 | 2005-08-18 | Acuity Pharmaceuticals Inc | Medios y metodos para la modulacion especifica de genes objetivo en el cns y el ojo y metodos para su identificacion. |
US7148342B2 (en) | 2002-07-24 | 2006-12-12 | The Trustees Of The University Of Pennyslvania | Compositions and methods for sirna inhibition of angiogenesis |
JP5449639B2 (ja) | 2002-11-01 | 2014-03-19 | ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア | HIF−1アルファのsiRNA阻害に関する組成物及び方法 |
EP2752488B1 (en) | 2002-11-18 | 2020-02-12 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense design |
WO2004053104A2 (en) | 2002-12-11 | 2004-06-24 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | 5’ cpg nucleic acids and methods of use |
CA2513398C (en) * | 2003-01-31 | 2013-09-10 | Rexahn Corporation | Antisense oligonucleotides that inhibit expression of hif-1 |
US20040241717A1 (en) * | 2003-02-10 | 2004-12-02 | Santaris Pharma A/S | Oligomeric compounds for the modulation of thioredoxin expression |
US7683036B2 (en) | 2003-07-31 | 2010-03-23 | Regulus Therapeutics Inc. | Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding RNAs |
US20050053981A1 (en) * | 2003-09-09 | 2005-03-10 | Swayze Eric E. | Gapped oligomeric compounds having linked bicyclic sugar moieties at the termini |
US7480382B2 (en) * | 2003-09-30 | 2009-01-20 | Microsoft Corporation | Image file container |
US8188254B2 (en) | 2003-10-30 | 2012-05-29 | Coley Pharmaceutical Gmbh | C-class oligonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory potency |
AU2004308484A1 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-14 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for combined therapy of disease |
US7563885B1 (en) * | 2004-05-24 | 2009-07-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of Tudor-SN expression |
US7618947B2 (en) * | 2004-08-25 | 2009-11-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of HIF-1 beta expression |
US8759305B2 (en) | 2004-09-01 | 2014-06-24 | Dynavax Technologies Corporation | Methods and compositions for inhibition of innate immune responses and autoimmunity |
US20060069055A1 (en) * | 2004-09-21 | 2006-03-30 | Maya Dajee | Delivery of polynucleotides |
ZA200704253B (en) * | 2004-11-09 | 2008-09-25 | Santaris Pharma As | Potent LNA oligonucleotides for the inhibition of HIF-1A expression |
CA2587173C (en) | 2004-11-09 | 2016-09-06 | Santaris Pharma A/S | Potent lna oligonucleotides for the inhibition of hif-1a expression |
US9447138B2 (en) | 2004-11-09 | 2016-09-20 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Potent LNA oligonucleotides for the inhibition of HIF-1a expression |
WO2006137786A1 (en) * | 2005-06-20 | 2006-12-28 | Avaris Ab | Hybridization-stabilizing construct |
AU2006291836B2 (en) * | 2005-09-15 | 2012-02-23 | Santaris Pharma A/S | RNA antagonist compounds for the inhibition of Apo-Bl00 expression |
BRPI0616370A2 (pt) * | 2005-09-19 | 2011-06-14 | Johnson & Johnson Pharmaceutical Res & Dev L L C | modulaÇço da expressço de receptor de glucocorticàide |
WO2007073149A1 (en) * | 2005-12-22 | 2007-06-28 | Keygene N.V. | Alternative nucleotides for improved targeted nucleotide exchange |
EP1976567B1 (en) | 2005-12-28 | 2020-05-13 | The Scripps Research Institute | Natural antisense and non-coding rna transcripts as drug targets |
TW200731980A (en) | 2005-12-29 | 2007-09-01 | Alcon Mfg Ltd | RNAi-mediated inhibition of HIF1A for treatment of ocular angiogenesis |
