JP2004043503A - 化粧料 - Google Patents

Abstract

【課題】　シミ、ソバカス、ほくろなどの色素の沈着した細胞を除去することのできる化粧料を提供することである。
【解決手段】　パパインおよびケフィア発酵用乳酸菌などの乳酸菌の培養上清を配合し、これに水、グリセリンおよびコロジオンからなる群から選ばれる１種または２種以上をさらに配合した化粧料。
【選択図】　　　　なし

Description

　本発明は、化粧料に関する。さらに詳しくはシミ、ソバカス、ほくろなどを除去することのできる化粧料に関するものである。

　従来、シミ、ソバカスなどの色素沈着症の治療法としてはアスコルビン酸の内服が知られ、化粧料としても安定化剤を配合して使用することが知られている（特許文献１，２）。また、ハイドロキノンがシミ、ソバカスなどの治療に有効であることが知られているが、ハイドロキノンも熱、空気接触等に対し不安定であるため、皮膚中でハイドロキノンに変化するアルブチンを配合した皮膚外用剤（特許文献３）やハイドロキノン誘導体にコウジ酸を配合した漂白化粧料（特許文献４）が公知になっている。その他、動物臓器から抽出した化粧料（特許文献５）、発酵乳ケフィアのスターターであるケフィア粒から分離したサッカロマイセス属酵母の培養液を配合した化粧料（特許文献６）などが提案されている。

　また、乳酸菌を利用した化粧料として、紫外線照射時に発生する皮膚紅斑の予防治療用としてラクトバチルス属の菌体またはその細胞壁成分を含有する化粧料（特許文献７）、紫外線照射時の皮膚の着色抑制のためにオウゴンエキス等の生薬エキスと乳酸菌発酵液を含有する皮膚外用剤（特許文献８）が知られ、また、メラニン生成を抑制するため、ケフィア粒から分離したラクトバチルス属乳酸菌の菌体抽出物を配合する化粧料（特許文献９）等が提案されている。
特公昭５４−９７４号公報 特公昭５５−４３４４３号公報 特開昭６０−１６９０６号公報 特公昭３２−８１００号公報 特開昭６３−８３１２号公報 特開平７−１０７３４号公報 特開平５−１７３６３号公報 特開平５−２３８９２５号公報 特開平５−１６３１３４号公報

　しかしながら、従来の化粧料は十分なシミ、ソバカス、ほくろの除去効果を有しないものやシミ、ソバカスの形成を抑制するものが多く、十分な除去効果を有する化粧料の開発が待たれていた。

　そこで本発明は、シミ、ソバカス、ほくろなどの除去効果に優れた化粧料を提供することを目的とする。

　本発明に係る化粧料は、植物由来のプロテアーゼであるパパインおよび乳酸菌の培養上清を配合したことを特徴とする。
　また、本発明に係る化粧料は、前記乳酸菌がケフィア発酵用乳酸菌であることを特徴とする。
　また、本発明に係る化粧料は、水、グリセリンおよびコロジオンからなる群から選ばれる１種または２種以上をさらに配合したことを特徴とする。

　以上説明したように、本発明に係る化粧料は、シミ、ソバカスなどを効果的に除去することのできる。また、グリセリンをさらに配合することにより保湿効果に優れ、また、コロジオンを配合することにより定着効果に優れた化粧料とすることができる。

　以下、本発明の化粧料をより詳細に説述する。

　本発明において、プロテアーゼとしては、パパイン、ブロメライン、フィシンなどの植物由来のもの、ペプシン、トリプシン、キモトリプシン、レンニンなどの動物由来のもの、担子菌や微生物などの菌類由来のプロテアーゼを挙げることができる。担子菌としては、例えば、アガリクス・ブラゼイ・ムリル（Agaricus blazei Murill）、マイタケ（Grifola frondosa）、ホンシメジ（Tricholoma conglobatum）、シイタケ（Lentinus edodes）、カバノアナタケ（Fuscoporia obliqua）、メシマコブ（Phellinus linteus）、ハナビラタケ（Sparassis crispa）、ヤマブシタケ（Aericium erinaceum）を挙げることができる。これらの担子菌の子実体および菌糸体に含まれるプロテアーゼが使用できる。菌糸体は栽培した子実体を収穫した後の廃床中にも存在し、これも利用できる。微生物としては納豆菌（Bacillus natto）、枯草菌（Bacillus subtilis）が挙げられる。

