JP2004075972A

JP2004075972A - 抗酸化活性を有する野茨の抽出物、野茨の抽出物の製造方法および野茨の抽出物を含む組成物

Info

Publication number: JP2004075972A
Application number: JP2002325089A
Authority: JP
Inventors: Park Mi-Hyoun; ミ−ヒョン、パーク; Baek Nam-In; ナム−イン、バエク; Han Jae-Taek; ジャエ−タエク、ハン; Choi Chang-Won; チャン−ウォン、チョイ
Original assignee: Eromlife Co Ltd
Current assignee: Eromlife Co Ltd
Priority date: 2002-08-09
Filing date: 2002-11-08
Publication date: 2004-03-11
Also published as: US6858235B2; KR100531472B1; ATE395070T1; EP1388343B1; EP1388343A1; US20040028758A1; KR20020086326A; DE60226596D1

Abstract

【解決手段】抗酸化活性を有する野茨（Ｒｏｓａ　ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）抽出物、その製造方法およびこれを含む組成物に関するものである。具体的にプロシアニジンＢ３（ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎ　Ｂ３）を含有して抗酸化活性を有する野茨の抽出物、野茨の地下部を有機溶媒で抽出してクロマトグラフィーで分離・精製することを特徴とする野茨抽出物の製造方法および前記野茨の抽出物を含んで抗酸化活性を有する組成物。
【効果】野茨の抽出物およびこれを含む組成物は活性酸素により誘発される疾病の治療または予防、食品の品質維持および皮膚の酸化による損傷を防止するのに非常に有用に使われることができる。
【選択図】　　　　なし

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗酸化活性を有する野茨（Ｒｏｓａ　ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）の抽出物、野茨の製造方法および野茨を含む組成物に係り、特に、プロシアニジンＢ３を含有することにより抗酸化活性を有する野茨の抽出物、野茨の地下部を有機溶媒で抽出してクロマトグラフィーで分離・精製することを特徴とする野茨抽出物の製造方法、および前記野茨の抽出物を含むことにより抗酸化活性を有する組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
前述した抗酸化活性とは、生体内の活性酸素の生成を防止して細胞に回復不可能な損傷をもたらす酸化現象を防止する活性をいう。安定な状態の酸素（ｔｒｉｐｌｅｔｏｘｙｇｅｎ）は、酵素系、還元代謝、化学薬品、公害物質、光化学反応のような環境的および生化学的要因等によりスーパーオキシドラジカル、ヒドロキシルラジカル、過酸化水素のような反応性が大きい活性酸素（Ｒｅａｃｔｉｖｅ　Ｏｘｙｇｅｎ　Ｓｐｅｃｉｅｓ：ＲＯＳ）に転換されて細胞構成の成分を非可逆的に破壊する。これら活性酸素の作用は体内の防御器具であるスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、カタラーゼ（ｃａｔａｌａｓｅ）、ペルオキシダーゼ（ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）などの抗酸化性酵素およびビタミンＣ（ｖｉｔａｍｉｎ　Ｃ）、ビタミンＥ（ｖｉｔａｍｉｎ　Ｅ）、グルタチオン（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ）などの抗酸化物質の作用によって最小化されることが可能となる。しかし、このような生体防御力に異常が生じたり、過度な活性酸素に露出される場合、この均衡が破られて活性酸素が脂質、蛋白質、ＤＮＡなどを非可逆的に破壊するようになる。この結果、老化（ａｇｉｎｇ）、癌（ｃａｎｃｅｒ）、複合性動脈硬化（ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、関節炎（ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）およびパーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ）のような各種疾病が誘発される。
