JP2003521461A - ガラクトースα１，３ガラクトシルエピトープを含有する結合体およびそれを使用する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、超急性拒絶の主要なエフェクター分子である抗αＧａｌ抗体（ＩｇＭ抗体を含む）に結合する能力が顕著に増加した、αＧａｌ結合体、これらの結合体を含む組成物、およびこれらの結合体を使用する方法を提供する。さらに本発明は、結合手プラットホーム分子およびαＧａｌエピトープを含む結合体を提供する。ここで、この結合手プラットホーム分子は、２と１２８との間の結合価を有する。αＧａｌエピトープは、抗αＧａｌ抗体に特異的に結合する任意の部分であり得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （関連出願の引用） 本出願は、米国仮特許出願第６０／１１１，６４４号（１９９８年１２月９日
出願）および同第６０／１６０，９９７号（１９９９年１０月２３日出願）の優
先権を主張し、両方の開示は、その全体が参考として援用される。

【０００２】 （連邦政府によって資金提供された研究の下で行われた発明に対する権利の記
載） （適用なし）。

【０００３】 （技術分野） 本発明は、異種移植および免疫寛容性の分野に関する。より具体的には、本発
明は、循環抗αＧａｌ抗体のレベルを低減し、そして異種移植組織に対する免疫
寛容性を誘導する際に使用するためのガラクトースα１，３ガラクトシルエピト
ープ（αＧａｌ）の結合体に関する。

【０００４】 （背景） 器官移植の必要性はますます増加しているが、移植のために利用可能なヒト器
官の決定的な不足により悪化している。同種移植のためのヒト組織の不足を克服
するために異種移植を利用するという可能性は、決定的な器官不足に対する可能
な解決策であるが、それ自体、重大な問題をもたらす。

【０００５】 異種移植片の２つの基本的な型が研究されている。調和性異種移植片（ｃｏｎ
ｃｏｒｄａｎｔ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ）において、ドナー動物からの器官は、ド
ナー器官に対する抗体が欠如した類似の種に移植される。調和性器官の拒絶は、
通常、主要組織適合性抗原における差異に対するＴ細胞媒介反応により生じる。
調和性異種移植は、早くも１９６３年にはヒト患者に対して適用され、最も高名
な症例は、ヒト新生児に対してヒヒの心臓を移植したことである。Ａｕｃｈｉｎ
ｃｌｏｓｓら（１９９８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：４３３。不
調和性移植片においては、ドナーおよびレシピエントは、系統発生的により遠く
、そしてレシピエントは、ブタ器官が旧世界霊長類へ移植された場合のように、
ドナー器官に対する抗体を有した。これらの異種移植片は、超急性拒絶（ＨＡＲ
）という現象に起因して、最初の数分以内に拒絶される。

【０００６】 ヒトおよび旧世界霊長類において、ガラクトースα１，３ガラクトシル（αＧ
ａｌ）エピトープに対して特異的な天然の抗体は、ブタのような動物から異種移
植された器官の超急性拒絶（ＨＡＲ）および遅延型異種移植片拒絶（ＤＸＲ）の
両方を媒介する。ヒトおよび旧世界霊長類は、他の動物種の膜脂質および膜タン
パク質上に高レベルで発現されるガラクトースα１，３ガラクトシル（αＧａｌ
）残基に対する、高レベルの循環抗体を示す。Ｇａｌｉｌｉら（１９８８）Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１７７５５。このことは、ヒトおよび旧世界霊長
類が酵素α１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ（この酵素は、αＧａｌエピ
トープを発現するために必要である）を欠き（Ｓａｎｄｒｉｎら（１９９３）Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１１３９１）、そのため
に、通常の腸細菌叢で発現され、そして外来物質として認識されるαＧａｌエピ
トープに対する抗体を生成するという事実に起因している。対照的に、異種移植
片器官ドナー種（例えば、ブタ）は、α１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ
酵素を発現し、そのため、αＧａｌエピトープを発現する。多くのドナー組織細
胞に関して、１細胞につき約１０⁷のαＧａｌエピトープが存在すると予測され
る。Ｃｏｏｐｅｒら（１９９８）Ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５
：６−１７。

【０００７】 αＧａｌ発現不調和性器官が抗αＧａｌ抗体を生成するレシピエントに移植さ
れる場合、最初の有害な結果は、高レベル（循環ＩｇＭの４％まで）の、天然の
抗αＧａｌ Ｉｇにより媒介されるＨＡＲである。Ｐａｒｋｅｒ（１９９４）Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：３７９１。ヒトへのαＧａｌ保有移植片（ブタ島）
は、抗αＧａｌ応答を６４倍増加させることが示された。Ｇａｌｉｌｉら（１９
９５）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５９：１５４９。ブタ軟骨のカニクイ
ザルへの移植は、ＩｇＧ抗αＧａｌの３０〜３００倍の増加を生じ、そしてＩｇ
Ｍの２〜１６倍の増加を生じる。Ｇａｌｉｌｉら（１９９７）Ｔｒａｎｓｐｌａ
ｎｔａｔｉｏｎ ６３：６４６。これらの天然の抗体は、移植された器官の内皮
表面に発現するαＧａｌに結合し、これは、補体系および内皮細胞の両方を活性
化し、細胞に対して損傷を引き起こし、そして血管表面に最終的な前血栓状態を
築く。この結果は、損傷した内皮細胞、ならびに移植器官の虚血の急激な発生お
よび数分から数時間内に移植器官の機能的無能力を引き起こす広範囲の凝固であ
る。

【０００８】 抗αＧａｌ抗体はまた、遅延型異種移植片拒絶（ＤＸＲ）、しばしば拒絶を生
じる異種移植器官に対する中時間（数日）の損傷において役割を果たす。Ｂａｃ
ｈら（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１：８６９−８７３。抗αＧａｌ抗体
は内皮細胞に結合し、そしてＡＤＣＣのような細胞媒介性応答過剰を媒介し、移
植器官の機能を損なう、血管および組織の損傷をもたらす。抗αＧａｌ抗体はま
た、異種移植片細胞上のレセプターの慢性的活性化および／または異種移植片特
異的抗原の免疫原性の増加を生じ得る。Ｃｏｏｐｅｒら（１９９８）Ｘｅｎｏｔ
ｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５：６−１７。抗αＧａｌ抗体レベルの減少は
、この損傷を減じ得るが、急性でない場合ですら、この損傷は蓄積され、最終的
に器官拒絶がもたらされ得る。

【０００９】 抗αＧａｌ抗体結合の主要な後遺症を扱うための種々のストラテジーが追求さ
れてきた。これらとしては、１）抗αＧａｌ抗体により直接的にまたは間接的に
媒介されるエフェクター機能の阻害；２）レシピエントの抗αＧａｌ抗体の除去
；３）レシピエントの、致死未満の照射ならびに自己およびドナー骨髄を用いた
再構築；４）ドナー組織のグリコシル化の改変；５）レシピエントにおける抗α
Ｇａｌ抗体の抑制；ならびに６）ドナー組織に見出されるαＧａｌ部分のレシピ
エントに対する投与が挙げられる。

【００１０】 抗αＧａｌ抗体結合により媒介されるエフェクター機能を阻害することを試み
る際に、補体調節タンパク質（崩壊促進因子（ＤＡＦ、ＣＤ５５）および同種拘
束因子（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）（Ｈ
ＲＦ、ＣＤ５９））についてトランスジェニックであるドナー動物を作出するた
めに大きな努力が払われてきた。Ｓｃｈｍｏｅｋｅｌら（１９９６）Ｔｒａｎｓ
ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６２：７２９；およびＢｙｒｎｅら（１９９７）Ｔｒａ
ｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６３：１４９。これらのタンパク質（補体活性化（
ＲＣＡ）調節因子遺伝子ファミリーのメンバー）は、急性炎症および細胞溶解活
性を媒介する補体タンパク質の生成をダウンレギュレートし得る。しかし、ＲＣ
Ａタンパク質のトランスジェニック発現は、内皮細胞活性化に続く最終的な前血
栓状態を引き起こす、内皮細胞への抗αＧａｌ抗体結合の影響に取り組むもので
はなかった。従って、ＲＣＡトランスジェニックドナー器官は、ＨＡＲに対して
は改善に役立つ効果を有し得る一方、このアプローチは、異種移植片損傷が抗α
Ｇａｌ抗体に結合するエフェクター細胞によって媒介されるＤＸＲに対しては効
果を有さない。さらに、移植器官上でのＲＣＡ分子の発現は、宿主／レシピエン
ト免疫応答の防御機能から移植片を保護し得る一方、移植器官が、（ウイルスま
たは細菌感染由来の）病原体抗原を発現するとすれば、補体により媒介される防
御抗体エフェクター機能は効率的に遮断され、器官が病原体感染細胞に満ちてい
る宿主が残される。これらの理由のために、補体制御を目的としたストラテジー
は、受け入れ可能なレジメンが開発されて、抗体応答が低減されなければ、長期
間の移植片生存を達成するには不十分であると考えられている。Ｓｏｕｌｉｌｌ
ｏｕ（１９９８）Ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５：１−２。

【００１１】 レシピエントの病原性抗αＧａｌ抗体を除去することは、ブタ組織の生存の長
期化を示した。Ｃｏｏｐｅｒら（１９９６）Ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔ
ｉｏｎ ４：２７。しかし、天然の抗αＧａｌ抗体をアフェレーシスによって取
り除く試みは、一時的に有効であったにすぎず、そして抗体媒介器官拒絶をごく
わずかな遅延を生じるにすぎない。抗αＧａｌ抗体の病原性レベルは、１〜２日
以内に戻り、そして異種移植片損傷を媒介する。Ｓａｂｌｉｎｓｋｉら（１９９
５）Ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ２：２６４；Ｃｏｏｐｅｒら（
１９９８）Ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５：６。従って、ＨＡＲ
の影響を低減するためには、非常に頻繁なエキソビボプラスマフェレーシスが必
要である。さらに、抗αＧａｌ抗体が非常に低いためにＨＡＲを媒介できないが
、ＤＸＲを媒介するレベルによる蓄積損傷は、プラズマフェレーシスストラテジ
ーを用いて回避することはできない。さらに、現在利用可能な薬理学的介入（組
み合わせたとしても）は、抗αＧａｌ抗体生成を阻害するに適度な効果を有する
にすぎない。Ｃｏｏｐｅｒら（１９９８）Ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉ
ｏｎ ５：６。従って、抗αＧａｌ応答の恒久的な抑制がこのアプローチを用い
て起こり得るという可能性は低いようである。

【００１２】 混合キメラ現象の使用（ヒト組織レシピエントは、致死未満に照射され、そし
て自己およびブタ骨髄で再構築される）が企図された。αＧａｌを発現しないα
Ｇａｌトランスフェラーゼノックアウトマウスは、混合造血キメラ現象に寛容性
であった。Ｔｈａｌｌら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．。しかし、霊長類に
おけるブタ骨髄細胞の微少なキメラ現象（ｍｉｃｒｏｃｈｉｍｅｒｉｓｍ）の開
始は、問題を含み、なぜなら、霊長類骨髄は、必須の種特異性造血性サイトカイ
ン／増殖因子が、霊長類骨髄においてそれらの移植を容易にしないからである。

【００１３】 ドナー組織（例えば、ブタ血管内皮細胞）のグリコシル化を改変する試みもま
た、企図された。しかし、グリコシル化改変をもたらすように作出されたブタノ
ックアウト（ＫＯ）は、ブタ胚幹細胞の欠如に起因して達成されていない。α１
，３ガラクトシルトランスフェラーゼ酵素（αＧａｌ部分の発現をもたらす）の
排除をもたらす同種組換えは、マウスにおいて達成された。Ｔｈａｌｌら（１９
９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２１４３７。αＧａｌノックアウト心
臓は、エキソビボ系でヒト血清を用いて灌流された場合にもなお、急激な拒絶を
受けた。このことは、αＧａｌ生成を減少することにより、フォルスマン抗原の
ような、他の異種抗原を増加させ得ることを示す。Ｔａｎｇｅら（１９９７）Ｘ
ｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ４：２０。さらに、細胞表面での糖質
抗原発現の過剰な改変は、発生および分化に対して有害な影響を有し得る。フコ
シルトランスフェラーゼについてのトランスジェニック動物を作出することによ
ってαＧａｌ発現を減少する試みは、抗原発現を十分に減少しない。Ｇａｌｉｌ
ｉら（１９９８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ９：２８。従っ
て、αＧａｌ発現を改変するという一般的なアプローチは、理論的には興味をそ
そられるが、適切ではないかもしれない。

【００１４】 ＰＣＴ出願ＷＯ９８ＵＳ２１０３は、一般に、寛容性を誘導するためのαＧａ
ｌ組成物を記載する。フランス国特許出願第ＦＲ２７５１３４６号（ＷＯ９８０
３６５３に基づく）は、拒絶に関与する分子に対する抗体をコードするポリヌク
レオチドを含む、移植のためのトランスジェニック細胞を記載する。ＰＣＴ出願
ＷＯ９７１６０６４は、細胞表面糖質エピトープ（例えば、αＧａｌ）を改変す
る機能的糖質エピトープ改変遺伝子産物を発現するトランスジェニック細胞を記
載する。ＰＣＴ ＷＯ９５０６６１（α１，３−ガラクトシルトランスフェラー
ゼをコードする核酸配列）およびＰＣＴ ＷＯ９４２１７９９（α１，３−ガラ
クトシルトランスフェラーゼをコードする核酸配列）もまた参照のこと。

【００１５】 まとめると、ヒトおよび旧世界霊長類において、ガラクトースα１，３ガラク
トシル（αＧａｌ）エピトープに対して特異的な天然の抗体は、ブタのような動
物から異種移植された器官の、超急性拒絶（ＨＡＲ）および遅延型異種移植片拒
絶（ＤＸＲ）両方を媒介する。抗αＧａｌ媒介性の補体活性化および内皮細胞活
性化は、移植器官の内皮細胞に対して急性の最終的な前凝固状態を誘導し、この
ことによって急激な凝固、虚血および器官機能の喪失がもたらされる。天然の抗
αＧａｌ抗体を除去する試みは、一時的に有効であったにすぎず、ごくわずかに
遅延した抗体媒介性器官拒絶を生じた。

【００１６】 異種移植の有効性を促進するために、循環αＧａｌ抗体の影響を妨げる組成物
（例えば、寛容原）および方法を開発することが非常に必要とされる。

【００１７】 本明細書中に引用される全ての刊行物は、その全体が参考として援用される。

【００１８】 （発明の要旨） 本発明者らは、超急性拒絶の主要なエフェクター分子である抗αＧａｌ抗体（
ＩｇＭ抗体を含む）に結合する能力が顕著に増加した、αＧａｌ結合体を発見し
た。従って、本発明は、これらの結合体、これらの結合体を含む組成物、および
これらの結合体を使用する方法を提供する。

【００１９】 従って、１つの局面において、本発明は、結合手プラットホーム分子（ｖａｌ
ｅｎｃｙ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）およびαＧａｌエピトープを
含む結合体を提供する。ここで、この結合手プラットホーム分子は、２と１２８
との間の結合価（ｖａｌｅｎｃｙ）を有する。好ましい実施形態は、２、４、６
、８、１０、１２、１６、２０、および２５の結合価を有する結合手プラットホ
ーム分子を含む。αＧａｌエピトープは、抗αＧａｌ抗体に特異的に結合する任
意の部分であり得る。

【００２０】 別の局面において、本発明は、結合手プラットホーム分子およびαＧａｌエピ
トープを含む結合体を提供する。ここで、この結合手プラットホーム分子は、少
なくとも２、４、６、８、１０、１２、１６、２０、および２５の結合価を有す
る。αＧａｌエピトープは、抗αＧａｌ抗体に特異的に結合する任意の部分であ
り得る。

【００２１】 別の局面において、本発明は、本明細書中に記載される結合体を含む組成物を
提供し、そして好ましくは、有効量の、本明細書中に記載される結合体のいずれ
かを含む。いくつかの実施形態において、この組成物は、薬学的賦形剤を含む。

【００２２】 別の局面において、本発明は、個体における抗αＧａｌ抗体の循環レベルを低
減する方法を提供し、この方法は、有効量の、本明細書中に記載の結合体のいず
れかを上記個体に投与する工程を包含し、ここで有効量は、抗αＧａｌ抗体の循
環レベルを低減するに十分な量である。

【００２３】 別の局面において、本発明は、個体における抗αＧａｌ抗体の循環レベルを中
和する方法を提供し、この方法は、有効量の、本明細書中に記載される結合体の
いずれかを上記個体に投与する工程を包含し、ここで、有効量は、抗αＧａｌ抗
体の循環レベルを中和するに十分な量である。

【００２４】 別の局面において、本発明は免疫学的寛容性（一般に、異種移植抗原（より具
体的にはαＧａｌ）に対する）を誘導する方法を提供し、この方法は、有効量の
、本明細書中に記載される結合体のいずれかを上記個体に投与する工程を包含す
る。

【００２５】 別の局面において、本発明は、生物学的サンプルにおける抗αＧａｌ抗体の存
在および／または量を検出する方法を提供し、この方法は、（ａ）本発明のαＧ
ａｌ結合体と、生物学的サンプルとを、安定な抗原−抗体複合体の形成を可能に
する条件下で接触させる工程；および（ｂ）存在する場合、工程（ａ）において
形成された安定な複合体を検出する工程、を包含する。

【００２６】 別の局面において、本発明は、個体における異種移植を行うための方法を提供
し、この方法は、（ａ）本明細書中に記載される結合体または組成物のいずれか
を上記個体に投与する工程；および（ｂ）個体に異種組織を導入する工程、を包
含する。

【００２７】 別の局面において、本発明は、個体における、αＧａｌエピトープを含む移植
組織の拒絶を抑制する方法を提供し、この方法は、本明細書中に記載の結合体の
いずれかを拒絶を抑制するに十分な量で上記個体に投与する工程を包含する。

【００２８】 （発明を実施する形態） 本発明者らは、循環する抗αＧａｌ抗体に結合し、そしてこの抗体を清澄する
こと、およびαＧａｌ特異的Ｂ細胞に結合し、そしてこの細胞を寛容化する（ｔ
ｏｌｅｒｉｚｅ）ことの両方のために設計された、結合体を発見した。これらの
結合体は、抗αＧａｌ抗体を、一時的および／またはより永久的にのいずれであ
ろうと、中和、低減および／または除去するために（すなわち、αＧａｌエピト
ープ保有器官の可能なレシピエントにおける抗αＧａｌ抗体応答をくじきそして
／または排除する寛容原として）使用され得る。これらはまた、循環するレベル
の抗αＧａｌ抗体を検出するために、使用され得る。本発明者らは、１価プラッ
トホーム分子およびαＧａｌエピトープを含む結合体が、結合価に依存する様式
で、抗αＧａｌ ＩｇＧおよびＩｇＭ（超急性拒絶の主要なエフェクター分子）
に結合し得、そしてこれらの循環から除去され得ることを見出した。このことは
、ＩｇＧ抗αＧａｌ抗体の高い親和性およびＩｇＭ応答のより低い親和性である
がより高いアビディティと一致する。

【００２９】 （一般的な技術） 本発明の実施は、他に示さない限り、分子生物学（組換え技術を含む）、微生
物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来の技術を使用し、これらは当業者
の能力内である。このような技術は、以下のような文献に完全に説明される：「
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａ
ｌ」、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔ
ｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；「Ａｎｉｍ
ａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ）編、１９８７
）；「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌ
ｌ編）；「Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａ
ｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ」（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、
１９８７）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；「ＰＣＲ：
Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ」、（Ｍｕｌｌ
ｉｓら編、１９９４）；および「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）。

