JP2003513911A - シスプラチン及び他の薬剤又はリポソーム中に封入された遺伝子を用いてのヒト癌のための療法 - Google Patents

シスプラチン及び他の薬剤又はリポソーム中に封入された遺伝子を用いてのヒト癌のための療法

Info

Publication number
JP2003513911A
JP2003513911A JP2001536130A JP2001536130A JP2003513911A JP 2003513911 A JP2003513911 A JP 2003513911A JP 2001536130 A JP2001536130 A JP 2001536130A JP 2001536130 A JP2001536130 A JP 2001536130A JP 2003513911 A JP2003513911 A JP 2003513911A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
cisplatin
encapsulated
cells
cancer
peptide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
JP2001536130A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2003513911A5 (ja
Inventor
ブリカス，テニ
Original Assignee
ブリカス，テニ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ブリカス，テニ filed Critical ブリカス，テニ
Publication of JP2003513911A publication Critical patent/JP2003513911A/ja
Publication of JP2003513911A5 publication Critical patent/JP2003513911A5/ja
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/475—Quinolines; Isoquinolines having an indole ring, e.g. yohimbine, reserpine, strychnine, vinblastine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/14—Peptides containing saccharide radicals; Derivatives thereof, e.g. bleomycin, phleomycin, muramylpeptides or vancomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6907—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a microemulsion, nanoemulsion or micelle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
    • A61K9/1278—Post-loading, e.g. by ion or pH gradient

Abstract

(57)【要約】 それらの内部及び外部膜ニ層間に異なった脂質組成を有するリポソーム中にシスプラチン及び他の正に荷電された薬剤を封入するための方法が開示される。リポソームは、動物及びヒトへの静脈内注入の後、一次腫瘍及びそれらの転移に達することができる。封入されたシスプラチンは、種々のヒト固形癌、例えば乳癌及び前立腺癌（但し、それらだけには限定されない）の根絶において高い治療効力を有する。封入されたシスプラチンと封入されたドキソルビシン又は他の抗腫瘍薬剤との組合せは、治療価値のあるものであることが主張されている。封入されたシスプラチンと多くのリポソーム中に封入された抗癌遺伝子、例えばp53、IL−２、IL−12、アンジオスタチン及びオンコスタチンとの組合せ、又は封入されたシスプラチンとHSV−tk及び封入されたガンシクロルビルとの組合せもまた、癌根絶において治療価値のあるものであることが主張されている。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 発明の分野： 本発明は、リポソーム封入された薬剤及び供給システム、特にリポソーム封入
されたシスプラチンに関する。薬剤は、静脈内注入の後、種々のヒト悪性疾患に
おける癌細胞を殺害するのに有用である。
【０００２】 発明の背景： 本出願においては、種々の出版物、特許及び公開された特許明細書は、著者及
び日付により又は特許番号により言及される。出版物についての十分な引用文献
が、この開示又は請求の範囲の直前に提供される。それらの出版物、特許及び公
開された特許明細書の開示は、本発明が関与する技術の状態により十分に説明す
るために、引用により本明細書に組み込まれる。
【０００３】 シス−ジアミンジクロロ白金（II）シス−[Pt (NH3)2Cl2]2+、すなわち省略さ
れたシスプラチン又はシス−DDPは、精巣、卵巣癌の処理のための、及び頭及び
首の癌に対する最も広く使用されている抗腫瘍薬物の１つである。90％以上の精
巣癌がシスプラチンにより治癒される。最も重度の副作用は、腎毒性、骨髄毒性
及び胃腸刺激である（Oliver and Mead, 1993）。両眼神経障害が、160mg/m2の
シスプラチン及び640mg/m2のカルボプラチンにより処理された卵巣癌により影響
された患者において観察された（Caraceniなど., 1997）。シス−又はカルボプ
ラスチン耐性の上皮卵巣癌（最終治療の６日目以内での再発）を有する61人の患
者のグループにおける経口ヘキサメチルメラミン処理は、14％の客観的応答割合
を示した（Vergote など., 1992）。
【０００４】 カチオン性コレステロール誘導体は、治療剤を供給するために使用されて来た
。例えば、それらはホスファチジルエタノールアミンと共に混合され、そして音
波処理され、DNAと複合体化され、そしてエンドソーム区画からのサントゾル中
への侵入を仲介することができる小さな単層小胞が形成される。リポソーム配合
物の１つ、すなわちDC−Cholリポソームは、メラノーマに対する遺伝子療法臨床
試験に使用されて来た。ヒト免疫欠損ウィルス−１トランス活性タンパク質遺伝
子は、HIV-1の制御下でレポーター遺伝子と共に同時供給された。シスプラチン
療法に失敗した患者は、カチオン性リポソームにより高くトランスフェクトでき
た。 それらの結果は、シスプラチンによる一連の治療プロトコール及び悪性疾患の
ための遺伝子療法を示唆した（Farhoodなど., 1994）。
【０００５】 キャリヤーリガンドとして２−アミノ−メチルピロリジン誘導体から調製され
た種々の白金複合体が、マウスにおける皮下及び/又は腹腔内注入を用いてColon
26癌及びP388白血病に対するそれらの抗腫瘍活性について試験された。２−アミ
ノメチルピロリジンは、そのアミン誘導体において最も効果的なキャリヤーリガ
ンドであることがわかっている（Morikawa など、1990）。 最適な方法が、エマルジョン−加熱安定化方法によりシスプラチンアルブミン
微小球（Cis−DDP−AMS）（平均サイズは148ミクロンであった）を調製するため
の直交試験により確立された。白金の分布及び脱離半減時間は、それぞれ、Cis
−DDP−AMS対Cis−DDPによる肝動脈化学塞栓形成の後、3.36倍及び1.23倍、延長
された（Zhangなど., 1995）。
【０００６】 改良された治療性質を有する白金（II）−基材の化合物についての研究は、ウ
ラシル及びウリジンに結合される新規種類の水溶性第三世代シス−ジアミンジク
ロロ白金（II）複合体を企画し、そして合成を促進した。しかしながら、合成さ
れた化合物のどれも、処理された3種の細胞系に対していずれの有意な細胞毒性
活性も示さなかった（Kimなど., 1998）。
【０００７】 最適開発された生物還元剤４−［３−（２−ニトロイミダゾリル）−プロピル
アミノ］−７−クロロキノリン塩酸塩（NLCQ−１）は、骨髄毒性における同時増
強を伴なわないで、化学治療剤メルファラン（L−PAM）、シスプラチン（シスDD
P）及びシクロホスファミド（CPM）の抗腫瘍効果を増強することが見出された。
増強は、厳密には、予定通りであり、そしてNLCQ−１がシスDDPの45分前に与え
る場合、最適な効果（付加的効果よりも1.5〜２対数倍の殺害効果）が観察され
た。それらの結果は、臨床学的研究に基づけば、化学感作物質としてのHLCQ−１
の分類を支持する（Papudopoulouなど., 1998）。
【０００８】 シスプラチンによる第１線級の治療をこれまでに受けている、非−小細胞肺癌
（NSCLC）を有する患者における第２線級処理としてのシスプラチンとパシルタ
キセルとの組合せは、14人の患者において部分的な応答を達成した（40％）（St
athopoulasなど.,1997）。 Abraなど. (1999年８月31日に発行されたアメリカ特許第5,945,122号)は、ほ
とんど中性の脂質に閉じ込められた荷電されていないシスプラチンを含むリポソ
ーム組成物を記載する。しかしながら、シスプラチン閉じ込めについての原特許
においては。
【０００９】 従って、従来の報告は、シスプラチン及び他の治療薬物のリポソーム仲介され
た供給が可能であることを示しているが、治療効率はシスプラチンの低い水溶解
性及び低い安定性により制限されて来た。治療効率はまた、薬物の高い毒性によ
っても制限される。従って、治療的に使用される場合、シスプラチン含有薬物の
加工、及びシスプラチンの高い毒性に関与する困難性を低める必要が存在する。
本発明は、この必要性を満たし、そして同様に関連する利点も提供する。
【００１０】 発明の開示： １つの観点においては、本発明は、それらの内部膜と外部膜との二層間に異な
った脂質組成を有し、そして動物及びヒトへの静脈内注入の後、一次腫瘍及びそ