【０００３】
いままで開発された合成抗酸化剤としては、ＢＨＡ（ｂｕｔｙｌａｔｅｄ　ｈｙｄｒｏｘｙ　ａｎｉｓｏｌｅ）、ＢＨＴ（ｂｕｔｙｌａｔｅｄ　ｈｙｄｒｏｘｙ　ｔｏｌｕｅｎｅ）およびＮＤＧＡ（ｎｏｒｄｉｈｙｄｒｏ−ｇｕａｉａｒｅｔｉｃ　ａｃｉｄ）などがあり、天然抗酸化剤としてはスーパーオキシドジスムターゼ、ペルオキシダーゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼなどの抗酸化酵素とトコフェロール（ビタミンＥ）、ビタミンＣ（Ｖｉｔａｍｉｎ　Ｃ、　ａｓｃｏｒｂｉｃ　ａｃｉｄ）、カロテノイド、グルタチオンなどの非酵素的な抗酸化物質などがある。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、合成抗酸化剤は生体内で毒性を示してアレルギーと腫瘍を発生させる問題があるほか、温度に弱く、一度熱を加えると容易に破壊される問題もある。反面、天然抗酸化剤は合成抗酸化剤に比べて生体に安全であるという利点があるが、その安全性が弱いという問題もある。したがって、抗酸化活性が卓越でより安全な新しい天然抗酸化剤の開発が切実に要求されている。
【０００５】
一方、現在まで開発された天然抗酸化剤のうちから安全で抗酸化活性が優秀であると知られているプロシアニジン（ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎ）は、広範囲な植物に存在するプロアントシアニジン（ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）のうちの１つである。プロアントシアニジンは縮合型タンニンの一種で、フラバン−３−オール（ｆｌａｖａｎ−３−ｏｌ）またはフラバン−３，４−ディオール（ｆｌａｖａｎ−３，４−ｄｉｏｌ）を構成単位として縮合または重合により結合された化合物群をいう。この中でプロシアニジンは、カテキン（Ｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピカテキン（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ）、カテキンギャレイト（Ｃａｔｅｃｈｉｎ　ｇａｌｌａｔｅ）、エピカテキンギャレイト（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ　ｇａｌｌａｔｅ）、ガロカテキンギャレイト（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ　ｇａｌｌａｔｅ）またはエピガロカテキンギャレイト（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ　ｇａｌｌａｔｅ）を基本骨格（ｂａｃｋｂｏｎｅ）とする二重体（ｄｉｍｅｒ）以上のオリゴマー（Ｏｌｉｇｏｍｅｒ）および多重体（Ｐｏｌｙｍｅｒ）の通称である。プロシアニジンは、基本骨格および結合形態によっていろいろな種類に分類される。たとえば、プロシアニジンＢ３はカテキン−（α４→８）−カテキンの構造を有しており、プロシアニジンＢ１はエピカテキン−（β４→８）−カテキンの構造を有している。また、プロシアニジンＢ２はエピカテキン−（β４→８）−エピカテキンの構造を有しており、プロシアニジンＢ５はエピカテキン−（β４→６）−エピカテキンの構造を有している（Ｗａｌｔｅｒ　Ｆｅｕｃｈｔ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｚ．Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ．，　５４ｃ、９４２−９４５、１９９９）。
【０００６】
