JP2004504627A - 予め作製された角膜組織レンズ、および視力を矯正するために角膜をオーバーレイする方法（ｉｉ） - Google Patents

Abstract

本願は、コンタクトレンズまたは移植されたレンズとして使用するために適切なドナーの角膜組織から製造されたレンズ、そのレンズを調製する方法、およびそのレンズを眼に配置する技術に関する。そのレンズは、天然の上皮および角膜実質細胞を除去することによって、無細胞であるドナーの角膜組織から製造される。これらの細胞は、必要に応じて、ヒト上皮および角膜実質細胞と置換されて、ヒトの角膜に類似する構造的解剖学を有するレンズを形成する。その接眼レンズは、乱視、近視、無水晶体症、および老視のような状態を矯正するために使用され得る。

Description

【０００１】
（発明の分野）
本発明は、眼科学の分野にある。より具体的には、本発明は、コンタクトレンズとして使用するためか、または上皮下移植のために適切である生レンズ（ｌｉｖｉｎｇ　ｌｅｎｓ）に関する。そのレンズは、ドナー角膜組織でできている。本発明には、そのレンズを調製する方法、およびそのレンズを眼に配置する技術が包含される。
【０００２】
（発明の背景）
視覚系は、眼が光線の焦点合わせをして意味のある像にすることを可能にする。眼科医または検眼医が遭遇する最も一般的な問題は、球状屈折異常（ｓｐｈｅｒｉｃａｌ　ａｍｍｅｔｒｏｐｉａ）の問題、または球の形状が不適切であるために調節が焦点ボケしている、眼による像の形成である。眼科医または検眼医は、眼の屈折状態を決定し、そして光学的誤差をコンタクトレンズまたは眼鏡で矯正する。
【０００３】
多くの手順が、角膜の形状を改変することによって球状屈折異常を矯正するために開発されている。眼に入る光は、まず、角膜によって焦点を合わされ、これは、眼の全体的な抵抗力の約７５％を有する。屈折操作の大部分は、その角膜の前方の湾曲を減少させるかまたは増大させることのいずれかを含む。
【０００４】
ケラトファキアおよび角膜曲率形成術のような初期の角膜の屈折の手術における手順は、元々、近視を矯正するために開発され、そして角膜のディスクを微小角膜切開刀で患者から除去することを包含する。次いで、その除去した角膜ディスクは、クリオレース（ｃｒｙｏｌａｔｈｅ）で後面を再成形する前に凍結された。解凍後、そのディスクを眼に戻し、そして縫合糸で縫合した。
【０００５】
米国特許第４，６６２，８８１号に記載されるエピケラトファキアは、はす縁（ｂｅｖｅｌｅｄ　ｅｄｇｅ）で寸法どおりに切ったドナーの組織レンズを、レシピエントの角膜の対応する溝に挿入することを包含する手順である。次いで、そのレンズを、角膜床へと縫合する。ドナーレンズは凍結乾燥され、そしてレシピエントの角膜に配置される前に再水和されることが必要である。
【０００６】
これらの技術およびその改変は、一般に、不規則な乱視、外科治癒の遅れ、角膜の傷、および屈折の結果の不安定性を含む頻繁な合併症のために不成功とみなされた。その問題は、その手順の技術的な複雑性ならびにレンズの操作に対して派生的な角膜組織の構造における歪みによるものであった。例えば、エピケラトファキアにおいて、上皮の不規則性は、ドナーレンズの凍結乾燥によって誘導される。ケラトファキアおよび角膜曲率形成術におけるレンズ（ｌｅｎｔｉｃｕｌｅ）の凍結もまた、上皮細胞および支質細胞に重篤な損傷を引き起こし、そして角膜の層状構造を破壊する。
【０００７】
本発明は、ヒトまたは動物の角膜のような組織供給源から得られたドナー角膜組織でできた予め作製されたレンズである。そのレンズは、好ましくは、眼の前面にほぼ形が一致するように、後面上で成形される角膜ディスクである。本発明のレンズは、切除レーザー（例えば、エキシマーレーザーまたは他の適切なレーザー）により、成形され得る。その角膜レンズ（ｃｏｒｎｅａｌ　ｌｅｎｔｉｃｕｌｅ）は、凍結されていないか、凍結乾燥されていないか、または化学修飾（例えば、グルタルアアルデヒドで角膜組織に架橋されて固定）されていない、生組織である。予め存在する角膜実質細胞を除去し、次いでヒト角膜実質細胞で置換して抗原性を減少させる。レシピエントの角膜の中央のゾーンにある上皮を除去した後、そのレンズをこのゾーン上に、コンタクトレンズを眼に配置するの同じ様式で配置する。
【０００８】
先行技術において見出される接眼レンズは、天然の角膜を使用しないが、コラーゲンヒドロゲル（例えば、ポリヒドロキシエチルメタクリレート）またはその他の生体適合性の材料のような可溶性コラーゲンを使用して処方される。例えば、Ｃｉｖｅｒｃｈｉａに対する米国特許第５，２１３，７２０号では、可溶性コラーゲンがゲル化され、そして架橋されて人工レンズが生成される。ヒドロゲルに加えて、Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍに対する米国特許第４，７１５，８５８号は、種々のポリマー、シリコーン、および酢酸酪酸セルロースから製造されたレンズを開示する。
【０００９】
接眼レンズが角膜組織を使用する場合、そのレンズは、角膜移植物であるか、またはレンズを角膜床に接着させるために別々の薬剤を必要とするかのいずれかである。Ｇｉｂｓｏｎらに対する米国特許第５，１７１，３１８号、およびＰｅｙｍａｎに対する米国特許第５，９１９，１８５号は、支質に部分的にかまたは完全に埋もれている角膜組織のディスクに関する。Ｐｅｙｍａｎらに対する米国特許第４，６４６，７２０号およびＴｉｎｇに対する米国特許第５，１９２，３１６号に開示される接眼レンズデバイスは、レシピエント角膜に縫合糸で付着している。Ｋｅｒｎに対する米国特許第４，６７６，７９０号に記載される角膜インレーは、レシピエント角膜に、縫合糸、レーザー溶接を使用して、または液体接着溶液もしくは架橋溶液を適用して、結合されている。
【００１０】
本発明の接眼レンズデバイスは、角膜組織の解剖学的構造を変更しない。Ｔｅｎｎａｎｔらに対する米国特許第４，３４６，４８２号は、視力の矯正のために前方を湾曲させたドナーの角膜からなる「生コンタクトレンズ」を開示する。しかし、このレンズは、レース（ｌａｔｈｅ）上で再成形する前に凍結され、これは支質の角膜実質細胞の死をもたらす。Ｃｕｍｍｉｎｇらに対する米国特許第４，７９３，３４４号はまた、組織を保存しそしてレンズの膨潤を防止するグルタルアルデヒド固定剤で処理することによって修飾したドナーの角膜組織レンズを記載する。この処理は、角膜レンズの基本構造を、その組織を架橋することによって変更する。