れらの転移部分に達することができるリポソーム中にシスプラチン及び他の正に
荷電された薬物を封入するための方法を提供する。１つの観点においては、前記
方法は、正に荷電され、そして抗腫瘍活性を付与された活性形のシスプラスチン
であるその水性形に加水分解によりシスプラチンを転換するために、シスプラチ
ンとDPPG（ジパルミトイルホスファチジルグリセロール）又は他の脂質分子との
間での複合体形成を包含する。
【００１１】 この段階でフソゲン性質を有する膜融合ペプチド及び他の分子が、複合体の細
胞膜を通しての侵入を改良するために添加され得る。水性シスプラチン−DPPGミ
セルは、小胞形成脂質、例えば予備製造されたリポソーム又は脂質と共に混合し
、続いて膜を通して透析し、そして押出し、シスプラチンを非常に高い効率で閉
じ込め、そして封入することによってリポソームに転換される。ドキソルビジン
又は他の正に荷電された化合物が、それらの配合においてシスプラチンに代わっ
て置換され得る。
【００１２】 封入されたシスプラチンは、種々のヒト固形腫瘍、例えば乳癌及び前立腺癌（
但し、それらだけは限定されない）を根絶することにおいて高い治療効率を有す
る。封入されたシスプラチンと封入されたドキソルビシン又は他の抗腫瘍薬物と
の組み合わせが、治療価値のあるものとして請求されている。また、封入された
シスプラチンと多くの抗癌剤、例えばp53、IL−１、IL−12、アンジオスタチン
及びリポソーム中に封入されたオンコスタチンとの組合せ、及び封入されたシス
プラチンとHSV−tk及び封入されたガンシクロビルとの組合せも、癌根絶におい
て治療的に価値あるものとして請求されている。
【００１３】 本発明を実施するための態様： 本発明の実施は、特にことわらない限り、免疫学、分子生物学、微生物学、細
胞生物学及び組換えDNAの従来の技法を用いるであろう。それらの方法は、次の
出版物に記載されている。例えば、Sambrookなど. Molecular Cloning: A Labor
atory Manual, 2nd edition (1989); Current Protocols in Molecular Biology
(F. M. Ausubel など. Eds., (1987); The series Methods in Enzymology (Ac
ademic Press, Inc.); “PCR: A Practical Approavh” (M. MacPherson など.,
IRL Press at Oxford University Press (1991)); PCR2: A Practical Approac
h (M. J. MacPherson, B.D. Hames and G. R. Taylor eds. (1995)); Antibodie
s, A Laboratory Manual (Harlow and Lane, eds. (1988)); 及びAnimal Cell C
ulture (R. I. freshney, ed. (1987))を参照のこと。
【００１４】 本明細書及び請求の範囲において使用される場合、単数形“不定冠詞”及び“
定冠詞”は、特にことわらない限り、複数の参照も包含する。例えば、用語“細
胞”とは、多くの細胞、例えばその混合物も包含する。 用語“含んで成る”とは、組成物及び方法が列挙される要素を包含するが、し
かし他の排除するものではない。組成物及び方法を定義するために使用される場
合、“〜から実質的に成る”とは、いずれかの必須の重要な他の要素の排除を意
味するであろう。従って、要素から実質的に成る組成物は。方法及び医薬的に許
容できるキャリヤー、例えばリン酸緩衝溶液、保存剤及び同様のもの。 “〜か
らなる”とは、他の成分中の微量元素の排除及び本発明の組成物の投与のための
実質的な方法段階を意味するのであろう。個々のそれらの推移用語により定義さ
れる態様は、本発明の範囲内である。
【００１５】 用語“ポリヌクレオチド”及び“核酸分子”とは、いずれかの長さのヌクレオ
チドのポリマー形を言及するために交換可能的に使用される。ポリヌクレオチド
は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び/又はそれらの類似体を
含むことができる。ヌクレオチドは、いずれかの三次元構造を有し、そしていず
れかの知られているか又は未知の機能を行うことができる。用語“ポリヌクレオ
チド”とは、例えば一本鎖、ニ本鎖及び三本鎖ヘリックス分子、遺伝子又は遺伝
子フラグメント、エキソン、イントロン、mRNA, tRNA, リボザイム、cDNA, 組換
えポリヌクレオチド、枝分かれポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、いず
れかの配列の単離されたDNA、いずれかの配列の単離されたRNA、核酸プローブ及
びプライマーを包含する。核酸分子はまた、修飾された核酸分子を包含すること
ができる。
【００１６】 “遺伝子”とは、転写され、そして翻訳された後、特定のポリペプチド又はタ
ンパク質をコードすることができる少なくとも１つの読み取り枠を含むポリヌク
レオチドを言及する。 “組成物”とは、活性剤、及び他の不活性（例えば、検出剤又はラベル、又は
医薬的に許容できるキャリヤー）又は活性化合物又は組成物、例えばアジュバン
トの組合せを意味する。 “医薬組成物”とは、インビトロ、インビボ又はエクスビボでの診断又は治療
的使用のために組成物を適切にする不活性又は活性キャリヤーと活性剤との組合
せを包含する。
【００１７】 本明細書において使用される場合、用語“医薬的に許容できるキャリヤー”と
は、標準の医薬キャリヤー、例えばリン酸緩衝溶液、水及びエマルジョン、例え
ば油/水又は水/油エマルジョン、及び種々のタイプの湿潤剤のいずれかを包含す
る。組成物はまた、安定剤及び保存剤も含むことができる。キャリヤー、安定剤
及びアジュバントの例に関しては、Martin, Remington’s. sti., 15th Ed. (Ma
ck Pull. Co., Easton (1975)) を参照のこと。
【００１８】 “有効量”とは、有益な又は所望の結果をもたらすのに十分な量である。有効
量は、１又は複数回の投与、適用又は用量で投与され得る。哺乳類は、ネズミ、
サル、ヒト、家畜、スポーツ用動物、及びペットを包含するが、但しそれらだけ
には限定されない。 “対照”とは、比較目的のための実験に使用される他の対象又はサンプルであ
る。対照は、“正”又は“負”であり得る。例えば、実験の目的が特定型の癌と
遺伝子の変更された発現レベルとの相互関係を決定するためである場合、正の対
照（そのような変更を担持し、そしてその疾病の症候特徴を示す対象又は対象か
らのサンプル）、及び負の対照（変更された発現及びその疾病の臨床学的症候を
欠いている対象又は対象からのサンプル）を使用することが一般的に好ましい。
【００１９】 “遺伝子供給ビークル”とは、宿主細胞中に挿入されたポリヌクレオチドを担
持することができるいずれかの分子として定義される。遺伝子供給ビークルの例
は、リポソーム、カチオン性リポソーム、ウィルス、例えばバキュロウィルス、
アデノ関連ウィルス、及びレトロウィルス、バクテリオファージ、コスミド、プ
ラスミド、菌類ベクター、及び種々の真核及び原核宿主における発現のために記
載された、及び遺伝子療法及び単純なタンパク質発現のために使用され得る、当
業界において典型的に使用される他の組換えビークルである。
【００２０】 “ウィルスベクター”とは、インビトロ、エクスビボ又はインビボのいずれか
で、宿主細胞中に供給されるべきポリヌクレオチドを含んで成る、組換え的に生
成されたウィルス又はウィルス粒子として定義される。ウィルスベクターの例は
、レトロウィルスベクター、アデノウィルスベクター、アデノ関連ウィルスベク
ター及び同様のものを包含する。遺伝子移行レトロウィルスベクターにより仲介
される観点においては、ベクター構造体は、レトロウィルスゲノム又はその一部
を含んで成るポリヌクレオチド、及び挿入されたポリヌクレオチドを言及する。
【００２１】 本明細書において使用される場合、“レトロウィルス仲介された遺伝子移行”
又は“レトロウィルストランスダクション”は、同じ意味を担持し、そして遺伝
子又は核酸配列が細胞に侵入し、そしてそのゲノムを宿主細胞ゲノム中に組み込
むウィルスにより宿主細胞中に安定して移行される工程を言及する。ウィルスは
、感染のその通常の機構を通して宿主細胞中に侵入し、又はそれが異なった宿主
細胞表面受容体又は細胞に侵入するリガンドに結合するよう修飾され得る。本明
細書において使用される場合、レトロウィルスベクターとは、ウィルス又はウィ
ルス様侵入機構を通して細胞中に外因性核酸を導入することができるウィルス粒
子を言及する。
【００２２】 レトロウィルスは、RNAの形でそれらの遺伝子情報を担持するが、しかしなが
ら、ウィルスが細胞を感染すると、そのRNAは、感染された細胞のゲノムDNA中に
組み込まれるDNA形に逆転写される。その組み込まれたDNA形は、プロウィルスと
呼ばれる。アデノウィル（Ad）又はアデノ関連ウィルス（AAV）おいては、ベク
ター構造体は、ウィルスゲノム又はその一部、及び挿入されるべきポリヌクレオ
チドを含んで成るポリヌクレオチドを言及する。
【００２３】 デノウィルス（Ads）は、50以上の血清型を包含する、比較的十分に特徴づけ
られたウィルスの均質グループである（例えば、WO95/27071号を参照のこと）。
Adsは、容易に増殖し、そして宿主細胞ゲノム中への組み込みを必要としない。
組換えAd−由来のベクター、特に、野生型ウィルスの組換え及び生成のための可
能性を低くするそれらのベクターがまた構成されている。（WO95/00655号；WO95
/11984号を参照のこと）。野生型AAVは、宿主細胞ゲノム中に組み込む高い感染
性及び特異性を有する。（Hermonl and Muzyczka (1984) PNAS USA 81: 6466-64
70; Lebkowski など., (1988) Mol. Cell. Biol. 8: 3988-3996 を参照のこと）