　これらのプロテアーゼのなかでも、パパイン、ブロメライン、アガリクス・ブラゼイ・ムリル由来、マイタケ由来のプロテアーゼおよび納豆菌由来のプロテアーゼが好ましく使用できる。パパイン、ブロメラインは食品分野で広く用いられており、アガリクス・ブラゼイ・ムリルは健康食品に、さらに、マイタケも生を食用に、乾燥物を健康食品に使用されており、納豆菌は日本古来の食品である納豆の製造に利用されているように、これらは安全性にすぐれており、好ましい。この中で、パパインはパパイヤの果実の乳汁に含まれる蛋白分解酵素であり、ブロメラインはパイナップルの果実の表皮や果肉に含まれる蛋白分解酵素であり、これらは市販されている。本発明にはこれら市販のものを使用することができる。プロテアーゼは２種以上を併用してもよい。

　アガリクス・ブラゼイ・ムリルは、ブラジル　サンパウロ市の郊外ピエロダーテを原産地とするハラタケ属茸の一種であり、同属茸であるマッシュルーム（Agaricus bisuporous）に似た白色の釣鐘状の子実体を有する。近年、アガリクス・ブラゼイ・ムリル由来の多糖体がマウス等の細胞組織内でマクロファージやインターフェロンを活性化する能力を有し、ウイルスの細胞への侵入を防ぐ力も大きいことが知られ、ガンの免疫療法への応用が提案され、また、子実体由来の蛋白多糖体、または核酸成分を抗腫瘍剤として利用することが提案されたこともあって、広く栽培されるようになってきている。

　マイタケは、ミズナラ、ブナ、シイなど主にブナ科の大木の根元に、扇形、へら状のかさが多数重なりあって巨大株となって発生し、極めて香りがよく、美味で、一級の食用茸とされている。近年、乾燥品が健康食品として加工され、各地で栽培されるようになってきている。

　本発明において、アガリクス・ブラゼイ・ムリル由来およびマイタケ由来のプロテアーゼは、一般に栽培されたものでも、もちろん野生のものから抽出されたものでもよい。茸のプロテアーゼは、一般に至適ｐＨ４付近で活性を示すものとｐＨ７付近で活性を示すもの２種類のアイソザイムが知られており、それらのｐＨのバッファーで抽出するのがよい。例えば、ｐＨ４付近ではクエン酸−クエン酸ナトリウムバッファー、ｐＨ７付近ではリン酸１ナトリウム−リン酸２ナトリウムバッファーを、子実体および／または菌糸体重量の、例えば、１〜２倍量、抽出溶媒として用い、子実体および／または菌糸体を共にミルなどに入れて破砕して抽出するとよい。破砕後、固形分を分離して抽出液を凍結乾燥した後、精製し、プロテアーゼとして用いる。未精製のものもプロテアーゼとして使用できる。しかし、プロテアーゼの抽出法はこれに限定されず、一般の酵素の抽出法により行うことができる。

