JP2003529570A

JP2003529570A - オリゴ糖含有の製薬学的組成物およびそれらの調製

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Publication number: JP2003529570A
Application number: JP2001570671A
Authority: JP
Inventors: ムーリエ，ピエール; ペラン，エリザベス; ビスコフ，クリステイアン
Original assignee: Aventis Pharma SA
Current assignee: Aventis Pharma SA
Priority date: 2000-03-28
Filing date: 2001-03-26
Publication date: 2003-10-07
Also published as: HK1056564A1; CN1183149C; CN1426419A; PL204419B1; SK13932002A3; WO2001072762A1; EP1272499A1; PL357301A1; AU782713B2; AU4663901A; NZ521558A; BR0109617A; IL151832A0; EP1272499B1; YU72802A; MEP88408A; ZA200207707B; NO20024590D0; AR034251A1; CA2403906A1

Abstract

(57)【要約】本発明は活性主成分として式（Ｉ）のオリゴ糖もしくは前記オリゴ糖の混合物を含有する製薬学的組成物、式（Ｉ）の新規のオリゴ糖、それらの混合物およびそれらの製法に関する。【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】［発明の分野］本発明は活性主成分として、式

【０００２】

【化６】

【０００３】のオリゴ糖を含有する製薬学的組成物もしくはこれらオリゴ糖の混合物、式（Ｉ
）の新規のオリゴ糖、これらの混合物およびそれらの調製法に関する。

【０００４】［発明の背景］式（Ｉ）において、ｎは０〜２５の整数であり、Ｒ₁、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆お
よびＲ₈は同一であるかもしくは異なることができ、水素原子もしくはＳＯ₃Ｍ基
を表わし、Ｒ₂およびＲ₇は同一であるかもしくは異なることができ、水素原子も
しくはＳＯ₃ＭもしくはＣＯＣＨ₃基を表わしそしてＭはナトリウム、カルシウム
、マグネシウムもしくはカリウムである。

【０００５】このように、これらオリゴ糖は偶数の糖類を含んで成る。

【０００６】式（Ｉ）中、Ｒ₄およびＲ₆は好ましくは、水素原子である。

【０００７】式（Ｉ）［式中、ｎは０に等しく並びに、Ｒ₁、Ｒ₆およびＲ₈は水素原子であ
り、Ｒ₇はＳＯ₃ＭもしくはＣＯＣＨ₃基を表わしそしてＭはナトリウムである、
またはＲ₁およびＲ₆が水素原子を表わし、Ｒ₇がＣＯＣＨ₃基を表わし、Ｒ₈がＳ
Ｏ₃Ｍ基を表わしそしてＭがナトリウムである、またはＲ₆が水素原子を表わし、
Ｒ₁、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わしそしてＭがナトリウムである］のオリゴ
糖はすでにＧ．Ｈ．ＬＥＥｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔ．２１２，６５
−７３（１９８１）により記載されたが、これらの生成物の薬理学的特性は記載
されていない。

【０００８】式（Ｉ）［ｎが０に等しく並びに、Ｒ₆およびＲ₇が水素原子を表わし、Ｒ₁お
よびＲ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わしそしてＭがナトリウムである、またはＲ₁、Ｒ₆およ
びＲ₇が水素原子を表わし、Ｒ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わしそしてＭがナトリウムであ
る］のオリゴ糖はＭＷＭｃＬｅａｎｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．，１９８４，１４５，６０７により記載されているが、薬理学的活性の記
述はない。

【０００９】好ましい製薬学的組成物は式（Ｉ）［式中、 −ｎは０〜１０、そしてとりわけ０〜６、そして更に特に１〜６の整数であり、
−Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈は同一であるかもしくは異なり、水素原子
もしくはＳＯ₃Ｍ基を表わし、そしてとりわけＲ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈ がＳＯ₃Ｍ基であり、 −Ｍがナトリウムである］のオリゴ糖を含有するものである。

【００１０】特に好ましい製薬学的組成物は式（Ｉ）［式中、 −ｎが０に等しく、Ｒ₁、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₆が水素原子を
表わしそしてＭがナトリウムである、 −ｎが１に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わし、
Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムである、 −ｎが２に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わし、
Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムである、 −ｎが３に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わし、
Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムである、 −ｎが４に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わし、
Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムである］のオリゴ糖を含有するものである。

【００１１】式中、ｎが０であり並びに、Ｒ₁、Ｒ₆およびＲ₈が水素原子を表わし、Ｒ₇がＳ
Ｏ₃ＭもしくはＣＯＣＨ₃基を表わしそしてＭがナトリウムである、またはＲ₁お
よびＲ₆が水素原子を表わし、Ｒ₇がＣＯＣＨ₃基を表わし、Ｒ₈がＳＯ₃Ｍ基を表
わしそしてＭがナトリウムである、またはＲ₆が水素を表わし、Ｒ₁、Ｒ₇および
Ｒ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わしそしてＭがナトリウムである、またはＲ₆およびＲ₇が水
素原子を表わし、Ｒ₁およびＲ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わしそしてＭがナトリウムであ
る、またはＲ₁、Ｒ₆およびＲ₇が水素原子を表わし、Ｒ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わしそ
してＭがナトリウムである、ものを除く式（Ｉ）のオリゴ糖は新規であり、それ
自体で本発明の一部を形成する。

【００１２】式（Ｉ）のオリゴ糖はホウ水素化アルカリ金属もしくはホウ水素化第四級アン
モニウムの、式

【００１３】

【化７】

【００１４】［式中、ｎは０〜２５の整数であり、Ｒ₁、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆およびＲ₈は同一
であるかもしくは異なることができ、水素原子もしくはＳＯ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₂ およびＲ₇は同一であるかもしくは異なることができ、水素原子もしくはＳＯ₃Ｍ
もしくはＣＯＣＨ₃基を表わしそしてＭはナトリウム、カルシウム、マグネシウ
ムもしくはカリウムである］のオリゴ糖との反応により調製することができる。

【００１５】この反応を反応の全期間中、２５℃の近位の温度で７と１０の間の、そして好
ましくは、９と１０の間のｐＨで水性溶媒中で実施する。ｐＨは０．５モル／ｌ
の水酸化ナトリウム水溶液の添加により維持される。反応は４と５の間のｐＨが
得られるまで、例えば酢酸の添加により、反応溶媒の酸性化により停止される。

【００１６】ホウ水素化アルカリ金属としては、ホウ水素化リチウム、ホウ水素化ナトリウ
ムおよびホウ水素化カリウムを挙げることができる。

【００１７】ホウ水素化第四級アンモニウムとしては、ホウ水素化テトラブチルアンモニウ
ムを挙げることができる。

【００１８】式（II)のオリゴ糖はヘパリンの酵素による解重合またはヘパリンのベンジル
エステルもしくは半合成ヘパリンのベンジルエステルの塩基性解重合により得ら
れたオリゴ糖（III）の混合物のゲルクロマトグラフィー分離により得ることが
できる。

【００１９】このクロマトグラフィーは商品名ＵｌｔｒｏｇｅｌＡＣＡ２０２^R（Ｂｉｏ
ｓｅｐｒａ）として販売されているようなポリアクリルアミド−アガロースタイ
プのゲルの充填されたカラム上で実施される。好ましくは、一列のポリアクリル
アミド−アガロースのゲルカラムが使用される。使用カラム数は容量、ゲルおよ
び分離されるオリゴ糖の関数として適応される。混合物をリン酸バッファーおよ
び塩化ナトリウム含有溶液で溶出する。好ましくは、リン酸バッファー溶液は０
．１モル／ｌの塩化ナトリウムを含有する０．０２モル／ｌのＮａＨ₂ＰＯ₄／Ｎ
ａ₂ＨＰＯ₄（ｐＨ７）含有溶液である。様々な画分の検出はＵＶ分光測定（２５
４ｎｍ）およびイオン分光測定（ＩＢＦ）により実施する。次に、このように得
られた画分を場合によっては、例えば、当業者に既知の方法に従う、そしてとり
わけＫ．Ｇ．ＲｉｃｅａｎｄＲ．Ｊ．Ｌｉｎｈａｒｄｔ，Ｃａｒｂｏｈｙｄ
ｒａｔｅＲｅｓｅａｒｃｈ１９０，２１９−２３３（１９８９）、Ａ．Ｌａ
ｒｎｋｊａｅｒ，Ｓ．Ｈ．ＨａｓｅｎａｎｄＰ．Ｂ．Ｏｓｔｅｒｇａａｒｄ
，ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＲｅｓｅａｒｃｈ，２６６，３７−５２（１９９
５）により、そして国際公開第９０／０１５０１号パンフレット中（実施例２）
中に記載の方法に従う、ＳＡＸ（ｓｔｒｏｎｇａｎｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅ
（強アニオン交換））クロマトグラフィーにより精製することができる。次に画
分を凍結乾燥し、次にＳｅｐｈａｄｅｘＧ１０^Rゲル（Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）のようなゲル充填カラム上で脱塩する。