。
【００２４】 プロモーター、及びポリヌクレオチドが操作可能的に結合され得るクローニン
グ部位の両者を含むベクターは、当業界において良く知られている。そのような
ベクターは、インビトロ又はインビボでRNAを転写することができ、そして例え
ばStratagene (La Jolla, CA) 及びPromega Biotech (Madison, WI) から市販さ
れている。発現及び/又はインビトロ転写を最適化するためには、特別の可能性
ある不適切な他の翻訳開始コドン、又は転写又は翻訳のレベルで、発現を妨害し
、又は低めることができる他の配列を排除するためにクローンの5’及び/又は3
’未翻訳部分を除去し、付加し、又は変更することが必要である。他方では、コ
ンセンサンリボソーム結合部位が、発現を増強するために開始コドンの5’側に
すぐに挿入され得る。
【００２５】 遺伝子供給ビークルはまた、いくつかの非ウィルスベクター、例えばDNA/リポ
ソーム複合体及び標的化されたウィルスタンパク質DNA複合体を包含する。また
標的抗体又はそのフラグメントを含んで成るリポソームも本発明の方法に使用さ
れ得る。細胞への供給を増強するためには、本発明の核酸又はタンパク質は、細
胞表面抗原、例えばTCR、CD3又はCD4を結合する抗体又はその結合フラグメント
に結合され得る。
【００２６】 ポリヌクレオチドは、当業界において良く知られている方法を用いて、ベクタ
ーゲノム中に挿入される。例えば、挿入体及びベクター分子は、お互い対合し、
そしてリガーゼにより連結され得る個々の分子上に相補的末端を創造するために
制限酵素と、適切な条件下で接触せしめられ得る。他方では、合成核酸リンカー
が、制限されたポリヌクレオチドの末端に連結され得る。それらの合成リンカー
は、ベクターDNAにおける特定の制限部位に対応する核酸配列を含む。
【００２７】 さらに、終結コドン及び適切な制限部位を含むオリゴヌクレオチドは、選択マ
ーカー遺伝子、例えば哺乳類細胞における安定した又は過渡的なトランスフェク
タントの選択のためのネオマイシン遺伝子；高レベルの転写のためのヒトCMVの
即時初期遺伝子からのエンハンサー/プロモーター配列；mRNA安定性のためのSV4
6からの転写終結及びRNAプロセッシングシグナル；複製のSV40ポリオーマ起点及
び適切なエピソーム複製のためのColEI；種々の多クローニング部位；挿入され
たポリヌクレオチドの3’側の安定化要素；及びセンス及びアンチセンスRNAのイ
ンビトロ転写のためのT7及びSP6 RNAプロモーターであり得る。他の手段は当業
界において良く知られており、そして入手できる。
【００２８】 “宿主細胞”とは、ベクター、又は外因性ポリヌクレオチド、ポリペプチド及
び/又はタンパク質の組み込みのための受容体であり得るいずれかの個々の細胞
又は細胞培養物を意味する。それはまた、単一の細胞の子孫も包含し、そしてそ
の子孫は、天然、突然又は意図的な突然変異誘発のために、元の親細胞と完全に
同一である必要はない（形態学的又はゲノム又は全体のDNA補体において）。細
胞は、原核又は真核細胞であり得、そして細菌細胞、酵母細胞、植物細胞、昆虫
細胞、動物細胞及び哺乳類細胞、例えばネズミ、ラット、サル又はヒトを包含す
るが、但しそれらだけには限定されない。
【００２９】 本明細書において使用される場合、用語“新形成細胞”、“新形成”、“腫瘍
”、“腫瘍細胞”、“癌”及び“癌細胞”（交換可能的に使用される）とは、比
較的自主増殖を示す細胞を言及し、その結果、それらは細胞増殖の制御の有意な
損失（すなわち、規則解除された細胞分裂）により特徴づけられる異常増殖表現
を示す。新形成細胞は、悪性又は良性であり得る。 “抑制する”腫瘍増殖とは、対照細胞に比較される場合、縮小される増殖状態
を示す。腫瘍細胞増殖は、当業界において知られているいずれかの手段、例えば
腫瘍サイズの測定、腫瘍細胞が増殖するかどうかの3H−チミジン組み込みアッセ
イを用いての決定、又は腫瘍細胞の計数により評価され得るが、但しそれらだけ
には限定されない。“抑制する”腫瘍細胞増殖とは、次の状態のいずれか又はす
べてを意味する：遅延及び停止する腫瘍増殖、並びに腫瘍縮小。
【００３０】 発明の態様： ミセル、リポソーム及びそれらを得るための方法： 体積単位当たりシスプラチンの含有率を増強し、その毒性を低め、静脈内注入
の後、一次腫瘍及びそれらの転移を標的化することができ、そして腫瘍の縮小及
びSCIDマウス担持のヒト腫瘍の完全な治療を示す、シスプラチンを脂質中に閉じ
込めるための新規方法が提供される。
【００３１】 シスプラチンは、そのニ価形で遷移重金属白金の1つの原子に結合されるシス
位置に２個の塩素原子及び２個のアミノ基を含む重金属複合体である。それはニ
官能価のアルキル化剤及びDNA合成を阻害するDNAインターカレーターである。１
つの形においては、シスプラチンは、300.1の分子量及び水における1mg/mlの制
限された溶解性の黄色の粉末である。それは、しばしば、アドリアマイシン、ビ
ンプラスチン、ブレオマイシン、プレドニゾン、ビンクリスチン、タキソール及
び他の抗腫瘍薬物、並びに放射線療法と組合して、癌患者、特に精巣癌、リンパ
腫、子宮内膜癌、膀胱癌、卵巣癌、頭及び首の鱗状細胞癌、乳癌及び多くの他の
悪性腫を有する患者の処理のために広く使用される。本発明者は、その脂質閉じ
込めの形でのその溶解性の上昇のために、患者の処理のために必要とされる合計
のシスプラチン体積の低下を主張する。
【００３２】 静脈内注入のために使用される体積は通常、24時間の注入の場合、多く投与さ
れる（成人患者当たり約180ml、又は約20〜120mg/m2）。それは、25〜80分の急
速相、続く58〜73時間の遅い二次相における血漿から明らかであり；それは血漿
タンパク質により結合され、そして腎臓により排泄される（処理された患者にお
ける重度の腎毒性を説明する）。用量関連の腎毒性は、強い水和化、マンニトー
ル、フロセミド及び他の薬剤により一部克服され得る。シスプラチンにより付与
される他の毒性は、耳毒性、吐気及び嘔吐、貧血及び軽い骨髄抑制を包含する（
The Merck Manual of Diagnosis and Therapy）。本発明は、従来技術の方法及
び組成物の限界を克服する。
【００３３】 従って、1つの観点においては、本発明は、シスプラチン混合物を形成するた
めに、シスプラチン及びホスファチジルグリセロール脂質誘導体（PGL誘導体）
を、１：１〜１：2.1の範囲で組合すことによって、シスプラチンミセルを生成
するための方法を提供する。他の態様においては、シスプラチン：PGL誘導体の
範囲は、１：1.2；１：1.4；１：1.5；１：1.6；１：1.8；１：1.9；１：2.0又
は１：2.1の範囲である。次に、混合物は、シスプラチンミセルを形成するため
に、有効量の少なくとも20％の有機溶媒、例えばエタノール溶液と組合される。
【００３４】 ミセルを形成する能力を有するいずれかの脂質誘導体、及び負に荷電された実
効ヘッド基を有する。これは、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（DP
PG）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール及びジカプリルホスファチジ
ルグリセロールを包含するが、但しそれらだけには限定されない。1つの観点に
おいては、10〜28個の炭素原子を有し、そして不飽和脂肪測鎖を有するホスファ
チジル誘導体は、本発明の範囲内である。正（１：１）、中性（１：２）又はわ
ずかに負（１：2.1）の実効電荷を粒子に付与するモル比での変動を有する負に
荷電されたホスファチジルグリセロール脂質によるシスプラチンの複合体化は、
投与の後、身体における異なった組織の標的化を可能にするであろう。
【００３５】 しかしながら、負に荷電されたPGLによるシスプラチンの複合体化は、シスプ
ラチンの溶解性を増強することが示されており、従って、効果的な抗腫瘍治療の
ために必要とされる薬剤の体積を減じる。さらに、シスプラチン及び負に荷電さ
れたPGLの複合体化は、製造工程の間、薬剤損失を最少にする非常に高い封入効
率を進行せしめる。それらの複合体は、安定しており、沈殿物を形成せず、そし
て４℃での少なくとも４ヶ月間の貯蔵の後、治療効能を保持する。
【００３６】 本明細書において使用される場合、用語“シスプラチン”とは、類似体を包含
する。例としては、次のものを包含する：カルボプラチン、オルマプラチン、オ
キサプラチン、２−アミノメチルピロリジン（1，1−シクロブタンジカルボキシ
レート）白金、ロバプラチン、１−シクロブタン−ジカルボキシレート（２）−
（２−メチル−１，４−ブタンジアミン−N，N’）白金、ゼニプラチン、エンロ
プラチン、254−Sネダプラチン及びJM−216（ビス−アセテート−アミン−ジク
ロロヘキシルアミン−白金（IV））。
【００３７】 必ずしも明白に言及されないが、他の正に荷電された薬剤、例えば抗腫瘍薬物
ドキソルビシン（但し、これだけには限定されない）がシスプラチンに変わって
置換され得ることは理解されるべきである。他方では、中性である他の型の薬剤
は、正に荷電された基による誘導体化による正に荷電された薬剤へのそれらの転
換に基づいて使用され得る。中性又は負に荷電された抗癌又は他のタイプの薬剤
の正に荷電された分子への修飾は、有機合成において十分に確立されている多く
の方法により達成され得る。これは、例えば薬剤におけるヒドロキシル基をアミ
ノ基又はトリメチルアミノ基により置換し、従って化合物に正の電荷を導入する
ことによって達成され得る。アミノ基による環ヒドロキシル基の置換は、1998年
11月17日に発行されたアメリカ特許第5,837,868号（Wangなど.）に論じられてい
る。
【００３８】 上記方法は、その段階が上記に示される順序で行われることを必要としない。
例えば、前記方法は、溶液を形成するために、シスプラチンと有効量の少なくと
も20％の有機溶媒溶液とを組合すことによって実施され得る。上記溶液はシスプ
ラチンミセルを形成する。上記のように、シスプラチン：PGL誘導体の範囲は、