CA3044969A1 (en) | 2006-05-05 | 2007-12-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating gene expression |
US20090130212A1 (en) * | 2006-05-15 | 2009-05-21 | Physical Pharmaceutica, Llc | Composition and improved method for preparation of small particles |
JP2009540011A (ja) * | 2006-06-12 | 2009-11-19 | エクセジェニックス、インク.ディー/ビー/エー オプコ ヘルス、インク. | 血管新生のsiRNA阻害のための組成物及び方法 |
US7872118B2 (en) * | 2006-09-08 | 2011-01-18 | Opko Ophthalmics, Llc | siRNA and methods of manufacture |
JP2010505432A (ja) * | 2006-10-09 | 2010-02-25 | サンタリス ファーマ アー/エス | Pcsk9を調節するためのrnaアンタゴニスト化合物 |
CA2670563A1 (en) * | 2006-11-27 | 2008-06-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hypercholesterolemia |
US8093222B2 (en) | 2006-11-27 | 2012-01-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hypercholesterolemia |
US20100074897A1 (en) * | 2006-12-01 | 2010-03-25 | University Of Utah Research Foundation | Methods and Compositions related to HIF-1 alpha |
US8580756B2 (en) | 2007-03-22 | 2013-11-12 | Santaris Pharma A/S | Short oligomer antagonist compounds for the modulation of target mRNA |
EP2149605B1 (en) * | 2007-03-22 | 2013-07-03 | Santaris Pharma A/S | Short RNA antagonist compounds for the modulation of target mRNA |
JP5723154B2 (ja) | 2007-09-19 | 2015-05-27 | アプライド バイオシステムズ リミテッド ライアビリティー カンパニー | RNAiにおけるオフターゲット表現型の影響を減少させるためのSiRNA配列非依存性修飾フォーマットおよびその安定化型 |
CA2701895A1 (en) * | 2007-10-04 | 2009-04-09 | Santaris Pharma A/S | Short rna antagonist compounds for the modulation of hif1alpha |
CA2703931C (en) | 2007-10-26 | 2016-08-16 | Dynavax Technologies Corporation | Methods and compositions for inhibition of immune responses and autoimmunity |
US8153606B2 (en) * | 2008-10-03 | 2012-04-10 | Opko Curna, Llc | Treatment of apolipoprotein-A1 related diseases by inhibition of natural antisense transcript to apolipoprotein-A1 |
TW201029668A (en) * | 2008-11-17 | 2010-08-16 | Enzon Pharmaceuticals Inc | Releasable conjugates for nucleic acids delivery systems |
RU2746478C2 (ru) | 2008-12-04 | 2021-04-14 | КьюРНА, Инк. | Лечение связанных с геном-супрессором опухолей заболеваний посредством ингибирования природного транскрипта в антисмысловой ориентации относительно этого гена |
CN102317458B (zh) * | 2008-12-04 | 2018-01-02 | 库尔纳公司 | 通过红细胞生成素(epo)天然反义转录物的抑制对epo相关疾病的治疗 |
WO2010065671A2 (en) | 2008-12-04 | 2010-06-10 | Curna, Inc. | Treatment of vascular endothelial growth factor (vegf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to vegf |
NZ593743A (en) | 2008-12-04 | 2012-07-27 | Opko Ophthalmics Llc | Compositions and methods for selective inhibition of pro-angiogenic vegf isoforms |
PT2396038E (pt) | 2009-02-12 | 2016-02-19 | Curna Inc | Tratamento das doenças associadas com o factor neurotrófico derivado do cérebro (bdnf) por inibição do produto antisenso natural da transcrição para bdnf |
ES2656290T3 (es) | 2009-03-16 | 2018-02-26 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con el factor nuclear (derivado de eritroide 2) similar al 2 (NRF2) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a NRF2 |
EP2408920B1 (en) | 2009-03-17 | 2017-03-08 | CuRNA, Inc. | Treatment of delta-like 1 homolog (dlk1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to dlk1 |
KR101722541B1 (ko) | 2009-05-06 | 2017-04-04 | 큐알엔에이, 인크. | Ttp에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 트리스테트라프롤린 관련된 질환의 치료 |
CN103223177B (zh) | 2009-05-06 | 2016-08-10 | 库尔纳公司 | 通过针对脂质转运和代谢基因的天然反义转录物的抑制治疗脂质转运和代谢基因相关疾病 |