【００２０】精製をＳＡＸクロマトグラフィーにより実施しない場合は、凍結乾燥物を場合
によっては当業者に知られた、そしてとりわけフランス特許第２５４８６７
２号明細書に記載の方法に従う単純もしくは分別沈殿により精製することができ
る。概括的に、その方法は以下の手順に従い実施される。

【００２１】精製される凍結乾燥画分を２５℃で、約１０倍容量の蒸留水中に溶解する。メ
タノールもしくはエタノールを添加すると、その濃縮をＨＰＬＣクロマトグラフ
ィー（高速液体クロマトグラフィー）によりモニターしながら、所望のオリゴ糖
が沈殿する。メタノールもしくはエタノールの添加は前記オリゴ糖の所望の収率
および純度の関数として決定される。同様に、この操作は凍結乾燥体の最初の溶
液から出発して幾つかの連続段階で実施することができる。このために更なる不
溶化剤（メタノールもしくはエタノール）を分割して添加し、各添加後に得た沈
殿物を単離する。このように調製した沈殿物をＨＰＬＣクロマトグラフィーによ
り分析する。所望の収率および純度に応じて、沈殿物の適当な画分を合わせる。

【００２２】本発明の変法に従い、精製される凍結乾燥画分を０〜３０％酢酸ナトリウム含
有の１０〜２００容量の水中に溶解することができる。酢酸ナトリウムの百分率
は処理されるオリゴ糖の本質の関数（サイズの関数）として前以て調整されるで
あろう。メタノールを添加すると、ＨＰＬＣクロマトグラフィー（高速液体クロ
マトグラフィー）によるその濃縮をモニターしながら、所望のオリゴ糖が沈殿す
る。メタノールの添加は前記オリゴ糖の所望の収率および純度の関数として決定
される。同様に、この操作は凍結乾燥体の最初の溶液から出発して幾つかの連続
的段階で実施することができる。このために、更なる不溶化剤（メタノール）を
分割して添加し、各添加後に得た沈殿物を単離する。このように調製された沈殿
物をＨＰＬＣクロマトグラフィーにより分析する。所望の収率および純度に応じ
て、沈殿物の適当な画分を合わせる。

【００２３】ｎ＝０、１もしくは２である式（II)の中間体に対しては、酵素による解重合
により得られた混合物（III）から出発することが好ましい。

【００２４】この解重合は１０℃と１８℃の間、そして好ましくは１５℃の温度で、８〜１
０日間、そして好ましくは９日間、塩化ナトリウムおよびＢＳＡ（ウシ血清アル
ブミン）の存在下でｐＨ７のリン酸バッファー溶液中のヘパリナーゼＩ（ＥＣ
４．２．２．７）により実施される。解重合は例えば、２分間１００℃で反応溶
媒を加熱することにより停止され、混合物を凍結乾燥により回収する。ヘパリン
２５ｇにつき７ＩＵのヘパリナーゼＩを使用することが好ましい。リン酸バッフ
ァー溶液は概括的に塩化ナトリウム０．１モル／ｌの存在下で、０．０５モル／
ｌのＮａＨ₂ＰＯ₄／Ｎａ₂ＨＰＯ₄（ｐＨ７）を含んで成る。ＢＳＡ濃度は概括的
に２％である。

【００２５】ｎ＝０、１、２、３もしくは４の式（II)の中間体に対しては、ヘパリンのベ
ンジルエステルを解重合することにより得られる混合物（III）から出発するこ
とが好ましい。

【００２６】ヘパリンのベンジルエステルは米国特許第５３８９６１８号、欧州特許第
４０１４４号およびフランス特許第２５４８６７２号明細書に記載の方法
に従って調製することができる。エステル化の度合いは好ましくは、５０％と１
００％の間であろう。好ましくは、それは７０％と９０％の間であろう。

【００２７】解重合は４０℃と８０℃の間の温度で、５〜１２０分間、好ましくは、０．１
と０．２モル／ｌの間のモル量のアルカリ金属水酸化物（例えば、水酸化リチウ
ム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムもしくは水酸化セシウム）または第四級
アンモニウム水酸化物（例えば、水酸化テトラブチルアンモニウム）により水性
溶媒中で実施される。１種の好ましい態様において、その方法は０．１５モル／
ｌの水酸化ナトリウム溶液により６０℃と７０℃の間の温度で、５〜１５分間実
施される。解重合反応は酢酸のような酸の添加による中和により停止される。酢
酸ナトリウム１０重量／容量％の添加後に、オリゴ糖混合物は、好ましくは反応
溶媒１容量当り２容量のメタノールの添加により沈殿し、それを濾取する。

【００２８】本発明の１種の好ましいアスペクトに従うと、水溶液の形態の、化学的解重合
後に得られたオリゴ糖混合物は適当な公称カットオフ閾値をもつ膜（Ｍｉｌｌｉ
ｐｏｒｅにより販売の再生セルロースより製造されたＰｅｌｌｉｃｏｎタイプの
）をとおす限外濾過により濃縮され、膜のタイプは回収される濃縮オリゴ糖の種
類の関数として適応される。ｎ＝０のオリゴ糖（II)に対しては１ｋＤａの公称
カットオフ閾値をもつ膜が使用され、ｎ＝１のオリゴ糖（II)に対しては１ｋＤ
ａもしくは３ｋＤａの膜が使用され、ｎ＝２のオリゴ糖（II)に対しては３ｋＤ
ａの膜が使用され、ｎ＝３もしくは４のオリゴ糖（II)に対しては５ｋＤａの膜
が使用されるであろう。この操作の間に、浸透液が回収され、保持液は廃棄され
る。従って、濃縮生成物の画分は、同時に所望のオリゴ糖の少なくとも８０％を
保存しながら、最初のオリゴ糖混合物の５０％〜１０％を表わすことができる。

【００２９】ｎ＝０〜２５の式（II)の中間体に対しては、半合成の硫酸多糖のベンジルエ
ステルを解重合することにより得られた混合物（III）から出発することが好ま
しい。半合成の硫酸多糖のベンジルエステルは多糖Ｋ５から得られた半合成硫酸
多糖から、そして国際公開第９４／２９３５２号および第９６／１４４２５号パ
ンフレットに記載の方法に従い調製される。エステル化、解重合および回収条件
はヘパリンのベンジルエステルについて上記のものと同様である。

【００３０】前記すべての方法において、最初のヘパリンはブタ、ヒツジ、ヤギもしくはウ
シから採取することができ、動物の粘膜、肺もしくは皮膚から得ることができる
。好ましくは、ブタもしくはヒツジの粘膜からまたはウシの肺からのヘパリンが
使用され、更により好ましくは、ブタ粘膜もしくはウシ肺からのものが使用され
る。

【００３１】式（Ｉ）のオリゴ糖は抗炎症性を有し、従って、その誘動可能な形態がとりわ
け、これらの好中球もしくはマクロファージが組織中で移動し、活性化される時
に好中球もしくはマクロファージにより放出される、一酸化窒素（ＮＯ）のよう
な細胞毒性物質の生成に関与する炎症過程に関連する疾患の予防もしくは処置の
ために使用することができる。好中球の移動、活性化および接着はこの組織を血
管新生する動脈の塞栓もしくは痙攣後に虚血にされた組織部分に起こる。これら
の虚血は脳（脳血管の事故）もしくは心筋（心筋梗塞）もしくは下肢（末梢虚血
として知られる）のいずれかに起こることができる。従って、式（Ｉ）のオリゴ
糖は脳の炎症が、死に導くことができる有害な役割を果たす神経変性疾患を予防
そして／もしくは処置するために使用することができ、その中でも、脳虚血、心
虚血（心筋梗塞）、末梢虚血、中枢神経系の外傷およびとりわけ頭蓋、脊椎およ
び頭蓋脊椎外傷、多発性硬化症、神経障害性疼痛および末梢神経障害、筋萎縮性
側索硬化症、進行性脊髄萎縮症、幼児筋萎縮症および原発性側索硬化症を含む運
動ニューロン疾患、神経−ＡＩＤＳ、アルツハイマー氏病、パーキンソン氏病お
よびハンチントン舞踏病およびとりわけ関節の限局化を伴なうある形態の変形性
関節症を挙げることができる。