　本発明者らは、上記例示の抽出法により得られたプロテアーゼの活性を担子菌に含まれるプロテアーゼ測定法（小崎道雄監修、酵素利用ハンドブック、地人書館、第２０７頁（1980））により測定した。具体的には、子実体２００gと抽出溶媒（共に、０．１Ｍ）２００mlとをミルに入れて５分間、２回破砕して抽出後、濾過して得られたろ液のプロテアーゼ活性を測定した。測定結果によると、アガリクス・ブラゼイ・ムリルの子実体からのpH4.0抽出プロテアーゼの活性は 46.9単位/ml、pH7.0抽出プロテアーゼの活性は 82.4単位/mlであった。同様にして抽出されたマイタケの子実体由来のプロテアーゼの活性は、pH7.0抽出505.1単位/mlであり、同時に測定したパパイン（和光純薬株式会社製、188-00171）は117.6単位/mlであった。

　なお、この測定法は、３０℃に保温した基質（０．５％カゼイン）５mlに、プロテアーゼ液１ml(パパイン粉末は1mg/ml)を加え、１０分間反応させ、１分間に１μgのチロシン相当量をＴＣＡ可溶性とする酵素力価をもって１単位とするものであり、具体的には、酵素反応による吸光度の増加値に１４９をかけて算出する。

　納豆菌由来のプロテアーゼは、ナットウキナーゼと呼ばれることがあり、これは強い血栓溶解作用を有し、心筋梗塞や脳梗塞等の血栓症の治療や予防に応用できるといわれている。本発明者らの実験によると、腕のシミ（死細胞）に塗布したところ、数日でシミが小さくなり、色も薄くなるなど高い溶解効果を示した。本発明の化粧料の成分として、強力かつ安全なものの一つである。

　本発明の化粧料においては、上記のようなプロテアーゼにより色素が沈着した古い皮膚細胞および死細胞が分解され、シミ、ソバカス、ほくろなどが除去されるものであり、プロテアーゼの酵素作用を利用するものである。

　乳酸菌は、菌形態により球菌と桿菌に分けられるが、球菌にはストレプトコッカス(Streptococcus)、ロイコノストック(Leuconostoc)、ペジオコッカス（Pediococcus）が含まれ、桿菌にはラクトバチルス（Lactobacillus）、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）が含まれる。本発明には上記の属のいずれの乳酸菌も含まれ、遺伝子組み換え法によって得られる組み換え体乳酸菌、人工的に変異を誘発して得られる乳酸菌変異体などの非天然型の乳酸菌も包含されるものとする。好ましい乳酸菌はヒトや他の動物に対して病原性を持たないものであり、発酵乳製品、発酵肉製品、醸造製品、発酵豆乳、漬物などの食品類の製造に使用される市販の乳酸菌である。そのような乳酸菌は、例えば、Chr. Hansen's 社から市販され入手可能である。

　本発明で使用できる乳酸菌の例として、例えば、ストレプトコッカス属の例としては、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Streptococcus thermophilus)、ストレプトコッカス・ラクチス（Streptococcus lactis)、ストレプトコッカス・ラクチス亜種ジアセチラクチス（Streptococcus lactis subap. diacetilactis)などが挙げられる。ロイコノストック属の例としては、ロイコノストック・クレモリス（Leuconostoc cremoris) 、ロイコノストック・オエノス（Leuconostoc oenos)などが挙げられる。ペジオコッカス属の例としては、ペジオコッカス・セレビシアエ（Pediococcus cerevisiae) 、ペジオコッカス・アシジラクチシ（Pediococcus acidilactici) 、ペジオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus penntosaceus) 、ペジオコッカス・ハロフィラス（Pediococcus halophilus)、ペジオコッカス・ウリナエ−エクイ（Pediococcus urinae-equi）などが挙げられる。

　また、ラクトバチルス属の例としては、ラクトバチルス・デルブルエキ（Lactobacillus delbruecki） 、ラクトバチルス・ロイクマニイ（Lactobacillus leichmannii）、ラクトバチルス・ラクチス（Lactobacillus lactis） 、ラクトバチルス・ブルガリカス（Lactobacillus bulgaricus） 、ラクトバチルス・ヘルベチカス（Lactobacillus helveticus） 、ラクトバチルス・ファーメンタム（Lactobacillus fermentum）、ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis） 、ラクトバチルス・ビリデッセンス（Lactobacillus viridescens）などが挙げられる。ビフィドバクテリウム属の例としては、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum） 、ビフィドバクテリウム・ビフィデュム（Bifidobacterium bifidum）、ビフィドバクテリウム・ブレビ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis） などが挙げられる。