US9012139B2 (en) | 2009-05-08 | 2015-04-21 | Curna, Inc. | Treatment of dystrophin family related diseases by inhibition of natural antisense transcript to DMD family |
CA2762369C (en) | 2009-05-18 | 2021-12-28 | Joseph Collard | Treatment of reprogramming factor related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a reprogramming factor |
EP2432882B1 (en) | 2009-05-22 | 2019-12-25 | CuRNA, Inc. | TREATMENT OF TRANSCRIPTION FACTOR E3 (TFE3) and INSULIN RECEPTOR SUBSTRATE 2 (IRS2) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT TO TFE3 |
CA2764683A1 (en) | 2009-05-28 | 2010-12-02 | Joseph Collard | Treatment of antiviral gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an antiviral gene |
EP2443237B1 (en) | 2009-06-16 | 2017-02-22 | CuRNA, Inc. | Treatment of collagen gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a collagen gene |
JP6128846B2 (ja) | 2009-06-16 | 2017-05-17 | クルナ・インコーポレーテッド | パラオキソナーゼ(pon1)に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるpon1遺伝子関連疾患の治療 |
CN102597238B (zh) | 2009-06-24 | 2016-06-29 | 库尔纳公司 | 通过抑制针对肿瘤坏死因子受体2(tnfr2)的天然反义转录物来治疗tnfr2相关的疾病 |
CN102482672B (zh) | 2009-06-26 | 2016-11-09 | 库尔纳公司 | 通过抑制唐氏综合征基因的天然反义转录物治疗唐氏综合征基因相关疾病 |
WO2011009697A1 (en) | 2009-07-21 | 2011-01-27 | Santaris Pharma A/S | Antisense oligomers targeting pcsk9 |
CA2768947C (en) | 2009-07-24 | 2018-06-19 | Opko Curna, Llc | Treatment of sirtuin (sirt) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a sirtuin (sirt) |
CN102762731B (zh) | 2009-08-05 | 2018-06-22 | 库尔纳公司 | 通过抑制针对胰岛素基因(ins)的天然反义转录物来治疗胰岛素基因(ins)相关的疾病 |
KR101827015B1 (ko) | 2009-08-11 | 2018-02-07 | 큐알엔에이, 인크. | 아디포넥틴(adipoq)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 아디포넥틴(adipoq) 관련된 질환의 치료 |
EP2982755B1 (en) | 2009-08-21 | 2020-10-07 | CuRNA, Inc. | Treatment of 'c terminus of hsp70-interacting protein' (chip) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to chip |
JP5964232B2 (ja) | 2009-08-25 | 2016-08-03 | カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド | ‘iqモチーフ含有gtpアーゼ活性化タンパク質’(iqgap)に対する天然アンチセンス転写産物の阻害によるiqgap関連疾患の治療 |
WO2011038210A2 (en) | 2009-09-25 | 2011-03-31 | Curna, Inc. | Treatment of filaggrin (flg) related diseases by modulation of flg expression and activity |
KR101823702B1 (ko) | 2009-12-16 | 2018-01-30 | 큐알엔에이, 인크. | 막 결합 전사 인자 펩티다제, 부위 1(mbtps1)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 mbtps1 관련 질환의 치료 |
US8940708B2 (en) | 2009-12-23 | 2015-01-27 | Curna, Inc. | Treatment of hepatocyte growth factor (HGF) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to HGF |
JP6031356B2 (ja) | 2009-12-23 | 2016-11-24 | カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド | Ucp2に対する天然アンチセンス転写産物の阻害による脱共役タンパク質2(ucp2)関連疾患の治療 |
CA2785177C (en) | 2009-12-29 | 2019-09-24 | Curna, Inc. | Treatment of tumor protein 63 (p63) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to p63 |
CN102782134B (zh) | 2009-12-29 | 2017-11-24 | 库尔纳公司 | 通过抑制核呼吸因子1(nrf1)的天然反义转录物而治疗nrf1相关疾病 |
JP6083735B2 (ja) | 2009-12-31 | 2017-02-22 | カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド | インスリン受容体基質2(irs2)および転写因子3(tfe3)に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるインスリン受容体基質2(irs2)関連疾患の治療 |
WO2011082409A2 (en) | 2010-01-04 | 2011-07-07 | Curna, Inc. | Treatment of interferon regulatory factor 8 (irf8) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to irf8 |