【００１１】
さらに、引用される文献は、天然の角膜組織細胞を除去し、そしてそれらをヒト角膜から培養した細胞と置換するレンズ調製のいかなる方法も示さない。本発明者のデバイスは、天然の上皮および角膜実質細胞を失活されて、無細胞の角膜組織を生成し、次いでヒト上皮および角膜実質細胞で再活性化される。いわゆる「角膜組織等価物」を構築する試みが、Ｐａｒｅｎｔｅａｕらに対する米国特許第５，３７４，５１５号に示された。しかし、その「等価物」において使用されるコラーゲンは、角膜からではなくウシの腱から得られる。添加された角膜実質細胞および上皮もまた、ヒト供給源由来ではない。これらの細胞培養手順を使用する組織もまた、非常にもろいものである。
【００１２】
エキシマーレーザーを使用して、「レーザーインサイチュ角膜曲率形成術」（ＬＡＳＩＫ）手順を介して角膜を再編成する。この技術において、エキシマーレーザーを使用して、角膜フラップの支質光切除または露出した支質床のインサイチュ光切除を行う。研究により、この手順による矯正の不正確さは、所望の値から１ジオプターほどの大きさであり得ることが示されている。レンズ（コンタクトレンズおよび眼鏡）は、対照的に、所望の値の０．２５ジオプター以内に矯正できる。
【００１３】
Ｊｅａｎらに対する米国特許第６，０３６，６８３号は、角膜を再成形するレーザーの使用を示す。しかし、このレーザーは、角膜の天然の構造を、不可逆的に凝集するコラーゲンによって変化させる。コラーゲンのレーザー後の緩和は、この処置では不可能である。
【００１４】
しかし、本発明は、いくつかのバリエーションにおいて、レシピエントの角膜に縫合糸を使用せずに接着する予め作製されたドナーコンタクトレンズに関する。そのレンズは、正常な角膜組織の解剖学を維持している。そのドナーのレンズは、ヒトおよび動物の供給源から得られ得、天然の角膜実質細胞および上皮が失活されて無細胞組織を生成し、次いで必要に応じて、ヒト角膜実質細胞および上皮細胞のうちの少なくとも１つで再活性化され、レンズの生存能を維持しそして抗原性を減少させる。本発明の角膜オーバーレイ技術は、局所麻酔下および全身麻酔下で完了され得、そして寸法どおりに切ったレンズの入手可能性は、手順にかかる時間、患者の費用、および手術による合併症の危険性を大いに減少する。治癒の持続時間もまた、角膜実質細胞で既に再増殖させたレンズの使用に起因して減少する。
【００１５】
引用したいずれの文献も、本明細書に記載した本発明者の発明を示さず、示唆もしない。
【００１６】
（発明の要旨）
本発明は、ヒトまたは動物の角膜のような組織供給源由来のドナー角膜組織で作られたレンズコアを有する予め作製された接眼レンズデバイスである。このデバイスは、コンタクトレンズとして、または移植されたレンズとして使用され得、そしてほぼ凸状の前面および必要に応じて凹状の後面を有し得る。レンズコアの支質部分は、置換された角膜実質細胞で再増殖され得、そして前面は、好ましくは、置換された上皮で被覆される。そのレンズコアは、縫合糸も他の接着材料も使用せずに、レシピエントの角膜に接着する。
【００１７】
そのレンズコアは、乱視、近視、無水晶体症、および老視を矯正するために多様に使用され得る。このレンズコアは、トランスジェニックまたは異種の角膜組織から作製され得る。適切に処理されれば、本発明のレンズは、対応する厚さのヒト角膜組織の透明度の少なくとも８５％の透明度を有し得る。そのレンズコアは、凍結されていないか、凍結乾燥していないか、または固定剤で化学的に処理されていない。しかし、そのデバイスのバリエーションは、治療剤、成長因子、または免疫抑制剤を含有し得る。
【００１８】
本発明の別の成分は、レンズデバイスを調製するための方法である。ドナー角膜組織からのレンズの鋭い切除の後、後面は、切除レーザー（例えば、エキシマーレーザーまたはその他の適切な成形レーザー）を使用して成形される。天然の上皮および角膜実質細胞を除去し、次いで所望のように、ヒト上皮および角膜実質細胞と置換する。
【００１９】
本発明の別の部分は、レシピエントの角膜の前面の一部の脱上皮化およびその前面上に本発明の接眼レンズデバイスを配置することを包含する角膜オーバーレイの方法である。別の方法は、吸入またはその他の手順による上皮組織の一時的な分離および本発明のレンズをその上皮組織の下に配置することを包含する。
【００２０】
（詳細な説明）
眼は、光エネルギーの量子を神経作用電位へと変える網膜の専門化したレセプター上に光の焦点を合わせるように設計される。図１に示すように、光線は、まず、眼の角膜（１００）を通過する。その角膜は、そのコラーゲン線維の高度に組織化した構造のため透明である。その角膜の縁は、頑丈な線維膠原性（ｆｉｂｒｏｃｏｌｌａｇｅｎｏｕｓ）の強膜（１０２）と融合し、そして角膜−強膜層といわれる。
【００２１】
角膜（１００）は、眼の前面６分の１を包む角膜−強膜層の一部である。角膜の滑らかな湾曲は、網膜（１０４）上の像の主要な焦点合わせ力であり、そしてそれは、眼の６０ジオプターの収束力のほとんどを提供する。角膜は、無血管構造であり、そして房水（１０６）からの栄養物および酸素の拡散により維持される。いくらかの酸素はまた、外部環境から由来する。角膜の無血管の性質は、組織の免疫原性を減少させ、角膜移植の成功率を増大させる。
【００２２】
角膜は、５つの層からなる。外側表面は、層化扁平上皮により裏打ちされ、これは約５個の細胞の厚みがある。上皮化の失敗は、支質キャップの壊死およびレシピエント角膜の潜在的な傷を生じる。上皮は、ボーマン膜として知られる専門化した基底膜によって支持され、これは、角膜に滑らかな光学表面を与える。角膜の大部分である、角膜固有質（支質）は、薄いラメラを形成する高密度のコラーゲン性結合組織の高度に規則正しい形態からなる。ラメラの間には、紡錘形の角膜実質細胞があり、これは結合組織の成分を合成するために刺激され得る。角膜の内部表面は、非常に厚い弾性の基底膜であるデスメ膜によって支持される平坦にされた内皮細胞の層によって裏打ちされている。
【００２３】
以前に言及したように、角膜の焦点合わせ力は、主に、その外部表面の湾曲の半径に依存する。近視において、図２Ａに見られるように、角膜（２００）の増加した湾曲が、網膜（２０４）に届かない光線（２０２）の焦点を生じる。図２Ｂにおいて、角膜（２０６）の前面の湾曲の平坦化は、焦点（２０８）を矯正する。
【００２４】
（本発明のレンズの構造）