【００３２】これらの生成物の抗炎症作用は、ＹＡＭＡＳＨＩＴＡｅｔａｌ．，Ｅｕｒ
ｏ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，３３８，２，１５１−１５８（１９９７）もしく
はＪ．Ｅ．ＳＨＥＬＬＩＴＯｅｔａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌ
ｌＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１３，１，４５−５３（１９９５）により記載された
プロトコールに従って、Ｅ．ｃｏｌｉから生産されたリポ多糖（ＬＰＳ）により
誘動されたＮＯｘ（亜硝酸および硝酸塩）の生成試験においてインビボで示され
る。

【００３３】オリゴ糖０．５ｍｇ／ｋｇを雄のＣＤ１マウス（ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒ
，２５−３５ｇ）にＴ０において静脈内投与により注射し、Ｔ＋１５分に１もし
くは２ｍｇ／ｋｇのオリゴ糖を皮下注射する。Ｔ＋３０分に、Ｅ．ｃｏｌｉ（Ｓ
ｉｇｍａＬ３１２９、血清型０１２７：Ｂ８）から生産されたリポ多糖（ＬＰ
Ｓ）１００ｍｇ／ｋｇを投与する。Ｔ＋３時間に、１もしくは２ｍｇ／ｋｇのオ
リゴ糖を再度皮下注射する。Ｔ＋５時間３０分に、血液サンプルを目の穿刺によ
り採取し、以下の方法：［血漿サンプル１２ｍｌを脱イオン水８８ｍｌと混合し
、リン酸バッファー（０．３１Ｍ、ｐＨ７．５）４０ｍｌ、β−ＮＡＤＰＨ（還
元ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェエート）２０ｍｌ（０．８６
ｍＭ）、ＦＤＡ（フラビンアデニンジヌクレオチド）２０ｍｌ（０．１１ｍＭ）
および硝酸塩還元酵素２０ｍｌ（２Ｕ／ｍｌ）（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎ
ｎｈｅｉｍ）ととともに室温で１時間、暗所でインキュベートする］で硝酸塩還
元酵素による硝酸塩の亜硝酸塩への還元後、血漿中ＮＯｘ（亜硝酸および硝酸塩
）の濃度をグリース（Ｇｒｉｅｓｓ）の比色定量法により決定する。ＺｎＳＯ₄
（１Ｍ）１０ｍｌを添加してタンパク質を沈殿させ、混合後に、サンプルを２０
，０００×ｇで５分間遠心分離する。最後に、上澄み液５０ｍｌをグリース試薬
（リン酸中１％スルファニルアミド／脱イオン水中０．１％のナフチルエチレン
ジアミン混合物（Ｖ／Ｖ））１００ｍｌとともに室温で１０分間インキュベート
する。光学濃度をミクロプレート比色計で５４０ｎｍで読み取り、各点を２回測
定する。比色法の基準としてＫＮＯ₃およびＮａＮＯ₂を使用する。

【００３４】この試験において、本発明に従うオリゴ糖はＮＯｘの形成を５０％を超えて抑
制する。

【００３５】更に、式（Ｉ）のオリゴ糖は運動ニューロンの生残りおよび成長を増加し、従
って、筋萎縮性側索硬化症、進行性脊髄萎縮、幼児筋萎縮もしくは原発性側索硬
化症のような運動ニューロン疾患の予防および／もしくは処置に特に有用である
。

【００３６】運動ニューロン培養物は栄養の支持（例えば、ＢＤＮＦ、ＮＴ５）の不在下で
調製されると、アポトーシスにより死亡することが知られている。今や、本発明
に従うオリゴ糖が運動ニューロンの生残りおよび成長を可能にすることが見いだ
された。この作用は以下のプロトコールに従って、ニューロンの栄養因子を欠乏
させた星状細胞および運動ニューロンの共培養物につき試験した。運動ニューロン濃縮培養物：運動ニューロン濃縮培養物はＲ．Ｌ．ＳＸＨＮＡＡＲａｎｄＡ．Ｅ．ＳＣ
ＨＡＦＦＮＥＲ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１，２０４−２１７（１９８１）に
より記載され、Ｗ．ＣａｍｕａｎｄＣ．Ｅ．Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｎｅ
ｕｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，４４，５９−７０（１９９２）により修飾され
た遠心分離法を使用して調製する。Ｅ１５ラット胚からの脊髄を滅菌切開し、脊
椎の脊索を除去する。次にそれらを切断し、０．０５％のトリプシンを添加した
ＰＢＳ（リン酸バッファー生理食塩水：１３７ｍＭのＮａＣｌ、２．６８ｍＭの
ＫＣｌ、６．４５ｍＭのＮａ₂ＨＰＯ₄、１．４７ｍＭのＫＨ₂ＰＯ₄）中で３７℃
で１５分間インキュベートする。細胞の分離はウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）０
．１％およびＤＮＡ分解酵素０．１ｍｇ／ｍｌを補充された培養培地中に１ｍｌ
のピペットの先端による滴定により完了する。細胞県濁液をＬ１５培地（Ｇｉｂ
ｃｏＢＲＬにより市販）中６．５重量／容量％のメトリザマイドのバンド上に
塗布し、１５分間５００ｇで遠心分離する。運動ニューロンを含有する内側のバ
ンドを回収し、Ｌ１５培地に希釈し、抗マウスＩｇＧおよびハイブリドーマ上澄
み液ＭＣ１９２（ＣＥＣｈａｎｄｌｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．，２５９，６８８２（１９８４））で前以て被覆した培養皿中で外界温度
で４５分間インキュベートする。県濁細胞をＬ１５培地で洗浄し、僅かに震盪し
ながらハイブリドーマ上澄み液ＭＣ１９２で運動ニューロンを溶出する。運動ニ
ューロンは重炭酸ナトリウム（２２ｍＭ）、コアルブミン（０．１ｍｇ／ｍｌ）
、プトレシン（０．１ｍＭ）、インスリン（５μｇ／ｍｌ）、ナトリウムセレナ
イト（３１ｎＭ）、グルコース（２０ｍＭ）、プロゲステロン（２１ｎＭ）、ペ
ニシリン（１００ＩＵ／ｍｌ）およびストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）
を添加したＬ１５培地中で星状細胞の単層上に培養皿中２４ｍｍ当り６５０細胞
密度で平板培養される。培養物は５％ＣＯ₂における湿気のある雰囲気中で３７
℃で維持する。脊髄星状細胞の培養星状細胞を僅かに修飾されたＲ．Ｐ．ＳＡＮＥＴＯＡＮＤＤＥＶＥＬＬ
ＩＳ，ｉｎＮｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ａｐｒａｃｔｉｃａｌａｐｐ
ｒｏａｃｈ（Ａ．Ｊ．ＴＲＵＮＥＲａｎｄＨ．Ｓ．ＳｔＪＨＯＮ）ＩＲＬ
Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ−ＷａｓｈｉｎｇｔｏｎＤＣ．ｐ２７−６３（１
９８７）の方法に従ってラット胚から得る。脊髄を滅菌切開し、髄膜および神経
節を除去する。５〜１０脊髄をＰＢＳ（リン酸バッファー生理食塩水：１３７ｍ
ＭのＮａＣｌ、２．６８ｍＭのＫＣｌ、６．４５ｍＭのＮａ₂ＨＰＯ₄、１．４７
ｍＭのＫＨ₂ＰＯ₄）中に移植し、切断し、その後０．２５％トリプシンを添加し
たＰＢＳ中で２５分間３７℃でインキュベートする。１０％のコウシ胎児血清（
ＦＣＳ）を添加した１０ｍｌのＤｕｂｅｌｃｃｏ修飾Ｅａｇｌｅ培地（ＤＭＥＭ
）を添加することにより酵素処理を停止し、細胞を遠心分離により回収する。１
ｍｌピペットの先端を使用してもう１段階の機械的分離を実施する。細胞は１０
％のＦＣＳ含有のＤＭＥＭ中２５ｃｍ²の培養培地当り１．５×１０⁶細胞密度で
平板培養される。インビトロで２日後に、培養物に研究の全期間中毎日栄養を補
給する。可視の細胞の単層を得る時に、培養物を２５０ｒｐｍで４８時間震盪し
、翌日、単層をシトシンアラビノシド（１０^-5Ｍ）で４８時間処理する。次に星
状細胞の単層を研究の開始時に２５ｃｍ²の培養フラスコに対して培養平板上に
３５ｍｍ当り５の密度で増殖させる。