WO2011085066A2 (en) | 2010-01-06 | 2011-07-14 | Curna, Inc. | Treatment of pancreatic developmental gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a pancreatic developmental gene |
EP2524039B1 (en) | 2010-01-11 | 2017-11-29 | CuRNA, Inc. | Treatment of sex hormone binding globulin (shbg) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to shbg |
RU2611192C2 (ru) | 2010-01-25 | 2017-02-21 | Курна, Инк. | ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С РНКазой Н1, ПУТЕМ ИНГИБИРОВАНИЯ ПРИРОДНОГО АНТИСМЫСЛОВОГО ТРАНСКРИПТА К РНКазе Н1 |
US8962586B2 (en) | 2010-02-22 | 2015-02-24 | Curna, Inc. | Treatment of pyrroline-5-carboxylate reductase 1 (PYCR1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to PYCR1 |
CA2795145C (en) | 2010-04-02 | 2019-01-22 | Curna, Inc. | Treatment of colony-stimulating factor 3 (csf3) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to csf3 |
TWI644675B (zh) | 2010-04-09 | 2018-12-21 | 可娜公司 | 藉由抑制纖維母細胞生長因子21(fgf21)之天然反義轉錄物以治療fgf21相關疾病 |
KR101915115B1 (ko) | 2010-05-03 | 2018-11-05 | 큐알엔에이, 인크. | 시르투인 (sirt)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 시르투인 (sirt) 관련된 질환의 치료 |
TWI531370B (zh) | 2010-05-14 | 2016-05-01 | 可娜公司 | 藉由抑制par4天然反股轉錄本治療par4相關疾病 |
US8895528B2 (en) | 2010-05-26 | 2014-11-25 | Curna, Inc. | Treatment of atonal homolog 1 (ATOH1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ATOH1 |
CN102971423B (zh) | 2010-05-26 | 2018-01-26 | 库尔纳公司 | 通过抑制蛋氨酸硫氧化物还原酶a(msra)的天然反义转录物而治疗msra相关疾病 |
AU2011268211B2 (en) | 2010-06-16 | 2015-07-16 | Dynavax Technologies Corporation | Methods of treatment using TLR7 and/or TLR9 inhibitors |
PT2585596T (pt) | 2010-06-23 | 2021-03-23 | Curna Inc | Tratamento de doenças relacionadas com a subunidade alfa de canais de sódio dependentes de voltagem (scna) por inibição da transcrição antissentido natural para scna |
US8980860B2 (en) | 2010-07-14 | 2015-03-17 | Curna, Inc. | Treatment of discs large homolog (DLG) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to DLG |
CN103210086B (zh) | 2010-10-06 | 2017-06-09 | 库尔纳公司 | 通过抑制唾液酸酶4(neu4)的天然反义转录物而治疗neu4相关疾病 |
EP2630241B1 (en) | 2010-10-22 | 2018-10-17 | CuRNA, Inc. | Treatment of alpha-l-iduronidase (idua) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to idua |
WO2012068340A2 (en) | 2010-11-18 | 2012-05-24 | Opko Curna Llc | Antagonat compositions and methods of use |
KR102010598B1 (ko) | 2010-11-23 | 2019-08-13 | 큐알엔에이, 인크. | Nanog에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 nanog 관련된 질환의 치료 |
WO2012082765A2 (en) | 2010-12-16 | 2012-06-21 | The United State Of America. As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services | Methods for decreasing body weight and treating diabetes |
CA2838588C (en) | 2011-06-09 | 2021-09-14 | Curna, Inc. | Treatment of frataxin (fxn) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to fxn |
US20150051389A1 (en) | 2011-08-11 | 2015-02-19 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Selective antisense compounds and uses thereof |
MX365525B (es) | 2011-09-06 | 2019-06-06 | Curna Inc | Compuestos que regulan la expresión de subunidades alfa de canales de sodio regulados por voltaje en enfermedades relacionadas con epilepsia mioclónica severa de la infancia. |
JP6129844B2 (ja) | 2011-09-14 | 2017-05-17 | ラナ セラピューティクス インコーポレイテッド | 多量体オリゴヌクレオチド化合物 |
CA2853373A1 (en) | 2011-10-25 | 2013-05-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of gccr expression |