１：1.2；１：1.4；１：1.5：１：1.6；１：1.8；１：1.9：１：2.0；又は１：2
.1の範囲である。
【００３９】 いずれかの有機溶媒又はエタノールの配合物、又は二層システムを形成しない
いずれか他のアルコール、又は20％アルコールに相溶性である他の有機溶媒（す
なわち、クロロホルム）が、本明細書に記載される方法において有用である。例
えば、アルコール溶液は、少なくとも30％，35％，40％，45％〜90％（それらの
間でのいずれかの増大を包含する）のいずれかであり得る。好ましくは、アルコ
ール溶液は、DPPGに関して、30％エタノールであり、そして他の脂質に関しては
、最適な％は異なることができる。
【００４０】 １つの態様においては、負の実効電荷を有するペプチドによるDPPG分子の部分
置換は、標的物の細胞膜を通過できるフソゲン性質を有するシスプラチン複合体
を付与する。フソゲンペプチドはまた、それらの良好な暴露のためにPEGの遊離
端で共有結合され得る。最終シスプラチン/DPPG複合体での水性シスプラチンの
正の電荷を置換する少量のカチオン性脂質はまた、フソゲン性質を複合体に付与
し；カチオン性脂質（例えば、DDAP：ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロ
ミド；DMRIE：N−［１−（２，３−ジミリスチルオキシ）プロピル］−N, N−ジ
メチル−N−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウムブロミド；DMTAP：１，２−
ジミリストイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン；DOGS：ジオクタデシル
アミドグリシルスペルミン；DOTAP：N−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）
プロピル）−N，N，N−トリメチルアンモニウムクロリド；DPTAP：１，２−ジパ
ルミトイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン；DSTAP：１，２−ジステロ
イル−３−トリメチルアンモニウムプロパン）により置換される正の荷電の％は
、カチオン脂質の毒性のために低い。いくつかの配合物は、ミセルにおいて多量
のフソゲン両親媒性脂質DOPEを含む。
【００４１】 さらなる観点においては、シスプラチンミセルは、例えば薬剤供給への使用の
ためには、小胞形成脂質中に封入される。 脂質封入されたシスプラチンは、種々のヒト固形腫瘍、例えば乳癌、前立腺癌
、多形グリア芽腫、非小肺細胞癌、膵臓癌、頭及び首の鱗状細胞癌及びT−細胞
リンパ腫（但し、それらだでには限定されない）の根絶に高い治療効能を有する
。従って、もう１つの観点においては、本発明は、それらの内部及び外部膜二層
間に異なった脂質組成を有するリポソーム中に封入されたシスプラチン又は他方
では、他の正に荷電された抗腫瘍薬剤を用いての種々のヒト悪性疾患の処理方法
を提供する。
【００４２】 リポソーム封入された薬剤は、動物及びヒトへの静脈内注入の後、一次腫瘍及
びそれらの転移部分に達することができる。抗腫瘍薬剤は、シスプラチンのみよ
りも高い治療効果を有する。また、封入されたシスプラチンと多くの抗癌遺伝子
、例えばp53、IL−２，IL−12，アンジオスタチン及び類似するタイプのリポソ
ーム中に封入されるオンコスタチンとの組合せ、及び封入されたシスプラチンと
HSV−tk及び封入されたガンシクロビルとの組合せは、癌根絶において高い治療
効能を有する。
【００４３】 さらなる観点においては、本発明は、封入されたシスプラチンと次の遺伝子と
の組み合わせを提供する： （ｉ）CMV、β−アクチン又は他のプロモーターの制御下での野生型（wt）p53
cDNA発現ベクター、及びp53遺伝子の長期発現を維持することができる複製のヒ
ト起点；ウィルス複数イニシエータータンパク質、例えばT抗原を必要とする複
製の起点は、p53タンパク質がT抗原と強く相互作用するために、p53遺伝子の移
行のためには適切でない。
【００４４】 （ii）PAX5 cDNA発現ベクター、すなわちp53遺伝子のイントロン１内の短い（
10個のヌクレオチド）調節領域と相互作用する既知のp53遺伝子（wt及び変異体p
53遺伝子の両者）の唯一のサプレッサー。p53遺伝子療法における主要欠点は、
腫瘍においては、過剰発現され、そしてwt p53タンパク質と四重体化できるp53
の内因性突然変異誘発された形によるwt p53タンパク質の不活性化であり；前記
内因性p53遺伝子は、Pax5, すなわちp53遺伝子の可能性ある転写リプレッサーの
発現により抑制されるであろう。Wt p53 cDNAベクターは、イントロン１及び結
果的には、抑制性PAX5結合領域を欠いている。内因性変異体p53遺伝子発現を抑
制し、そして癌細胞から変異体p53を排除し、アポプトミス及び腫瘍抑制の誘発
を増強することが重要である。
【００４５】 （iii）単純ヘルペスウィルスチミジンキナーゼ（HSV−tk）遺伝子。単純ヘル
ペスウィルスチミジンキナーゼ（HSV−tk）自殺遺伝子はまた、動物モデル及び
ヒト患者のガンシクロビル（GCV）処理の後、DNA合成の中断を引き起こすp53及
びPax5遺伝子の組合せに包含され；これは、癌細胞における鎖の分裂を高め、そ
して鎖分裂に結合し、そしてDNA部位に損傷を与えることが知られているp53の腫
瘍サプレッサー機能を増強することが予測される。もう１つの態様においては、
ガンシクロビルが組合され、そしてリポソーム中に封入される。
【００４６】 遺伝子療法は、患者の体細胞中への治療遺伝子の導入を意図する生物医学的研
究の新時代である（Boulilas, 1998a; Martin and Boulikas, 1998により再考さ
れる）。２種の腫瘍障害が、体細胞遺伝子移行の好結果をもたらす適用を妨げる
：（１）インビボ注入から約３〜７日後での治療遺伝子。
【００４７】 第１の問題は、（ｉ）遺伝子を担持する供給ビークルの標的細胞表面に達する
ことの無能性から（リポソーム−DNA複合体の大部分が血液循環から急速に排除
される）：（ii）細胞膜を通過することの困難性から、及び（iii）細胞による
インターナリゼーションの後、エンドゾームからのDNAの開放の困難性から；（i
v）核中への無能な取り組みから生じる。他は、数日間、循環に存続し、そして
腫瘍において濃縮する秘密リポソーム（Martin and Boulikas, 1998a）を使用し
て来た。しかしながら、従来の秘密リポソームは、癌細胞により摂取されない。
リポソームインターナリゼーション（フソゲンペプチド）を増強することが企画
される方法が、本明細書に開示される。
【００４８】 第２の問題は、子孫細胞間での細胞増殖の間、それらの希釈を導くヌクレアー
ゼ分解及び自律的に複製することの失敗による、又は宿主細胞の染色体中への組
み込みの後、外来性DNAの不活性化による核におけるプラスミドの損失に起因す
る。しかしながら、延長された期間、プラスミドの染色体外複製を維持すること
ができるヒト配列の使用（Teni Boulikasによる“Cloning mthod for tropping
human origins of replication”と称するアメリカ特許第5,894,060号を参照の
こと）は、この制限を克服するであろう。
【００４９】 封入されたシスプラチン（Lipoplatin（商標）と称する）又は封入されたドキ
ソルビシン、及びそれらの薬剤と遺伝子、例えばp53、PAX5及びHSV−tk/封入さ
れたガンシクロビル、IL−２，IL−12，GM−CSF，アンジオスタチン、IL−４，I
L−７，IFN−γ，TNF−α，RB，BRCA１，E１A，封入された５−フルオロシトシ
ンと組合してのシトシンデアミナーゼ、bcl−２, MDR−１，p21，p16, bax, bcl
−xs, E2F, IGF−１ VEGF，TGF−β遺伝子及び同様のものとの組合せの供給の
後、動物モデル及びヒトにおける腫瘍の緩和及び乳癌、前立腺癌及び他の癌の腫
瘍質量体積の低下がまた、本明細書に請求されている。
【００５０】 従って、本発明は、本発明の方法により得られる封入された薬剤又は他の中間
体と細胞とを接触することを含んで成る、シスプラチン又は他の治療剤を細胞に
供給するための方法をまた提供する。本発明の方法により得られる封入された薬
剤の有効量を対象に投与することを含んで成る、対象における腫瘍の増殖を阻害
するための方法がまた、本発明により提供される。前記方法は、インビトロ、エ
クスビボ又はインビボにおいて実施され得る。
【００５１】 従って、本発明はまた、封入された薬剤及びポリヌクレオチドを用いての組合
せ治療も提供する。本明細書において使用される場合、ポリヌクレオチドは、遺
伝子類を包含するが、但しそれらだけには限定されない。組合せ治療は、２種の
機構が異なっており、そして相乗性を達成できるので、いずれか１つの処理より
も癌の根絶においてより効果的である。
【００５２】 例えば、損傷されたDNA領域及びDNAの遊離端に結合するp53タンパク質の性質
は知られており、そして重度に損傷された細胞におけるアポプトシスの機構を開
始する性質も知られている（Boulikas, 1998a により再考された）。癌細胞にお
けるDNAの遊離端は、移行されたwt p53の発現によりそれらの細胞におけるアポ
プトシス経路の誘発を増強するシスプラチンにより、損傷の後に生成されること
が予測される（多くの腫瘍は、突然変異誘発されたp53を有し、そしてこの経路
を効果的に誘発することはできない）。治療用ポリヌクレオチドはまた、ミセル
中に導入する前、遺伝子移行ベクター中に挿入され得る。
【００５３】 野生型p53遺伝子の移行は、多くの研究において、インビボ及び細胞培養にお
いて腫瘍細胞増殖を延長するために都合良く使用されて来た。アデノウィルス/p
53ベクターを用いての腫瘍内注入は、最近の臨床試験において肺腫瘍に対して（
Rothなど., 1996）及び動物モデルにおいて前立腺腫に対して（Boulikas，1998a