プロシアニジンは多様な種類の植物体から溶媒抽出したり、またはクロマトグラフィーに分離・精製することによって収得することができ、ワインやビールからも分離することができると知られている。文献には小豆（Ｖｉｇｎａ　ａｎｇｕｌａｒｉｓ　Ｏｈｗｉｅｔ　Ｏｈａｓｈｉ）、（Ｔｏｓｈｉａｋｉ　Ａｒｉｇａ　ｅｔ　ａｌ．，　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌ．　４５、２７０９−２７１２、１９８１）、テーダマツ（Ｌｏｂｌｏｌｌｙ　ｐｉｎｅ）、（Ｒ．　Ｗ．　Ｈｅｍｉｎｇｗａｙ　ｅｔ　ａｌ．，　　Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌ．２２、２７５−２８１、１９８３）および蔓ドクダミ（Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）の根（Ｎｏｎａｋａ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌ．　２１、４２９−４３２、１９８２）で溶媒抽出およびクロマトグラフィーによりプロシアニジンを分離したことがある。
【０００７】
プロシアニジンは蛋白質との結合能を有しており、抗炎症効果があると報告されたことがある。特に、緑茶タンニンとして知られているカテキンは、卓越した坑癌効果まであるものとして報告されたことがある。米国特許第４，７９７，４２１号明細書には、プロシアニジンの抗酸化効果が開示されており、米国特許第５，６４６，１７８号明細書には、ブルーベリー属（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ　ｓｐ．）に属するクランベリー抽出物から収得したプロシアニジンの抗細菌効果が開示されている。大韓民国特許公開第２００１−１０１５４号公報には、基質金属蛋白質の分解酵素と関連された傷、癌転移、齒周疾患、関節炎のような疾患の予防および治療のためのプロシアニジンを有効成分とする薬剤が開示されている。大韓民国特許公開第１９９８−７０２５３３号公報には、タマリンド種皮の抽出物から分離したプロシアニジンを有効成分とする抗肥満剤が開示されている。
【０００８】
しかし、まだ野茨抽出物の抗酸化効果は報告されたことがなく、野茨の抽出物にプロシアニジンが含まれていると報告されたこともない。
【０００９】
本発明者らは新しい天然抗酸化剤の研究中に、野茨（Ｒｏｓａ　ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）の地下部を有機溶媒で抽出した抽出物が抗酸化活性を有しており、前記抽出物にはプロシアニジンＢ３（ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎ　Ｂ３）化合物が含まれているという新しい事実を発見し、抗酸化活性を有する野茨の抽出物および前記抽出物を含む組成物を製造することによって本発明を完成した。
【００１０】
したがって、本発明の目的は野茨地下部を有機溶媒で抽出して収得した抗酸化活性を有する野茨の抽出物を提供することである。
【００１１】
本発明の他の目的は（ａ）野茨の地下部を有機溶媒に沈漬させて抽出する段階と、（ｂ）前記（ａ）段階の抽出物をクロマトグラフィーで分離・精製する段階とを含むことを特徴とする抗酸化活性を有する野茨抽出物の製造方法を提供することである。
【００１２】
本発明のさらに他の目的は前記野茨の抽出物を含むことにより抗酸化活性を有する組成物を提供することである。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
前述した目的を達成するために、本発明の野茨の抽出物の特徴は、野茨地下部を有機溶媒で抽出して収得した抗酸化活性を有する点にある。
【００１４】
本発明の他の目的を達成するために、本発明の野茨抽出物の製造方法の特徴は、（ａ）野茨の地下部を有機溶媒に沈漬させて抽出する段階と、（ｂ）前記（ａ）段階の抽出物をクロマトグラフィーで分離・精製する段階とを含む点にある。
【００１５】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明の組成物の特徴は、野茨の抽出物を含むことにより抗酸化活性を有する点にある。
【００１６】
以上のような本発明の目的と別の特徴および長所などはつぎに参照する本発明の好適な実施例に対する以下の説明から明確になるであろう。
【００１７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１８】
野茨（Ｒｏｓａ　ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）はバラ科の落葉潅木として全国の山のふもとや河川流域に広範囲に分布する植物である。漢方では実を営実という薬剤として使用するが、不眠症、健忘症、性機能減退、浮腫に効果があると知られていて利尿剤としても使われる。
【００１９】
