JP2005522189A - (1−4)結合したβ−D−マンヌロン酸からの哺乳類、鳥類、魚、および爬虫類の経口免疫賦活 - Google Patents
(1−4)結合したβ−D−マンヌロン酸からの哺乳類、鳥類、魚、および爬虫類の経口免疫賦活 Download PDFInfo
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Abstract
Description
本発明は、少なくとも40%の(1−4)結合したβ−D−マンヌロン酸含量を有する、免疫賦活量のアルギン酸塩、および必要または所望であれば、許容可能なキャリアを含む、哺乳類、鳥類、魚、および爬虫類用の経口免疫賦活材料に関する。本発明はまた、哺乳類、鳥、魚、または爬虫類に本発明の材料を経口投与することを含む、哺乳類、鳥、魚、または爬虫類の免疫系を賦活する方法に関する。
本発明は、少なくとも40%のM含量を有する免疫賦活量のアルギン酸塩、および必要または所望であれば、許容可能なキャリアを含む、哺乳類、鳥類、魚、および爬虫類用の経口免疫賦活材料に関する。
少なくとも40%のM含量を有するアルギン酸塩は、本発明において、哺乳類、鳥類、魚、および爬虫類用の経口免疫賦活体として利用される。より詳細には、50%〜70%(レッソニア、ダービリア、およびラミナリア(Laminaria)由来など);70%〜80%(ダービリア由来など)および80%〜99.9%(細菌および例えば、以下の実施例に従って調製されるようなダービリアなどのアルギン酸塩の水抽出物に由来など)のM含量を有するアルギン酸塩が使用され得る。これらのアルギン酸塩は、異物による細胞攻撃および細胞の物理的損傷により引き起こされる疾患または外傷に対して、哺乳類、鳥類、魚、および爬虫類の免疫応答を賦活する。異物として、微生物、粒状物質、化学剤などが挙げられる。物理的損傷として、機械的創傷(擦過傷、裂傷、挫傷、創傷など)が挙げられる。
異なるダービリア種、D.ポタトルヌ(D.potatorum)(粉砕)(試料1)、およびD.アンタルクティカ(D.antarctica)(未粉砕)(試料2)からの出発原材料に、以下の表に記載される量で水を加え、3.5時間、55℃の温度で、時々手で攪拌した。周辺温度で一晩置いた後、藻類を55℃で1時間、2度抽出し、次いで2.5mlのホルムアルデヒドを加えて抽出を1時間続けた。
70メッシュより大きい粒子に破砕した1996年8月のダービリア・アンタルクティカからの試料を、出発物質として使用した。乾燥させた藻類30グラムを容器に量り取った。100mlの0.2MのHClを加え、そして材料を水で500mlに希釈した。撹拌して数分後、pHが2.3よりも上がったので、酸を加えてpHを2.3未満(PH1.8)に維持した。2分後、2.5mlの0.2MのHClを加えた。pHを常にpH2.3より低く、pH1.8に維持した場合、純水で膨潤させるのと比較して、材料はほとんど膨潤しなかった。1時間膨潤後、材料を、60メッシュの濾過布で濾し、手で圧縮し、そして容器に移した。次いで、得られる材料に500mlの水および50mlソーダ灰/水酸化ナトリウム溶液を加え、そして55℃で1時間抽出した。材料は非常に速く膨潤し、そしてペーストまたはパルプのようにどろどろになった。これを、次の日まで周辺温度に置いておいた。次いで、材料を55℃で1時間さらに抽出し、次いでミキサーユニットで破砕した。総量は、549グラムの重さになった。150グラムの材料を、撹拌しながら700グラムの水で希釈した。次いで、濾過助剤を加えた後、溶液を、水吸引からの減圧により、濾紙で濾過した。濾液の量は、測定すると564グラムとなり、これを10℃に冷却した。これに塩化ナトリウムを0.5%まで加え、そして希塩酸(1:1)を滴下してpHを1.6に調整した。柔らかい沈殿物が形成された。次いで、材料を120メッシュ濾過布で濾し、そして手で注意して圧縮した。次いで、材料を水に懸濁させ、そして20℃の温度で、約200mlの体積に希釈した。磁気攪拌を使用して、溶液のpHを固体ソーダ灰粉末で7に中和した。ガラス棒で攪拌することにより、同等の割合のイソプロピルアルコールで溶液が沈殿した。沈澱した線維を、70体積%イソプロピルアルコール溶液で1回洗った。次いで、純粋な100体積%イソプロピルアルコールで再度洗った。120メッシュ濾過布で濾して圧縮した後、線維をハサミで取り出し、次いで一晩真空で凍結乾燥させた。収量は、重さ1.04グラムのアルギン酸塩となり、ダービリア・アンタルクティカ出発物質から3.6重量%に相当した。M含量は、70%であり、そしてアルギン酸塩のブロック分布はNMRにより以下のように測定された。