【００３０】 （定義） 「αＧａｌエピトープ」とは、抗αＧａｌ抗体に対する特異的な結合を示す、
任意の化学部分である。そういうものとして、αＧａｌエピトープの例としては
、α−Ｄ−ガラクトピラノシド部分、Ｇａｌ、Ｇａｌα１−３Ｇａｌ、Ｇａｌα
１−４Ｇａｌ、Ｇａｌα１−６Ｇａｌ、Ｇａｌα１−３Ｇａｌα１−３ＧｌｃＮ
Ａｃ、Ｇａｌα１−３Ｇａｌα１−４Ｇａｌ、Ｇａｌα１−３Ｇａｌα１−４Ｇ
ｌｃＮＡｃ、Ｇａｌα１−３Ｇａｌα１−４Ｇｌｃ、Ｇａｌα１−３Ｇａｌα１
−４［３−デオキシ］ＧｌｃＮＡｃ、Ｇａｌα１−３Ｇａｌα１−４［６−デオ
キシ］ＧｌｃＮＡｃ、Ｇａｌα１−３Ｇａｌα１−４Ｇａｌα１−３Ｇａｌ、Ｇ
ａｌα１−３Ｇａｌα１−４ＧｌｃＮＡｃα１−３Ｇａｌα１−４Ｇｌｃ（Ｍｃ
Ｋａｎｅら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（１９９８）６６：６２６〜６３
３；Ｗｉｅｓｌａｎｄｅｒら、Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ（１９９０）７：
８５〜１００；Ｇａｌｉｌｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８８）２６３
：１７７５５〜１７７６２；Ｇａｌｉｌｉら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９８５
）１６２：５７３〜５８２）；ペプチド、ならびに前述のものの任意の多量体お
よび組み合わせを含む任意の部分が挙げられるが、これらに限定されない。本発
明の結合体に適切であるαＧａｌエピトープのさらなる議論は、以下に記載され
る。

【００３１】 抗体に「特異的に結合する」エピトープとは、当該分野においてよく理解され
る用語であり、そしてこのような特異的な結合を決定する方法もまた、当該分野
において周知である。ある分子が、代替の細胞または物質と反応もしくは会合す
るよりさらに頻繁に、さらに迅速に、より長い持続時間を伴って、および／また
はより大きな親和性を有して、特定の細胞または物質と反応もしくは会合する場
合に、その分子は「特異的な結合」を示すと言われる。ある抗体が、他の物質と
結合するよりさらに大きな親和性、アビディティ、さらなる容易さ、および／ま
たはより長い持続時間を伴って、ある標的に結合する場合に、その抗体はその標
的に「特異的に結合する」。用語「エピトープ」はまた、以下に記載される、α
Ｇａｌ自体の模倣物を含む。

【００３２】 本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、およびこの説明が当
業者に対して明らかにする場合に、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」
は、そうでないと文脈が明らかに示さない限り、複数の参照を含む。

【００３３】 「抗αＧａｌ抗体」または「αＧａｌ抗体」は、本明細書中において交換可能
に使用され、αＧａｌに特異的に結合する任意の抗体である。任意の抗体とは、
ＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＭなどの任意のクラスの抗体、ならびにいかなる特
定のクラスのものである必要もない抗体を含む。本明細書中に提供される「抗体
」の定義に明らかに示されるように、「抗αＧａｌ抗体」とは、この必須の機能
（すなわち、αＧａｌに特異的に結合する）特性を示す任意のフラグメント（例
えば、Ｆａｂフラグメントなどの、可変領域を含むフラグメント）を含む。以下
に考察されるように、任意の抗αＧａｌ抗体（または機能的フラグメント）に対
する特異的な結合が、十分であることが理解される。

【００３４】 「抗体」（複数形で交換可能に使用される）とは、免疫グロブリン分子の可変
領域に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を通して、標的（例えば、炭水化
物またはポリペプチド）に特異的に結合し得る、免疫グロブリン分子である。本
明細書中において使用される場合に、この用語は、インタクトな抗体のみでなく
、そのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂、Ｆｖ）、単
鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗体タンパク質を含む融合タンパク質、ヒト化抗
体、および必要な特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の他の任意の
改変構造をも含む。

【００３５】 「天然に存在する」とは、炭水化物、ポリヌクレオチド配列またはポリペプチ
ド配列（すなわち、天然に見られるもの）などの、内因性化学部分を表す。天然
に存在する部分のプロセシングは、１以上の工程で起こり得、そしてこれらの用
語は、全ての段階のプロセシングを含む。逆に、「天然には存在しない」部分と
は、他のすべての部分（すなわち、組換えポリヌクレオチド配列および天然には
存在しない炭水化物のような、天然には存在しない部分）を表す。

【００３６】 本明細書中において使用される場合に、用語「模倣物」（「アナログ」とも呼
ばれる）は、抗αＧａｌ抗体に特異的に結合する、生物学的化合物または化学化
合物を意味する。そういうものとして、本発明の目的のために、「αＧａｌエピ
トープ」は、天然に存在するαＧａｌの模倣物（例えば、ペプチド）を含む。「
模倣物」は、αＧａｌと、エピトープまたは結合特異性を共有する。模倣物は、
必要な結合特性を示す任意の化学物質であり得、従って例えば、単純なもしくは
複雑な有機分子もしくは無機分子；ポリペプチド；ポリヌクレオチド；炭水化物
；脂質；リポ多糖類；リポタンパク質、または上記のものの任意の組み合わせで
あり得、ポリヌクレオチド含有ポリペプチド；グリコシル化ポリペプチド；およ
び糖脂質が挙げられるが、これらに限定されない。用語「模倣物」は、当該分野
において周知な用語である用語「ミモトープ（ｍｉｍｏｔｏｐｅ）」を含む。

【００３７】 「個体」は、脊椎動物であり、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはヒ
トである。哺乳動物としては、家畜、狩猟動物、ペット、霊長類、マウスおよび
ラットが挙げられるが、これらに限定されない。

【００３８】 「寛容を誘導する」とは、免疫原に対する免疫応答の程度の減少および／また
は安定化を意味する。「免疫応答」は、体液性および／または細胞性であり得、
そして当該分野において公知の標準的なアッセイを使用して、測定され得る。本
発明の目的のために、免疫応答は、一般的に、抗αＧａｌ抗体の存在によって反
映される。定量的に、その減少（抗体産生および／または抗体レベルの減少によ
り測定する場合）は少なくとも約１５％、より好ましくは少なくとも約２５％、
より好ましくは少なくとも約５０％、より好ましくは少なくとも約７５％、より
好ましくは少なくとも約９０％、さらにより好ましくは少なくとも約９５％、そ
して最も好ましくは１００％である。この寛容は抗原特異的であること、および
本発明の目的のために、抗αＧａｌ抗体を有する個体に適用されることが、理解
される。「寛容を誘導する」はまた、抗体レベルの増加の速度を遅くすることお
よび／または遅延させることを包含する。

【００３９】 「有効量」（免疫寛容を生じる文脈において使用される場合）とは、有利な結
果または所望の結果（臨床的結果を含む）をもたらすに十分な量である。有効量
は、１回以上の投与で投与され得る。本発明の目的のために、本発明の結合体（
または本発明の結合体を含む組成物）の有効量とは、（必須ではないが）好まし
くは寛容を誘導すること（特に抗αＧａｌ抗体に対して）によって、循環レベル
の抗αＧａｌ抗体を減少させるに十分な量である。処置の観点において、本発明
の結合体の「有効量」（または本発明の結合体を含む組成物）とは、αＧａｌ含
有移植組織の拒絶を、軽減するか、改善するか、安定化するか、逆行させるか、
進行を遅くするかもしくは遅延させるか、または防止するに十分な量である。効
力の指標の検出および測定は、一般的に、αＧａｌ抗体および／または移植拒絶
に関連する臨床的症状の測定に基づく。

【００４０】 超急性拒絶の場合には、抗αＧａｌのαＧａｌ発現血管への結合の後の、分子
の変化には、相補的活性化およびドナー内皮細胞活性化が挙げられる。これは、
ドナー内皮を抗凝固環境からプロ凝固（ｐｒｏｃｏａｇｕａｌｉｔｉｖｅ）表面
へと移動させる。これは次いで、移植器官の脈管系における凝固をもたらし、そ
してその器官における虚血状態をもたらす。従って、数分〜２時間の間で、この
器官への血流は中断され、そして移植された器官が黒くなり、硬さを増す。超急
性拒絶が、抗体の除去（フェレーシス）または補体調節によって回避される場合
には、移植に続いて産生される抗体は、異種移植片拒絶の遅延をもたらし得、こ
こで、移植器官の内皮に結合した抗体は、移植細胞活性化、ＮＫ細胞結合、抗体
依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、および異種移植片特異性抗原の免疫原
性の増加を媒介し得る。

【００４１】 従って、移植拒絶の指標および／または臨床的症状としては、器官機能の減少
または欠損（例えば、腎臓については尿排出の変化；および心臓については拍動
の変化）；補体活性化（例えば、Ｃ３ａ、Ｃ５ａ、およびＣ５ｄ−９などの、補
体カスケードの成分の存在または増加したレベルにより示されるような）；ＮＫ
活性；ならびに抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）が挙げられるが、こ
れらに限定されない。例えば、心機能は、適切なマーカー（例えば、血清中のク
レアチンキナーゼ（ＣＫ）、およびＣＫイソエンザイムＣＫ ＭＢ、ならびに乳
酸デヒドロゲナーゼ）を測定することによって、モニタリングされ得る。腎不全
は、血尿、尿排出の減少、血液尿素窒素レベルの増加、血清中クレアチニンレベ
ルの増加、高血圧、およびタンパク尿により特徴付けられる。従って、これらの
パラメーターは、腎臓異種移植片拒絶をモニタリングする手段として、モニタリ
ングされ得る。

【００４２】 本明細書中において使用される場合に、「結合手プラットホーム分子（ｖａｌ
ｅｎｃｙ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」とは、別個の数のエピトー
プおよび／またはエピトープ模倣物の付着が可能である部位を含む、非免疫原性
分子を意味する。結合体または結合手プラットホーム分子の「結合価（ｖａｌｅ
ｎｃｙ）」は、αＧａｌエピトープについての１分子あたりの付着部位の数を示
す。あるいは、結合体の結合価は、αＧａｌエピトープ対結合手プラットホーム
分子の比（絶対であれ平均であれ）である。

【００４３】 「非免疫原性」とは、結合手プラットホーム分子を記載するために使用される
場合には、その結合手プラットホーム分子が、単独で個体に投与された場合に、
免疫応答を惹起し損なうこと、および／または十分な免疫応答を惹起し損なうこ
とを意味する。受容可能な免疫応答の程度は、結合手プラットホーム分子が使用
される状況に依存し、そして経験的に決定され得る。

【００４４】 「生物学的サンプル」とは、個体から得られる様々なサンプルの種類を含み、
そして診断アッセイまたはモニタリングアッセイにおいて使用され得る。この定
義は、血液および他の生物起源の液体サンプル、バイオプシー標本もしくは組織
培養物またはそれらに由来する細胞のような固体組織サンプル、ならびにこれら
の子孫を含む。この定義はまた、獲得後に任意の方法（例えば、試薬での処理、
可溶化、またはタンパク質もしくはポリヌクレオチドのような特定の成分の濃縮
）で操作されたサンプルを含む。用語「生物学的サンプル」は、臨床的サンプル
を含み、そしてまた、培養物中の細胞、細胞上清、細胞溶解物、血清、血漿、生
物学的流体、および組織サンプルを含む。

【００４５】 生化学反応において任意の２つ以上の成分の間で形成される、「安定な複合体
」とは、二重複合体（ｄｕｐｌｅｘ）または複合体の形成と引き続く検出（いず
れかの任意の洗浄工程またはその間に起こり得る他の操作を含む）との間十分に
長く持続する、二重複合体または複合体を表す。

【００４６】 用語「中和する」は、循環する抗αＧａｌ抗体に関して使用される場合には、
当該分野において十分に理解される用語であり、そして本発明のαＧａｌ結合体
が循環する抗αＧａｌ抗体に結合し、その結果、本発明のαＧａｌ結合体は、ド
ナー組織上のαＧａｌエピトープにはもはや結合し得ないことを意図する。

【００４７】 用語「循環する抗αＧａｌ抗体」とは、本明細書中において使用される場合に
、ドナー組織／器官上のαＧａｌ抗原／エピトープに結合しない、抗αＧａｌ抗
体（すなわち、遊離抗体）を意図する。循環する抗体の「レベル」とは、抗体の
量（ａｍｏｕｎｔ（ｑｕａｎｔｉｔｙ））を意味する。循環する抗αＧａｌ抗体
の「減少した」レベルとは、遊離（すなわち結合していない）循環する抗体のレ
ベルが減少したことを意味する。遊離抗体のレベルを、多数の方法のいずれかに
よって減少させ得、その方法としては、結合体を結合させること（その結果、抗
体はもはやエフェクター分子ではあり得ない）；クリアランス（循環からの除去
）；例えばＢ細胞アネルギーを介する生成の減少が挙げられる。

【００４８】 ある事象（例えば、抗αＧａｌ抗体に結合するエピトープへの、抗αＧａｌ抗
体の結合）が起こることを「可能にする」かまたは「許容する」条件とは、この
ような事象が起こることを妨げない条件である。従って、これらの条件は、その
事象を強化し、容易にし、そして／または進行させる。当該分野において公知で
あり、そして本明細書中に記載されるような条件は、当該分野において標準的な
方法を使用して、決定および実施され得る。

【００４９】 （本発明の結合体） 移植された組織上に存在するαＧａｌに対する望ましくない免疫応答反応に基
づく異種移植拒絶反応の予防、軽減、および／または遅延に有用な結合体を提供
する。本発明の結合体は、（ａ）αＧａｌエピトープ；および（ｂ）結合手プラ
ットホーム分子を含む。必要に応じて、リンカーは、以下に記載されるように、
プラットホームとαＧａｌエピトープの間に提供される。種々の結合価が許容さ
れ、特に好ましい結合価は、以下に記載される。

【００５０】 （αＧａｌエピトープ） 本発明の結合体における使用のためのαＧａｌエピトープは、αＧａｌ抗体に
特異的に結合する任意の化学部分であり得る。そのように、αＧａｌエピトープ
を含む結合体は、αＧａｌエピトープを含む任意の分子または部分を含む結合体
である。

【００５１】 αＧａｌの化学構造が公知であり、エピトープが公知の（α−Ｄ−ガラクトピ
ラノシド）であるので、天然に存在するαＧａｌからαＧａｌエピトープを調製
し、得られ得る。

【００５２】 より好ましくは、αＧａｌエピトープはまた、標準的な化学合成方法を使用し
て合成的に作製され得る。合成的に生成されたαＧａｌの例は、実施例１に提供
される。従って、本発明の結合体に使用されるαＧａｌエピトープの例には、以
下が挙げられるが、これらには限定されない：２−［２−（２−チオエトキシ）
エトキシ］エチル ３−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−ガラク
トピラノシド；２−［２−（２−チオエトキシ）エトキシ］エチル ６−Ｏ−（
α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド；２−［２−（２
−ベンゾイルチオエトキシ）エトキシ］エチル α−Ｄ−ガラクトピラノシド；
２−［２−（２−ｔｅｒｔ−ブチルジチオエトキシ）エトキシ］エチル α−Ｄ
−ガラクトピラノシド；２−［２−（２−ｔｅｒｔ−ブチルジチオエトキシ）エ
トキシ］エチル ３−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−ガラクト
ピラノシド；２−［２−（２−ｔｅｒｔ−ブチルジチオエトキシ）エトキシ］エ
チル ３−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド
；ｐ−アミノフェニル−３−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−ガ
ラクトピラノシド。

【００５３】 「αＧａｌエピトープ」の定義において明らかにされるように、αＧａｌエピ
トープは、天然に存在する炭水化物部分に基づくことも、それから誘導されるこ
とも必要ないが、例えば、ペプチドであり得る。ペプチドαＧａｌエピトープの
例は、ＷＯ９７／１１９６３に提供される。αＧａｌエピトープはまた、他の有
機部分から構成され得る。例えば、一連の有機化合物（ランダムに生成されるか
またはランダムでなく設計される）が合成され得、必要な結合活性についてスク
リーニングされ得る。

【００５４】 特異的結合の検出は、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、および競合アッセイのような当
該分野で標準的な技術を使用して行われ得る。抗αＧａｌ抗体は、例えば、アフ
ィニティクロマトグラフィーを使用して免疫された動物の血清のような抗αＧａ
ｌ抗体源から単離され得る。実施例は、抗αＧａｌ抗体の単離および適切なアッ
セイについての例示的な記載を提供する。

【００５５】 本発明の目的のために、１つより多いタイプのαＧａｌエピトープ（単数また
は複数）が結合体を調製する際に使用され得る。あるいは、αＧａｌエピトープ
の１つのタイプ（すなわち、１つの化学種）が使用され得る。

【００５６】 （結合手プラットホーム分子） 任意の種々の非免疫原性結合手プラットホーム分子（「プラットホーム」とも
呼ばれる）は、本発明の結合体において使用され得る。

【００５７】 プラットホームは、タンパク質様または非タンパク質様（すなわち、有機性）
であり得る。タンパク質様プラットホームの例には、アルブミン、ガンマグロブ
リン、免疫グロブリン（ＩｇＧ）およびオボアルブミンが挙げられるが、これら
には限定されない。Ｂｏｒｅｌら、（１９９０）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ １２６：１５９〜１６８；Ｄｕｍａｓら（１９９５）Ａｒｃｈ．Ｄｅｍａｔ
ｏｌ．Ｒｅｓ．２８７：１２３〜１２８；Ｂｏｒｅｌら（１９９５）Ｉｎｔ．Ａ
ｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０７：２６４〜２６７；Ｂｏｒｅ
ｌら（１９９６）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７７８：８０〜８７。

【００５８】 好ましくは、結合体は、化学的に規定された結合手プラットホーム分子を含み
、ここで、正確な結合価（平均とは対照的に）が提供される。特定のクラスの化
学的に規定された結合手プラットホーム、それらの調製方法、それらを含む結合
体、およびこのような結合体の調製方法は、米国特許第５，１６２，５１５号；
同第５，３９１，７８５号；同第５，２７６，０１３号；同第５，７８６，５１
２号；同第５，７２６，３２９号、同第５，２６８，４５４号；同第５，５５２
，３９１号；同第５，６０６，０４７号；および同第５，６６３，３９５号に記
載されている。従って、規定された結合手プラットホームは、規定された構造、
従って、規定された数の結合点および規定された結合価を有するプラットホーム
である。以前に記載されたより伝統的なプラットホームとは対照的に、これらの
プラットホームは、均質な（すなわち均一な）分子量（多分散な分子量とは対照
的）を有するという利点を有し、従って、「化学的に規定される」。従って、こ
れらのプラットホームを使用する一集団の結合体は、均質な分子量のプラットホ
ームを含むか、または実質的に単分散（すなわち、狭い分子量分布を有する）で
ある。プラットホーム分子の試料（例えば、組成物および／またはプラットホー
ム分子の集団）の分子量の分布の幅の尺度は、試料の多分散性である。多分散性
は、ポリマー試料の分子量の均質性または非均質性の尺度として使用される。多
分散性は、重量平均分子量（Ｍｗ）を数平均分子量（Ｍｎ）によって割ることに
よって計算される。Ｍｗ／Ｍｎの値は、完全に単分散性のポリマーについて単一
である。多分散性は（Ｍｗ／Ｍｎ）は、ゲル浸透クロマトグラフィーのような当
該分野で利用可能な方法によって測定される。プラットホーム分子の試料の多分
散性（Ｍｗ／Ｍｎ）は、好ましくは、２未満、より好ましくは１．５未満、また
は１．２未満、１．０７未満、１．０２未満、または例えば、約１．０５〜１．
５または、約１．０５〜１．２である。典型的なポリマーは、一般的に、２〜５
、またはある場合には２０以上の多分散性を有する。結合手プラットホーム分子
の低い多分散性特性の利点には、この分子がサイズにおいて実質的に均質であり
、分子量における幅広い変化に起因する生物学的活性における変化が、最小化さ
れるので、改善された生態適合性およびバイオアベイラビリティーが挙げられる
。従って、低い多分散性の分子は、薬学的に最適化されて処方され、分析が容易
である。さらに、試料中の分子の集団の制御された結合価がある。

【００５９】 いくつかの実施形態において、結合手プラットホーム分子は、カルバメート結
合（すなわち、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ＜）を含む。このようなプラットホームは
、「Ｖａｌｅｎｃｙ Ｐｌａｔｆｏｒｍ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ Ｃｏｍｐｒｉｓ
ｉｎｇ Ｃａｒｂａｍｔｅ Ｌｉｎｋａｇｅｓ」と題された共有に係る特許出願
、米国特許第６０／１１１，４１号に記載される。このようなプラットホームの
例は、化合物３０であり、これは、図７に示される。他の実施形態では、結合手
プラットホーム分子は、共有に係る米国特許６０／１３８，２６０号に記載され
る、アミノオキシ基を含む。