本発明による抗酸化活性を有する野茨の抽出物は、野茨地下部を有機溶媒で抽出することによって収得することができる。有機溶媒としては、エチルアセテート、アセトン、エタノール、メタノール、水およびこれらの混合溶媒を使用することができる。望ましくはアセトンを使用する。抽出溶媒としてアセトンを使用すれば、水溶性エタノールを使用する場合に比べてさらに溶媒を分画する段階を経由せずに抗酸化活性物質が多量に含まれた抽出物を収得することができるという利点がある。一方、抽出溶媒として水溶性エタノールを使用する場合には全体的に抽出収率が高い利点がある反面、過度に極性が高い物質が多量に抽出される。したがって、以後の精製過程でクロマトグラフィーの使用を容易にするために、エタノール抽出物を収得した後に、エチルアセテートと水を添加してエチルアセテート分画と水分画を収得し、前記水分画にブタノールを添加して水分画とブタノール分画を収得する段階をさらに遂行する。このように抽出溶媒としてエタノールまたは水溶性エタノールを使用して抽出した抽出物は食品原料として使用するのに安全であるという利点がある。
【００２０】
本発明の一実施例においては、野茨の根を水溶性エタノールで抽出した後に、前記エタノール抽出物に蒸溜水とエチルアセテートを添加して水とエチルアセテート層で２回分画する。そして、水層にブタノールを添加して水層とブタノール層で２回分画することによってエチルアセテート分画、ブタノール分画および水分画を各々収得した。収得されたそれぞれの分画には活性成分がすべて存在するが、エチルアセト分画が抗酸化活性が最も高く、しかも分離が容易な物質らが分布する分画として確認された。これはＴＬＣプレート上に展開された様子で確認することができた。
【００２１】
抽出時の野茨地下部と抽出溶媒の比率は特別に限定されないが、野茨地下部の生体中の１ｇに対して抽出溶媒を１倍ないし２０倍（重量基準）で使用することができる。抽出効率を増加させるためには、望ましくは野茨地下部の生体中の１ｇに対して抽出溶媒の３倍ないし１０倍（重量基準）を使用して２回反復することができる。
【００２２】
抽出温度は常圧下において室温で遂行することが望ましい。また、抽出時間は抽出温度によって異なるが、１時間ないし４８時間、望ましくは１２時間ないし２４時間抽出する。また、抽出時に撹拌器（ｓｈａｋｅｒ）により撹拌すれば、さらに抽出効率を増大させることができる。
【００２３】
抽出に使用される野茨地下部としては、野茨の根またはその乾体を使用することができ、抽出効率を増大させるために野茨の根またはその乾体を粉碎機で粉砕したものを使用することができる。
【００２４】
前述した方法で製造された本発明による野茨抽出物の抗酸化活性を抗酸化活性測定法（大韓民国食品栄養学会、食品栄養実験ハンドブック、６５１ｐ、２０００；　Ｂｌｏｉｓ、Ｍ．　Ｓ．，　Ｎａｔｕｒｅ、４６１７：１１９８、１９５８）により調べた結果、従来の合成抗酸化剤のＢＨＡまたは天然抗酸化剤のトコフェロールに比べて比較的高く現れることを確認した。
【００２５】
また、本発明によれば、前述したようにして収得した野茨の抽出物をクロマトグラフィーにより分離・精製することによって抗酸化活性を示す活性分画を収得することができる。クロマトグラフィーはシリカゲルコラムクロマトグラフィーを利用して、１回ないし２回遂行することが望ましい。
【００２６】
シリカゲルコラムクロマトグラフィーにより収得した活性分画をさらにＯＤＳコラムクロマトグラフィーを実施して、より純粋に精製された活性分画を収得することができる。
【００２７】
クロマトグラフィーを遂行する時に展開溶媒としてはクロロホルムとメタノールまたはメタノールと蒸溜水が混合された混合溶媒を使用することができる。展開溶媒の流速は５ｍｌ／時間ないし１０００ｍｌ／時間になるようにし、望ましくは２０ｍｌ／時間ないし５００ｍｌ／時間になるようにする。
【００２８】
前記クロマトグラフィーから湧出された分画は、試験管に５ｍｌないし１００ｍｌずつ収集し、収集された分画の抗酸化活性を測定して抗酸化活性を示す活性分画を収得することができる。抗酸化活性は従来に公知された方法によって測定することができる（大韓民国食品栄養学会、食品栄養実験ハンドブック、６５１ｐ、２０００；　Ｂｌｏｉｓ、　Ｍ．　Ｓ．，　Ｎａｔｕｒｅ、４６１７：１１９８、１９５８）。
【００２９】
本発明の一実施例によって収得された活性分画の抗酸化活性を測定した結果、合成抗酸化剤のＢＨＡおよび天然抗酸化剤のα−トコフェロールの抗酸化活性に比べて各々２．７倍および３．８倍強く現れた。
【００３０】