【００３７】脊髄の星状細胞の培養物は９８％を超える、グリアの原繊維の酸性タンパク質
（ＧＦＡＰ）に免疫反応性の細胞より成る。

【００３８】星状細胞の単層を０．１ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌの濃度で２４時間ＰＢＳ
中溶液中の、ＰＢＳ単独（対照）もしくは被試験生成物のいずれかを受ける。次
に星状細胞の単層をＤＭＥＭで洗浄し、運動ニューロンを添加した培養培地で２
時間維持する。

【００３９】供給（ｆｅｅｄｉｎｇ）の２時間後、そして２もしくは３日間、ビヒクルもし
くは被試験生成物を再度培養培地に添加する。運動ニューロンの免疫化学的同定細胞をＰＢＳ（１５分間４℃でｐＨ７．４）中４％のパラホルムアルデヒドお
よび０．１％グルタルアルデヒド中で固定する。次に培養物を洗浄し、不特定部
位をＰＢＳおよび０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ１００^R中２％のウシ血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）でブロックする。これらの培養物を４℃で１晩ｐ７５^LNGRF抗体（
前記のＣｈａｎｄｌｅｒによる記事）とともに、そして６０分間ビオチニル化ヤ
ギ血清（１／１２５Ｇｉｂｃｏ）およびストレプタビデン−ペルオキシダーゼ
（１／２００、Ｇｉｂｃｏ）とともに継続してインキュベートする。抗体をＤＡ
Ｂ／過酸化水素反応を使用して可視化させる。細胞の計数および統計的分析低い活性のニュートロフィン受容体７５^lngfrに対して免疫反応性であり、４
細胞の直径より長い軸索を示す細胞が生存運動ニューロンであると考えられる。
運動ニューロンの数は２００倍率の顕微鏡下で０．８２５ｃｍ²の表面積内の標
識細胞を計数することにより評価される。値は対照に比較した、栄養因子の不在
において維持された培養物中に存在するｃｍ²当りの運動ニューロン数もしくは
運動ニューロン数の百分率として表わす。実験は少なくとも３回実施される。

【００４０】統計的分析はスチューデント試験（ｔ−テスト）を使用して実施する。

【００４１】本発明のオリゴ糖で前処理することにより、星状細胞の単層上に生育する運動
ニューロン数は２０〜５０％だけ増加する。

【００４２】以下の実施例は式（Ｉ）および中間体のオリゴ糖の調製を表わす。

【００４３】これらの実施例において、略語は以下の意味を有する。

【００４４】 ΔＩｓ：（４−デオキシ−２−Ｏ−スルホ−ａ−Ｌ−スレオ−ヘキシ−エノピ
ラノシルウロン酸）−（１→４）−２−デオキシ−２−スルホアミノー６−Ｏ−
スルホ−α−Ｄ−グルコピラノース、テトラナトリウム塩、もしくはΔＵＡｐ２
Ｓ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇ１ｃＮｐ２Ｓ６ＳＩｓ：（２−スルホ−ａ−Ｌ−イドピラノシルウロン酸）−（１→４）−２−
デオキシ−２−スルホアミノ−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノース、四
ナトリウム塩、（２−スルホ−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸）−（１→４）
−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−α−Ｄ−グルコピラノー
ス、四ナトリウム塩、もしくはα−Ｌ−イドＡｐ２Ｓ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇ
ｌｃＮｐ２Ｓ６Ｓ IIｓ：（α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸）−（１→４）−２−デオキシ−６
−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−α−Ｄ−グルコピラノース、三ナトリウム塩
、もしくはα−Ｌ−イドＡｐ−（１→４）−α−Ｄ−ＧｌｃＮｐ２Ｓ６Ｓ IIIｓ：（２−スルホ−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸）−（１→４）−２
−デオキシ−２−スルホアミノ−α−Ｄ−グルコピラノース、三ナトリウム塩、
もしくはα−Ｌ−イドＡｐ２Ｓ−（１→４）−α−Ｄ−ＧｌｃＮｐ２ＳＩｄｏＡｐ：イドピラノシルウロン酸ＧｌｃＮｐ：２−アミノ−２−デオキシグルコピラノース ΔＵａｐ：４−デオキシ−α−Ｌ−スレオ−ヘキセノピラノシルウロン酸Ｓ：硫酸塩。式（II）の中間体混合物の調製例実施例Ａ−酵素による解重合および分離によるｎ＝０、１および２の式（II）の
オリゴ糖の調製ヘパリン２５ｇをＮａＨ₂ＰＯ₄／Ｎａ₂ＨＰＯ₄（ｐＨ＝７）０．０５モル／ｌ
、塩化ナトリウム０．０２モル／ｌおよび２％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）を
含有するリン酸バッファー溶液２５０ｍｌ中に溶解する。混合物に７ＩＵのヘパ
リナーゼＩ（ＥＣ４．２．２．２．７）を導入し、得られた溶液を１５℃に冷
却し、次にこの温度で解重合反応中維持する。反応の進行をときどきアリコート
サンプルを採取することによりモニターし、ゲル透過クロマトグラフィーにより
分析する。９日後に、２分間１００℃に反応溶媒を加熱することにより、酵素反
応を停止する。次に冷却混合物を凍結乾燥する。このようにしてオリゴ糖混合物
（III）を得る。

【００４５】次に、得られたオリゴ糖混合物（III）を以下の方法に従ってクロマトグラフ
ィーにかけ、クロマトグラフィーをＵｌｔｒｏｇｅｌａＡＣＡ２０２の名称
で知られたポリアクリルアミド−アガロースゲルを充填したカラム上で実施し、
混合物をリン酸バッファー（０．０２モル／ｌのＮａＨ₂ＰＯ₄／Ｎａ₂ＨＰＯ₄）
ｐＨ＝７および塩化ナトリウム０．１モル／ｌを含有する溶液で溶出する。検出
をＵＶ分光測定（２５４ｎｍ）およびイオン分光測定（ＩＢＦ）により実施する
。生成物を場合によってはＳＡＸ（ｓｔｒｏｎｇａｎｉｏｎｅｘｃｈａｎｇ
ｅ（強力アニオン交換））クロマトグラフィーもしくはフランス特許第２５４
８６７２号明細書に記載の方法に従う分別沈殿により精製することができる。
回収された生成物画分を凍結乾燥し、次にＳｅｐｈａｄｅｘＧ１０^R ｇｅｌ（
ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を充填したカラム上で脱塩す
る。