【００６０】 好ましい結合手プラットホーム分子は、生物学的に安定化され、すなわち、こ
れらは、治療的効力を与えるための、しばしば数時間〜数日〜数ヶ月のインビボ
排泄半減期を示し、好ましくは、規定された組成の合成的単一鎖から構成される
。これらは、一般的に、約２００〜約２００，０００、好ましくは、約２００〜
約５０，０００（またはそれ未満、例えば３０，０００）の範囲の分子量を有す
る。本発明の結合手プラットホーム分子の例は、ポリマーであるか、またはポリ
マーから構成され、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ−Ｄ−リ
シン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、Ｄ−グルタミン酸および
Ｄ−リシン（３：２の比で）が挙げられる。好ましいポリマーは、約２００〜約
８，０００の分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に基づく。本発
明の結合体の使用に適切な他のプラットホーム分子は、アルブミンおよびＩｇＧ
である。

【００６１】 本発明の使用に適切な他の好ましい結合手プラットホーム分子は、共有に係る
米国特許５，５５２，３９１に開示される、化学的に規定された非ポリマー性結
合手プラットホーム分子である。本発明の使用に適切な好ましい均質な化学的に
規定された結合手プラットホーム分子は、誘導２，２’−エチレンジオキシジエ
チルアミン（ＥＤＤＡ）およびトリエチレングリコール（ＴＥＧ）である。

【００６２】 別の適切な結合手プラットホーム分子には、テトラアミノベンゼン、ヘプタア
ミノベータシクロデキストリン、テトラアミノペンタエリトリトール、１，４，
８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（Ｃｙｃｌａｍ）および１，４，７，
１０−テトラアザシクロドデカン（Ｃｙｃｌｅｎ）が挙げられるが、これらに限
定されない。

【００６３】 一般的に、これらのプラットホームは、標準的な化学合成技術によって作製さ
れる。ＰＥＧは、誘導体化され、多価にされ、これは、標準的な技術を使用して
達成される。ＰＥＧ、アルブミン、およびＩｇＧのような結合体合成に適切ない
くつかの物質は、市販される。

【００６４】 構造が図６に示される化合物２５、２６、および２７のような結合手プラット
ホームの合成は、共有に係る米国特許第０８／６６０，０９２号および共有に係
る国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９６／０９９７６および同ＰＣＴ／ＵＳ９７／
１００７５に記載される。

【００６５】 構造が図６および７に示される、結合手プラットホーム２３、２４、２９、３
０、３１および３２の合成は、実施例２に記載される。

【００６６】 上で議論したように、αＧａｌエピトープは、任意の多数の方法によって、任
意の多数の適切なプラットホームに結合され得る。好ましい実施形態では、テト
ラブロモアセチルプラットホームＰＩＺ／ＩＤＡ／ＴＥＧプラットホームが使用
される。ＰＩＺ／ＩＤＡ／ＴＥＧ（ＰＩＴＧ）プラットホームの誘導体は、以下
に示されるように調製され得る。

【００６７】

【化１】 結合体実施形態の例として、αＧａｌエピトープは、化学的または酵素的合成
によって（またはαＧａｌエピトープがペプチドである場合、組換え方法によっ
て）、Ｎ末端にチオールリンカーを用いて調製される。リンカーは、システイン
またはＳＨ含有部分であり得る。次いで、改変エピトープは、適切に誘導された
プラットホーム（例えば、ブロモアセチルまたはヨードアセチル）によってアル
キル化され得る。

【００６８】 本発明の目的のために、結合手プラットホーム分子は、少なくとも２、好まし
くは少なくとも４、好ましくは少なくとも６、より好ましくは少なくとも８、好
ましくは少なくとも１０、好ましくは少なくとも１２の最小結合価を有する。上
限として、結合価は、一般的に１２８未満、好ましくは６４未満、好ましくは３
５未満、好ましくは３０未満、好ましくは２５未満、好ましくは２４未満、好ま
しくは２０未満であるが、上限は１２８を超え得る。特定の理論に束縛されるこ
とは望まないが、結合価は、一般的に、結合体がＴ細胞非依存性抗原になる（す
なわち、そのＴ細胞非依存性に起因するＢ細胞寛容性を誘導しない）数より上に
限定される。従って、本発明は、２、４、６、８、１０、１２、１６の任意の下
限の、１２８、６４、３５、３０、２５、２４、２０の任意の上限を有する範囲
の結合価を有する結合体を含む。

【００６９】 好ましくは、結合価は、少なくとも８（上記のように上限を有する）である。
実施例に記載されるように、オクタマーとしてプラットホームに存在する合成的
に調製されたαＧａｌエピトープは、血清中のＩｇＧとＩｇＭの抗αＧａｌの両
方を、ＢＳＡ−αＧａｌに、またはαＧａｌ発現ブタ腎臓上皮細胞株ＰＫ−１５
に結合することから阻害した。対照的に、テトラマー構築物のみが、ＩｇＧを除
去した。この差は、増加したエピトープ結合価によって打ち勝つＩｇＭ抗αＧａ
ｌ抗体の低い親和性に起因し得る。ＩｇＭがＨＡＲの大きなエフェクター分子で
あるので、これは重要である。ＥＬＩＳＡによって、２〜１０ｍｇ／ｋｇにおい
て、テトラマーに対する抗αＧａｌ応答の統計的に有意な減少はなかった。対照
的に、テトラマー結合体（「ＬＪＰ ７１２」と示され、実施例においてｃｐｄ
３８とも呼ばれる）の２０ｍｇ／ｋｇでの処理は、抗αＧａｌ ＩｇＧ応答を２
４％（ｐ＜０．０５）、そして抗αＧａｌ ＩｇＭレベルを１２％（ｐ＝ＮＳ）
減少を生じる。

【００７０】 いくつかの実施形態において、結合価は２である。他の実施形態では、結合価
は４である。他の実施形態では、８である。他の実施形態では、結合価は１６で
ある。他の実施形態では、結合価は以下のうちの任意である：６、１０、１４、
１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３４、３６、３８、４０、４２、
４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６６、６８、
７０、７２、７４、７６、７８、８０、９０、１２０、１２８。２の結合価を有
する結合手プラットホーム分子の例は、実施例２および図６に提供される。４の
結合価を有する結合手プラットホーム分子の例は、実施例２および図６に提供さ
れる。８の結合価を有する結合手プラットホーム分子の例は、実施例２および図
７に提供される。従って、本発明は、これらの結合手プラットホーム分子を含む
結合体を含む。

【００７１】 他の実施形態において、結合された場合、平均結合価を提供する結合手プラッ
トホーム（すなわち、これらのプラットホームはそれらの結合価に関して化学的
に規定されない）が使用され得る。このようなプラットホームの例は、直鎖ＰＥ
Ｇ；分枝ＰＥＧ；スターＰＥＧ；ポリアミノ酸；ポリリシン；タンパク質；アミ
ノ官能基化可溶性ポリマーのようなポリマーである。

【００７２】 （結合手プラットホーム分子とのαＧａｌエピトープの結合） 結合手プラットホーム分子とのαＧａｌエピトープの結合は、標準的な化学的
技術を用いて行われる。以下は、用いられ得る標準的な化学の例である：１）チ
オール置換；２）チオールマイケル付加；３）アミノアルキル化；４）ジスルフ
ィド結合形成。図４および図５は、一般的な、例示的な結合ストラテジーを提供
する。

【００７３】 αＧａｌエピトープの結合手プラットホーム分子との結合は、任意の多数の方
法により行われ得、その方法は、典型的に、１以上の架橋剤ならびにエピトープ
上および結合手プラットホーム分子上の官能基を含む。プラットホームおよびα
Ｇａｌエピトープは、適切な連結基を有さなければならない。連結基は、標準的
な合成化学技術を用いてプラットホームに付加される。連結基は、標準的な固相
合成技術または組換え技術（例えば、αＧａｌエピトープがペプチドの場合）の
いずれかを用いてαＧａｌエピトープに付加され得る。組換えアプローチは、リ
ンカーを結合させるために、翻訳後の修飾を必要とし得、そしてこのような方法
は当該分野において公知である。

【００７４】 さらなる例としては、αＧａｌエピトープがポリペプチドの場合、ポリペプチ
ドは、そのポリペプチドをプラットホームに結合させるための部位として作用す
る官能基（例えば、アミノ基、カルボキシル基、またはスルフヒドリル基）を有
するアミノ酸側鎖部分を有する。このような官能基を有する残基は、このポリペ
プチドがもうこれらの基を有していない場合、このポリペプチドに付加され得る
。このような残基は、固相合成技術または組換え技術により組み入れられ得、こ
れらの技術の両方は、ペプチド合成分野において周知である。ポリペプチドが炭
水化物側鎖を有する場合、アミノ官能基、スルフヒドリル官能基および／または
アルデヒド官能基は、従来化学により、その炭水化物側鎖に組み入れられ得る。
例えば、１級アミノ基は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下でのエチレン
ジアミンとの反応により組み入れられ得、スルフヒドリルは、二塩酸システアミ
ンとの反応、次いで標準的なジスルフィド還元剤を用いる還元により組み入れら
れ得、一方、アルデヒド基は、過ヨウ素酸酸化後に生成され得る。同様の様式で
、結合手プラットホーム分子もまた、それがもう適切な官能基を有していない場
合、官能基を有するように誘導体化され得る。

【００７５】 種々の長さの親水性リンカーは、αＧａｌエピトープを結合手プラットホーム
分子に連結するために有用である。適切なリンカーとしては、エチレングリコー
ルの直線状オリゴマーまたはポリマーが挙げられる。このようなリンカーとして
は、式Ｒ¹Ｓ（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_nＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｒ²（ここで、ｎ＝
０〜２００、ｍ＝１または２、Ｒ¹＝Ｈまたはトリチルのような保護基、Ｒ²＝Ｈ
またはアルキルもしくはアリール（例えば、４−ニトロフェニルエステル））を
有するリンカーが挙げられる。これらのリンカーは、チオエーテルを介して、チ
オール反応性基（例えば、ハロアセチル、マレイミドなど）を有する分子を、ア
ミド結合を介して、アミノ基を有する第二の分子と連結させる際に有用である。
これらのリンカーは、結合の順序に関してフレキシブルである（すなわち、チオ
エーテルは最初または最後に形成され得る）。

【００７６】 特定の結合が実施例３に記載され、そして図８〜１５に示されており、従って
、これらは、本発明の実施形態として提供される。

【００７７】 （本発明の組成物） 本発明はまた、本発明の任意の結合体を含む組成物を提供する。好ましくは、
この組成物は有効量の結合体を含む。「有効量」とは、所望の結果または意図さ
れる結果に依存し、そして経験的に決定され得る。例えば、抗αＧａｌ抗体の循
環レベルを減少させるために有効な量は、適切な試験または研究を行うことによ
り決定され得る。循環抗αＧａｌ抗体のレベルをより持続的に減少させる（すな
わち、寛容を誘導する）ために有効な量は、同様に、経験的に決定され得る。

【００７８】 試薬として（例えば、抗αＧａｌ抗体の検出の際に）用いられ得る組成物に関
しては、これらの組成物は、一般に、検出を行うために十分な量の本発明のαＧ
ａｌ結合体を含む。これらの量は、経験的に容易に決定される。これらの組成物
は、検出を行うため、および／または本発明の結合体上での、抗αＧａｌ抗体と
αＧａｌエピトープとの間の安定な複合体の形成を可能にするための物質（例え
ば、緩衝液）をさらに含み得る。これらの組成物はまた、必要に応じて固相のよ
うな検出マトリックス（例えば、免疫親和性カラム中で）と複合化され得る。

【００７９】 いくつかの実施形態においては、この組成物は、結合体および薬学的に受容可
能な賦形剤を含み、そして種々の処方物中であり得る。薬学的に受容可能な賦形
剤は、当該分野において公知であり、そして薬学的に有効な物質の投与を容易に
する、比較的不活性な物質である。例えば、賦形剤は、形もしくはコンシステン
シーを与え得るか、または希釈剤として作用し得る。適切な賦形剤としては、安
定化剤、湿潤剤および乳化剤、浸透圧を変化させる塩、カプセル剤、緩衝剤、な
らびに皮膚浸透増強剤が挙げられるが、これらに限定されない。非経口的な薬物
送達および経口的薬物送達のための賦形剤および処方物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ
’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１９版 Ｍａｃｋ
Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（１９９５）に記載されている。

【００８０】 一般的に、これらの組成物は、注射（例えば、腹腔内注射、静脈内注射、皮下
注射、筋肉内注射など）による投与のために処方される。従って、これらの組成
物は、好ましくは、薬学的に受容可能なビヒクル（例えば、生理食塩水、リンゲ
ル溶液、デキストロース溶液など）と組み合わせられる。一般的に、この結合体
は、溶解度および浸透圧のような実際的、経験的な要件により、通常この処方物
の約０．０１重量％〜１０重量％を構成する。特定の投与レジメン（すなわち、
用量、タイミングおよび繰り返し）は、特定の個体およびその個体の病歴に依存
する。一般的に、用量約１μｇ〜約１００ｍｇ結合体／ｋｇ体重、好ましくは、
約１００μｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは、約５０μｇ〜約５ｍｇ／ｋ
ｇ体重、好ましくは、約１μｇ〜約１ｇ結合体／ｋｇ体重、好ましくは、約５μ
ｇ〜約５００ｍｇ体重である。経験的な要件（例えば、半減期）は、一般的に、
投薬量の決定に寄与する。寛容原（ｔｏｌｅｒａｇｅｎ）として使用される場合
、結合体は、例えば、抗体クリアランス（フェレーシス）を行うために毎日投与
され得、続いて、より少ない頻度（例えば、１週間当たり２回、１週間に１回、
またはさらに少ない頻度）で投与され得る。投与の頻度は、治療の過程にわたっ
て決定および調整され得、それは寛容（すなわち、αＧａｌに対する減少された
免疫応答または免疫応答の欠乏）の維持に基づく。他の適切な投与スケジュール
は、個体または疾患の状態に依存して、毎日の頻度、または１週間当たり３用量
の頻度、または１週間当たり１用量の頻度、または２〜４週間毎に１用量の頻度
、または１ヶ月に１用量の頻度またはより少ない頻度のスケジュールであり得る
。繰り返し投与は、通常、Ｂ細胞代謝回転速度に従って時間を決められ、体液性
アネルギーの状態を達成および／または維持することが必要とされ得る。このよ
うな繰り返し投与は、一般に、３０〜６０日毎に（または抗αＧａｌ抗体レベル
の上昇が検出される場合は、より早く）約１μｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重以上の
処置を含む。あるいは、この組成物の持続放出性処方物が適切であり得る。持続
放出を達成するための種々の処方物およびデバイスは、当該分野において公知で
ある。

【００８１】 他の処方物としては、当該分野において公知の適切な送達形態が挙げられ、リ
ポソームのようなキャリアが挙げられるが、これらに限定されない。Ｍａｈａｔ
ｏら（１９９７）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１４：８５３−８５９。リポソーム調製
物としては、シトフェクチン（ｃｙｔｏｆｅｃｔｉｎ）、多重膜リポソームおよ
び単膜リポソームが挙げられるが、これらに限定されない。

【００８２】 いくつかの実施形態においては、１より多い結合体（例えば、エピトープの結
合価および／または性質に関して変化する混合物）が組成物中に存在し得る。こ
のような組成物は、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なく
とも４つ、少なくとも５つの異なる結合体を含み得る。このような「カクテル」
（当該分野においてしばしば表されるように）は、より広い範囲の個体の集団を
処置する際に特に有用であり得る。これらはまた、１つの結合体のみ（または、
このカクテルに含まれるよりも少ない結合体）を用いるよりもより有効である際
に有用であり得る。

【００８３】 この組成物は、単独でか、または本発明の結合体の有効性を増強するためおよ
び／もしくは補足するために役立つ他の形態の薬剤との組み合わせで投与され得
、抗ヘルパーＴ細胞処置を含むがこれに限定されない。このような処置は、通常
、ステロイドまたはシクロスポリンのようなＴ細胞を抑制する薬剤を使用する。
この組成物はまた、移植拒絶反応を抑制するために用いられる薬剤（例えば、免
疫抑制剤）と共に投与され得る。

【００８４】 結合体（または、本発明の結合体を含む組成物）の投与のために適する個体は
、αＧａｌを含む（すなわち、細胞表面上で発現される）ことが公知の組織また
はαＧａｌを含むと思われる組織を、有するかまたは受け入れる個体である。個
体をドナー器官または組織に対して寛容化するために、移植の前（一般的には、
少なくとも移植の約１日〜約５日前、好ましくは、少なくとも移植の約５日〜１
０日前、より好ましくは、少なくとも移植の約１０日〜約３０日前、さらにより
好ましくは、少なくとも移植の約３０日〜約６０日前）にこの結合体を投与する
ことが、一般的に好ましい。循環抗αＧａｌ Ａｂを中和するために（例えば、
急性の状況において）、この接合体は、異種移植と同時または異種移植の後のい
ずれかに投与され得る。従って、所望の結果に依存して、この結合体は、移植前
、移植の間、または移植後に投与される。好ましくは、この個体はヒトである。
抗αＧａｌ抗体の測定可能な循環レベルは、移植後に免疫応答の増加が起こり得
る場合、検出可能である必要はない。

【００８５】 （結合体を含むキット） 本発明はまた、１以上の本発明の結合体を有する（すなわち、含む）キットを
提供する。このキットは、例えば、臨床的な状況において、その中に含まれるこ
の結合体の投与のためのビヒクルとして使用され得る。本発明のキットは、適切
なパッケージに入っており、そして必要に応じてさらなる構成成分（例えば、緩
衝液および説明書（これは、投与および／または検出に関連し得る）を提供し得
る。本発明の結合体は、抗αＧａｌ抗体を検出するために用いられ得るので、本
発明のキットは、抗αＧａｌ抗体の検出に適切な試薬（例えば、捕捉剤）、発色
剤、標識、反応表面、検出手段、コントロールサンプル、および説明情報を、さ
らにまたは代わりに含み得る。

【００８６】 ヒト抗αＧａｌ抗体の存在が試験される場合、抗体の結合を検出するための任
意の適切な手段、例えば、標識抗ヒト抗体が使用され（そしてこのキット中に提
供され）得、ここでその標識は、酵素、蛍光体、化学発光物質、放射性同位体ま
たは補酵素であり得る。一般的に、用いられる標識は酵素である。

【００８７】 （本発明の結合体を用いる方法） 本発明は、本発明の結合体を用いる方法を提供する。この結合体は、抗αＧａ
ｌ抗体の循環レベルを減少させるため；ドナー組織／器官上のαＧａｌエピトー
プに対する免疫寛容を個体に誘導するため；個体における循環抗αＧｅｌ抗体を
中和するため；生物学的サンプル中の抗αＧａｌ Ａｂの存在および／または量
を検出するため、に用いられ得；そしてまた、個体に異種移植を行う方法におい
て用いられ得る。抗αＧａｌ抗体の循環レベルの減少は、本発明のαＧａｌ結合
体を用いて、αＧａｌに対する免疫寛容を誘導することにより、および／または
抗αＧａｌ抗体を中和することにより、達成され得る。抗αＧａｌ抗体の中和は
、インビボまたはエキソビボで達成され得る。これらの方法の全てに関して、こ
の結合体（またはこの結合体を含む組成物）は、単独でかまたは所望の活性／目
的を促進する他の薬剤との組み合わせで用いられ得る。種々の処方物および投与
の手段は、上記で議論された。

【００８８】 （個体における免疫寛容の誘導） 本発明は、個体において寛容を誘導する方法を提供し、この方法は、有効量の
本明細書中に記載される任意の結合体（またはこの結合体を含む組成物）を投与
する工程を包含する。本発明の目的のために、寛容の誘導を介して減少される（
および／または除去され、安定化され、および／または増加速度が減少される）
免疫応答は、αＧａｌに対する免疫応答である。従って、誘導される寛容は、抗
原特異的であり、ここでその抗原はαＧａｌである。

【００８９】 寛容が誘導されたか否かの決定は、当該分野において公知の任意の手段により
達成され得る。一般に、寛容は、免疫応答を測定することにより決定され、その
免疫応答は、標準的なアッセイ（例えば、抗αＧａｌ抗体の血清レベルの測定；
ＥＬＩＳｐｏｔアッセイによる抗αＧａｌ Ａｂ産生Ｂ細胞の測定；αＧａｌ（
またはαＧａｌ結合体）での免疫化に続くサイトカイン産生の測定；このような
投与を受けている個体由来のＴ細胞を用いるαＧａｌまたはその結合体の投与後
の、αＧａｌ（またはαＧａｌエピトープ）に対するＴ細胞応答のインビボ分析
の実行（例えば、抗原提示細胞に関連してαＧａｌ（またはαＧａｌエピトープ
）とともに提示された場合のＴ細胞の増殖を測定するための、³Ｈ−チミジン取
り込みのような標準的アッセイ、αＧａｌ（またはαＧａｌエピトープ）を提示
する細胞の細胞傷害性Ｔ細胞による死滅を測定するための、標準的な⁵¹Ｃｒ放出
アッセイなどを含む）を含む）を用いて測定され得る。

