JP2005287333A5 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- JP2005287333A5 JP2005287333A5 JP2004103652A JP2004103652A JP2005287333A5 JP 2005287333 A5 JP2005287333 A5 JP 2005287333A5 JP 2004103652 A JP2004103652 A JP 2004103652A JP 2004103652 A JP2004103652 A JP 2004103652A JP 2005287333 A5 JP2005287333 A5 JP 2005287333A5
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gene
- seq
- sequence shown
- protein
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Description
また、本発明者らは、Ｌ−システイン分解系が抑制され、かつ、Ｌ−システインによるフィードバック阻害が低減されたセリンアセチルトランスフェラーゼ（serine acetyltransferase（EC 2.3.1.30）：以下、「SAT」ともいう）を保持するエシェリヒア属細菌を用いたＬ−システインの製造法を開示している（特許文献３又は４参照）。これらの文献では、Ｌ−システイン分解系を抑制する手段としては、細胞中のシステインデスルフヒドラーゼ活性を低下させることが開示されている。
ｅｍｒＡＢ、ｅｍｒＫＹ、ｙｏｊＩＨ、ａｃｒＥＦ、ｂｃｒ、ｃｕｓＡ遺伝子は、過剰発現させた際に宿主微生物に種々の薬剤に対する耐性を付与する遺伝子として知られていた（非特許文献６参照）。しかしながら、これらの遺伝子がシステイン排出能を有するかどうかは不明であった。
特表２０００−５０４９２６号公報
特開平１１−５６３８１号公報
特開平１１−１５５５７１号公報
特開２００３−１６９６６８号公報
特許第２９９２０１０号公報
FEMS Microbiol. Lett., vol.179 (1999) p453-459
J.Bacteriol., 185, (2003) p1161-1166
J.Biol.Chem., 277(2002) p49841-49849
J.Bacteriol., Vol.183, （2001） p5803-5812
すなわち本発明は、以下のとおりである。
（１）Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｅｍｒＡＢ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
（２） ｅｍｒＡＢ遺伝子が以下の（Ａ）又は（Ｂ）の遺伝子である（１）の微生物、（Ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列を有するタンパク質及び配列番号４に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質、及び配列番号４に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（３） ｅｍｒＡＢ遺伝子が以下の（ａ）又は（ｂ）の遺伝子である（１）の微生物、（ａ）配列番号１に示す塩基配列及び配列番号３に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｂ）配列番号１に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子及び配列番号３に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子を含む遺伝子。
（４） Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｅｍｒＫＹ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
（５） ｅｍｒＫＹ遺伝子が以下の（Ｃ）又は（Ｄ）の遺伝子である（４）の微生物、（Ｃ）配列番号６に示すアミノ酸配列を有するタンパク質及び配列番号８に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｄ）配列番号６に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質及び
配列番号８に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（６） ｅｍｒＫＹ遺伝子が以下の（ｃ）又は（ｄ）の遺伝子である（４）の微生物、（ｃ）配列番号５に示す塩基配列及び配列番号７に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｄ）配列番号５に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子及び配列番号７に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子を含む遺伝子。
（７） Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｙｏｊＩＨ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
（８） ｙｏｊＩＨ遺伝子が以下の（Ｅ）又は（Ｆ）の遺伝子である（７）に記載の微
生物、
（Ｅ）配列番号１０に示すアミノ酸配列を有するタンパク質及び配列番号１２に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｆ）配列番号１０に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質及び配列番号１２に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（９） ｙｏｊＩＨ遺伝子が以下の（ｅ）又は（ｆ）の遺伝子である（７）の微生物、（ｅ）配列番号９に示す塩基配列及び配列番号１１に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｆ）配列番号９に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子及び配列番号１１に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子を含む遺伝子。
（１０） Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ａｃｒＥＦ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
（１１） ａｃｒＥＦ遺伝子が以下の（Ｇ）又は（Ｈ）の遺伝子である（１０）の微生物、
（Ｇ）配列番号１４に示すアミノ酸配列を有するタンパク質及び配列番号１６に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｈ）配列番号１４に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質及び配列番号１６に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（１２） ａｃｒＥＦ遺伝子が以下の（ｇ）又は（ｈ）の遺伝子である（１０）の微生物、
（ｇ）配列番号１３に示す塩基配列及び配列番号１５に示す塩基配列を含む遺伝子、又は（ｈ）配列番号１３に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子及び配列番号１５に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子を含む遺伝子。
（１３） Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｂｃｒ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
（１４） ｂｃｒ遺伝子が以下の（Ｉ）又は（Ｊ）の遺伝子である（１３）の微生物、（
Ｉ）配列番号１８に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｊ）配列番号１８に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（１５） ｂｃｒ遺伝子が以下の（ｉ）又は（ｊ）の遺伝子である（１３）の微生物、（ｉ）配列番号１７に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｊ）配列番号１７に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（１６） Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｃｕｓＡ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
（１７） ｃｕｓＡ遺伝子が以下の（Ｋ）又は（Ｌ）の遺伝子である（１６）の微生物、
（Ｋ）配列番号２０に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｌ）配列番号２０に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（１８） ｃｕｓＡ遺伝子が以下の（ｋ）又は（ｌ）の遺伝子である（１６）の微生物、
（ｋ）配列番号１９に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｌ）配列番号１９に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（１９） エシェリヒア属細菌である（１）〜（１８）のいずれかの微生物。
（２０） エシェリヒア・コリである（１９）の微生物。
（２１） さらにセリンアセチルトランスフェラーゼ活性が増強するように改変された（１）〜（２０）のいずれかの微生物。
（２２） （１）〜（２１）のいずれかの微生物を培地で培養し、Ｌ−システインを培地中に生成蓄積させ、該培地よりＬ−システインを採取する、Ｌ−システインの製造法。
（１）Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｅｍｒＡＢ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
（２） ｅｍｒＡＢ遺伝子が以下の（Ａ）又は（Ｂ）の遺伝子である（１）の微生物、（Ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列を有するタンパク質及び配列番号４に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質、及び配列番号４に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（３） ｅｍｒＡＢ遺伝子が以下の（ａ）又は（ｂ）の遺伝子である（１）の微生物、（ａ）配列番号１に示す塩基配列及び配列番号３に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｂ）配列番号１に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子及び配列番号３に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子を含む遺伝子。
（４） Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｅｍｒＫＹ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
（５） ｅｍｒＫＹ遺伝子が以下の（Ｃ）又は（Ｄ）の遺伝子である（４）の微生物、（Ｃ）配列番号６に示すアミノ酸配列を有するタンパク質及び配列番号８に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｄ）配列番号６に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質及び
配列番号８に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（６） ｅｍｒＫＹ遺伝子が以下の（ｃ）又は（ｄ）の遺伝子である（４）の微生物、（ｃ）配列番号５に示す塩基配列及び配列番号７に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｄ）配列番号５に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子及び配列番号７に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子を含む遺伝子。
（７） Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｙｏｊＩＨ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
（８） ｙｏｊＩＨ遺伝子が以下の（Ｅ）又は（Ｆ）の遺伝子である（７）に記載の微
生物、
（Ｅ）配列番号１０に示すアミノ酸配列を有するタンパク質及び配列番号１２に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｆ）配列番号１０に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質及び配列番号１２に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（９） ｙｏｊＩＨ遺伝子が以下の（ｅ）又は（ｆ）の遺伝子である（７）の微生物、（ｅ）配列番号９に示す塩基配列及び配列番号１１に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｆ）配列番号９に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子及び配列番号１１に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子を含む遺伝子。
（１０） Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ａｃｒＥＦ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
（１１） ａｃｒＥＦ遺伝子が以下の（Ｇ）又は（Ｈ）の遺伝子である（１０）の微生物、
（Ｇ）配列番号１４に示すアミノ酸配列を有するタンパク質及び配列番号１６に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｈ）配列番号１４に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質及び配列番号１６に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（１２） ａｃｒＥＦ遺伝子が以下の（ｇ）又は（ｈ）の遺伝子である（１０）の微生物、
（ｇ）配列番号１３に示す塩基配列及び配列番号１５に示す塩基配列を含む遺伝子、又は（ｈ）配列番号１３に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子及び配列番号１５に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子を含む遺伝子。
（１３） Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｂｃｒ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
（１４） ｂｃｒ遺伝子が以下の（Ｉ）又は（Ｊ）の遺伝子である（１３）の微生物、（
Ｉ）配列番号１８に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｊ）配列番号１８に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（１５） ｂｃｒ遺伝子が以下の（ｉ）又は（ｊ）の遺伝子である（１３）の微生物、（ｉ）配列番号１７に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｊ）配列番号１７に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（１６） Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｃｕｓＡ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
（１７） ｃｕｓＡ遺伝子が以下の（Ｋ）又は（Ｌ）の遺伝子である（１６）の微生物、
（Ｋ）配列番号２０に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｌ）配列番号２０に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（１８） ｃｕｓＡ遺伝子が以下の（ｋ）又は（ｌ）の遺伝子である（１６）の微生物、
（ｋ）配列番号１９に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｌ）配列番号１９に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。
（１９） エシェリヒア属細菌である（１）〜（１８）のいずれかの微生物。
（２０） エシェリヒア・コリである（１９）の微生物。
（２１） さらにセリンアセチルトランスフェラーゼ活性が増強するように改変された（１）〜（２０）のいずれかの微生物。
（２２） （１）〜（２１）のいずれかの微生物を培地で培養し、Ｌ−システインを培地中に生成蓄積させ、該培地よりＬ−システインを採取する、Ｌ−システインの製造法。
本発明において、ｅｍｒＡＢ遺伝子としてはｅｍｒＡ遺伝子及びｅｍｒＢ遺伝子を含む遺伝子をいう。これらの遺伝子は同時に発現を強化してもよいし、別々に発現強化してもよい。ｅｍｒＡ遺伝子としては、配列番号２に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子を挙げることができる。また、ｅｍｒＢ遺伝子としては、配列番号４に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子を挙げることができる。これらの遺伝子は、Ｌ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする限りにおいて、上記配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子であってもよい。また、Ｌ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする限りにおいて、上記配列と８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上相同なアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子であってもよい。なお、上記数個とは、２〜２０個が好ましく、２〜１０個がより好ましく、２〜５個が特に好ましい。Ｌ−システイン排出能は、例えば、上記遺伝子を導入した微生物を培養したときに培地中に排出されるＬ−システインの量が野生株に比べて増加するか否かを調べることによって測定することができる。
（１）システイン排出遺伝子及びシステイン生合成系を増強した菌株の構築
親株としてはJM39株（F+ cysE51 tfr-8）（Denk,D. and Bock,A., J. Gen. Microbiol., 133, 515-525 (1987)）を用いた。JM39株を、pUC118に各種システイン排出遺伝子を組み込んだプラスミド（pUCemrAB、pUCemrKY、pUCyojIH、pUCacrEF、pUCbcr、pUCcusA）で各々形質転換した。各プラスミドの構築は、J.Bacteriol., Vol.183, 2001, 5803-5812のMaterials and Methods及びTable 1に記載の方法で行った。なお、pUCemrABはエシェリヒア・コリのemrR , emrA , 及びemrB遺伝子を含む3.9-kbのSalI-BamHI fragmentを含むプラスミドである。pUCemrKYはエシェリヒア・コリのevgS/A, emrK 及びemrY遺伝子を含む7.5-kbのSphI-BamHI fragmentである。pUCyojIHはエシェリヒア・コリのyojI 及びyojH遺伝子を含む4.0-kbのSalI-SphI fragmentである。pUCacrEFはエシェリヒア・コリのenvR, acrE 及びacrF遺伝子を含む5.9-kbのSalI-SphI fragmentである。pUCbcrはエシェリヒア・コリのyeiD 及びbcr遺伝子を含む2.3-kbのAccI-KpnI fragmentである。pUCcusAはエシェリヒア・コリのcusS, cusR/C/F/B 及びcusA遺伝子を含む9.0-kbのSphI-EcoRI fragmentである。形質転換株は、アンピシリン耐性を指標として選択した。得られた形質転換体について、256番目のMetがIleに置換された変異型SAT遺伝子を含有するプラスミド（pACYC256I）にて形質転換した。形質転換株は、アンピシリン耐性＋クロラムフェニコール耐性を指標として選択した。なお、pACYC256IはpCEM256I（特開平１１−１５５５７１）に基き、以下のようにして構築した。すなわち、pCEM256I をBamHIとSalIで切断し、得られたMet256Ile変異型SATの遺伝子（プロモーター領域含む）を同制限酵素で切断したpACYC184（NIPPON GENE社）のラージフラグメントに連結してpACYC256Iを作製した。
親株としてはJM39株（F+ cysE51 tfr-8）（Denk,D. and Bock,A., J. Gen. Microbiol., 133, 515-525 (1987)）を用いた。JM39株を、pUC118に各種システイン排出遺伝子を組み込んだプラスミド（pUCemrAB、pUCemrKY、pUCyojIH、pUCacrEF、pUCbcr、pUCcusA）で各々形質転換した。各プラスミドの構築は、J.Bacteriol., Vol.183, 2001, 5803-5812のMaterials and Methods及びTable 1に記載の方法で行った。なお、pUCemrABはエシェリヒア・コリのemrR , emrA , 及びemrB遺伝子を含む3.9-kbのSalI-BamHI fragmentを含むプラスミドである。pUCemrKYはエシェリヒア・コリのevgS/A, emrK 及びemrY遺伝子を含む7.5-kbのSphI-BamHI fragmentである。pUCyojIHはエシェリヒア・コリのyojI 及びyojH遺伝子を含む4.0-kbのSalI-SphI fragmentである。pUCacrEFはエシェリヒア・コリのenvR, acrE 及びacrF遺伝子を含む5.9-kbのSalI-SphI fragmentである。pUCbcrはエシェリヒア・コリのyeiD 及びbcr遺伝子を含む2.3-kbのAccI-KpnI fragmentである。pUCcusAはエシェリヒア・コリのcusS, cusR/C/F/B 及びcusA遺伝子を含む9.0-kbのSphI-EcoRI fragmentである。形質転換株は、アンピシリン耐性を指標として選択した。得られた形質転換体について、256番目のMetがIleに置換された変異型SAT遺伝子を含有するプラスミド（pACYC256I）にて形質転換した。形質転換株は、アンピシリン耐性＋クロラムフェニコール耐性を指標として選択した。なお、pACYC256IはpCEM256I（特開平１１−１５５５７１）に基き、以下のようにして構築した。すなわち、pCEM256I をBamHIとSalIで切断し、得られたMet256Ile変異型SATの遺伝子（プロモーター領域含む）を同制限酵素で切断したpACYC184（NIPPON GENE社）のラージフラグメントに連結してpACYC256Iを作製した。
Claims (22)
- Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｅｍｒＡＢ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
- ｅｍｒＡＢ遺伝子が以下の（Ａ）又は（Ｂ）の遺伝子である請求項１に記載の微生物、
（Ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列を有するタンパク質及び配列番号４に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質、及び配列番号４に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。 - ｅｍｒＡＢ遺伝子が以下の（ａ）又は（ｂ）の遺伝子である請求項１に記載の微生物、
（ａ）配列番号１に示す塩基配列及び配列番号３に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｂ）配列番号１に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子及び配列番号３に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子を含む遺伝子。 - Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｅｍｒＫＹ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
- ｅｍｒＫＹ遺伝子が以下の（Ｃ）又は（Ｄ）の遺伝子である請求項４に記載の微生物、
（Ｃ）配列番号６に示すアミノ酸配列を有するタンパク質及び配列番号８に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｄ）配列番号６に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質及び配列番号８に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。 - ｅｍｒＫＹ遺伝子が以下の（ｃ）又は（ｄ）の遺伝子である請求項４に記載の微生物、
（ｃ）配列番号５に示す塩基配列及び配列番号７に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｄ）配列番号５に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子及び配列番号７に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子を含む遺伝子。 - Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｙｏｊＩＨ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
- ｙｏｊＩＨ遺伝子が以下の（Ｅ）又は（Ｆ）の遺伝子である請求項７に記載の微生物、
（Ｅ）配列番号１０に示すアミノ酸配列を有するタンパク質及び配列番号１２に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｆ）配列番号１０に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質及び配列番号１２に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。 - ｙｏｊＩＨ遺伝子が以下の（ｅ）又は（ｆ）の遺伝子である請求項７に記載の微生物、
（ｅ）配列番号９に示す塩基配列及び配列番号１１に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｆ）配列番号９に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子及び配列番号１１に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子を含む遺伝子。 - Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ａｃｒＥＦ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
- ａｃｒＥＦ遺伝子が以下の（Ｇ）又は（Ｈ）の遺伝子である請求項１０に記載の微生物、（Ｇ）配列番号１４に示すアミノ酸配列を有するタンパク質及び配列番号１６に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｈ）配列番号１４に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質及び配列番号１６に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。 - ａｃｒＥＦ遺伝子が以下の（ｇ）又は（ｈ）の遺伝子である請求項１０に記載の微生物、（ｇ）配列番号１３に示す塩基配列及び配列番号１５に示す塩基配列を含む遺伝子、又は（ｈ）配列番号１３に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子及び配列番号１５に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子を含む遺伝子。
- Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｂｃｒ遺伝子の発現が上昇するように改変された微
生物。 - ｂｃｒ遺伝子が以下の（Ｉ）又は（Ｊ）の遺伝子である請求項１３に記載の微生物、
（Ｉ）配列番号１８に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｊ）配列番号１８に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。 - ｂｃｒ遺伝子が以下の（ｉ）又は（ｊ）の遺伝子である請求項１３に記載の微生物、
（ｉ）配列番号１７に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｊ）配列番号１７に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。 - Ｌ−システイン生産能を有し、かつ、ｃｕｓＡ遺伝子の発現が上昇するように改変された微生物。
- ｃｕｓＡ遺伝子が以下の（Ｋ）又は（Ｌ）の遺伝子である請求項１６に記載の微生物、
（Ｋ）配列番号２０に示すアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は
（Ｌ）配列番号２０に示すアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。 - ｃｕｓＡ遺伝子が以下の（ｋ）又は（ｌ）の遺伝子である請求項１６に記載の微生物、
（ｋ）配列番号１９に示す塩基配列を含む遺伝子、又は
（ｌ）配列番号１９に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＬ−システイン排出能を有するタンパク質をコードする遺伝子。 - エシェリヒア属細菌である請求項１〜１８のいずれか一項に記載の微生物。
- エシェリヒア・コリである請求項１９に記載の微生物。
- さらにセリンアセチルトランスフェラーゼ活性が増強するように改変された請求項１〜２０のいずれか一項に記載の微生物。
- 請求項１〜２１のいずれか一項に記載の微生物を培地で培養し、Ｌ−システインを培地中に生成蓄積させ、該培地よりＬ−システインを採取する、Ｌ−システインの製造法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2004103652A JP4604537B2 (ja) | 2004-03-31 | 2004-03-31 | Ｌ−システイン生産菌及びｌ−システインの製造法 |
| US10/957,828 US20050221453A1 (en) | 2004-03-31 | 2004-10-05 | L-cysteine producing microorganism and method for producing L-cysteine |
| US11/776,306 US20090226982A1 (en) | 2004-03-31 | 2007-07-11 | L-cysteine producing microorganism and method for producing l-cysteine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2004103652A JP4604537B2 (ja) | 2004-03-31 | 2004-03-31 | Ｌ−システイン生産菌及びｌ−システインの製造法 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2005287333A JP2005287333A (ja) | 2005-10-20 |
| JP2005287333A5 true JP2005287333A5 (ja) | 2007-02-22 |
| JP4604537B2 JP4604537B2 (ja) | 2011-01-05 |
Family
ID=35054867
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2004103652A Expired - Fee Related JP4604537B2 (ja) | 2004-03-31 | 2004-03-31 | Ｌ−システイン生産菌及びｌ−システインの製造法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20050221453A1 (ja) |
| JP (1) | JP4604537B2 (ja) |
Families Citing this family (48)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7572607B2 (en) * | 2002-04-23 | 2009-08-11 | Cargill, Incorporated | Polypeptides and biosynthetic pathways for the production of monatin and its precursors |
| US8372989B2 (en) * | 2002-04-23 | 2013-02-12 | Cargill, Incorporated | Polypeptides and biosynthetic pathways for the production of monatin and its precursors |
| KR20060061811A (ko) * | 2003-08-01 | 2006-06-08 | 카아길, 인코포레이팃드 | 모나틴 식탁용 감미제 조성물 및 이의 제조 방법 |
| AU2004268594A1 (en) * | 2003-08-25 | 2005-03-10 | Cargill, Incorporated | Beverage compositions comprising monatin and methods of making same |
| DE602004031444D1 (de) * | 2003-10-21 | 2011-03-31 | Cargill Inc | Herstellung von monatin und monatinvorstufen |
| US8153405B2 (en) * | 2005-04-20 | 2012-04-10 | Cargill, Incorporated | Products and methods for in vivo secretion of monatin |
| US8158389B2 (en) * | 2005-04-20 | 2012-04-17 | Cargill, Incorporated | Products and methods for in vivo secretion of monatin |
| US7582455B2 (en) * | 2005-04-26 | 2009-09-01 | Cargill, Incorporated | Polypeptides and biosynthetic pathways for the production of stereoisomers of monatin and their precursors |
| US8076108B2 (en) | 2005-04-26 | 2011-12-13 | Cargill, Incorporated | Polypeptides and biosynthetic pathways for the production of stereoisomers of monatin and their precursors |
| BRPI0708673A2 (pt) | 2006-03-07 | 2011-06-07 | Cargill Inc | método para fabricação de polipeptìdeos com atividade de aldolase e polinucleotìdeos que codificam estes polipeptìdeos |
| US20090198072A1 (en) * | 2006-05-24 | 2009-08-06 | Cargill, Incorporated | Methods and systems for increasing production of equilibrium reactions |
| CA2653054A1 (en) * | 2006-05-24 | 2007-12-06 | Cargill, Incorporated | Methods and systems for increasing production of equilibrium reactions |
| DE102007007333A1 (de) | 2007-02-14 | 2008-08-21 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur Reinigung von L-Cystein |
| JP5319521B2 (ja) * | 2007-04-06 | 2013-10-16 | 協和発酵バイオ株式会社 | ジペプチドの製造法 |
| US8076107B2 (en) * | 2007-10-01 | 2011-12-13 | Cargill, Incorporated | Production of monatin stereoisomers |
| US8367847B2 (en) * | 2007-10-01 | 2013-02-05 | Cargill, Incorporated | Production of monatin enantiomers |
| US8003361B2 (en) * | 2007-10-01 | 2011-08-23 | Cargill Incorporated | Production of monatin enantiomers |
| EP2246420B1 (en) | 2008-02-21 | 2014-12-31 | Ajinomoto Co., Inc. | L-cysteine-producing bacterium, and method for production of l-cysteine |
| JP5332237B2 (ja) | 2008-03-06 | 2013-11-06 | 味の素株式会社 | Ｌ−システイン生産菌及びｌ−システインの製造法 |
| DE602009000714D1 (de) | 2008-03-06 | 2011-03-24 | Ajinomoto Kk | L-Zystein-produzierendes Bakterium und Verfahren zur Herstellung von L-Zystein |
| JP5521347B2 (ja) | 2009-02-16 | 2014-06-11 | 味の素株式会社 | Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP5463528B2 (ja) | 2009-02-25 | 2014-04-09 | 味の素株式会社 | Ｌ−システイン生産菌及びｌ−システインの製造法 |
| JP5359409B2 (ja) * | 2009-03-12 | 2013-12-04 | 味の素株式会社 | Ｌ−システイン生産菌及びｌ−システインの製造法 |
| CN102639691B (zh) | 2009-11-30 | 2014-04-16 | 味之素株式会社 | 生产l-半胱氨酸的细菌以及生产l-半胱氨酸的方法 |
| RU2460793C2 (ru) * | 2010-01-15 | 2012-09-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae |
| EP2617808B1 (en) | 2010-09-14 | 2016-06-15 | Ajinomoto Co., Inc. | Sulfur-containing amino acid-producing bacterium and method for producing sulfur-containing amino acids |
| JP2014087259A (ja) | 2011-02-22 | 2014-05-15 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−システイン生産菌及びｌ−システインの製造法 |
| WO2012137689A1 (ja) | 2011-04-01 | 2012-10-11 | 味の素株式会社 | Ｌ－システインの製造法 |
| US9234223B2 (en) | 2011-04-01 | 2016-01-12 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing L-cysteine |
| JP2014131487A (ja) | 2011-04-18 | 2014-07-17 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−システインの製造法 |
| DE102011075656A1 (de) | 2011-05-11 | 2012-03-29 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur fermentativen Produktion von L-Cystin |
| DE102011078481A1 (de) | 2011-06-30 | 2013-01-03 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur fermentativen Produktion von natürlichem L-Cystein |
| DE102012208359A1 (de) | 2012-05-18 | 2013-11-21 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur fermentativen Produktion von L-Cystein und Derivaten dieser Aminosäure |
| DE102012216527A1 (de) | 2012-09-17 | 2014-03-20 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur fermentativen Produktion von L-Cystein und Derivaten dieser Aminosäure |
| WO2014185430A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-11-20 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| JP2016165225A (ja) | 2013-07-09 | 2016-09-15 | 味の素株式会社 | 有用物質の製造方法 |
| JP6459962B2 (ja) | 2013-10-21 | 2019-01-30 | 味の素株式会社 | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| EP3061828A4 (en) | 2013-10-23 | 2017-03-15 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing target substance |
| JP7066977B2 (ja) | 2017-04-03 | 2022-05-16 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| KR20190092951A (ko) | 2018-01-31 | 2019-08-08 | 씨제이제일제당 (주) | 연속식 크로마토그래피 공정을 이용한 천연 l-시스테인 결정의 제조 방법 |
| KR20190092950A (ko) | 2018-01-31 | 2019-08-08 | 씨제이제일제당 (주) | 연속식 크로마토그래피 공정을 이용한 천연 l-시스테인 염산염 수화물 결정의 제조 방법 |
| WO2020071538A1 (en) | 2018-10-05 | 2020-04-09 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing target substance by bacterial fermentation |
| WO2020171227A1 (en) | 2019-02-22 | 2020-08-27 | Ajinomoto Co., Inc. | METHOD FOR PRODUCING L-AMINO ACIDS USING A BACTERIUM BELONGING TO THE FAMILY Enterobacteriaceae HAVING OVEREXPRESSED ydiJ GENE |
| BR112021017870A2 (pt) | 2019-04-05 | 2021-12-07 | Ajinomoto Kk | Método para produzir um l-aminoácido |
| JP2022550084A (ja) | 2019-09-25 | 2022-11-30 | 味の素株式会社 | 細菌の発酵によるｌ－アミノ酸の製造方法 |
| EP4172310A1 (de) | 2020-06-26 | 2023-05-03 | Wacker Chemie AG | Verbesserte cystein produzierende stämme |
| CN116096909A (zh) | 2021-07-05 | 2023-05-09 | 瓦克化学股份公司 | 用于将亚磺酸酶促氧化成磺酸的方法 |
| WO2023165684A1 (de) | 2022-03-01 | 2023-09-07 | Wacker Chemie Ag | Verbesserte cystein produzierende stämme |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19726083A1 (de) * | 1997-06-19 | 1998-12-24 | Consortium Elektrochem Ind | Mikroorganismen und Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Cystein, L-Cystin, N-Acetyl-Serin oder Thiazolidinderivaten |
| JP4186564B2 (ja) * | 2001-09-28 | 2008-11-26 | 味の素株式会社 | Ｌ−システイン生産菌及びｌ−システインの製造法 |
| RU2229513C2 (ru) * | 2001-11-23 | 2004-05-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Способ получения l-аминокислот, штамм escherichia coli - продуцент l-аминокислоты (варианты) |
-
2004
- 2004-03-31 JP JP2004103652A patent/JP4604537B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2004-10-05 US US10/957,828 patent/US20050221453A1/en not_active Abandoned
-
2007
- 2007-07-11 US US11/776,306 patent/US20090226982A1/en not_active Abandoned
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2005287333A5 (ja) | ||
| US5922583A (en) | Methods for production of recombinant plasmids | |
| ES2286844T3 (es) | Expresion de proteinas heterologas. | |
| Zhang et al. | Expression of eukaryotic proteins in soluble form inEscherichia coli | |
| Zwiefka et al. | Transcription termination factor rho: the site of bicyclomycin inhibition in Escherichia coli | |
| JP3408529B2 (ja) | コレラトキシンの免疫原性無毒化変異体およびトキシンｌｔの免疫原性無毒化変異体、それらの調製、ならびにワクチンの調製のためのそれらの使用 | |
| Ignatova et al. | Unusual signal peptide directs penicillin amidase from Escherichia coli to the Tat translocation machinery | |
| EP0784689A1 (en) | Microorganisms as therapeutic delivery systems | |
| JPH06261746A (ja) | 高収量の組換え産物の産生宿主体 | |
| CA2385325A1 (en) | Chlamydia antigens and corresponding dna fragments and uses thereof | |
| CN112725210B (zh) | 抑制乳酸代谢和乙醇产生的重组耐酸酵母及使用其生产乳酸的方法 | |
| JP2020531007A (ja) | マイコスポリン様アミノ酸を生産する微生物及びそれを用いたマイコスポリン様アミノ酸の生産方法 | |
| US8563293B2 (en) | Bacteriocin based methods to control lactic acid bacterial growth | |
| US8535909B2 (en) | E. coli BL21 strain lacking a functional group II capsular gene cluster | |
| KR101376848B1 (ko) | ｍＲＮＡ 안정화 방법 | |
| US20040202678A1 (en) | Actinobacillus pleuropneumoniae subunit vaccine | |
| JP5778426B2 (ja) | アミノ酸生合成のための組成物及び方法 | |
| KR102303662B1 (ko) | 화합물을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 화합물의 생산 방법 | |
| KR102157781B1 (ko) | 디카르복시산 생산을 위한 미생물 및 이를 이용한 디카르복시산 생산방법 | |
| PL213561B1 (pl) | Sposób otrzymywania plazmidu, plazmid oraz zastosowania | |
| US20180148696A1 (en) | Microorganism including genetic modification that increases activity of cellulose synthase and method for producing cellulose by using the same | |
| JP2011512796A5 (ja) | ||
| Yeung et al. | Production of rabbit polyclonal antibody against apobec-1 by genetic immunization | |
| EP2820040A1 (en) | Method for reduction of 1->2 reading frame shifts | |
| US20240035036A1 (en) | FlmG-Dependent Soluble Protein O-Glycosylation Systems In Bacteria |