本発明のレンズの第１のバリエーションにおいて、物理的な形状は、一般的に、角膜上に装備された際に、角膜の湾曲を補充して、異常な状態（例えば、乱視、近視、遠視、老視、および無水晶体症）を矯正するサイズおよび構造である。レンズのその他のバリエーションは、宿主角膜の前面の下に配置されるように、または薬物の供給源として作用するように、成形され得る。
【００２５】
代表的には、そのレンズコアは、失活され（例えば、天然の角膜実質細胞および上皮を除去するため、組織拒絶の機会を減じるために処理され）、次いで、少なくとも部分的に再活性化され（例えば、眼に配置された本発明のレンズの連続的使用を可能にしてかつ支持するために、ヒト角膜実質細胞および上皮層の少なくとも１つを導入するように処理され）た、無細胞ドナー角膜組織を含み得るか、または本質的にそれからなり得る。上皮細胞が、本発明のレンズの前面の少なくとも一部の上に（しばしば、別々の層の形態で）配置されることは、本発明の範囲内である。本発明のレンズのいくつかのバリエーションにおいて、前面の全ては、そのように被覆される。以下に議論される１つのバリエーションにおいて、上皮層は、そのレンズコアの外周を超えて延び、そして必要に応じてそのレンズは、眼のなかに配置される間に使用され、そして後に消失する生分解性のキャリアに担持される。
【００２６】
本発明のレンズは、その角膜上の天然の上皮の少なくとも主要な部分が除去されている、宿主の眼上に配置され得る。好ましくは、本発明の手順のこのバリエーションにおいて、実質的に全ての上皮は、本発明のレンズが配置された際に、その領域から除去されている。そのレンズまたは、そのレンズを宿主角膜の前面上に導入する手順の間に、眼の表面から持ち上げられた上皮の層の下に、または、他の場合には、宿主角膜の表面の下に配置され得る。本発明のレンズは、屈折を矯正するために（その形状のため）様々に使用され得るか、または、単に眼への注入された薬物の供給源を提供するために、使用され得る。
【００２７】
ドナーのレンズまたはレンズコアは、他人から（同種異系間）、または外来組織（異種間）の供給源から入手され得る。適切な異種供給源には、ウサギ、ウシ、ブタ、またはモルモットの角膜組織が含まれる。その接眼レンズコアはまた、トランスジェニック角膜組織由来であり得るか、またはインビトロで増殖された角膜組織であり得る。多くの場合、寄贈された組織における角膜層の構造、正常角膜組織マトリックス（例えば、結合組織または支質）が、実質的に保存されていることが望ましい。「角膜組織マトリックス」は、コラーゲン線維の薄層からできている。本明細書で使用される用語「ドナー角膜組織」は、ドナー角膜もしくは収集された角膜または「角膜組織マトリックス」を含有する角膜組織を含むことが意図される。さらに、本発明のほとんどのバリエーションにおいて、天然の上皮の下に見出されるように、寄贈された角膜組織の前面を保存することが高度に望ましい。ドナーの角膜組織は、凍結乾燥、凍結、または他の化学的固定のような粗暴な処理を経ない。それにもかかわらず、ドナーレンズの前面の一部分のみを利用することが望ましいことがある（例えば、本発明のレンズ構造が環状の形状である場合）。
【００２８】
本発明の接眼レンズデバイスは、望ましくは、ヒト上皮の天然の構造を維持するために、ボーマン膜を含む（ドナー組織がそれを含む場合）。ここでもまた、上皮の下の天然の前面が保存されるように、ドナー供給源から収集することが高度に望ましい。本発明者は、これらの天然の構造が、以下に議論する置換された上皮を支持しかつ維持するより優れた能力を有する（特に、以下に議論する再活性化工程の後に）ことを見出した。そのようにして取り扱われた本発明の組織レンズコアの透明度は、一般に、対応する厚さのヒト角膜組織の透明度の少なくとも８５％、好ましくは、７５〜１００％の間、そして最も好ましくは、少なくとも９０％である。
【００２９】
本発明のレンズの全体的な直径は、所望の矯正を行うために機能的に適切であり、一般的には、約２５ｍｍ未満であり、そしてより好ましくは、１０と１５ｍｍとの間である。得られるレンズの厚さは、また、所望の矯正を行うために機能的に適切である（例えば、一般に３００μｍ未満、より好ましくは、５〜１００μｍ）。
【００３０】
図３Ｂに示されるように、近視の患者についてのレンズコア（３１６）は、好ましくは、以下に記載される手順に従って、中央のほぼ環状の領域（３１８）が、その前面の湾曲において平坦にされるように、形成される。無水晶体症の矯正において、図３Ｃに示されるような比較的厚い中央（３２２）とより薄い周囲（３２４）とを有するレンズが形成される。一般に、本明細書で記載される形状は、いわゆる「ソフト」コンタクトレンズで見出されるものと類似しており、そして特定の眼球の疾患を矯正するために選択されたレンズの全体的形状に関連する技術から、教示が得られ得る。
【００３１】
図３Ｄおよび３Ｅに示されるように、本発明のレンズはまた、老視を矯正するために使用され得る。特に、老視を処置するために、レンズ（３３０）はまた、そのデバイスの中央付近にほぼ不透明の環状領域（３３２）を提供される。そのオープンセンター（３３４）は、好ましくは、平レンズの特徴および約１．５ｍｍ未満、好ましくは、約０．５〜１．５ｍｍの間の、および最も好ましくは、０．７５ｍｍと１．７５ｍｍとの間の有効直径を有する。そのオープンセンター（３３４）または中央領域または「ピンホール」の直径は、一般的に、日中の宿主の眼の瞳孔の直径より小さいように形成されそして選択される。これは、「ピンホール」効果を生じ、それにより、眼の全体的な有効焦点距離を延長し、そして眼が遠近を調節する必要性を最小にする。他の二重焦点レンズのデザインもまた、組み込まれ得る（例えば、同心リング、環状領域またはリングのセグメントもしくはセクター、または漸進的回折（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ　ｄｉｆｆｒａｃｔｉｖｅ））。
【００３２】
図３Ｅは、角膜（３４４）の前面に隣接する図３Ｄに示す本発明のレンズ（３３０）の側面の断面図を示し、このバリエーションの特定の特徴を例示する。不透明のアニュラーリング（３３２）のその外径（３３６）は、一般的に、弱い光の条件での虹彩（３４２）の瞳孔（３４０）の直径（３３８）よりも小さくなるように選択される。このようにして、その眼の角膜およびレンズ（水晶体）ならびに本発明のレンズは、入射光が不透明なリング（３３４）の中央、およびより重要なことには、不透明リング（３３２）の外周の周り、の両方を通して通過するような様式で協力して、弱い光条件の間に視力が矯正されるのを可能にする。