により再考される）、効果的であることが示されている。しかしながら、腫瘍内
注入方法は、癌の後期段階にしばしば関連する転移に対して適用できない。封入
されたシスプラチンによるp53遺伝子の全身性供給及び身体のいずれかの領域に
おける腫瘍の標的化は、癌治癒のための効果的な処理である。
【００５４】 本発明者は、動物モデル及び臨床試験において試験される患者における種々の
ヒト癌への、封入された５−フルオロシトシン、bcl−２，MDR−１, p21, p16,
bax, bcl-xs, E2F, IGF−1 VEGF, TGF−β，アンジオスタチン及び他の遺伝子と
組合して、wt p53, pax5, HSV−tk，GM−CSF, IL−12，IL−２，IL−４，IL−７
，IFN−γ，TMF−α，RB，BRCA１，E１A，シトシンデアミニアーゼ，並びに封入
されたシスプラスチン及び他の薬剤のリポゾーム供給を用いて、好都合な体細胞
遺伝子移行のための４種の重要障害を緩和するか又は部分的に克服するために手
段を提供する。
【００５５】 それらは、（ｉ）それらの毒性を低めるリポソーム中への薬剤及び遺伝子小球
の濃縮及び封入化；（ii）ポリエチレングリコール（PEG）、ヒアルロン酸又は
他のポリマーによる複合体の表面の被覆による固形腫瘍及び転移の標的化；（ii
i）フソゲンペプチド又は低い％のカチオン性脂質のために、癌細胞による薬剤
及びプラスミドの摂取の増強；及び（iv）治療遺伝子のエピソーム複製又は長期
発現及び高レベルの発現を維持することができる複製のヒト起点（ORI）を用い
ての遺伝子の維持された発現を包含する。
【００５６】 さらなる態様においては、ポリヌクレオチド又は遺伝子はさらに、数日よりも
むしろ数ヶ月間、遺伝子の発現を維持する調節DNA配列を含んで成る。この強い
治療効果は、抗癌遺伝子の高レベルの発現のためであり；弱い調節DNAの制御下
に配置されるその同じ遺伝子は無効果であろう。
【００５７】 癌処理のためのいくつかの実験方法が、p53遺伝子供給を用いて企画されてお
り；本発明の新規性は、ヒト前立腺悪性腫瘍、特に進行した前立腺癌の半分以上
で過剰発現される内因性変異体p53形がPAX5発現ベクターを用いて制御されるこ
とにある。p53の突然変異誘導された形は主にそれらのDNA結合ドメインにおける
アミノ酸置換を有するが、しかしwt p53形とまだ四量体化することができ；p53
はテトラマーとして作用し、そしてヒト癌細胞における高レベルの内因性変異体
p53の存在は、供給されるwt p53の腫瘍サプレッサー機能を妨げる。
【００５８】 PAX5は、成長の間、身体構造を決定するホモドメインタンパク質であり；PAX5
は哺乳類成長の初期段階で、及び造血幹細胞における分化の間、成人において発
現され；p53遺伝子発現は成長する胚における細胞の早い増殖を可能にする成長
の初期段階でPAX5サプレッサータンパク質により排除される。PAX5は、成人の後
期段階でスイッチオフし、p53の発現を可能にし、そしてその腫瘍抑制機能の付
与及び特に造血細胞系におけるアポプトシスの調節を可能にする。
【００５９】 多くの供給システムが体細胞遺伝子移行に使用され、それらの個々は利点及び
欠点に関連している。組換えアデノウィルスは効果的に複製せず；組換えネズミ
レトロウィルスはランダムに組み込み、そしてクロマチン取り囲み不活性化され
；組換えAAVはランダムに組み込み、そして臨床学的有用性のために高い力価を
達成することはできない。すべては、パッケージング制限のために、3.5〜7.5kb
の外来性DNAの最大能力を有する。裸のDNAは、全身性供給の後、急速に分解され
る（半減期５分）。カチオン性リポソームは、毒性であり、心博以上には循環に
おいて生存せず、そして主に肺、肝臓及び心臓の内皮を標的化する。
【００６０】 “秘密（stealth）”リポソームのみが、腫瘍部位（また、肝臓及び脾臓）に
おいて濃縮することができ、そして血液循環において延長された期間、生存する
ことが証明されている（例えば、非秘密中性リポソームに関して数分、及びカチ
オン性リポソームに関して数秒に比較して、１日）。しかしながら、秘密リポソ
ームは、それらが、溶菌の後、数日間にわたってそれらの荷重を開放する細胞外
空間に残存する腫瘍細胞により容易に摂取されず（Martin and Boulikas, 1998
により再考されている）；しかしながら、下記式の本発明の観点は、フソゲンペ
プチドにより、又はそれらの内部二層で部分的カチオン性の脂質組成物又はDOPE
を提供することにより秘密リポソームを変性する。
【００６１】 秘密リポソームにより動物における固形腫瘍において薬剤及び遺伝子小球の濃
縮及び摂取を達成すると、第２段階は、本発明の薬剤及び遺伝子標的化アプロー
チの効力である。M.D. Anderson Cancer Center でのヒト臨床試験は、非細胞肺
癌を有し、そしてシスプラチンを組合して腫瘍の部位でのAd5/CMV/p53組換えア
デノウィルスの局部注入を用いて、それらの腫瘍にp53突然変異を有することが
示されている患者における野生型p53遺伝子の移行を使用する。
【００６２】 この臨床試験の第１の結果は、p53の腫瘍内注入の後、有望である（Rothなど.
, 1996; Boulikas, 1998a により再考されている）。しかしながら、局部注入
は、進行した段階の悪性腫にしばしば関連する転移には適用できず；特に、前立
腺癌は、特に細胞により分泌されるインスリン−様成長因子I（IGF−I）による
前立腺腫瘍増殖における刺激に関する機構により骨への転移を付与する。従って
、全身性注入の後、腫瘍細胞塊状物中に濃縮することができる、本明細書におい
て提案される供給システムは、たぶん一次腫瘍のみならず、またその転移を処理
する。
【００６３】 提案されたシスプラチンリポソームは、本発明者の供給システムの性質のため
に、主に腫瘍を標的化するであろう。組換え治療における遺伝子は、複製DNA中
に組み込むHSV−tk及びガンシクロビルの使用のために、分裂細胞を主に標的化
し、そして秘密リポソームの使用のために、血管形成腫瘍を主に標的化する。従
って、秘密リポソームにより到達される肝臓及び脾臓細胞は、殺害されないであ
ろう。
【００６４】 さらなる態様においては、本明細書に記載されるリポソーム封入された薬剤は
、有効量のフソゲンペプチドをさらに含んで成る。フソゲンペプチドは、長いヘ
リックス軸にそって疎水性グラジエンドにより特徴づけられるヘリックス両親媒
性ペプチドの種類に属する。この疎水性グラジエントは、膜におけるペプチドの
偏向された挿入を引き起こし、従って、脂質コアを不安定化し、そしてそれによ
り、膜融合を増強する（Decoutなど., 1999）。
【００６５】 赤血球凝集素（HA）は、インフルエンザウィルスのホモトリマー表面糖タンパ
ク質である。感染においては、それは低pHで、ウィルス膜とエンドソーム膜との
間での膜融合を誘発する。個々のモノマーは、受容体−結合HA１ドメイン及び膜
−相互作用HA２ドメインから成る。HA２ドメインのNH2−末端領域（アミノ酸１
〜127）、いわゆる“融合ペプチド”は、標的膜中に挿入し、そしてウィルス膜
とエンドソーム膜との間での融合の誘発において決定的な役割を演じる。システ
インによる領域５〜14における８個のアミノ酸の置換及び回転ラベリング電子常
磁性共鳴に基づけば、それは、ホスフェート基から15オングストローム（Å）の
最大の深さを有する膜の水平面上に存在する（Macoskoなど., 1997）。
【００６６】 インフルエンザウィルス赤血球凝集素HA−２からのフソゲンペプチドの使用は
、細胞によるトランスフェリン−ポリリシン−DNA複合体摂取の効率を非常に増
強し；この場合、ペプチドはポリリシンに結合され、そして複合体はトランスフ
ェリン−介在性エンドサイトーシスにより供給された（Boulikas, 1998aにより
再考される）。このペプチドは、配列：GLFEAIAGFIENGWEGMIDGGGYC（配列番号１
）を有し、そして酸性pHで高い卵黄ホスファチジルコリンにより調製されたリポ
ソームからの蛍光色素カルセインの開放を誘発することができ；このペプチドは
また、培養におけるCEM−SSリンパ球を用いて、0.1〜１mMの濃度で、アンチセン
スオリゴヌクレオチドの抗−HIV能力を10培まで高めることができた。このペプ
チドは、エンドソーム膜を不安定化し、そして分解するエンドソームのわずかに
より酸性の環境下でコンホメーションを変える（Boulikas, 1998aにより再考さ
れる）。
【００６７】 膜における負に荷電された脂質の存在は、いくつかのペプチドのフソゲン性質
の明示のために重要であり；ところが、フェルチリン、すなわち精子−卵融合に
関与する精子表面タンパク質の推定上の融合ドメインを表すペプチドのフソゲン
作用は、負に荷電された脂質の存在に依存する。しかしながら、HIV2ペプチドの
その作用は依存しなかった（Martin and Ruysschaert, 1997）。
【００６８】 例えば、インフルエンザウィルス赤血球凝集素HAのフソゲンペプチド上の２種
のドメインを分析するために、HAの細胞質末端及び/又はトランスメンブランド
メインがセンダイウィルスのフソゲン糖タンパク質Fのその対応するドメインに
より置換されたHA−キメラが企画された。細胞質末端がヒトニューロフィブロミ
ンタイプI（残基1441〜1518）又はc−Raf−１（残基51〜131）のペプチドにより
置換されたHAの構造体が製造された。
【００６９】 この構造体は、ワクシニアウィルス−T7ポリメラーゼ過渡的発現システムを用
いることによって、CV−１細胞において発現された。CV−１細胞と、親又はキメ
ラHAタンパク質により仲介される結合されたヒト赤血球（RBC）との間の膜融合
は、pHが低められた後、タンパク質−発現CV−１細胞の細胞質中への予備荷動さ
れRBCからの水性蛍光団カルセインの流れが生じたことを示した。これは、膜融
合が脂質二層の両葉状器官を包含し、そして水性融合孔の形式を導くことを示し
た（Schroth−Diezなど.,1998）。
【００７０】 注目すべき発現は、HIVのTATタンパク質が細胞膜を通過することができ（Gree