KR20140136488A (ko) | 2012-03-15 | 2014-11-28 | 큐알엔에이, 인크. | 뇌 유래 신경영양 인자(bdnf)에 대한 천연 안티센스 전사체의 저해에 의한 뇌 유래 신경영양 인자(bdnf)관련 질환의 치료 |
WO2013173601A1 (en) * | 2012-05-16 | 2013-11-21 | Rana Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for modulating bdnf expression |
CN104583402A (zh) | 2012-05-16 | 2015-04-29 | Rana医疗有限公司 | 用于调节mecp2表达的组合物和方法 |
WO2013173645A1 (en) | 2012-05-16 | 2013-11-21 | Rana Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for modulating utrn expression |
CA2873766A1 (en) | 2012-05-16 | 2013-11-21 | Rana Therapeutics Inc. | Compositions and methods for modulating atp2a2 expression |
US10837014B2 (en) | 2012-05-16 | 2020-11-17 | Translate Bio Ma, Inc. | Compositions and methods for modulating SMN gene family expression |
CN104583399A (zh) | 2012-05-16 | 2015-04-29 | Rana医疗有限公司 | 用于调节血红蛋白基因家族表达的组合物和方法 |
SG11201407483YA (en) | 2012-05-16 | 2014-12-30 | Rana Therapeutics Inc | Compositions and methods for modulating smn gene family expression |
US20150247141A1 (en) | 2012-09-14 | 2015-09-03 | Rana Therapeutics, Inc. | Multimeric oligonucleotide compounds |
CA2908096C (en) | 2013-03-27 | 2022-05-03 | Isarna Therapeutics Gmbh | Modified tgf-beta oligonucleotides |
EP3007705A4 (en) * | 2013-06-12 | 2017-02-15 | Oncoimmunin, Inc. | Systemic in vivo delivery of oligonucleotides |
CN112263682A (zh) | 2013-06-27 | 2021-01-26 | 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 | 靶向pcsk9的反义寡聚体和缀合物 |
EP3033433B1 (en) * | 2013-08-12 | 2018-10-10 | Patogen As | Detection of organophosphate resistance in crustaceans |
WO2015023975A1 (en) * | 2013-08-16 | 2015-02-19 | Rana Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for modulating rna |
DK3234131T3 (da) * | 2014-12-16 | 2020-06-29 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | Fremgangsmåde til screening af kiral toksicitet |
WO2016130943A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | Rana Therapeutics, Inc. | Hybrid oligonucleotides and uses thereof |
MA43072A (fr) | 2015-07-22 | 2018-05-30 | Wave Life Sciences Ltd | Compositions d'oligonucléotides et procédés associés |
JP7089511B2 (ja) * | 2016-10-11 | 2022-06-22 | オリパス コーポレーション | HIF1-αアンチセンスオリゴヌクレオチド |
WO2018160772A1 (en) | 2017-02-28 | 2018-09-07 | The United State Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Method of treating obesity, insulin resistance, non-alcoholic fatty liver disease including non-alcoholic steatohepatitis |
Family Cites Families (47)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2601676B1 (fr) | 1986-07-17 | 1988-09-23 | Rhone Poulenc Sante | Procede de preparation du taxol et du desacetyl-10 taxol |
US5108921A (en) | 1989-04-03 | 1992-04-28 | Purdue Research Foundation | Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules |
US5278324A (en) * | 1990-08-28 | 1994-01-11 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Water soluble derivatives of taxol |
MX9102128A (es) | 1990-11-23 | 1992-07-08 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Derivados de taxano,procedimiento para su preparacion y composicion farmaceutica que los contiene |
US6030954A (en) * | 1991-09-05 | 2000-02-29 | University Of Connecticut | Targeted delivery of poly- or oligonucleotides to cells |
US5227400A (en) * | 1991-09-23 | 1993-07-13 | Florida State University | Furyl and thienyl substituted taxanes and pharmaceutical compositions containing them |