【００３３】
アニュラーリング（３３２）は、適切な色素を配置することによって、すなわち、「入れ墨をする」ことによって、または例えば、Ｄａｃｒｏｎメッシュなどの実質的に不透明な生体適合性部材を後面上にて配置することによって、レンズのコア上に配置され、光線をフィルタリングし得る。アニュラーリング（３３２）の他の配置が考えられ得る（例えば、本発明のレンズの前面）。アニュラーリング（３３２）それ自体は、好ましくは、非常に不透明であるが（例えば、入射可視光の約８０％未満を透過する）、より低い不透明度に選択され得るか、または他の疾患（例えば、色盲）を入射色を可視範囲に色屈折などによりシフトすることによって矯正するように選択され得る。
【００３４】
図３Ｆ（前面図）および３Ｇ（断面）に示されるように、本発明のレンズデバイスの別のバリエーション（３４６）は、上記のようにコアレンズ（３４８）を含むが、そのレンズコア（３４８）の周囲（３５０）を越えて延びる上皮層（３５２）を有する。周囲を越える上皮層（３５２）を有するバリエーション（３４６）を産生する方法は、レンズコア（３４８）が、ドナーコアレンズ（３４８）の前面とほぼ合致する形状を有するキャリア（図３Ｈの３５４）に所望のように配置されていることを除いて、本明細書の他のところで記載した方法と類似する。
【００３５】
図３Ｈに示すように、キャリア（３５４）は、所望にはいくつかの機能を果たす。第一に、それは、コアレンズ（３４８）がその上皮層（３５２）に配置される時間の前に、上皮層（３５２）の増殖のための基層を提供する。コアレンズ（３４８）の周囲を越えるこの余分の表面は、さもなくばもろい上皮層（３５２）のための支持を提供する。そのキャリア（３５４）は、そのかわり、上皮層（３５２）を増殖させる工程の間にもろいキャリア（３５４）に支持を提供する適切に形作られた形状の容器に配置され得るかまたはその中に形成され得る。
【００３６】
図３Ｈに示されるような、キャリア（３５４）、上皮層（３５２）−−上皮層（３５２）がコアレンズ（３４８）の周囲を越えて延びるか否か（例えば、その上皮層（３５２）がそのコアレンズ（３４８）のいくらかまたは全部の上に配置しているに過ぎない）にかかわらず−−、およびその上皮層（３５２）の上に配置されるコアレンズ（３４８）の組み合わせ（３５６）は、本発明の別のバリエーションである。図３Ｈに示される構築物（３５６）は、そのキャリアの材料の適切な選択により、宿主の眼の中に直接配置され得、それにより上皮層（３５２）およびコアレンズ（３４８）、ならびに必要に応じて最初の配置の間の眼のための投薬またはその他の処置材料のための支持を提供する。
【００３７】
そのキャリアが眼への配置のために使用される場合、そのキャリア（３５４）は、好ましくは、２つの関連する基準に合う材料を含む。第１に、その材料は、望ましくは、そのキャリア（３５４）、上皮層（３５２）、およびドナーレンズ（３４８）の組み合わせ（３５６）がその眼に導入された後に、溶解し、腐食し、またはそうでなければ処置される眼から短時間でクリアされるものである。好ましくは、また、そのキャリアは、予め増殖した上皮層のための基質として作用する材料のものである。最も好ましくは、そのキャリア（３５４）は、両方の基準を満足する。そのキャリア（３５４）は、コラーゲン、ゼラチン、デンプン、グルコサミングルカン、タンパク質、炭水化物、ポリ無水物（例えば、ポリラクチドおよびポリグリコリド、それらの混合物およびコポリマー）、ポリジアキサノン（ｐｏｌｙｄｉａｘａｎｏｎｅ）などのような材料を含み得る。
【００３８】
そのキャリア（３５４）にはまた、薬剤またはその他の処置材料、抗血管形成材料などが注入され得る。
【００３９】
図３Ｉおよび３Ｊは、それぞれ、レンズ本体を貫通する中央開口（３６２）を有する本発明のレンズ（３６０）の前面図および側面断面図を示す。このレンズのバリエーション（３６０）は、上皮層なしで示されるが、その層を含めることは本発明の範囲内にある。
【００４０】
（レンズを成形するためのプロセス）
図３Ａに戻って、そのドナーコアレンズ（３００）は、望ましくは、微小角膜切開刀（ｍｉｃｒｏｋｅｒａｔｏｍｅ）を用いてドナーから角膜組織を薄切りにしてそのレンズコア（３００）を形成した後に得られる。そのドナーレンズ（３００）は、ドナー角膜組織の構造的表面として作用する構造的表面であるコアレンズの前面を有する。そのレンズコア前面は、好ましくは、ボーマン膜（ドナーレンズがそれを含む場合）および上皮（３０２）を維持するために回収される。得られる本発明のレンズの後面（３０４）は、ほぼ凹状である（そうである必要はないが）。そのレンズの前面は、好ましくは、そのレンズの必要な力を得るために、切除レーザー（例えば、エキシマーレーザー）の使用を含む成形工程を介して成形され得る。別の適切な形成工程は、高圧水ジェット切断である。
【００４１】
（滅菌工程、失活工程、および再活性化工程）
以下に概説されるプロセス工程の順序は代表的なものであるが、このような工程が、所望の結果を生成するために必要に応じて変更され得ることは、理解されるべきである。
【００４２】
一般に、そのレンズは、上記のように、まず、適切な形状に成形される。次いで、そのレンズコアは、滅菌、失活、および再活性化のプロセスに供され得る。ドナーレンズからの上皮の除去（脱上皮化）および角膜実質細胞の除去（無細胞化）は、「失活」と呼ばれる。ヒト上皮および角膜実質細胞の添加は、「再活性化」と呼ばれる。これらの工程を達成するための１つの所望の方法は、以下に見出される。他の等価な方法は公知である。
【００４３】
抗生物質、上皮細胞培地、および角膜実質細胞培地を含むリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）は、これらのプロセスの間に使用される溶液である。「抗生物質を含むＰＢＳ」溶液は、以下を含み得る：
抗生物質を含むＰＢＳ
１．アンホテリシンＢ（ＩＣＮ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）　０．６２５μｇ／ｍｌ
２．ペニシリン（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）１００ＩＵ／ｍｌ
３．ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）１００μｇ／ｍｌ
４．リン酸緩衝化生理食塩水（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）