抽出前工程において塩を加えることにより、マンヌロン酸の含量をさらに増加させることが可能である。1996年8月のチリからのダービリア・アンタルクティカ(破砕された>70メッシュの粗い粒子)藻類20グラムに500mlの水およびある量のNaCIを加え、そして攪拌速度140rpmで、温度20℃で2時間、ジャー(Jar)検査機械での攪拌下、抽出した。以下の表に記載されるとおりの溶液濃度まで塩を加えた。
別々のフラクション中のマンヌロン酸含量は、CaCl2を加えることによりさらに増加した。出発物質は、>70メッシュの粗い粒子に破砕された、チリ産のD.アンタルクティカであった。抽出前工程の量および条件は、以下の表に記載される。抽出前工程を、ジャー検査機で約140rpmでの攪拌下行った。
6腹からの、平均初期重量13.07kg(STD1.98)である、全部で48匹の交雑した[(ノルウェジアン・ランドレース(Norwegian Landrace)×ヨークシャ(Yorkshire))×ノルウェジアン・ランドレース]35〜38日齢の乳ばなれしたばかりのブタを、実験給餌研究のため4つの群に分け、そして環境を制御した保育舎に置いた。最初に、2.5m×2.5mの囲いあたり4匹のブタで、ブタを飼育した。給餌の6週間後、ブタを、個別の給餌区画のある15平方メートルの囲いに、囲いあたり6匹のブタで、移した。ブタには、無制限に、餌および水を取らせた。週1回の頻度で、個別にブタの重さを量った。ブタには、囲いに適合するための4日間の準備期間と標準的な市販の離乳用のブタの餌を取らせた。市販の餌(13%の水分含量)は、成長に必要なビタミンおよびミネラルで強化され、約18〜19%の原タンパク質含量、14〜15%の消化性タンパク質含量、40〜50%のデンプン含量、および約2.6%の原脂肪含量を有した。
ダービリア水抽出物アルギン酸塩(実施例5に記載されるとおり)を水に溶解し、そして短い超音波処理後、1リットルあたり4.2グラムのアルギン酸塩の濃度で溶解したアルギン酸塩を含む溶液を、市販の餌粒(Skretting/Nutreco, Dirdal, Norge)上に噴霧して餌に0.02%および0.06%のアルギン酸塩(重量%)を加えた。餌粒を2日間空気乾燥させてから、孵化したばかりのスポッティドウルフフィッシュ(アナリカス・マイナー(Anarhichas minor))稚魚に経口投与した。このダービリア・アンタルクティカ水抽出物は、8.3dl/gの固有粘度を有し、これはマーク・ホーウィンク式を用いて、推定重量、160000ダルトンの平均分子量に相当する。このダービリア水抽出物のアルギン酸塩試料は、マンヌロン酸(M)単位で0.89、およびグルロン酸(G)単位で0.11のモルフラクション含量を有する。MからMへの結合のフラクション含量、F(MM)は、0.81であった。GからGへの結合のフラクション含量、F(GG)は、0.03であった。MからGへの結合のフラクション含量、F(MG)は、GからMへの結合のフラクション含量F(GM)と等しく、0.09であった。
ダービリア水抽出物アルギン酸塩(実施例5に記載されるとおり)を水に溶解し、そして3%の濃度のアルギン酸塩を加えた。このダービリア・アンタルクティカ水抽出物は、4.7dl/gの固有粘度を有し、これはマーク・ホーウィンク式を用いて、推定重量、85000ダルトンの平均分子量に相当する。このダービリア水抽出物のアルギン酸塩試料は、マンヌロン酸(M)単位で0.88、およびグルロン酸(G)単位で0.12のモルフラクション含量を有する。MからMへの結合のフラクション含量、F(MM)は、0.80であった。GからGへの結合のフラクション含量、F(GG)は、0.04であった。MからGへの結合のフラクション含量、F(MG)は、GからMへの結合のフラクション含量F(GM)と等しく、0.08であった。