【００４６】この方法により、二糖ΔＩｓ３ｇおよび具体的には５５％ΔＤＩｓ−Ｉｓ−Ｉ
ｓ誘導体、３５％ΔＩｓ−Ｉｓ−IIｓおよび１０％ΔＩｓ−Ｉｓ−IIIｓを含有
する六糖混合物１１００ｍｇが得られる。後者の混合物はそれらから成分のそれ
ぞれを分離するために当業者に既知の方法に従って精製することができるかもし
くは、式（Ｉ）の還元誘導体への転化のためにその現在の状態で使用することが
できる。実施例Ｂ−ヘパリンのベンジルエステルの解重合および分離による、ｎ＝０、１
、２、３もしくは４の式（II）のオリゴ糖の調製ａ−ヘパリンのベンジルエステルの調製ヘパリンのベンジルエステルを米国特許第５３８９６１８号明細書の実施
例３に従って調製する。ｂ−解重合ヘパリンのベンジルエステル１００ｇを脱鉱物水１．９ｌ中に溶解する。混合
物を撹拌しながら６０℃にする。均一な溶液を得た後に、２３％水酸化ナトリウ
ム溶液約３５ｍｌを１回で導入する。次に１０分間の反応後に、溶液を冷却し、
約２Ｎの酢酸溶液８０ｍｌで中和する。１０重量／容量％の酢酸ナトリウムをこ
の溶液に添加する。オリゴ糖混合物を約２容量のメタノールを添加することによ
り沈殿させる。沈殿物を濾過により単離し、メタノールで２回洗浄し、５０℃で
減圧下乾燥する。乾燥後に、オリゴ糖混合物（II）７３．８ｇを得る。ｃ−ｎ＝１のオリゴ糖の濃縮前記で得られたオリゴ糖混合物３０ｇを約３５容量の水に溶解する。この溶液
を３ｋＤａの膜（Ｐｅｌｌｉｃｏｎ）をとおして限外濾過する。透過液６００ｍ
ｌが吸引された時に、保持液を水５００ｍｌで希釈する。更に４５０ｍｌの透過
液が吸引されるまでその操作を継続する。透過液の２画分を合わせ、次に減圧下
で乾燥濃縮する。黄色がかった−白色の固体６．１ｇを得る。ゲル透過クロマト
グラフィーによる固体の分析はそれがｎ＝１の式（II）のオリゴ糖約３０％を含
むことを示す。ｄ−限外濾過したオリゴ糖混合物の分別濃縮混合物をＵｌｔｒｏｇｅｌＡＣＡ２０２（１０ｃｍ直径および５０ｃ
ｍ長の直列の４カラムを使用する）の名称で知られたポリアクリルアミド−アガ
ロースゲルを充填したカラム上で分別する。限外濾過により濃縮した混合物５ｇ
を水２５ｍｌに溶解し、次に５ｍｌ／分の速度で塩化ナトリウムの０．２モル／
ｌ溶液で溶出する。２５−ｍｌ画分をカラムの底に回収する。生成物の検出はＵ
Ｖ分光測定（２５４ｎｍ）およびイオン分光測定（ＩＢＦ）により実施する。ｎ
＝１の生成物の画分を回収し、凍結乾燥し、次にＳｅｐｈａｄｅｘＧ１０ｇ
ｅｌを充填したカラム上で脱塩する。凍結乾燥後に、具体的には７０％の式II（
Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈＝ＳＯ３Ｎａ；Ｒ₄、Ｒ₆＝ＨそしてＭ＝Ｎａ）の
ΔＩｓ−Ｉｓ誘導体を含有する四糖１ｇを得る。ΔＩｓ−Ｉｓ誘導体を場合によ
ってはＳＡＸ（強力アニオン交換）クロマトグラフィーにより、もしくはフラン
ス特許第２５４８６７２号明細書に記載の方法および本発明に記載の変法に
従う分別沈殿による好ましいアスペクトに従い精製することができる。式（Ｉ）のオリゴ糖の調製例（実施例１）式（II）［式中、ｎは０に等しく、Ｒ₁、Ｒ₇およびＲ₈はＳＯ₃Ｍ基を表わし、
Ｒ₆は水素原子を表わしそしてＭはナトリウムである］のオリゴ糖３００ｍｇの
２５℃溶液（２ｍｌの水中）を反応容器中に導入する。ホウ水素化ナトリウム２
１２ｍｇを撹拌しながら１回で添加する。次に０．５モル／ｌの水酸化ナトリウ
ム溶液の添加によりｐＨを９と１０の間に調整する。１２時間後、４と５の間の
ｐＨを得るまで酢酸を徐々に添加する。混合物を１時間撹拌し、次に０．５モル
／ｌの水酸化ナトリウムの添加によりｐＨを６．７に再調整する。次に混合物を
５０℃で減圧下で乾燥濃縮する。濃縮物を磁気撹拌によりメタノール１０ｍｌ中
に分散させる。１晩の沈降後、県濁物をＷｈａｔｍａｎＧＦ／Ｂ膜をとおして
濾過する。フィルター上の固体を蒸留水１００ｍｌを２回分通過させることによ
り溶解する。次にこの溶液を減圧下で５０℃で乾燥濃縮する。白色固体５８０ｍ
ｇを得る。次に固体を磁気撹拌によりメタノール１５ｍｌに分散する。３０分間
撹拌後、県濁物をＷｈａｔｍａｎＧＦ／Ｂ膜をとおして濾過する。蒸留水１０
ｍｌの２回分をとおしてケークを溶解する。得られた溶液を減圧下で５０℃で乾
燥濃縮する。このようにして、式（Ｉ）［式中、ｎが０に等しく、Ｒ₁、Ｒ₇およ
びＲ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムであ
る］のオリゴ糖２５０ｍｇをジアステレオ異性体の混合物の形態で得る。二糖を
構成する糖がＩ〜IIであることが認められ、Ｉは還元残基であり、IIは不飽和ウ
ロン酸残基［（４−デオキシ−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−スレオヘキシ−４−エ
ノピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スル
ホアミノ−Ｄ−グルシトール、四ナトリウム塩；（４−デオキシ−２−Ｏ−スル
ホ−α−Ｌ−スレオ−ヘキシ−４−エノピラノシルウロン酸−（１→４）−２−
デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−Ｄ−マニトール、四ナトリウム
塩である：Ｄ₂Ｏ中の陽子スペクトル、６００ＭＨｚ，Ｔ＝３０５Ｋ，δはｐｐ
ｍで：３．３８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２^(I)），３．７０および３．７５（各１Ｈ，
それぞれｄｄ，Ｊ＝６および１２Ｈｚ並びにｄｄ，Ｊ＝５および１２Ｈｚ，２Ｈ
−１^(I)），３．８６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，Ｈ−３^(I)），４．１３（１Ｈ，
ｄｄ，Ｊ＝８および１１Ｈｚ，Ｈ−６^(I)），４．１８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４^(I)）
，４．２５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−６^(I)およびＨ−３^(II)），４．３５（１Ｈ，ｍ，
Ｈ−５^(I)），４．６５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２^(II)），５．６７（１Ｈ，ｓ，Ｈ−
１^(II)），６．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，Ｈ−４^(II)）］．（実施例２）式（II）［式中、ｎが０に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃ Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムである
］のオリゴ糖６０ｍｇの２５℃溶液（１．２ｍｌの水中）を反応容器中に導入す
る。ホウ水素化ナトリウム１８ｍｇを撹拌しながら１回で添加する。次に０．５
モル／ｌの水酸化ナトリウム溶液の添加によりｐＨを９と１０の間に調整する。
１２時間後、４と５の間のｐＨを得るまで酢酸を徐々に添加する。混合物を１時
間撹拌し、次にメタノール５ｍｌを添加する。県濁物をＷｈａｔｍａｎＧＦ／
Ｂ膜をとおして濾過し、回収固体をメタノール０．５ｍｌで２回濯ぐ。乾燥後、
式（Ｉ）［式中、ｎは１に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃
Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムである］
のオリゴ糖４２ｍｇをジアステレオ異性体の混合物の形態で得る。四糖を構成す
る糖がＩ〜IVであることが認められ、Ｉは還元残基であり、IVは不飽和ウロン酸
残基［（４−デオキシ−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−スレオ−ヘキシ−４−エノピ
ラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホア
ミノ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−イド
ピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−２−スルホアミノ−６−Ｏ−
スルホ−Ｄ−グルシトール、八ナトリウム塩）；（４−デオキシ−２−Ｏ−スル
ホ−α−Ｌ−スレオ−ヘキシ−４−エノピラノシルウロン酸−（１→４）−２−
デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（
１→４）−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸−（１→４）−２
−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−Ｄ−マニトール、八ナトリウ
ム塩）である：Ｄ₂Ｏ中の陽子スペクトル、４００ＭＨｚ，Ｔ＝２９８Ｋ，δは
ｐｐｍで：３．２５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０および３Ｈｚ，Ｈ−２^(III)），３
．３７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２^(I)），３．５９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３^(III)），３．７
５（２Ｈ，ｍ，２Ｈ−１^(I)），３．７９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ｈ−４^(III) ），３．８６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３^(I)），４．０５と４．４０の間（１０Ｈ，広
域ピーク，Ｈ−４^(I)／Ｈ−５^(I)／２Ｈ−６^(I)），Ｈ−２^(II)／Ｈ−３^(II)／
Ｈ−４^(II)，２Ｈ−６^(III)），Ｈ−３^(IV)，４．５８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２^(IV)
），４．６０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５^(II)），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，Ｈ
−１^(II)），５．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，Ｈ−１^(III)），５．４７（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，Ｈ−１^(IV)），５．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，Ｈ−４^(IV) ）］． (実施例３）式（II）［式中、ｎが２に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃ Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わし、そしてＭがナトリウムであ
る］のオリゴ糖１００ｍｇの２５℃溶液（２ｍｌの水中）を反応容器中に導入す
る。ホウ水素化ナトリウム２０ｍｇを撹拌しながら１回で添加する。次に０．５
モル／ｌの水酸化ナトリウム溶液の添加によりｐＨを９と１０の間に調整する。
１２時間後、４と５の間のｐＨを得るまで酢酸を徐々に添加する。混合物を１時
間撹拌し、次に０．５モル／ｌの水酸化ナトリウムの添加によりｐＨを６．７に
再調整する。次に混合物を十分量の蒸留水で希釈して２０ｍｌを得る。酢酸ナト
リウム２．５ｇを添加し、メタノール３容量を流し込む。県濁物をＷｈａｔｍａ
ｎＧＦ／Ｂ膜をとおして濾過し、回収固体をメタノール２ｍｌで２回濯ぐ。乾
燥後、式（Ｉ）［式中、ｎが２に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈が
ＳＯ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムで
ある］のオリゴ糖６１ｍｇをジアステレオ異性体の混合物の形態で得る。六糖を
構成する糖がＩ〜VIであることが認められ、Ｉは還元残基であり、IVは不飽和ウ
ロン酸残基である。［（４−デオキシ−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−スレオ−ヘキ
シ−４−エノピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−２−スルホアミ
ノ−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−スルホ
−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−２−スルホア
ミノ−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−スル
ホ−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−２−スルホ
アミノ−６−Ｏ−スルホ−Ｄ−グルシトール、十二ナトリウム塩）；（４−デオ
キシ−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−スレオ−ヘキシ−４−エノピラノシルウロン酸
−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−イドピラノシルウロン
酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−α−Ｄ−
グルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−イドピラノシルウロ
ン酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−α−Ｄ
−マニトール、十二ナトリウム塩）：Ｄ₂Ｏ中の陽子スペクトル、６００ＭＨｚ
，Ｔ＝３０５Ｋ，δはｐｐｍで：３．２５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２^(III)および^(V)）
，３．３８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２^(I)），３．６１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０Ｈｚ，Ｈ