上皮細胞培地の組成は、以下を含み得る：
上皮細胞培地
１．Ｄｕｌｂｅｃｃｏ改変イーグル培地／Ｈａｍ　Ｆ１２培地（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）　３：１
２．１０％ウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）
３．上皮成長因子（ＩＣＮ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）　１０ｎｇ／ｍｌ
４．ヒドロコルチゾン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）　０．４μｇ／ｍｌ
５．コレラ毒素（ＩＣＮ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）　１０^−１０Ｍ
６．アデニン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）　１．８×１０^−４Ｍ
７．インスリン（ＩＣＮ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）　５μｇ／ｍｌ
８．トランスフェリン（ＩＣＮ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）　５μｇ／ｍｌ
９．グルタミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）　２×１０^−３Ｍ
１０．トリヨードチロニン（ＩＣＮ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）　２×１０^−７Ｍ
１１．アンホテリシンＢ（ＩＣＮ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）　０．６２５μｇ／ｍｌ
１２．ペニシリン（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）　１００ＩＵ／ｍｌ
１３．ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）　１００μｇ／ｍｌ
角膜実質細胞培地の組成は以下を含み得る：
角膜実質細胞培地
１．ＤＭＥＭ
２．１０％新生仔ウシ血清（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）
３．グルタミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）　２×１０^−３Ｍ
４．アンホテンシンＢ（ＩＣＮ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）　０．６２５μｇ／ｍｌ。
【００４４】
（滅菌工程）
そのレンズコアをドナー角膜組織から回収した後そして成形工程の後、そのレンズを、例えば、室温で９８％グリセロール中に浸すことによって、滅菌し得る。３週間のグリセロール処理により、細胞内ウイルス、および任意の細菌または真菌を不活性化する。エチレンオキシドガス滅菌もまた使用され得るが、支質組織に様々な損傷を誘導する傾向がある。
【００４５】
（失活工程）
（脱上皮化）
本発明者は、ドナーレンズを、４〜２５℃の温度で塩（好ましくは、塩化ナトリウム）の１モル濃度溶液中にそれを配置することによって、脱上皮化することを好む。４〜８時間のインキュベーションの後、その全体の上皮層は一般に、角膜支質から分離し、そして容易に除去され得る。その後、そのレンズは、抗生物質を含むＰＢＳ溶液中で洗浄され、塩および細胞物質を除去し得る。
【００４６】
上皮を除去する別の方法は、真空の使用によるものである。上皮は、吸引により（−１００ｍｍＨｇ〜−４５０ｍｍＨｇ）、支質から分かれ得る。１５分から１時間後、上皮は代表的には、基底膜層で支質から分離される。その後、そのレンズは、塩および細胞物質を除去するために、抗生物質を含むＰＢＳ溶液中において洗浄され得る。
【００４７】
最後に、ドナーレンズは、それを抗生物質を含む滅菌ＰＢＳ中に４時間配置し、そしてその溶液を多数回変えることによって、脱上皮化され得る。次いで、そのレンズコアは、３７℃で１週間そのＰＢＳ溶液中に浸されたまま維持され、上皮と支質との間に開裂を生成し得る。次いで、その上皮は、例えば、物理的にかきとるかまたは液体流で洗浄するかにより除去され得る。少数のレンズは、ピンセットで穏やかにかきとることによって、上皮を剥ぎ取り得る。
【００４８】
（無細胞化）
次いで、脱上皮化レンズは、界面活性剤の溶液中に浸され（例えば、０．０２５％から１５％のドデシル硫酸ナトリウム）、角膜実質細胞の細胞物質を洗浄除去し得る。界面活性剤は、角膜実質細胞物質を可溶化し、洗浄する。これには、１〜８時間かかり得る。その後、細胞物質は、抗生物質を含む緩衝溶液中で洗浄され、界面活性剤および細胞物質を除去し得る。
【００４９】
あるいは、脱上皮化したレンズは、抗生物質を含む滅菌ＰＢＳ中に、適切な期間（例えば、数週間、おそらく６週間）浸され、天然の角膜実質細胞を除去し得る。その溶液は、週２回換えられ得る。いくつかの場合において、例えば、ドナー組織がトランスジェニック供給源から得られ、そして最小の抗原性を有する場合、角膜実質細胞をドナーレンズから除去することは必要ではないかもしれない。
【００５０】
（再活性化工程）
（細胞の調製）
ヒト上皮細胞および角膜実質細胞を、再活性化プロセスにおいて使用する。上皮細胞は、組織バンクから得られ得るが、好ましくは、胎仔組織または新生仔組織から得られる。胎仔細胞が最も好ましい。なぜなら、胎仔組織の特性は、いかなる創傷治癒のプロセスの間にも傷を最小にするからである。
【００５１】