ダービリア水抽出物アルギン酸塩(実施例5に記載されるとおり)を水に溶解し、そして市販の餌(Biomar Ecoweaner EMB 16244)の一部をベンチトップ流動床反応器で異なる量のアルギン酸塩溶液を噴霧コーティングした。乾燥餌粒子を、実施例7におけるように、異なる濃度のアルギン酸塩(0.01%、0.06%、および0.10%)で戻した。
実施例7でのスポッティドウルフフィッシュの幼生の成長研究における死亡率が記録され、そして図11に示される。いずれの群の間にも有意差は測定されなかった(P<0.05)。
実施例8でのタラの幼生の成長研究における死亡率が記録され、そして図12に示される。いずれの群の間にも有意差は測定されなかった(P<0.05)。
Claims (41)
- 免疫賦活量の、少なくとも40%のマンヌロン酸(M)含量を有するアルギン酸塩、および許容可能なキャリアを含む、魚用の経口免疫賦活材料(material)。
- 前記M含量が50%〜70%である、請求項1に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- 前記M含量が70%〜80%である、請求項1に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- 前記M含量が80%〜99.9%である、請求項1に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- 前記アルギン酸塩が、レッソニア(Lessonia)海草、ダービリア(Durvillea)海草、またはラミナリア(Laminaria)海草由来である、請求項2に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- 前記アルギン酸塩が、ダービリア海草由来である、請求項3に記載の材料。
- 前記アルギン酸塩が、細菌またはダービリア水抽出物由来である、請求項4に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- (i)薬学的、獣医学的、または栄養補助的な、固体剤形または液体配合物(formulation)、(ii)固体、半固体、または液体食、あるいは(iii)固体または液体の栄養補助物である、請求項1に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- 免疫賦活量の免疫賦活材料を魚に経口投与することを含む、前記魚の免疫系を賦活する方法であって、ここで前記材料が、少なくとも40%のM含量を有するアルギン酸塩および許容可能なキャリアを含む、魚の免疫系を賦活する方法。
- 前記M含量が50%〜70%である、請求項9に記載の魚の免疫系を賦活する方法。
- 前記M含量が70%〜80%である、請求項9に記載の魚の免疫系を賦活する方法。
- 前記M含量が80%〜99.9%である、請求項9に記載の魚の免疫系を賦活する方法。
- 前記摂取材料が、(i)薬学的、獣医学的、または栄養補助的な、固体剤形または液体配合物、(ii)固体、または液体食、あるいは(iii)固体または液体の栄養補助物である、請求項9に記載の魚の免疫系を賦活する方法。
- 免疫賦活量の、少なくとも80%のM含量を有するアルギン酸塩、および許容可能なキャリアを含む、魚用の経口免疫賦活材料であって、ここで前記アルギン酸塩が、ダービリア海草を水に混合かつ膨潤させること、少なくとも30分間、約20℃を超える温度で、約2.3を超えるpHに維持すること、前記混合物から可溶化フラクションを単離すること、および酸、塩、またはアルコールでの沈殿により前記可溶化フラクションから前記少なくとも80%のM含量を有するアルギン酸塩を回収することにより作られる、魚用の経口免疫賦活材料。
- (i)薬学的、獣医学的、または栄養補助的な、固体剤形または液体配合物、(ii)固体または液体食、(iii)固体または液体の栄養補助物である、請求項14に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- 請求項14の免疫賦活量の免疫賦活材料を哺乳類、鳥類、魚、および爬虫類に経口投与することを含む、該魚の免疫系を賦活する方法。