−３^(III)および^(V)），３．７０と３．８３の間（４Ｈ，広域ピーク，２Ｈ−１^(I) およびＨ−４^III)および^(V)），３．８６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，Ｈ−３^(I ⁾ ），４．００（２Ｈ，ｍ，Ｈ−５^(III)および^(V)），４．０７（１Ｈ，ｍ，Ｈ
−４^(IV)），４．０８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４^(I)），４．１０と４．４５の間（１
３Ｈ，広域ピーク，Ｈ−５^(I)／２Ｈ−６^(I)，Ｈ−２^(II)）／Ｈ−３^(II)／Ｈ−
４^(II)，２Ｈ−６^(III)，Ｈ−２^(IV)／Ｈ−３^(IV)，２Ｈ−６^(V)，Ｈ−３^(VI)）
，４．６０（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２^(VI)），４．６２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５^(II)），４
．７８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５^(IV)），５．１７（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１^(IV)），５．２
８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，Ｈ−１^(II)），５．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，
Ｈ−１^(V)），５．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，Ｈ−１^(III)）、５．４７（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，Ｈ−１^(VI)），５．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，Ｈ−４^(VI) ）］．（実施例４）式（II）［式中、ｎが３に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃ Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムである
］のオリゴ糖１００ｍｇの２５℃溶液（２ｍｌの水中）を反応容器中に導入する
。ホウ水素化ナトリウム３０ｍｇを撹拌しながら２回に分けて添加する。次に０
．５モル／ｌの水酸化ナトリウム溶液の添加によりｐＨを９と１０の間に調整す
る。１２時間後、４と５の間のｐＨを得るまで酢酸を徐々に添加する。混合物を
１時間撹拌し、次に０．５モル／ｌの水酸化ナトリウムの添加によりｐＨを６．
７に再調整する。次に混合物を十分量の蒸留水で希釈して２０ｍｌを得る。酢酸
ナトリウム２ｇを添加し、メタノール３容量を流し込む。県濁物をＷｈａｔｍａ
ｎＧＦ／Ｂ膜をとおして濾過し、回収固体をメタノール１ｍｌで２回濯ぐ。乾
燥後、白色固体６８ｍｇを得る。ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）のモ
ニター後、生成物が完全に還元されていないので、前記の操作全体を繰り返す。
乾燥後、ジアステレオ異性体の混合物の形態の式（Ｉ）［式中、ｎが３に等しく
、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水
素原子を表わしそしてＭがナトリウムである］のオリゴ糖４５ｍｇを得る。八糖
を構成する糖がＩ〜VIIIであることが認められ、Ｉは還元残基であり、VIIIは不
飽和ウロン酸残基、［（４−デオキシ−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−スレオ−ヘキ
シ−４−エノピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ
−２−スルホアミノ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−スルホ
−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−２−スルホア
ミノ−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−スル
ホ−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−ス
ルホ−２−スルホアミノ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−ス
ルホ−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−
スルホ−２−スルホアミノ−Ｄ−グルシトール、十六ナトリウム塩）；（４−デ
オキシ−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−スレオ−ヘキシ−４−エノピラノシルウロン
酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−α−Ｄ−
グルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−イドピラノシルウロ
ン酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−α−Ｄ
−グルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−イドピラノシルウ
ロン酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−α−
Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−イドピラノシル
ウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−Ｄ
−マニトール、十六ナトリウム塩）：Ｄ₂Ｏ中の陽子スペクトル、６００ＭＨｚ
，Ｔ＝３０５Ｋ，δはｐｐｍで：３．２５（３Ｈ，ｍ，Ｈ−２^(III)，Ｈ−２^(V) ，Ｈ−２^(VII)），３．３８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２^(I)），３．６１（３Ｈ，ｍ，Ｈ
−３^(III)，Ｈ−３^(V)，Ｈ−３^(VII)），３．７０と３．８３の間（５Ｈ，広域
ピーク，２Ｈ−１^(I)およびＨ−４^(III)，Ｈ−４^(V)，Ｈ−４^(VII)），３．８６
（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，Ｈ−３^(I)），４．００（３Ｈ，ｍ，Ｈ−５^(III)，Ｈ
−５^(V)，Ｈ−５^(VII)），４．０８（３Ｈ，ｍ，Ｈ−４^(I)，Ｈ−４^(IV)，Ｈ−
４^(VI))，４．１０と４．４５の間（１７Ｈ，広域ピーク，Ｈ−５^(I)／２Ｈ−６^(I) ，Ｈ−２^(II)／Ｈ−３^(II)／Ｈ−４^(II)，２Ｈ−６^(III)，Ｈ−２^(IV)／Ｈ−
３^(IV)，２Ｈ−６^(V)，Ｈ−２^(VI)／Ｈ−３^(VI)，２Ｈ−６^(VII)，Ｈ−３^(VIII) ），４．５９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２^(VIII)），４．６２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５^(II)）
，４．７８（２Ｈ，ｓ，Ｈ−５^(IV)，Ｈ−５^(VI)），５．１７（２Ｈ，ｓ，Ｈ−
１^(IV)，Ｈ−１^(VI)），５．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，Ｈ−１^(II)），５．
３８（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１^(V)，Ｈ−１^(VII)），５．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ
，Ｈ−１^(III)），５．４７（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１^(VIII)），５．９６（１Ｈ，ｄ
，Ｊ＝５Ｈｚ，Ｈ−４^(VIII)）］．（実施例５）式（II）［式中、ｎが４に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃ Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムである
］のオリゴ糖６５ｍｇの２５℃溶液（１．２ｍｌの水中）を反応容器中に導入す
る。ホウ水素化ナトリウム１８ｍｇを撹拌しながら１回で添加する。次に０．５
モル／ｌの水酸化ナトリウム溶液の添加によりｐＨを９と１０の間に調整する。
１２時間後、４と５の間のｐＨを得るまで酢酸を徐々に添加する。混合物を１時
間撹拌し、次に０．５モル／ｌの水酸化ナトリウムの添加によりｐＨを６．７に
再調整する。次に混合物を１０％の酢酸ナトリウムの水溶液３ｍｌで希釈し、メ
タノール３容量（１２ｍｌ）を流し込む。懸濁物を濾過し、回収固体をメタノー
ル３ｍｌで濯ぐ。乾燥後、ジアステレオ異性体の混合物の形態の式（Ｉ）［式中
、ｎが４に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わし、
Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムである］のオリゴ糖５４
ｍｇを得る。十糖を構成する糖がＩ〜Ｘであることが認められ、Ｉは還元残基で
あり、Ｘは不飽和ウロン酸残基である。［（４−デオキシ−２−Ｏ−スルホ−α
−Ｌ−スレオ−ヘキシ−４−エノピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキ
シ−２−スルホアミノ−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４
）−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオ
キシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→
４）−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デ
オキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１
→４）−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸−（１→４）−２−
デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（
１→４）−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸−（１→４）−２
−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−スルホアミノ−Ｄ−グルシトール、二十ナト
リウム塩）；（４−デオキシ−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−スレオ−ヘキシ−４−
エノピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−ス
ルホアミノ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ
−イドピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−
スルホアミノ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−スルホ−α−
Ｌ−イドピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２
−スルホアミノ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−スルホ−α
−Ｌ−イドピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−
２−スルホアミノ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−Ｏ−スルホ−
α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ
−２−スルホアミノ−Ｄ−マニトール、二十ナトリウム塩）：Ｄ₂Ｏ中の陽子ス
ペクトル、６００ＭＨｚ，Ｔ＝３０３Ｋ，δはｐｐｍで：３．２３（４Ｈ，ｍ，
Ｈ−２^(III)，Ｈ−２^(V)，Ｈ−２^(VII)，Ｈ−２^(IX)），３．３５（１Ｈ，ｍ，
Ｈ−２^(I)），３．５９（４Ｈ，ｍ，Ｈ−３^(III)，Ｈ−３^(V)，Ｈ−３^(VII)，Ｈ
−３^(IX)），３．６５と３．８０の間（６Ｈ，ｍ），３．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−
３^(I)），３．９０と４．４０の間（２９Ｈ，ｍ），４．５７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−
２^(X)），４．５９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５^(II)），４．７５（３Ｈ，ｍ，Ｈ−５^(IV ⁾ ，Ｈ−５^(VI)，Ｈ−５^(VIII)），５．１５（３Ｈ，ｍ，Ｈ−１^(IV)，Ｈ−１^(VI ⁾ ，Ｈ−１^(VIII)），５．２５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１^(II)），５．３７（３Ｈ，ｍ
，Ｈ−１^(V)，Ｈ−１^(VII)，Ｈ−１^(IX)），５．４２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１^(III)
），５．４５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１^(X)），５．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，Ｈ
−４^(X)）］．本発明に従う医薬品は活性主成分として、それが、不活性かもしくは生理学的
に活性であることができる、あらゆる他の製薬学的に相容性の生成物と組み合わ
せた組成物の形態で、式（Ｉ）の少なくとも１種のオリゴ糖もしくは式（Ｉ）の
オリゴ糖の混合物を含んで成る。本発明に従う医薬品は静脈内、皮下、経口、直
腸内、局所もしくは肺から（吸入）の経路により使用することができる。

【００４７】静脈内もしくは皮下投与のための滅菌組成物は概括的に水溶液である。これら
の組成物はまた、補助剤、とりわけ湿潤化剤、等張化剤、乳化剤、分散剤および
安定剤を含有することができる。滅菌は幾つかの方法、例えば、滅菌濾過により
、組成物中に殺菌剤を取り込むことにより、もしくは放射線照射により実施する
ことができる。それらはまた、使用時に、滅菌水もしくはあらゆる他の注射可能
な滅菌溶媒に溶解することができる滅菌固体組成物の形態に調製することができ
る。

【００４８】使用することができる、経口投与のための固体組成物は錠剤、丸剤、末剤（ゼ
ラチンカプセルもしくはカシェ剤）または顆粒である。これらの組成物において
は、活性主成分をアルゴン流下でデンプン、セルロース、スクロース、ラクトー
スもしくはシリカのような１種もしくはそれ以上の不活性希釈剤と混合する。

【００４９】これらの組成物はまた、希釈剤以外の物質、例えば、ステアリン酸マグネシウ
ムもしくはタルクのような１種もしくはそれ以上の潤滑剤、経口吸収を促進する
ための薬剤、染料、コーティング（糖衣錠）もしくは上薬を含んで成ることがで
きる。

【００５０】使用することができる経口投与のための液体組成物は、水、エタノ−ル、グリ
セロール、植物油もしくは流動パラフィンのような不活性希釈剤を含有する製薬
学的に許容できる液剤、県濁物、エマルション、シロップ剤およびエリキシル剤
である。これらの組成物は希釈剤以外の物質、例えば、湿潤用製品、甘味剤、増
粘剤、香料もしくは安定剤を含んで成ることができる。

【００５１】直腸投与のための組成物は活性生成物の他に、ココアバター、半合成グリセリ
ドもしくはポリエチレングリコールのような賦形剤を含有する座薬もしくは直腸
カプセルである。

【００５２】局所投与のための組成物は例えば、クリーム、ローション、点眼液、のどスプ
レー、点鼻液もしくはエアゾールであることができる。

【００５３】用量は所望の効果、処置の期間および使用される投与経路に応じ、それらは概
括的に、皮下で、１日１ｋｇ当り０．５ｍｇ〜１０ｍｇの間にあり、すなわち、
６０ｋｇの成人に対して１日に３〜６０ｍｇである。

【００５４】概括的に、医師は処置される個体の年齢、体重および他のすべての個人的因子
の関数として適当な用量を決定するであろう。

【００５５】本発明はまた、一酸化窒素（ＮＯ）の生成に関与する炎症過程に関連する疾患
の予防もしくは処置に有用な、または運動ニューロンの生残りおよび成長に有用
な医薬品を調製するための、本発明に従うオリゴ糖の使用に関する。

【００５６】本発明は脳、心臓もしくは末梢血管の虚血、変形性関節症、中枢神経系の外傷
、頭蓋、脊髄もしくは頭蓋脊髄外傷、多発性硬化症、神経障害性疼痛および末梢
神経障害、運動ニューロン疾患、筋萎縮性側索硬化症、神経−ＡＩＤＳ、アルツ
ハイマー氏病、パーキンソン氏病およびハンチントン舞踏病を予防そして処置す
るために有用な医薬品を調製するための式（Ｉ）のオリゴ糖の使用のために特に
有利である。

【００５７】本発明はまた、一酸化窒素（ＮＯ）のような細胞毒性物質の生成に関与する炎
症過程と関連する疾患および運動ニューロンの生存および成長に関連する疾患を
予防もしくは処置するための方法に関する。従って、式（Ｉ）のオリゴ糖は、脳
の炎症が、死亡に導くことができる有害な役割を果たす神経変性疾患を予防そし
て／もしくは処置するために使用することができ、なかでも脳虚血、心虚血（心
筋梗塞）、末梢虚血、中枢神経系の外傷およびとりわけ頭蓋、脊髄および頭蓋脊
髄外傷、多発性硬化症、神経障害性疼痛および末梢神経障害、筋萎縮性側索硬化
症、進行性脊髄萎縮、幼児筋萎縮および原発性側索硬化症のような運動ニューロ
ン疾患、神経−ＡＩＤＳ、アルツハイマー氏病、パーキンソン氏病およびハンチ
ントン舞踏病およびとりわけ関節の限局化を伴なうある形態の変形性関節症を挙
げることができる。

【００５８】本発明はまた筋萎縮性側索硬化症、進行性脊髄萎縮、幼児筋萎縮および原発性
側索硬化症のような運動ニューロン疾患の予防および／もしくは処置のための方
法に関する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 17/02 Ａ６１Ｐ 17/02 19/02 19/02 25/00 25/00 25/02 25/02 25/14 25/14 25/16 25/16 25/28 25/28 29/00 29/00 Ｃ０８Ｂ 37/10 Ｃ０８Ｂ 37/10 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ビスコフ，クリステイアンフランス・エフ−91130リスオランジ・リユデユベルン３Ｆターム(参考） 4C057 BB02 BB04 DD01 JJ09 4C086 AA01 AA04 EA05 EA22 EA26 MA01 MA04 NA14 ZA02 ZA14 ZA16 ZA20 ZA36 ZA89 ZA96 ZB11 4C090 AA09 BA68 BB17 BB18 BB21 BB36 BB53 BB55 BB62 BB63 BB65 BB72 BB92 BC27 BD35 CA16 CA31 DA23

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】活性主成分として、式【化１】［式中、ｎは０〜２５の整数であり、Ｒ₁、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆およびＲ₈は同一
であるかもしくは異なり、水素原子もしくはＳＯ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₂およびＲ₇
は同一であるかもしくは異なり、水素原子もしくはＳＯ₃ＭもしくはＣＯＣＨ₃基
を表わしそしてＭはナトリウム、カルシウム、マグネシウムもしくはカリウムで
ある］のオリゴ糖、またはこれらのオリゴ糖の混合物を含有する製薬学的組成物
。
【請求項２】Ｒ₄およびＲ₆ が水素原子を表わす式（Ｉ）のオリゴ糖もし
くはこれらのオリゴ糖の混合物を含有する、請求項１記載の製薬学的組成物。
【請求項３】ｎが０〜１０の整数である式（Ｉ）のオリゴ糖もしくはこれ
らのオリゴ糖の混合物を含有する、請求項１および２のいずれかに記載の製薬学
的組成物。
【請求項４】ｎが０〜６の整数である式（Ｉ）のオリゴ糖もしくはこれら
のオリゴ糖の混合物を含有する、請求項１および２のいずれかに記載の製薬学的
組成物。
【請求項５】ｎが１〜６の整数である式（Ｉ）のオリゴ糖もしくはこれら
のオリゴ糖の混合物を含有する、請求項１および２のいずれかに記載の製薬学的
組成物。
【請求項６】ｎが０に等しく、Ｒ₁、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わし、
Ｒ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムである、式（Ｉ）のオリゴ糖を含
有する、請求項１記載の製薬学的組成物。
【請求項７】ｎが１に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃ Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムである
、式（Ｉ）のオリゴ糖を含有する、請求項１記載の製薬学的組成物。
【請求項８】ｎが２に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃ Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムである
、式（Ｉ）のオリゴ糖を含有する、請求項１記載の製薬学的組成物。
【請求項９】ｎが３に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃ Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムである
、式（Ｉ）のオリゴ糖を含有する、請求項１記載の製薬学的組成物。
【請求項１０】ｎが４に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳ
Ｏ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムであ
る、式（Ｉ）のオリゴ糖を含有する、請求項１記載の製薬学的組成物。
【請求項１１】式【化２】［式中、ｎは０〜２５の整数であり、Ｒ₁、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆およびＲ₈は同一
であるかもしくは異なり、水素原子もしくはＳＯ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₂およびＲ₇
は同一であるかもしくは異なり、水素原子もしくはＳＯ₃ＭもしくはＣＯＣＨ₃基
を表わしそしてＭはナトリウム、カルシウム、マグネシウムもしくはカリウムで
ある］のオリゴ糖であって、ただし、［式中、ｎが０であり、並びにＲ₁、Ｒ₆およびＲ₈が水素原子であり、Ｒ₇がＳＯ₃ ＭもしくはＣＯＣＨ₃基を表わしそしてＭがナトリウムである、またはＲ₁およ
びＲ₆が水素原子を表わし、Ｒ₇がＣＯＣＨ₃基を表わし、Ｒ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わ
しそしてＭがナトリウムである、またはＲ₆が水素を表わし、Ｒ₁、Ｒ₇およびＲ₈ がＳＯ₃Ｍ基を表わしそしてＭがナトリウムである、またはＲ₆およびＲ₇が水素
原子を表わし、Ｒ₁およびＲ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わしそしてＭがナトリウムである
、またはＲ₁、Ｒ₆およびＲ₇が水素原子を表わし、Ｒ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わしそし
てＭがナトリウムである］ものを除くオリゴ糖。
【請求項１２】Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わす、請求項１１記載の式（
Ｉ）のオリゴ糖。
【請求項１３】ｎが０〜１０の整数である、請求項１１および１２のいず
れかに記載の式（Ｉ）のオリゴ糖。
【請求項１４】ｎが０〜６の整数である、請求項１１および１２のいずれ
かに記載の式（Ｉ）のオリゴ糖。
【請求項１５】ｎが１〜６の整数である、請求項１１および１２のいずれ
かに記載の式（Ｉ）のオリゴ糖。
【請求項１６】ｎが０に等しく、Ｒ₁、Ｒ₇およびＲ₈がＳＯ₃Ｍ基を表わし
、Ｒ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムである、請求項１１記載の式（
Ｉ）のオリゴ糖。
【請求項１７】ｎが１に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳ
Ｏ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムであ
る、請求項１１記載の式（Ｉ）のオリゴ糖。
【請求項１８】ｎが２に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳ
Ｏ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムであ
る、請求項１１記載の式（Ｉ）のオリゴ糖。
【請求項１９】ｎが３に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳ
Ｏ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムであ
る、請求項１１記載の式（Ｉ）のオリゴ糖。
【請求項２０】ｎが４に等しく、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₇およびＲ₈がＳ
Ｏ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₄およびＲ₆が水素原子を表わしそしてＭがナトリウムであ
る、請求項１１記載の式（Ｉ）のオリゴ糖。
【請求項２１】請求項１１記載の式（Ｉ）のオリゴ糖の調製法であって、
ホウ水素化アルカリ金属もしくはホウ水素化第四級アンモニウムを式【化３】［式中、ｎは０〜２５の整数であり、Ｒ₁、Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅は同一であるかも
しくは異なり、水素原子もしくはＳＯ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₂およびＲ₆は同一であ
るかもしくは異なり、水素原子もしくはＳＯ₃ＭもしくはＣＯＣＨ₃基を表わしそ
してＭはナトリウム、カルシウム、マグネシウムもしくはカリウムである］のオリゴ糖と反応させ、そしてオリゴ糖を単離することを特徴とする方法。
【請求項２２】反応を２５℃の近位の温度で７〜１０のｐＨで水性溶媒中
で実施することを特徴とする、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】反応のｐＨが９〜１０であることを特徴とする、請求項２
１および２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】ホウ水素化アルカリ金属もしくはホウ水素化第四級アンモ
ニウムがホウ水素化リチウム、ホウ水素化ナトリウム、ホウ水素化カリウムもし
くはホウ水素化テトラブチルアンモニウムであることを特徴とする、請求項２１
〜２３記載の方法。
【請求項２５】一酸化窒素（ＮＯ）の生成に関与する炎症過程と関連する
疾患を予防もしくは処置するために有用な医薬品を調製するための、式【化４】［式中、ｎは０〜２５の整数であり、Ｒ₁、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆およびＲ₈は同一
であるかもしくは異なり、水素原子もしくはＳＯ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₂およびＲ₇
は同一であるかもしくは異なり、水素原子もしくはＳＯ₃ＭもしくはＣＯＣＨ₃基
を表わしそしてＭはナトリウム、カルシウム、マグネシウムもしくはカリウムで
ある］のオリゴ糖、もしくはこれらのオリゴ糖の混合物の使用。
【請求項２６】脳、心臓もしくは末梢血管の虚血、変形性関節症、中枢神
経系の外傷、頭蓋外傷、脊髄および頭蓋脊髄外傷、多発性硬化症、神経障害性疼
痛および末梢神経障害、運動ニューロン疾患、筋萎縮性側索硬化症、神経−ＡＩ
ＤＳ、アルツハイマー氏病、パーキンソン氏病およびハンチントン舞踏病を予防
そして処置するために有用な医薬品を調製するための請求項２５記載の式（Ｉ）
のオリゴ糖の使用。
【請求項２７】運動ニューロンの生存および成長と関連する疾患を予防そ
して／もしくは処置するための医薬品調製のための式（Ｉ）【化５】［式中、ｎは０〜２５の整数であり、Ｒ₁、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆およびＲ₈は同一
であるかもしくは異なり、水素原子もしくはＳＯ₃Ｍ基を表わし、Ｒ₂およびＲ₇
は同一であるかもしくは異なり、水素原子もしくはＳＯ₃ＭもしくはＣＯＣＨ₃基
を表わしそしてＭはナトリウム、カルシウム、マグネシウムもしくはカリウムで
ある］のオリゴ糖、もしくはこれらのオリゴ糖の混合物の使用。