n and Loewenstein, 1988）、そしてTATの36個のアミノ酸ドメインが、異種タン
パク質に化学的に架橋される場合、細胞をトランスダクトする能力を付与したこ
とであった。（配列番号２）は、核局在化シグナルである（Boulikas，1998bを
参照のこと）。
【００７１】 HIVのもう1つのタンパク質、すなわち糖タンパク質gp41は、フソゲンペプチド
を含む。gp41エクトドメインの膜近位領域に由来する線状ペプチドは、抗−HIV
剤としての可能性ある用途を有し、そしてヘリックスコンホメーションを採用す
ることによって感染性を阻害する（Judiceなど., 1997）。HIV−１gp41の23個の
アミノ酸残基N−末端ペプチドは、負に荷電された大きな単層小胞を不安定化す
る能力を有する。カチオンの不在下で、主要構造は孔形成α−ヘリックスであり
、そしてCa2+の存在下で、そのコンホメーションは、卓越して延長されたフソゲ
ンβ−型構造に転換した。HIV（ala）（R22（A置換）を担持する）の融合活性は
70％低められ、ところが第２置換（V2（E））が包含される場合、フソゲン性は
完全に破壊され、このことは、それがα−ヘリックスではなく、しかしコレステ
ロール含有の電気的に中性の膜を活性的に不安定化するHIV−１融合ペプチドに
より採用される延長された構造であることを立証する（Pereira など., 1997）
。
【００７２】 プリオンタンパク質（PrP）は、ニューロン及びグリア細胞の表面で通常見出
される未知の機能の糖タンパク質である。それは、疾病、例えばウシ海綿状脳障
害、及びヒトにおけるCreutzfeldt−Jakob病に包含され、ここでPrPは、変更さ
れた形（PrPScと称する）に転換される。コンピューターモデリング計算によれ
ば、PrPの120〜133及び118〜135ドメインは、脂質二層中に斜行手段で挿入し、
そして封入されたカルセインの漏れを誘発するためにリボソームと相互反応でき
る傾斜された脂質結合ペプチドである（Pillotなど., 1997b）。
【００７３】 アルツハイマーアミロイドペプチドのC−末梢フラグメント（アミノ酸29〜40
及び29〜42）は、インビトロでリポソームの融合を誘発するウィルスタンパク質
の融合ペプチドの性質に関連する性質を有する。それらの性質は、細胞膜とアミ
ロイドペプヂドとの直接的な相互作用を仲介し、そしてアミロイドペプチドの細
胞毒性の一部を説明することができた。アルツハイマー病の病理学とアポリポタ
ンパク質E(apoE) 多彩現象との間の疫学的及び生化学的連鎖の観点においては、
アミロイドペプチドの３種の共通するapoEイソ形とC−末端フラグメントとの間
の可能性ある相互作用の試験は、apoE2及びapoE3のみが（apoE4ではない）、ア
ミロイドペプチドフソゲン及び凝集性質の可能性あるインヒビターであることを
示した。
【００７４】 アミロイド凝集体の形成に対するapoEの保護効果は、安定したapoE/アミロイ
ドペプチド複合体の形成により介在されると思われた（Pillotなど., 1997a；Li
nsなど., 1999）。11個のアミノ酸残基のペプチドは、そのペプチドがリポソー
ム膜に結合される場合、強く促進され；ペプチドの融合活性はpH及び膜融合に無
関係であるように思われ、そして標的膜は、リシン結合されたホスファチジルエ
タノールアミン（PE−K）を組み込むことによって提供される正の電荷を必要と
した。結合されたペプチドはPE−Kとの非特異的静電相互作用を通して小胞の凝
集を引き起こすが、その遊離ペプチドはPE−K小胞の凝集を誘発しなかった（Pec
heurなど., 1997）。
【００７５】 多くの研究は、細胞又はリポソームの膜における脂質二層への挿入の後、ペプ
チドのα−ヘリックス二次構造の安定化がペプチドの膜融合性質を担当すること
を示唆し；Zn2+が、α−ヘリックス構造を安定化するので、ペプチドのフソゲン
活性を増強する。例えば、ヒスタチン−５、すなわち認識される亜鉛結合モチー
フのC−末端の機能的ドメインに位置する唾液抗微生物ペプチドのHEXXHドメイン
は、らせん形コンホメーション形で存在する（Martinなど., 1999; Melinoなど.
, 1999; Curtain など., 1999）。
【００７６】 融合ペプチドは、ペプチド基材の遺伝子供給システムを創造するために、DNA
プラスミドにより配合されて来た。プラスミドを40〜200nmの超微粒子に縮合す
るために使用されるYKAKnWKペプチドと、エンドソームからのプラスミドの開放
を促進するよう企画されたpH−感受性溶解剤であるGLFEALLELLESLWELLLEA（配列
番号３）両親媒性ペプチドとの組合せが、β−ガラクトシダーゼレポーター遺伝
子を含む発現システムを増強した（Duguidなど., 1998）。
【００７７】 DOPE（ジオレイルホスファチジルエタノールアミン）はフソゲン脂質であり；
N−メトキシ−スクシニル−Ala−Ala−Pro−Val−DOPEのエラスターゼ分解は、
封入された蛍光プローブ、すなわちカルセインを細胞質中に供給するために、こ
の誘導体をDOPE（全体的に正の電荷）に転換した（Pakなど., 1999）。β−エン
ドフィンmRNAの領域に対して相補的な30個の塩基のオリゴデオキシヌクレオチド
配列は、それがフソゲン性質を付与されたジパルミトイル−DL−α−ホスファチ
ジル−L−セリンを含む小さな単層小胞（50nm）内に封入された後、細胞培養物
におけるβ−エンドフィン生成の濃度−依存性阻害を誘発した（Frestaなど., (
1998）。 本発明の方法において有用な追加のフソゲンペプチドが下記表１〜４に記載さ
れる。
【００７８】
【表１】
【００７９】
【表２】
【００８０】
【表３】
【００８１】
【表４】
【００８２】 ミセルが形成された後、それらは、薬剤含有リポソームを形成するために、有
効量の小胞形成脂質と共に混合される。本発明のための有用な脂質は、予備製造
された中性リポソーム、粉末での脂質、PEG−DSPE又は水素化された大豆ホスフ
ァチジルコリン（HSPC）を包含する。小胞−形成脂質は、外層の脂質組成物を提
供する最終複合体の特定の程度の流動性又は剛性を達成するよう選択される。好
ましい脂質は、14〜22個の範囲の炭化水素鎖長を有し、そして１又は複数の二重
C＝C結合により飽和されたホスファチジル、例えばホスファチジルコリン（PC）
又はホスファチジルエタノールアミン（PE）である。
【００８３】 本発明に使用するための好ましい脂質は、コレステロール10〜60％、水素化さ
れた大豆ホスファチジルコリン（HSPC）40〜90％及び誘導体化された小胞−形成
脂質PEG−DSPE１〜７％である。リポソームは、親水性ポリマーPEGにより被覆さ
れる外側の脂質ニ層表面を提供する。PEG鎖は、1,000〜5,000ドルトンの分子量
を有する。他の親水性ポリマーは、ヒアルロン酸、ポリビニルピロリドン、DSPE
、ヒドロキシエチルセルロース及びポリアスパルトアミドを包含する。PEG−DSP
C及びPEG−HSPCは、Syngenaから市販されている。 小胞形成脂質との混合の前、エタノール又は他の有機溶媒は、当業界において
知られているいずれかの方法、例えば透析膜を通してのミセルの透析により除去
され得る。
【００８４】 診断及び治療方法： 本発明者は、ヒト癌、例えば乳癌、前立腺癌、結腸癌、非小肺癌、膵臓癌、精
巣癌、卵巣癌、頸部癌、頭及び首の鱗状細胞癌を有する対象、例えば哺乳類、例
えばマウス、ラット、サル及びヒト患者の治療を提供する。１つの観点において
は、リポソーム中に封入されたシスプラチンの静脈内注入、及び封入されたシス
プラチンと封入されたドキソルビシン、フルオロデオキシウリジン、ブレオマイ
シン、アドリアマイシン、ビンブラスチン、プレドニソン、ビンクリスチン、タ
キソール又は放射線療法、封入されたオリゴヌクレオチド、抗癌性質を付与され
たリボザイム及び多くの抗癌遺伝子、例えばp53/Pax5/HSV−tk遺伝子との組合せ
が提供される。１つのアプローチは、次の２種の主要部分から成る：（ｉ）癌細
胞を標的化する能力、及び（ii）癌細胞を殺害する本発明者のアプローチの有効
性。
【００８５】 従って、本発明は、本発明の方法により得られる封入された薬剤と細胞とを接
触することを含んで成る、細胞にシスプラチン又は他の治療剤を供給するための
方法をまた提供する。本発明の方法により得られる封入された有効量の薬剤を、
対象に投与することを含んで成る、対象における腫瘍の増殖を阻害するための方
法がまた、本発明により提供される。脂質/ミセル配合の組成に依存して、有効
量の封入された薬剤の静脈内投与により対象における固形腫瘍及び転移を標的化
するための方法、本発明の方法により得られる有効量のシスプラチンミセル及び
封入された薬剤を投与することを含んで成る、対象における腫瘍の細胞膜を侵入
するための方法がまた、提供され、ここで前記ミセルは遊離フソゲンペプチド又
はフソゲンペプチド−脂質接合体を含む。
【００８６】 前記方法は、インビトロ、エクスビボ又はインビボで実施され得る。 本発明の方法のインビトロ実施は、腫瘍生検の除去、又は腫瘍細胞を含む細胞
サンプルの培養を包含する。最終リポソーム複合体、又はシスプラチン封入の間
に生じるいずれかの中間体生成物（図１Aに示されるミセル）が、薬剤の組み込
みのために適切な条件下で細胞培養物と接触せしめられる。インビトロ方法は、
個々の患者のための最良の薬剤療法を決定するためのスクリーンとして有用であ
る。細胞成長又は増殖の阻害は、細胞又は腫瘍がこの療法により適切に処理され
ることを示す。個々の治療のための有効量の薬剤は、処理される腫瘍及び処理さ
れる対象により変化する。有効量は、当業者により実験的に決定され得る。
【００８７】 動物に投与される場合、前記方法は、個々の腫瘍型のための薬剤又は治療の効
能をさらに確かめるために有用である。適切な動物モデルの例として、SCIDマウ
ス又はヌードマウス（Balb/c NCR nu/nu 雌、Simonsen, Gilroy, CA）のグルー