【００９０】 Ｂ細胞におけるαＧａｌに対する免疫寛容は、例えば、アネルギーにより、ま
たはアポトーシスの結果として生じ得る。このメカニズムにもかかわらず、Ｂ細
胞寛容は、Ｂ細胞が抗αＧａｌ抗体を産生し、抗αＧａｌ抗体をそれらの表面上
で発現し、そして／または分泌する能力の減少または喪失という結果を生じる。
Ｂ細胞が抗αＧａｌ Ａｂを産生し、抗αＧａｌ Ａｂをそれらの表面で発現し
、そして／または分泌する能力の減少または喪失があるか否かを決定するために
、Ｂ細胞は、例えば、脾臓もしくはリンパ節または血液のような、一次リンパ系
器官もしくは二次リンパ系器官から得られ得、そして抗αＧａｌ抗体の産生が測
定される。抗αＧａｌ抗体が分泌される場合、それは、例えば、本発明の固定さ
れたαＧａｌ結合体を用いる、ＥＬＩＳＡのようなイムノアッセイ、そして適切
な標識された第二の抗体（例えば、抗アイソタイプ抗体）を用いる、結合抗αＧ
ａｌ抗体の検出により、測定され得る。Ｂ細胞の表面に存在する抗αＧａｌ抗体
は、標識抗ヒトＩｇＭ抗体、または、代わりに、標識αＧａｌ結合体を用いる、
ＦＡＣＳにより測定され得る。

【００９１】 （個体における循環抗αＧａｌ抗体の減少） 本発明はさらに、個体における抗αＧａｌ抗体の循環レベルを減少させる方法
を提供し、この方法は、有効量（すなわち、抗体レベルを減少するに十分な量）
の本明細書中に記載される任意の結合体（またはこの結合体を含む組成物）を投
与する工程を含む。

【００９２】 αＧａｌ抗体の循環レベルの減少の決定は、ＥＬＩＳＡのような当該分野にお
いて標準的なアッセイを用いて達成され得る。好ましくは、この減少（初期に測
定されたレベルと比較する場合）は少なくともほぼ以下のうちのいずれかの減少
である：１０％、２０％、３０％、４０％、５０％。所望の減少の範囲は、以下
を含むが、これらに限定されない、多くの因子に依存する：個体の状態；他の薬
剤が使用される（またはこれから使用される）か否か；移植組織の性質。

【００９３】 （エキソビボでの液体における抗αＧａｌ抗体のレベルの減少） いくつかの実施形態においては、循環抗αＧａｌ抗体のレベルの減少は、エキ
ソビボで行われる。従って、本発明は、個体の生物学的流体における抗αＧａｌ
抗体のレベルを減少させるための方法を提供し、この方法は、この抗体がプラッ
トホーム上のエピトープと結合することを可能にする条件下で、エキソビボで、
その液体を本発明のαＧａｌ結合体と接触させる工程を含む。適切な体液として
は、血液、血漿、またはリンパ液のような、その個体に戻され得る体液が挙げら
れる。

【００９４】 親和性吸着アフェレーシスは、一般的に、以下に記載される：Ｎｉｌｓｓｏｎ
ら（１９８１）Ｂｌｏｏｄ ５８（１）：３８−４４；Ｃｈｒｉｓｔｉｅら（１
９９３）Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ３３：２３４−２４２；Ｒｉｃｈｔｅｒら（
１９９７）ＡＳＡＩＯ Ｊ．４３（１）：５３−５９；Ｓｕｚｕｋｉら（１９９
４）Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ １９：１０５−１１２；米国特許第５，７３３
，２５４号；Ｒｉｃｈｔｅｒら（１９９３）Ｍｅｔａｂｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ
．４２：８８８−８９４；Ｒｉｃｈｔｅｒら（１９９７）ＡＳＡＩＯ Ｊ．４３
（１）：５３−５９；およびＷａｌｌｕｋａｔら（１９９６）Ｉｎｔ’ｌ Ｊ．
Ｃａｒｄ．５４：１９１−１９５．これらのうちの任意の方法が用いられ得る。

【００９５】 本発明の方法においては、抗αＧａｌ抗体と反応性のエピトープを含む、本発
明のαＧａｌ結合体との体外での結合のため、体液は個体から取り出される。例
えば、血液を取り出し、そしてそれをその構成成分に分離するための装置および
方法は、当該分野において公知である（例えば、米国特許第４，０８６，９２４
号；同第４，２２３，６７２号を参照のこと）。次いで、血液またはその一部は
、αＧａｌ結合体に曝される。このαＧａｌ結合体は、抗αＧａｌ抗体を中和し
、次いで、血液成分は、必要に応じて個体に戻される。

【００９６】 好ましい技術において、この抗αＧａｌ−αＧａｌ結合複合体は、この液体が
個体に戻される前に取り出される。これは、例えば、固相に結合したキャリアを
使用することまたは可溶性キャリアを使用すること、そして処理された溶液から
この複合体を選択的に取り出すことによって、なされ得る。

【００９７】 固相を作製するために、αＧａｌ結合体は、不溶性になるように適合され得る
。例えば、αＧａｌ結合体が上記に列挙したプラットホームの１つを含む場合、
そのプラットホームは、コア構造中にさらなる反応基を含むように、合成の間に
化学的に適合され得る。例えば、さらなる結合（ｌｉｎｋａｇｅ）が、コアに存
在するトリエチレン（ｔｒｉｅｔｈｌｙｅｎｅ）グリコール構造に付加され得る
。この結合は、次に、プラットホームを不溶性構造（例えば、ポリスチレンビー
ズまたはポリエチレンビーズ、ポリセルロース膜、または他の所望の構造）に結
合するために使用される。市販のマトリクスとしては、アガロース（一般的に、
Ｄ−ガラクトース残基および変化した３，６−無水ガラクトース残基から構成さ
れた、中性の直鎖状多糖（例えば、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ^TM、Ｐｈａｒｍａｃｉａ
））、活性化ゲル、ニトロセルロース、ホウケイ酸、ガラス繊維フィルター、シ
リカ、ポリビニルクロライド、ポリスチレン、およびジアゾ化紙が挙げられる。
ペプチド−ペプチド結合体を調製するための方法は、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．
Ｔ．「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９６；および「Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉ
ｎｇ」Ｓ．Ｓ．Ｗｏｎｇ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、１９９３に記載される。処理さ
れる生物学的流体は、この固相で簡単に処理され、そしてその液体中の抗体がこ
の固相と複合体化する。次いで、その上清の液体が固相から取り出されて、個体
へと戻される。いくつかの場合において、この固相はまた、適切な洗浄液を使用
することによって、反復使用のために抗体を除去され得るが、ただし、エピトー
プおよびキャリアは、この洗浄溶液に対して抵抗性である。適切な洗浄溶液とし
ては、０．１Ｍ グリシン緩衝剤、ｐＨ２．４、希酢酸、またはｐＨ約７に緩衝
化した１Ｍ ＫＳＣＮが挙げられ得る。

【００９８】 αＧａｌ結合体が固相の一部でない場合、この抗体−αＧａｌ結合複合体は、
他の適切な任意の方法（微細濾過、抗体捕捉、または沈殿が挙げられるが、これ
らに限定されない）によって、この液体から除去され得る。この複合体の沈殿を
生じるために適切な溶液は、この複合体の可溶性に依存し、そして硫酸アンモニ
ウムまたはポリエチレングリコールが挙げられ得る。この液体が個体にもどされ
るべきである場合、この沈殿溶液は、この液体中に残存するいかなるものも個体
において有害な反応を生じないように、選択されるべきである。個体に血液を戻
す方法は、当該分野で周知である。一般的に使用される２つのプロセスは、連続
プロセスおよび不連続プロセスである。この不連続プロセスは、安定したフロー
で個体から血液を取り出す工程、その細胞成分から血漿を分離する工程、その血
漿を処理する工程、この血漿をこの細胞成分と再混合する工程、次いで、その個
体に再注入する工程を包含する。この不連続工程は、少量の血液を取り出す工程
、その特定の容量の細胞成分から血漿を分離する工程、その容量の血漿を処理す
る工程、その２つの成分を再構成する工程、そしてその容量を個体に再注入する
工程を包含する。

【００９９】 本開示は、本発明のαＧａｌ結合体を使用して、生物学的流体を中の抗αＧａ
ｌ抗体のレベルを減少させるために使用され得る、デバイスを意図する。代表的
には、このデバイスは、以下の２つの要素を備える、フローシステムである：ａ
）生物学的流体がこのデバイス中へ流れることを可能にする、入口；ｂ）この液
体が（必用に応じて固相において）αＧａｌ結合体を接触され得る、チャンバー
；ｃ）処理された液体がこのデバイス外へと流れることを可能にする、入口。こ
のようなデバイスは、連続フローシステムとして、そして後の分析または再投与
目的のために、個体由来の単一のサンプルの処理を可能にするシステムとして、
設計され得る。

【０１００】 （抗αＧａｌ抗体の中和） 本発明はまた、個体における抗αＧａｌ抗体の循環レベルを中和する方法を提
供し、この方法は、その個体に、本明細書中に記載の有効量の任意の結合体を投
与する工程を包含する。この方法において、有効量とは、抗αＧａｌ抗体の循環
レベルを中和するに十分な量である。循環する抗αＧａｌ抗体すべてが中和され
る必要はない。循環する抗αＧａｌ抗体への結合体の結合を検出する方法は、当
該分野で標準的である方法および下記の方法を使用して、実施され得る。例えば
、血液サンプルが、本明細書中に記載の結合体を受けた個体から得られ得、そし
て（この結合体に対して使用されるのと同じエピトープを使用することによって
検出される）抗αＧａｌ抗体のレベルが、抗αＧａｌ抗体の開始レベル（すなわ
ち、投与前）と比較され得る。低下するレベルは、抗αＧａｌ抗体が中和されて
いることを示す。中和は、結合体の投与に際して比較的迅速に生じるはずである
ので、このような測定は、好ましくは、結合体の投与の１日以内、好ましくは約
１２時間以内、より好ましくは約１０時間以内、より好ましくは約８時間以内、
より好ましくは４時間に行われる。

【０１０１】 （抗αＧａｌ抗体の存在および／または量の検出） 本発明は、生物学的サンプルにおける抗αＧａｌ抗体の存在を検出するためお
よび／またはこの抗αＧａｌ抗体の量を定量するための、方法をさらに提供する
。この方法は、（ａ）本発明のαＧａｌ結合体を、安定な抗体−抗体複合体の形
成が可能である条件下で、その生物学的サンプルと接触させる工程、および（ｂ
）工程（ａ）において形成された安定な複合体が存在するならば、その複合体を
検出する工程を包含する。現在の検出方法は、所定の任意の抗体により認識され
るエピトープはまた、αＧａｌエピトープおよび１つ以上のアミノ酸を含み得る
場合、タンパク質キャリアに結合したαＧａｌエピトープを使用する。その正体
（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）は、広く変化し得、そのタンパク質キャリアとの結合が生
じた位置に依存する。さらに、このようなαＧａｌ−タンパク質結合体の結合価
は、非常に変化する。対照的に、本発明の結合体は、構造および結合価の両方に
関して、規定されており、従って、診断アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）におい
て、抗αＧａｌ Ａｂのみを検出し、本発明のαＧａｌ結合体を用いて作製され
る標準曲線が、より均一である（すなわち、ロット間の変動を受けにくい）とい
う点で、大きな利点を付与する。

【０１０２】 １つの実施形態において、本発明は、生物学的サンプルにおいてαＧａｌエピ
トープに特異的に結合する抗体を検出する方法を提供する。これらの方法は、臨
床的設定、例えば、個体における抗αＧａｌ抗体レベルを診断および／またはモ
ニターするために、一般的に適用可能である。これらの方法は、サンプル中の（
抗αＧａｌ）抗体を、αＧａｌ結合体（すなわち、本発明の任意の結合体）と、
抗αＧａｌエピトープ（例えば、ドナー組織／器官と反応する、抗αＧａｌ抗体
）とαＧａｌ抗体との間での安定な複合体の形成を可能するために適した条件下
で、接触させる工程、そして形成された安定な複合体が、もし存在するならば、
検出する工程を包含する。本発明のαＧａｌ結合体は、これらの方法を特に有用
にする。なぜなら、これらの抗体についての一般的に簡便であるかまたは適切で
あるアッセイは、未だ開発されていないからである。多数のイムノアッセイ法が
、当該分野で公知であり、詳細に記載される必要はない。

【０１０３】 抗αＧａｌ抗体は、Ｂ細胞の表面上で発現され得る。従って、別の実施形態に
おいて、本発明は、その表面上で抗αＧａｌ抗体を発現する、Ｂ細胞を検出する
方法を提供する。これらの方法は、生物学的サンプル中の（抗αＧａｌ）抗体を
発現するＢ細胞を、αＧａｌ結合体（すなわち、本発明の任意の結合体）と、抗
αＧａｌ抗体（例えば、ドナー組織／器官と反応する、抗αＧａｌ抗体）とαＧ
ａｌエピトープとの間での安定な複合体の形成を可能にするために適した条件下
で、接触させる工程、および形成された安定な複合体が、もし存在する場合は、
それを検出する工程を、包含する。

【０１０４】 αＧａｌ抗体を測定するために適切なサンプルは、生物学的サンプルであり、
血清または血漿（好ましくは血清）およびドナー組織溶出物を含む。抗αＧａｌ
抗体を発現するＢ細胞の検出のために、適切なサンプルとしては、全血が挙げら
れ、これは好ましくは、赤血球を除去するように処理されている。形成される複
合体の検出は、直接的（例えば、複合体と結合する標識の量を測定することによ
る）であっても、または間接的（例えば、このアッセイの間に置換される標識リ
ガンドの量を測定することにおける）であってもよいことが、当該分野で周知で
ある。

【０１０５】 個体におけるこのような抗体の検出において本発明のαＧａｌ結合体を使用す
るために、イムノアッセイが実施される。このαＧａｌ結合体は試薬として提供
され、そしてこの抗αＧａｌ抗体は、生物学的サンプルにおける標的である。例
えば、血清サンプル中に存在するヒトＩｇＧ抗体分子が、固相プロテインＡを用
いて捕捉され得、次いで、標識ポリペプチド試薬を重層され得る。次いで、抗体
の量は、固相に結合した標識に対して比例する。あるいは、αＧａｌを発現する
細胞または組織切片が、この抗体を含む試験サンプルを最初に重層され得、次い
で、検出試薬（例えば、標識抗免疫グロブリン）を重層され得る。次いで、抗体
の量は、この細胞に結合した標識に比例する。サンプル中で検出される抗体の量
は、コントロールサンプルにおいて検出される量と比較される。

【０１０６】 抗αＧａｌ抗体を発現するＢ細胞を検出するために、Ｂ細胞を本発明の適切に
標識されたαＧａｌ結合体との間での安定な複合体の形成の後に、この複合体が
、例えば、蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）分析によって検出され得る
。Ｂ細胞の適切な供給源としては、血液または二次リンパ器官（例えば、脾臓ま
たはリンパ節）が挙げられるが、これらに限定されない。

【０１０７】 本発明の方法において、αＧａｌ結合体は、代表的には、公知の技術によって
、適切な固相（例えば、アフィニティーカラム充填材料）またはプラスチック表
面（例えば、マイクロタイタープレートもしくは計量棒）上に固定される。適切
なアフィニティーカラム充填材料としては、例えば、ビーズアガロースマトリク
ス、ポリアクリルアミド、ガラス、セルロースまたは架橋デキストランが、挙げ
られる。適切なプラスチック表面としては、ポリメタクリレート、ポリスチレン
、ポリエチレン、ポリテレフタレート、エチレングリコール、ポリエステル、ポ
リプロピレンなどが、挙げられる。一般的に、標準的などのマイクロタイタープ
レートも使用され得る。あるいは、この固相は、αＧａｌ結合体が組み込まれた
、ゲルまたはマトリクスの形態であり得る。

【０１０８】 さらなる例示のために、αＧａｌエピトープに特異的に結合する抗体をおそら
く含む、試験サンプルが、一般的に検出可能に（例えば、放射性同位体または酵
素で）標識された、所定の無制限の量のαＧａｌ結合体と混合され得る。液相ア
ッセイにおいて、未処理の試薬が、分離技術（例えば、濾過またはクロマトグラ
フィー）によって除去される。これらのイムノアッセイ技術において、この複合
体と結合する標識の量は、そのサンプル中に存在する抗αＧａｌ抗体の量と、正
に相関する。試験サンプル中の抗αＧａｌ抗体が、限定量のαＧａｌ結合体への
結合について、標識抗体と競合する、類似のアッセイが、設計され得る。ここで
、標識の量は、そのサンプル中の抗αＧａｌ抗体の量と負に相関する。

【０１０９】 いくつかの実施形態において、その生物学的サンプルは、組織サンプルまたは
組織溶出物であり、そしてその組織サンプルと結合した抗αＧａｌ抗体の量が、
例えば、競合結合アッセイによって測定される。これらの方法は、特定の組織が
、抗αＧａｌ抗体の存在および／または量について試験および／またはモニター
されるべき状況において、特に有用であり得る。この型のアッセイは、例えば、
特定の疾患（または疾患の危険）（例えば、特定の形態の血栓症または凝固障害
）が示され得るか否かを、示し得る。このようなアッセイはまた、診断目的およ
び／またはモニター目的のために、抗αＧａｌ抗体の位置のより正確かつ感度の
良い決定を提供する際にも有用であり得る。さらに、抗αＧａｌ抗体についての
位置情報はまた、適切な処置の選択肢についての指標を臨床医に提供し得る。

【０１１０】 これらの検出方法は種々の臨床状況において適用可能であることが、理解され
る。例えば、検出は、抗αＧａｌ抗体に関連する状態または障害（例えば、異種
移植片（ｘｅｎｏｐｌａｎｔ）拒絶）（これはまた、病因に関する抗体と病因に
関係しない抗体とを区別し得ないことから生じ得る）を発症する危険を示す個体
を同定するために、使用され得る。検出はまた、処置（例えば、上記の組成物の
いずれかの投与）をモニターするためにも使用され得る。検出はまた、非病原性
抗体と病原性抗体との間を識別することを補助し得る。検出はまた、最良の処置
の選択肢および／または診断を決定する際に、臨床医を補助し得る。

【０１１１】 （異種移殖（ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）の実施） 本発明はまた、個体において異種移殖を実施する方法を提供し、この方法は、
（ａ）その個体へのαＧａｌを保有する組織の導入；および（ｂ）その個体に、
有効量の本明細書中に記載の任意の結合体（またはこの結合体を含む組成物）を
投与する工程を包含する。移殖（例えば、外科移殖）の方法は、当該分野で公知
であり、本明細書中に記載する必要はない。αＧａｌを保有するいかなる組織（
すなわち、その表面（すなわち、その組織の表面）の少なくとも一部に、αＧａ
ｌを含むかまたは含むと考えられる、組織）も使用され得、これは、以下を含む
が、これらに限定されない：腎臓；肝臓；膵臓；肺；心臓：肺−心臓ブロック移
植片；細胞（膵臓のインスリン産生細胞、および胎児神経細胞（例えば、パーキ
ンソン病を処置するためのドーパミン産生脳細胞）を含むが、これらに限定され
ない）。これらの組織の供給源は変化し得、一般的には、ブタに由来する。結合
体および組成物の投与は、上記に記載されている。好ましくは、この結合体は、
αＧａｌ保有組織の導入の前に、その個体に投与される。従って、本発明の移殖
方法はまた、本明細書中に記載の結合体を、組織の導入の少なくとも約５日前、
約１０日前、約１５日前、約２０日前、３０日前、４５日前、５０日前、６０日
前のいずれかに投与する工程も包含する。結合体の投与とαＧａｌ保有組織の導
入との間の関係は、いくつかの因子に依存し、この因子としては、使用される結
合体、導入される組織、および／または個体の状態（病歴を含む）が、挙げられ
るが、これらに限定されない。