本発明者らは前記クロマトグラフィーにより分離・精製された活性分画の理化学的性質を水素および炭素核磁気共鳴スペクトルで調べた。その結果、前記活性分画は、下記化学式で表示されるカテキン−（α４→８）−カテキン構造を有するプロシアニジンＢ３（ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｅ　Ｂ３）化合物であることを確認した。したがって、本発明による野茨の抽出物はその活性成分でプロシアニジンＢ３を含むことを特徴とするものである。
【００３１】
また、本発明は（ａ）野茨の地下部を有機溶媒に沈漬させて抽出する段階と、（ｂ）前記（ａ）段階の抽出物をクロマトグラフィーで分離・精製する段階とを含むことを特徴とする抗酸化活性を有する野茨抽出物の製造方法を提供する。
【００３２】
（ａ）段階において有機溶媒は詳述したようにアセトンまたはエタノールを使用することができる。エタノールを使用する場合には、エタノール抽出物を収得した後に、前記エタノール抽出物にエチルアセテートと水を添加し、エチルアセテート分画と水分画を収得して、前記水分画にブタノールを添加し、水分画とブタノール分画を収得する段階をさらに遂行する。このとき、抽出条件は前述したしたとおりである。
【００３３】
（ｂ）段階においてクロマトグラフィーはシリカゲルコラムクロマトグラフィーとＯＤＳコラムクロマトグラフィーを順次に施行することができ、クロマトグラフィー条件は前述したとおりである。
【００３４】
本発明のまた他の目的を達成するために、本発明は前記野茨の抽出物を含むことにより抗酸化活性を有する組成物を提供する。より具体的には、本発明は、本発明の野茨の抽出物が有効成分として抗酸化活性を有する薬学的組成物を提供する。
【００３５】
本発明による薬学的組成物に含まれる野茨の抽出物はコラムクロマトグラフィーを通じて精製されたものが望ましいが、単純に溶媒抽出法により収得された抽出物も本発明による薬学的組成物に含まれる。
【００３６】
本発明の薬学的組成物は經口または非經口投与が可能である。本発明による薬学組成物の投与経路はこれらに限定されることはないが、たとえば、口腔、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、硬膜内、心臓内、硬皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸管、舌下または局所投与が可能である。
【００３７】
このような臨床投与のために本発明の薬学的組成物は公知の技術を利用して適合した剤形で製剤化することができる。例えば、經口投与時には、不活性希釈剤または食用担体と混合したり、硬質または軟質ゼラチンカプセルに密封したり、あるいは錠剤で圧型して投与することができる。經口投与用の場合、活性化合物は賦形剤と混合して、摂取型錠剤、頬側錠剤、トローチ、カプセル、エリクサー（ｅｌｉｘｉｒ）、サスペンション、シロップ、ワイパーなどの形態で使用することができる。また、注射用、非經口投与用などの各種剤型は当該技術分野の公知とされた技術または慣用されている技術によって製造することができる。
【００３８】
本発明の薬学的組成物に含まれる野茨抽出物の有効量は０．１ｍｇ／ｋｇないし５００ｍｇ／ｋｇである。望ましくは１ｍｇ／ｋｇないし１００ｍｇ／ｋｇであり、１日１回ないし５回投与することができる。しかし、最終投与量および投与回数は患者の状態、年齢などを考慮して臨床医の判断によって必要な範囲で調整することができる。
【００３９】
本発明による薬学的組成物は活性酸素による細胞構成成分の酸化により誘発される疾病の治療または予防に有用に使われることができる。このような疾病としては、たとえば、これに限定されないが老化（ａｇｉｎｇ）、癌（ｃａｎｃｅｒ）、複合性動脈硬化（ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、関節炎（ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）およびパーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ）が含まれる。
【００４０】
また、本発明は、本発明の野茨の抽出物を含むことにより抗酸化活性を有する食品組成物を提供する。本発明による野茨の抽出物は抗酸化活性が強く、酸化によって生じる食品のにおいや風味の変化、油脂の酸敗、そして食品の変色を効果的に防止することができる。したがって、前記野茨の抽出物を従来の各種食品類に配合することによって、これら食品類を保存したり食品の新鮮度および品質を長期間にわたり維持するために使用することができる。
【００４１】
使用される食品類としては典型的な食品だけでなく、飲料（アルコール性飲料も含む）、果実および果実の加工食品（例：果物缶詰、瓶詰、ジャム、マーマレード等）、魚類、肉類およびその加工食品（例：ハム、ソーセージ、コーンビーフ等）、パン類および麺類（例：うどん、そば、ラーメン、スパゲティ、マカロニ等）、果汁、各種ドリンク、クッキー、飴、乳製品（例：バター、チーズ等）、食用植物油脂、マーガリン、植物性蛋白質、レトルト食品、冷凍食品および各種調味料（例：みそ、醤油、ソース等）が含まれる。
【００４２】
また、本発明は、本発明の野茨の抽出物を含む抗酸化活性を有する化粧品組成物を提供する。本発明の化粧品組成物は、本発明の野茨の抽出物をそのまま使用するか、または必要に応じて希釈して使用することができる。前記野茨の抽出物は、化粧品分野において通常に使用される基剤、補助剤および添加剤を使用して液体または固体形態で製造することができる。液体または固体形態の化粧品としては、これに限定されるものではないが、たとえば、化粧水、クリーム剤、ローション剤および入浴剤などの形態を含むことができる。
【００４３】
化粧品分野において通常に使用される基剤、補助剤および添加剤は特に制限されるものではなく、たとえば、水、アルコール、プロピレングリコール、ステアリン酸、グリセロール、セチルアルコールおよび流動ファラフィンなどを含むことができる。
【００４４】
本発明による化粧品組成物は皮膚の酸化による損傷、たとえば、斑点（褐色班）、そばかす、皮膚亀裂、紫外線損傷（日焼け）などを予防するのに非常に有用であり、化粧品自らの酸化を防止することによって化粧品の品質を維持するためにも非常に有用に使われることができる。
【００４５】
【実施例１】
野茨の根のアセトン抽出物製造
野茨の根はソウルＫｙｕｎｇｄｏｎｇ市場の漢方薬商で購入した。前記野茨の根３０００ｇ（生体中）にアセトン１５Ｌを添加して常温で２４時間抽出した。これを２回反復した後、濃縮乾燥させてアセトン抽出物９２ｇを収得した。
【００４６】
【実施例２】
野茨の根のエタノール抽出物製造
野茨の根３０００ｇ（生体中）に７０％エタノール１５Ｌを添加して常温で２４時間抽出した。これを２回反復した後に、濃縮乾燥させて水溶性エタノール抽出物１４６．４ｇを収得した。
【００４７】
【実施例３】
野茨の根のエチルアセテート分画、ブタノール分画および水分画製造
前記実施例２で収得した水溶性エタノール抽出物に蒸溜水１０００ｍｌおよびエチルアセテート１０００ｍｌをそれぞれ添加して水とエチルアセテート層で２回分画した。前記で収得した水層に再びブタノール６００ｍｌを添加して水層とブタノール層で２回分画した。それぞれの分画を減圧濃縮してエチルアセテート分画７６．９ｇ、ブタノール分画１２．５ｇおよび水分画５３．２ｇを収得した。
【００４８】
【実施例４】
野茨の根のアセトン抽出物のクロマトグラフィー
前記実施例１で収得した野茨の根アセトン抽出物をシリカゲルクロマトグラフィーおよびＯＤＳクロマトグラフィーを順次施行することによって抗酸化活性を示す物質を分離・精製した。シリカゲル（７０−２３０ｍｅｓｈ、Ｍｅｒｃｋ社）をクロロホルムとメタノール溶媒に懸濁させ、ガラスコラム（１０×１５ｃｍ）に充填した後に、前記実施例１で収得した野茨の根アセトン抽出物をローディングして湧出した。このとき、展開溶媒としてはクロロホルム：メタノール溶媒系をメタノール比率を段階的に高めながら使用した。クロロホルム：メタノールの比率を３：１で溶媒量を６０００ｍｌとした後にメタノールの比率を高めてクロロホルム：メタノールの比率を２：１で、溶媒量を２１００ｍｌに調節した後、メタノールのみを２０００ｍｌ使用した。湧出溶媒の流速は２００ｍｌ／時間とし、分画サイズは５０ｍｌ／フラスコの条件で分画した。クロマトグラフィーの結果、湧出された分画１７０個を収得して薄層クロマトグラフィー（Ｔｈｉｎ　ｌａｙｅｒ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；以下ＴＬＣと称する）を実施して１０％硫酸で噴霧後、加熱して物質の分布を確認した後に類似の物質が含まれた分画を集めて１２個の大きい分画に分けた。ＴＬＣにおいては固定状でＴＬＣプレート（ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　Ｆ２４５、ＭＥＲＣＫ社）を使用し、移動状としてはクロロホルムと水（２：１）の混合溶媒を使用した。これら１２個の分画の抗酸化活性を自由ラジカルを利用した抗酸化活性測定法（韓国食品栄養学会、食品栄養実験ハンドブック、６５１、２０００）により測定した。その結果、抗酸化活性を最も大きく示す分画が６番目の分画であることを分かり、収得された量は６．１６ｇであった。前記活性分画をもう一度前述した方法でシリカゲルコラムクロマトグラフィーを遂行して抗酸化活性を示す活性分画３．１１ｇを収得した。これを再びＯＤＳゲル（４０−６３μｍ、Ｍｅｒｃｋ社）が充填されたガラスコラム（４．５×１２ｃｍ）を利用してメタノール：蒸溜水の混合溶媒（メタノール：蒸溜水＝１：２、１８００ｍｌ）で湧出させることによって最終活性物質２１７ｍｇを分離精製した。
【００４９】
【実施例５】
野茨の根抽出物中の活性成分の化学的構造結晶
野茨の根抽出物のうちから抗酸化活性を示す活性成分の化学的構造を水素および炭素核磁気共鳴スペクトルで調べ、この活性成分の理化学的性質を調べた。
【００５０】
その結果、抗酸化活性を示す活性成分は下記化学式で表示されるカテキン−（α４→８）−カテキンの構造を有するプロシアニジンＢ３であることを分かった。これの理化学的性質は次のとおりであり、水素および炭素核磁気共鳴スペクトルは図１および図２に示したとおりである。
【００５１】
１）化合物の名称：カテキン−（α４→８）−カテキン（ｃａｔｅｃｈｉｎ−（α４→８）−ｃａｔｅｃｈｉｎ）
２）物質の性状：薄い黄色粉末
３）分子量：５７８
４）化学構造式
【００５２】
【化２】

【００５３】
【実施例６】
有機溶媒で抽出した野茨の根抽出物およびクロマトグラフィー分画の薄層クロマトグラフィー
前記実施例１、実施例２、実施例３および実施例４において収得したそれぞれの野茨の抽出物、溶媒分画物およびクロマトグラフィー分画を薄層クロマトグラフィー（Ｔｈｉｎ　ｌａｙｅｒ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；以下ＴＬＣと称する）を実施してプロシアニジンＢ３が最も多く抽出される分画を調べた。固定状としてはＴＬＣプレート（ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　Ｆ２４５、ＭＥＲＣＫ社）を使用し、移動状としてはクロロホルムと水（２：１）の混合溶媒を使用し、それぞれの抽出物および分画を展開させて発色試薬で１０％硫酸溶液を噴霧して加熱し、発色させる方法を使用したり、または１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ（ＤＰＰＨ）溶液を噴霧して紫色が脱色される部分を抗酸化活性物質が存在する部位として確認する方法を使用した。
【００５４】
実験の結果、１０％硫酸で発色させた場合アセトン抽出物、エタノール抽出物およびこれのエチルアセテート分画でプロシアニジンＢ３を確認した。また、展開されたバンドにおける発色の濃さの程度からプロシアニジンＢ３の存在量を推定した。その結果、アセトン抽出物とエチルアセテート分画にプロシアニジンＢ３が比較的多く存在していることを確認した（図３Ａ）。この図３Ａ中、矢印はプロシアニジンＢ３が確認された部分である。
【００５５】
ＤＰＰＨ溶液を噴霧させて紫色で脱色された部分を確認した場合にも硫酸で発色させた結果と同様にアセトン抽出物、エタノール抽出物およびこれのエチルアセテート分画でプロシアニジンＢ３を確認することができた（図３Ｂ）。この図３Ｂ中、この図３Ａ中、矢印は図３Ａと同様、プロシアニジンＢ３が確認された部分である。
【００５６】
また、実施例４においてクロマトグラフィーで分離した１２個の分画をＴＬＣした結果、６番目の分画にプロシアニジンＢ３が多く存在していることを確認することができた（図３Ｃ）。この図３Ｃ中、矢印は図３Ａと同様、プロシアニジンＢ３が確認された部分である。この図３Ｃに示すように、６番目の分画にプロシアニジンＢ３が多く存在していることを確認することができたが、これは実施例４において自由ラジカルを利用した硫酸化活性測定法により前記１２個の分画の抗酸化活性を測定した結果と同様に現れたことになる。
【００５７】
【実施例７】
野茨の根抽出物の抗酸化活性測定
前記実施例１で収得した野茨の根抽出物と実施例４で収得した最終活性物質であるプロシアニジンＢ３の抗酸化活性を合成抗酸化剤であるＢＨＡと天然抗酸化剤のα−トコフェロールの抗酸化活性と比較して測定した。
【００５８】
抗酸化活性は自由ラジカルである１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ（ＤＰＰＨ）を使用した抗酸化活性測定法（韓国食品栄養科学会、食品栄養実験ハンドブック、６５１ｐ、２０００；Ｂｌｏｉｓ、Ｍ．　Ｓ．，　Ｎａｔｕｒｅ、４６１７：１１９８、１９５８）で調べた。実施例１において収得した野茨の根抽出物、実施例４において収得した最終活性物質、ＢＨＡおよびトコフェロールを各々２．０、１．０、０．５、０．２５、０．１２５、０．０６３ｍｇ／ｍｌを含有したエタノール溶液０．２ｍｌを試験管に入れてＤＰＰＨ（０．４ｍＭ）溶液０．８ｍｌとエタノール３ｍｌを添加して室温で３０分間反応させた後５１７ｎｍで吸光度を測定した。抗酸化活性はＲＣ５０値で示した。ＲＣ５０はそれぞれの試料を添加しない対照群の吸光度値を５０％減少させるのに必要な濃度（μｇ／ｍｌ）を示す。
【００５９】
実験の結果、表１に示したように野茨の根抽出物の抗酸化活性はＢＨＡとα−トコフェロールに比べて比較的高く現れた。また、野茨の根抽出物から分離されたプロシアニジンＢ３の抗酸化活性はＢＨＡとα−トコフェロールに比べて各々２．７倍、３．８倍強く現れた。
【００６０】
【表１】

【００６１】
以上では本発明を実施例によって詳細に説明したが、本発明は実施例に限定されるものではなく、本発明が属する技術分野において通常の知識を有する者であれば本発明の思想と精神を離れることなく、本発明を修正または変更できるであろう。
【００６２】
【発明の効果】
本発明による野茨の抽出物およびこれを含む組成物は活性酸素により誘発される疾病の治療または予防、食品の品質維持および皮膚の酸化による損傷を防止するのに非常に有用に使われることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】野茨の根抽出物のうちから抗酸化活性を示す活性成分の水素核磁気共鳴スペクトルを示した線図
【図２】野茨の根抽出物のうちから抗酸化活性を示す活性成分の炭素核磁気共鳴スペクトルを示した線図
【図３】Ａは本発明による野茨の抽出物を薄膜クロマトグラフィーした後、１０％硫酸で発色させた結果を示した図、Ｂは本発明による野茨の抽出物を薄膜クロマトグラフィーした後１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ（ＤＰＰＨ）溶液を噴霧させた結果を示した図、Ｃは本発明による野茨の根アセトン抽出物をクロマトグラフィーして収得した分画に対する薄膜クロマトグラフィー結果を示した図
【符号の説明】
１　アセトン抽出物（図３Ａ，Ｂ）
２　水溶性エタノール抽出物（図３Ａ，Ｂ）
３　エチルアセテート分画（図３Ａ，Ｂ）
４　ブタノール分画（図３Ａ，Ｂ）
５　水分画（図３Ａ，Ｂ）
６　プロシアニジンＢ３（図３Ａ，Ｂ）

Claims

野茨地下部を有機溶媒で抽出して収得した抗酸化活性を有する野茨の抽出物。
野茨地下部がそれの根または根の乾体であることを特徴とする請求項１に記載の野茨の抽出物。
有機溶媒がアセトンまたはエタノールであることを特徴とする請求項１に記載の野茨の抽出物。
エタノールで抽出した野茨の抽出物を各々エチルアセテート、ブタノールおよび蒸溜水で抽出して収得したことを特徴とする請求項３に記載の野茨の抽出物。
前記抽出物が下記化学構造式のプロシアニジンＢ３を含むことを特徴とする請求項１ないし請求項４のいずれか１項に記載の野茨の抽出物。
（ａ）野茨の地下部を有機溶媒に沈漬させて抽出する段階と、（ｂ）前記（ａ）段階の抽出物をクロマトグラフィーで分離・精製する段階とを含むことを特徴とする抗酸化活性を有する野茨抽出物の製造方法。
前記（ａ）段階の野茨地下部が野茨の根または根の乾体であることを特徴とする請求項６に記載の野茨抽出物の製造方法。
前記（ａ）段階の有機溶媒がアセトンまたはエタノールであることを特徴とする請求項６または請求項７に記載の野茨抽出物の製造方法。
前記（ａ）段階のエタノールで抽出した抽出物に水とエチルアセテートを添加して水分画とエチルアセテート分画を収得し、前記水分画にブタノールを添加して水分画とブタノール分画を収得することを特徴とする請求項８に記載の野茨抽出物の製造方法。
前記（ｂ）段階のクロマトグラフィーはシリカゲルコラムクロマトグラフィーとＯＤＳコラムクロマトグラフィーを順次に遂行することを特徴とする請求項６に記載の野茨抽出物の製造方法。
請求項１ないし請求項５のうちいずれか１つの抽出物を含むことにより抗酸化活性を有することを特徴とする組成物。
前記組成物が、薬学的組成物、食品組成物および化粧品組成物のいずれか１つであることを特徴とする請求項１１に記載の組成物。