いずれにしても、角膜組織のトリプシン化により得た新鮮に単離した上皮細胞は、上皮細胞培地中の致死的に照射した３Ｔ３線維芽細胞（ｉ．３Ｔ３）の予め被覆した供給（ｆｅｅｄｅｒ）層上に播種され得る。細胞を培養し、そして細胞が８０％のコンフルエンスになるまで、約７〜９日間培地を３日毎に換えた。残ったｉ．３Ｔ３を、上皮細胞がトリプシン（ＩＣＮ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を使用して剥離される前に、０．０２％　ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で除去する。上皮を再生する別の方法は、自系上皮細胞を、Ｔｓａｉら（２０００）「Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄａｍａｇｅｄ　Ｃｏｒｎｅａｓ　ｂｙ　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ　Ｌｉｍｂａｌ　Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　Ｃｅｌｌｓ」　Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　３４３：８６−９３に記載されるようにヒト羊膜上で培養することを包含する。
【００５２】
角膜実質細胞を、残りの支質組織から抽出し得る。支質をＰＢＳで洗浄して、細かく切り、そして３７℃で１６時間、０．５％コラゲナーゼＡ（ＩＣＮ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）中に配置する。次いで、この酵素消化から得られた角膜実質細胞を、連続的に、角膜実質細胞培地において培養する。再活性化工程において生成されたその上皮細胞および角膜実質細胞は、「置換された」上皮細胞および角膜実質細胞と呼ばれる。
【００５３】
（ドナーレンズの産生）
次いで、無細胞ドナーレンズコアを、再活性化を完了するために、親水性の、高分子電解質ゲル上に配置し得る。好ましい高分子電解質は、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸、およびポリアクリルアミドである。最も好ましいものは、ポリアクリル酸である。そのレンズを、角膜実質細胞培地に浸し、そして約３×１０^５個の角膜実質細胞とともに、４８時間３７℃でインキュベートする。次いで、ほぼ同じ量の上皮細胞を、前方の支質表面に添加する。組織培養インキュベーションは、さらに４８時間続く。角膜実質細胞培地を、２〜３日毎に交換する。一旦、上皮が再生されると、その高分子電解質ゲルは、約２０〜３０ｍｍＨｇの圧力で、元々のレンズの容積（ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ）が得られるまでレンズから水を汲み出す。
【００５４】
置換された上皮は、本発明のレンズのこのバリエーションの前面の少なくとも一部を被覆し、そして置換された角膜実質細胞は、再活性化後にレンズコアの支質を再増殖させる。
【００５５】
上記のように、本発明のレンズの別のバリエーションには、レンズコア（３４８）の周囲から延びる上皮層（図３Ｇの３５２）が含まれる。いま説明したのと同じ手順を、予め調製した上皮細胞層上にレンズコア（３４８）を配置する前に、キャリア（３５４）中に上皮細胞層を調製するために使用し得る。
【００５６】
いくつかの場合において、治療剤、成長因子、または免疫抑制剤を、レンズコアに取り込み、さらに拒絶の危険性を減少させるかまたは疾患状態を改善することはまた、有益であり得る。
【００５７】
（眼へのレンズの配置）
本発明のレンズを適用するための１つの手順を、図４Ａおよび４Ｂに示す。この手順の間、図３Ａに示すようなドナーレンズ（３００）を、脱上皮化（３０８）されたレシピエントの角膜の一部の上に配置する。その結果は、図４Ｂに示される配置および構成（３１２）である。そのレンズの置換された上皮および宿主上皮は、最終的に、連続する、防水層（３１０）を形成するように増殖する。本発明者は、本発明のレンズが、縫合糸または接着剤なしでレシピエントの角膜に結合または接着するが、しかしまた、実質的な困難なしに除去され得ることを見出した。
【００５８】
別の配置手順のバリエーションを図５に示す。このバリエーションにおいて、角膜実質細胞が置換されているが、上皮層は置換されていない、部分的にのみ再活性化されているコアレンズを使用することが好ましい。当然に、上皮細胞のシーズ層で部分的に被覆されたコアレンズもまた許容される。いずれにしても、図５の工程ａは、上皮層（６０２）および角膜支質（６０４）を有する天然の眼（６００）を示す。図５の工程ｂは、眼（６００）の前面上の吸引デバイス（６０６）の配置を示す。吸引デバイス（６０６）は、上皮層（６０２）に対して適度な真空（例えば、−１００ｍｍＨｇと−４５０ｍｍＨｇとの間）をかけて、工程ｃに示されるように、上皮層（６０２）の部分を上昇させる。この水ぶくれ（６０８）は、代表的には、生理学的流体で満たされている。明らかに、吸引デバイス（６０６）は、角膜の表面上に、その角膜上に配置されるレンズと同様の大きさの足跡を有する。工程ｄは、開かれた上皮のフラップ（ｆｌａｐ）（６０８）およびその上皮フラップ（６０８）の下の角膜の間質周囲（６１２）に向かうレンズの配置を示す。図５の工程ｅは、天然の上皮膜の下の角膜上のそのレンズ（６１０）の仕上がった配置を示す。この手順は、眼の表面に対して、上皮の単なる切除よりも外傷性ではない利点を含む多数の利点を有する。
【００５９】
本発明のレンズの適用のための角膜表面を露出する工程のために、本発明においてＬＡＳＥＫ手順についての調製手順を使用することもまた、本発明の範囲内である。ＬＡＳＥＫ手順は公知であり、そしてＬＡＳＩＫ手順とは異なり、外科ツールによる角膜組織の前面のフラップの一時的な除去を含まず、むしろ、レーザー処置のためのエタノール洗浄および上皮層の一時的な除去を利用するのみである。このような予備的工程である、角膜支質と上皮との間の結合を妨害するためのエタノールでの洗浄が、角膜表面上の一時的な移動および本発明のレンズの挿入のための、上皮の層を提供するのに適切である。
【００６０】
本発明者は、構造的および生理学的特性およびこのドナーの接眼レンズの利点を記載した。しかしながら、本発明を記載するこの様式は、いかなる様式によっても、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、眼の上方断面図である。
【図２Ａ】図２Ａは、近視における焦点の側面図である。
【図２Ｂ】図２Ｂは、角膜の前方湾曲の平坦化により矯正された焦点の側面図である。
【図３Ａ】図３Ａは、予め作製されたドナーレンズの側面の、断面図である。
【図３Ｂ】図３Ｂは、近視を矯正するために適切である予め作製されたドナーレンズの側面の、断面図である。
【図３Ｃ】図３Ｃは、無水晶体症を矯正するために適切である予め作製したドナーレンズの側面の、断面図である。
【図３Ｄ】図３Ｄは、二重焦点用に適した予め作製されたドナーレンズの前面図である。