【０１１２】 当業者に理解されるように、αＧａｌ保有組織は、αＧａｌ保有細胞を含み、
従って本発明の異種移植方法は、αＧａｌ保有細胞の投与を包含する。

【０１１３】 本発明はまた、個体において移殖されたαＧａｌ保有組織の拒絶を抑制する方
法も包含し、この方法は、拒絶を抑制するに十分な量で、この個体に本明細書中
に記載の任意の結合体を投与する工程を包含する。拒絶のしるしは、本明細書中
に記載されている。拒絶を「抑制」することとは、以下の状態のうちの任意の１
つ以上を意味する：拒絶を遅くすること、遅延させること、停止させること。拒
絶を「抑制」することは、その結合体を投与していない拒絶の程度と比較して減
少したかまたは短縮された（すなわち、所定の時点での拒絶の程度が、結合体を
受けること以外は同じ状態と比較した場合に減少した）、拒絶の程度を示す。好
ましくは、この結合体は、化合物４６（ＬＪＰ９２０）である。投与、処方物、
およびαＧａｌ保有組織は、移植方法の議論を含めて、上記に考察されている。
結合体は、個体がαＧａｌ保有組織を受ける前および／または後に投与され得る
。その投与量は、結合体が拒絶を抑制するように設計された別の薬剤（例えば、
免疫抑制剤）と組み合わせて使用されるか否かに、とりわけ依存して変化し得る
。

【０１１４】 以下の実施例は、本発明を例示するために提供されるが、本発明を限定するた
めに提供されるわけではない。

【０１１５】 （実施例） （実施例１：αＧａｌエピトープの合成） 本開示で使用される一般的分析方法および特徴付け技術を以下で確認する。Ｎ
ＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＣ３００スペクトロメーター上で、¹Ｈの
場合は３００ＭＨｚ、そして¹³Ｃの場合は７５ＭＨｚで記録した。化学シフトは
、ＴＭＳ（すなわち、テトラメチルシラン、δ＝０．０ｐｐｍ）、または重水素
化溶媒：クロロホルム（¹Ｈの場合、δ＝７．２７ｐｐｍ；¹³Ｃの場合、δ＝７
７．２３）、メタノール（¹Ｈの場合、δ＝４．８７ｐｐｍ；¹³Ｃの場合、δ＝
４９．１５ｐｐｍ）およびＤ₂Ｏ（¹Ｈの場合、δ＝４．８０（ＤＳＳ）ｐｐｍ）
の残りのシグナルに対する百万分の１の値（δ）で記録した。カップリング定数
（Ｊ）は、ヘルツで報告する。分析ＨＰＬＣの分析は、Ｖｙｄａｃ Ｃ１８カラ
ム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ粒子サイズ）を装備したＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａ
ｃｋａｒｄ液体クロマトグラフィーＨＰ１０９０機器で実施した。分取ＨＰＬＣ
は、Ｖｙｄａｃ Ｃ１８カラム（２２×２５０ｍｍ、１０μｍ粒子サイズ）を備
えたＤｙｎａｍａｘ ＳＤ ２００システムで実施した。質量スペクトルは、Ｆ
ｉｎｎｉｇａｎＬＣＱマススペクトロメーターで記録した。

【０１１６】 （αＧａｌエピトープ、２−［２−（２−チオエトキシ）エトキシ］エチル３
−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシドの酵素的
合成） この合成を例示する反応スキームを図１に示す。

【０１１７】 （化合物２：Ｓ−２−［２−（２−ヒドロキシルエトキシ）エトキシ］エチル
チオベンゾエート） ２−［２−（２−クロロエトキシ）エトキシ］エタノール、化合物１（２０ｇ
、０．１２ｍｏｌ）およびチオ安息香酸（１６．４ｇ、０．１２ｍｏｌ）の混合
物に室温で１２ｇのトリエチルアミンを加えた。次いで、この混合物を９０℃で
１時間攪拌した。室温まで冷却した後、酢酸エチル（１００ｍＬ）をこの反応混
合物に加え、濾過した。この濾液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘ
キサン／酢酸エチル、１：１）によって精製し、化合物２（３０．６ｇ、９５％
）を橙色のシロップ状物として得た。

【０１１８】

【数１】 （化合物４：２−［２−（２−ベンゾイルチオエトキシ）エトキシ］エチル２
，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド） 乾燥ＣＨ₂Ｃｌ₂（１００ｍＬ）中の化合物２（７．７９ｇ、２８．９ｍｍｏｌ
）およびアセトブロモ−α−Ｄ−ガラクトース、化合物３（１７．８０ｇ、４３
．２８ｍｍｏｌ）の溶液にＡｇ₂ＣＯ₃（９．２７ｇ、３６．１ｍｍｏｌ）および
活性化４Åモレキュラーシーブ（粉末、１０ｇ）を０℃で加えた。室温で３日間
攪拌し、この反応混合物をセライトを通して濾過し、この濾液を濃縮し、シリカ
ゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、４：１）によって精製し、無
色のシロップ状物として化合物４（１２．２９ｇ、７１％）を得た。

【０１１９】

【数２】 （化合物６：２−［２−（２−ｔｅｒｔ−ブチルジチオエトキシ）エトキシ］
エチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシド） メタノール（１５ｍＬ）中の化合物４（３．４７ｇ、５．７７ｍｍｏｌ）の攪
拌溶液に、０℃でＮａＯＣＨ₃（０．５０ｇ、９．２８ｍｍｏｌ）を加えた。３
時間後、ジエチル１−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−１，２−ヒドラジンジカルボ
キシレート（ｄｉｅｔｈｙｌ １−（ｔｅｒｔ−ｂｙｔｙｌｔｈｉｏ）−１，２
−ｈｙｄｒｚａｉｎｅｄｉｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）、化合物５（２．２ｇ，８
．３ｍｍｏｌ）（これは、Ｗｕｎｓｃｈ，Ｅ．ら、Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ’
ｓＺ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９８２，３６３，１４６１−１４６４に記
載されたように調製された）を加えた。この反応混合物を室温でさらに２時間攪
拌した。次いで、Ｄｏｗｅｘ５０Ｘ２−４００樹脂を添加して、この溶液を中和
し、濾過した。この濾液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ₂Ｃｌ₂ ／ＭｅＯＨ、９：１）によって精製し、化合物６（１．２２ｇ、５１％）を白色
固体をして得た。

【０１２０】

【数３】 （化合物７および８：２−［２−（２−ｔｅｒｔ−ブチルジチオエトキシ）エ
トキシ］エチル３−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシド（７）、２−［２−（２−ｔｅｒｔ−ブチルジチオエトキシ）エトキシ
］エチル３−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ド（８）） １０ｍＬのリン酸ナトリウム緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ６．５）中の化合物６（
２．８７ｇ、６．８９ｍｍｏｌ）およびｐ−ニトロフェニルα−Ｄ−ガラクトピ
ラノシド（２００ｍｇ）の溶液に、２０ｍｇのコーヒー豆α−ガラクトシダーゼ
を加えた。この反応は、３００ｍＭのｐ−ニトロフェノールが形成されるまで（
３日間）、室温でドナーの段階的添加によって進行した。この反応混合物を凍結
乾燥し、この残渣をメタノール中に懸濁し、濾過し、濃縮した。未反応の開始物
質（２．５ｇ）をシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ、９５
：５〜７０：３０）によって回収した。この生成物をまず、水で溶出したＰ２ゲ
ル濾過カラムで精製し、次いで逆相ＨＰＬＣカラムで精製し、白色固体として化
合物７（８０ｍｇ、２．０％）および化合物８（１０６ｍｇ、２．６％）を得た
。化合物７の場合：分析ＲＦ−ＨＰＬＣ：流速１ｍＬ／分にてＨ₂Ｏ中２５〜３
０％ＡＣＮの勾配でｔ_R８．４９分、純度、１００％；

【０１２１】

【数４】 化合物８の場合：分析ＲＦ−ＨＰＬＣ：流速１ｍＬ／分にてＨ₂Ｏ中２５〜３０
％ＡＣＮの勾配でｔ_R７．１４分、純度、１００％；

【０１２２】

【数５】 室温で一晩ピリジン中Ａｃ₂Ｏでアセチル化した後、これらの２つの二糖をさ
らに特徴づけした：アセチル化した化合物７の場合：

【０１２３】

【数６】 （αＧａｌエピトープ、２−［２−（２−チオエトキシ）エトキシ］エチル３
−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシドの化学合
成） この合成を例示する反応スキームを図２に示す。

【０１２４】 （化合物１０：２−［２−（２−クロロエトキシ）エトキシ］エチル２，３，
４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド） 乾燥ＣＨ₂Ｃｌ₂（５００ｍＬ）中のガラクトースペンタアセテート、化合物９
（７０ｇ、１７９ｍｍｏｌ）、２−［２−（２−クロロエトキシ）エトキシ］エ
タノール（４５．４ｇ、２７０ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブ
（２０ｇ）の混合物に、ＢＦ₃Ｅｔ₂Ｏ（５２ｇ、３７０ｍｍｏｌ）を室温で３時
間滴下した。２時間攪拌した後、懸濁液をセライトを通して濾過し、この濾液を
氷浴中で冷却した３００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液に注いだ。この有機相を
分離し、この水相をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出した。この合わせた有機相をブラインで洗
浄し、乾燥し、濃縮した。この残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン
／酢酸エチル、１：１）によって精製し、化合物１０（６７ｇ、７５％）を無色
の油状物として得た。

【０１２５】

【数７】 （化合物１１：２−［２−（２−クロロエトキシ）エトキシ］エチルβ−Ｄ−
ガラクトピラノシド） ２００ｍＬのメタノールおよび２５０ｍＬの１Ｍ Ｋ₂ＣＯ₃水溶液中の化合物
１０（６７ｇ、１３４ｍｍｏｌ）の溶液を室温で一晩攪拌した。この反応混合物
を氷水浴で冷却した７００ｍＬのメタノールに注いだ。沈殿物をセライトを通し
て濾過し、メタノールで洗浄した。この濾液を合わせ、Ｄｏｗｅｘ樹脂（Ｈ形態
）で中和し、ｐＨ６とした。この樹脂を濾過し、水で洗浄した。この濾液を濃縮
し、凍結乾燥して、化合物１１（３７ｇ、８３％）を無色の油状物として得た。

【０１２６】

【数８】 （化合物１２：２−［２−（２−クロロエトキシ）エトキシ］エチル３−Ｏ−
ｐ−メトキシベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド） 乾燥ＭｅＯＨ（３００ｍＬ）中の化合物１１（３７ｇ、１１２ｍｍｏｌ）およ
びジブチルチンオキシド（４６ｇ、２１０ｍｍｏｌ）の混合物を透明になるまで
（１０時間）窒素雰囲気下で還流した。この反応混合物を濃縮し、残渣を減圧乾
燥した。この残渣を８００ｍＬのジオキサンおよび８０ｍＬのＤＭＦに溶解し、
ｐ−メトキシベンジルクロライド（３２ｇ、２８ｍｌ、０．２０ｍｏｌ）を加え
た。この得られた混合物を１００℃で１０時間撹拌し、沈澱物を有する褐色溶液
を得た。室温まで冷却した後、この沈澱物をセライトを通して濾過によって除去
し、ジオキサン（１００ｍＬ）およびクロロホルム（１００ｍＬ）で洗浄した。
この合わせた有機相を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル）に
よって精製し、無色の油状物として化合物１２（３０ｇ、６０％）を得た。

【０１２７】 （化合物１３：２−［２−（２−クロロエトキシ）エトキシ］エチル２，４，
６−ｔｒｉ−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ｐ−メトキシベンジルβ−Ｄ−ガラクトピ
ラノシド） ピリジン（１５０ｍＬ）中で、ＤＭＡＰ（１２０ｍｇ）を触媒として化合物１
２（３０ｇ、６６．５ｍｍｏｌ）をＡｃ₂Ｏ（１５０ｍＬ）でアセチル化した。
５時間撹拌した後、この反応混合物を濃縮した。この残渣をクロロホルム（３０
０ｍＬ）に溶解し、ＨＣｌ溶液（０．５Ｍ）、水、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液およ
びブラインで洗浄した。この有機相を無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、濃縮して、化
合物１３（３４ｇ、８９％）を無色油状物として得た。

【０１２８】

【数９】 （化合物１４：２−［２−（２−クロロエトキシ）エトキシ］エチル２，４，
６−ｔｒｉ−Ｏ−アセチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシド） ３００ｍＬのＣＨ₃ＣＮ／水（９：１）中の化合物１３（３４ｇ、５９ｍｍｏ
ｌ）の溶液に、０℃にて、３時間かけてＣＡＮ（６４ｇ、１２０ｍｍｏｌ）をゆ
っくり加えた。添加後、この混合物を同じ温度で３時間撹拌した。次いで、この
反応混合物を濃縮し、２５０ｍＬの水で希釈し、クロロホルムで抽出した。有機
抽出物を飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液およびブラインで洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で
乾燥し、そして濃縮した。この残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘ
キサン／酢酸エチル、３：１〜２：３）によって精製し、化合物１４（２０．４
ｇ、７６％）を無色の油状物として得た。

【０１２９】

【数１０】 （化合物１６：２−［２−（２−クロロエトキシ）エトキシ］エチル３−Ｏ−
（２，３，４，６−ｔｅｔｒａ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）
−２，４，６−ｔｒｉ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド） 乾燥エーテル（３００ｍＬ）中の化合物１４（１０ｇ、２２ｍｍｏｌ）、化合
物１５（２５．４ｇ、４５ｍｍｏｌ）、４−メチル−２，６−ジ−ｔ−ブチルピ
リジン（６．８ｇ、３３ｍｍｏｌ）、および活性化４Åモレキュラーシーブ（１
０ｇ）の混合物に、エーテル（５０ｍＬ）中のメチルトリフラート（７．２ｍＬ
）の溶液を、２４時間にわたって、シリンジ−ポンプによって滴下した。室温で
３６時間撹拌した後に、反応混合物をセライトを通して濾過した。この濾液を濃
縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、４：１〜１：１
）によって精製し、化合物１６（１７．３ｇ、８１％）を黄色の油状物として得
た。

【０１３０】

【数１１】 （化合物１７：２−［２−（２−クロロエトキシ）エトキシ］エチル３−Ｏ−
α−Ｄ−ガラクトピラノシル−２，４，６−ｔｒｉ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガ
ラクトピラノシド） ３００ｍＬのメタノールおよび１．５ｍＬの酢酸中の化合物１６（１８．１ｇ
、１８．５ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（２０％、３ｇ）の混合物を室温で９時間
圧縮水素（５０ｐｓｉ）雰囲気下で振盪した。この反応混合物をセライトを通し
て濾過し、濃縮した。水（１０ｍＬ）を残渣に加え、酢酸の除去を補助し、そし
てこの粗生成物を精製することなく次の反応に直接使用した。

【０１３１】

【数１２】 （化合物１８：２−［２−（２−クロロエトキシ）エトキシ］エチル３−Ｏ−
α−Ｄ−ガラクトピラノシル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド） ４０ｍＬの１Ｍ ＮａＯＨおよび３００ｍＬのメタノール中の化合物１７の溶
液を室温で６時間撹拌した。この反応混合物をＤｏｗｅｘ樹脂（Ｈ形態）でｐＨ
６まで中和し、濾過し、凍結乾燥して化合物１８（８．９ｇ、９７％）を白色固
体として得た。

【０１３２】

【数１３】 （化合物１９：２−［２−（２−アセチルチオエトキシ）エトキシ］エチル３
−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド） １００ｍＬの１Ｍチオ酢酸カリウム中の化合物１８（８．９ｇ、１８．１ｍｍ
ｏｌ）の溶液を９５℃で３６時間窒素下にて撹拌した。この反応混合物を冷却し
、Ｄｏｗｅｘイオン交換樹脂（Ｈ形態、１００ｇ）を充填したカラムに装填し、
水で溶離した。この水溶液をＤｏｗｅｘ Ｍａｒａｔｈｏｎ ＷＢＡアニオン交
換樹脂（ｐＨ２〜５）で中和し、濾過し、そして凍結乾燥し、化合物１９（７．
５ｇ、７８％）をオフホワイト色の固形物として得た。

【０１３３】

【数１４】 （化合物２０：２−［２−（２−チオエトキシ）エトキシ］エチル３−Ｏ−（
α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド） ５０ｍＬのメタノール中の、化合物１９（６５０、１．２２ｍｍｏｌ）および
メタノールで予め洗浄した４ｇのＤＯＷＥＸ ５５０Ａ ＯＨアニオン交換樹脂
の混合物を室温で一晩撹拌した。この反応混合物を濾過し、この樹脂をメタノー
ル中５％酢酸で洗浄した。この濾液を濃縮し、化合物２０（５７８ｍｇ、９７％
）を白色固体として得た。

【０１３４】

【数１５】 樹脂上に合成的に調製したαＧａｌエピトープは、その能力によって実証され
るように抗原性的に活性であり、ＦＡＣＳによって測定されるように正常なアカ
ゲザルまたはヒト血清由来の抗αＧａｌ Ｉｇの９５％より多くを除去する。

【０１３５】 （化合物２２：ｐ−アミノフェニル３−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−α
−Ｄ−ガラクトピラノシド） αＧａｌエピトープ、ｐ−アミノフェニル３−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（２２）の化学酵素合成（ｃｈｅｍｏｅｎｚｙ
ｍａｔｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）を例示する反応スキームを、図３に示す。ｐ
−ニトロフェニル３−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−α−Ｄ−ガラクトピラ
ノシド（化合物２１）をＮｉｌｓｓｏｎ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．
（１９９７）３８：１３３−１３６）によって記載されるように、酵素的に調製
した。メタノール（４ｍＬ）中のｐ−ニトロフェニル３−Ｏ−α−ガラクトピラ
ノシル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（７０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）および１
０ｍｇＰｄ／Ｃ（１０％）の混合物を室温で一晩水素下で撹拌した。次いで、こ
の反応混合物をセライトを通して濾過し、濾液を減圧濃縮し、黄色の固体として
５０ｍｇを得た。

【０１３６】

【数１６】 （実施例２：結合手プラットホームの合成） （化合物２３の合成） 水／ジオキサン１／１中の１，４−ジアミノブタンおよびＮａＨＣＯ₃の溶液
を無水ブロモ酢酸で処理する。この混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出し、このＣＨ₂Ｃ
ｌ₂層を乾燥し、濃縮し、粗生成物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィー
によって精製し、化合物２３を得る。

【０１３７】 （化合物２４の合成） 水／ジオキサン１／１中の４，７，１０−トリオキサ−１，３−トリデカンジ
アミンおよびＮａＨＣＯ₃の溶液を無水ブロモ酢酸で処理する。この混合物をＣ
Ｈ₂Ｃｌ₂で抽出し、このＣＨ₂Ｃｌ₂層を乾燥し、濃縮し、粗生成物を得、これを
シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、化合物２４を得る。

【０１３８】 （化合物２９の合成） 化合物２９の合成の戦略を図２４に示す。

【０１３９】 化合物Ａ：水性ジオキサン中の１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパンの
溶液をジ−ｔ−ブチルジカーボネートおよびＮａ₂ＣＯ₃で処理した。この混合物
をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出し、このＣＨ₂Ｃｌ₂層を乾燥し、濃縮し、粗生成物を得、こ
れをシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、化合物Ｂを得た。

【０１４０】 化合物Ｂをピリジン中でｐ−トルエンスルホニルクロリドで処理した。この混
合物を水性ＨＣｌで酸性化し、ＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出した。このＣＨ₂Ｃｌ₂層を乾燥
し、濃縮し、粗生成物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィーによって精製
し、化合物Ｃを得た。

【０１４１】 適切な溶媒中の化合物Ｃの溶液をチオ安息香酸および適切な塩基で処理する。
この混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出し、このＣＨ₂Ｃｌ₂層を乾燥し、濃縮して粗生成
物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、化合物Ｄを得る
。

【０１４２】 ＴＬＣによって実証されるようにチオ安息香酸エステルが加水分解されるまで
、ＭｅＯＨ中の化合物Ｄの溶液を、１当量のＮａＯＨで処理する。この得られた
混合物に０．２５当量の化合物２６を加える。ＴＬＣによって完了したことが実
証されるまでこの混合物を撹拌する。この混合物をＨ₂ＳＯ₄水溶液で酸性化し、
ＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出する。このＣＨ₂Ｃｌ₂層を乾燥し、濃縮し、粗生成物を得、こ
れをシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、化合物Ｅを得る。