　これらの乳酸菌のうち、好適な例として、発酵乳ケフィアの製造に用いられる乳酸菌を挙げることができる。ケフィアは長寿国として知られるコーカサス地方の人々の健康を支えてきたといわれている発酵乳であり、そのスターターはケフィア粒と称されており、これには、前記、ストレプトコッカス・ラクテイスおよびラクトバチルス・ブルガリカスの乳酸菌が含まれている。

　本発明における乳酸菌の培養上清は、前記例示のような乳酸菌培養液の上澄み液であり、乳酸菌を培養し、得られた培養液から菌体を除去することによって得ることができる。

　乳酸菌の培養には、特に制限はなく、乳酸菌が十分に増殖できる条件であればいずれの培養方法によることもできるが、乳酸菌の種類に応じて、培地、温度、ｐＨ、培養時間等の条件が変化しうる。培養条件および培養方法については、例えば、Bergey's Manual of Determinative Bacteriology （第８版、１９７４年）やメーカーにより提供される市販乳酸菌の使用説明書に記載されるものが使用できる。

　培地成分としては、例えば、乳清（ホエイ）、グルコース、ラクトース（乳糖）、ペプトンなどの炭素源、窒素源の１つまたはそれ以上を任意に組み合わせて用いることができる。ホエイに代えて牛乳、山羊乳、人乳などの動物乳も用いることができる。培養温度は、菌の種類によって異なるが、通常知られている温度（約２０〜４５℃）である。耐熱性の乳酸菌の場合には、それより高い温度で培養できる。また、培養時間は数時間〜７２時間、好ましくは約１５〜約５０時間である。乳酸菌の接種量は培地１リットルあたり、１０〜１００ｍｌの範囲である。

　以下に培養条件の一例を示すが、これに限定されるものではない。
　ストレプトコッカス属、ロイコノストック属およびラクトバチルス属の乳酸菌の場合、ＭＲＳ培地（Difco 社製) で３０〜３７℃、ｐＨ６．８、２４〜４８時間で培養することができる。ペジオコッカス属乳酸菌の場合、ＭＲＳ培地に１〜３％塩化ナトリウムを添加したもので、３５〜４０℃、ｐＨ６．８、２４〜４８時間で培養することができる。

　ビフィドバクテリウム属乳酸菌の場合、ＢＬ培地（和光純薬株式会社製）もしくはＥＧ培地（メルク社製）で３０〜３７℃、ｐＨ７〜８、２４〜４８時間、嫌気的条件下で培養することができる。

　本発明の具体例によれば、乳清と乳糖（例えば、各々１０％、５％）を含む培地に乳酸菌を接種し、３５〜３７℃で約２４時間、静置または振盪培養を行い、培養後に菌体を培養液から遠心分離、濾過等の分離手段を用いて菌体を取り除き、培養上清を回収することができる。

　乳酸菌の培養上清は、プロテアーゼの酵素作用、すなわち細胞分解作用を調整して生細胞を安定化する、いわばバッファー効果を奏する。また、乳酸菌の培養上清中には培地および発酵生産物としてビタミン類、ミネラル等の各種栄養分が含まれており、これらを皮膚に補給し、保湿効果を与え、生細胞を賦活し、さらには皮膚細胞の新生を促す効果も奏する。