US5250683A (en) * | 1991-09-23 | 1993-10-05 | Florida State University | Certain substituted taxanes and pharmaceutical compositions containing them |
US5272171A (en) * | 1992-02-13 | 1993-12-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Phosphonooxy and carbonate derivatives of taxol |
FR2688518B1 (fr) | 1992-03-13 | 1994-05-06 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Procede de preparation de derives du taxane. |
US5248796A (en) * | 1992-06-18 | 1993-09-28 | Bristol-Myers Squibb Company | Taxol derivatives |
US5254580A (en) * | 1993-01-19 | 1993-10-19 | Bristol-Myers Squibb Company | 7,8-cyclopropataxanes |
US5672659A (en) * | 1993-01-06 | 1997-09-30 | Kinerton Limited | Ionic molecular conjugates of biodegradable polyesters and bioactive polypeptides |
US5801154A (en) * | 1993-10-18 | 1998-09-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein |
US5595760A (en) * | 1994-09-02 | 1997-01-21 | Delab | Sustained release of peptides from pharmaceutical compositions |
US5882914A (en) | 1995-06-06 | 1999-03-16 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Nucleic acids encoding the hypoxia inducible factor-1 |
US6770748B2 (en) * | 1997-03-07 | 2004-08-03 | Takeshi Imanishi | Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue |
US5994076A (en) * | 1997-05-21 | 1999-11-30 | Clontech Laboratories, Inc. | Methods of assaying differential expression |
JP4236812B2 (ja) | 1997-09-12 | 2009-03-11 | エクシコン エ/エス | オリゴヌクレオチド類似体 |
US6238921B1 (en) * | 1998-03-26 | 2001-05-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of human mdm2 expression |
EP1064378A2 (en) | 1998-03-27 | 2001-01-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Hypoxia-inducible human genes, proteins, and uses thereof |
WO2000012548A1 (en) | 1998-08-26 | 2000-03-09 | Salem-Teikyo University | Nucleic acid and polypeptide p10 of a borna disease virus (bdv) and their use for diagnostic and immunization purposes |
US6821724B1 (en) * | 1998-09-17 | 2004-11-23 | Affymetrix, Inc. | Methods of genetic analysis using nucleic acid arrays |
CA2367414C (en) | 1999-03-17 | 2007-06-26 | Sujoy Kumar Guha | An improved reversible contraceptive for male and female |
WO2000056748A1 (en) | 1999-03-18 | 2000-09-28 | Exiqon A/S | Xylo-lna analogues |
US6639059B1 (en) | 1999-03-24 | 2003-10-28 | Exiqon A/S | Synthesis of [2.2.1]bicyclo nucleosides |
AU4471700A (en) | 1999-04-26 | 2000-11-10 | University Of North Carolina At Chapel Hill, The | Antisense human fucosyltransferase sequences and methods of use thereof |
CA2372085C (en) | 1999-05-04 | 2009-10-27 | Exiqon A/S | L-ribo-lna analogues |
JP4638098B2 (ja) * | 1999-06-14 | 2011-02-23 | キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッド | 癌治療 |
CA2376284A1 (en) * | 1999-06-21 | 2000-12-28 | Murdoch Childrens Research Institute | A method for the prophylaxis and/or treatment of medical disorders |
US6168950B1 (en) * | 1999-07-23 | 2001-01-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of MEKK1 expression |
EP1216089B1 (en) | 1999-09-17 | 2006-06-21 | Millipore Corporation | Patterned porous structures |
AU7406700A (en) | 1999-10-04 | 2001-05-10 | Exiqon A/S | Design of high affinity rnase h recruiting oligonucleotide |
US6706505B1 (en) * | 2000-03-08 | 2004-03-16 | Amgen Inc | Human E3α ubiquitin ligase family |
HUP0301805A3 (en) * | 2000-09-02 | 2005-12-28 | Gruenenthal Gmbh | Antisense oligonucleotides against vanilloid receptor 1 |