【０１４３】 化合物Ｅをトリフルオロ酢酸で処理し、ＢＯＣ保護基を除去する。この混合物
を濃縮し、そしてこの残渣を１／１ジオキサン／水中のＮａＨＣＯ₃の溶液に溶
解する。この得られた溶液に８当量の無水ブロモ酢酸を加える。ＴＬＣによって
完了したことが実証されるまでこの混合物を撹拌する。この混合物をＨ₂ＳＯ₄水
溶液で酸性化し、ＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出する。このＣＨ₂Ｃｌ₂層を乾燥し、濃縮して
粗生成物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、化合物２
９を得る。

【０１４４】 （化合物３０の合成） 八量体のＨＥＧＡ／ＴＥＧの調製のための化学スキームを、図２６Ａおよび２
６Ｂに示す。化合物３０。ビス−ヘキサエチレングリコールアミン（化合物４’
）を、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネートと反応させ、Ｎ−ＢＯＣ化合物（化
合物８’）を得、これを、次いで、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメートと反応
させ、ｐ−ニトロフェニルカルボネート化合物（化合物９’）を得た。次いで、
ｐ−ニトロフェニルカルボネート（ＰＮＰ）基を、モノ−ＣＢＺ−保護ピペラジ
ンとの反応によってカルバメート基に変換し、化合物１０’を得た。ＢＯＣ基を
、トリフルオロ酢酸を使用して除去し、化合物１１’を得た。次いで、化合物９
’および１１’を、共に反応させ、「一面（ｏｎｅ−ｓｉｄｅｄ）」樹状化合物
（ｄｅｎｄｒｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）（化合物１２’）を形成した。また、Ｂ
ＯＣ基をトリフルオロ酢酸を使用して除去し、化合物１３’を得た。次いで、化
合物１３’を、トリエチレングリコールビスクロロホルメート（これから「コア
」が誘導される）と反応させ、「二面（ｔｗｏ−ｓｉｄｅｄ）」樹状化合物（化
合物１４’）を得た。次いで、末端ＣＢＺ保護アミノ基を、アミノ基の臭化水素
酸塩に変換し、そしてさらにブロモ酢酸無水物と反応させ、反応性ブロモアセチ
ル基を化合物３０の各末端に得た。

【０１４５】 （化合物３１および３２の合成） 化合物３１および３２の合成のためのストラテジーを、図２５に示す。

【０１４６】 テトラアミノプラットホーム（ｐｌａｔｆｏｒｍ）である化合物Ｆを、Ｎａ₂
ＣＯ₃を含む水／アセトニトリルの溶液中で、

【０１４７】

【化２】 のＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルと反応させた。アセトニトリルを真
空下で除去し、そして生成物を沈殿させた。この沈殿物を水で洗浄し、そしてア
セトニトリルから再結晶化させ、Ｇを得た。

【０１４８】 ＣＢＺ基を、エタノール中で炭素担持１０％Ｐｄを使用して、接触水素化によ
り、化合物Ｇから除去した。混合物を濾過し、そして濾液を濃縮し、オクタ−ア
ミンである化合物Ｈを褐色オイルとして得た。

【０１４９】 化合物Ｈを、室温で一晩、メタノール／アセトニトリル中でクロロ酢酸無水物
と反応させた。粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、化
合物３１を得た。

【０１５０】 （化合物３２） 化合物Ｈの溶液を、適切な塩基の存在下で塩化アクリロイルまたはアクリル酸
無水物と反応させた。溶媒を除去し、そして粗生成物をシリカゲルクロマトグラ
フィによって精製し、化合物３２を得た。

【０１５１】 （実施例３：αＧａｌ結合体の合成） （化合物３３） （単量体αＧａｌ結合体の合成） 水／ＡＣＮ（１：１）中の１ｍＬのＮａ₂ＣＯ₃（１０ｍｇ／ｍＬ）溶液中のα
Ｇａｌ ２０（１００ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）、クロロアセトアミド（３８
ｍｇ、０．４０８ｍｍｏｌ）、およびトリブチルホスフィン（１０μＬ）の混合
物を、室温で一晩攪拌した。有機溶媒を除去後、残りの水溶液を、４０分間にわ
たるアセトニトリル−水の勾配（５〜１５％）を用いて１０ｍＬ／分で溶出する
逆相ＨＰＬＣカラムで精製し、白色固体として３３を得た（９６．３ｍｇ、８６
％）：分析ＲＦ−ＨＰＬＣ：１ｍＬ／分の流速でのＨ₂Ｏ中５〜２０％のＡＣＮ
の勾配を用いてｔ_R４．７８分（純度、１００％）；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｅ（
Ｍ＋Ｎａ⁺）Ｃ₂₀Ｈ₃₇ＮＯ₁₄ＳＮａについての計算値：５７０．２、実測値：５
７０．３。

【０１５２】 （化合物３４） （二量体αＧａｌ結合体の合成） １ｍＬのＮａ₂ＣＯ₃（２０ｍｇ／ｍＬ）水溶液中のαＧａｌ ２０（６５ｍｇ
、０．１３３ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で一晩攪拌した。この溶液を、４０分
間にわたるアセトニトリル−水の勾配（１０〜２５％）を用いて１０ｍＬ／分で
溶出する逆相ＨＰＬＣカラムで精製し、白色固体として３４を得た（３１．３ｍ
ｇ、４８％）：分析ＲＦ−ＨＰＬＣ：１ｍＬ／分の流速でのＨ₂Ｏ中５〜３０％
のＡＣＮの勾配を用いてｔ_R４．７８分（純度、１００％）；ＭＳ（ＥＳＩ）：
ｍ／ｅ（Ｍ＋Ｎａ⁺）Ｃ₃₆Ｈ₆₆ＮＯ₂₆Ｓ₂Ｎａについての計算値：１００１．３、
実測値：１００１．３。

【０１５３】 （化合物３５） （二量体αＧａｌ結合体の合成） ３ｍＬのＮａ₂ＣＯ₃溶液（２０ｍｇ／ｍＬ）および２ｍＬのＡＣＮ中のαＧａ
ｌ １９（３０ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）、樹状プラットホーム２３（９．３
ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）、およびトリブチルホスフィン（０．００３ｍＬ）
の混合物を、Ｎ₂下、室温で一晩攪拌した。有機溶媒を除去後、残りの水溶液を
、４０分間にわたるアセトニトリル−水の勾配（５〜１５％）を用いて１０ｍＬ
／分で溶出する逆相ＨＰＬＣカラムで精製し、白色固体として３５を得た（１０
ｍｇ、３１％）：分析ＲＦ−ＨＰＬＣ：１ｍＬ／分の流速でのＨ₂Ｏ中５〜３０
％のＡＣＮの勾配を用いてｔ_R８．６９分（純度、９７．９％）；

【０１５４】

【数１７】 （化合物３６） （二量体αＧａｌ結合体の合成） この化合物を、化合物３５について上述した手順に従って調製した。化合物
１９（３０ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）を、樹状プラットホーム２４（１３．０
ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）と結合体化し、３６を白色固体として得た：分析Ｒ
Ｆ−ＨＰＬＣ：１ｍＬ／分の流速でのＨ₂Ｏ中５〜３０％のＡＣＮの勾配を用い
てｔ_R１１．３分（純度、９７．４％）；

【０１５５】

【数１８】 （化合物３７） （四量体αＧａｌ結合体の合成） αＧａｌ ７（３０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブチルチオ保護
基を、室温で一晩、５ｍＬの水中でトリブチルホスフィン（２５μＬ）で還元す
ることによって除去した。この反応混合物を濃縮し、そして一晩、高真空下で乾
燥し、全ての残りのｔｅｒｔ−ブチルチオールを除去した。残渣を、水／ＡＣＮ
（１：１）中の５ｍＬのＮａ₂ＣＯ₃（１０ｍｇ／ｍＬ）溶液に溶解した。四量体
プラットホーム２５（５．０ｍｇ、０．００７４ｍｍｏｌ）を、添加し、そして
得られた溶液を室温で一晩攪拌した。有機溶媒を除去した後、残りの水溶液を、
４０分間にわたるアセトニトリル−水の勾配（２０〜２５％）を用いて１０ｍＬ
／分で溶出する逆相ＨＰＬＣカラムで精製し、凍結乾燥後、白色固体として３７
を得た（９．６ｍｇ、５６％）：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｅ（Ｍ／２＋Ｎａ⁺）Ｃ_{4 7} Ｈ₇₉Ｏ₂₈Ｓ₂Ｎａについての計算値：１１７８．４、実測値：１１７８．４。

【０１５６】 （化合物３８） （四量体αＧａｌ結合体の合成） この化合物を、化合物３７について上述した手順に従って調製した。化合物７
（２２ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）を、プラットホーム２６（７．０ｍｇ、０．
００５７ｍｍｏｌ）と結合体化した。生成物を、４０分間にわたるアセトニトリ
ル−水の勾配（１５〜２０％）を用いる逆相ＨＰＬＣカラムで精製し、白色固体
として３８を得た（１３ｍｇ、８０％）：分析ＲＦ−ＨＰＬＣ：１ｍＬ／分の流
速でのＨ₂Ｏ中１５〜２０％のＡＣＮの勾配を用いてｔ_R５．２４分（純度、１０
０％）；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｅ（Ｍ／２＋Ｎａ⁺）Ｃ₅₆Ｈ₉₆Ｎ₅Ｏ₃₃Ｓ₂Ｎａに
ついての計算値：１４５４．６、実測値：１４５４．５。

【０１５７】 （化合物３９） （四量体αＧａｌ結合体の合成） この化合物を、化合物３８について上述した手順に従って調製した。プラット
ホーム２７（６．０ｍｇ、０．００４８ｍｍｏｌ）との化合物７（２２ｍｇ、０
．０３８ｍｍｏｌ）の結合体化によって、白色固体として３９を得た（１２ｍｇ
、９３％）：分析ＲＦ−ＨＰＬＣ：１ｍＬ／分の流速でのＨ₂Ｏ中１５〜２０％
のＡＣＮの勾配を用いてｔ_R１１．３２分（純度、１００％）；ＭＳ（ＥＳＩ）
：ｍ／ｅ（Ｍ／２＋Ｎａ⁺）Ｃ₅₃Ｈ₈₇Ｎ₄Ｏ₃₂Ｓ₂Ｎａについての計算値：１３７
９．１、実測値：１２７９．１。

【０１５８】 （化合物４０） （四量体αＧａｌ結合体の合成） この結合体を、αＧａｌ ７およびプラットホーム２８を使用して、化合物３
８について上述した手順に従って、調製した。

【０１５９】 （化合物４１） （四量体αＧａｌ結合体４１の合成） ０．１５ｍＬのＨ₂Ｏ／ＣＨ₃ＣＮ（１：１）中のｐ−アミノフェニル−３−Ｏ
−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド２２（１１ｍｇ、
０．０２５ｍｍｏｌ）、四量体プラットホーム２８、およびＮａＨＣＯ₃（３ｍ
ｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）の混合物を、１時間、軽く攪拌した。０．１５ｍＬの
Ｈ₂Ｏの添加後、この反応混合物を、２日間、室温で静置し、そして１５分間に
わたるアセトニトリル−水の勾配（０〜３０％）を用いて１ｍＬ／分で溶出する
逆相ＨＰＬＣカラムで精製し、白色固体として４１を得た（４．６ｍｇ、４０％
）：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｅ（Ｍ／２＋１）Ｃ₆₀Ｈ₉₅Ｎ₇Ｏ₂₉についての計算値
：１３７７．６、実測値：１３７７．９。

【０１６０】 （化合物４２） （四量体αＧａｌ結合体の合成） 水／ＡＣＮ（１：１）中の５ｍＬのＮａ₂ＣＯ₃（１０ｍｇ／ｍＬ）溶液中のα
Ｇａｌ ７のβ異性体、２−［２−（２−チオエトキシ）エトキシ］エチル３−
Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（３０ｍｇ
、０．０６１ｍｍｏｌ）、プラットホーム２５（５ｍｇ、０．００７４ｍｍｏｌ
）、およびトリブチルホスフィン（０．１０ｍＬ）の溶液を、室温で、一晩攪拌
した。有機溶媒を除去した後、残りの水溶液を、４０分間にわたるアセトニトリ
ル−水の勾配（２０〜２５％）を用いて１０ｍＬ／分で溶出する逆相ＨＰＬＣカ
ラムで精製し、白色固体として４２を得た（２．４ｍｇ、１４％）：ＭＳ（ＥＳ
Ｉ）：ｍ／ｅ（Ｍ／２＋Ｎａ⁺）Ｃ₄₇Ｈ₇₉Ｏ₂₈Ｓ₂Ｎａについての計算値：１１７
８．４、実測値：１１７９．０。

【０１６１】 （化合物４３） （四量体αＧａｌ結合体の合成） この結合体を、化合物３８について上述した手順に従って調製した。化合物８
（２５ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）のプラットホーム２７（６．０ｍｇ、０．０
０４８ｍｍｏｌ）との結合体化によって、４３を白色固体として得た（８．８ｍ
ｇ、６８％）：分析ＲＦ−ＨＰＬＣ：１ｍＬ／分の流速でのＨ₂Ｏ中１５〜２０
％のＡＣＮの勾配を用いてｔ_R６．４８分（純度、１００％）；ＭＳ（ＥＳＩ）
：ｍ／ｅ（Ｍ／２＋Ｎａ⁺）Ｃ₅₃Ｈ₈₇Ｎ₄Ｏ₃₂Ｓ₂Ｎａについての計算値：１３７
９．４、実測値：１３７９．１。

【０１６２】 （化合物４４） （八量体αＧａｌ結合体の合成） 水／ＡＣＮ（１：１）中の２ｍＬのＮａ₂ＣＯ₃（１０ｍｇ／ｍＬ）溶液中のα
Ｇａｌ １９（２３ｍｇ、０．４２９ｍｍｏｌ）およびプラットホーム２９（１
０ｍｇ、０．００４３ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ₂下、室温で一晩攪拌した。反応
混合物を濃縮し、そして、４０分間にわたるアセトニトリル−水の勾配（１０〜
３５％）を用いて１０ｍＬ／分で溶出する逆相ＨＰＬＣカラムで精製し、白色固
体として４４を得た（８．５ｍｇ、３７％）。

【０１６３】 （化合物４５） （八量体αＧａｌ結合体の合成） この化合物を、化合物４４について上述した手順に従って調製した。化合物１
９（５０ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）を、プラットホーム３０（１０ｍｇ、０．
００１８ｍｍｏｌ）と結合体化させた。生成物を、４０分間にわたるアセトニト
リル−水の勾配（１０〜５０％）を用いて逆相ＨＰＬＣカラムで精製し、白色固
体として４５を得た（１０．８ｍｇ、６７％）：分析ＲＦ−ＨＰＬＣ：１ｍＬ／
分の流速でのＨ₂Ｏ中５〜７０％のＡＣＮの勾配を用いてｔ_R１１．１６分（純度
、１００％）。

【０１６４】 （化合物４６） （八量体αＧａｌ結合体の合成） この化合物を、化合物４４について上述した手順に従って調製した。化合物１
９（６９１ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）を、プラットホーム３１（２８０ｍｇ、０
．１４１ｍｍｏｌ）と結合体化した。生成物を、４０分間にわたってアセトニト
リル−水（１９．５％）を用いて逆相ＨＰＬＣカラムで精製し、白色固体として
４６を得た（６０４ｍｇ、７６％）：分析ＲＦ−ＨＰＬＣ：１ｍＬ／分の流速で
のＨ₂Ｏ中１５〜２５％のＡＣＮの勾配を用いてｔ_R９．１６分（純度、１００％
）；

【０１６５】

【数１９】 （化合物４７） （八量体αＧａｌ結合体の合成） この化合物を、化合物４４について上述した手順に従って調製した。化合物１
９（２９ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）を、プラットホーム３２（１０ｍｇ、０．
００５５ｍｍｏｌ）と結合体化させた。生成物を、４０分間にわたるアセトニト
リル−水の勾配（１５〜２０％）を用いて逆相ＨＰＬＣカラムで精製し、白色固
体として４７を得た（２０ｍｇ、６５％）：分析ＲＦ−ＨＰＬＣ：１ｍＬ／分の
流速でのＨ₂Ｏ中１５〜２５％のＡＣＮの勾配を用いてｔ_R１１．３５分（純度、
８２％）；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｅ（Ｍ／３＋Ｎａ⁺）（Ｃ₂₃₂Ｈ₄₁₆Ｎ₁₈Ｏ₁₂₆Ｓ ₈ ）／３＋Ｎａについての計算値：１９３３．１、実測値：１９３２．１。

【０１６６】 （実施例４：αＧａｌ結合体のインビトロでの特徴付け） （材料および方法） 抗体。血液を、健康な正常ボランティアより採取した。血漿を遠心分離により
分離し、そして凝塊させた。フィブリンを除去し、そして血漿を直ちに使用する
か、またはアリコートで−７０℃にて保存した。アカゲザル血清（Ｃａｌｉｆｏ
ｒｎｉａ Ｒｅｇｉｏｎａｌ Ｐｒｉｍａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅ
ｒ、Ｄａｖｉｓ、ＣＡ）を、バキュテイナー（ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ）管内に採
取した血液より得、そして凝塊させた。血清を遠心分離により分離した後、プー
ルし、等分し、そして−２０℃または−７０℃にて保存した。いくつかの実験に
おいて、補体の溶血性活性を破壊するために、血清を５６℃で３０分間、熱失活
した。αＧａｌエピトープに対する抗体を、αＧａｌ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラ
ム（αＧａｌ−ＳＨを１０ｍｇ／ｍＬのレジンでのＭｉｃｈａｅｌ付加化学反応
を介してマレイミド−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（Ｐｉｅｒｃｅ）に結合することによ
って調製した）上でアフィニティー精製した。２０ｍＬまでのプールされたＮＨ
Ｓまたは正常サル血清（ＮＭＳ）を２ｍＬ容量のパックされたαＧａｌ−Ｓｅｐ
ｈａｒｏｓｅにアプライした。フロースルーを収集した後、１０〜２０倍のカラ
ム容量でカラムを洗浄するか、またはＡ₂₈₀がベースラインの値になるまでカラ
ムを洗浄し、そして１Ｍ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）を含む管中に、０．１Ｍトリ
エタノールアミン（ｐＨ１１．５）で溶出した。カラムを、直ちに１０〜２０倍
の容量のリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。画分を、Ｂｒａｄｆｏ
ｒｄアッセイによりタンパク質濃度について評価した。ピークの画分をプールし
、そしてＰＢＳに対して透析した。アフィニティー精製された抗αＧａｌ Ｉｇ
を、ＩｇＭ抗αＧａｌ抗体を除去するＭＢＰカラム（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆ
ｏｒｄ、ＩＬ）での精製によって、ＩｇＧのために陰性選択した。ＩｇＭ抗αＧ
ａｌは、ＩｇＧ抗αＧａｌ抗体を除去するプロテインＧ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカ
ラム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、
ＩＮ）での精製によって陰性選択された。αＧａｌアフィニティーカラムからの
抗αＧａｌ Ｉｇの溶出プロフィールを、図１６に示す。

【０１６７】 ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび免疫ブロット分析。抗体を含む画分およびプールを、
４〜１２％のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（Ｎｏｖｅｘ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）によ
って分離した。タンパク質を、ＸＣＥＬＬ ＩＩ^TM Ｂｌｏｔ Ｍｏｄｕｌｅブ
ロットシステム（Ｎｏｖｅｘ）を使用してＰＲＯＴＲＡＮ^TMピュアニトロセルロ
ースメンブレン（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ａｎｄ Ｓｃｈｕｅｌｌ、Ｋｅｅｎｅ
、ＮＨ）に電気泳動的に転写した。メンブレンをＰＢＳ中２％の脱脂粉乳（ＮＦ
ＤＭ）でブロックし、そしてアルカリホスファターゼ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍ
ｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）に結合した抗ヒトＩｇ
ＧもしくはＩｇＭ、またはアルカリホスファターゼ（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅ
ｍ Ｔｅｃｈ、Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ、ＫＹ）に結合した抗サルＩｇＧもしくは
ＩｇＭを用いてプローブした。第２工程抗体を、アルカリホスファターゼについ
てＷｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｕｅ Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｐ
ｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を用いて展開
させた。