プが、本明細書に定義されるように、約105〜約109個の癌又は標的細胞により皮
下接種され得る。腫瘍が確立されると、リポソームが投与される。
【００８８】 本明細書において使用される場合、“投与、供給される、又は投与される”と
は、究極的には、腫瘍塊状物に薬剤/リポソーム複合体を供給するいずれかの方
法を包含する。例としては、次のものを包含するが、但しそれらだけには限定さ
れない：局部適用、静脈内投与、非経口投与、又は腫瘍の周囲への皮下注射。腫
瘍サイズの低下を決定するための腫瘍測定は、週２度、カルパスを用いて、２次
元的に行われる。
【００８９】 インビボ投与に関しては、治療組成物は、非経口、すなわち静脈内、腹腔内、
皮下、鞘内、脊髄内、筋肉内、動脈内、門脈内又は腫瘍内投与される。より好ま
しくは、医薬組成物は、ボーラス注射により静脈内又は腫瘍内投与される。他の
方法においては、医薬製剤は、組織へのその製剤の直接的な適用により標的組織
と接触せしめられ得る。適用は、“局部”、“開放”又は“閉鎖”方法により行
われ得る。“局部”とは、環境、例えば皮膚、鼻咽頭、外耳道、眼、等に暴露さ
れる組織への医薬製剤の直接的な適用を意味する。“開放”とは、患者の皮膚の
切開を包含し、そして医薬製剤が適用される基礎組織の直接的な可視化を包含す
る。
【００９０】 これは、一般的に、手術方法、例えば肺に接近するための開胸、腹部内臓に接
近するための腹部開腹、又は標的組織への他の直接的手術アプローチにより達成
される。“閉鎖”方法とは、内部標的組織は直接的に可視化されないが、しかし
皮膚における小さな傷を通しての装置の挿入を通して接近される侵襲性方法であ
る。例えば、製剤は、針洗浄により腹膜に投与され得る。同様に、医薬製剤は、
腰椎穿刺、続いて、脊髄麻酔又は脊髄のメトラザミド画像化のために通常行われ
る患者の適切な位置決定の間、注入により髄膜又は脊髄に投与され得る。他方で
は、製剤は、内視鏡装置を通して投与され得る。
【００９１】 インビボ投与は、処理の間、１回の用量で、連続的又は断続的にもたらされ得
る。投与の最も効果的な手段及び用量を決定するための方法は、当業者に良く知
られており、そして治療のために使用される組成物、治療の目的、処理される標
的細胞、及び処理される対象により変化するであろう。１回又は複数回の投与が
、処置する医者により選択される用量レベル及びパターンにより行われ得る。剤
を投与するための適切な用量配合及び方法は、当業者により実験的に決定され得
る。
【００９２】 本発明の剤及び組成物は、医薬の製造に、及び従来の方法に従っての投与によ
るヒト及び他の動物の処理のために使用され得る。 理想的には、薬剤/脂質配合物は、疾病の部位で活性化合物のピーク濃度を達
成するよう投与されるべきである。これは、例えば、薬剤/脂質配合物の静脈内
注入により達成され得る。薬剤の所望する血液レベルが、疾病組織内に治療量の
活性成分を提供するために連続注入により維持され得る。効果的組合せの使用は
、個々の治療化合物又は薬剤が単独で使用される場合に必要とされるよりも低い
合計用量の個々の成分薬剤を必要とする治療的組合せを提供することが企画され
、それにより悪影響を低める。
【００９３】 薬剤/脂質配合物は単独で投与されることが可能であるが、少なくとも1つの活
性成分及び任意には他の治療剤を含んで成る医薬配合物としてそれを提供するこ
とが好ましい。個々のキャリヤーは、配合物中の他の成分と適合でき、そして患
者に対して無害であることにおいて、“許容できる”べきである。 本明細書に記載されるように、固形腫瘍への抗癌薬剤及び遺伝子の供給のため
のビークルの第３世代の企画は、存在する技法に対する次の５種の主要改良点の
結果であった：
【００９４】 １）立体的に安定化されたリポソーム中への抗腫瘍薬剤の封入は、多種のそれ
らの毒性を減じた。これは、化学療法を受ける癌患者の悪夢を終りにすることが
予測される。現在使用下のほとんどの抗腫瘍薬剤は、重度の副作用、例えば髪の
損失、嘔吐、体重の低下を有し、そして腎臓、脳、肝臓及びすべての他の生存組
織に梗塞形成及び損傷を引き起こす。本明細書に記載される抗腫瘍薬剤は、脂質
ニ層の内腔内に隠され、ほとんどの組織には見えず、そしてそれらの腫瘍標的中
に濃縮するが、しかし身体中のあらゆる組織においては濃縮しない。固形腫瘍に
よるそれらの摂取に基づいて、それらは正常な細胞を傷つけないで、癌細胞に特
定の細胞毒性効果を付与する。
【００９５】 ２）身体じゅうの固形腫瘍及びそれらの転移の標的化。95％以上の癌患者は、
一次腫瘍からではなく、転移に付随する合併症に屈服する。本発明の遺伝子及び
薬剤供給システムは、一次腫瘍のみならず、また腫瘍のサイズに関係なく、動物
及び身体におけるあらゆる転移に達する遺伝子及び薬剤小球の静脈内投与の後、
免疫系を回避するよう企画されている。それは、本発明の薬剤及び遺伝子担持の
ビークルの長い循環時間、及び形成（増殖する腫瘍における新脈管形成）のその
初期段階でのその不完全性及び漏れのために、及び増殖する固形腫瘍と正常な身
体組織との間での流体静力学的圧力の差異のために、腫瘍の血管内皮を通しての
それらの管外遊出に基づかれている。本発明のリポソームは、効果的な封入及び
腫瘍標的化を可能にする、それらの内部及び外部脂質層の間に異なった組成を有
する。
【００９６】 ３）癌細胞によるリポソーム小球の摂取。リポソーム小球は、細胞膜との融合
を促進することができる。他で開発された類似する“秘密”小球は、癌細胞の膜
バリヤーを通過することができない。 ４）抗癌薬剤、オリゴヌクレオチド及び遺伝子についてのほぼ100％のリポソ
ーム封入効率の達成が、主要な進歩である。これは、薬剤及び遺伝子の最少の損
失及び費用効率のより使用を意味する。それはまた、抗癌剤小球の製造において
、より単純な段階を付与した。数日よりもむしろ数ヶ月間、抗癌剤小球に遺伝子
の発現を維持する配列。これは、癌患者のより少ない処理及び低い苦痛を付与す
る。それはまた、高いレベルの抗癌遺伝子の発現のために、強い治療効果を付与
し；弱い調節のDNAの制御下に配置された同じ遺伝子は無効化でろう。 次の例は、例示的であって、本発明を限定するものではない。
【００９７】 実施例 ミセル及び脂質−封入されたシスプラチンの調製： 封入のための１つの処理方法は、（A）約５mg/mlの最終シスプラチン濃度を達
成するために、少なくとも30％のエタノール、0.1MのトリスHCl（pH7.5）におい
て、シスプラチン（粉末又は他の形での）とDPPG（ジパルミトイルホスファチジ
ルグリセロール）又は他の負に荷電された脂質分子とを、１：１〜１：２のモル
比で混合する段階を包含する。シスプラチンとDPPGとの間のモル比の変動はまた
、異なった組織を標的化する治療価値のものである。
【００９８】 （B）50℃での加熱段階。段階A及びB間、黄色のシスプラチン粉末の沈殿物を
付与する傾向がある初期の粉末懸濁液を、ゲル（コロイド）形に転換し；段階A
及びBの間、正に荷電され、そして抗腫瘍活性を付与されたシスプラチンの活性
形である水性形（クロライド原子の加水分解及びプラスチンに結合される水分子
によるそれらの置換による）へのシスプラチンの転換が存在し；水性シスプラチ
ンを、30％エタノールにおいてミセル中に、負に荷電された脂質により同時に複
合体化する。このシスプラチン−DPPG静電複合体は、腫瘍根絶においては、遊離
シスプラチンよりも、すでに改良された性質を有する。
【００９９】 （C）その標的に達した後、腫瘍細胞膜を通過することにおける複合体（及び
段階Dの後の最終配合物の；下記参照のこと）の性質を、複合体にこの性質を付
与するペプチド及び他の分子の添加により改良する。（D）シスプラチン−DPPG
ミセル複合体を、予備製造されたリポソームの直接的な添加、続いて、塩溶液に
対する透析及びそれらを100〜160nmの直径に小さくするための膜を通しての押し
出しにより、シスプラチン−DPPG単層を封入するリポソーム又は他のタイプの複
合体に転換する（図１の下部）。それは、本発明の最終シスプラチン配合物の外
面の組成を決定する添加されたリポソームの脂質組成である。 中性又は負に荷電された化合物への正に荷電されたグループの添加は、同様に
、リポソーム中へのそれらの封入を可能にする。
【０１００】 治療用途： 90日−開放エストロゲンペレットを、SCID雌マウスに皮下移植した。0.1mlのP
BS中7.5百万のMCF−７（ATCCから入手できるヒト乳癌）を、乳脂肪パッドで、マ
ウスに皮下注射した。腫瘍の確立の後、0.1mlのシスプラチンリボソームを、試
験静脈でマウスに静脈内注射した。結果は図２〜４に示される。 本発明は詳細且つ特定の態様で記載されて来たが、種々の変更及び修飾が本発
明の範囲内で行われ得ることは、当業者に明らかであろう。
【０１０１】 Ban M. Hettich D, N (1994) Nephrotoxicity mechanism of cis-platinum (I
I) diamine dichloride in mice. Toxicol Lett, 71 (2): 161-8 Bellon SF, Coleman JH and Lippard SJ (1991) DNA Unwinding Produced by
Site-Specific Intrastrand Cross-Links of the Antitumor Drug cis-Diammine
dichlopoplatinum (II). Biochemistry 30, 8026-8035. Bongartz J-P, Aubertin A-M, Milhaud PG, and Lebleu B (1994) Improved b
iological activity of antisense oligonucleotides conjugated to a fusogen
ic peptide. Nucleic Acids Res 22, 4681-4688. Boulikas T (1992) Evolutionary consequences of preferential damage and
repair of chromatin domains. J. Mol. 35, 156-180.