US6998484B2 (en) | 2000-10-04 | 2006-02-14 | Santaris Pharma A/S | Synthesis of purine locked nucleic acid analogues |
AU2002231223A1 (en) * | 2000-10-26 | 2002-05-06 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Compositions and methods for treating hematologic malignancies and multiple drug resistance |
US20030125241A1 (en) | 2001-05-18 | 2003-07-03 | Margit Wissenbach | Therapeutic uses of LNA-modified oligonucleotides in infectious diseases |
DE60232443D1 (de) | 2001-06-05 | 2009-07-09 | Masahiro Hiraoka | Polypeptid-destabiliserendes protein in zellen unter aeroben bedingungen und dieses codierende dna |
JP4402454B2 (ja) | 2001-07-12 | 2010-01-20 | サンタリス ファーマ アー/エス | Lnaホスホラミダイトの製造法 |
US7153954B2 (en) * | 2001-07-12 | 2006-12-26 | Santaris Pharma A/S | Method for preparation of LNA phosphoramidites |
HUE037352T2 (hu) | 2002-04-05 | 2018-08-28 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | A HIF-1alfa expresszálódását módosító oligomer vegyületek |
CA2484526C (en) | 2002-05-08 | 2009-10-13 | Santaris Pharma A/S | Synthesis of locked nucleic acid derivatives |
JP5449639B2 (ja) | 2002-11-01 | 2014-03-19 | ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア | HIF−1アルファのsiRNA阻害に関する組成物及び方法 |
EP2752488B1 (en) | 2002-11-18 | 2020-02-12 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense design |
US7144999B2 (en) * | 2002-11-23 | 2006-12-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of hypoxia-inducible factor 1 alpha expression |
PT1592793E (pt) | 2003-02-10 | 2009-09-30 | Santaris Pharma As | Compostos oligoméricos para a modulação da expressão de survivina |
CA2515644A1 (en) | 2003-02-10 | 2004-08-19 | Santaris Pharma A/S | Oligomeric compounds for the modulation of ras expression |
-
2003
- 2003-04-04 HU HUE10175232A patent/HUE037352T2/hu unknown
- 2003-04-04 US US10/407,807 patent/US7737264B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-04-04 ES ES10175232.7T patent/ES2649817T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-04-04 DK DK10175232.7T patent/DK2264172T3/da active
- 2003-04-04 EP EP10175232.7A patent/EP2264172B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-04-04 JP JP2003582288A patent/JP4338527B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2003-04-04 AU AU2003225495A patent/AU2003225495B2/en not_active Ceased
- 2003-04-04 PT PT101752327T patent/PT2264172T/pt unknown
- 2003-04-04 EP EP03745870A patent/EP1501930A2/en not_active Withdrawn
- 2003-04-04 WO PCT/IB2003/001758 patent/WO2003085110A2/en active Application Filing
- 2003-04-04 SI SI200332557T patent/SI2264172T1/sl unknown
- 2003-04-04 CA CA2480311A patent/CA2480311C/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-05-25 JP JP2009125880A patent/JP2009189372A/ja active Pending
- 2009-10-15 US US12/580,126 patent/US7846911B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-10-27 US US12/913,173 patent/US8207140B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-05-22 US US13/477,825 patent/US8357670B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2012-12-21 US US13/725,540 patent/US8785617B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2017
- 2017-11-21 CY CY20171101215T patent/CY1119614T1/el unknown
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8513400B2 (en) | 2002-11-23 | 2013-08-20 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of HIF1α and HIF2α expression |
JP2006520195A (ja) * | 2003-01-28 | 2006-09-07 | レクサーン・コーポレイション | Hif−1発現を抑制するアンチセンスオリゴヌクレオチド |