【図３Ｅ】図３Ｅは、眼の角膜から離れて配置した図３Ｃのレンズの側面の、断面図である。
【図３Ｆ】図３Ｆは、重複する上皮層を有する本発明のレンズの前面図である。
【図３Ｇ】図３Ｇは、図３Ｆのレンズの側面の断面図を示す。
【図３Ｈ】図３Ｈは、キャリアにおける本発明のレンズの側面の断面図を示す。
【図３Ｉ】図３Ｉは、環状の本発明のレンズの前面図である。
【図３Ｊ】図３Ｊは、図３Ｉのレンズの側面の断面図を示す。
【図４Ａ】図４Ａは、本発明の光学レンズを受けるように調製した脱上皮化したレシピエントの角膜の領域の側面の、断面図である。
【図４Ｂ】図４Ｂは、レシピエントの角膜上に配置した後のドナーのレンズの側面の、断面図である。
【図５】図５は、本発明のレンズを上皮下に導入する一連の工程を示す。

Claims (71)

1. 接眼レンズデバイスであって、
   ほぼ凸状の前面および後面を有するドナー角膜組織を含むレンズコアであって、ａ）該レンズコアにおいて置換された角膜実質細胞、および
   ｂ）該前面の少なくとも一部を被覆する置換された上皮細胞
   のうちの少なくとも１つを含む、レンズコア
   を含む、接眼レンズデバイス。
2. 前記後面がほぼ凹状である、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
3. 前記レンズコアが、無細胞角膜組織を含む、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
4. 前記レンズコアが、本質的に無細胞角膜組織からなる、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
5. 前記後面が凹状である、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
6. 前記後面が成形工程に供されている、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
7. 前記後面が切除レーザーによって成形される、請求項６に記載の接眼レンズデバイス。
8. 前記接眼レンズが、対応する厚さのヒト角膜組織の透明度の少なくとも８５％の透明度を有する、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
9. 前記接眼レンズが、対応する厚さのヒト角膜組織の透明度の約７５％と約１００％との間の透明度を有する、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
10. 前記レンズコアが、対応する厚さのヒト角膜組織の透明度の少なくとも９０％の透明度を有する、請求項９に記載の接眼レンズデバイス。
11. 前記レンズコアが、本質的にドナー角膜組織からなる、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
12. 前記レンズコアが、ヒト角膜組織を含む、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
13. 前記レンズコアが、同種異系の角膜組織を含む、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
14. 前記レンズコアが、異種角膜組織を含む、請求項１１に記載の接眼レンズデバイス。
15. 前記異種レンズコアが、ウサギ角膜組織、ウシ角膜組織、ブタ角膜組織、およびモルモット角膜組織からなる群から選択される、角膜組織を含む、請求項１４に記載の接眼レンズデバイス。
16. 前記レンズコアが、トランスジェニック角膜組織を含む、請求項１１に記載の接眼レンズデバイス。
17. 前記ドナー角膜組織が、構造表面を有し、前記レンズコア前面が、該ドナー角膜組織の構造表面である、請求項１１に記載の接眼レンズデバイス。
18. サイズおよび構成が、乱視、近視、無水晶体症、および老視からなる群から選択される少なくとも１つを矯正するように選択される、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
19. 前記サイズおよび構成が、近視を矯正するように選択され、前記デバイスが、ほぼ環状で平らなレンズコア中央領域を有する、請求項１８に記載の接眼レンズデバイス。
20. 前記サイズおよび構成が、無水晶体症を矯正するように選択され、前記デバイスが、ほぼ平らな周囲を有する、請求項１８に記載の接眼レンズデバイス。
21. 前記サイズおよび構成が、二重焦点であるように選択される、請求項１８に記載の接眼レンズデバイス。
22. 前記サイズおよび構成が、老視を矯正するように選択され、矯正なしにほぼ環状のレンズコア中央領域を有する、請求項１８に記載の接眼レンズデバイス。
23. 前記レンズコアが、中央のオープン領域および周縁直径を有する不透明なアニュラーリングをさらに含む、請求項２２に記載の接眼レンズデバイス。
24. 前記リングが入れ墨をするか、後面上に不透明の材料を配置することによって形成される、請求項２３に記載の接眼レンズデバイス。
25. 前記中央オープン領域が、約１．５ｍｍ未満の直径を有する、請求項２３に記載の接眼レンズデバイス。
26. 前記中央オープン領域が、約０．５ｍｍと約１．５ｍｍとの間の直径を有する、請求項２５に記載の接眼レンズデバイス。
27. 前記中央オープン領域が、約０．７５ｍｍと約１．２５ｍｍとの間の直径を有する、請求項２５に記載の接眼レンズデバイス。
28. 前記リングが、Ｄａｃｒｏｎメッシュを含む、請求項２４に記載の接眼レンズデバイス。
29. 前記不透明なアニュラーリングの周縁直径が、３〜５ｍｍの間である、請求項２３に記載の接眼レンズデバイス。
30. 前記リングの周縁直径が、不十分な光の下での選択されたレシピエントの眼の瞳孔の直径よりも小さいように選択される、請求項２９に記載の接眼レンズデバイス。
31. 前記レンズコアが、さらに、治療剤、免疫抑制剤、または成長因子を含む、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
32. 前記レンズコアが、凍結、凍結乾燥、または固定剤により化学的に処理されていない、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
33. 前記レンズコアが、インビトロで増殖した角膜組織からなる、請求項１１に記載の接眼レンズデバイス。
34. 前記上皮細胞および角膜実質細胞が、ヒト角膜細胞を含む、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
35. 前記上皮細胞および角膜実質細胞が、新生仔角膜細胞、胎仔角膜細胞、または組織バンク角膜細胞を含む、請求項３４に記載の接眼レンズデバイス。
36. 前記レンズコアが厚さを有し、該厚さが、３００μｍ未満である、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
37. 前記レンズコアの厚さが、５〜１００μｍの間である、請求項３６に記載の接眼レンズデバイス。
38. 前記レンズコアが、置換された角膜実質細胞を含む、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
39. 前記レンズコアが、前記前面の少なくとも一部を被覆する置換された上皮細胞を含む、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
40. 前記レンズコアが、周縁を有し、さらに該レンズコアの周縁を越えて延びる上皮細胞層を含む、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
41. 前記レンズコアが、前記前面の少なくとも一部を被覆する置換された上皮細胞を含み、さらに、該置換された上皮細胞および該レンズコアを支持するキャリアを含む、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
42. 前記レンズコアが周縁を有し、さらに、該レンズコアの周縁を越えて延びる上皮細胞層を含む、請求項４１に記載の接眼レンズデバイス。
43. 前記キャリアが、生体侵食性または生分解性である材料を含む、請求項４１に記載の接眼レンズデバイス。
44. 前記キャリアが、眼に導入するのに適した大きさおよび形状のものである、請求項４３に記載の接眼レンズデバイス。
45. 前記キャリアが、コラーゲン、ゼラチン、デンプン、グルコサミングルカン、タンパク質、炭水化物、ポリ無水物（例えば、ポリ乳酸およびポリグリコリド、それらの混合物およびコポリマー）、およびポリジアキサノンからなる群から選択される材料を含む、請求項４３に記載の接眼レンズデバイス。
46. 前記レンズコアが環状であり、前記前面と前記後面との間に開口を有する、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
47. 前記レンズコアが、置換された角膜実質細胞を該レンズコア内に含む、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
48. 前記レンズコアが、前記前面の少なくとも一部を被覆する置換された上皮細胞を含む、請求項１に記載の接眼レンズデバイス。
49. 前記レンズコアが、前記前面の実質的に全部を被覆する、置換された上皮細胞を含む、請求項４９に記載の接眼レンズデバイス。
50. 前面を有する角膜を有するヒトの眼の視力を矯正するための方法であって、以下の工程：
    ａ）該角膜の該前面を調製する工程；および
    ｂ）請求項１〜４９のいずれかに記載の接眼デバイスを該調製された前面に導入する工程
    を包含する、方法。
51. 前記調製する工程が、前記前面に存在する任意の上皮細胞の実質的な部分を除去する工程を包含する、請求項５０に記載の方法。
52. 前記調製する工程が、前記前面から上皮層を持ち上げる工程を包含する、請求項５０に記載の方法。
53. 前記持ち上げる工程が、真空を利用して、前記上皮層を前記前面から持ち上げる工程を包含する、請求項５２に記載の方法。
54. 前記持ち上げる工程が、前記上皮層にエタノールを塗布して、前記前面から該上皮層を持ち上げる工程を包含する、請求項５２に記載の方法。
55. 接眼レンズデバイスの調製のための方法であって、以下の工程：
    ａ）ドナー角膜組織を含み、ほぼ凸状の前面および後面を有するレンズコアを収集する工程；
    ｂ）該ほぼ凸状の前面の少なくとも一部を被覆する上皮を置換する工程；ならびに
    ｃ）該レンズコアを再増殖させる角膜実質細胞を置換する工程であって、該工程が、ｉ）該レンズコアを失活させる工程；およびｉｉ）該レンズコアを再活性化する工程を包含する、工程
    を包含する、方法。
56. 前記後面の成形工程をさらに包含する、請求項５５に記載の方法。
57. 前記成形工程が、切除レーザーを前記後面に適用する工程を包含する、請求項５６に記載の方法。
58. 前記成形工程が、エキシマーレーザーまたは他の適切な成形レーザーを前記後面に適用する工程を包含する、請求項５７に記載の方法。
59. 前記成形工程が、水ジェットカッターを前記後面に適用する工程を包含する、請求項５６に記載の方法。
60. 前記成形工程が、近視、無水晶体症、老視、および乱視からなる群から選択される少なくとも一つを矯正するために、前記後面を成形する工程を包含する、請求項５４に記載の方法。
61. 前記レンズコアを収集する工程をさらに包含する、請求項５５に記載の方法。
62. 前記レンズコアが、ヒト、ウサギ、ウシ、ブタ、またはモルモットの角膜組織から収集される、請求項６１に記載の方法。
63. 前記再活性化工程が、ヒト角膜組織から培養された細胞を置換する工程を包含する、請求項５５に記載の方法。
64. 前記細胞が新生仔組織、胎仔組織、または組織バンク組織から培養される、請求項６３に記載の方法。
65. 前記レンズコアを前記成形工程の後に滅菌する工程をさらに包含する、請求項６４に記載の方法。
66. 前記滅菌工程が、前記レンズコアをグリセロールと接触させる工程を包含する、請求項６５に記載の方法。
67. 前記滅菌工程が、前記レンズコアをエチレンオキシドガスと接触させる工程を包含する、請求項６５に記載の方法。
68. 前記失活工程が、上皮を前記前面から、角膜実質細胞を前記レンズコアから除去する工程を包含する、請求項５５に記載の方法。
69. 前記再活性化工程が、上皮細胞を前記前面の少なくとも一部に、角膜実質細胞を前記レンズコアに添加する工程を包含する、請求項５５に記載の方法。
70. 前記再活性化工程が、前記レンズコアを高分子電解質ゲル上に配置する工程を包含する、請求項５５に記載の方法。
71. 前記レンズコアの角膜組織マトリックスが、変更されていない、請求項５５に記載の方法。

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