【０１６８】 抗αＧａｌ抗体のためのＥＬＩＳＡ。αＧａｌ−ＳＨを製造者のプロトコルに
従って、２：１（ｗ／ｗ）の比でマレイミド−ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）（
Ｐｉｅｒｃｅ）と結合させた。ＢＳＡ分子当たりの結合したαＧａｌ分子の比は
、１０〜１２：１または２５：１であった。あるいは、αＧａｌ−ＢＳＡまたは
αＧａｌ−ＨＳＡ（ヒト血清アルブミン）を、Ｃ３またはＣ１４リンカー群（Ｄ
ｅｘｔｒａ、Ｒｅｄｄｉｎｇ、Ｅｎｇｌａｎｄ）を用いて取得した。αＧａｌ−
ＢＳＡ（ＰＢＳ中に５μｇ／ｍＬで１００μＬ）を、１８時間、４℃で９６ウェ
ルプレート上に吸着させた。少なくとも使用の４８時間前にプレートを、４℃で
ＰＢＳ中２％のＮＦＤＭでブロックした。プレートは、少なくとも３ヶ月間、安
定であった。新しいロットのプレートを、プールされた標準血清を使用して、最
初のロットの結合効率と比較した。プールされた標準血清、個々の血清、または
アフィニティー精製された抗αＧａｌ Ｉｇを、滴定した。血清（１００μＬニ
ート（ｎｅａｔ）−ＨＢＳＡ中に１／２５６に希釈した）、またはアフィニティ
ー精製された抗αＧａｌ ＩｇＧ（Ｃａ⁺²またはＭｇ⁺²を含まないハンクス平衡
化食塩溶液中（ＨＢＳＡ）で２ｍｇ／ｍＬ〜１μｇ／ｍＬへと連続した２倍希釈
の１００μＬ）をαＧａｌ−ＢＳＡでコーティングされたウェル中で、２０℃に
て６０分間インキュベートした。洗浄後、抗αＧａｌ Ｉｇを、予め決定された
飽和濃度（１００μＬ、通常１：１０００希釈）の抗サルまたは抗ヒトＩｇＧま
たはＩｇＭ（２０℃で６０分間、アルカリホスファターゼに結合した）で展開し
た。ウェルを洗浄緩衝液（ＰＢＳ中１％のＴｗｅｅｎ２０）で５回洗浄した後、
１００μＬ ＰＰＭＰ（フェノールフタレイン一リン酸塩）（Ｓｉｇｍａ）を用
いて、５〜２０分間、２０℃で、プレートを発色させた。１００μＬの０．２Ｍ
Ｎａ₂ＨＰＯ₄の添加によって、反応を停止し、そしてプレートをＡ₅₅₀におい
て読み込んだ（ＰｏｗｅｒＷａｖｅ ３４０ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｓｐｅｃ
ｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ、Ｂｉｏ−Ｔｅｋ、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、Ｖｅｒｍｏ
ｎｔ）。

【０１６９】 αＧａｌ結合体。αＧａｌ（ガラクトース（α１，３，ガラクトース））エピ
トープを、実施例１に記載されるようにマルチグラムスケールで合成し、そして
実施例３に記載されるように明瞭な有機プラットホームに結合させた。

【０１７０】 競合ＥＬＩＳＡ。血清、またはアフィニティー精製された抗αＧａｌ Ｉｇ調
製物をＥＬＩＳＡによって滴定し、そして５０％の結合濃度を決定した。血清に
ついては、５０％結合点は、約１：５の血清希釈で達成されたが、アフィニティ
ー精製されたＩｇについては、５０％希釈結合濃度は、約１２．５μｇ／ｍＬで
あった。血清またはＩｇ（５０μＬ）を、インヒビターを含む当量のＨＢＳＡ（
４ｍｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬへと２倍方法で連続して希釈された）と共にか、
または緩衝液単独で、２０℃で６０分間、インキュベートした。次いで、抗αＧ
ａｌ Ｉｇ、または血清±インヒビターを、αＧａｌ−ＢＳＡでコーティングさ
れたプレートへ添加し、そしてＩｇ結合を記載されたように評価した。抗ジガル
（ｄｉｇａｌ）の結合の阻害の％を、以下のように計算した： ［（ＯＤ₅₅₀Ｉｇ源＋ＩＮＨ）−ＯＤ₅₅₀ブランク／（ＯＤ₅₅₀Ｉｇ源−ＩＮＨ）
−ＯＤ₅₅₀ブランク］×１００。（ＩＮＨ＝インヒビター）。

【０１７１】 ＥＬＩＳｐｏｔアッセイ。正常アカゲザル由来の脾臓を細かく刻み、そして急
速冷凍したデバリングされたガラススライドを使用して単細胞懸濁液として調製
した。汚染された赤血球を低浸透圧的に溶解し、そしてフィコール−ハイパーク
密度勾配遠心分離法によって単核細胞（ＭＮＣ）を単離した。ＭＮＣ（１００μ
Ｌ）を、αＧａｌ−ＢＳＡまたは抗サルＩｇＧもしくはＩｇＭを保有するＥＬＩ
ＳＡプレートに４通りで、１０⁴／細胞／ｍＬから５×１０²細胞／ｍＬへの連続
する２倍希釈で添加した。プレートを、５％ＣＯ₂を含む加湿された大気中で３
７℃で一晩インキュベートし、次いで洗浄した。αＧａｌ−ＢＳＡに結合した分
泌された抗αＧａｌのフットプリントは、ビオチンに結合したヤギ抗サルＩｇＧ
またはＩｇＭ（Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ）を用いた３７℃で６０分
間のインキュベーションによって進展し、続いてＥｘｔｒａＡｖｉｄｉｎ−アル
カリホスファターゼ（Ｓｉｇｍａ）を添加した。アルカリホスファターゼ基質Ｂ
（１：１００希釈で１００μＬ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）を
添加し、そしてインキュベーションを２０℃で一晩続けた。Ｉｇ−産生細胞の合
計を、同様に決定した。フットプリントを、Ｍｉｃｒｏｔｅｋ ＳｃａｎＭａｋ
ｅｒ ＩＩＩフラットベッドスキャナおよびＩｍａｇｅ−Ｐｒｏイメージングソ
フトウェア（Ｍｅｄｉａ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ、Ｕｎｉｖ．Ｒｏｃｈｅｓｔ
ｅｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＮＹ）を利用して
パーソナルコンピューターを使用して数量化した。抗αＧａｌ ＩｇＧ−産生細
胞または抗αＧａｌ ＩｇＭ−産生細胞／合計ＩｇＧ−産生細胞またはＩｇＭ−
産生細胞の比を計算した。

【０１７２】 細胞障害性（ｃｙｔｏｘｉｃｉｔｙ）アッセイ。ブタの腎臓上皮細胞株ＰＫ−
１５およびブタの大動脈内皮細胞（ＰＡＥＣ）（ＡＴＣＣ、１０８０１ Ｕｎｉ
ｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ２０１１０−２２０９）
を指示されたように培養した。アッセイのために、トリプシン−ＥＤＴＡを用い
て細胞を除去し、そしてサブコンフルエントに９６ウェルプレート中に、または
２４ウェルプレート中のカバーガラス上に再プレートした。まだサブコンフルエ
ントである間（再プレートの２日以内）に、細胞を細胞障害性（ｃｙｔｏｘｉｃ
ｉｔｙ）アッセイに使用した。ニートな補体が十分な血清を、記載されたように
４℃で６０分間インヒビターと共にインキュベートした。次いで、血清を、血清
の添加前に、すぐに培地が吸引されているサブコンフルエントな細胞を含むウェ
ルに添加した。ウェルを、血清±インヒビターと共に３７℃で６０〜９０分間イ
ンキュベートした。ウェルをリンスし、そして細胞死を、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄキ
ット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）を使用して可
視化し、そして１０高倍率の視野において、または２５０細胞を数えることによ
って顕微鏡的に数量化した。いくつかの実験のために、細胞を、細胞分離溶液（
Ｓｉｇｍａ）を用いて非酵素学的にフラスコから除去し、そして単細胞懸濁液を
調製した。アッセイを、粘着性の細胞については、細胞障害性（ｃｙｔｏｘｉｃ
ｉｔｙ）がＢｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＦＡＣＳｃａｂｉｌｕｒを備え
たフローサイトメトリーによって数量化したことを除いて行った。

【０１７３】 （結果） （αＧａｌエピトープの抗原性活性） 合成的に調製されたαＧａｌエピトープ（図２）は、ＦＡＣＳによって測定さ
れたように、正常なアカゲザル血清またはヒト血清から、＞９５％の抗αＧａｌ
Ｉｇを除去するその能力（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅに結合した場合）によって示さ
れたように抗原性に活性であった。

【０１７４】 四量体結合体の活性。本発明者らは、αＧａｌ四量体プラットホーム構築物を
試験した。この構築物は、実施例２に記載されるようにＰＩＴＧプラットホーム
（化合物（ｃｐｄ）３８）およびＢＭＴＧプラットホーム（ｃｐｄ３７）に含ま
れ、そしてそれらが、ＥＬＩＳＡにおいてαＧａｌエピトープに結合することか
らＡｂを阻害するそれらの能力において等しいと見出された。抗αＧａｌＩｇに
結合し、かつＩｇＧ抗αＧａｌのαＧａｌ発現ブタ腎臓上皮細胞株ＰＫ−１５お
よびＢＳＡ−αＧａｌへの結合を阻害されたＣｐｄ３８（ＬＪＰ７１２）は、Ｅ
ＬＩＳＡウェルに約１ｍＭで吸着した。アフィニティー精製されたＩｇＭ抗αＧ
ａｌの結合は、ｃｐｄ３８によって、ＩｇＧ抗αＧａｌがされるよりも、１００
０倍より低く阻害された。

【０１７５】 八量体結合体の活性。八量体結合体（実施例２に記載されるような）を試験し
た。八量体結合体ｃｐｄ４４（ＬＪＰ７１９としてもまた称される）を、血清中
において、抗αＧａｌ ＩｇＭがＢＳＡ−αＧａｌに結合することを阻害するそ
の能力について、インビトロで試験した。ＥＬＩＳＡ分析は、αＧａｌエピトー
プが、八量体としてプラットホーム上に存在する場合、血清中のＩｇＧ抗αＧａ
ｌおよびＩｇＭ抗αＧａｌの両方が、ＢＳＡ−αＧａｌまたはαＧａｌ発現ブタ
腎臓上皮細胞株ＰＫ−１５に結合することの両方を阻害し、そして図１８に示さ
れるようにＩｇＭ抗αＧａｌのαＧａｌエピトープへの結合を阻害することにお
いて５〜１０倍より有効であったことを示した。これは、寛容原（ｔｏｌｅｒａ
ｇｅｎ）の結合価が、より低い親和性のＩｇＭ分子との結合において非常に重要
であるという本発明者らの仮説を支持する。

【０１７６】 （実施例５：結合体のインビボでの評価） 寛容原のインビボでの効力を、四量体寛容原、八量体寛容原または緩衝液でＩ
Ｖ処理されたアカゲザルにおける用量増大研究において試験した。

【０１７７】 ６匹の雄アカゲザル（３．５〜４ｋｇ）を、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ Ｒｅｇｉ
ｏｎａｌ Ｐｒｉｍａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ（ＣＲＰＲＣ）、
Ｄａｖｉｓ、ＣＡに収容した。すべての実験プロトコルは、ＣＲＰＲＣ ＩＡＣ
ＵＣ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ
Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）の標準を充たした。サルを、ベースライン臨床的価値お
よび抗αＧａｌ抗体レベルのために採血した。サルを、ベースライン臨床的価値
のために採血した。４匹のサルを、２〜２０ｍｇ／ｋｇの四量体プラットホーム
ＬＪＰ７１２（ｃｐｄ３８）を用いて、毎日ＩＶ処置した。２匹のサルは、コン
トロールとして静脈内にＰＢＳ単独を受けた（ＩＶ）。サルを、６０日間、２ｍ
ｇ／ｋｇのＬＪＰ７１２を用いて処置されたこれらの動物において、ＩＶ注射の
前にすぐに毎週採血した（５ｍＬ）。サルが、１０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／
ｋｇの四量体ＬＪＰ７１２または２０ｍｇ／ｋｇの八量体ＬＪＰ９２０（ｃｐｄ
４６）を受ける場合、処置は５〜７日間であり、そして動物を２〜３日毎に３ｍ
Ｌの採血した。血清サンプルを、抗αＧａｌ ＩｇＧおよびＩｇＭについてＥＬ
ＩＳＡによって分析した。１つの実験において、２匹のサルは、毎日１０日間、
２０ｍｇ／ｋｇ八量体プラットホームＬＪＰ７１９を用いてＩＶ処置された。別
の実験において、サルを毎日、２０ｍｇ／ｋｇでの八量体ＬＪＰ９２０を用いて
ＩＶ処理した。

【０１７８】 四量体結合体。ＬＪＰ１２のインビボでの効力を試験するために、αＧａｌに
特異的である１％の循環抗体に基づいて血漿中の抗αＧａｌ抗体に対するモル過
剰の寛容原（ｔｏｌｅｒａｇｅｎ）を作製するのに十分に高い用量での四価寛容
原を、サルを処置するために使用した。サルは、上述したように、毎日、２ｍｇ
／ｋｇのＬＪＰ７１２（ｎ＝４）または緩衝液（ＰＢＳ）（ｎ＝２）で６０日間
腹腔内処置した。毎週採血し、そして血清をＩｇＧおよびＩｇＭの抗αＧａｌに
ついてＥＬＩＳＡにより試験した。ＬＪＰ７１２は十分に寛容であり、そして図
２０および２１にそれぞれ示されるように、インビトロで古典的補体経路も代替
補体経路も活性化しなかった。抗αＧａｌ Ｉｇ応答の統計学的に有意な減少は
なかった。

【０１７９】 本発明者らは、次に、より高い用量のＬＪＰ７１２が、より短い期間での腹腔
内投薬モダリティーを用いる、循環からの抗αＧａｌＡｂのクリアランスを引き
起こすことができるか否かを決定しようとした。用量を１０ｍｇ／ｋｇ ＬＪＰ
７１２に増大させたとき、ＩｇＧ抗αＧａｌまたはＩｇＭ抗αＧａｌのいずれも
ほとんど減少が見られなかった。対照的に、２０ｍｇ／ｋｇ ＬＪＰ７１２での
毎日の腹腔内処置は、図１９に示されるように、処置の８日目までに２４％（ｐ
＜０．０５）までの抗αＧａｌ ＩｇＧ応答の減少を、そして１２％（Ｐ＝ＮＳ
）までの抗αＧａｌＩｇＭレベルの減少を生じた。

【０１８０】 （八量体結合体） 本発明者らは次に、八量体寛容原ＬＪＰ９２０での７日間のアカゲザルの処置
が、抗αＧａｌＡｂの血清レベルの減少に至るか否かを決定した。２匹のサルを
、ＰＢＳで毎日腹腔内処置し、そして２匹を、ＬＪＰ９２０（ｃｐｄ４６）２０
ｍｇ／ｋｇで毎日腹腔内処置した。この用量で、四量体寛容原は、循環ＩｇＧ抗
αＧａｌの減少を示したが、ＩｇＭ抗Ｇａｌでは示さなかった。血清サンプルを
、０日目（採血前）、３日目および６日目（薬物投与２４時間後）の薬物または
コントロール投与の直前に採取した血液から調製した。血清はまた８日目に調製
した。これは最後の投与の２４時間後であり、この後続いて投与は行わなかった
。ＬＪＰ９２０（ｃｐｄ４６）は、処置した動物においては十分に寛容であり、
獣医学職員によって観察されたように望ましくない影響はなかった。８日目に、
ＩｇＧ抗αＧａｌレベルは、１１％減少した。これは、四量体で見られたレベル
と同様であった。コントロール動物は、ほとんど変化を示さなかった（図２２Ａ
）。同様に、あるサルでは１８％のＩｇＭ抗αＧａｌレベルの減少が、第二の（
ｒｅｐｌｉｃａｔｅ）動物では５％の減少があった。対照的に、コントロール動
物におけるＩｇＭ抗αＧａｌレベルは、図２２Ｂに示されるように、ある動物で
は変化せず、そして第二の動物では増大した。ＩｇＭ抗αＧａｌを清浄するのに
八量体が四量体よりも効率がよいことは、図２３に示される。これらのデータは
、価数の増大が、より効率的な分子を、インビトロだけでなく、インビボでも生
じることを示す。

【０１８１】 （実施例６：八量体結合体のインビボ評価；八量体ｇａｌα１−３ｇａｌ結合
体ＬＪＰ９２０を用いるｇａｌα１，３−ガラクトシルトランスフェラーゼ寛容
ノックアウトマウスの誘発） 本実験の目標は、八量体ジｇａｌ（αＧａｌと交互に使用する）結合体ＬＪＰ
９２０でのＧａｌＴノックアウトマウスの処置が、ジｇａｌ（すなわち、αＧａ
ｌ）特異的寛容を誘発するか否かを決定することであった。

【０１８２】 α１，３−ガラクトシルトランスフェラーゼノックアウトマウス（Ｔｈａｌｌ
ら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２１４３７−２１４４０）（
ＧａｌＴ ＫＯ）は、Ｇａｌα１−３Ｇａｌ二糖（ジｇａｌ）を合成できず、こ
のため、末端Ｇａｌα１−３Ｇａｌエピトープを認識する抗体を自然に形成する
点で、ヒト、類人猿、および旧世界ザルに類似する。従って、ＧａｌＴ ＫＯマ
ウスは、天然抗Ｇａｌα１−３Ｇａｌ抗体を減少する潜在的な方法を試験するた
めに非常に有用な系である。Ｙａｎｇら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８
７：１３３５−１３４２。

【０１８３】 （材料および方法） 抗αＧａｌ抗体についてのＥＬＩＳＡ。免疫アッセイプレート（Ｃｏｓｔｅｒ
＃３５９０）を４℃で一晩、１００μｌ／ウェルのジｇａｌ（すなわち、αＧａ
ｌ）−ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ−ジｇａｌ）（５μｇ／ｍｌ（生理食塩水（
ＰＢＳ）中））でコーティングした。プレートをＰＢＳで洗浄し、そして残りの
タンパク質結合部位を４℃で一晩、２５０μｌ／ウェルの５％脱脂粉乳（ＰＢＳ
中）でブロックした。血清サンプルを、０．５％ＢＳＡ（ＨＢＳＡ）を含有する
ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）中に希釈した。ブロックしたプレートを、Ｐ
ＢＳ−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄し、そして５０μｌの血清サンプル希釈液
を添加した。プレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを、ＰＢＳ
−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄した。アルカリホスファターゼ結合体化ヤギ抗
マウスＩｇＧまたはＩｇＭ（Ｊａｃｋｓｏｎ＃１１５−０５５−１４６または１
１５−０５５−０７５、１／１０００（ＨＢＳＡ中））を添加し（１００μｌ／
ウェル）、そしてプレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを、Ｐ
ＢＳ−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄した。フェノールフタレイン一リン酸（１
：２６（蒸留水中）、１００μｌ／ウェル）を添加し、そしてプレートを室温で
インキュベートした。光学密度を、ＰｏｗｅｒＷａｖｅ３４０Ｍｉｃｒｏｐｌａ
ｔｅ分光光度計で１０分および３０分のインキュベート後に５５０ｎｍで読み取
った。

【０１８４】 抗ジｇａｌ特異的抗体形成細胞のＥＬＩＳｐｏｔ。免疫アッセイプレートを、
ＢＳＡ−ジｇａｌでコーティングし、そして上記のようにブロックした。ブロッ
クしたプレートをＰＢＳ−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で６回、ＰＢＳで２回、そし
て１％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｇｉｂｃｏ＃１６０００−０４４）、２ｍＭグル
タミン（Ｇｉｂｃｏ ＃２５０３０−０８１）、１×抗生物質（Ｇｉｂｃｏ ＃
１５２４０−０６２）および１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ ＃１５６３０
−０８０）を含有するＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）（ＲＰＭＩ−１）で１
回洗浄した。マウスから脾臓を摘出し、そして２枚のすりスライドガラス間で破
砕することにより、ＲＰＭＩ−１中に脱凝集（ｄｉｓａｇｇｒｅｇａｔｅ）した
。腹膜細胞を、腹腔をＲＰＭＩ−１で洗浄することにより入手した。細胞をＲＰ
ＭＩ−１中で２回洗浄し、そして１０％ＦＢＳを含有する同じ培地（ＲＰＭＩ−
１０）中に再懸濁した。細胞の希釈物を、最終容量１００μｌのＲＰＭＩ−１０
中でコーティングされたプレート上にプレートした。プレートを、３７℃で一晩
、５％ＣＯ₂、９５％湿度中でインキュベートした。