　本発明の化粧料においては、化粧料全量中に、プロテアーゼ０．１〜５重量％、乳酸菌の培養上清１〜５０重量％が配合されることが好ましい。プロテアーゼの配合量が０．１重量％未満では酵素作用が不十分であり、一方５重量％を超えると酵素作用が強すぎ生細胞を損傷する。また、乳酸菌の培養上清が１重量％未満ではバッファー効果が十分でなく、一方、上限は特にないが、５０重量％を超えるとその効果が飽和するのでこの量で十分である。さらに好ましくは、プロテアーゼの配合量は、パパインの場合、０．２〜２重量％、ブロメラインの場合、０．１〜１重量％、アガリクス・ブラゼイ・ムリル由来、マイタケ由来および納豆菌由来のプロテアーゼの場合０．１〜４重量％であり、乳酸菌の培養上清は５〜２５重量％である。

　本発明の化粧料を製剤化する場合、プロテアーゼおよび乳酸菌の培養上清を皮膚に塗布する場合の濃度調整のため、それらを水または水−アルコール混液に溶解して１００重量％とし、液状の形態の化粧料とすることができる。または、水に代えてワセリン等の化粧品用基剤を用い、クリーム状等の形態にすることもできる。

　化粧品用基剤としては、前記ワセリンの他、例えば、流動パラフィン、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、セトステアリルアルコール、吸着精製ラノリン、メチルパラベンなど、通常化粧品基剤として知られたものを挙げることができる。

　さらに、皮膚に塗布する場合の媒体として、グリセリンを配合することにより保湿効果を、またコロジオンを後から添加することによりコロジオンが皮膜を形成し、皮膚表面に本発明の化粧料を定着させ効果を上げることができる。さらには、美白剤として通常知られているアスコルビン酸を添加してもよい。これらは通常化粧料に配合される量配合すればよく、一般にグリセリンは１〜２０重量％、コロジオンは局所に皮膜形成を目的とするときに１〜２滴（約０．２ｍｌ／１００ｍｌ）である。

　上記、水、グリセリン、コロジオンおよびアスコルビン酸はいずれか１または２以上をプロテアーゼおよび乳酸菌の培養上清と混合して化粧料とすることができる。

　また、本発明の化粧料が液体や乳液の場合にはメチルパラベンやエチルパラベン等を保存料として配合し、クリームの場合にはエチルパラベンやプロピルパラベン等を保存料として配合することができる。保存料としてはその他にも安息香酸、ソルビン酸、プロピレングリコールなどを用いることができる。配合量としては、パラベン類は０．１〜３重量％、安息香酸やソルビン酸は通常０．５重量％以下、そしてプロピレングリコールは３〜４０重量％である。

　本発明の化粧料は、上記のとおり、溶液またはクリーム等の形態とすることができ、老人性シミなどのシミ、ソバカス、ほくろなどの色素沈着した皮膚に適量を１日に数回塗布すると、経日的に皮膚の色が薄くなり、またはソバカスが徐々に縮小し、数日〜十数日程度で、シミやソバカスを除去することができる。なかでも、老人性シミは死細胞であるため生細胞に比べ酵素による分解を受け易く、より効果的に除去される。

　以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。なお、実施例中、％は重量％である。

　[参考例１]（乳酸菌培養上清の製造）
　５リットル容量の三角フラスコに４リットルの蒸留水を入れ、これに１０％のホエイパウダー（明治乳業株式会社製）および５％の乳糖を添加したものに、０．１％のケフィア発酵用乳酸菌（Chr. Hansen's 社製）を接種し、３７℃で２４時間、静置培養した。得られた培養液のｐＨは４．０であった。この培養液を遠心分離して上清層を採取し、下記実施例の化粧料用に培養上清として用いた。

　参考例１で得られた培養上清５０ｇに、グリセリン（一級試薬）３５ｇを加え、攪拌後、０．５ｇのパパイン（164-00172 、和光純薬株式会社製）を溶解し、１５ｇの蒸留水を加え、攪拌して得た液状化粧料を、Ａ〜Ｃの手の甲のソバカス部分（表中、検体）（注：Ａ、Ｂは成人男性、Ｃは成人女性）に１日３〜４回塗布したときの結果を表１に示す。結果はソバカスの大きさをノギスで測定し（単位：ｍｍ）、その変化で示す。
　表１から、ソバカスが次第に小さくなり、７〜１０日後には消失したことがわかる。

　パパインに代えてブロメライン（和光純薬株式会社製）０．５ｇを溶解するほかは実施例１と同様にして得た液状化粧料を、Ｄ〜Ｆの手の甲のソバカス部分（注：Ｄ、Ｅは成人男性、Ｆは女性）に１日３〜４回塗布したときの結果を表２に示す。

　パパイン０．５ｇに代えて、パパイン０．２５ｇおよびブロメライン０．２５ｇを溶解するほかは実施例１と同様にして得た液状化粧料を、Ｇ〜Ｉの手の甲のソバカス部分（注：Ｇ、Ｈは成人男性、Ｉは女性）に１日３〜４回塗布したときの結果を表３に示す。

　参考例１で得られた培養上清３０ｇに、グリセリン２０ｇを加え、攪拌後、１．０ｇのパパインを溶解させ、５０ｇのハンドクリーム（カネボウ社製、ＳＩＬＫハンドクリーム）を加え良くかき混ぜて得られたクリーム状化粧料を、Ｊ〜Ｌの手の甲のソバカス部分（Ｊ、Ｋは成人男性、Ｌは女性）に１日３〜４回塗布したときの結果を表４に示す。

　パパイン１．０ｇに代えてブロメライン（和光純薬株式会社製）１．０ｇを溶解するほかは実施例４と同様にして得たクリーム状化粧料を、Ｍ〜Ｏの手の甲のソバカス部分（注：Ｍ、Ｎは成人男性、Ｏは女性）に１日３〜４回塗布したときの結果を表５に示す。

　パパイン１．０ｇに代えて、パパイン０．５ｇおよびブロメライン０．５ｇを溶解するほかは実施例４と同様にして得たクリーム状化粧料を、Ｐ〜Ｒの手の甲のソバカス部分（注：Ｐ、Ｑは成人男性、Ｒは女性）に１日３〜４回塗布したときの結果を表６に示す。

　実施例１で用いた液状化粧料（パパイン０．５ｇ含有）を、１〜３の手の甲のシミ部分（１、２は６０才台男性、３は５０才台女性）に１日１回塗布したときの結果を色度の変化（目視により観察）により、表７に示す。

　注：表中、+++ は色の濃さが変わらない、++は少し色が薄くなる、+ は多少色がある、−は肌の色と変わらないことを示す。

　実施例２で用いた液状化粧料（ブロメライン０．５ｇ含有）を、４〜６の手の甲のシミ部分（４、５は６０才台男性、６は５０才台女性）に１日１回塗布したときの結果を色度の変化により、表８に示す。

　実施例３で用いた液状化粧料（パパイン０．２５ｇおよびブロメライン０．２５ｇ含有）を７〜９の手の甲のシミ部分（７、８は６０才台男性、９は５０才台女性）に１日１回塗布したときの結果を色度の変化により、表９に示す。

　実施例４で用いたクリーム状化粧料（パパイン１．０ｇ含有）を、１０〜１２の手の甲のシミ部分（１０、１１は６０才台男性、１２は５０才台女性）に１日１回塗布したときの結果を色度の変化により、表１０に示す。

　実施例５で用いたクリーム状化粧料（ブロメライン１．０ｇ含有）を、１３〜１５の手の甲のシミ部分（１３、１４は６０才台男性、１５は５０才台女性）に１日１回塗布したときの結果を色度の変化により、表１１に示す。

　実施例６で用いたクリーム状化粧料（パパイン０．５ｇおよびブロメライン０．５ｇ含有）を、１６〜１８の手の甲のシミ部分（１６、１７は６０才台男性、１８は５０才台女性）に１日１回塗布したときの結果を色度の変化により、表１２に示す。

　参考例１で得られた培養上清１０ｇ、グリセリン１０ｇ、パパイン１．０ｇ、ワセリン７９ｇをよく混ぜ合わせてクリーム状化粧料を調製して、手の甲のソバカス部分（Ｓ〜Ｕ）に塗布してその変化を測定した。結果を表１３に示す。比較のため、培養上清およびパパインを含まない化粧料についても同様に試験した（Ｖ）。

　表１３に見るとおり、ブランクテスト（Ｖ）では、ソバカスに何の変化も見られないのに対し、本発明の化粧料では経日的に縮小しており、本発明の化粧料の効果がわかる。

　下記の処方により液状化粧料を調製した（重量比）。
　　参考例１でえられた培養上清　　　　　　 10.0
　　パパイン　　　　　　　　　　　　　　　 1.0
　　スクアラン　　　　　　　　　　　　　　　5.0
　　ステアリン酸　　　　　　　　　　　　　　2.5
　　セタノール　　　　　　　　　　　　　　　2.5
　　自己乳化型モノステアリン酸グリセリン　　1.5
　　ポリオキシエチレンセチルエーテル　　　　1.5
　　パラベン　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　濃グリセリン　　　　　　　　　　　　　　3.5
　　プロピレングリコール　　　　　　　　　　3.5
　　精製水にて全量を100 とする。
　　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量

　[参考例２]（アガリクス・ブラゼイ・ムリル子実体由来のプロテアーゼの製造）
　栽培後の生のアガリクス・ブラゼイ・ムリルの子実体を水で洗浄し、２種類のバッファー、すなわち、pH4.0（酸性プロテアーゼ抽出用、0.1Mクエン酸−クエン酸ナトリウムバッファー）、pH7.0（金属プロテアーゼ抽出用、0.1Mリン酸−リン酸ナトリウムバッファー）を用いて、プロテアーゼを抽出した。具体的には、各バッファー 200mlと子実体200gをミル（日本精機製、2.5リットル、180mmφ）に入れて、５分間、２回破砕した。その後、破砕液をナイロンメッシュ（NYLON No.300,アース株式会社製）で濾過し、固形物を除去した。上清液を回収してこれらを凍結乾燥して粉末とし、アガリクス・ブラゼイ・ムリル子実体由来のプロテアーゼとした。このプロテアーゼは冷暗所（５℃以下）で安定であった。

　実施例１４の処方において、パパイン1.0に代えて、参考例２で製造したアガリクス・ブラゼイ・ムリル子実体由来のプロテアーゼのうち、pH7.0のバッファーによる抽出液の乾燥粉末1.0を配合するほかは実施例１４と全く同様にして液状化粧料を調製した。この液状化粧料を１９〜２２の手の甲のシミ部分（１９，２０は６０才台男性、２１，２２は５０才台女性）に１日２〜３回塗布したときの結果を色度の変化（目視による観察）により表１４に示す。

　参考例２と同様にしてマイタケ子実体からpH7.0のバッファーによる抽出液乾燥粉末（マイタケ由来のプロテアーゼ）を、実施例１４の配合のパパインに替えて配合して、同様に液状化粧料を調製した。この液状化粧料を２３〜２６の手の甲のシミ部分（２３、２４は６０才台男性、２５、２６は５０才台女性）に１日２〜３回塗布した後のシミの大きさ（縦長と横長の平均値（ｍｍ））の変化をノギスにより測定した。測定の結果を表１５に示す。

Claims (3)

1. パパインおよび乳酸菌の培養上清を配合したことを特徴とする化粧料。
2. 前記乳酸菌がケフィア発酵用乳酸菌である請求項１記載の化粧料。
3. 水、グリセリンおよびコロジオンからなる群から選ばれる１種または２種以上をさらに配合した請求項１記載の化粧料。