- 免疫賦活量の賦活材料を魚に経口投与することを含む、免疫賦活を通して前記魚の体重増加を賦活する方法であって、ここで前記材料が、少なくとも40%のM含量を有するアルギン酸塩および許容可能なキャリアを含む、魚の体重増加を賦活する方法。
- 前記M含量が50%〜70%である、請求項17に記載の魚の体重増加を賦活する方法。
- 前記M含量が70%〜80%である、請求項17に記載の魚の体重増加を賦活する方法。
- 前記M含量が80%〜99.9%である、請求項17に記載の魚の体重増加を賦活する方法。
- 免疫賦活量の、少なくとも40%のM含量を有するアルギン酸塩を含む、魚用の経口免疫賦活材料。
- 前記M含量が50%〜70%である、請求項21に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- 前記M含量が70%〜80%である、請求項21に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- 前記M含量が80%〜99.9%である、請求項21に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- 免疫賦活量の免疫賦活材料を魚に経口投与することを含む、前記魚の免疫系を賦活する方法であって、ここで前記材料が、少なくとも40%のM含量を有するアルギン酸塩を含む、魚の免疫系を賦活する方法。
- 前記M含量が50%〜70%である、請求項25に記載の魚の免疫系を賦活する方法。
- 前記M含量が70%〜80%である、請求項25に記載の魚の免疫系を賦活する方法。
- 前記M含量が80%〜99.9%である、請求項25に記載の魚の免疫系を賦活する方法。
- 免疫賦活量の、少なくとも40%のM含量を有するアルギン酸塩を含むが、ただし前記アルギン酸塩が合成的に作られるか、または海草もしくは細菌源から単離されるかのいずれかである、魚用の経口免疫賦活材料。
- 前記M含量が50%〜70%である、請求項29に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- 前記M含量が70%〜80%である、請求項29に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- 前記M含量が80%〜99.9%である、請求項29に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- 許容可能なキャリアをさらに含む、請求項29に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- (i)薬学的、獣医学的、または栄養補助的な、固体剤形または液体配合物、(ii)固体、半固体、または液体食、あるいは(iii)固体または液体の栄養補助物である、請求項29に記載の魚用の経口免疫賦活材料。
- 免疫賦活量の免疫賦活材料を魚に経口投与することを含む、前記魚の免疫系を賦活する方法であって、ここで前記材料は、少なくとも40%のM含量を有するアルギン酸塩を含むが、ただし該アルギン酸塩は合成的に作られるか、または海草もしくは細菌源から単離されるかのいずれかである魚の免疫系を賦活する方法。
- 前記材料が許容可能なキャリアをさらに含む、請求項35に記載の魚の免疫系を賦活する方法。
- 前記M含量が50%〜70%である、請求項35に記載の魚の免疫系を賦活する方法。
- 前記M含量が70%〜80%である、請求項35に記載の魚の免疫系を賦活する方法。
- 前記M含量が80%〜99.9%である、請求項35に記載の魚の免疫系を賦活する方法。
- 許容可能なキャリアをさらに含む、請求項35に記載の魚の免疫系を賦活する方法。
- 前記材料が、(i)薬学的、獣医学的、または栄養補助的な、固体剤形または液体配合物、(ii)固体、半固体、または液体食、(iii)固体または液体の栄養補助物である、請求項35に記載の魚の免疫系を賦活する方法。
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