ES2311403B1 - Extractos fenolicos de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su procedimiento de obtencion. - Google Patents
Extractos fenolicos de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su procedimiento de obtencion. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2311403B1 ES2311403B1 ES200701616A ES200701616A ES2311403B1 ES 2311403 B1 ES2311403 B1 ES 2311403B1 ES 200701616 A ES200701616 A ES 200701616A ES 200701616 A ES200701616 A ES 200701616A ES 2311403 B1 ES2311403 B1 ES 2311403B1
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- extract
- type
- obtaining
- extracts
- proanthocyanidins
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 108
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 229920002783 Propelargonidin Polymers 0.000 title claims abstract description 34
- 241000220304 Prunus dulcis Species 0.000 claims abstract description 53
- 235000011437 Amygdalus communis Nutrition 0.000 claims abstract description 52
- CWEZAWNPTYBADX-UHFFFAOYSA-N Procyanidin Natural products OC1C(OC2C(O)C(Oc3c2c(O)cc(O)c3C4C(O)C(Oc5cc(O)cc(O)c45)c6ccc(O)c(O)c6)c7ccc(O)c(O)c7)c8c(O)cc(O)cc8OC1c9ccc(O)c(O)c9 CWEZAWNPTYBADX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 50
- 229920002414 procyanidin Polymers 0.000 claims abstract description 50
- 229920002770 condensed tannin Polymers 0.000 claims abstract description 41
- 235000020224 almond Nutrition 0.000 claims abstract description 32
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 22
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims abstract description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 16
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 14
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000002803 maceration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims abstract 4
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 claims abstract 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 claims abstract 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 26
- 239000013638 trimer Substances 0.000 claims description 22
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 12
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 7
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 claims description 4
- 230000010065 bacterial adhesion Effects 0.000 claims description 3
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 3
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 claims description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000013589 supplement Substances 0.000 claims description 3
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 3
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 claims description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 2
- 229960004592 isopropanol Drugs 0.000 claims description 2
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 claims description 2
- 238000003825 pressing Methods 0.000 claims description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims description 2
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 3
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims 3
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 claims 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 claims 2
- 206010013786 Dry skin Diseases 0.000 claims 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 claims 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims 1
- 230000037336 dry skin Effects 0.000 claims 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 claims 1
- 235000020510 functional beverage Nutrition 0.000 claims 1
- 239000004519 grease Substances 0.000 claims 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 abstract description 6
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 abstract 1
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 abstract 1
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 description 28
- 229930013783 (-)-epicatechin Natural products 0.000 description 17
- 235000007355 (-)-epicatechin Nutrition 0.000 description 17
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 17
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 14
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 10
- 229930013915 (+)-catechin Natural products 0.000 description 9
- 235000007219 (+)-catechin Nutrition 0.000 description 9
- PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N (-)-epicatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N 0.000 description 9
- JPFCOVZKLAXXOE-XBNSMERZSA-N (3r)-2-(3,5-dihydroxy-4-methoxyphenyl)-8-[(2r,3r,4r)-3,5,7-trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-3,4-dihydro-2h-chromen-4-yl]-3,4-dihydro-2h-chromene-3,5,7-triol Chemical compound C1=C(O)C(OC)=C(O)C=C1C1[C@H](O)CC(C(O)=CC(O)=C2[C@H]3C4=C(O)C=C(O)C=C4O[C@@H]([C@@H]3O)C=3C=CC(O)=CC=3)=C2O1 JPFCOVZKLAXXOE-XBNSMERZSA-N 0.000 description 8
- 229920001722 A-type proanthocyanidin Polymers 0.000 description 8
- 229920001991 Proanthocyanidin Polymers 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 description 7
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 description 7
- XMOCLSLCDHWDHP-IUODEOHRSA-N epi-Gallocatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-IUODEOHRSA-N 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- XMOCLSLCDHWDHP-SWLSCSKDSA-N (+)-Epigallocatechin Natural products C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-SWLSCSKDSA-N 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 5
- 150000003385 sodium Chemical class 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- OEIJRRGCTVHYTH-UHFFFAOYSA-N Favan-3-ol Chemical compound OC1CC2=CC=CC=C2OC1C1=CC=CC=C1 OEIJRRGCTVHYTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N Trolox Chemical compound O1C(C)(C(O)=O)CCC2=C1C(C)=C(C)C(O)=C2C GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 240000001717 Vaccinium macrocarpon Species 0.000 description 4
- 235000012545 Vaccinium macrocarpon Nutrition 0.000 description 4
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000004634 cranberry Nutrition 0.000 description 4
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 4
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 4
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XMOCLSLCDHWDHP-UHFFFAOYSA-N L-Epigallocatechin Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000002118 Vaccinium oxycoccus Nutrition 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- RSYUFYQTACJFML-DZGCQCFKSA-N afzelechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C=C1 RSYUFYQTACJFML-DZGCQCFKSA-N 0.000 description 3
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 3
- DZYNKLUGCOSVKS-UHFFFAOYSA-N epigallocatechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3cc(O)c(O)c(O)c3 DZYNKLUGCOSVKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- HGVVOUNEGQIPMS-UHFFFAOYSA-N procyanidin Chemical compound O1C2=CC(O)=CC(O)=C2C(O)C(O)C1(C=1C=C(O)C(O)=CC=1)OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC=C(O)C(O)=C1 HGVVOUNEGQIPMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 229930013884 (+)-gallocatechin Natural products 0.000 description 2
- 235000007243 (+)-gallocatechin Nutrition 0.000 description 2
- XFZJEEAOWLFHDH-UHFFFAOYSA-N (2R,2'R,3R,3'R,4R)-3,3',4',5,7-Pentahydroxyflavan(48)-3,3',4',5,7-pentahydroxyflavan Natural products C=12OC(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)C(O)CC2=C(O)C=C(O)C=1C(C1=C(O)C=C(O)C=C1O1)C(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1 XFZJEEAOWLFHDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YREROAPXUOXCGI-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=CC=C1O.OC(=O)C1=CC(O)=CC=C1O YREROAPXUOXCGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000223760 Cinnamomum zeylanicum Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RSYUFYQTACJFML-UKRRQHHQSA-N Epiafzelechin Natural products C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC=C(O)C=C1 RSYUFYQTACJFML-UKRRQHHQSA-N 0.000 description 2
- 244000183278 Nephelium litchi Species 0.000 description 2
- MOJZMWJRUKIQGL-FWCKPOPSSA-N Procyanidin C2 Natural products O[C@@H]1[C@@H](c2cc(O)c(O)cc2)Oc2c([C@H]3[C@H](O)[C@@H](c4cc(O)c(O)cc4)Oc4c3c(O)cc(O)c4)c(O)cc(O)c2[C@@H]1c1c(O)cc(O)c2c1O[C@@H]([C@H](O)C2)c1cc(O)c(O)cc1 MOJZMWJRUKIQGL-FWCKPOPSSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 235000017803 cinnamon Nutrition 0.000 description 2
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008821 health effect Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Substances N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- LXEKPEMOWBOYRF-QDBORUFSSA-N AAPH Chemical group Cl.Cl.NC(=N)C(C)(C)\N=N\C(C)(C)C(N)=N LXEKPEMOWBOYRF-QDBORUFSSA-N 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 235000021411 American diet Nutrition 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000593280 Dioclea lasiophylla Species 0.000 description 1
- 241000208421 Ericaceae Species 0.000 description 1
- CITFYDYEWQIEPX-UHFFFAOYSA-N Flavanol Natural products O1C2=CC(OCC=C(C)C)=CC(O)=C2C(=O)C(O)C1C1=CC=C(O)C=C1 CITFYDYEWQIEPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- 241000220225 Malus Species 0.000 description 1
- 235000011430 Malus pumila Nutrition 0.000 description 1
- 235000015103 Malus silvestris Nutrition 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 244000025272 Persea americana Species 0.000 description 1
- 235000008673 Persea americana Nutrition 0.000 description 1
- 241000218641 Pinaceae Species 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 description 1
- 241000220222 Rosaceae Species 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 241001411370 Urceola micrantha Species 0.000 description 1
- 235000012511 Vaccinium Nutrition 0.000 description 1
- 241000736767 Vaccinium Species 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 1
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 1
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 1
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 1
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 235000021438 curry Nutrition 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 150000002085 enols Chemical class 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 229930182497 flavan-3-ol Natural products 0.000 description 1
- 235000011987 flavanols Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000012994 industrial processing Methods 0.000 description 1
- 230000002608 insulinlike Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 229940097156 peroxyl Drugs 0.000 description 1
- 235000010204 pine bark Nutrition 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 229920000429 procyanidin dimer Polymers 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000005979 thermal decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 150000003712 vitamin E derivatives Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/73—Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
- A61K36/736—Prunus, e.g. plum, cherry, peach, apricot or almond
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
- A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
- A61K8/4973—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom
- A61K8/498—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom having 6-membered rings or their condensed derivatives, e.g. coumarin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
- A61K2800/52—Stabilizers
- A61K2800/522—Antioxidants; Radical scavengers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Birds (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Extractos fenólicos de piel de almendra
conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su
procedimiento de obtención.
Esta invención se refiere a extractos fenólicos
conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas
obtenidos a partir de la piel de la almendra [Prunus dulcis
(Mill.) D.A. Webb, Prunus amygdalus (L.) Batsch.,
Amygdalus dulcis (Mill.), Amygdalus communis (L.) o
Prunus communis (L.)]. En particular, se quieren conseguir
extractos ricos en proantocianidinas con enlaces de tipo A.
El procedimiento de obtención que también se
protege consiste en: a) una maceración del material vegetal con
disolventes orgánicos a 25-100ºC, b) una
purificación por extracción líquido-líquido y/o
cromatografía de adsorción o intercambio iónico, y c)
opcionalmente, un secado final. También se protegen las posibles
actividades/propiedades de estos extractos tales como la actividad
antioxidante y otras, que determinan su uso como ingrediente
alimentario o dietético, y en la industria cosmética y
farmacéutica.
Description
Extractos fenólicos de piel de almendra
conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su
procedimiento de obtención.
Extractos fenólicos bioactivos de aplicación en
la industria alimentaria, dietética, cosmética y farmaceútica.
Las proantocianidinas o taninos condensados son
oligómeros y polímeros de
flavan-3-ol ampliamente
distribuidos en el reino vegetal. Las unidades de
flavan-3-ol más abundantes son
(+)-afzelequina, (+)-catequina y
(+)-galocatequina (formas 2R:3S) y sus
diasteroisómeros (-)-epiafzelequina,
(-)-epicatequina y
(-)-epigalocatequina (formas 2R:3R),
respectivamente. Las proantocianidinas constituidas exclusivamente
por (epi)catequina se denominan procianidinas. Las
propelargonidinas y prodelfinidinas contienen al menos una unidad de
(epi)afzelequina y (epi)galocatequina,
respectivamente, junto con unidades de (epi)catequina. En
las procianidinas/propelargonidinas/prodelfinidinas de tipo B, las
unidades de flavan-3-ol se
encuentran unidas por el carbono C-4 de la unidad
superior y el carbono C-6 o C-8 de
la unidad inferior, siendo más abundantes los isómeros
C4-C8 que los C4-C6. Además de este
enlace C-C interflavánico, las procianidinas de
tipo A presentan un enlace de tipo éter entre el carbono
C-2 de la unidad superior y el grupo hidroxilo del
carbono C-7 de la unidad inferior (Porter L.J.
(1988) Flavans and proanthocyanidins. In The flavonoids
(Harborne J.B., Ed.) Chapman and Hall, New York, pp.
21-62). Mientras que las proantocianidinas de tipo
B se encuentran en muchas especies de plantas, son escasas las
fuentes naturales en las que se han identificado proantocianidinas
de tipo A (arándano, cacahuete, aguacate, ciruela, canela y curry);
de igual forma, las procianidinas son mayoritarias respecto a
propelargonidinas y prodelfinidinas en el reino vegetal (Prior
R.L., Gu L. (2005) Occurrence and biological significance of
proanthocyanidin in the American diet. Phytochemistry 66,
2264-2280).
Los productos ricos en proantocianidinas más
comercializados actualmente se obtienen de fuentes como semillas de
uva, manzana, cacao, corteza de pino, etc., y contienen
mayoritariamente procianidinas de tipo B. Las proantocianidinas de
tipo A presentan propiedades/actividades potencialmente beneficiosas
para la salud humana, tal es la capacidad de inhibición de la
adhesión bacteriana en el tracto urinario -lo que reduce el riesgo
de infecciones urinarias- (Foo L.Y., Lu Y.R., Howell A.B., Vorsa N.
(2000) A-type proanthocyanidin trimers from
cranberry that inhibit adherence of uropathogenic
P-fimbriated Escherichia coli. J Nat.
Prod. 63, 1225-1228; Foo L.Y., Lu Y.R., Howell
A.B., Vorsa N. (2000) The structure of cranberry proanthocyanidins
which inhibit adherence of uropathogenic
P-fimbriated Escherichia coli in
vitro. Phytochemistry 54, 173-181), y la
actividad seudo-insulina -lo que mejora el
metabolismo de la glucosa en pacientes con diabetes del tipo
2-(Anderson R.A., Broadhurst C.L., Polansky M.M., Schmidt W.F.,
Khan A., Flanagan V.P., Shoene N.W., Graves D. J. (2004) Isolation
and characterization of polyphenol type-A polymers
from cinnamon with insulin-like biological
activity. J. Agric. Food Chem. 52, 65-70).
También se han demostrado actividades antioxidante (Barreiros
A.L.B.S., David J.P., de Queiroz L.P., David J.M. (2000)
A-type : proanthocyanidin antioxidant from
Dioclea lasiophylla. Phytochemistry 55,
805-808) y antiinflamatoria (Lin L.C., Kuo Y.C.,
Chou C.J. (2002) Immunomodulatory proanthocyanidins from
Ecdysanthera utilis. J. Nat. Prod. 65,
505-508) para las proantocianidinas de tipo A.
Dicho lo anterior, surge, pues, el interés por
nuevos productos ricos en los tres tipos de proantocianidinas - es
decir, procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas -,
especialmente con enlaces de tipo A. Algunas patentes previas
relacionadas con productos conteniendo proantocianidinas son las
siguientes:
- WO2005/072726: Compositions and methods of use
of A-type procyanidins, Schmitz, H. H.;
Kwik-Uribe, C.L.; Kelm, M.A.; Hammerstone, J.
F.
Esta patente se refiere a formulaciones a
emplear en el tratamiento contra la hipertensión. Se incluyen
exclusivamente procianidinas de tipo A, es decir, formadas
exclusivamente por (epi)catequina.
- WO2004/112813: Litchi sinensis extracts
containing oligomeric proanthocyanidins, Rull, S.; Alaoui, I.;
Fabry, B.
Esta patente se refiere a la obtención de
extractos de litchi ricos en proantocianidinas de tipo A, aunque no
se incluyen identificaciones del tipo de moléculas contenidas en
el extracto.
- US2004/156925: Plant proanthocyanidin extract
effective at inhibiting utility, Howell, A. B.; Vorsa, N.
Esta patente se refiere a la obtención de
extractos de proantocianidinas para la prevención y tratamiento de
infecciones del tracto urinario causadas por Escherichia
coli tipo P. Los extractos contienen proantocianidinas con al
menos un enlace de tipo A, particularmente procianidinas.
- WO99/12541: Plant proantocyanidin extract
effective at inhibiting adherence of bacteria with
P-type fimbriae to surfaces, Howell, A. B.; Vorsa,
N.
Esta patente se refiere a la obtención de
extractos de proantocianidinas a partir de plantas de las familias
Ericaceae, Rosaceae, Pinaceae y Vitaceae,
preferiblemente Vaccinium macrocarpon. Los extractos se
emplean en la prevención y tratamiento de infecciones del tracto
urinario causadas por Escherichia coli tipo P.
- US2002/028260: Proanthocyanidin composition
extracted from Vaccinium useful in pharmaceutical compositions for
preventing or treating urogenital infection, Mickelsen, J. N.;
Mickelsen, R. A.; Walker, E. B.
Esta patente se refiere al uso de ciertas
procianidinas (A y B) contra infecciones urinarias y otros. Aunque
en el titulo se habla de proantocianidinas, en el texto se indica
que están formadas por unidades de (epi)catequina (es decir,
procianidinas).
- US2002/0228260: Plant proanthocyanidin
extracts, Walter, E. B.; Mickelsen, R. A.; Mickelsen, J. N.
Esta patente se refiere a extractos de plantas
conteniendo procianidinas con al menos un enlace de tipo A y su uso
en el prevención y tratamiento de infecciones urogenitales.
- ES2171142: Conjugados de flavanoles y
cisteamina. Torres, J. L.
Se refiere a nuevos productos que resultan de la
conjugación de extractos polifenólicos ricos en procianidinas y
prodelfinidinas con moléculas que contienen el grupo tiol.
Un punto importante en la invención y desarrollo
de productos ricos en compuestos potencialmente activos es su
coste, tanto de materia prima inicial como de procedimiento de
producción. En este sentido, los subproductos de la industria
agroalimentaria son fuentes atractivas de compuestos
bioactivos.
El tegumento o piel de la almendra, que se
separa de la almendra durante el procesamiento industrial de la
misma, es un subproducto con escaso valor económico, empleándose
mayormente como alimento para ganado. En la piel de la almendra, se
han identificado diversos compuestos fenólicos tanto de tipo
no-flavonoideo como flavonoideo (Sang, S.; Lapsley,
K.; Jeong, W-S.; Lachance, P.A.; Ho,
C-T; Rosen, R.T. (2002) Antioxidant phenolic
compounds isolated from almond skins (Prunus amygdalus Batsch).
J. Agric. Food Chem., 50, 2459-2463; Milbury
P.E., Chen C.Y., Dolnikowski G.G., Blumberg J.B. (2006)
Determination of flavonoids and phenolics and their distribution in
almonds. J Agric Food Chem 54, 5027-5033;
Wijeratne SSK, Abou-Zaid MM, Shahidi F. (2006)
Antioxidants polyphenols in almond and its coproducts. J Agric
Food Chem, 54, 312-318). En relación a los
flavan-3-oles, Brieskon, C.H.; Betz,
R. (1998) Procyanidin polymers crucial to the structure of the
almond seed coat. Z. Lebensm. Unters. Forsch. 187,
347-353, identificaron los monómeros
(+)-catequina y (-)-epicatequina,
así como los dímeros de procianidinas B1, B3 y B4. Posteriormente,
Lazarus, S.A., Adamson, G.E., Hammerstone, J.F., Schmitz, H.H.
(1999) High performance liquid chromatography/mass spectrometry
analysis of proanthocyanidins in food and beverages. J. Agric.
Food Chem. 47, 3693-3701, confirman la
presencia de procianidinas de tipo B, demostrando a su vez la
ausencia de procianidinas de tipo A en los extractos que
obtuvieron a partir de piel de almendra.
El problema a resolver es la obtención de
extractos conteniendo proantocianidinas con propiedades/actividades
potencialmente beneficiosas para la salud humana. Además, se
buscan materias primas de bajo coste y procesos de producción
sencillos y rentables.
La invención se refiere a extractos fenólicos
conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y
obtenidos de la piel de la almendra [Prunus dulcis (Mill.)
D.A. Webb, Prunus amygdalus (L.) Batsch., Amygdalus
dulcis (Mill.), Amygdalus communis (L.) or Prunus
communis (L.)]. En particular, se quieren conseguir extractos
ricos en proantocianidinas con enlaces de tipo A. Es de esperar que
estos extractos presenten propiedades diferentes, cuando no
mejoradas, con respecto a los productos comercializados actualmente
y que contienen mayoritariamente procianidinas de tipo B. El
procedimiento de obtención, que también se protege, consiste en una
maceración del material vegetal con disolventes, seguido de una
etapa de purificación del extracto y, opcionalmente, un secado
final del extracto purificado. También se protegen las posibles
actividades o propiedades de estos extractos tales como la
actividad antioxidante y otras, que determinan su uso como
ingrediente alimentario o dietético y en la industria cosmética y
farmacéutica.
Figura 1: Ejemplos de las estructuras químicas
de las proantocianidinas que se encontrarían en los extractos
objeto de esta patente.
Figura 2: Análisis por MALDI-TOF
de la muestra obtenida en el ejemplo 1, ampliándose la zona
correspondiente a los tetrámeros. Se comprueba la presencia de
procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas desde dímeros
hasta heptámeros, conteniendo ambos tipos de enlaces, B y A. A
continuación se indican las señales m/z correspondientes a los
aductos sódicos [M+Na]^{+} de las proantocianidinas
detectadas.
Figura 3: Análisis por HPLC con columna de fase
inversa de la muestra obtenida en el ejemplo 1, con identificación
de picos cromatográficos correspondientes a dímeros y trimeros de
procianidinas de tipo B (m/z= 577 y 865, respectivamente) y
dimeros y trimeros de procianidinas de tipo A (m/z= 575 y
863, respectivamente).
Figura 4: Análisis por MALDI-TOF
de la muestra obtenida en el ejemplo 2, ampliándose la zona
correspondiente a los tetrámeros. Se comprueba la presencia de
procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas desde dímeros
hasta octámeros, conteniendo ambos tipos de enlaces, B y A. A
continuación se indican las señales m/z correspondientes a los
aductos sódicos [M+Na]^{+} de las proantocianidinas
detectadas.
Figura 5: Análisis por HPLC con columna de fase
inversa de la muestra obtenida en el ejemplo 2, con identificación
de picos cromatográficos correspondientes a dímeros y trímeros de
procianidinas de tipo B (m/z= 577 y 865, respectivamente),
dímeros y trímeros de procianidinas de tipo A (m/z= 575 y
863, respectivamente), dímeros y trimeros de propelargonidinas de
tipo B (m/z= 561 y 849, respectivamente), dímeros de
propelargonidinas de tipo A (m/z= 559), y dímeros de
prodelfinidinas de tipo A (m/z= 591).
La presente invención consiste en extractos
fenólicos de la piel (tegumento) de la almendra [Prunus
dulcis (Mill.) D.A. Webb, Prunus amygdalus (L.) Batsch.,
Amygdalus dulcis (Mill.), Amygdalus communis (L.) or
Prunus communis (L.)] caracterizados por contener
procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas. La piel de la
almendra es un subproducto agroalimentario de bajo coste por lo que
este procedimiento de obtención de extractos supondría una
valorización de dicho subproducto ya que se obtendrían productos de
mayor valor añadido. La piel podría emplearse tanto húmeda como
seca, separada del fruto por un proceso de escaldado y posterior
repelado, o por
tostación.
tostación.
Las procianidinas son polímeros formados
únicamente por (+)-catequina y/o
(-)-epicatequina. En cambio, las propelargonidinas
y prodelfinidinas son polímeros que contienen unidades de
(+)-afzelequina y/o
(-)-epiafzelequina -caso de las propelargonidinas- y
de (+)-galocatequina y/o
(-)-galoepicatequina -caso de las prodelfinidinas-,
pudiendo contener también unidades de (+)-catequina
y/o (-)-epicatequina. Las diferencias estructurales
entre (epi)catequina (dihidroxi-sustitución
en el anillo B) y (epi)afzelequina
(monohidroxi-sustitución en el anillo B) y
(epi)galocatequina (trihidroxi-sustitución
en el anillo B) justificarían posibles peculiaridades en las
propiedades/actividades fisiológicas de estos tres grupos de
proantocianidinas. Es de esperar, por tanto, que los extractos
conteniendo combinaciones de estos tres tipos de proantocianidinas
presenten propiedades diferentes, cuando no mejoradas, con respecto
a los productos comercializados actualmente y que contienen
únicamente procianidinas.
Otra característica estructural de las
proantocianidinas que determina sus propiedades/actividades
fisiológicas es el tipo de enlace (A ó B) entre las unidades
formadoras. La presente invención se refiere también a extractos de
piel de la almendra caracterizados por contener procianidinas,
propelargonidinas y prodelfinidinas de tipo A.
El contenido fenólico total del extracto se
determina por el método colorimétrico de Singleton V.L., Rossi J.A.
(1965) Colorimetry of total phenolics with
phosphomolibdicphosphotungstic acid reagent. Am J Enol Vitic
16, 144-158, que se basa en la oxidación en medio
básico de los grupos hidroxilos de los fenoles por el reactivo de
Folin-Ciocalteu. Los resultados se expresan como mg
de ácido gálico/g de extracto. De esta forma, los extractos
obtenidos siguiendo los procesos que a continuación se detallan
presentan un contenido fenólico total mínimo de 50 mg/g (5%).
Para confirmar que los extractos contienen los
tres tipos de proantocianidinas (procianidinas, propelargonidinas y
prodelfinidinas) unidas tanto por enlaces de tipo B ó A, se
realiza un análisis por espectrometría de masas, en concreto por
MALDI-TOF-MS
("matrix-assisted laser desorption/ionization
time-of-flight mass
spectrometry"). Para este análisis, el extracto se cristaliza en
una matriz sólida sobre la que incide el láser, que produce la
ionización de las moléculas contenidas en el extracto. Los iones
formados migran por el efecto de un campo eléctrico y lo hacen en
función de su relación masa/carga (m/z), lo que permite la
determinación de las masas moleculares de las sustancias contenidas
en el extracto. La energía de ionización baja y la eficacia de
transmisión alta hacen de esta técnica una de las más resolutivas
para el estudio de las proantocianidinas (Reed J.D., Krueger C.G.,
Vestling M.M. (2005) MALDI-TOF mass spectrometry of
oligomeric food polyphenols. Phytochemistry 66,
2248-2263).
En la tabla siguiente se indican las masas
monoisotópicas correspondientes a los aductos sódicos de las
procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas de tipo B y A
que se encontrarían en los extractos objeto de esta patente. La
asignación de la estructura a la masa observada [M+Na]^{+}
(m/z) se hace teniendo en cuenta el cálculo teórico:
m/z = 290.08*(CAT) + 274.08*(AFZ) + 306.07* (GAL) -
2.02* (B) -4.04* (A) + 22.99, donde CAT, AFZ y GAL
corresponden, respectivamente, al número de unidades de
(epi)catequina, (epi)afzelequina y
(epi)galocatequina que componen la molécula de
proantocianidina; B y A corresponden, respectivamente, al número de
enlaces de tipo B y A entre las unidades constitutivas. A modo de
ejemplo, a continuación, se recogen las señales m/z
correspondientes a procianidinas, propelargonidinas [hasta con 2
unidades de (epi)afzelequina] y prodelfinidinas [hasta con 2
unidades de (epi)galocatequina] con enlaces de tipo B y
A.
\vskip1.000000\baselineskip
Señales
MALDI-TOF-MS [M+Na]^{+}
(m/z)
Señales
MALDI-TOF-MS [M+Na]^{+}
(m/z)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Además del análisis MALDI-TOF,
los extractos se analizan por cromatografía líquida de alta
eficacia acoplada a espectrometría de masas (HPLC/MS) para separar
entre sí los distintos isómeros de los dimeros y trímeros de
procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, tanto con
enlaces de tipo B como de tipo A. Dado que apenas existen patrones
comerciales de proantocianidinas, la identificación de los picos
cromatográficos se basa en su espectro de masas, que nos permite
conocer las unidades formadoras (sin bien sin distinguir entre
diasteroisómeros). La asignación de la estructura a la masa
observada [M-H]^{-} (m/z) se hace de
acuerdo a la siguiente expresión: m/z = 290.08*(CAT) +
274.08*(AFZ) + 306.07* (GAL) - 2.02* (B) -4.04* (A) - 1.01, donde CAT, AFZ y GAL corresponden, respectivamente, al número de unidades de (epi)catequina, (epi)afzelequina y (epi)galocatequina que componen la molécula de proantocianidina; B y A corresponden, respectivamente, al número de enlaces de tipo B y A entre las unidades constitutivas. A modo de ejemplo, a continuación, se recogen las señales m/z correspondientes a dímeros y trímeros de procianidinas, propelargonidinas, y prodelfinidinas con enlaces de tipo B y A.
274.08*(AFZ) + 306.07* (GAL) - 2.02* (B) -4.04* (A) - 1.01, donde CAT, AFZ y GAL corresponden, respectivamente, al número de unidades de (epi)catequina, (epi)afzelequina y (epi)galocatequina que componen la molécula de proantocianidina; B y A corresponden, respectivamente, al número de enlaces de tipo B y A entre las unidades constitutivas. A modo de ejemplo, a continuación, se recogen las señales m/z correspondientes a dímeros y trímeros de procianidinas, propelargonidinas, y prodelfinidinas con enlaces de tipo B y A.
\newpage
Señales ESI-MS
[M-H]^{-}
(m/z)
Algunos ejemplos de las estructuras químicas de
las proantocianidinas que se encontrarían en los extractos objeto
de esta patente se incluyen en la figura 1.
Para la cuantificación de las proantocianidinas
identificadas se utiliza un detector de fluorescencia operando en
condiciones específicas para
flavan-3-oles
(\lambda_{excitación}=280 nm, \lambda_{emisión}=310 nm). Los
contenidos de cada compuesto se expresan como mg de
(-)-epicatequina/g de extracto. De esta forma, los
extractos obtenidos presentan un contenido mínimo en monómeros,
dímeros y trímeros de proantocianidinas de 10 mg/g (1%).
El porcentaje de proantocianidinas de tipo A se
calcula dividiendo los contenidos de dímeros y trímeros de tipo A
entre los contenidos de los dímeros y trímeros de tipo A y B. De
esta forma, los extractos obtenidos presentan un porcentaje mínimo
de proantocianidinas de tipo A del 15%. Otro aspecto de la
invención es el procedimiento de obtención de los extractos
caracterizado porque se efectúan algunos de los siguientes
pasos:
- maceración del material vegetal con
disolventes
- purificación del extracto
- secado del extracto purificado.
Se parte de piel de almendra húmeda o seca
obtenida después del escaldado y posterior repelado, o después de
la tostación de la almendra. Si la muestra está seca, se puede
moler para reducir el tamaño. Para evitar posibles interferencias
de la grasa, la piel se puede desengrasar empleando disolventes
orgánicos (i.e., hexano).
La extracción se puede llevar a cabo con
metanol, etanol y agua puros o sus mezclas; a temperatura entre
25ºC y 100ºC, y de preferencia entre 50ºC a 70ºC; acidulado o no
con cualquier ácido de tipo inorgánico como por ejemplo HCl,
H_{2}SO_{4}, H_{3}PO_{4} o cualquier ácido orgánico como
ácido acético, cítrico o alguna resina catiónica en forma
protonada. Se emplean sistemas habituales para las extracciones
sólido-líquido (incubador, reflujo, etc.),
pudiéndose emplear también un baño de ultrasonidos. El tiempo de
extracción puede estar comprendido según el tipo de equipo
utilizado entre 2 horas y 24 horas. Después de este tiempo, el
extracto líquido se separa del residuo sólido por centrifugación o
por prensado y/o filtración.
Una alternativa que acelera el proceso anterior
y reduce el volumen de líquido extractante, es la extracción con
líquidos sobrecalentados. El vehículo de extracción puede ser
también metanol, etanol y agua puros o sus mezclas, y acidulados o
no con los mismos ácidos comentados anteriormente. En este caso se
emplea un equipo extractor específico que permite utilizar líquidos
a elevadas temperaturas y presiones. Las condiciones de trabajo
serán presiones entre 500 psi y 3000 psi y temperaturas entre 60ºC
y 180ºC, con preferencia 100ºC a 140ºC. El tiempo de extracción con
líquidos sobrecalentados puede estar comprendido según las
condiciones empleadas entre 1 minuto y 6 horas.
En cuanto a la etapa de purificación del
extracto, uno de los métodos que se contemplan es la extracción con
disolventes orgánicos como acetato de etilo, acetona,
n-butanol, iso-propanol o sus
mezclas y acidulados con los mismos ácidos utilizados en el proceso
de extracción.
Otra alternativa es la purificación por
cromatografía de adsorción o intercambio fónico sobre resinas tipo
Dowex o Amberlite por elución en gradiente de alcoholes tipo
metanol o etanol entre 20% y 80% en alcohol.
El extracto se puede secar de diversas formas,
si bien se debe caracterizar por trabajar a temperaturas inferiores
a 40ºC. La liofilización, concentración y/o secado a vacío, secado
con aire, y atomización también se contemplan como formas de
secado.
En cuanto a sus propiedades, los extractos de
piel de almendra objeto de esta patente presentan capacidad
antioxidante, evaluada in vitro por el método ORAC
(capacidad de absorción de radicales de oxígeno) empleando
fluoresceína como sustancia fluorescente. Los antioxidantes
presentes en el extracto neutralizan los radicales peroxilo
generados por la descomposición térmica de AAPH, evitando así su
reacción con la fluoresceína. Los resultados se expresan como
mmoles de Trolox/g de extracto, siendo el Trolox un compuesto
sintético, análogo hidrosoluble de la vitamina E. El método ORAC es
uno de los recomendados para la medida de las propiedades
antioxidantes de alimentos y productos dietéticos, así como del
control de la calidad de los mismos (Prior R.L., Wu X., Schaich K.
(2005) Standardized methods for the determination of antioxidant
capacity of phenolics in foods and dietary supplements. J.
Agric. Food Chem. 53, 4290-4302).
Actualmente, se admite que el estrés oxidativo o
sobrecarga oxidativa está implicado en multitud de enfermedades
degenerativas, como el cáncer, la aterosclerosis, la enfermedad de
Alzheimer o el proceso mismo de envejecimiento. No obstante, los
mecanismos etiopatogénicos no se conocen completamente. Frente al
estrés oxidativo como causa de estas enfermedades, se considera que
una estrategia preventiva es la dieta rica en compuestos
antioxidantes, entre ellos, los compuestos fenólicos. Ahora bien,
el hecho de que un extracto presente buenas propiedades in
vitro no implica necesariamente que actúe como antioxidante
efectivo in vivo. Otros factores como biodisponibilidad,
metabolismo, interacciones entre nutrientes, etc. pueden
condicionar la actividad en el medio fisiológico de los compuesto/s
potencialmente bioactivos presentes en el extracto.
En cualquier caso, la metodología ORAC es una
buena aproximación experimental para la optimización de procesos
de obtención, control de calidad y comparativa entre extractos
potencialmente activos. A modo de referencia, podemos mencionar los
valores ORAC para algunos extractos fenólicos comerciales. Las
diferencias en la capacidad antioxidante entre productos se deben
no sólo a la fuente empleada, que determina las estructuras
fenólicas activas, sino también al proceso de obtención del
extracto.
\vskip1.000000\baselineskip
Monagas M.,
Hernández-Ledesma B., Garrido I.,
Martin-Alvarez P.J.,
Gómez-Cordovés C., Bartolomé, B.
(2005). Quality assessment of commercial dietary antioxidant
products from Vitis Vinifera 1. grape seeds. Nutr.
Cancer, 53, 244-254.
Monagas M.,
Hernández-Ledesma B.,
Gómez-Cordovés C., Bartolomé, B.
(2006). Commercial dietary ingredients from Vitis
vinifera L. leaves and grape skins: antioxidant and chemical
characterization. J. Agric. Food Chem., 54,
319-327.
Garrido I., Bartolomé B.,
Gómez-Cordovés C. (2007). Hydrophilic
and lipophilic antioxidant capacities of commercial dietary
antioxidant supplements. Ital. J. Food Sci., en prensa.
Los extractos objeto de esta patente presentan
una capacidad antioxidante similar o superior a la encontrada para
muchos de los extractos fenólicos comercializados en la actualidad.
En cualquier caso, estos extractos también pueden presentar otras
actividades/propiedades de interés para la industria alimentaria,
dietética, cosmética y farmacéutica que también se incluirían en
esta invención. Así, por ejemplo, es de esperar que los extractos
conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas de
tipo A presenten actividades descritas para moléculas aisladas como
la capacidad inhibitoria de la adhesión bacteriana en el tracto
urinario y cierta actividad seudo-insulina.
Estos extractos se podrían emplear como
ingredientes en alimentos, para la elaboración de suplementos
dietéticos y de cosméticos y en la fabricación de medicamentos.
Para una mejor compresión de la invención se
adjuntan dos ejemplos que no son limitantes en cuanto a su
aplicación.
Se utilizaron muestras de piel de almendra
desprendidas durante la tostación del fruto en un horno a escala
industrial. Las pieles se molieron. La muestra molida se desengrasó
con hexano. La muestra desengrasada se mezcló con metanol/HCl
(1000:1 v/v) y se mantuvo durante 15 min. en un baño de
ultrasonidos a 25ºC. Se dejó reposar 15 min., repitiéndose la
operación dos veces en total. Posteriormente la mezcla se
centrifugó. El sobrenadante se retiró y el residuo se extrajo de
nuevo 2 veces más. Se unieron los sobrenadantes correspondientes y
la mezcla se llevó a sequedad a baja presión en un rotavapor. El
residuo se redisolvió en 40 mL de agua destilada y se extrajo con
acetato de etilo. Las fases orgánicas se combinaron.
Posteriormente, el extracto se llevó a sequedad en rotavapor a una
temperatura inferior a 40ºC para obtener un extracto seco. El
contenido en polifenoles de este extracto #1 fue de 78,3 mg/g,
siendo el rendimiento del proceso del 2.1%.
Se llevó a cabo el análisis
MALDI-TOF del extracto empleando ácido
2,5-dihidroxibenzoico (ácido gentísico) como
matriz. Así, se comprobó que el extracto contenía procianidinas,
propelargonidinas y prodelfinidinas hasta heptámeros (Figura 2). De
igual forma, se comprobó que las procianidinas, propelargonidinas y
prodelfinidinas encontradas correspondían a ambos tipos, A y B
(Figura 2, ampliación para tetrámeros). A continuación se indican
las señales m/z correspondientes a los aductos sódicos
[M+Na]^{+} de las proantocianidinas detectadas:
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 1: Señales
MAI,DI-TOF-MS [M+Na]^{+}
(m/z)
\vskip1.000000\baselineskip
También se realizó un análisis por HPLC
empleando una columna de fase inversa Waters
Nova-Pak® C_{18} [300 mm x 3,9 mm (diámetro
interno); tamaño de partícula: 4 \mum] y aplicando un gradiente
de elución compuesto por agua/ácido acético (98:2, v/v) y
agua/acetonitrilo/ácido acético, (73:25:2, v/v/v) con un flujo de
1,0 mL/min Se inyectó un volumen de muestra de 75 \muL de una
solución del extracto 21 mg/ml en metanol/agua (50:50, v/v).
Por un lado, se empleó un detector de masas
cuadrupolar acoplado a una interfase de ionización por electrospray
(ESI) que permitió identificar algunos picos cromatográficos como
dímeros y trímeros de procianidinas de tipo B (m/z= 577 y
865, respectivamente) y dímeros y trímeros de procianidinas de tipo
A (m/z= 575 y 863, respectivamente) (Figura 3). No fue
posible la asignación de picos cromatográficos correspondientes a
otros tipos de compuestos detectados por el análisis
MALDI-TOF (i.e., propelargonidinas y
prodelfinidinas) debido posiblemente a la baja concentración de los
mismos y/o coelución entre ellos.
Dado que se disponían de patrones de dímeros y
trímeros de procianidinas tipo B previamente aislados de otras
plantas, fue posible la asignación de la estructura química de los
compuestos: B3
[(+)-catequina-(4\alpha\rightarrow8)-(+)-catequina],
B1
[(-)-epicatequina-(4\beta\rightarrow8)-(+)-catequina],
B2
[(-)-epicatequina-(4\beta\rightarrow8)-(-)-epicatequina],
B7
[(-)-epicatequina-(4\beta\rightarrow6)-(+)-catequina],
B5
[(-)-epicatequina-(4\beta\rightarrow6)-(-)-epicatequina]
y C1
[(-)-epicatequina-(4\beta\rightarrow8)-(-)-epicatequi-
na-(4\beta\rightarrow8)-(-)-epicatequina]. Sin embargo, no fue posible la asignación de estructuras al resto de picos cromatográficos por la falta de disponibilidad de patrones.
na-(4\beta\rightarrow8)-(-)-epicatequina]. Sin embargo, no fue posible la asignación de estructuras al resto de picos cromatográficos por la falta de disponibilidad de patrones.
Por otro lado, empleando un detector de
fluorescencia, se determinó el área de los picos cromatográficos
correspondientes a los compuestos identificados y se calculó su
contenido empleando la curva de calibrado de la
(-)-epicatequina. A continuación, se indica los
contenidos de las proantocianidinas de tipo B y A identificadas en
el extracto de piel de almendra:
\vskip1.000000\baselineskip
Extracto #1:
composición
\vskip1.000000\baselineskip
El contenido total en compuestos
flavan-3-oles fue de 18,25 mg/g,
expresados como (-)-epicatequina. De ellos, 7,27
mg/g se corresponden con dímeros y trímeros de proantocianidinas.
De este total de proantocianidinas, 1,39 mg/g se corresponden con
dímeros de tipo A, es decir, el 19,0% de proantocianidinas
identificadas presentan un enlace de tipo A.
También se determinó la capacidad antioxidante
del extracto siguiendo el método ORAC que evalúa la capacidad de
absorción de radicales de oxígeno. Este extracto #1 presentó una
buena capacidad antioxidante, siendo su valor ORAC de 3,0 mmoles de
Trolox/g.
La piel de almendra húmeda desprendida del
escaldado industrial del fruto se extrajo con etanol acidulado con
HCl a pH=3, manteniéndose a reflujo durante 4 horas a una
temperatura próxima a su punto de ebullición. La relación
piel/etanol acidulado fue de 1/10. La mezcla se prensó y se
separaron por filtración sobre malla fina de 0,2 mm los restos de la
piel del líquido extractivo. El líquido resultante se sometió a
secado bajo vacío a una temperatura inferior a 60ºC.
El extracto seco se resuspendió en agua
acidulada con HCl a pH=3, con una relación extracto/agua de 1/10.
El residuo seco insoluble se filtró sobre filtro de papel de poro
fino. El residuo sólido depositado sobre el filtro se lavó con agua
(pH=3), y se recuperó el líquido filtrado, añadiéndose al líquido
anterior.
El extracto de piel de almendra purificado y
disuelto en agua se cargó en una columna llena de resina Amberlita
XAD-7, lavada previamente con 5 volúmenes de etanol
y 5 volúmenes de agua destilada acidulada a pH=3. Después del paso
de todo el líquido de extracción se lavó la resina con 2 volúmenes
de columna de solución acuosa de etanol al 20% y tras comprobar que
no salía a través de la columna materia seca disuelta se eluyó el
material retenido con 5 volúmenes de una disolución etanol/agua
(60/40). Esta última fracción se secó bajo vacío a una temperatura
inferior a 40ºC. El contenido en polifenoles totales de este
extracto #2 fue de 264.6 mg/g, siendo el rendimiento del proceso
del 3.3%.
Se llevó a cabo el análisis
MALDI-TOF del extracto empleando ácido
2,5-dihidroxibenzoico (ácido gentísico) como
matriz. Así, se comprobó que el extracto #2 contenía procianidinas,
propelargonidinas y prodelfinidinas hasta octámeros (Figura 4). De
igual forma, se comprobó que las procianidinas, propelargonidinas y
prodelfinidinas encontradas correspondían a ambos tipos, A y B
(Figura 4, ampliación para tetrámeros). A continuación se indican
las señales m/z correspondientes a los aductos sódicos
[M+Na]^{+} de las proantocianidinas detectadas:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Señales
MALDI-TOF-MS [M+Na]^{+}
(m/z)
\newpage
Señales
MALDI-TOF-MS [M+Na]^{+}
(m/z)
\vskip1.000000\baselineskip
También se realizó un análisis por HPLC
empleando una columna de fase inversa Waters
Nova-Pak® C_{18} [300 mm x 3,9 mm (diámetro
interno); tamaño de partícula: 4 \mum] y aplicando un gradiente
de elución compuesto por agua/ácido acético (98:2, v/v) y
agua/acetonitrilo/ácido acético, (73:25:2, v/v/v) con un flujo de
1,0 mL/min Se inyectó un volumen de muestra de 5 pL de una solución
del extracto de 43 mg/ml en metanol/agua (50:50, v/v).
Por un lado, se empleó un detector de masas
cuadrupolar acoplado a una interfase de ionización por electrospray
(ESI) que permitió identificar algunos picos cromatográficos como
dimeros y trímeros de procianidinas de tipo B (m/z= 577 y
865, respectivamente), dímeros y trimeros de procianidinas de tipo
A (m/z= 575 y 863, respectivamente), dímeros y trímeros de
propelargonidinas de tipo B (m/z= 561 y 849,
respectivamente), dimeros de propelargonidinas de tipo A
(m/z= 559) y dímeros de prodelfinidinas de tipo A
(m/z= 591) (Figura 5). No fue posible la asignación de picos
cromatográficos correspondientes a otros tipos de compuestos
detectados por el análisis MALDI-TOF (i.e., trimeros
de propelargonidinas y prodelfinidinas) debido posiblemente a la
baja concentración de los mismos y coelución entre ellos.
Dado que se disponían de patrones de dimeros y
trímeros de procianidinas tipo B previamente aislados de otras
plantas, fue posible la asignación de la estructura química de los
compuestos: B3
[(+)-catequina-(4\alpha\rightarrow8)-(+)-
catequina], B1
[(-)-epicatequina-(4\beta\rightarrow8)-(+)-catequina],
B2
[(-)-epicatequina-(4\beta\rightarrow8)-(-)-epicatequina],
B7
[(-)-epicatequina-(4\beta\rightarrow6)-(+)-catequina],
B5 [(-)-epicatequina-
(4\beta\rightarrow6)-(-)-epicatequina] y
C1
[(-)-epicatequina-(4\beta\rightarrow8)-(-)-epicatequi-
na-(4\beta\rightarrow8)-(-)-epicatequina]. Sin embargo, no fue posible la asignación de estructuras al resto de picos cromatográficos por la falta de disponibilidad de patrones.
na-(4\beta\rightarrow8)-(-)-epicatequina]. Sin embargo, no fue posible la asignación de estructuras al resto de picos cromatográficos por la falta de disponibilidad de patrones.
Por otro lado, empleando un detector de
fluorescencia, se determinó el área de los picos cromatográficos
correspondientes a los compuestos identificados y se calculó su
contenido empleando la curva de calibrado de la
(-)-epicatequina. A continuación, se indica los
contenidos de las proantocianidinas de tipo B y A identificadas en
el extracto de piel de almendra:
\newpage
Extracto #2:
composición
El contenido total en compuestos
flavan-3-oles fue de 114,02 mg/g,
expresados como (-)-epicatequina. De ellos, 53,39
mg/g se corresponden con dímeros y trímeros de proantocianidinas.
De este total de proantocianidinas, 11,40 mg/g se corresponden con
dímeros de tipo A, es decir, el 21,4% de proantocianidinas
identificadas presentan un enlace de tipo A.
También se determinó la capacidad antioxidante
del extracto siguiendo el método ORAC que evalúa la capacidad de
absorción de radicales de oxígeno. Este extracto #2 presentó una
buena capacidad antioxidante, siendo su valor ORAC de 12,1 mmoles
de Trolox/g.
Se partió de la misma muestra de piel de
almendra que en el ejemplo 2. También se empleó el mismo líquido
extractante (etanol acidulado con HCl a pH=3) pero se utilizó un
equipo extractor específico que permite utilizar líquidos a elevadas
temperaturas y presiones. Las condiciones de trabajo fueron 2000
psi de presión y 90ºC de temperatura, siendo el tiempo de
extracción de 30 min. El líquido resultante se sometió a secado
bajo vacío a una temperatura inferior a 60ºC. A partir de aquí se
operó de igual forma que en el ejemplo 2 y los análisis para la
caracterización del extracto y para la identificación de sus
componentes se realizaron del mismo modo, obteniéndose un extracto
sustancialmente equivalente al obtenido en el ejemplo 2.
Claims (20)
1. Extracto de piel de almendra [Prunus
dulcis (Mill.) D.A. Webb, Prunus amygdalus (L.) Batsch.,
Amygdalus dulcis (Mill.), Amygdalus communis (L.) o
Prunus communis (L.)] caracterizado por un contenido
fenólico > 50 mg/g (5%), por contener procianidinas,
propelargonidinas y prodelfinidinas y presentar capacidad
antioxidante.
2. Extracto de piel de almendra según la
reivindicación 1 caracterizado por contener por contener
dímeros y trímeros de proantocianidinas de tipo A en un porcentaje
> 15% referido al total de dímeros y trímeros de
proantocianidinas de tipo A y B.
3. Procedimiento para la obtención de un
extracto según cualquiera de las reivindicaciones
1-2 caracterizado porque comprende los
siguientes pasos:
- -a)
- preparación del material vegetal que contenga la piel ya sea tanto húmeda como seca, separada del fruto por un proceso de escaldado y posterior repelado, o por tostación, pudiendo estar molida en el caso de estar seca para reducir el tamaño; así mismo opcionalmente para evitar posibles interferencias de la grasa, la piel se puede desengrasar empleando disolventes orgánicos como el hexano.
- -b)
- extracción de la piel con disolventes orgánicos, bien por maceración (incubador, reflujo, baño de ultrasonidos, etc.) a temperatura entre 25ºC y 100ºC, o bien empleando extractores que utilizan líquidos sobrecalentados a temperatura entre 60ºC y 180ºC, y presiones entre 500 psi y 3000 psi;
- -c)
- purificación del extracto mediante extracción con disolventes y/o cromatografía de adsorción o intercambio fónico,
- -
- y, opcionalmente
- -d)
- secado del extracto purificado.
4. Procedimiento de obtención de extractos
según la reivindicación 3 caracterizado porque en la etapa
de maceración se emplean disolventes como metanol, etanol y agua
puros o sus mezclas, a temperatura entre 25ºC y 100ºC,
preferentemente entre 50ºC y 70ºC, y tiempo de extracción
comprendido entre 2 horas y 24 horas, separándose el extracto
líquido del residuo sólido por centrifugación o por prensado y/o
filtración.
5. Procedimiento de obtención de extractos
según la reivindicación 4 caracterizado porque en la etapa
de maceración se emplean disolventes acidulados con ácidos
inorgánicos del grupo de HCl, H_{2}SO_{4}, H_{3}PO_{4},
ácidos orgánicos del grupo del ácido acético, ácido cítrico o
alguna resina catiónica en forma protonada.
6. Procedimiento de obtención de extractos
según la reivindicación 3 caracterizado porque en la etapa de
extracción se emplean líquidos sobrecalentados como vehículo de
extracción, que puede ser agua, metanol o etanol puros o sus
mezclas, bajo presión (500 psi a 3000 psi) y una temperatura desde
60ºC hasta 180ºC, preferentemente entre 100ºC y 140ºC, y tiempo de
extracción comprendido entre 1 minuto y 6 horas.
7. Procedimiento de obtención de extractos según
la reivindicación 3 caracterizado porque en la etapa de
purificación se realiza una extracción con disolventes orgánicos
como acetato de etilo, acetona, n-butanol,
iso-propanol o sus mezclas.
8. Procedimiento de obtención de extractos según
la reivindicación 7 caracterizado porque en la etapa de
purificación se emplean disolventes acidulados con ácidos
inorgánicos del grupo de HCl, H_{2}SO_{4}, H_{3}PO_{4},
ácidos orgánicos del grupo del ácido acético, ácido cítrico o
alguna resina catiónica en forma protonada.
9. Procedimiento de obtención de extractos según
la reivindicación 3 caracterizado porque en la etapa de
purificación se emplea cromatografía de adsorción o intercambio
iónico sobre resinas tipo Dowex o Amberlite por elución en
gradiente de alcoholes tipo metanol o etanol entre 20% y 80% en
alcohol.
10. Procedimiento de obtención de extractos
según la reivindicación 3 caracterizado porque en la etapa
de secado se trabaja a temperaturas inferiores a 40ºC.
11. Procedimiento de obtención de extractos
según la reivindicación 3 caracterizado porque se emplea
liofilización, concentración y/o secado a vacío, secado con aire, o
atomización.
12. Procedimiento de obtención de extractos
según las reivindicaciones 3 a 11, caracterizado porque en
el procedimiento de obtención se efectúan los siguientes pasos:
- maceración del material vegetal con
metanol/HCl (1000:1, v/v)
- purificación del extracto por extracción con
acetato de etilo
- concentración a sequedad del extracto
manteniendo la temperatura por debajo de 40ºC.
13. Procedimiento de obtención de extractos
según las reivindicaciones 3 a 11, caracterizado porque en
el procedimiento de obtención se efectúan los siguientes pasos:
- maceración del material vegetal con
etanol/HCl(pH=3)
- purificación del extracto por cromatografía
en columna
- secado a vacío del extracto manteniendo la
temperatura por debajo de 40ºC.
14. Aditivo, ingrediente o suplemento
alimentario funcional caracterizado por comprender el
extracto de piel de almendra con actividad antioxidante según las
reivindicaciones 1 y 2.
15. Producto alimentario o bebida funcional
caracterizado por comprender el extracto de piel de almendra
con actividad antioxidante según las reivindicaciones 1 y 2.
16. Composición farmacéutica caracterizada por
comprender el extracto de piel de almendra con actividad
antioxidante y/o favorable para prevenir infecciones microbianas,
y/o actividad antiglucémica según las reivindicaciones 1 y 2.
17. Uso de aditivo, ingrediente o suplemento
alimentario funcional según la reivindicación 14 en la elaboración
de un producto alimentario funcional con actividad
antioxidante.
18. Uso de aditivo, ingrediente según la
reivindicación 14 en la elaboración de un producto cosmético con
actividad antioxidante.
19. Composición farmacéutica según la
reivindicación 16 para su uso en la elaboración de un medicamento
para el tratamiento de infeccione urinarias por su capacidad
inhibitoria de la adhesión bacteriana en el tracto urinario.
20. Composición farmacéutica según la
reivindicación 16 para su uso en la elaboración de un medicamento
para el tratamiento de la diabetes por su actividad antiglucémica
como seudoinsulina.
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200701616A ES2311403B1 (es) | 2007-06-12 | 2007-06-12 | Extractos fenolicos de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su procedimiento de obtencion. |
| US12/664,350 US8802165B2 (en) | 2007-06-12 | 2008-05-28 | Phenolic extracts of almond peel containing procyanidins, propelargonidins, and prodelphinidins, and method for preparation thereof |
| PCT/ES2008/070104 WO2008152173A1 (es) | 2007-06-12 | 2008-05-28 | Extractos fenolicos de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su procedimiento de obtención. |
| ARP080102233A AR066740A1 (es) | 2007-06-12 | 2008-05-28 | Extractos fenolicos de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas y su procedimiento de obtencion |
| EP08775443A EP2165712A4 (en) | 2007-06-12 | 2008-05-28 | PROCYANIDINE, PROPELARGONIDINE AND PRODELPHINIDINE CONTAINING MENDELHAUT PHENOLEXTRACTS |
| CL2008001685A CL2008001685A1 (es) | 2007-06-12 | 2008-06-09 | Extracto de piel de almendra antioxidante con un contenido fenolico mayor 5% que contiene procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas; procedimiento de preparacion del extracto: preparacion del material vegetal que contenga la piel, extraccion de la piel con disolvente organicos, secado; usos. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200701616A ES2311403B1 (es) | 2007-06-12 | 2007-06-12 | Extractos fenolicos de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su procedimiento de obtencion. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2311403A1 ES2311403A1 (es) | 2009-02-01 |
| ES2311403B1 true ES2311403B1 (es) | 2010-01-12 |
Family
ID=40129280
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES200701616A Expired - Fee Related ES2311403B1 (es) | 2007-06-12 | 2007-06-12 | Extractos fenolicos de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su procedimiento de obtencion. |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8802165B2 (es) |
| EP (1) | EP2165712A4 (es) |
| AR (1) | AR066740A1 (es) |
| CL (1) | CL2008001685A1 (es) |
| ES (1) | ES2311403B1 (es) |
| WO (1) | WO2008152173A1 (es) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8507018B2 (en) * | 1998-03-12 | 2013-08-13 | Mars, Incorporated | Products containing polyphenol(s) and L-arginine and methods of use thereof |
| EP2829277A1 (en) | 2013-07-26 | 2015-01-28 | Natac Biotech, S.L. | Use of a-type proanthocyanidins in treating a mineralocorticoid receptor related disease |
| ES2570433B1 (es) * | 2014-10-17 | 2016-11-21 | Universitat Rovira I Virgili | Utilización de proantocianidinas para la supresión del apetito o inducción de la saciedad |
| GB201506526D0 (en) * | 2015-04-17 | 2015-06-03 | Uropharma Ltd And Synesis Llc | Medicinal composition |
| US20170156360A1 (en) * | 2015-12-04 | 2017-06-08 | Whitewave Services, Inc. | Almond-Based Food Products with Improved Taste Characteristics |
| CN107602521B (zh) * | 2017-11-01 | 2020-06-19 | 天津农学院 | 一种火龙果皮提取原花青素的方法及制得的原花青素与用途 |
| CN111665306A (zh) * | 2020-06-19 | 2020-09-15 | 新疆农业大学 | 一种野山杏果肉黄酮类化合物的测定方法 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PT1014969E (pt) * | 1997-09-09 | 2009-02-17 | Univ Rutgers | Extracto de proantocianidinas de origem vegetal eficaz para inibição da aderência a superfícies de bactérias com fímbrias de tipo p |
| JP2000032953A (ja) * | 1998-07-15 | 2000-02-02 | Ezaki Glico Co Ltd | アーモンド種皮またはその抽出物を配合した飲食物 |
| US6210681B1 (en) * | 1999-09-07 | 2001-04-03 | Jlb, Inc. | Plant proanthocyanidin extracts |
| JP2003524648A (ja) * | 2000-01-28 | 2003-08-19 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング | ベンゾフラノン誘導体を含む酸化ストレスに対する保護用の配合物 |
| ES2171142B1 (es) | 2000-12-22 | 2003-12-16 | Consejo Superior Investigacion | Conjugados de flavanoles y cisteamina. |
| KR100531472B1 (ko) * | 2002-08-09 | 2005-11-28 | 주식회사 이롬 | 항산화 활성을 가지는 찔레나무 추출물을 포함하는 화장품 조성물 및 상기 추출물의 제조방법 |
| DE50308279D1 (de) | 2003-06-24 | 2007-11-08 | Cognis Ip Man Gmbh | Extrakte von Litchi sinensis enthaltend oligomere Proanthocyanidine |
| AU2005209317B2 (en) | 2004-01-28 | 2011-07-07 | Mars, Incorporated | Compositions and methods of use of A-type procyanidins |
-
2007
- 2007-06-12 ES ES200701616A patent/ES2311403B1/es not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-05-28 AR ARP080102233A patent/AR066740A1/es unknown
- 2008-05-28 US US12/664,350 patent/US8802165B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-05-28 EP EP08775443A patent/EP2165712A4/en not_active Withdrawn
- 2008-05-28 WO PCT/ES2008/070104 patent/WO2008152173A1/es active Application Filing
- 2008-06-09 CL CL2008001685A patent/CL2008001685A1/es unknown
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| CIFUENTES et al. Fast determination of procyanidins and other phenolic compounds in food samples by micellar electrokinetic chromatography using acidic buffers. Electrophoresis. Mayo, 2001. Vol. 22, n$^{o}$ 8, páginas 1561-1567. ISSN 0173-0835. * |
| GU, L. et al. Screening of Foods Containing Proanthocyanidins and Their Structural Characterization Using LC-MS/MS and Thiolytic Degradation. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2003. Vol. 51, n$^{o}$ 25, páginas 7513-7521. ISSN 0021-8561. * |
| HARNLY, J.M. et al. Flavonoid Content of U.S. Fruits, Vegetables, and Nuts. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2006. Vol. 54, n$^{o}$ 26, páginas 9966-9977. ISSN 0021-8561. * |
| LAZARUS, S.A. et al. High-Performance Liquid Chromatography/Mass Spectrometry Analysis of Proanthocyanidins in Foods and Beverages. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1999. Vol. 47, n$^{o}$9, páginas 3693-3701. ISSN 0021-8561. * |
| MILBURY, P.E. et al. Determination of flavonoids and phenolics and their distribution in almonds. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 12.07.2006. Vol. 54, n$^{o}$14, páginas 5027-5033. ISSN 0021-8561. * |
| PRIOR, R.L.; GU, L. Occurrence and biological significance of proanthocyanidins in the American diet. Phytochemistry. 01.09.2005. Vol. 66, n$^{o}$ 18, páginas 2264-2280. ISSN 0031-9422. * |
| SANG, S. et al. Antioxidative phenolic compounds isolated from almond skins (Prunus amygdalus Batsch). Journal of Agricultural and Food Chemistry. 10.04.2002. Vol. 50, n$^{o}$8, páginas 2459-2463. ISSN 0021-8561. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20100184850A1 (en) | 2010-07-22 |
| EP2165712A1 (en) | 2010-03-24 |
| ES2311403A1 (es) | 2009-02-01 |
| US8802165B2 (en) | 2014-08-12 |
| WO2008152173A1 (es) | 2008-12-18 |
| AR066740A1 (es) | 2009-09-09 |
| EP2165712A4 (en) | 2011-09-28 |
| CL2008001685A1 (es) | 2009-01-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2311403B1 (es) | Extractos fenolicos de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su procedimiento de obtencion. | |
| Wu et al. | Investigation of in vitro and in vivo antioxidant activities of flavonoids rich extract from the berries of Rhodomyrtus tomentosa (Ait.) Hassk | |
| Tsai et al. | In vitro antimicrobial activities against cariogenic streptococci and their antioxidant capacities: A comparative study of green tea versus different herbs | |
| Fecka | Qualitative and quantitative determination of hydrolysable tannins and other polyphenols in herbal products from meadowsweet and dog rose | |
| EP1852430B1 (en) | Method of producing proanthocyanidin oligomer | |
| Chen et al. | Identification and evaluation of antioxidants defatted Camellia oleifera seeds by isopropanol salting-out pretreatment | |
| Tavares et al. | Antioxidant and antiproliferative properties of strawberry tree tissues | |
| US20070292540A1 (en) | Extracts and Methods Comprising Cinnamon Species | |
| Xu et al. | An in vitro study on the dental caries preventing effect of oligomeric procyanidins in sorghum episperm | |
| Pascoal et al. | Free Radical Scavenging Activity, Determination of Phenolic Compounds and HPLC-DAD/ESIMS Profile of Campomanesia Adamantium Leaves | |
| Puttipan et al. | Caesalpinia sappan: A promising natural source of antimicrobial agent for inhibition of cariogenic bacteria | |
| Dzolin et al. | Flavonoid distribution in four varieties of Ficus deltoidea (Jack) | |
| Alberti et al. | Evaluation of radical scavenging activity of Sempervivum tectorum and Corylus avellana extracts with different phenolic composition | |
| KR20110072153A (ko) | 백장미 꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물 | |
| Purushothaman et al. | Quantification of total phenolic content, HPLC analysis of flavonoids and assessment of antioxidant and anti-haemolytic activities of Hibiscus rosa-sinensis L. flowers in vitro | |
| Sharma et al. | Role of plant extract in the inhibition of dental caries | |
| Din et al. | Antioxidant and cytoprotective effects of an ethanol extract of Acalypha wilkesiana var. macafeana from Malaysia | |
| WO2014096488A1 (es) | Extractos fenólicos de uncaria tomentosa l. (uña de gato) que contienen procianidinas, propelargonidinas y flavanolignanos, procedimiento de obtención y sus aplicaciones | |
| Azari et al. | Antioxidants activity of extracts from Sambucus nigra, efficiency of different extraction methods | |
| KR100514916B1 (ko) | 항산화활성을 갖는 연수 추출물 및 그로부터 분리된플라보노이드 화합물을 함유한 조성물 | |
| Owoade et al. | Identification of phenolic compounds in Hibiscus sabdariffa polyphenolic rich extract (HPE) by chromatography techniques | |
| Sa et al. | Free radical scavenging and in vitro cytotoxicity activity of agnuside from Vitex agnus castus (Verbenacae) | |
| Duenas et al. | Phenolic composition and antioxidant activity of mocan seeds (Visnea mocanera Lf). | |
| KR101208566B1 (ko) | 산겨릅나무 추출물을 포함하는 조성물 | |
| Babatunde et al. | Bioguided isolation of an antioxidant compound from Combretum racemosum P. Beav leaf |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EC2A | Search report published |
Date of ref document: 20090201 Kind code of ref document: A1 |
|
| PC2A | Transfer of patent |
Owner name: BIOSEARCH S.A. Effective date: 20130919 |
|
| FD2A | Announcement of lapse in spain |
Effective date: 20181010 |