CZ20021707A3 - Pouľití protilátek pro výrobu farmaceutického přípravku vhodného jako vakcína - Google Patents
Pouľití protilátek pro výrobu farmaceutického přípravku vhodného jako vakcína Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20021707A3 CZ20021707A3 CZ20021707A CZ20021707A CZ20021707A3 CZ 20021707 A3 CZ20021707 A3 CZ 20021707A3 CZ 20021707 A CZ20021707 A CZ 20021707A CZ 20021707 A CZ20021707 A CZ 20021707A CZ 20021707 A3 CZ20021707 A3 CZ 20021707A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- antibodies
- tumor
- individual
- immunoaffinity purification
- antibody
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 34
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 88
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 82
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 82
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 80
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims abstract description 40
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims abstract description 40
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims abstract description 36
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 16
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 claims abstract description 11
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 65
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 34
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 26
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 23
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 22
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 22
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 14
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims description 2
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 2
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims description 2
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 claims description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims description 2
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 claims 2
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 claims 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 34
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 12
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 12
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 7
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 7
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 229940037642 autologous vaccine Drugs 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 5
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 102100031940 Epithelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 102000012406 Carcinoembryonic Antigen Human genes 0.000 description 3
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 3
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 3
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 3
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 3
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- -1 GM-CSF Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 1
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102100032768 Complement receptor type 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000941929 Homo sapiens Complement receptor type 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- RMINQIRDFIBNLE-NNRWGFCXSA-N O-[N-acetyl-alpha-neuraminyl-(2->6)-N-acetyl-alpha-D-galactosaminyl]-L-serine Chemical compound O1[C@H](OC[C@H](N)C(O)=O)[C@H](NC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]1CO[C@@]1(C(O)=O)O[C@@H]([C@H](O)[C@H](O)CO)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C1 RMINQIRDFIBNLE-NNRWGFCXSA-N 0.000 description 1
- MXRIRQGCELJRSN-UHFFFAOYSA-N O.O.O.[Al] Chemical compound O.O.O.[Al] MXRIRQGCELJRSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 101000762949 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 1
- 101710100968 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diamine;hydron;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NC1=CC=CC=C1N RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 208000028659 discharge Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical class O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012859 sterile filling Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 101150047061 tag-72 gene Proteins 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Oblast techniky které jsou obsahuj ících
Předkládaný vynález popisuje použití protilátek, které se váží na protilátky namířené proti antigenům asociovaným s nádory („tumour-associated antigens), a získávány z tělních tekutin jedince (individua;
protilátky pomocí imunoafinitní purifikace na specifických ligandech, pro výrobu farmaceutického přípravku pro individuální autologní profylaktickou nebo terapeutickou vakcinaci proti rakovinným onemocněním. Ligandy pro imunoafinitní purifikaci jsou protilátky nebo jejich deriváty, které jsou namířeny proti jednomu nebo více antigenům spojeným s nádory. Dále se vynález týká farmaceutických přípravků obsahujících protilátky získané pomocí imunoafinitní purifikace nebo dendritických buněk, které jimi byly pulzně ošetřeny in vitro.
Dosavadní stav techniky
Adaptivní imunitní systém člověka se skládá ze dvou základních složek, a sice humorální a buněčné imunity, adaptivní imunitní reakce je založena na klonální selekci B a T lymfocytů a v principu umožňuje, aby byl rozpoznán jakýkoliv antigen a byla vytvořena imunologická paměť. Při vakcinaci (očkování) se výhodně využívá těchto vlastností adaptivního imunitního systému.
Každý B iymfocyt tvoří protilátku s určit vazebnou specifičností. Tato protilátka je také přítomná jako • · • · specifický receptor v membráně těch B lymfocytů, které ji vytvářejí. Humorální imunitní reakce proti antigenům, které jsou rozpoznány jako cizorodé (cizí) antígeny, je založena na selektivní aktivaci B lymfocytů, které tvoří protilátky schopné navázat se na epitopy příslušného antigenu. V průběhu diferenciace B lymfocytů je reorganizace (přestavba) DNA klíčovým procesem, pokud jde o diverzitu protilátek.
V humánním séru se vyskytuje velký počet protilátek různých specifit, isotypů a podtříd. Celková koncentrace všech imunoglobulinů v séru je 15 až 20 mg/ml, což znamená, že v krevním oběhu trvale cirkuluje přibližně 100 g imunoglobulinů s různou specifitou. Není možné určit přesné množství všech protilátek majících různé specifity. Teoreticky možný repertoár je přibližně 1011. Obecně platí, že určitá protilátka může vázat odlišné antígeny, které jsou si navzájem podobné, avšak váže je s odlišnou afinitou a aviditou.
Imunitní systém musí udržovat homoeostázu pokud jde o distribuci a důležitost těchto odlišný specificit pomocí endogenních regulačních mechanismů. Esenciálním mechanismem je tzv. „idiotypová síť, která byla postulována v publikaci Nielse Jerneho přibližně před 25 lety (Jerne, Ann. Immunol. 125C (1974), 373-389): Existují anti-idiotypové protilátky, které jsou namířeny proti každému idiotypu protilátky, které určují její vazebnou specifitu a které se tudíž vážou k idiotypu první protilátky jako prostředek k rozpoznávání antigenu. Jerne předpokládal, že interakce mezi idiotypověspecifickými receptory na lymfocytech mohou být zodpovědné za regulaci imunitního systému. Tyto interakce zjevně skutečně existují, jelikož bylo ukázáno, že v průběhu imunitní reakce se vytvářejí také anti-idiotypové protilátky namířené proti primárně indukovaným protilátkám. Jelikož existují
4 4
4··
4 4 4 4 4 anti-idiotypové protilátky proti každé protilátce, lymfocyty v principu nejsou tolerantní pokud jde o idiotypy protilátek.
V imunologickém smyslu, některé anti-idiotypové protilátky mohou představovat „interní obraz antigenu. Takové protilátky mohou tudíž být použity pro imunizaci jako náhrada nominálního antigenu, jelikož protilátky indukované pomocí imunizace se mohou, alespoň částečně, vázat k nominálnímu antigenu. PO značně dlouhé období byl tento přístup využíván, zejména v imunoterapii nádorů. Více než 10 let existuje řada preklinických a klinických projektů, jak indukovat imunitní reakce proti antigenům spojeným s nádory (tumour-associated antigens) pomocí vakcinace monoklonální antiidiotypovou protilátkou (pro přehled viz: Bhattacharya-Chatterjee, Foon, Anti-idiotype antibody vaccination therapies of cancer, Cancer Treat. Res. 94 (1998), 51-68). Většina těchto monoklonálních anti-idiotypových protilátek je myšího původu. Avšak byly testovány i humánní monoklonální anti-idiotypové protilátky (např. Fagerberg et al., PNAS 92 (1995), 4773-4777).
Konkrétním případem jsou pokusy o terapeutickou imunizaci pacientů trpících B lymfocytárním lymfomem. V případě takové nemoci, určitý klon B lymfocytů, který tvoří specifické imunoglobuliny mající jeho idiotypové charakteristiky, a který také nese daný imunoglobulin jako receptor v buněčné membráně, je degenerovaný. Tato protilátka je monoklonální a může být považována za nádorově-specificky antigen pro individuální B lymfocytární lymfom. Bylo ukázáno, že takové pacient-specifické autologní protilátky, když jsou produkovány v buněčné kultuře a podávány jako vakcína ve vhodné imunogenní formě, mohou vyvolat imunitní reakci proti idiotypu takové protilátky, přičemž tato imunitní reakce působí na B lymfocytární lymfom (Reichardt et al., Blood. 93 (1999), 2411-2419) . Stručně lze shrnout, že • · · • 4 • 4 • Humánní monoklonální anti-idiotypové protilátky které napodobují (mimikují) s nádorem asociovaný antigen mohou, jako vakcína, indukovat imunitní reakci v karcinomu u pacientů, přičemž imunitní reakce může být namířena proti danému s nádorem asociovanému antigenu. Pomocí hybridomové technologie nebo imortalizace humánních B lymfocytů byly takové humánní monoklonální protilátky získány od pacientů, kterým byly podány (většinou myší) anti-nádorové protilátky pro pasivní imunoterapii, a u nichž se proti nim vytvořila imunitní reakce. Další pacienti byli imunizováni humánními monoklonálními anti-idiotypovými protilátkami, vytvořenými tímto způsobem.
• Humánní protilátky, které byly produkovány pomocí B lymfocytárních lymfomů a tudíž měly definovaný idiotyp, mohou jakožto individuální vakcinace indukovat imunitní reakci způsobem specifickým pro pacienta, kdy imunitní reakce může být namířena proti B lymfocytárnímu lymfomu. Takové pacient-specifické protilátky se musejí získávat individuálně, užitím hybridomové technologie nebo pomocí imortalizace buněk z B lymfocytárního lymfomu. Použití takových protilátek je přirozeně omezeno na léčení B lymfocytárních lymfomů.
Takže ačkoliv je známo, že monoklonální anti-idiotypové protilátky z určitých biologických druhů mohou také být použity pro imunizaci jedinců stejného druhů, ze kterého byly získány protilátky, je v každém případě nezbytné manipulovat s buňkami a kultivovat je. Tento přístup je tedy značně časově náročný a je omezen pouze na monoklonální protilátky.
V publikaci Losman et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 88 (1991), 3421-3425, byla popsána purifikace ab2 protilátek z karcinomu pacienta. Avšak tento pacient byl před tím podroben působení myší monoklonální protilátky (NP-4) proti • · » · * · · · · · · · · « · · ·· · · « · · ···· · · · 9 9 »
999999999· 999·
9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
CEA. Je tudíž zcela jasné, že existuje stále potřeba prostředků a způsobů léčení, které by umožnily účinné a široce aplikovatelné léčení, a případně individuální (tj. individualizované) léčení nádorů a také prevenci proti nádorovým onemocněním.
Tudíž technický problém, který řeší předkládaný vynález, je poskytnutí účinných prostředků k individuálnímu léčení různých typů nádorů, obecně k léčení rakoviny a také k preventivní ochraně proti rakovině. Tento technický problém byl vyřešen tak, jak je demonstrováno na příkladech provedení vynálezu, který je definován připojenými patentovými nároky.
Předkládaný vynález se týká použití protilátek pro výrobu přípravků, které jsou užitečné jako vakcíny, a to jak pro profylaktickou tak i terapeutickou vakcinaci proti rakovině, přičemž protilátky jsou získávány z tělních tekutin obsahujících protilátky pomocí imunoafinitní purifikace, kdy protilátky rozpoznávající jeden nebo více antigenů asociovaných s nádory nebo jejich fragmenty mající stejný idiotyp jsou použity jako ligandy pro imunoafinitní purifikaci.
Celkový fond („pool) protilátek, které jsou například přítomny ve velkém množství v krvi každého člověka, obsahuje protilátky se všemi možnými vazebnými specifitami. Tedy tento fond protilátek v principu také obsahuje protilátky (Ab2) proti idiotypu např. (již známé nebo také nové) myší monoklonální protilátky (Abl) namířené proti kterémukoliv antigenů asociovanému s nádorem (TAA). V souladu s teorií imunologické sítě stejný protilátkový fond každého člověka také obsahuje určité množství protilátkek namířených proti idiotyům autologní Ab2, tyto protilátky jsou označovány Ab3 protilátky. Podle teorie imunologické sítě se Ab3 protilátky mohou vázat na antigen asociovaný s nádorem, který je
4 4·4 4
4
4 • 444 44 4 · 4 4 g · 4 4444 44*4 444 4
4 44 · 444444 definován externí Abl. Posun rovnováhy Ab2/Ab3 ve prospěch Ab3 musí vést k tomu, že imunitní systém je schopen lépe rozpoznávat a pak napadnout nádorové buňky nesoucí daný antigen.
Podstatou předkládaného vynálezu je to, že takový posun imunologické rovnováhy může být dosažen tím, že jsou podávány jednotlivé autologní frakce Ab2 ve formě imunogenní vakcína. Pomocí takové autologní vakcinace mohou být B lymfocyty, které tvoří Ab3, selektivně stimulovány. Pro takovouto vakcinaci jsou potřebná pouze malá množství Ab2 frakce, která mohou být formulována známými způsoby užitím vhodného vakcinačního adjuvans.
Protilátky použité podle vynález jsou tudíž Ab2 protilátky tělních tekutin obsahujících protilátky, které jsou namířeny proti anti-TAA protilátce použité pro imunoafinitní purifikaci. Tělní tekutiny obsahující protilátky jsou například krev, plazma, sérum, lymfa, maligní výtoky apod. Výhodnou tělní tekutinou je sérum. Tělní tekutina může být získána z jakéhokoliv živočišného organizmu, který obsahuje tělní tekutiny obsahující protilátky. Výhodně se jedná o tělní tekutiny obratlovce, výhodněji savce a nejvýhodněji člověka.
Jelikož je imunitní reakce indukovaná vakcinaci autologními protilátkami určována vazebným úsekem těchto protilátek, tj. jejich idiotypem, v principu mohou být pro úspěšnou vakcinaci místo frakce intaktních protilátek použity také fragmenty nebo deriváty těchto protilátek, pokud tyto fragmenty nebo deriváty obsahují idiotyp odpovídající výchozí protilátky. Takže termín „protilátka v předkládaném popisu zahrnuje také fragmenty nebo deriváty takových protilátek shodnou vazebnou specifitu. Jako příklady, které však vynález nijak neomezují, lze uvést následující: F(ab) '2 fragmenty a F(ab) ' fragmenty, které mohou být připraveny ·· · · zahrnuje produkty, které kondenzací protilátky biochemickými metodami, které jsou známé (např. pomocí enzymatického štěpení). Termín „derivát zahrnuje také např. protilátkové deriváty, které mohou být připraveny chemickými nebo biochemickými metodami, které jsou známy, jako jsou například protilátky amidované mastnými kyselinami na volné aminoskupině pro zvýšení lipofilního charakteru, což umožňuje inkorporaci do lipozomů. Konkrétně termín „derivát také mohou být připraveny chemickou nebo protilátkového fragmentu s molekulou, která zesiluje imunitní reakci, jako je například tetanový toxoid, exotoxin z Pseudomonas, deriváty lipidu A, GM-CSF, IL-2, nebo chemickou kondenzací protilátky nebo protilátkového fragmentu s polypeptidy, které zesilují imunitní reakci, jako je například GM-CSF, IL-2, IL-12, C3d atd. Purifikace protilátek z tělních tekutin obsahujících protilátky, např. z humánního séra, užitím imunoafinitní purifikace, se provádí postupy, které jsou odborníkovi známy (Clin. Chem. 45 (1999), 593, J. Chem. Technol. Biotechnol. 48 (1990), 105). TAA-specifická protilátka nebo směs protilátek se immobilizuje na pevné fázi (nosiči) . Může to být membrána, gel nebo podobné látky, na které se protilátky mohou navázat, aniž by došlo k podstatné změně jejich vazebných vlastností. Ab2 mohou být navázány k imobilizovaným protilátkám dávkovým způsobem nebo průtokovým způsobem. Imunoafinitní purifikace se může provádět automaticky na chromatografickém zařízení ručním způsobem. Lze si však i představit, že proces se provádí ručně, automaticky nebo semiautomaticky pomocí jednoduchého zařízení obsahujícího zmobilizované protilátky. Při imunoafinitní chromatografií, která je popsána v příkladu 1, se obvykle získá mezi 3 až 10 μς imunoglobulinu na 1 ml použitého séra. Obecně protilátková frakce získaná tímto způsobem obsahuje jak IgM tak i IgG. Je tudíž možné izolovat přibližně 0,08 až 0,25 mg Ab2 z množství
0« 000· krve, které lze přijatelně odebrat, např. z 50 ml krve, které poskytnou přibližně 25 ml séra. Toto množství je v podstatě dostatečné pro vakcinaci. Pokud je třeba izolovat větší množství Ab2, užijí se techniky, které jsou odborníkům známy, jako je například plazmaferéza, v kombinaci s imunoafinitní purifikaci. Když je použito několik protilátek, majících odlišné specifity, pak takové imobilizované protilátky mohou být použity simultánně simultánně nebo odděleně a imunoafinitní purifikace mohou být provedeny paralelně nebo v sérii.
V kontextu předkládaného vynálezu termín „ antigen asociovaný s nádorem „ označuje strukturu, která je prezentována především nádorovými buňkami, a která je tudíž umožňuje odlišit od normálních nenádorových buněk. Výhodně je takový antigen asociovaný s nádorem lokalizován na nebo v buněčné membráně nádorových buněk. Avšak není ani vyloučeno, že takové antigeny jsou také přítomny na nedegenerovaných buňkách. Antigeny asociované s nádorem jsou například polypeptidy, konkrétně glykosylované proteiny nebo glykosylační profily polypeptidů. Další struktury, které mohou představovat antigen asociovaný s nádorem jsou například glykolipidy. K těm patří například gangliosidy, jako je například GM2. A dále antigen asociovaný s nádorem může být představován změnou ve složení lipidů buněčné membrány, která může být charakteristická pro buňky karcinomu.
Nej různější protilátky proti různým antigenům asociovaným s nádorem jsou známy již delší dobu, a nebo mohou být připraveny metodami, které jsou jíž odborníkům známy (např. tzv. hybridomová technika, technika „phage display, tj. vystavování na fágu nebo fágový displej).
Ve výhodném provedení vynálezu jsou protilátky získané pomocí imunoafinitní purifikace podávány jakožto autologní, φφ ··♦ · φφ φφ φ φ φ φφφφ φφ φφφ φ φ φ φφφφφφ φφ φφ φ φ φ φφφ φφφ individuální vakcíny jednotlivcům, z jejichž tělních tekutin byly získány.
Tudíž další nedílnou složkou předkládaného vynálezu je to, že izolace Ab2 frakce z tělesných tekutin jedince, např. krev, může být provedena prostřednictvím imunoafinitní purifikace protilátky přítomné v tělesné tekutině. Jedna nebo více protilátek proti antigenu asociovanému s nádorem se použije jako ligand.
V tomto kontextu je jedincem jakýkoliv živočich, výhodně obratlovec, výhodněji savec a nejvýhodněji člověk.
V dalším výhodném provedení několik protilátek namířených proti různým antigenům asociovaným s nádory a/nebo proti různým epitopům jednoho nebo více antigenů asociovaných s nádorem může být současně užito k imunoafinitní purifikace. Jestliže je užito několik, a zejména monoklonáiních, protilátek, namířených proti odlišným antigenů asociovaným s nádorem nebo proti odlišným epitopům, současně pro imunoafinitní purifikaci Ab2 přítomné v tělesné tekutině, získá se frakce obsahující různé Ab2 proti vybranému soboru antigenů asociovaných s nádorem, jejichž simultánní použití jako „vakcinová spoušť imunitní reakce proti všem těmto antigenům asociovaným s nádorem nebo epitopy. Tedy je posunuta o jeden krok směrem k (často společně exprimovaných, koexprimovaných) antigenů asociovaných s nádorem nebo epitopů. Takový postup přirozeně zvyšuje účinnost indukované imunitní reakce a podstatně redukuje vytváření antigen-negativních variant nádorů („únik nádoru), jelikož je vysoce nepravděpodobné, že by nádorové buňky mohly zastavit expresi několika antigenů současně.
imunologická rovnováha rozpoznávání soboru ·· 4 · · 4
Μ · • · 4 • · 4 4 • · 4 4 · · • 44
V principu jsou způsoby výše popsané založeny na všech známých nebo nově objevených antigenech asociovaných s nádorem. Jedinou podmínkou je, aby byla dostupná jedna nebo více protilátek, výhodně monoklonálních protilátek, namířených proti tomuto antigenu, která se může užít jako ligand pro imunoafinitní purifikaci. V principu jsou vhodné všechny možné druhy protilátek, konkrétně polyklonální nebo monoklonální protilátky, přičemž výhodné jsou monoklonální protilátky. Je také možné využít směsi polyklonální a monoklonální protilátky. Navíc lze užít jak např. myší monoklonální protilátku tak i protilátku z jiného biologického druhu (např. laboratorního potkana). Kromě toho mohou být užity myší-humánní chimérické protilátky, humanizované nebo humánní monoklonální protilátky proti antigenům asociovaným s nádorem. Vlastnosti protilátky použité pro imunoafinitní purifikaci jsou určeny jejich vazebnými úseky, tj . jejich idiotypem. Takže v principu mohou být použity pro úspěšnou imunoafinitní purifikaci namísto intaktní protilátky také fragmenty těchto protilátek, pokud si tyto fragmenty ještě zachovávají idiotyp příslušné výchozí protilátky. K příkladům patří (aniž by výčet byl limitující): F(ab)'2 fragmenty, F(ab)' fragmenty a Fv fragmenty, které mohou být připraveny biochemickými metodami, které jsou odborníkům známy (enzymatické štěpení) nebo metodami molekulární biologie, taktéž odborníkům známými. Faktem je, že je možné použít také směsi uvedených druhů protilátek nebo jejich fragmentů.
Výběr antigenů asociovaných s nádorem a tudíž protilátky použité pro imunoafinitní purifikaci, která je namířena proti takovým antigenům, závisí na antigenních vlastnostech nádoru, proti kterému má být vakcinace prováděna.
V následujícím seznamu jsou pro příklad uvedeny antigeny asociované s nádorem, které jsou známy ze stavu techniky, a
9999
99
9 9 9 9 9 ····
9 9 9 9 9 9 9 9 9
9 9999 9999 999 · • · · · · · 9 9 · ·· · ·· · ·· ···· které jsou často exprimovány na různých, zejména epiteliálních, nádorech. Avšak použití autologní vakcinace, která je popsána v předkládané přihlášce, není vůbec limitováno jen na tyto antigeny:
- Adhezní molekula epitelových buněk (Ep-CAM),
- Karcinoembryonální antigen (CEA),
- Lewis Y sacharid, sialyl Tn sacharid,
- globo H sacharid,
- gangliosidy jako jsou například GD2 / GD3 / GM2
- antigen specifický pro prostatu (PSA)
- CA 125,
- CA 18-9,
- CA 15-3,
- TAG-72,
- EGF receptor,
- Adhezní molekula nuronových buněk (N-CAM),
- Receptor Her2/Neu,
- D97,
- CD20 a
- CD21
Proti všem těmto zmíněným antigenům (většinou několika) byly popsány zejména monoklonální protilátky, které jsou v principu vhodné pro použití jako ligandy pro výše imunoafinitní purifikace s cílem získat Ab2.
Další antigeny asociované s nádorem byly popsány například publikaci DeVita et al. (Eds., „Biological Therapy of Cancer, 2nd edition, chapter 3: Biology of Tumour Antigens, Lippincott Company, ISBN 0-397-5144116-6 (1995)).
Ve výhodném provedení vynálezu je antigen asociovaný s nádorem v membráně lokalizovaná molekula, která je často
·.«··
0 0 « 0 9 9 9
9 9 9 9 9
0 0000 0 0 0 • 0 0 0 0
0 00 «0 0000 «0 0 0 0 0 0
0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0
00 0«00 exprimována nebo koexprimována na nádorových buňkách epteliálního původu, nádorových buňkách neuroendokrinního původu nebo nádorových buňkách pocházejích ze systému krvetvorby.
V dalším výhodném provedení je přípravek podle vynálezu vhodný pro opakované podávání protilátky v něm obsažené. Způsob získání autologní vakcíny z tělesných tekutin jedince není přirozeně omezen na jedinou aplikaci.
Posun imunologického repertoáru směrem k anti-nádorové účinnosti, který je spuštěn pomocí první vakcinace, může být zesílen pomocí opakování téhož postupu, např. několik týdnů po izolaci první autologní vakcíny pomocí imunoafinitní purifikace, opět může být odebrána tělní tekutina, např. krev, a nový autologní vakcína může být připravena a podávána. Tímto způsobem je zajištěno, že je při jednotlivých vakcínách vždy brán zřetel na odpovídající stav imunologické rovnováhy. Tento postup lez ve vhodných intervalech znovu a znovu opakovat (např. nejdříve každé 4 až 8 týdnů, později každých 6 měsíců).
Nové vakcinační přípravky a postupy vakcinace autologní protilátkou, které jsou popsány v předkládané přihlášce, jsou v principu vhodné jak pro terapeutické tak i profylaktické účely. Opakovaná terapeutická vakcinace pacientů s karcinomem může potlačit vytváření nových metastáz, což může alespoň zpomalit rozvoj a šíření nemoci. Terapeutická autologní vakcinace s může být zejména použitelná při následujících stádiích nemocí:
V časných stadiích nemocí, např. po úspěšné operaci primárního nádoru (adjuvantní stádium), kdy zbývající diseminující nádorové buňky jsou zničeny pomocí autologní vakcíny podle vynálezu, a je tak zabráněno vzniku nových metastáz. V důsledku toho může být prodlouženo období života * .4 » • 00 0 » • 004 11 »000» 9 1 0 » · · 4 «
0« 1 >* *1 «0«·
04 «440 »0 0 • 0 0 4 0
0 0 4 » 000400 bez relapsu a tedy doba přežití. Případně je možné dosáhnout i celoživotní ochrany proti vytváření metastáz pomocí popsané autologní vakcinace a podávání zesilovacích („boosters) dávek ve vhodných intervalech.
Ve stádiu, kdy byly metastázy již vytvořeny, může být jejich šíření a vytváření dalších metastáz zastaveno pomocí přípravků nebo autologní vakcinace podle vynálezu. Výsledkem je, že se stav nemoci stabilizuje a tudíž je možné udržet kvalitu života a případně prodloužit délku života.
Strategie autologní vakcinace podle vynálezu může být využita u pacientů, kterým byla podávána monoklonální protilátka proti antigenu asociovanému s nádorem předem z důvodů diagnostiky nebo terapie, a u kterého se vyvinula proti nim imunologická reakce. V důsledku toho v imunoafinitní purifikaci, ve které je tato protilátka použita jako ligand, protilátky namířené proti ní (Ab2) jsou získány v množství vyšším, než v případě neošetřených jedinců. Vakcinace těmito Ab2 protilátkami zesiluje tvorbu Ab3 protilátek, které již mohly být tvořeny vnitřně. Vnitřní (intrinsická) indukce Ab3 protilátek s potenciálními protinádorovými vlastnostmi prostřednictvím indukce Ab2 užitím pasivní imunoterapie myšími protilátkami namířenými proti antigenům asociovaným s nádorem tumour-associated antigens (Abl), které jsou podávány i.v. pacientům s karcinomem, byl předpovězena a po mnoho let testována (např. Koprowski et al., PNAS 81 (1984), 216-19).
Přípravek podle vynálezu a autologní vakcinace podle vynálezu mohou být, v principu, použity u zdravých jedinců pro zlepšení, tedy jako profylaxe, ochrany proti vzniku rakovinných onemocnění. Taková opatření mají smysl, zejména v případě vysoce rizikových skupin (kam patří jedinci např. s genetickou dispozicí pro vývoj určitého rakovinného • · onemocnění, které může být detekována ve zvýšené míře pomocí odpovídajících testů).
Skutečnost, že imunologický stav určitého jedince, pokud jde i idiotypovou síť, je zohledněn, jelikož výhodná vakcína je připravena z tělní tekutiny daného jedince, např. séra, je obecně výhoda této strategie individuální autologní vakcinace popsané v předkládaném vynálezu.
Navíc důsledkem je i to, že imunizovaný jedinec nepřijde do kontaktu s cizorodými antigeny, ale je podroben pouze působení endogenní složky ve vhodné formě, která modulačně působí na imunologickou rovnováhu.
Ve výhodném provedení vynálezu je protilátka získaná pomocí imunoafinitní purifikace formulována s adjuvans vhodným pro vakcíny.
Jak obecně platí pro vakcíny, frakce autologní protilátky nebo jejích fragmentů a derivátů může být formulována s adjuvans pro vakcíny. Pomocí adjuvans se zesiluje imunitní reakce. K příkladům takových adjuvans, aniž by však výčet byl omezující, patří: adjuvans obsahující hliník, konkrétně hydroxid hlinitý (např. Alu-gel), deriváty lipopolysacharidů, Bacillus Calmette Guerin (BCG), QS-21, liposomové přípravky, formulace s dalšími antigeny, proti kterým již imunitní systém má vytvořenou silnou imunitní reakci, jako je například tetanový toxoid nebo složky chřipkových virů, případně ve formě liposomových přípravků.
Pro zesílení imunitní reakce může být získaná vakcína podávána spolu s odpovídajícími, výhodně humánními, cytokiny, které podporují vznik imunitní reakce. Zejména, avšak nikoliv výlučně, je třeba zmínit faktor stimulující faktor stimulující kolonie granulocytů a makrofágů (GM-CSF). Tento cytokin stimuluje účinnou imunitní reakci tím, že aktivuje buňky • · ··· · „zpracovávající antigen („antigen processing cells), např. dendritické buňky).
Případně publikovány, s autologními lze odborníkům známými postupy, které byly inkubovat frakce autologní protilátky denčritickými buňkami kultivovanými ex-vivo.
Dendritické buňky takto pulzně ošetřené jsou pak podávány zpět danému jedinci. Tímto způsobem je možné dosáhnout zvláště účinné imunitní reakce.
Ve výhodném provedení použití podle vynálezu protilátky obsažené v přípravku jsou smíchány s adjuvans a jsou pak tepelně ošetřeny, výhodně při teplotě mezi 70 a 121 °C. adjuvans je výhodně adjuvans obsahující hliník. Je možné, že ačkoliv tepelné ošetření denaturuje proteinový antigen, imunogenní části proteinu mohou být prezentovány imunitnímu systému ve správném tvaru díky navázání na adjuvans. Nicméně není absolutně nezbytné proteiny denaturovat, aby bylo dosaženo prospěšného účinku působení tepla. Je známo, že tepelná denaturace nezávisí jen na teplotě samotné, ale také na době, po kterou je protein takové teplotě vystaven. Navíc existují další fyzikálně-chemické parametry, jako je například iontová síla, hodnota pH nebo druh a množství aktivních povrchových struktur ve směsi, které jsou spoluzodpovědné za denaturaci proteinu. Mohou tedy nastat takové podmínky, kdy protilátky nejsou nebo nejsou úplně denaturovány a/nebo další účinky, jako je například menší desorpce na povrchu adjuvans, jsou využity.
Další výhodou formulace vakcíny společně s adjuvans a následného ošetření teplem je to, že v takto formulovaném přípravku jsou případně infekční patogeny zeslabeny nebo zcela inaktivovány. Tato výhoda může být důležitá jak pro výrobu tak i pro skladování a distribucí vakcinačního přípravku. Takže se jedná o značnou bezpečnost s ohledem na známé i neznámé
• · patogeny infekčních onemocnění. Navíc je možné plnit léky bez použití konzervačních látek, jestliže se užije odpovídající způsob balení, jelikož tepelným ošetřením byla provedena antimikrobiální konzervace vakcíny.
Další výhodou takto formulovaných přípravků je potenciální zvýšení imunogenicity protilátky, neboť zahřívání může vést k, alespoň částečné, denaturaci protilátky. Takto zvýšená antigenicita může mít za následek zvýšení imunogenicity, a to zejména v případě proteinů, které by mohly být rozpoznávány jako protein tělu vlastní. Ještě další výhodou je to, že komplex protilátka-adjuvans je potenciálně dodatečně stabilizován tepelnou inaktivací, tj. desorpce proteinového antigenu neprobíhá tak rychle jako je tomu v případě přípravku obsahujícího antigen a adjuvans, avšak neošetřeného teplem. Tato výhoda dovoluje také užít delší intervaly mezi jednotlivými imunizacemi.
Přípravek vyrobený podle vynálezu může být podáván ve shodě s obecně známými postupy, např. jako vakcína pomocí subkutánní nebo intramuskulární injekce.
A dále se předkládaný vynález týká farmaceutického přípravku, který obsahuje protilátky izolované z tělních tekutin obsahujících protilátky pomocí imunoafinitní purifikace, kde jsou pro imunoafinitní purifikaci jako ligandy použity protilátky rozpoznávající jeden nebo více antigenů asociovaných s nádorem nebo jejich fragmenty mající stejný idiotyp. Jak bylo již zmíněno výše, takové přípravky jsou vhodné jako vakcíny pro terapeutickou nebo profylaktickou vakcínací proti rakovině. Pokud jde o výhodné provedení přípravku, pro složky, formulaci, způsoby podávání atd. farmaceutického přípravku podle vynálezu platí, co bylo již výše popsáno v popisu v souvislosti s použitím podle vynálezu.
«· ··· ♦
V neposlední řadě se předkládaný vynález také týká farmaceutického přípravku obsahujícího izolované dendritické buňky jedince, které byly kultivovány ex vivo, kde dendritické buňky byly inkubovány in vivo s protilátkami, které byly izolovány z tělní tekutiny obsahující protilátky téhož jedince imunoafinitní purifikací.
Kromě toho se předkládaný vynález také týká terapeutické nebo profylaktické vakcinace proti rakovině, kdy je jedinci podávána protilátka, která byla izolována z tělní tekutiny obsahující protilátky, výhodně z tělní tekutiny téhož jedince, pomocí imunoafinitní purifikace, kde jsou pro imunoafinitní purifikaci jako ligandy použity protilátky rozpoznávající jeden nebo více antigenů asociovaných s nádorem nebo jejich fragmenty mající stejný idiotyp.
Navíc se předkládaný vynález týká terapeutické nebo profylaktické vakcinace proti rakovině, kdy je jedinci jsou podávány autologní izolované dendritické buňky, které byly kultivovány ex vivo a které byly předtím inkubovány in vitro s protilátkami, které byly izolovány z tělní tekutiny obsahující protilátky, výhodně z tělní tekutiny téhož jedince, pomocí imunoafinitní purifikace, kde jsou pro imunoafinitní purifikaci jako ligandy použity protilátky rozpoznávající jeden nebo více antigenů asociovaných s nádorem nebo jejich fragmenty mající stejný idiotyp. V podstatě totéž, co již bylo vysvětleno dříve ve spojení s použitím podle vynálezu, platí i pro další výhodná provedení.
Předkládaný vynález se dále týká způsobu výroby protilátkových přípravků, kdy protilátky jsou protilátky, které byly izolovány z tělní tekutiny obsahující protilátky imunitní purifikaci, přičemž jako ligandy jsou použity protilátky rozpoznávající jeden nebo více antigenů asociovaných s nádorem nebo jejich fragmenty mající stejný ·· ···· idiotyp. Pokud jde o tělní tekutiny, použití protilátek jako ligandů a antigeny asociované s nádorem, platí zde v podstatě totéž, co již bylo vysvětleno dříve ve spojení s použitím podle vynálezu. Imunoafinitní purifikace může být prováděna metodami, které jsou odborníkům známé. V tomto ohledu platí také totéž, co již bylo uvedeno výše.
Ve výhodném provedení způsobu podle vynálezu je užito pro afinitní purifikaci současně několik protilátek namířených proti odlišným antigenům asociovaným s nádorem a/nebo epitopům takových antigenů. Při postupu, kdy je pro afinitní purifikaci použito několik protilátek, mohou být použity buďto simultánně nebo odděleně a imunoafinitní purifikace jsou prováděny paralelně nebo sériově, t j. různé epitopy a/nebo antigenní specifity mohou být kombinovány podle potřeby. Tyto požadavky jsou důsledkem exprese různých antigenů na nádorech různých jedinců.
Ve zvláště výhodném provedení vynálezu jsou pro imunoafinitní purifikaci jakožto ligandy použity monoklonální protilátky a v ještě výhodnějším provedení je jako tělní tekutina použito sérum.
Způsob podle vynálezu je výhodně způsob přípravy protilátkového preparátu, který je dále použit pro výrobu farmaceutického přípravku, který je užitečný pro terapeutickou nebo profylaktickou vakcinaci proti rakovině.
Dále se předkládaný vynález týká způsobu výroby farmaceutického přípravku, kdy se připraví protilátka způsobem podle vynálezu a takto získaná protilátka se následně formuluje s farmaceuticky přijatelným nosičem a/nebo vhodným adjuvans pro vakcíny.
• * · · · • * ····
Ve výhodném provedeni se protilátkový preparát smíchá s adjuvans, výhodně s adjuvans obsahujícím hliník, a pak se podrobí působení tepla, výhodně při teplotě mezi 70 a 121 °C.
·· ····
I pro tato výhodná provedení farmaceutických přípravků podle vynálezu platí vše, co již bylo uvedeno výše.
Všechny v přihlášce citované patentové spisy, publikace nebo přístupy do databází jsou formou odkazu zahrnuty v plném rozsahu do předkládané přihlášky.
Popis obrázků
Obrázek 1 ukazuje chromatogram imunoafinitní purifikace (pomocí imobilizované protilátky 17-1A) protilátkové frakce ze séra makaka „rhesus.
Obrázek 2 ukazuje chromatogram (třídicí chromatografie) protilátkové frakce purifikované pomocí imunoafinitní purifikace.
Obrázek 3 ukazuje vazbu sérové protilátky získané pomocí afinitní purifikace na protilátku 17-1 A: 17-1 A ELISA.
Obrázek 4 ukazuje výsledek autologní vakcinace makaka „rhesus: vazba sérového Ig na nádorové buňky Kato III (buněčná ELISA).
Obrázek 5 ukazuje chromatogram (třídicí chromatografie) protilátkové frakce purifikované pomocí imunoafinitní purifikace (směsné lože anti-EpCAM/anti-LewisY).
Obrázek 6 ukazuje chromatogram velikostního standardu (rozdělen třídicí chromatografii).
·· *· .
a ·« 4 ί · ’ '· ···· ·* * • · ♦ • · · • · · • · ·· • · • · • · · • · ·*
Příklady provedení vynálezu
Následující materiály byly použity v příkladech, které jsou dále popsány pro podrobnější ilustraci předkládaného vynálezu. Uvedené příklady nijak neomezují rozsah vynálezu.
Mikrotitrační destičky: Imunodestičky F96 MaxiSorp (Nunc) pro ELISA, destičky pro kultivaci buněk Cell kultur Cluster (Costar, Katalog, č. 3598) pro ELISA s buňkami
Buněčné linie: KATO III: humánní buněčná linie karcinomu žaludku (ATCC HTB 103)
Kondenzační pufr: 0,1 M NaHCO3 0,5 M NaCl pH 8,0
Purifikační pufr A: PBS def.
0,2 M NaCl
Purifikační pufr B: 0,1 M giycine/HCl 0,2 M NaCl pH 2,9
Médium A: RPMI 1640 + 2 g/1 NaHCO3 100 U/ml penicilín G 100 gg/ml sulfát streptomycinu 4 mM glutamin
10% fetální telecí sérum (tepelně inaktivované)
Vazebný pufr: 15 mM Na2CO3 35 mM NaHCO3 3 mM NaN3 pH: 9,6 ·· *· ř · * « ·»»>
» · * • · *
Deficitní PBS (PBS def.
• · » • ·»·· €♦ ·»**
138 mM NaCl
1.5 mM KH2PO4 2,7 mM KC1
6.5 mM Na2HPO4 pH: 7,2
Fixační roztok: 0,1 % glutardialdehyd ve fyziologickém roztoku NaCl
Promývací pufr A: 2% NaCl
0,2% Triton X-100 v PBS def.
Promývací pufr B: 0,05% Tween 20 v PBS def.
Blokovací pufr A: 5% fetální telecí sérum (tepelně inaktiv.) v PBS def.
Blokovací pufr Β: 1 % bovinní sérový albumin 0,1 % NaN3 v PBS def.
Ředicí pufr A: 2% fetální telecí sérum (tepelně inaktivované) v PBS def.
Ředicí pufr B: PBS def.
Značící/barvicí pufr: 24,3 mM kyselina citrónová 51,4 mM Na2HPO4 pH: 5,0
Substrát: 40 mg o-fenylendiamindihydrochlorid 100 ml značící/barvicí pufr 20 μΐ H2O2 (30%)
Zastavovací (stop) roztok: 4 N H2SC>4 • 4 • 4 Μ 4 «4 «
4 4
Formulační pufr: 10% PBS def., pH = 6,0
90% fyziologický roztok NaCl
Příklad 1
Příprava imunoafinítní kolony s TAA-specifickou protilátkou
7,5 g CH-sefarózy 4B (Pharmacia) bylo suspendováno po dobu 15 minut ve 20 ml 1 mM HCl. Vzniklý gel byl pak promyt 1 litrem 1 mM HCl a poté 200 ml kondenzačního pufru na sintrovém filtru AG3. 100 mg myší protilátky 17-1 A (Panorex, zásobní roztok 10 mg/ml, specifická proti antigenu asociovanému s nádorem Ep-CAM) bylo dialyzováno proti 5 1 kondenzačního pufru a upraveno pomocí kondenzačního pufru na výslednou koncentraci 5 mg/ml. Tento roztok byl smíchán s gelovou suspenzí v uzavřené nádobě. Suspenze, které je vhodná pro kondenzaci, může být připravena při poměru gelu k pufru 1:2. Tato suspenze byla točena po dobu 24 hodin ve 4°C. Pak byl odmyt nadbytek ligandu s 3 x 30 ml kondenzačního pufru. Zbylé reaktivní skupiny byly blokovány pomocí lhodinové inkubace s 1M ethanolaminem ve 4°C. Pak byl gel točen po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti s 0,lM Tris-HCl pufrem. A nakonec byl gel promyt ve třech cyklech pufry s měnící se pH hodnotou. Každý cyklus sestával z 0,1 M acetátového pufru (octan sodný) o pH 4 s 0,5 M NaCl, a 0,1 M Tris-HCl pufru o pH 8 s 0,5 M NaCl. Gel byl pak uložen ve 4°C.
Příklad 2
Imunoafinítní purifikace protilátkové frakce ze séra pomocí imunoafinítní chromatografie • · · · · · · • · · · · · • « 9 · · · · • · · · · · ·· ♦ ·· ···· ml periferní krve bylo odebráno z makaků „rhesus a bylo z ní připraveno sérum. Celý postup byl prováděn ve sterilních podmínkách.
Imunoafinitní purifikace byl prováděn na systému FPLC (Pharmacia). 1 ml gelu připraveného podle Příkladu 1 byl nanesen do kolony HR5/5 (Pharmacia). 5 ml séra bylo naředěno
1:10 purifikačním pufrem A. Tento roztok byl pumpován kolonou průtokem 1 ml/minutu a pak byla kolona proplachována purifikačním pufrem A tak dlouho, dokud nebylo dosaženo opět bazální hodnoty UV detektoru (280 nm) . Navázané imunoglobuliny byly eluovány purifikačním pufrem B a frakce byla neutralizována 1 M Na2HPO4 bezprostředně po desorpci. Obrázek 1 ukazuje chromatogram z této purifikace (UV 280 nm).
μΐ protilátkové frakce purifikované, jak bylo výše popsáno, bylo analyzováno na třídicí koloně (SEC, Zorbax 250 GF) . 220 mM fosfátový pufr, pH 7 + 10% acetonitril byly použity jako nosič. Jak je vidět z chromatogramu této analýzy, (Obrázek 2), protilátková frakce obsahuje IgM a IgG v poměru přibližně 3:2. Celkové množství protilátkové frakce bylo přibližně 40 μς (stanoveno třídicí chromatografií, „size exclusion chromatography, SEC). Protilátková frakce získaná tímto způsobem byla testována v ELISA s ohledem na vazbu k protilátce 17-1A (která byla použita jako ligand pro afinitní purifikaci): 100 μΐ alikvoty protilátky specifické proti antigenů asociovanému s nádorem (protilátka 17-1A, roztok s 10 g/ml ve vazebném pufru), která byla také použita pro afinitní purifikaci, byly inkubovány v jamkách mikrotitrační destičky po dobu 1 hodiny ve 37°C. Po promytí destiček šestkrát promývacím pufrem A bylo přidáno 200 μΐ blokovacího pufru A a inkubováno po dobu 30 minut ve 37°C. Po promytí destiček, jak bylo popsáno výše, byly 100 μΐ alikvoty afinitně purifikované protilátkové frakce, které měly být • · · ♦ · · · • · · · · • ······· testovány, společně s normálním humánním imunoglobulinem ve stejné koncentraci jako negativní kontrola, byly inkubovány v ředění 1:4 až 1:65,000 v ředicím pufru A po dobu 1 hodiny ve 37°C. Po opětném promytí destiček, jak bylo popsáno výše, 100 μΐ kozí anti-humánní Ig protilátky konjugované s peroxidázou (Zymed) bylo přidáno v ředění 1:1000 v ředicím pufru A a inkubováno po dobu 30 minut ve 37 °C. Destičky byly promyty čtyřikrát promývacím pufrem A a dvakrát značicím/barvicím pufrem. Navázání protilátky bylo detekováno přidáním 100 μΐ specifického substrátu a barevná reakce byla zastavena za přibližně 3 minuty přidáním 50 μΐ stop roztoku. Vyhodnocení bylo provedeno měřením optické denzity (OD) při vlnové délce 490 nm (vlnová délka referenčního měření byla 620 nm) .
Jak je vidět na obr. 3, afinitně purifikovaná protilátková frakce vykazovala významnou vazbu na protilátku 17-1A, zatímco normální humánní imunoglobulin se vůbec nevázal.
Příklad 3
Formulace vakcíny s purifikovanou protilátkou
Protilátková frakce získaná afinitní purifikací byla formulována s hydroxidem hlinitým jakožto adjuvans následujícím postupem:
mg hydroxidu hlinitého (vodná suspenze, Alhydrogel, Superfos) bylo přidáno ke 3 ml roztoku protilátky získané po afinitní chromatografií (obsahujícím přibližně 40 μρ protilátky) a suspenze byl stočen v centrifugační lahvičce „FILTRON (Microsep™, filtrační limit 10 kD) po dobu 30 minut při 4000 x g. Pak byl roztok suspendován dvakrát s 1 ml
0 · • 00 · • 0 0 · · 0 · formulačního pufru a stočen po dobu 30 minut při 4000 x g.
suspenze byla doplněna formulačním pufrem na 0,5 ml a sterilním způsobme uchována.
• 0 ··· ·
Příklad 4
Imunizace makaků „rhesus' purifikovanou protilátkou autologní imunoafinitně
Jednotliví příslušní makakové „rhesus, z jejichž séra byla získána vakcína, jak je popsáno v příkladech 2 a 3, byli vakcinováni subkutánně do hřbetu touto vakcínou. Před první vakcinací bylo odebráno 5 ml krve pro přípravu séra (ke stanovení počátečních hodnot pro charakterizaci imunitní reakce) . Dva týdny poté, bylo opět odebráno 10 ml krve, ze ml tohoto séra byla jak již bylo popsáno toto novou vakcínou které bylo opět izolováno sérum. Se opakována izolace autologní vakcíny, výše. Makakové „rhesus byly opět injikováni subkutánně do hřbetu. 4 týdny po této vakcinací bylo odebráno opět 5 ml krve a bylo izolováno sérum (pro stanovení účinku vakcinace).
Pre-sérum těchto makaků a imunitní sérum 4 týdny po druhé vakcinací byly analyzovány buněčným testem ELISA, zda se protilátky vážou na buňky buněčné linie KATO III. Testy byly provedeny následujícím způsobem:
Jamky mikrotitrační destičky byly inkubovány se 100 μΐ buněčné suspenze linie KATO III v koncentraci 2xl06 buněk/ml v médium A přes noc při +37°C. Po odsátí supernatantu byly destičky inkubovány s 50 μΐ fixačního roztoku v každé jamce po dobu 5 minut při teplotě místnosti. Po opětném odsátí supernatantu bylo přidáno do každé jamky 200 μΐ blokovacího pufru B a destičky byl inkubovány po dobu 1 hodiny při teplotě • 0 místnosti. Po promytí dvakrát s 200 μΐ promývacího pufru B byly 100 μΐ alikvoty séra makaků testovány tak, že byly inkubovány v ředění 1:4 až 1:56, 000 pufrem B po dobu 1 hodin ve 37°C. Po promytí destiček dvakrát 100 μΐ ledově chladného promývacího pufru B bylo přidáno 100 μΐ kozí anti-humánní Ig protilátky konjugované s peroxidázou (Zymed) v ředění 1:1000 pufrem A a inkubováno po dobu 45 minut ve 37°C. Destičky byly promyt třikrát 100 μΐ ledově chladného promývacího pufru B. Vazba protilátky byla detekována pomocí přidání 100 μΐ specifického substrátu a barevná reakce byla zastavena po přibližně 5 minutách přidáním 50 μΐ zastavovacího roztoku. Vyhodnocení bylo provedeno měřením optické denzity (OD) ve vlnové délce 490 nm (referenční vlnová délka byla 620 nm) .
Jak je vidět na obrázku 4, v imunitním séru makaků, kteří byly vakcinováni autologním způsobem, se vyskytují imunoglobuliny, které se váží na nádorové buňky Kato III, zatímco takové protilátky nemohly být detekovány pre-séru stejných zvířat.
Výsledky výše popsaných experimentů ukazují, že vakcinace individuálními frakcemi autologní protilátky, které byly získány pomocí imunoafinitní purifikace s monoklonální protilátkou namířenou specificky proti antigenů asociovanému s nádorem, spouští humorální imunitní reakci, která je namířena proti humánním nádorovým buňkám, které exprimují daný antigen asociovaný s nádorem.
Příklad 5
Příprava imunoafinitní kolony se dvěma různými TAAspecifickými protilátkami e ♦
Monoklonální myší protilátka, která reagovala s EP-CAM, a monoklonální myš protilátka, která reagovala s Lewis Y, byly obě kondenzovány na aktivovanou CH sefarózu 4B (Pharmacia Biotech, Sweden) standardním postupem:
7,5 g CH sefarózy 4B bylo suspendováno ve 20 ml 1 mM HCI po dobu 15 minuty a nasáklý gel byl promyt 1 litrem 1 mM HCI a pak 200 ml kondenzačního pufru na filtru AG3 ze sintrového skla. 100 mg myší protilátky (zásobní roztok 10 mg/ml) bylo dialyzováno proti 5 1 kondenzačního pufru a pak upraveno kondenzačním pufrem na koncentraci 5 mg/ml. Tento roztok byl smíchán s gelovou suspenzí v uzavřené nádobě. Suspenze, která byla vhodná pro kondenzaci, byl získána při poměru gelu k pufru 1:2. Tato suspenze byla 24 hodin točena ve 4°C. Pak byl nadbytek ligandu odmyt 3 x 30 ml kondenzačního pufru. Zbylé reaktivní skupiny byly blokovány pomocí 1-hodinové inkubace s 1 M ethanolaminem ve 4°C. Pak byl gel točen po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti s 0,1 M Tris-HCl. Nakonec byl gel promyt ve třech cyklech pufry s měnící se pH. Každý cyklus sestával z 0,1 M acetátového pufru (octan sodný) o pH 4 s 0,5 M NaCl, následovaného 0,1 M Tris-HCl o pH 8 s 0,5 M NaCl. Gel byl pak uložen ve 4°C.
Dva shodné objemy dvou afinitních matric byly smíchány a byla z nich vytvořena imunoafínitní chromatografická kolona (systém Akta, Pharmacia, Sweden).
Příklad 6
Purifikace protilátky z opičího séra pomocí simultánní imunoafínitní purifikace se dvěma různými TAA-specifickými protilátkami • · « · • ·♦·· · *
Přibližně 20 ml krve bylo odebráno každému imunologicky naivnímu makakovi „rhesus. 9 ml séra bylo purifikováno na imunoafinitní chromatografické koloně, jak byla popsána v příkladu 5 (Systém Akta, Pharmacia, Sweden).
Nanášecí pufr: purifikační pufr A
Elučni pufr: purifikační pufr B
Eluáty byly neutralizovány 0,5 M roztokem hydrogenfosforečnanu sodného. Pak byly frakcionovány tak, že proteiny byly přítomny ve vysoké koncentraci.
μΐ purifikované protilátkové frakce bylo analyzováno na třídicí koloně (SEC, Zorbax 250 GF). 220 mM fosfátový pufr, pH 7 + 10% acetonitril byly použity jako rozdělovači činidlo (průtok: 1,000 ml/min, vlnová délka 214 nm) . Jak je vidět na chromatogramu z této analýzy (viz obrázek 5), protilátková frakce obsahuje IgM (retenční čas 6,963 min) a IgG (retenční čas 8,745 min) v poměru přibližně 3:2.
Celkové množství protilátkové frakce bylo přibližně 50 gg (stanoveno pomocí SEC v porovnání se standardem, viz obrázek
6) .
Příklad 7
Různé formulace purifikované protilátky do vakcinačního přípravku
Vakcíny byly formulovány v ultrafiltrační jednotce pro centrifugaci (Centricon 10, Amicon, USA) . Ultrafiltrační jednotky byly promyty pomocí centrifugace 1 mM fosfátovým pufrem, 0,86% NaCl, pH 6,0 (NBK).
·· tt»9 ·· · ► · · » · ·
Pak byl 1 ml pufru (NBK) naplněn do jednotky 37 μΐ 2% Alhydrogelu (Superfos Biosector, Denmark) bylo přidáno. Po přidání neutralizovaného eluátu z příkladu 6 byly provedeny centrifugace a promytí (s 5 ml pufru) podle instrukcí Centricon.
Pak byla vakcína resuspendována a doplněna na 550 μΐ pufrem a uskladněna sterilním způsobem.
Alternativně byla vakcína doplněna na 545 μΐ pufrem po resuspendování a bylo přidáno 5,5 μΐ zásobního roztoku thimerosalu (10 mg/ml, Sigma, USA).
A třetí varianta formulace vakcíny bylo sterilní naplnění do skleněných lahviček a tepelná denaturace v autoklávu (121 °C, 20 minut).
Claims (23)
1. Použití protilátky pro výrobu farmaceutického přípravku vhodného jako vakcína pro terapeutickou nebo profylaktickou vakcinaci proti rakovině, kdy protilátky se izolují z tělních tekutin obsahujících protilátky pomocí imunoafinitní purifikace, kde protilátky rozpoznávající jeden nebo více antigenů asociovaných s nádorem nebo jejich fragmenty mající stejný idiotyp jsou použity jako ligandy pro imunoafinitní purifikaci, a kde tělní tekutiny byly získány z jedince, kterému před tím nebyla podávána monoklonální protilátka namířená ani proti jednomu z antigenů asociovaných s nádorem.
2. Použití podle nároku 1, kdy farmaceutický přípravek je určen pro podávání jako autologní individuální vakcína jedinci, z jehož tělních tekutin byly protilátky získány.
3. Použití protilátky pro výrobu farmaceutického přípravku vhodného jako vakcína pro terapeutickou nebo profylaktickou vakcinaci proti rakovině, kdy protilátky jsou izolovány z tělních tekutin obsahujících protilátky pomocí imunoafinitní purifikace, kde protilátky rozpoznávající jeden nebo více antigenů asociovaných s nádorem nebo jejich fragmenty její mající stejný idiotyp jsou použity jako ligandy pro imunoafinitní purifikaci, přičemž farmaceutický přípravek je určen pro podávání jakožto autologní individuální vakcína jedinci, z jehož tělních tekutin byly protilátky získány.
4 4 4 4
4. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kdy tělní tekutina je sérum.
• 4 4 4
4 44444 4
4 4>
5. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, kdy jedinec je člověk.
6. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, kdy se pro imunoafinitní purifikace použije současně několik protilátek namířených proti různým antigenům asociovaným s nádorem a/nebo proti různým epitopům takových antigenů.
7. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, kdy protilátky použité jako ligandy pro imunoafinitní purifikaci jsou monoklonální protilátky.
8. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7, kdy se farmaceutický přípravek připravuje opakovaně a je určen pro postupné podávání pro individuální vakcinaci opakovanou ve vhodných intervalech.
9. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 8, kdy antígeny asociované s nádorem jsou molekuly lokalizované v membráně, které jsou často exprimovány a/nebo koexprimovány na buňkách nádorů epiteliálního původu nebo na buňkách nádorů neuroendokrinního původu nebo buňkách nádorů systému krvetvorby.
Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, kdy protilátky purifikované pomocí imunoafinitní purifikace nebo jejich • · • · · · deriváty jsou formulovány spolu s adjuvans vhodným pro vakcínu.
11. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 10, kdy přípravek dále obsahuje protein, který zesiluje imunitní reakci a který je podáván současně s protilátkami.
12. Použití podle nároku 11, kdy protein je humánní protein.
13. Použití podle nároku 12, kdy humánní protein je faktor stimulující kolonie granulocytů a makrofágů(GM-CSF).
14. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 13, kdy přípravek je vhodný pro podávání protilátky purifikované pomocí imunoafinitní purifikace jakožto vakcíny subkutánními nebo intramuskulárními injekcemi.
15. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 14, kdy protilátky obsažené v přípravku jsou smíchány s adjuvans a podrobeny působení tepla.
16. Použití izolovaných, ex vivo kultivovaných dendritických buněk jedince k výrobě farmaceutického přípravku vhodného jako vakcína pro terapeutickou nebo profylaktickou vakcinaci proti rakovině, kdy dendritické buňky byly předtím inkubovány in vitro s protilátkami, které byly získány imunoafinitní purifikaci z tělních tekutin téhož jedince obsahujících protilátky, přičemž jako ligandy pro imunoafinitní purifikaci byly použity protilátky rozpoznávající jeden nebo více antigenů asociovaných • · ♦ · « » • 9 ·
9 9 • · s nádorem nebo jejich fragmenty mající stejný idiotyp, a tělní tekutiny pocházejí z jedince, kterému před tím nebyla podána monoklonální protilátka namířená ani proti jednomu z antigenů asociovaných s nádorem.
17. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje protilátky získané z tělních tekutin obsahujících protilátky pomocí imunoafinitní purifikace, kde pro imunoafinitní purifikaci byly jako ligandy použity protilátky rozpoznávající jeden nebo více antigenů asociovaných s nádorem nebo jejich fragmenty mající stejný idiotyp, a kde tělní tekutiny pocházejí z jedince, kterému před tím nebyla podána monoklonální protilátka namířená ani proti jednomu z antigenů asociovaných s nádorem.
18. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje izolované ex vivo kultivované dendritické buňky jedince, kde dendritické buňky byly předtím inkubovány in vitro s protilátkami, které byly získány imunoafinitní purifikaci z tělních tekutin téhož jedince obsahujících protilátky, přičemž jako ligandy pro imunoafinitní purifikaci byly použity protilátky rozpoznávající jeden nebo více antigenů asociovaných s nádorem nebo jejich fragmenty mající stejný idiotyp, a tělní tekutiny pocházejí z jedince, kterému před tím nebyla podána monoklonální protilátka namířená ani proti jednomu z antigenů asociovaných s nádorem.
19. Způsob výroby protilátkového preparátu vyznačující se tím, že protilátky se izolují z tělních tekutin obsahujících protilátky pomocí imunoafinitní purifikace, kde pro imunoafinitní purifikaci byly jako ligandy použity a
»· ··· · • 9 • · · · • · · · · · protilátky rozpoznávající jeden nebo více antigenů asociovaných s nádorem nebo jejich fragmenty mající stejný idiotyp, a kde tělní tekutiny pocházejí z jedince, kterému před tím nebyla podána monoklonální protilátka namířená ani proti jednomu z antigenů asociovaných s nádorem.
20. Způsob podle nároku 19, vyznačující se tím, že se pro afinitní purifikaci se současně užije několik protilátek namířených proti různým antigenům asociovaným s nádorem a/nebo epitopům takových antigenů.
21. Způsob podle nároku 19 nebo 20, vyznačující se tím, že protilátky použité pro afinitní purifikaci jsou monoklonální protilátky.
22. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 19 až 21, vyznačující se tím, že tělní tekutina je sérum.
23. Způsob výroby farmaceutického přípravku vyznačující se tím, že protilátkový preparát se připraví způsobem podle kteréhokoliv z nároků 19 až 22 a takto získaný protilátkový preparát se formuluje s farmaceuticky přijatelným nosičem a/nebo adjuvans vhodným pro vakcínu.
24. Způsob podle nároku 23, vyznačující se tím, že protilátkový preparát se smíchá s adjuvans a pak se podrobí působení tepla.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT0192799A AT409086B (de) | 1999-11-16 | 1999-11-16 | Neue verwendung von antikörpern als impfstoffe |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20021707A3 true CZ20021707A3 (cs) | 2002-10-16 |
Family
ID=3524036
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20021707A CZ20021707A3 (cs) | 1999-11-16 | 2000-11-15 | Pouľití protilátek pro výrobu farmaceutického přípravku vhodného jako vakcína |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1229936B1 (cs) |
| JP (1) | JP2003514028A (cs) |
| KR (1) | KR20020060968A (cs) |
| CN (1) | CN1390138A (cs) |
| AT (1) | AT409086B (cs) |
| AU (1) | AU780853B2 (cs) |
| BR (1) | BR0015597A (cs) |
| CA (1) | CA2391927A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ20021707A3 (cs) |
| DE (1) | DE50006526D1 (cs) |
| DK (1) | DK1229936T3 (cs) |
| EE (1) | EE200200252A (cs) |
| ES (1) | ES2218272T3 (cs) |
| HU (1) | HUP0204216A2 (cs) |
| IL (1) | IL149614A0 (cs) |
| IS (1) | IS6381A (cs) |
| MX (1) | MXPA02004942A (cs) |
| NO (1) | NO20022333L (cs) |
| NZ (1) | NZ518669A (cs) |
| PL (1) | PL356770A1 (cs) |
| PT (1) | PT1229936E (cs) |
| SK (1) | SK6542002A3 (cs) |
| TR (1) | TR200401267T4 (cs) |
| WO (1) | WO2001035989A2 (cs) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4017108A (en) * | 1975-04-17 | 1977-04-12 | Archibald Kenrick And Sons Limited | Window stay |
| US6294171B2 (en) * | 1999-09-14 | 2001-09-25 | Milkhaus Laboratory, Inc. | Methods for treating disease states comprising administration of low levels of antibodies |
| AT410172B (de) * | 2000-03-21 | 2003-02-25 | Igeneon Gmbh | Verfahren zur herstellung einer vakzineformulierung |
| AT410637B (de) * | 2001-06-01 | 2003-06-25 | Igeneon Krebs Immuntherapie | Verwendung von polyklonalen immunglobulinen |
| AT502293B1 (de) * | 2002-05-15 | 2008-03-15 | Igeneon Krebs Immuntherapie | Immunogener, monoklonaler antikörper |
| AT500648B1 (de) * | 2002-08-12 | 2010-03-15 | Igeneon Krebs Immuntherapie | Set zur behandlung von krebspatienten |
| KR100522526B1 (ko) * | 2002-11-28 | 2005-10-19 | 주식회사 바이넥스 | 면역 치료용 수지상 세포의 제조방법 |
| AT500650B1 (de) | 2003-04-17 | 2009-11-15 | Altropus Gmbh | Immunogener rekombinanter antikörper |
| WO2007024825A2 (en) * | 2005-08-26 | 2007-03-01 | Genway Biotech, Inc. | Immunoaffinity separation and analysis compositions and methods |
| EP2044949A1 (en) * | 2007-10-05 | 2009-04-08 | Immutep | Use of recombinant lag-3 or the derivatives thereof for eliciting monocyte immune response |
| GB201322626D0 (en) | 2013-12-19 | 2014-02-05 | Immutep S A | Combined preparations for the treatment of cancer |
| US20180008702A1 (en) * | 2014-12-05 | 2018-01-11 | Celltrion Inc. | Adjuvant composition containing at least one influenza virus neutralizing and binding molecule and vaccine composition containing same |
| GB201500374D0 (en) | 2015-01-09 | 2015-02-25 | Immutep S A | Combined preparations for the treatment of cancer |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1984002848A1 (en) * | 1983-01-28 | 1984-08-02 | Centocor Inc | Anti-idiotypic antibodies to t cell antigen receptors |
| WO1989011296A1 (en) * | 1988-05-17 | 1989-11-30 | Raychaudhuri, Syamal | Anti-idiotype antibodies to anti-human high molecular weight-melanoma associated antigen |
| US20030072751A1 (en) * | 1990-03-14 | 2003-04-17 | Heribert Bohlen | Idiotypic vaccination against b cell lymphoma |
| IT1254315B (it) * | 1992-03-27 | 1995-09-14 | Mini Ricerca Scient Tecnolog | Anticorpi monoclonali anti-idiotipici diretti contro anticorpi anti-tnf. |
| CA2139756A1 (en) * | 1992-07-08 | 1994-01-20 | Eric M. Bonnem | Use of gm-csf as a vaccine adjuvant |
| DK0796280T3 (da) * | 1994-12-28 | 2003-04-22 | Univ Kentucky | Murint monoklonalt anti-idiotypisk antistof 3H1 |
-
1999
- 1999-11-16 AT AT0192799A patent/AT409086B/de not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-11-15 DE DE50006526T patent/DE50006526D1/de not_active Expired - Fee Related
- 2000-11-15 WO PCT/EP2000/011306 patent/WO2001035989A2/de not_active Application Discontinuation
- 2000-11-15 CA CA002391927A patent/CA2391927A1/en not_active Abandoned
- 2000-11-15 CZ CZ20021707A patent/CZ20021707A3/cs unknown
- 2000-11-15 ES ES00987250T patent/ES2218272T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-15 JP JP2001537979A patent/JP2003514028A/ja active Pending
- 2000-11-15 EP EP00987250A patent/EP1229936B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-15 EE EEP200200252A patent/EE200200252A/xx unknown
- 2000-11-15 DK DK00987250T patent/DK1229936T3/da active
- 2000-11-15 IL IL14961400A patent/IL149614A0/xx unknown
- 2000-11-15 BR BR0015597-7A patent/BR0015597A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-11-15 CN CN00815789A patent/CN1390138A/zh active Pending
- 2000-11-15 KR KR1020027006126A patent/KR20020060968A/ko not_active Application Discontinuation
- 2000-11-15 MX MXPA02004942A patent/MXPA02004942A/es unknown
- 2000-11-15 PT PT00987250T patent/PT1229936E/pt unknown
- 2000-11-15 AU AU23572/01A patent/AU780853B2/en not_active Ceased
- 2000-11-15 HU HU0204216A patent/HUP0204216A2/hu unknown
- 2000-11-15 SK SK654-2002A patent/SK6542002A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2000-11-15 NZ NZ518669A patent/NZ518669A/en unknown
- 2000-11-15 TR TR2004/01267T patent/TR200401267T4/xx unknown
- 2000-11-15 PL PL00356770A patent/PL356770A1/xx not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-05-14 IS IS6381A patent/IS6381A/is unknown
- 2002-05-15 NO NO20022333A patent/NO20022333L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATA192799A (de) | 2001-10-15 |
| PT1229936E (pt) | 2004-09-30 |
| EP1229936A2 (de) | 2002-08-14 |
| WO2001035989A3 (de) | 2001-10-04 |
| EE200200252A (et) | 2003-06-16 |
| PL356770A1 (en) | 2004-07-12 |
| ES2218272T3 (es) | 2004-11-16 |
| HUP0204216A2 (en) | 2003-04-28 |
| MXPA02004942A (es) | 2003-10-14 |
| DE50006526D1 (de) | 2004-06-24 |
| KR20020060968A (ko) | 2002-07-19 |
| NO20022333D0 (no) | 2002-05-15 |
| DK1229936T3 (da) | 2004-08-30 |
| WO2001035989A2 (de) | 2001-05-25 |
| IL149614A0 (en) | 2002-11-10 |
| AT409086B (de) | 2002-05-27 |
| BR0015597A (pt) | 2002-07-23 |
| TR200401267T4 (tr) | 2004-07-21 |
| SK6542002A3 (en) | 2002-11-06 |
| JP2003514028A (ja) | 2003-04-15 |
| AU2357201A (en) | 2001-05-30 |
| IS6381A (is) | 2002-05-14 |
| NZ518669A (en) | 2003-08-29 |
| CA2391927A1 (en) | 2001-05-25 |
| NO20022333L (no) | 2002-06-03 |
| EP1229936B1 (de) | 2004-05-19 |
| AU780853B2 (en) | 2005-04-21 |
| CN1390138A (zh) | 2003-01-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8444974B2 (en) | Use of antibodies for the vaccination against cancer | |
| AU782569B2 (en) | Therapeutic binding agents against MUC-1 antigen and methods of their use | |
| US20080019990A1 (en) | Therapeutic binding agents against MUC-1 antigen and methods for their use | |
| US20050048059A1 (en) | Therapeutic binding agents against MUC-1 antigen and methods for their use | |
| CZ20021707A3 (cs) | Pouľití protilátek pro výrobu farmaceutického přípravku vhodného jako vakcína | |
| Roehnisch et al. | Chemically linked phage idiotype vaccination in the murine B cell lymphoma 1 model | |
| US20060018901A1 (en) | Use of antibodies in a very low dose for the vaccination against cancer | |
| US20040191242A1 (en) | Method for producing a vaccine | |
| US20040265318A1 (en) | Use of antibodies for the vaccination against cancer | |
| JP2001055341A (ja) | 免疫応答を惹起するための、多数エピトープ含有抗原の再構成法および組成物 | |
| KR20000011003A (ko) | 면역 반응을 개시시키기 위해 다중 에피토프 항원의 입체형태를변화시키기 위한 방법 및 조성물 | |
| CZ20032573A3 (cs) | Způsob výroby očkovací látky |