【０１８５】 プレートをＰＢＳ−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で６回洗浄し、そして１００μｌ
ビオチン結合体化抗ＩｇＭまたは抗ＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ＃１１５−０６５−
０２０または１１５−０６５−００８、１／１０００（１０％ヤギ血清、１％魚
ゼラチン、および０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ中））と共に、３
７℃で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０
で６回洗浄し、そして１００μｌＥｘｔｒＡｖｉｄｉｎ−アルカリホスファター
ゼ（Ｓｉｇｍａ、＃Ｅ２６３６、１／１０００（１０％ヤギ血清、１％魚ゼラチ
ン、および０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ中））と共に、３７℃で
１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で６回
洗浄し、そして１００μｌアルカリホスファターゼ基質Ｂ（展開緩衝液（Ｂｉｏ
ｒａｄ＃１７０−６４３２中１／１００）と共に、暗所で室温で一晩インキュベ
ートした。次いで、プレートを蒸留水でリンスし、風乾し、そしてスポットを顕
微鏡検査によって手動で計数した。

【０１８６】 実験プロトコル。ＧａｌＴ ＫＯマウスを、Ｊｏｈｎ Ｌｏｗｅ（Ｕｎｉｖｅ
ｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｃｈｉｇａｎ）より入手した。マウス（１５〜１６週齢
）に、１５週の間、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中に溶解した４００μｇ
ＬＪＰ９２０またはＰＢＳ単独を毎日腹腔内処置した。血液サンプルを、処置の
前、およびその後毎週、採集した。１５週後、ＬＪＰ９２０処置を止め、そして
マウスを１×１０⁹ウサギ赤血球（ｒＲＢＣ）で腹腔内で免疫した。免疫は、抗
ジｇａｌ特異的抗体形成細胞（ＡＦＣ）の検出のために必要であり、そして寛容
が誘発されたか否かの決定を可能にした。８日後、動物を屠殺し、脾臓および腹
膜細胞を、ジｇａｌ特異的ＡＦＣについてＥＬＩＳｐｏｔによってアッセイした
。血清サンプルを、抗ジｇａｌ抗体についてＥＬＩＳＡによってアッセイした。
比較のために、野生型Ｃ５７Ｂ１／６×ＤＢＡ／２マウスもまた試験した。これ
らのマウスは、α１，３−ガラクトシルトランスフェラーゼ酵素を発現し、そし
て抗ジｇａｌ抗体を作製しなかった。これらのマウスからの値は、ＥＬＩＳＡア
ッセイにおいてバックグラウンドを表す。

【０１８７】 （結果） 血清抗ジｇａｌ抗体レベル。連続採血（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｂｌｅｅｄｓ
）からのデータを、反復測定ＡＮＯＶＡによって解析した。ＩｇＭ抗ジｇａｌ抗
体およびＩｇＧ抗ジｇａｌ抗体は、ＬＪＰ９２０処置動物において、プラシボ処
置動物に対して有意に減少した（ｐ≦０．００１（両場合とも）；図２７Ａおよ
び２７Ｂ）。

【０１８８】 １５週目、ｒＲＢＣ免疫前、ＩｇＭ抗ジｇａｌ抗体のレベルは、プラシボ処置
動物に対して、ＬＪＰ９２０処置動物において有意に減少した（平均ＯＤ ０．
１２４対０．３９９、ｐ＝０．０００４、ＡＮＯＶＡ；図２８Ａ）。同様に、Ｉ
ｇＧ抗ジｇａｌ抗体のレベルは、プラシボ処置動物に対して、ＬＪＰ９２０処置
動物において有意に減少した（平均ＯＤ ０．０７９対０．１７９、ｐ＝０．０
００５、ＡＮＯＶＡ；図２８Ｂ）。ＬＪＰ９２０処置動物において、ＩｇＭ抗ジ
ｇａｌおよびＩｇＧ抗ジｇａｌのレベルは、バックグラウンドと有意に異ならな
かった（ＩｇＭ：ＷＴ、平均ＯＤ ０．０６１対ＬＪＰ９２０、平均ＯＤ ０．
１２４；ＩｇＧ：ＷＴ、平均ＯＤ ０．０５５対ＬＪＰ９２０、平均ＯＤ ０．
０７９；図２８Ａおよび２８Ｂ）。

【０１８９】 ｒＲＢＣでの免疫後、ＩｇＭ抗ジｇａｌ抗体のレベルは、プラシボ処置動物に
対してＬＪＰ９２０処置動物において有意に低かった（ＬＪＰ９２０平均ＯＤ０
．６５８対プラシボ平均１．０９７、ｐ＝０．００８、ＡＮＯＶＡ；図２８Ａ）
。ＩｇＧ抗ジｇａｌ抗体のレベルは、ＬＪＰ９２０処置動物において同様に低か
った（ＬＪＰ９２０平均ＯＤ０．３３５対プラシボ平均０．４８１、ｐ＝０．０
３８、ＡＮＯＶＡ；図２８Ｂ）。しかし、ＬＪＰ９２０処置動物におけるＩｇＭ
抗ジｇａｌ抗体レベルおよびＩｇＧ抗ジｇａｌ抗体レベルは共に、ｒＲＢＣ免疫
後、ＷＴコントロールに対して有意に増大した（ＩｇＭ：ＷＴ、平均ＯＤ ０．
０６２対ＬＪＰ９２０、平均ＯＤ ０．６５８、ｐ＝０．００１；ＩｇＧ：ＷＴ
、平均ＯＤ ０．０５８対ＬＪＰ９２０、平均ＯＤ ０．３３５、ｐ＝０．００
１、ＡＮＯＶＡ；図２８Ａおよび２８Ｂ）。

【０１９０】 ジｇａｌ特異的ＡＦＣ。ｒＲＢＣ免疫後のジｇａｌ特異的ＡＦＣの頻度を、Ｅ
ＬＩＳｐｏｔ分析によって決定した。ＩｇＭ抗ジｇａｌＡＦＣは、プラシボ処置
動物に比較してＬＪＰ９２０処置動物において有意に低かった（ｐ＝０．０２、
ＡＮＯＶＡ；図２９）；しかし、ＡＦＣ数は、バックグラウンドレベルに減少し
なかった。腹膜細胞においても、脾臓中のＩｇＧ抗ジｇａｌ分泌細胞においても
、抗ジｇａｌ特異的ＡＦＣは検出されなかった。

【０１９１】 これらの結果は、ＬＪＰ９２０での処置が、ＩｇＭ抗αＧａｌ抗体およびＩｇ
Ｇ抗αＧａｌ抗体の両方のレベルを減少するのに非常に有効であることを示す。
この結果が寛容原により誘発された寛容を反映することは、ＬＪＰ９２０処置後
にαＧａｌ特異的ＡＦＣの有意な減少がみられることにより支持される。

【０１９２】 前述の発明を、理解を明確にするために例示および実施例によって幾分詳細に
説明してきたが、ある種の変更および改変が実施されることは当業者に明らかで
ある。従って、本説明および実施例は、本発明の範囲を制限すると解釈されるべ
きではない。本発明の範囲は、上述の特許請求の範囲によって決定される。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、αＧａｌエピトープである２−［２−（２−チオエトキシ）エトキシ
］エチル３−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ドの酵素合成を示す反応スキームである。

【図２】 図２は、αＧａｌエピトープである２−［２−（２−チオエトキシ）エトキシ
］エチル３−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ドの化学合成を示す反応スキームである。

【図３】 図３は、αＧａｌエピトープであるｐ−アミノフェニル３−Ｏ−α−Ｄ−ガラ
クトピラノシル−α−Ｄ−ガラクトピラノシドの化学酵素合成を示す反応スキー
ムである。

【図４】 図４は、結合体化化学の２つの一般的な合成ストラテジーを示す。

【図５】 図５は、結合体化化学の第三の一般的な合成ストラテジーを示す。

【図６】 図６は、２つの二量体プラットホーム（化合物２３および２４）ならびに４つ
の四量体プラットホーム（化合物２５、２６、２７、および２８）を示す。

【図７】 図７は、４つの八量体プラットホーム（化合物２９、３０、３１、および３２
）を示す。

【図８】 図８は、単量体αＧａｌ結合体（化合物３３）ならびに４つの二量体αＧａｌ
結合体（化合物３３、３４、３５、および３６）を示す。

【図９】 図９は、実施例３に記載の２つの四量体αＧａｌ結合体（化合物３７および３
８）を示す。

【図１０】 図１０は、実施例３に記載の３つの四量体αＧａｌ結合体（化合物３９、４０
、および４１）を示す。

【図１１】 図１１は、実施例３に記載の、２つのαＧａｌ異性体の２つの四量体結合体（
化合物４２および４３）を示す。

【図１２】 図１２は、実施例３に記載の八量体αＧａｌ結合体（化合物４４）を示す。

【図１３】 図１３は、実施例３に記載の八量体αＧａｌ結合体（化合物４５）を示す。

【図１４】 図１４は、実施例３に記載の八量体αＧａｌ結合体（化合物４６）を示す。

【図１５】 図１５は、実施例３に示す八量体αＧａｌ結合体（化合物４７）を示す。

【図１６】 図１６は、αＧａｌアフィニティーカラムからの抗αＧａｌの溶出プロフィー
ルを示すグラフである（ＯＤ５５０対画分番号）。

【図１７Ａ】 図１７Ａは、ＰＫ１５細胞に結合した、アフィニティー精製したＩｇＧ抗αＧ
ａｌを示すグラフである。フローサイトメトリー分析結果を、アフィニティー精
製したＩｇＧ（黒い円）、またはカラムを素通りしたＩｇＧ（白い正方形）の、
平均蛍光強度（ＭＦＩ）対用量（μｇ／ｍｌ）で示す。

【図１７Ｂ】 図１７Ｂは、ＰＫ１５細胞に結合した、アフィニティー精製したＩｇＭ抗αＧ
ａｌを示すグラフである。フローサイトメトリー分析結果を、アフィニティー精
製したＩｇＭ（黒い円）、またはカラムを素通りしたＩｇＭ（白い正方形）の、
平均蛍光強度（ＭＦＩ）対用量（μｇ／ｍｌ）で示す。

【図１８】 図１８は、実施例４に記載のようにＥＬＩＳＡによって測定した、抗αＧａｌ
結合の阻害に対する、寛容原（ｔｏｌｅｒａｇｅｎ）のαＧａｌ結合価の効果を
示すグラフである。インヒビターに対する記号は、以下の通りである：白い円＝
αＧａｌ単量体；白い正方形、破線＝ＬＪＰ７２４（三糖類単量体）；白い正方
形、破線＝ＬＪＰ７２５（五糖類単量体）；黒い円、実線＝αＧａｌ二量体；黒
い正方形、実線＝ＬＪＰ７１２四量体；黒い三角形、実線＝ＬＪＰ７１９八量体
；白い三角形、破線＝ＬＪＰ７２８（１１マー五糖類−ＢＳＡ）；黒い三角形、
破線＝ＬＪＰ７２６（１１マー三糖類［３炭素リンカー］−ＨＳＡ）；黒い正方
形、破線＝ＬＪＰ７２７（１１マー三糖類［１４炭素リンカー］−ＨＳＡ）。

【図１９】 図１９は、実施例５に記載のような、ＬＪＰ７１２での霊長類の処理の後の、
血漿中抗αＧａｌ ＩｇＧの％の棒グラフである。

【図２０】 図２０は、実施例５に記載のような、種々の物質による古典的補体経路の活性
化を示すグラフである。記号は、以下の通りである；白い円、ＬＪＰ７１２；白
い正方形、コブラ毒因子（ＣＶＦ）；黒い三角形、凝集したヒトγグロブリン（
ＡＨＧ）。破線は、緩衝液単独について得られた結果を示す。

【図２１】 図２１は、実施例５に記載のような、種々の物質による第二補体経路の活性化
を示すグラフである。記号は、以下の通りである：白い円、ＬＪＰ７１２；白い
正方形、ＣＶＦ；黒い三角形、ＡＨＧ。

【図２２Ａ】 図２２Ａは、実施例５に記載のような、ＰＢＳ（正方形）と比較した、八量体
ＬＪＰ９２０（ｃｐｄ４６）での処理の後の血漿中抗αＧａｌ ＩｇＧ（円）の
減少を示すグラフである。

【図２２Ｂ】 図２２Ｂは、実施例５に記載のような、ＰＢＳ（正方形）と比較した、八量体
ＬＪＰ９２０（ｃｐｄ４６）での処理の後の血漿中抗αＧａｌ ＩｇＭ（円）の
減少を示すグラフである。

【図２３】 図２３は、実施例５に記載のような、血漿中抗αＧａｌ ＩｇＭの％に対する
、四量体ＬＪＰ７１２（白い円）と、八量体ＬＪＰ９２０（黒い円）との効果を
比較するグラフである。ＰＢＳ（黒い正方形）は、ネガティブコントロールとし
て含まれた。

【図２４】 図２４は、八量体プラットホーム化合物２９を合成するためのストラテジーを
示す。

【図２５】 図２５は、八量体プラットホーム化合物３１および３２を合成するためのスト
ラテジーを示す。

【図２６Ａ】 図２６Ａは、八量体プラットホーム化合物３０の合成を示す。

【図２６Ｂ】 図２６Ｂは、八量体プラットホーム化合物３０の合成を示す。

【図２７Ａ】 図２７Ａは、実施例６に記載のような、ＰＢＳ（正方形）と比較した、Ｇａｌ
Ｔノックアウトマウスの八量体結合体ＬＪＰ９２０での処置（菱形）後の、抗α
Ｇａｌ ＩｇＭの減少を示すグラフである。

【図２７Ｂ】 図２７Ｂは、実施例６に記載のような、ＰＢＳ（正方形）と比較した、Ｇａｌ
Ｔノックアウトマウスの八量体結合体ＬＪＰ９２０での処置（菱形）後の、抗α
Ｇａｌ ＩｇＧの減少を示すグラフである。

【図２８Ａ】 図２８Ａは、実施例６に記載のような、ＰＢＳ（中央の棒）と比較した、Ｇａ
ｌＴノックアウトマウスの八量体ＬＪＰ９２０での処置（左の棒）後の、自発的
およびｒＲＢＣ誘導抗αＧａｌ ＩｇＭの減少を示す棒グラフである。野生型レ
ベルを、右の棒に示す。

【図２８Ｂ】 図２８Ｂは、実施例６に記載のような、ＰＢＳ（中央の棒）と比較した、Ｇａ
ｌＴノックアウトマウスの八量体ＬＪＰ９２０での処置（左の棒）後の、自発的
およびｒＲＢＣ誘導抗αＧａｌ ＩｇＧの減少を示す棒グラフである。野生型レ
ベルを、右の棒に示す。

【図２９】 図２９は、実施例６に記載のような、ＰＢＳと比較した、八量体ＬＪＰ９２０
で処置したＧａｌＴノックアウトマウスにおけるＩｇＭ抗αＧａｌ抗体形成細胞
の減少を示す棒グラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｎ 33/531 33/531 Ａ 33/566 33/566 (31)優先権主張番号 ０９／４５７，９１３ (32)優先日 平成11年12月８日(1999．12．8) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ジョーンズ， デイビッド アメリカ合衆国 カリフォルニア 92121， サン ディエゴ， フローリンド ロー ド 11265 (72)発明者 ユー， リン アメリカ合衆国 カリフォルニア 92128， サン ディエゴ， ツリー ホロウ レ ーン 11597 Ｆターム(参考） 4C057 DD01 JJ08 JJ55 4C086 AA01 AA02 AA03 EA05 EA21 GA02 GA07 MA01 MA04 NA14 ZB07

Claims (30)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】結合手プラットホーム分子およびαＧａｌエピトープを含む結
   合体であって、該結合手プラットホーム分子が２〜１２８の結合価を有する、結
   合体。
2. 【請求項２】前記結合手プラットホーム分子が２の結合価を有する、請求項
   １に記載の結合体。
3. 【請求項３】前記結合手プラットホーム分子が４の結合価を有する、請求項
   １に記載の結合体。
4. 【請求項４】前記結合手プラットホーム分子が８の結合価を有する、請求項
   １に記載の結合体。
5. 【請求項５】前記結合手プラットホーム分子が１６の結合価を有する、請求
   項１に記載の結合体。
6. 【請求項６】前記結合手プラットホーム分子が化合物２６である、請求項３
   に記載の結合体。
7. 【請求項７】前記結合手プラットホーム分子が化合物３１である、請求項４
   に記載の結合体。
8. 【請求項８】前記結合体が化合物３８の構造を有する、請求項３に記載の結
   合体。
9. 【請求項９】前記結合体が化合物４６の構造を有する、請求項４に記載の結
   合体。
10. 【請求項１０】前記αＧａｌエピトープが、２−［２−（２−アセチルチオ
    エトキシ）エトキシ］エチル３−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ
    −ガラクトピラノシドである、請求項１に記載の結合体。
11. 【請求項１１】結合手プラットホーム分子およびαＧａｌエピトープを含む
    結合体であって、該結合手プラットホーム分子が少なくとも２の結合価を有する
    、結合体。
12. 【請求項１２】請求項１に記載の結合体を含む、組成物。
13. 【請求項１３】請求項３に記載の結合体を含む、組成物。
14. 【請求項１４】請求項４に記載の結合体を含む、組成物。
15. 【請求項１５】請求項９に記載の結合体を含む、組成物。
16. 【請求項１６】個体の抗αＧａｌ抗体の循環レベルを減少する方法であって
    、有効量の請求項１に記載の結合体を該個体に投与する工程を包含する、方法。
17. 【請求項１７】個体の抗αＧａｌ抗体の循環レベルを減少する方法であって
    、有効量の請求項３に記載の結合体を該個体に投与する工程を包含する、方法。
18. 【請求項１８】個体の抗αＧａｌ抗体の循環レベルを減少する方法であって
    、有効量の請求項７に記載の結合体を該個体に投与する工程を包含する、方法。
19. 【請求項１９】個体の抗αＧａｌ抗体の循環レベルを減少する方法であって
    、該個体の抗αＧａｌ抗体の循環レベルを減少するために十分な量の請求項９に
    記載の組成物を該個体に投与する工程を包含する、方法。
20. 【請求項２０】個体の抗αＧａｌ抗体の循環を中和する方法であって、請求
    項１に記載の組成物を該個体に投与する工程を包含する、方法。
21. 【請求項２１】個体のαＧａｌに対する耐性を誘導する方法であって、有効
    量の請求項１に記載の結合体を該個体に投与する工程を包含する、方法。
22. 【請求項２２】個体のαＧａｌに対する耐性を誘導する方法であって、有効
    量の請求項９に記載の結合体を該個体に投与する工程を包含する、方法。
23. 【請求項２３】生物学的サンプルにおいて、請求項１に記載の結合体と特異
    的に結合する抗体を検出する方法であって、 （ａ）安定な抗原−抗体複合体の形成を可能にする条件下で、該サンプル内の
    抗体と請求項１に記載の結合体とを接触させる工程；および （ｂ）もしあれば、工程（ａ）で形成された安定な複合体を検出する工程、 を包含する、方法。
24. 【請求項２４】前記抗体がＢ細胞の前記表面上で発現される、請求項２３に
    記載の方法。
25. 【請求項２５】個体中において異種移植を実施するための方法であって、以
    下： （ａ）個体に異種組織を導入する工程であって、ここで該異種組織がαＧａｌ
    エピトープを含む、工程；および （ｂ）請求項１に記載の結合体を該個体に投与する工程、 を包含する、方法。
26. 【請求項２６】前記工程（ｂ）が、前記工程（ａ）の少なくとも約３０日前
    に実施される、請求項２５に記載の方法。
27. 【請求項２７】個体中において異種移植を実施するための方法であって、以
    下： （ａ）個体に異種組織を導入する工程であって、ここで該異種組織がαＧａｌ
    エピトープを含む、工程；および （ｂ）請求項９に記載の結合体を該個体に投与する工程、 を包含する、方法。
28. 【請求項２８】前記工程（ｂ）が、前記工程（ａ）の少なくとも約３０日前
    に実施される、請求項２７に記載の方法。
29. 【請求項２９】個体において、αＧａｌエピトープを含む移植された組織の
    拒絶を抑制する方法であって、該方法が拒絶を抑制するために十分な量の請求項
    １に記載の結合体を該個体に投与する工程を包含する、方法。
30. 【請求項３０】個体において、αＧａｌエピトープを含む移植された組織の
    拒絶を抑制する方法であって、該方法が拒絶を抑制するために十分な量の請求項
    ９に記載の結合体を該個体に投与する工程を包含する、方法。