JP2007119396A (ja) * | 2005-10-28 | 2007-05-17 | Hosokawa Funtai Gijutsu Kenkyusho:Kk | 核酸化合物封入ナノ粒子を含む経肺投与用医薬製剤 |
JP2016105703A (ja) * | 2007-11-26 | 2016-06-16 | エンゾン ファーマシューティカルズ,インコーポレーテッド | アンドロゲン受容体を標的化するlnaアンタゴニスト |
JP2015093853A (ja) * | 2013-11-12 | 2015-05-18 | 学校法人東京理科大学 | ボラノホスフェート化合物、及び核酸オリゴマー |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CY1119614T1 (el) | 2018-04-04 |
EP2264172A1 (en) | 2010-12-22 |
EP2264172B1 (en) | 2017-09-27 |
US20120270924A1 (en) | 2012-10-25 |
CA2480311C (en) | 2015-01-27 |
JP4338527B2 (ja) | 2009-10-07 |
AU2003225495A1 (en) | 2003-10-20 |
JP2009189372A (ja) | 2009-08-27 |
WO2003085110A2 (en) | 2003-10-16 |
CA2480311A1 (en) | 2003-10-16 |
HUE037352T2 (hu) | 2018-08-28 |
EP1501930A2 (en) | 2005-02-02 |
US20110224285A1 (en) | 2011-09-15 |
US20100093839A1 (en) | 2010-04-15 |
US20040096848A1 (en) | 2004-05-20 |
US8357670B2 (en) | 2013-01-22 |
US7737264B2 (en) | 2010-06-15 |
ES2649817T3 (es) | 2018-01-15 |
US7846911B2 (en) | 2010-12-07 |
US8785617B2 (en) | 2014-07-22 |
AU2003225495B2 (en) | 2009-01-15 |
US20130116309A1 (en) | 2013-05-09 |
US8207140B2 (en) | 2012-06-26 |
SI2264172T1 (sl) | 2017-12-29 |
WO2003085110A3 (en) | 2004-05-21 |
DK2264172T3 (da) | 2017-11-27 |
PT2264172T (pt) | 2017-12-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4338527B2 (ja) | HIF−1α発現を調節するオリゴマー化合物 | |
US7741309B2 (en) | Oligomeric compounds for the modulation of survivin expression | |
EP1592793B1 (en) | Oligomeric compounds for the modulation of survivin expression | |
US7622453B2 (en) | Oligomeric compounds for the modulation of Bcl-2 | |
US20080188432A1 (en) | Oligomeric compounds for the modulation ras expression | |
WO2007031091A2 (en) | Rna antagonist compounds for the modulation of p21 ras expression | |
US20040241717A1 (en) | Oligomeric compounds for the modulation of thioredoxin expression | |
JP2011526494A (ja) | Hsp27を標的化するrnaアンタゴニスト | |
JP2006518999A (ja) | チオレドキシン発現の改変のためのオリゴマー化合物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060330 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20070823 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20070823 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20070928 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20071015 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20081028 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20081225 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20081225 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20081226 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20090128 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090204 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20090224 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090303 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20090324 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090331 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090413 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090508 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090525 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20090615 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20090630 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4338527 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120710 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130710 Year of fee payment: 4 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |