SK6542002A3 - The use of antibodies for the production of pharmaceutical composition useful as vaccines - Google Patents
The use of antibodies for the production of pharmaceutical composition useful as vaccines Download PDFInfo
- Publication number
- SK6542002A3 SK6542002A3 SK654-2002A SK6542002A SK6542002A3 SK 6542002 A3 SK6542002 A3 SK 6542002A3 SK 6542002 A SK6542002 A SK 6542002A SK 6542002 A3 SK6542002 A3 SK 6542002A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- antibodies
- tumor
- individual
- antibody
- associated antigens
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 37
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 87
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 84
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 84
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 82
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims abstract description 40
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims abstract description 40
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims abstract description 34
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 25
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 claims abstract description 11
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 67
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 32
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 27
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 23
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 22
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 20
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 20
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims description 2
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 claims description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims description 2
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims 2
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 claims 2
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 claims 2
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 36
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 14
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 13
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 13
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 13
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 8
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 7
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 7
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 6
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 5
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 5
- 229940037642 autologous vaccine Drugs 0.000 description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 102000012406 Carcinoembryonic Antigen Human genes 0.000 description 3
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 3
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 3
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 description 3
- 102100031940 Epithelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 3
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 3
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 3
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- -1 GM-CSF Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 2
- 102100021852 Neuronal cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 2
- 101710130688 Neuronal cell adhesion molecule Proteins 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 101000762949 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 1
- 101710100968 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diamine;hydron;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NC1=CC=CC=C1N RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 208000028659 discharge Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical class O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 101150047061 tag-72 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Predkladaný vynález opisuje použitie protilátok, ktoré sa viažu na protilátky namierené proti antigénom asociovaným s nádormi („tumourassociated antigens“), a ktoré sa získavajú z telesných tekutín jedinca (indivídua) obsahujúcich protilátky pomocou imunoafinitnej purifikácie na špecifických ligandoch, na výrobu farmaceutického prípravku pre individuálnu autológnu profylaktickú alebo terapeutickú vakcináciu proti rakovinovým ochoreniam. Ligandy na imunoafinitnú purifikáciu sú protilátky alebo ich deriváty, ktoré sú namierené proti jednému alebo viacerým antigénom spojeným s nádormi. Ďalej sa vynález týka farmaceutických prípravkov obsahujúcich protilátky získané pomocou imunoafinitnej purifikácie alebo dendritických buniek, ktoré nimi boli pulzne ošetrené in vitro.
Doterajší stav techniky
Adaptívny imunitný systém človeka sa skladá z dvoch základných zložiek, a to humorálnej a bunkovej imunity. Adaptívna imunitná reakcia je založená na klonálnej selekcii B a T lymfocytov a v princípe umožňuje, aby bol rozpoznaný akýkoľvek antigén a bola vytvorená imunologická pamäť. Pri vakcinácii (očkovaní) sa výhodne využívajú tieto vlastnosti adaptivneho imunitného systému.
Každý B lymfocyt tvorí protilátku s určitou väzbovou špecifickosťou. Táto protilátka je tiež prítomná ako špecifický receptor v membráne tých B lymfocytov, ktoré ju vytvárajú. Humorálna imunitná reakcia proti antigénom, ktoré sú rozpoznané ako cudzorodé (cudzie) antigény, je založená na selektívnej aktivácii B lymfocytov, ktoré tvoria protilátky schopné naviazať sa na epitopy príslušného antigénu. V priebehu diferenciácie B lymfocytov je
P P 0654-2002
31938/T reorganizácia (prestavba) DNA kľúčovým procesom, pokiaľ ide o diverzitu protilátok.
V humánnom sére sa vyskytuje veľký počet protilátok rôznych špecifít, izotypov a podtried. Celková koncentrácia všetkých imunoglobulínov v sére je 15 až 20 mg/ml, čo znamená, že v krvnom obehu trvalo cirkuluje približne 100 g imunoglobulínov s rôznou špecifickosťou. Nie je možné určiť presné množstvo všetkých protilátok majúcich rôznu špecifickosť. Teoreticky možný repertoár je približne 1011. Všeobecne platí, že určitá protilátka môže viazať odlišné antigény, ktoré sú si navzájom podobné, avšak viaže ich s odlišnou afinitou a aviditou.
Imunitný systém musí udržiavať homoeostázu pokiaľ ide o distribúciu a dôležitosť týchto odlišných špecificít pomocou endogénnych regulačných mechanizmov. Esenciálnym mechanizmom je tzv. „idiotypová sieť“, ktorá bola postulovaná v publikácii Nielsa Jerna približne pred 25 rokmi (Jern, Ann. Immunol. 125C (1974), 373-389): Existujú anti-idiotypové protilátky, ktoré sú namierené proti každému idiotypu protilátky, ktoré určujú jej väzbovú špecifickosť a ktoré sa preto viažu k idiotypu prvej protilátky ako prostriedok na rozpoznávanie antigénu. Jern predpokladal, že interakcie medzi idiotypovošpecifickými receptormi na lymfocytoch môžu byť zodpovedné za reguláciu imunitného systému. Tieto interakcie zjavne skutočne existujú, pretože bolo ukázané, že v priebehu imunitnej reakcie sa vytvárajú tiež anti-idiotypové protilátky namierené proti primárne indukovaným protilátkam. Pretože existujú anti-idiotypové protilátky proti každej protilátke, lymfocyty v princípe nie sú tolerantné pokiaľ ide o idiotypy protilátok.
V imunologickom zmysle, niektoré anti-idiotypové protilátky môžu predstavovať „interný obraz antigénu. Takéto protilátky môžu byť teda použité na imunizáciu ako náhrada nominálneho antigénu, pretože protilátky indukované pomocou imunizácie sa môžu, aspoň čiastočne, viazať k nominálnemu antigénu. Po značne dlhom období bol tento prístup využívaný, najmä v imunoterapii nádorov. Viac ako 10 rokov existuje rad preklinických a
P P 0654-2002
31938/T klinických projektov, ako indukovať imunitné reakcie proti antigénom spojeným s nádormi (tumour-associated antigens) pomocou vakcinácie monoklonálnou antiidiotypovou protilátkou (pre prehľad pozri: Bhattacharya-Chatterjee, Foon, Anti-idiotype antibody vaccination therapies of cancer, Cancer Treat. Res. 94 (1998), 51-68). Väčšina týchto monoklonálnych anti-idiotypových protilátok je myšieho pôvodu. Avšak boli testované i humánne monoklonálne anti-idiotypové protilátky (napr. Fagerberg et al., PNAS 92 (1995), 4773-4777).
Konkrétnym prípadom sú pokusy terapeutickej imunizácie pacientov trpiacich B lymfocytárnym lymfómom. V prípade takejto choroby, určitý kloň B lymfocytov, ktorý tvorí špecifické imunoglobulíny majúce jeho idiotypové charakteristiky, a ktorý tiež nesie daný imunoglobulín ako receptor v bunkovej membráne, je degenerovaný. Táto protilátka je monoklonálna a môže byť považovaná za nádorovo-špecifický antigén pre individuálny B lymfocytárny lymfóm. Bolo ukázané, že takéto pacient-špecifické autológne protilátky, keď sú produkované v bunkovej kultúre a podávané ako vakcína vo vhodnej imunogénnej forme, môžu vyvolať imunitnú reakciu proti idiotypu takejto protilátky, pričom táto imunitná reakcia pôsobí na B lymfocytárny lymfóm (Reichardt et al., Blood. 93 (1999), 2411-2419). Stručne možno zhrnúť, že
- Humánne monoklonálne anti-idiotypové protilátky ktoré napodobňujú (mimikujú) s nádorom asociovaný antigén môžu, ako vakcína, indukovať imunitnú reakciu v karcinóme u pacientov, pričom imunitná reakcia môže byť namierená proti danému s nádorom asociovanému antigénu. Pomocou hybridómovej technológie alebo imortalizácie humánnych B lymfocytov boli takéto humánne monoklonálne protilátky získané od pacientov, ktorým boli podané (väčšinou myšie) anti-nádorové protilátky na pasívnu imunoterapiu, a v ktorých sa proti nim vytvorila imunitná reakcia. Ďalší pacienti boli imunizovaní humánnymi monoklonálnymi anti-idiotypovými protilátkami, vytvorenými týmto spôsobom.
P P 0654-2002
31938/T
- Humánne protilátky, ktoré boli produkované pomocou B lymfocytárnych lymfómov a teda mali definovaný idiotyp, môžu ako individuálne vakcinácie indukovať imunitnú reakciu spôsobom špecifickým pre pacienta, keď imunitná reakcia môže byť namierená proti B lymfocytárnemu lymfómu. Takéto pacient-špecifické protilátky sa musia získavať individuálne, použitím hybridómovej technológie alebo pomocou imortalizácie buniek z B lymfocytárneho lymfómu. Použitie takýchto protilátok je prirodzene obmedzené na liečenie B lymfocytárnych lymfómov.
Takže hoci je známe, že monoklonálne anti-idiotypové protilátky z určitých biologických druhov môžu tiež byť použité pre imunizáciu jedincov rovnakého druhu, z ktorého boli získané protilátky, je v každom prípade nevyhnutné manipulovať s bunkami a kultivovať ich. Tento prístup je teda značne časovo náročný a je obmedzený iba na monoklonálne protilátky.
V publikácii Losman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 (1991), 34213425, bola opísaná purifikácia ab2 protilátok z karcinómu pacienta. Avšak tento pacient bol pred tým podrobený pôsobeniu myšej monoklonálnej protilátky (NP4) proti CEA. Je teda celkom jasné, že existuje stále potreba prostriedkov a spôsobov liečenia, ktoré by umožnili účinné a široko aplikovateľné liečenie, a prípadne individuálne (t.j. individualizované) liečenie nádorov a tiež prevenciu proti nádorovým chórobám.
Teda technický problém, ktorý rieši predkladaný vynález, je poskytnutie účinných prostriedkov na individuálne liečenie rôznych typov nádorov, všeobecne na liečenie rakoviny a tiež na preventívnu ochranu proti rakovine. Tento technický problém bol vyriešený tak, ako je demonštrovaný na príkladoch uskutočnenia vynálezu, ktorý je definovaný pripojenými patentovými nárokmi.
Predkladaný vynález sa týka použitia protilátok na výrobu prípravkov, ktoré sú užitočné ako vakcíny, a to tak pre profylaktickú ako i terapeutickú vakcináciu proti rakovine, pričom protilátky sú získavané z telesných tekutín obsahujúcich protilátky pomocou imunoafinitnej purifikácie, kedy protilátky rozpoznávajúce jeden alebo viac antigénov asociovaných s nádormi alebo ich
PP 0654-2002
319387 fragmenty majúce rovnaký idiotyp sú použité ako ligandy pre imunoafinitnú purifikáciu.
Celkový fond („pool“) protilátok, ktoré sú napríklad prítomné vo veľkom množstve v krvi každého človeka, obsahuje protilátky so všetkými možnými väzbovými špecifickosťami. Teda tento fond protilátok v princípe tiež obsahuje protilátky (Ab2) proti idiotypu napr. (už známe alebo tiež nové) myšie monoklonálne protilátky (Ab1) namierené proti ktorémukoľvek antigénu asociovanému s nádorom (TAA). V súlade s teóriou imunologickej siete rovnaký protilátkový fond každého človeka tiež obsahuje určité množstvo protilátok namierených proti idiotypom autológnej Ab2, tieto protilátky sú označované Ab3 protilátky. Podľa teórie imunologickej siete sa Ab3 protilátky môžu viazať na antigén asociovaný s nádorom, ktorý je definovaný externou Ab1. Posun rovnováhy Ab2/Ab3 v prospech Ab3 musí viesť k tomu, že imunitný, systém je schopný lepšie rozpoznávať a potom napadnúť nádorové bunky nesúce daný antigén.
Podstatou predkladaného vynálezu je to, že takýto posun imunologickej rovnováhy sa môže dosiahnuť tým, že sa podávajú jednotlivé autológne frakcie Ab2 vo forme imunogénnej vakcíny. Pomocou takejto autológnej vakcinácie môžu byť B lymfocyty, ktoré tvoria Ab3, selektívne stimulované. Na takúto vakcináciu sú potrebné iba malé množstvá Ab2 frakcie, ktoré môžu byť formulované známymi spôsobmi s použitím vhodného vakcinačného adjuvans.
Protilátky použité podľa vynálezu sú teda Ab2 protilátky telesných tekutín obsahujúcich protilátky, ktoré sú namierené proti anti-TAA protilátke použitej na imunoafinitnú purifikáciu. Telesné tekutiny obsahujúce protilátky sú napríklad krv, plazma,, sérum, lymfa, malígne výtoky apod. Výhodnou telesnou tekutinou je sérum. Telesná tekutina môže byť získaná z akéhokoľvek živočíšneho organizmu, ktorý obsahuje telesné tekutiny obsahujúce protilátky. Výhodne ide o telesné tekutiny stavovcov, výhodnejšie cicavcov a najvýhodnejšie človeka.
P P 0654-2002
31938/T
Keďže je imunitná reakcia indukovaná vakcináciou autológnymi protilátkami určovaná väzbovým úsekom týchto protilátok, t.j. ich idiotypom, v princípe môžu byť pre úspešnú vakcináciu miesto frakcie intaktných protilátok použité tiež fragmenty alebo deriváty týchto protilátok, pokiaľ tieto fragmenty alebo deriváty obsahujú idiotyp zodpovedajúci východiskovej protilátke. Takže termín „protilátka“ v predkladanom opise zahrňuje tiež fragmenty alebo deriváty takých protilátok majúcich zhodnú väzbovú špecifickosť. Ako príklady, ktoré však vynález nijako neobmedzujú, možno uviesť nasledujúce: F(ab)'2 fragmenty a F(ab)' fragmenty, ktoré môžu byť pripravené biochemickými metódami, ktoré sú známe (napr. pomocou enzymatického štiepenia). Termín „derivát“ zahrňuje tiež napr. protilátkové deriváty, ktoré môžu byť pripravené chemickými alebo biochemickými metódami, ktoré sú známe, ako sú napríklad protilátky amidované mastnými kyselinami na voľnej aminoskupine na zvýšenie lipofilného charakteru, čo umožňuje inkorporáciu do lipozómov. Konkrétne termín „derivát“ tiež zahrňuje produkty, ktoré môžu byť pripravené chemickou kondenzáciou protilátky alebo protilátkového fragmentu s molekulou, ktorá zosilňuje imunitnú reakciu, ako je napríklad tetanový toxoid, exotoxín z Pseudomonas, deriváty lipidu A, GM-CSF, IL-2, alebo chemickou kondenzáciou protilátky alebo protilátkového fragmentu s polypeptidmi, ktoré zosilňujú imunitnú reakciu, ako je napríklad GM-CSF, IL-2, IL-12, C3d atď. Purifikácia protilátok z telesných tekutín obsahujúcich protilátky, napr. z humánneho séra, použitím imunoafinitnej purifikácie, sa uskutočňuje postupmi, ktoré sú odborníkovi známe (Clin. Chem. 45 (1999), 593, J. Chem. Technol. Biotechnol. 48 (1990), 105). TAA-špecifická protilátka alebo zmes protilátok sa imobilizuje na pevnej fáze (nosiči). Môže to byť membrána, gél alebo podobné látky, na ktoré sa protilátky môžu naviazať, bez toho aby došlo k podstatnej zmene ich väzbových vlastností. Ab2 môžu byť naviazané k imobilizovaným protilátkam dávkovým spôsobom alebo prietokovým spôsobom. Imunoafinitná purifikácia sa môže uskutočňovať automaticky na chromatografickom zariadení ručným spôsobom. Možno si však i predstaviť, že
PP 0654-2002
31938/T proces sa uskutočňuje ručne, automaticky alebo semiautomaticky pomocou jednoduchého zariadenia obsahujúceho imobilizované protilátky. Pri imunoafinitnej chromatografii, ktorá je opísaná v príklade 1, sa zvyčajne získa medzi 3 až 10 pg imunoglobulínu na 1 ml použitého séra. Všeobecná protilátková frakcia získaná týmto spôsobom obsahuje ako IgM tak i IgG. Je teda možné izolovať približne 0,08 až 0,25 mg Ab2 z množstva krvi, ktoré možno prijateľne odobrať, napr. z 50 ml krvi, ktoré poskytnú približne 25 ml séra. Toto množstvo je v podstate dostatočné pre vakcináciu. Pokiaľ je potrebné izolovať väčšie množstvo Ab2, použijú sa techniky, ktoré sú odborníkom známe, ako je napríklad plazmaferéza, v kombinácii s imunoafinitnou purifikáciou. Keď je použitých niekoľko protilátok, majúcich odlišnú špecifickosť, potom takéto imobilizované protilátky môžu byť použité simultánne alebo oddelene a imunoafinitné purifikácie môžu byť uskutočňované paralelne alebo v sérii.
V kontexte predkladaného vynálezu termín “antigén asociovaný s nádorom“ označuje štruktúru, ktorá je prezentovaná predovšetkým nádorovými bunkami, a ktorá ich teda umožňuje odlíšiť od normálnych nenádorových buniek. Výhodne je takýto antigén asociovaný s nádorom lokalizovaný na alebo v bunkovej membráne, nádorových buniek. Avšak nie je ani vylúčené, že takéto antigény sú tiež prítomné na nedegenerovaných bunkách. Antigény asociované s nádorom sú napríklad polypeptidy, konkrétne glykozylované proteíny alebo glykozylačné profily polypeptidov. Ďalšie štruktúry, ktoré môžu predstavovať antigén asociovaný s nádorom sú napríklad glykolipidy. K tým patria napríklad gangliozidy, ako je napríklad GM2. A ďalej antigén asociovaný s nádorom môže byť predstavovaný zmenou v zložení lipidov bunkovej membrány, ktorá môže byť charakteristická pre bunky karcinómu.
PP 0654-2002
31938/T
Najrôznejšie protilátky proti rôznym antigénom asociovaným s nádorom sú známe už dlhšiu dobu, a alebo môžu byť pripravené metódami, ktoré sú už odborníkom známe (napr. tzv. hybridómová technika, technika „phage display“, t.j. vystavovanie na fágu alebo fágový displej).
Vo výhodnom uskutočnení vynálezu sú protilátky získané pomocou imunoafinitnej purifikácie podávané ako autológne, individuálne vakcíny jednotlivcom, z telesných tekutín ktorých boli získané.
Teda ďalšou nedeliteľnou zložkou predkladaného vynálezu je to, že izolácia Ab2 frakcie z telesných tekutín jedinca, napr. krv, môže byť uskutočnená prostredníctvom imunoafinitnej purifikácie protilátky prítomnej v telesnej tekutine. Jedna alebo viac protilátok proti antigénu asociovanému s nádorom sa použije ako ligand.
V tomto kontexte je jedincom akýkoľvek živočích, výhodne stavovec, výhodnejšie cicavec a najvýhodnejšie človek.
V ďalšom výhodnom uskutočnení niekoľko protilátok namierených proti rôznym antigénom asociovaným s nádormi a/alebo proti rôznym epitopom jedného alebo viac antigénov asociovaných s nádorom môže byť súčasne použitých na imunoafinitnú purifikáciu. Ak je aplikovaných niekoľko, a najmä monoklonálnych, protilátok, namierených proti odlišným antigénom asociovaným s nádorom alebo proti odlišným epitopom, súčasne pre imunoafinitnú purifikáciu Ab2 prítomnej v telesnej tekutine, získa sa frakcia obsahujúca rôzne Ab2 proti vybranému súboru antigénov asociovaných s nádorom, ktorých simultánne použitie ako „vakcínová“ spúšť imunitnej reakcie proti všetkým týmto antigénom asociovaným s nádorom alebo epitopmi. Teda imunologická rovnováha je posunutá o jeden krok smerom k rozpoznávaniu súboru (často spoločne exprimovaných, koexprimovaných) antigénov asociovaných s nádorom alebo epitopov. Takýto postup prirodzene zvyšuje účinnosť indukovanej imunitnej reakcie a podstatne redukuje vytváranie
PP 0654-2002
31938/T antigén-negatívnych variantov nádorov („únik nádoru“), pretože je vysoko nepravdepodobné, že by nádorové bunky mohli zastaviť expresiu niekoľkých antigénov súčasne.
V princípe sú spôsoby vyššie opísané založené na všetkých známych alebo novo objavených antigénoch asociovaných s nádorom. Jedinou podmienkou je, aby bola dostupná jedna alebo viac protilátok, výhodne monoklonálnych protilátok, namierených proti tomuto antigénu, ktorá sa môže aplikovať ako ligand pre imunoafinitnú purifikáciu. V princípe sú vhodné všetky možné druhy protilátok, konkrétne polyklonálne alebo monoklonálne protilátky, pričom výhodné sú monoklonálne protilátky. Je tiež možné využiť zmesi polyklonálnej a monoklonálnej protilátky. Navyše možno aplikovať ako napr. myšiu monoklonálnu protilátku tak i protilátku z iného biologického druhu (napr. laboratórneho potkana). Okrem toho môžu byť aplikované myšie-humánne chimerické protilátky, humanizované alebo humánne monoklonálne protilátky proti antigénom asociovaným s nádorom. Vlastnosti protilátky použité pre imunoafinitnú purifikáciu sú určené ich väzbovými úsekmi, t.j. ich idiotypom. Takže v princípe môžu byť použité pre úspešnú imunoafinitnú purifikáciu namiesto intaktnej protilátky tiež fragmenty týchto protilátok, pokiaľ si tieto fragmenty ešte zachovávajú idiotyp príslušnej východiskovej protilátky. K príkladom patria (bez toho aby výpočet bol limitujúci): F(ab)'2 fragmenty, F(ab)' fragmenty a Fv fragmenty, ktoré môžu byť pripravené biochemickými metódami, ktoré sú odborníkom známe (enzymatické. štiepenie) alebo metódami molekulárnej biológie, taktiež odborníkom známymi. Faktom je, že je možné použiť tiež zmesi uvedených druhov protilátok alebo ich fragmentov.
Výber antigénov asociovaných s nádorom a preto protilátky použitej na imunoafinitnú purifikáciu, ktorá je namierená proti takýmto antigénom, závisí od antigénnych vlastností nádoru, proti ktorému má byť vakcinácia uskutočňovaná.
PP 0654-2002
31938/T
V nasledujúcom zozname sú ako príklad uvedené antigény asociované s nádorom, ktoré sú známe zo stavu techniky, a ktoré sú často exprimované na rôznych, najmä epitelových, nádoroch. Avšak použitie autológnej vakcinácie, ktorá je opísaná v predkladanej prihláške, nie je vôbec limitované len na tieto antigény:
- Adhézna molekula epitelových buniek (Ep-CAM),
- Karcinoembryonálny antigén (CEA),
- Lewis Y sacharid,
- sialyl Tn sacharid,
- globo H sacharid,
- gangliozidy ako sú napríklad GD2/ GD3/ GM2
- antigén špecifický pre prostatu (PSA)
-CA 125,
-CA18-9,
-CA 15-3,
- TAG-72,
- EGF receptor,
- Adhézna molekula neurónových buniek (N-CAM),
- Receptor Her2/Neu,
-D97,
- D20 a
-CD21
Proti všetkým týmto zmieneným antigénom (väčšinou niekoľkým) boli opísané najmä monoklonálne protilátky, ktoré sú v princípe vhodné na použitie ako ligandy pre vyššie imunoafinitné purifikácie s cieľom získať Ab2.
PP 0654-2002
31938/T
Ďalšie antigény asociované s nádorom boli opísané napríklad v publikácii DeVita et al. (Eds., „Biological Therapy of Cancer“, 2nd edition, chapter 3: Biology of Tumour Antigens, Lippincott Company, ISBN 0-3975144116-6(1995)).
Vo výhodnom uskutočnení vynálezu je antigén asociovaný s nádorom v membráne lokalizovaná molekula, ktorá je často exprimovaná alebo koexprimovaná na nádorových bunkách epitelového pôvodu, nádorových bunkách' neuroendokrinného pôvodu alebo nádorových bunkách pochádzajúcich zo systému krvotvorby.
V ďalšom výhodnom uskutočnení je prípravok podľa vynálezu vhodný na opakované podávanie protilátky v ňom obsiahnutej. Spôsob . získania autológnej vakcíny z telesných tekutín jedinca nie je prirodzene obmedzený na jedinú aplikáciu.
Posun imunologického repertoáru smerom k anti-nádorovej účinnosti, ktorý je spustený pomocou prvej vakcinácie, môže byť zosilnený pomocou opakovania toho istého postupu, napr. niekoľko týždňov po izolácii prvej autológnej vakcíny pomocou imunoafinitnej purifikácie, opäť môže byť odobratá telesná tekutina, napr. krv, a nová autológna vakcína môže byť pripravená a podávaná. Týmto spôsobom je zaistené, že je pri jednotlivých vakcínach vždy braný zreteľ na zodpovedajúci stav imunologickej rovnováhy. Tento postup možno vo vhodných intervaloch znovu a znovu opakovať (napr. najskôr každých 4 až 8 týždňov, neskôr každých 6 mesiacov).
Nové vakcinačné prípravky a postupy vakcinácie autológnou protilátkou, ktoré sú opísané v predkladanej prihláške, sú v princípe vhodné ako pre terapeutické tak i profylaktické účely. Opakovaná terapeutická vakcinácia pacientov s karcinómom môže potlačiť vytváranie nových metastáz, čo môže aspoň spomaliť rozvoj a šírenie choroby. Terapeutická autológna vakcinácia môže byť najmä použiteľná pri nasledujúcich štádiách choroby:
PP 0654-2002
31938/T
V ranných štádiách choroby, napr. po úspešnej operácii primárneho nádoru (adjuvantné štádium), kedy zvyšné diseminujúce nádorové bunky sú zničené pomocou autológnej vakcíny podľa vynálezu, a je tak zabránené vzniku nových metastáz. V dôsledku toho môže byť predĺžené obdobie života bez relapsu a teda doba prežitia. Prípadne je možné dosiahnuť i celoživotnú ochranu proti vytváraniu metastáz pomocou opísanej autológnej vakcinácie a podávania zosilňovacích („boosters“) dávok vo výhodných intervaloch.
V štádiu, keď boli metastázy už vytvorené, môže byť ich šírenie a vytváranie ďalších metastáz zastavené pomocou prípravkov alebo autológnej vakcinácie podľa vynálezu. Výsledkom je, že sa stav choroby stabilizuje a teda je možné udržať kvalitu života a prípadne predĺžiť dĺžku života.
Stratégia autológnej vakcinácie podľa vynálezu môže byť využitá u pacientov, ktorým bola podávaná monoklonálna protilátka proti antigénu asociovanému s nádorom vopred z dôvodov diagnostiky alebo terapie, a u ktorého sa vyvinula proti nim imunologická reakcia. V dôsledku toho v imunoafinitnej purifikácii, v ktorej je táto protilátka použitá ako ligand, protilátky namierené proti nej (Ab2) sú získané v množstve vyššom, ako v prípade neošetrených jedincov. Vakcinácia týmito Ab2 protilátkami zosilňuje tvorbu Ab3 protilátok, ktoré už mohli byť tvorené vnútorne. Vnútorná (intrinsická) indukcia Ab3 protilátok s potenciálnymi protinádorovými vlastnosťami prostredníctvom indukcie Ab2 použitím pasívnej imunoterapie myšími protilátkami namierenými proti antigénom asociovaným s nádorom tumour-associated antigens (Ab1), ktoré sú podávané i.v. pacientom s karcinómom, bola predpovedaná a po mnoho rokov testovaná (napr. Koprowski et al., PNAS 81 (1984), 216-19).
Prípravok podľa vynálezu a autológna vakcinácia podľa vynálezu môžu byť, v princípe, použité u zdravých jedincov pre zlepšenie, teda ako profylaxia, ochrany proti vzniku rakovinových ochorení. Takéto opatrenia majú zmysel, najmä v prípade vysoko rizikových skupín (kde patria jedinci napr. s genetickou dispozíciou pre vývoj určitého rakovinového ochorenia, ktoré môže byť
PP 0654-2002
31938/T detekované vo zvýšenej miere pomocou zodpovedajúcich testov).
Skutočnosť, že imunologický stav určitého jedinca, pokiaľ ide o idiotypovú sieť, je zohľadnený, pretože výhodná vakcína je pripravená z telesnej tekutiny daného jedinca, napr. séra, je všeobecne výhoda tejto stratégie individuálnej autológnej vakcinácie opísanej v predkladanom vynáleze.
Navyše dôsledkom je i to, že imunizovaný jedinec nepríde do kontaktu s cudzorodými antigénmi, ale je podrobený iba pôsobeniu endogénnej zložky vo vhodnej forme, ktorá modulačné pôsobí na imunologickú rovnováhu.
Vo výhodnom uskutočnení vynálezu je protilátka získaná pomocou imunoafinitnej purifikácie formulovaná s adjuvans vhodným pre vakcíny.
Ako všeobecne platí pre vakcíny, frakcia autológnej protilátky alebo jej fragmentov a derivátov môže byť formulovaná s adjuvans pre vakcíny. Pomocou adjuvans sa zosilňuje imunitná reakcia. K príkladom takých adjuvans, bez toho aby však výpočet bol obmedzujúci patria: adjuvans obsahujúci hliník, konkrétne hydroxid hlinitý (napr. Alu-gél), deriváty lipopolysacharidov, Bacillus Calmette Guerin (BCG), QS-21, lipozómové prípravky, formulácie s ďalšími antigénmi, proti ktorým už imunitný systém má vytvorenú silnú imunitnú reakciu, ako je napríklad tetanový toxoid alebo zložky chrípkových vírusov, prípadne vo forme lipozómových prípravkov.
Na zosilnenie imunitnej reakcie môže byť získaná vakcína podávaná spolu so zodpovedajúcimi, výhodne humánnymi, cytokínmi, ktoré podporujú vznik imunitnej reakcie. Najmä, avšak nikdy výlučne, je potrebné zmieniť faktor stimulujúci faktor kolónie granulocytov a makrofágov (GM-CSF). Tento cytokín stimuluje účinnú imunitnú reakciu tým, že aktivuje bunky „spracovávajúce“ antigén („antigén processing celíš“), napr. dendritické bunky.
P P 0654-2002
31938/T
Prípadne možno odborníkom známymi postupmi, ktoré boli publikované, inkubovať frakcie autológnej protilátky s autológnymi dendritickými bunkami kultivovanými ex-vivo. Dendritické bunky takto pulzne ošetrené sa potom podávajú späť danému jedincovi. Týmto spôsobom možno dosiahnuť zvlášť účinné imunitné reakcie.
Vo výhodnom uskutočnení použitia podľa vynálezu protilátky obsiahnuté v prípravku sú zmiešané s adjuvans a sú potom tepelne ošetrené, výhodne pri teplote medzi 70 a 121 °C. Adjuvans je výhodne adjuvans obsahujúci hliník. Je možné, že hoci tepelné ošetrenie denaturuje proteínový antigén, imunogénne časti proteínu môžu byť prezentované imunitnému systému v správnom tvare vďaka naviazaniu na adjuvans. Avšak nie je absolútne nevyhnutné proteíny denaturovať, aby sa dosiahol prospešný účinok pôsobenia tepla. Je známe, že tepelná denaturácia nezávisí len od teploty samej, ale tiež od času, po ktorý je proteín takejto teplote vystavený. Navyše existujú ďalšie fyzikálno-chemické parametre, ako je napríklad iónová sila, hodnota pH alebo druh a množstvo aktívnych povrchových štruktúr v zmesi, ktoré sú spoluzodpovedné za denaturáciu proteínu. Môžu teda nastať také podmienky, keď protilátky nie sú alebo nie sú úplne denaturované a/alebo ďalšie účinky, ako je napríklad menšia desorpcia na povrchu adjuvans, sú využité.
Ďalšou výhodou formulácie vakcíny spoločne s adjuvans a následného ošetrenia teplom je to, že v takto formulovanom prípravku sú prípadne infekčné patogény zoslabené alebo celkom inaktivované. Táto výhoda môže byť dôležitá ako pri výrobe tak i pri skladovaní a distribúcii vakcinačného prípravku. Takže ide o značnú bezpečnosť s ohľadom na známe i neznáme patogény infekčných ochorení. Navyše je možné plniť lieky bez použitia konzervačných látok, ak sa použije zodpovedajúci spôsob balenia, pretože tepelným ošetrením bola uskutočnená antimikrobiálna konzervácia vakcíny.
Ďalšou výhodou takto formulovaných prípravkov je potenciálne zvýšenie imunogenicity protilátky, lebo zahrievanie môže viesť k aspoň čiastočnej, denaturácii protilátky. Takto zvýšená antigenicita môže mať za následok zvýšenie imunogenicity, a to najmä v prípade proteínov, ktoré by mohli byť
PP 0654-2002
31938/T rozpoznávané ako proteín telu vlastný. Ešte ďalšou výhodou je to, že komplex proti látka-adjuvans je potenciálne dodatočne stabilizovaný tepelnou inaktiváciou, t.j. desorpcia proteínového antigénu sa neuskutočňuje tak rýchlo ako je tomu v prípade prípravku obsahujúceho antigén a adjuvans, avšak neošetreného teplom. Táto výhoda dovoľuje tiež použiť dlhšie intervaly medzi jednotlivými imunizáciami.
Prípravok vyrobený podľa vynálezu sa môže podávať v zhode so všeobecne známymi postupmi, napr. ako vakcína pomocou subkutánnej alebo intramuskulárnej injekcie.
A ďalej sa predkladaný vynález týka farmaceutického prípravku, ktorý obsahuje protilátky izolované z telesných tekutín obsahujúcich protilátky pomocou imunoafinitnej purifikácie, kde sú pre imunoafinitnú purifikáciu ako ligandy použité protilátky rozpoznávajúce jeden alebo viac antigénov asociovaných s nádorom alebo ich fragmenty majúce rovnaký idiotyp. Ako bolo už zmienené vyššie, takéto prípravky sú vhodné ako vakcíny pre terapeutickú alebo profylaktickú vakcináciu proti rakovine. Pokiaľ ide o výhodné vyhotovenie prípravku, pre zložky, formulácií, spôsoby podávania atď. farmaceutického prípravku podľa vynálezu platí, čo bolo už vyššie opísané v opise v súvislosti s použitím podľa vynálezu.
V neposlednom rade sa predkladaný vynález tiež týka farmaceutického prípravku obsahujúceho izolované dendritické bunky jedinca, ktoré boli kultivované ex vivo s protilátkami, ktoré boli izolované z telesnej tekutiny obsahujúcej protilátky toho istého jedinca imunoafinitnou purifikáciou.
Okrem toho sa predkladaný vynález tiež týka terapeutickej alebo profylaktickej vakcinácie proti rakovine, keď sa jedincovi podáva protilátka, ktorá bola izolovaná z telesnej tekutiny obsahujúcej protilátky, výhodne z telesnej tekutiny toho istého jedinca, pomocou imunoafinitnej purifikácie, kde sú pre imunoafinitnú purifikáciu ako ligandy použité protilátky rozpoznávajúce jeden alebo viac antigénov asociovaných s nádorom alebo ich fragmenty majúce rovnaký idiotyp.
PP 0654-2002
31938/T
Navyše sa predkladaný vynález týka terapeutickej alebo profylaktickej vakcinácie proti rakovine, kedy sú jedincovi podávané autológne izolované dendritické bunky, ktoré boli kultivované ex vivo a ktoré boli predtým inkubované in vitro s protilátkami, ktoré boli izolované z telesnej tekutiny obsahujúcej protilátky, výhodne z telesnej tekutiny toho istého jedinca, pomocou imunoafinitnej purifikácie, kde sú pre imunoafinitnú purifikáciu ako ligandy použité protilátky rozpoznávajúce jeden alebo viac antigénov asociovaných s nádorom alebo ich fragmenty majúce rovnaký idiotyp. V podstate to isté, čo už bolo vysvetlené skôr v spojení s použitím podľa vynálezu, platí i pre ďalšie výhodné uskutočnenia.
Predkladaný vynález sa ďalej týka spôsobu výroby protilátkových prípravkov, kedy protilátky sú protilátky, ktoré boli izolované z telesnej tekutiny obsahujúcej protilátky imunitnej purifikácie, pričom ako ligandy sú použité protilátky rozpoznávajúce jeden alebo viac antigénov asociovaných s nádorom alebo ich fragmenty majúce rovnaký idiotyp. Pokiaľ ide o telesné tekutiny, použitie protilátok ako ligandov a antigény asociované s nádorom, platí tu v podstate to isté, čo už bolo vysvetlené skôr v spojení s použitím podľa vynálezu. Imunoafinitná purifikácia môže byť uskutočňovaná metódami, ktoré sú odborníkom známe. V tomto ohľade platí tiež to isté, čo už bolo uvedené vyššie.
Vo výhodnom uskutočnení spôsobu podľa vynálezu je použité pre afinitnú purifikáciu súčasne niekoľko protilátok namierených proti odlišným antigénom asociovaným s nádorom a/alebo epitopom takýchto antigénov. Pri postupe, keď je pre afinitnú purifikáciu použitých niekoľko protilátok, môžu byť použité buď simultánne alebo oddelene a imunoafinitné purifikácie sú uskutočňované paralelne alebo sériovo, t.j. rôzne epitopy a/alebo antigénne špecifickosti môžu byť kombinované podľa potreby. Tieto požiadavky sú dôsledkom expresie rôznych antigénov na nádoroch rôznych jedincov.
PP 0654-2002
31938/T
Vo zvlášť výhodnom uskutočnení vynálezu sú pre imunoafinitnú purifikáciu ako ligandy použité monoklonálne protilátky a v ešte výhodnejšom uskutočnení je ako telesná tekutina použité sérum.
Spôsob podľa vynálezu je výhodne spôsob prípravy protilátkového preparátu, ktorý je ďalej použitý na výrobu farmaceutického prípravku, ktorý je užitočný pre terapeutickú alebo profylaktickú vakcináciu proti rakovine.
Ďalej sa predkladaný vynález týka spôsobu výroby farmaceutického prípravku, kedy sa pripraví protilátka spôsobom podľa vynálezu a takto získaná protilátka sa následne formuluje s farmaceutický prijateľným nosičom a/alebo vhodným adjuvans pre vakcíny.
Vo výhodnom uskutočnení sa protilátkový preparát zmieša s adjuvans, výhodne s adjuvans obsahujúcim hliník, a potom sa podrobí pôsobeniu tepla výhodne pri teplote medzi 70 a 121 °C.
I pre tieto výhodné uskutočnenia farmaceutických prípravkov podľa vynálezu platí všetko, čo už bolo uvedené vyššie.
Všetky v prihláške citované patentové spisy, publikácie alebo prístupy do databázy sú formou odkazu zahrnuté v plnom rozsahu do predkladanej. prihlášky.
PP 0654-2002
31938/T
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obrázok 1 ukazuje chromatogram imunoafinitnej purifikácie (pomocou imobilizovanej protilátky 17-1 A) protilátkovej frakcie zo séra makaka „rhesus“.
Obrázok 2 ukazuje chromatogram (triediaci chromatografie) protilátkovej frakcie purifikovanej pomocou imunoafinitnej purifikácie.
Obrázok 3 ukazuje väzbu sérovej protilátky získanej pomocou afinitnej purifikácie na protilátku 17-1 A: 17-1 A ELISA.
Obrázok 4 ukazuje výsledok autológnej vakcinácie makaka „rhesus“: väzba sérového lg na nádorové bunky Kato III (bunková ELISA).
Obrázok 5 ukazuje chromatogram (triediaci chromatografie) protilátkovej frakcie purifikovanej pomocou imunoafinitnej purifikácie (zmesové lôžka antiEpCAM/anti-Lewisy).
Obrázok 6 ukazuje chromatogram veľkostného štandardu (rozdelený triediacou chromatografiou).
P P 0654-2002
31938/T
Príklady uskutočnenia vynálezu
Nasledujúce materiály boli použité v príkladoch, ktoré sú ďalej opísané pre podrobnejšiu ilustráciu predkladaného vynálezu. Uvedené príklady nijako neobmedzujú rozsah vynálezu. !
Mikrotitračné doštičky: Imunodoštičky F96 MaxiSorp (Nunc) pre ELISA, doštičky pre kultiváciu buniek Celí kultur Cluster (Costar, Katalóg, č. 3598) pre ELISA s bunkami
Bunkové línie: KATO III: humánna bunková línia karcinómu žalúdka (ATCC
HTB 103)
| Kondenzačný pufor: | 0,1 M NaHC03 0,5 M NaCI pH 8,0 |
| Purifikačný pufor A: | PBS def. 0,2 M NaCI |
| Purifikačný pufor B: | 0,1 Mglycín/HCI 0,2 M NaCI pH 2,9 |
| Médium A: | RPMI 1640 + 2 g/l NaHCO3 100 U/ml penicilín G 100 pg/ml sulfát streptomycínu 4 mM glutamín 10 % fetálne teľacie sérum (tepelne inaktivované) |
| Väzbový pufor: | 1 15 mM Na2CO3 35 mM NaHCO3 3 mM NaN3 pH: 9,6 |
PP 0654-2002
31938/T
Deficitný PBS (PBS def.): 138 mM NaCI
1.5 mM KH2PO4
2,7 mM KCI
6.5 mM Na2HPO4 pH: 7,2
Fixačný roztok: 0,1 % glutardialdehyd vo fyziologickom roztoku NaCI
| Premývací pufor A: | 2 % NaCI 0,2 % Triton X-100 v PBS def. |
| Premývací pufor B: | 0,05 % Tween 20 v PBS def. |
| Blokovací pufor A: | 5 % fetálne teľacie sérum (tepelne inaktiv.) v PBS def. |
| Blokovací pufor B: | 1 % bovinný sérový albumín 0,1 % NaN3 v PBS def. |
| Riediaci pufor A: | 2 % fetálne teľacie sérum (tepelne inaktivované) v PBS def. |
| Riediaci pufor B: | PBS def. |
| Značiaci/farbiaci pufor: | 24.3 mM kyselina citrónová 51.4 mM Na2HPO4 pH: 5,0 |
| Substrát: | 40 mg o-fenyléndiamíndihydrochlorid 100 ml značiaci/farbiaci pufor 20 μΙ H2O2 (30 %) |
Zastavovací (stop) roztok: 4 N H2SO4
Formulačný pufor: 10 % PBS def., pH = 6,0 % fyziologický roztok NaCI
P P 0654-2002
31938/T
Príklad 1
Príprava imunoafinitnej kolóny s TAA-špecifickou protilátkou
7,5 g CH-sefarózy 4B (Pharmacia) sa suspendovalo počas 15 minút v 20 ml 1 mM HCI. Vzniknutý gél bol potom premytý 1 litrom 1 mM HCI a potom 200 ml kondenzačného pufra na sintrovom filtri AG3. 100 mg myšej protilátky 17-1 A (Panorex, zásobný roztok 10 mg/ml, špecifická proti antigénu asociovanému s nádorom Ep-CAM) sa dialyzovalo proti 5 I kondenzačného pufra a upravené pomocou kondenzačného pufra na výslednú koncentráciu 5 mg/ml. Tento roztok sa zmiešal s gélovou suspenziou v uzavretej nádobe. Suspenzia, ktorá je vhodná na kondenzáciu, môže byť pripravená pri pomere gélu kpufru 1:2. Táto suspenzia bola točená počas 24 hodín pri 4 °C. Potom bol vymytý nadbytok ligandu s 3 x 30 ml kondenzačného pufra. Zvyšné reaktívne skupiny boli blokované pomocou 1 hodinovej inkubácie s 1M etanolamínom pri 4 °C. Potom bol gél točený počas 1 hodiny pri teplote miestnosti s 0,1 M Tris-HCI pufrom. A nakoniec bol gél premytý v troch cykloch pufra s meniacou sa pH hodnotou. Každý cyklus pozostával z 0,1 M acetátového pufra (octan sodný) s pH 4 s 0,5 M NaCI, a 0,1 M Tris-HCI pufra s pH 8 s 0,5 M NaCI. Gél sa potom uložil pri 4 °C.
Príklad 2
Imunoafinitná purifikácia protilátkovej frakcie zo séra pomocou imunoafinitnej chromatografie ml periférnej krvi sa odobralo z makakov „rhesus“ a pripravilo sa z nej sérum. Celý postup bol uskutočňovaný v sterilných podmienkach.
Imunoafinitná purifikácia bola uskutočňovaná na systéme FPLC (Pharmacia). 1 ml gélu pripraveného podľa Príkladu 1 bol nanesený do kolóny HR5/5 (Pharmacia). 5 ml séra sa nariedilo 1:10 purifikačným pufrom A. Tento roztok bol pumpovaný kolónou prietokom 1 ml/minútu a potom bola kolóna preplachovaná purifikačným pufrom A tak dlho, dokiaľ nebola dosiahnutá opäť
PP 0654-2002
31938/T bazálna hodnota UV detektoru (280 nm). Naviazané imunoglobulíny boli eluované purifikačným pufrom B a frakcia bola neutralizovaná 1 M Na2HPO4 bezprostredne po desorpcii. Obrázok 1 ukazuje chromatogram z tejto purifikácie (UV 280 nm).
μΙ protilátkovej frakcie purifikovanej, ako bolo vyššie opísané, sa analyzovalo na triediacej kolóne (SEC, Zorbax 250 GF). 220 mM fosfátový pufor, pH 7 + 10 % acetonitril boli použité ako nosič. Ako je vidieť z chromatogramu tejto analýzy, (Obrázok 2), protilátková frakcia obsahuje IgM a IgG v pomere približne 3:2. Celkové množstvo protilátkovej frakcie bolo približne 40 pg (stanovené triediacou chromatografiou, „size exclusion chromatography“, SEC). Protilátková frakcia získaná týmto spôsobom bola testovaná v ELISA s ohľadom na väzbu k protilátke 17-1A (ktorá bola použitá ako ligand pre afinitnú purifikáciu): 100 μΙ alikvóty protilátky špecifickej proti antigénu asociovanému s nádorom (protilátka 17-1A, roztok s 10 g/ml vo väzbovom pufri), ktorá bola tiež použitá pre afinitnú purifikáciu, boli inkubované v jamkách mikrotitračnej doštičky počas 1 hodiny pri 37 °C. Po premytí doštičiek šesťkrát premývacím pufrom A bolo pridané 200 μΙ blokovacieho pufra A a inkubované počas 30 minút pri 37 °C. Po premytí doštičiek, ako bolo opísané vyššie, sa 100 μΙ alikvóty afinitne purifikovanej protilátkovej frakcie, ktoré mali byť testované, spoločne s normálnym humánnym imunoglobulínom v rovnakej koncentrácii ako negatívna kontrola, inkubovali v riedení 1:4 až 1:65 000 v riediacom pufri A počas 1 hodiny pri 37 °C. Po opätovnom premytí doštičiek, ako bolo opísané vyššie, 100 μΙ kozej anti-humánnej Ig protilátky konjugovanej s peroxidázou (Zymed) bolo pridané v riedení 1:1000 v riediacom pufri A a inkubované počas 30 minút pri 37 °C. Doštičky boli premyté štyrikrát premývacím pufrom A a dvakrát značiacim/farbiacim pufrom. Naviazanie protilátky bolo detekované pridaním 100 μΙ špecifického substrátu a farebná reakcia bola zastavená za približne 3 minúty pridaním 50 μΙ stop roztoku. Vyhodnotenie bolo uskutočňované meraním optickej denzity (OD) pri vlnovej dĺžke 490 nm (vlnová dĺžka referenčného merania bola 620 nm).
PP 0654-2002
31938/T
Ako je vidieť na obr. 3, afinitne purifikovaná protilátková frakcia vykazovala významnú väzbu na protilátku 17-1 A, zatiaľ čo normálny humánny imunoglobulín sa vôbec neviazal.
I
Príklad 3
Formulácia vakcíny s purifikovanou protilátkou
Protilátková frakcia získaná afinitnou purifikáciou bola formulovaná s hydroxidom hlinitým ako adjuvans nasledujúcim spôsobom:
mg' hydroxidu hlinitého (vodná suspenzia, Alhydrogel, Superfos) bolo pridané k 3 ml roztoku .protilátky získanej po afinitnej chromatografii (obsahujúcom približne 40 pg protilátky) a suspenzia sa stočila v centrifugačnej fľaštičke „FILTRON“ (Microsep™, filtračný limit 10 kD) počas 30 minút pri 4000 x g. Potom bol roztok suspendovaný dvakrát s 1 ml formulačného pufra a stočený počas 30 minút pri 4000 x g. Suspenzia sa doplnila formulačným pufrom na 0,5 ml a uchovala sterilným spôsobom.
Príklad 4
Imunizácia makakov „rhesus“ autológnou imunoafinitne purifikovanou protilátkou
Jednotliví príslušní makakovia „rhesus“, zo séra ktorých bola získaná vakcína, ako je opísané v príkladoch 2 a 3, boli vakcinovaní subkutánne do chrbta touto vakcínou. Pred prvou vakcináciou bolo odobratých 5 ml krvi na prípravu séra (na stanovenie počiatočných hodnôt na charakterizáciu imunitnej reakcie). Dva týždne potom, bolo opäť odobratých 10 ml krvi, z ktorej bolo opäť izolované sérum. So 4 ml tohto séra bola opakovaná izolácia autológnej vakcíny, ako už bolo opísané vyššie. Makakovia „rhesus“ boli opäť touto novou vakcínou injikovaní subkutánne do chrbta. 4 týždne po tejto vakcinácii bolo odobratých opäť 5 ml krvi a bolo izolované sérum (na stanovenie účinku vakcinácie).
Pre-sérum týchto makakov a imunitné sérum 4 týždne po druhej
PP 0654-2002
31938/T vakcinácii boli analyzované bunkovým testom ELISA, tu sa protilátky viažu na bunky bunkovej línie KATO III. Testy boli uskutočnené nasledujúcim spôsobom:
Jamky mikrotitračnej doštičky boli inkubované so 100 μΙ bunkovej suspenzie línie KATO III v koncentrácii 2x106 buniek/ml v médium A cez noc pri +37 °C. Po odsatí supernatantu boli doštičky inkubované s 50 μΙ fixačného roztoku v každej jamke počas 5 minút pri teplote miestnosti. Po opätovnom odsatí supernatantu bolo pridané do každej jamky 200 μΙ blokovacieho pufra B a doštičky boli inkubované počas 1 hodiny pri teplote miestnosti. Po premytí dvakrát s 200 μΙ premývacieho pufra B boli 100 μΙ alikvóty séra makakov testované tak, že boli inkubované v riedení 1:4 až 1:56 000 pufrom B počas 1 hodiny pri 37 °C. Po premytí doštičiek dvakrát 100 μΙ ľadovo chladného premývacieho pufra B bolo pridané 100 μΙ kozej anti-humánnej Ig protilátky konjugovanej s peroxidázou (Zymed) v riedení 1:1000 pufrom A a inkubované počas 45 minút pri 37 °C. Doštičky boli premyté trikrát 100 μΙ ľadovo chladného premývacieho pufra B. Väzba protilátky bola detekovaná pomocou pridania 100 μΙ špecifického substrátu a farebná reakcia bola zastavená po približne 5 minútach pridaním 50 μΙ zastavovacieho roztoku. Vyhodnotenie bolo uskutočňované meraním optickej denzity (OD) vo vlnovej dĺžke 490 nm (referenčná vlnová dĺžka bola 620 nm).
Ako je vidieť na obrázku 4, v imunitnom sére makakov, ktorí boli vakcinovaní autológnym spôsobom, sa vyskytujú imunoglobulíny, ktoré sa viažu na nádorové bunky Kato III, zatiaľ čo takéto protilátky nemohli byť detekované v pre-sére rovnakých zvierat.
Výsledky vyššie opísaných experimentov ukazujú, že vakcinácia individuálnymi frakciami autológnej protilátky, ktoré boli získané pomocou imunoafinitnej purifikácie s monoklonálnou protilátkou namierenou špecificky proti antigénu asociovanému s nádorom, spúšťa humorálnu imunitnú reakciu, ktorá je namierená proti humánnym nádorovým bunkám, ktoré exprimujú daný antigén asociovaný s nádorom.
PP 0654-2002
31938/T
Príklad 5
Príprava imunoafinitnej kolóny s dvoma rôznymi TAA-špecifickými protilátkami.
Monoklonálna myšia protilátka, ktorá reagovala s EP-CAM, a monoklonálna myšia protilátka, ktorá reagovala s Lewis Y, boli obe kondenzované na aktivovanú CH sefarózu 4B (Pharmacia Biotech, Sweden) štandardným postupom:
7,5 g CH sefarózy 4B bolo suspendované v 20 ml 1 mM HCI počas 15 minút a nasiaknutý gél bol premytý 1 litrom 1 mM HCI a potom 200 ml kondenzačného pufra na filtri AG3 zo sintrového skla. 100 mg myšej protilátky (zásobný roztok 10 mg/ml) bolo dialyzované proti 5 I kondenzačného pufra a potom upravené kondenzačným pufrom na koncentráciu 5 mg/ml. Tento roztok sa zmiešal s gólovou suspenziou v uzavretej nádobe. Suspenzia, ktorá bola vhodná pre kondenzáciu, bola získaná pri pomere gélu k pufru 1:2. Táto suspenzia bola 24 hodín točená pri 4 °C. Potom bol nadbytok ligandu vymytý 3 x 30 ml kondenzačného pufra. Zvyšné reaktívne skupiny boli blokované pomocou 1-hodinovej inkubácie s 1 M etanolamínom pri 4 °C. Potom bol gél točený počas 1 hodiny pri teplote miestnosti s 0,1 M Tris-HCI. Nakoniec bol gél premytý v troch cykloch pufra s meniacim sa pH. Každý cyklus pozostával z 0,1 M acetátového pufra (octan sodný) s pH 4 s 0,5 M NaCI, nasledovaného 0,1 M Tris-HCI s pH 8 s 0,5 M NaCI. Gél bol potom uložený pri 4 °C.
Dva zhodné objemy dvoch afinitných matríc boli zmiešané a bola z nich vytvorená imunoafinitná chromatografická kolóna (systém Aktá, Pharmacia, Sweden).
P P 0654-2002
31938/T
Príklad 6
Purifikácia protilátky z opičieho séra pomocou simultánnej imunoafinitnej purifikácie s dvoma rôznymi TAA-špecifickými protilátkami.
Približne 20 ml krvi bolo odobraté každému imunologický naivnému makakovi „rhesus“. 9 ml séra bolo purifikované na imunoafinitnej chromatografickej kolóne, ako bola opísaná v príklade 5 (Systém Aktá, Pharmacia, Sweden).
Nanášací pufor: purifikačný pufor A
Elučný pufor: purifikačný pufor B
Eluáty boli neutralizované 0,5 M roztokom hydrogenfosforečnanu sodného. Potom boli frakcionované tak, že proteíny boli prítomné vo vysokej koncentrácii.
μΙ purifikovanej proti látkovej frakcie bolo analyzovaných na triediacej kolóne (SEC, Zorbax 250 GF). 220 mM fosfátový pufor, pH 7 + 10 % acetonitril boli použité ako rozdeľovacie činidlo (prietok: 1,000 ml/min, vlnová dĺžka 214 nm). Ako je vidieť na chromatograme z tejto analýzy (pozri obrázok 5), protilátková frakcia obsahuje IgM (retenčný čas 6,963 min) a IgG (retenčný čas 8,745 min) v pomere približne 3:2.
Celkové množstvo protilátkovej frakcie bolo približne 50 μΙ (stanovené pomocou SEC v porovnaní so štandardom, pozri obrázok 6).
PP 0654-2002
31938/T
Príklad 7
Rôzne formulácie purifikovanej protilátky do vakcinačného prípravku i
Vakcíny boli formulované v ultrafiltračnej jednotke pre centrifugáciu (Centricon 10, Amicon, USA). Ultrafiltračné jednotky boli premyté pomocou centrifugácie 1 mM fosfátovým pufrom, 0,86 % NaCI, pH 6,0 (NBK).
Potom sa 1 ml pufra (NBK) naplnilo do jednotky a pridalo sa 37 μΙ 2 % Alhydrogélu (Superfos Biosector, Denmark). Po pridaní neutralizovaného eluátu z príkladu 6 boli uskutočnené centrifugácie a premytia (s 5 ml pufra) podľa inštrukcií Centricon.
. Potom bola vakcína resuspendovaná a doplnená na 550 μΙ pufrom ä uskladnená sterilným spôsobom.
Alternatívne bola vakcína doplnená na 545 μΙ pufrom po resuspendovaní a bolo pridané 5,5 μΙ zásobného roztoku timerosalu (10 mg/ml, Sigma, USA).
Tretí variant formulácie vakcíny sa sterilné naplnil do sklenených fľaštičiek a tepelne denaturova v autokláve (121 °C, 20 minút).
PP 0654-2002
31938/T
Claims (24)
1. Použitie protilátky na výrobu farmaceutického prípravku vhodného ako vakcína na terapeutickú alebo profylaktickú vakcináciu proti rakovine, kedy sa protilátky izolujú z telesných tekutín obsahujúcich protilátky pomocou imunoafinitnej purifikácie, kde protilátky rozpoznávajúce jeden alebo viac antigénov asociovaných s nádorom alebo ich fragmenty majúce rovnaký idiotyp sú použité ako ligandy pre imunoafinitnú purifikáciu, a kde sa telesné tekutiny získali z jedinca, ktorému pred tým nebola podávaná monoklonálna protilátka namierená ani proti jednému z antigénov asociovaných s nádorom.
2. Použitie podľa nároku 1, kedy farmaceutický prípravok je určený na podávanie ako autológna individuálna vakcína jedinca, z ktorého telesných tekutín sa protilátky získali.
3. Použitie protilátky na výrobu farmaceutického prípravku vhodného ako vakcína na terapeutickú alebo profylaktickú vakcináciu proti rakovine, kedy protilátky sú izolované z telesných tekutín obsahujúcich protilátky pomocou imunoafinitnej purifikácie, kde protilátky rozpoznávajúce jeden alebo viac antigénov asociovaných s nádorom alebo ich fragmenty majúce rovnaký idiotyp sú použité ako ligandy pre imunoafinitnú purifikáciu, pričom farmaceutický prípravok je určený na podávanie ako autológna individuálna vakcína jedincovi, z ktorého telesných tekutín sa protilátky získali.
P P 0654-2002
31938pn ns/T
4. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, kedy telesná tekutina je sérum.
5. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, kedy jedinec je človek.
6. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5, kedy sa pre imunoafinitnú purifikáciu použije súčasne niekoľko protilátok namierených proti rôznym antigénom asociovaným s nádorom a/alebo proti rôznym epitopom takýchto antigénov.
7. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6, kedy protilátky použité ako ligandy na imunoafinitnú purifikáciu sú monoklonálne protilátky.
8. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 7, kedy sa farmaceutický prípravok pripravuje opakovane a je určený na postupné podávanie pre individuálnu vakcináciu opakovanú vo vhodných intervaloch.
9. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 8, kedy antigény asociované s nádorom sú molekuly lokalizované v membráne, ktoré sú často exprimované a/alebo koexprimované na bunkách nádorov epitelového pôvodu alebo na bunkách nádorov neuroendokrinného pôvodu alebo bunkách nádorov systému krvotvorby.
10. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 9, kedy protilátky purifikované pomocou imunoafinitnej purifikácie alebo ich deriváty sú formulované spolu s adjuvans vhodným pre vakcínu.
PP 0654-2002
31938pn ns/T
ÓO
11. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 10, kedy prípravok ďalej obsahuje proteín, ktorý zosilňuje imunitnú reakciu a ktorý sa podáva súčasne s protilátkami.
12. Použitie podľa nároku 11, kedy proteín je humánny proteín.
13. Použitie podľa nároku 12, kedy humánny proteín je faktor stimulujúci kolónie granulocytov a makrofágov (GM-CSF).
14. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 13, kedy prípravok je vhodný na podávanie protilátky purifikovanej pomocou imunoafinitnej purifikácie ako vakcíny subkutánnymi alebo intramuskulárnymi injekciami.
15. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 14, kedy protilátky obsiahnuté v prípravku sú zmiešané s adjuvans a podrobené pôsobeniu tepla.
16. Použitie izolovaných, ex vivo kultivovaných dendritických buniek jedinca na výrobu farmaceutického prípravku vhodného ako vakcína na terapeutickú alebo profylaktickú vakcináciu proti rakovine, kedy dendritické bunky sa predtým inkubovali in vitro s protilátkami, ktoré sa získali imunoafinitnou purifikáciou z telesných tekutín toho istého jedinca obsahujúcich protilátky, pričom ako ligandy pre imunoafinitnú purifikáciu sa použili protilátky rozpoznávajúce jeden alebo viac antigénov asociovaných s nádorom alebo ich fragmenty majúce rovnaký idiotyp, a telesné tekutiny pochádzajú z jedinca, ktorému pred tým nebola podaná monoklonálna protilátka namierená ani proti jednému z antigénov asociovaných s nádorom.
P P 0654-2002
31938pn ns/T
17. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje protilátky získané z telesných tekutín obsahujúcich protilátky pomocou imunoafinitnej purifikácie, kde pre imunoafinitnú purifikáciu boli ako ligandy použité protilátky rozpoznávajúce jeden alebo viac antigénov asociovaných s nádorom alebo ich fragmenty majúce rovnaký idiotyp, a kde telesné tekutiny pochádzajú z jedinca, ktorému pred tým nebola podaná monoklonálna protilátka namierená ani proti jednému z antigénov asociovaných s nádorom.
18. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje izolované ex vivo kultivované dendritické bunky jedinca, kde dendritické bunky sa predtým inkubovali in vitro s protilátkami, ktoré sa získali imunoafinitnou. purifikáciou z telesných tekutín toho istého jedinca obsahujúcich protilátky, pričom ako ligandy pre imunoafinitnú purifikáciu sa použili protilátky rozpoznávajúce jeden alebo viac antigénov asociovaných s nádorom alebo ich fragmenty majúce rovnaký idiotyp, a telesné tekutiny pochádzajú z jedinca, ktorému pred tým nebola podaná monoklonálna protilátka namierená ani proti jednému z antigénov asociovaných s nádorom.
19. Spôsob výroby protilátkového preparátu, vyznačujúci sa tým, že protilátky sa izolujú z telesných tekutín obsahujúcich protilátky pomocou imunoafinitnej purifikácie, kde pre imunoafinitnú purifikáciu sa ako ligandy použili protilátky rozpoznávajúce jeden alebo viac antigénov asociovaných s nádorom alebo ich fragmenty majúce rovnaký idiotyp, a kde telesné tekutiny pochádzajú z jedinca, ktorému pred tým nebola podaná monoklonálna protilátka namierená ani proti jednému z antigénov asociovaných s nádorom.
PP 0654-2002
31938pn ns/T
Μ
20. Spôsob podľa nároku 19, vyznačujúci sa tým, že sa na afinitnú purifikáciu sa súčasne použije niekoľko protilátok namierených proti rôznym antigénom asociovaným s nádorom a/alebo epitopom takýchto antigénov.
21. Spôsob podľa nároku 19 alebo 20, vyznačujúci sa tým, že protilátky použité na afinitnú purifikáciu sú monoklonálne protilátky.
22. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 19 až 21, vyznačujúci sa tým, že telesná tekutina je sérum.
23. Spôsob výroby farmaceutického prípravku, vyznačujúci sa tým, že protilátkový preparát sa pripraví spôsobom podľa ktoréhokoľvek z nárokov 19 až 22 a takto získaný protilátkový preparát sa formuluje s farmaceutický prijateľným nosičom a/alebo adjuvans vhodným pre vakcínu.
24. Spôsob podľa nároku 23, vyznačujúci sa tým, že protilátkový preparát sa zmieša s adjuvans a potom sa podrobí pôsobeniu tepla.
PP 0654-2002
31938pn ns/T
1/6
Obr. 1
2/6
Obr. 2
3/6
OD x 1000 riedenie 1:
normálne ľudské lg afinitne purifikované protilátky
Obr. 3
OD x 1000
4/6 — O O v- O
X riedenie séra 1:
100000J
-s- pre-sérum imunitné sérum
Obr. 4
5/6 .
Obr. 5
6/6
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT0192799A AT409086B (de) | 1999-11-16 | 1999-11-16 | Neue verwendung von antikörpern als impfstoffe |
| PCT/EP2000/011306 WO2001035989A2 (de) | 1999-11-16 | 2000-11-15 | Verwendung von anti-idiotypische antikörpern als impfstoffe gegenkrebs |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK6542002A3 true SK6542002A3 (en) | 2002-11-06 |
Family
ID=3524036
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK654-2002A SK6542002A3 (en) | 1999-11-16 | 2000-11-15 | The use of antibodies for the production of pharmaceutical composition useful as vaccines |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1229936B1 (sk) |
| JP (1) | JP2003514028A (sk) |
| KR (1) | KR20020060968A (sk) |
| CN (1) | CN1390138A (sk) |
| AT (1) | AT409086B (sk) |
| AU (1) | AU780853B2 (sk) |
| BR (1) | BR0015597A (sk) |
| CA (1) | CA2391927A1 (sk) |
| CZ (1) | CZ20021707A3 (sk) |
| DE (1) | DE50006526D1 (sk) |
| DK (1) | DK1229936T3 (sk) |
| EE (1) | EE200200252A (sk) |
| ES (1) | ES2218272T3 (sk) |
| HU (1) | HUP0204216A2 (sk) |
| IL (1) | IL149614A0 (sk) |
| IS (1) | IS6381A (sk) |
| MX (1) | MXPA02004942A (sk) |
| NO (1) | NO20022333L (sk) |
| NZ (1) | NZ518669A (sk) |
| PL (1) | PL356770A1 (sk) |
| PT (1) | PT1229936E (sk) |
| SK (1) | SK6542002A3 (sk) |
| TR (1) | TR200401267T4 (sk) |
| WO (1) | WO2001035989A2 (sk) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4017108A (en) * | 1975-04-17 | 1977-04-12 | Archibald Kenrick And Sons Limited | Window stay |
| US6294171B2 (en) * | 1999-09-14 | 2001-09-25 | Milkhaus Laboratory, Inc. | Methods for treating disease states comprising administration of low levels of antibodies |
| AT410172B (de) * | 2000-03-21 | 2003-02-25 | Igeneon Gmbh | Verfahren zur herstellung einer vakzineformulierung |
| AT410637B (de) * | 2001-06-01 | 2003-06-25 | Igeneon Krebs Immuntherapie | Verwendung von polyklonalen immunglobulinen |
| AT502293B1 (de) * | 2002-05-15 | 2008-03-15 | Igeneon Krebs Immuntherapie | Immunogener, monoklonaler antikörper |
| AT500648B1 (de) * | 2002-08-12 | 2010-03-15 | Igeneon Krebs Immuntherapie | Set zur behandlung von krebspatienten |
| KR100522526B1 (ko) * | 2002-11-28 | 2005-10-19 | 주식회사 바이넥스 | 면역 치료용 수지상 세포의 제조방법 |
| AT500650B1 (de) | 2003-04-17 | 2009-11-15 | Altropus Gmbh | Immunogener rekombinanter antikörper |
| WO2007024825A2 (en) * | 2005-08-26 | 2007-03-01 | Genway Biotech, Inc. | Immunoaffinity separation and analysis compositions and methods |
| EP2044949A1 (en) | 2007-10-05 | 2009-04-08 | Immutep | Use of recombinant lag-3 or the derivatives thereof for eliciting monocyte immune response |
| GB201322626D0 (en) | 2013-12-19 | 2014-02-05 | Immutep S A | Combined preparations for the treatment of cancer |
| US20180008702A1 (en) * | 2014-12-05 | 2018-01-11 | Celltrion Inc. | Adjuvant composition containing at least one influenza virus neutralizing and binding molecule and vaccine composition containing same |
| GB201500374D0 (en) | 2015-01-09 | 2015-02-25 | Immutep S A | Combined preparations for the treatment of cancer |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1984002848A1 (en) * | 1983-01-28 | 1984-08-02 | Centocor Inc | Anti-idiotypic antibodies to t cell antigen receptors |
| ES2015654A6 (es) * | 1988-05-17 | 1990-09-01 | Soldano Ferrone | Un procedimiento para preparar anticuerpos anti-idiotipicos para antigeno asociado con melanoma, de alto peso molecular anti-humano. |
| US20030072751A1 (en) * | 1990-03-14 | 2003-04-17 | Heribert Bohlen | Idiotypic vaccination against b cell lymphoma |
| IT1254315B (it) * | 1992-03-27 | 1995-09-14 | Mini Ricerca Scient Tecnolog | Anticorpi monoclonali anti-idiotipici diretti contro anticorpi anti-tnf. |
| WO1994001133A1 (en) * | 1992-07-08 | 1994-01-20 | Schering Corporation | Use of gm-csf as a vaccine adjuvant |
| CA2209172C (en) * | 1994-12-28 | 2007-04-10 | University Of Kentucky | Murine monoclonal anti-idiotype antibody 3h1 |
-
1999
- 1999-11-16 AT AT0192799A patent/AT409086B/de not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-11-15 EP EP00987250A patent/EP1229936B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-15 TR TR2004/01267T patent/TR200401267T4/xx unknown
- 2000-11-15 DE DE50006526T patent/DE50006526D1/de not_active Expired - Fee Related
- 2000-11-15 AU AU23572/01A patent/AU780853B2/en not_active Ceased
- 2000-11-15 CZ CZ20021707A patent/CZ20021707A3/cs unknown
- 2000-11-15 EE EEP200200252A patent/EE200200252A/xx unknown
- 2000-11-15 KR KR1020027006126A patent/KR20020060968A/ko not_active Application Discontinuation
- 2000-11-15 CN CN00815789A patent/CN1390138A/zh active Pending
- 2000-11-15 BR BR0015597-7A patent/BR0015597A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-11-15 SK SK654-2002A patent/SK6542002A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2000-11-15 PT PT00987250T patent/PT1229936E/pt unknown
- 2000-11-15 JP JP2001537979A patent/JP2003514028A/ja active Pending
- 2000-11-15 HU HU0204216A patent/HUP0204216A2/hu unknown
- 2000-11-15 DK DK00987250T patent/DK1229936T3/da active
- 2000-11-15 NZ NZ518669A patent/NZ518669A/en unknown
- 2000-11-15 CA CA002391927A patent/CA2391927A1/en not_active Abandoned
- 2000-11-15 MX MXPA02004942A patent/MXPA02004942A/es unknown
- 2000-11-15 WO PCT/EP2000/011306 patent/WO2001035989A2/de not_active Application Discontinuation
- 2000-11-15 ES ES00987250T patent/ES2218272T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-15 PL PL00356770A patent/PL356770A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2000-11-15 IL IL14961400A patent/IL149614A0/xx unknown
-
2002
- 2002-05-14 IS IS6381A patent/IS6381A/is unknown
- 2002-05-15 NO NO20022333A patent/NO20022333L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AT409086B (de) | 2002-05-27 |
| JP2003514028A (ja) | 2003-04-15 |
| PT1229936E (pt) | 2004-09-30 |
| EE200200252A (et) | 2003-06-16 |
| WO2001035989A2 (de) | 2001-05-25 |
| KR20020060968A (ko) | 2002-07-19 |
| NO20022333D0 (no) | 2002-05-15 |
| CN1390138A (zh) | 2003-01-08 |
| IL149614A0 (en) | 2002-11-10 |
| NO20022333L (no) | 2002-06-03 |
| IS6381A (is) | 2002-05-14 |
| AU780853B2 (en) | 2005-04-21 |
| DE50006526D1 (de) | 2004-06-24 |
| EP1229936A2 (de) | 2002-08-14 |
| AU2357201A (en) | 2001-05-30 |
| ATA192799A (de) | 2001-10-15 |
| NZ518669A (en) | 2003-08-29 |
| TR200401267T4 (tr) | 2004-07-21 |
| ES2218272T3 (es) | 2004-11-16 |
| EP1229936B1 (de) | 2004-05-19 |
| BR0015597A (pt) | 2002-07-23 |
| WO2001035989A3 (de) | 2001-10-04 |
| HUP0204216A2 (en) | 2003-04-28 |
| CZ20021707A3 (cs) | 2002-10-16 |
| MXPA02004942A (es) | 2003-10-14 |
| CA2391927A1 (en) | 2001-05-25 |
| DK1229936T3 (da) | 2004-08-30 |
| PL356770A1 (en) | 2004-07-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8444974B2 (en) | Use of antibodies for the vaccination against cancer | |
| WO2001012217A9 (en) | Therapeutic antibody against muc-1 antigen and methods for their use | |
| KR20020011137A (ko) | 면역 반응을 개시시키기 위해 다중 에피토프 항원의입체형태를 변화시키기 위한 방법 및 조성물 | |
| SK6542002A3 (en) | The use of antibodies for the production of pharmaceutical composition useful as vaccines | |
| Roehnisch et al. | Chemically linked phage idiotype vaccination in the murine B cell lymphoma 1 model | |
| US20060018901A1 (en) | Use of antibodies in a very low dose for the vaccination against cancer | |
| US20040191242A1 (en) | Method for producing a vaccine | |
| US20040265318A1 (en) | Use of antibodies for the vaccination against cancer | |
| KR100372958B1 (ko) | 면역반응을개시시키기위해다중에피토프항원의입체형태를변화시키기위한방법및조성물 | |
| JP2001055341A (ja) | 免疫応答を惹起するための、多数エピトープ含有抗原の再構成法および組成物 | |
| JP2004002481A (ja) | 免疫応答を惹起するための、多数エピトープ含有抗原の再構成法および組成物 | |
| MXPA98009586A (en) | Method and composition for the reconformation of multi-peptide antigens to start an animal response |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FC9A | Refused patent application |