【０１０２】 Boulikas, T (1996a) The nonuniform repair of active and inactiv chroma
tin domains. Int J Oncol 8, 65-75. Boulikas T (1996b) A. unified model explaining the preferential repair
of active over inactive genes and of the transcribed over the nontransc
ribed strand: a leading role for transcription factors and matrix anchor
age. Int J Oncol 8, 77-84. Boulikas T (1996c) DNA Iesion-recognizing proteins and the p53 connect
ion. Anticancer Res 16, 225-242. Boulikas T (1998a) Status of gene of gene therapy in 1997: molecular m
echanisms, disease targets, and clinical applications. Gene Ther Mol Bio
l 1, 1-172.
【０１０３】 Boulikas T (1998b) Nucleocytoplasmic trafficking: implications for the
nuclear import of plasmid DNA during gene therapy. Gene ther Mol Biol,
713-740. Brown SJ, Kellett PJ and Lippard SJ (1993) Ixrl, a Yeast Protein That
Binds to Platinated DNA and Confers Sensitivity to Cisplatin. Science 26
1, 603-605. Brutn SL, Pil PM, Essigrnan JM, Housman DE, and Lippard SJ (1992) Isol
ation and characterization of human cDNA clones encoding a high mobility
group box protein that recognizes structural distortions to DNA caused
by binding of the anticancer agent cisplatin. Proc Natl Acad Sci USA 89,
2307-2311.
【０１０４】 Buchanan RL and Gralla JD (1990) Cisplatin Resistance and Mechanism in
a Viral Test System: SV40 Isolates That Resist Inhibition by the Antitu
mor Drug Have Lost Regulatory DNA. Biochemistry 29, 3436-3442. Neuritis during systemic cisplatin and carboplatin chemotherapy. Acta Ne
urol Scand, 96 (4): 260-1. Chao CC-K, Huang S-L and Lin-Chao S (1991) Ca2+-mediated inhibition of
a nuclear protein that recognizes UV-damaged DNA and is constitutively
overexpressed in resistant human cells: DNA-binding assay. Nucleic Acids
Res. Nucleic Acids Res. 19,6413-6418. Chu G and Chang E (1988) Xeroderma Pigmentosum Group E Cells Lack a Nu
clear Factor That Binds to Damaged DNA, Science 242, 564-567. Chu G and Chang E (1990) Cisplatin-resistant cells express increased l
evels of a factor that recognizes damaged DNA. Proc Natl Acad Sci USA 87
,3324-3327.
【０１０５】 Clugston CK, Mclaughlin K, Kenny MK and Brown R (1992) Binding of Huma
n Singles-Stranded DNA Binding Protein to DNA Damaged by the Anticancer
Drug cis-Diamminedichloroplatinum (II). Cancer Res 52,6375-6379. Creuzenet C, Durand C, Haertle T (1997) Interaction of alpha s2-and be
ta-casein signal peptides with DMPC and DMPG liposomes. Peptides, 18 (4)
: 463-72. Cutain, C, Separovic F, Nielsen K, Craink D, Zhong Y, Kirkpatrick A (1
999) The interactions of the N-terminal fosogenic peptide of HIV-I gp41
with neutral phospholipids. Eur Biophys J, 28 (5): 4270-36. Decout A, Labeur C, Vanloo B, Goethals M, Vandekerckhove J, Brasseur R
, Rosseneu M (1999) Contribution of the hydrophobicity grandient to the
secondary structure and activity of fusogenic peptides. Mol Membr Biol,
16 (3): 237-46.
【０１０６】 Donahue BA, Augot M, Bellon SF, Treiber DK, Toney JH, Lippard SJ and E
ssigmann JM (1990) Characterization of a DNA Damage-Recogition Protein f
rom Mammalian Cells That Binds Specifically to Intrastrand d(GPG) and d(
ApG) DNA Adducts of the Anticancer Drug Cisplatin. Biochemistry 29, 5872
-5880. Dugnid JG, Li C, Shi m, Logan MJ, Alila H, Rolland A, Tomlinson E, Spa
rrow JT, Smith LC (1998) A physicochemical approach for predicting the e
ffectiveness of peptidebased gene delivery systems for use in plasmid-ba
sed gene therapy. Biophys J, 74 (6): 2802-14. Eapen S, Green M, Ismail IM (1985) Kinetic studies on the diaqua form
of cis-platin and various nucleobases, J Inorg Biochem, 24 (3): 232-7. Eliopoulos AG, Kerr DJ, Herod J, Hodgkins L, Krajewski S, Reed JC, You
ng LS (1995a) The control of apoptosis and drug resistance in ovarian ca
ncer: influence of p53 and Bcl-2. Oncogene, 11 (7): 1217-28. The c-myc but not the cH-ras promoter by platinum compounds. Biochem P
harmacol, 50 (1): 33-8.
【０１０７】 Farhood H, Gao X, Son K, Yang YY, Lazo JS, Huang L, Barsoum J, Bottega
R, Epand RM (1994) Cationic liposomes for direct genc transfer in thera
py of cancer and other diseases. Ann N Y Acad Sci, 716: 23-34; discussio
n 34-5. Fresta M, Chillemi R, Spampinato S, Sciuto S, Puglisi G (1998) Liposom
al delivery of a 30-mer antisense oligodeoxynucleotide to inhibit proopi
omelanocortin expression. J Pharm. Sci, 87 (5): 616-25. Ghosh JK, Shai Y (1999) Direct Evidence that the N-Terminal Heptad Rep
eat of Sendai Virus Fusion Protein Participates in Membrane Fusin. J mol
Biol, 292 (3): 531-546.
【０１０８】 Green M and Loewenstein PM (1988) Autonomous functional domains of che
mically synthesized human immunodeficiency virus tat transactivator prot
ein. Cell 55, 1179-1188, Gupta D, Kothekar V (1997) 500 picosecond molecular dynamics simulatio
n of amphiphilic polypeptide Ac (LKKL) 4 NHEt with 1,2 di-mysristoyl-sn-
glycero-3-phosphorylcholine (DMPC) molecules. Indian J Biochem Biophys,
34 (6): 501-11 Holler E, bauer R, Bernges F (1992) Monofunctional DNA-platinum (II) a
dducts block frequentl DNA polymerases. Nucleic Acids Res 1992 May 11;20
(9): 2307-12.
【０１０９】 Hughes EN, Engelsberg BN and Billings PC (1992) Purification of Nuclea
r Proteins That Bind to Cisplatin-damaged DNA. J. Biol. Chem. 267,12520-
12527. Judice JK, Tom JY, Huang W, Wrin T, Vennari J, Petropoulos CJ, McDowel
l RS (1997) Inhibition of HIV type 1 infectivity by constrained alpha-he
lical peptides: implications for the viral fusion mechanism. Proc Natl A
cad Sci U S A, 94 (25): 13426-30. Kim JC, Lee MH, Choi SK (1998) Synthesis and antitumor evaluation of c
is-(1,2-diaminoethane) dichlopoplatinum (II) complexes linked to 5-and 6
-methyleneuracil and-uridine analogues, Arch Pharm Res, 21 (4): 465-9. Kono K, Nishii H, Takagishi T (1993) Fusion activity of an amphiphilic
polypeptide having acidic amino acid residues: generation of fusion act
ivity by alpha-helix formation and charge neutralization. Biochem biophy
s Acta, 1164 (1): 81-90.
【０１１０】 Lambert G, Decout A, Vanloo B, Rouy D, Duverger N, Kalopissis A, Vande
kerckhove J, Chambaz J, Brasseur R, Rosseneu M (1998) The C-terminal hel
ix of human apolipoprotein all promotes the fusion of unilamellar liposo
mes and displaces apolipoprotein AI from high-density lipoproteins. Eur
J Biochem, 253(1): 328-38. With different alpha-helical contents on liposome-fusion. Biochim Biop
hys Acta, 1103(1): 157-62. Lelkes PI, Lazarovici P (1988) Pardaxin induces aggregation but not fu
sion of phosphatidylserine vesicies. FEBS Lett, 230(1-2): 131-6.
【０１１１】 Lins L, Thomas-Sounarmon A, Pillot T, Vandekerchkhove J, Rosseneu M, B
rasseur R (1999) Molecular determinants of the interaction between the C
-terminal domain of Alzheimer’s beta-amyloid peptide and apolipoprotein
E alpha-helices. J Neurochem, 73(2): 758-69. Macosko JC, Kim CH, Shin YK (1997) The membrane topology of the fusion
peptide region of influenza hemagglutinin determined by spin-labeling E
PR, J Mol Biol, 267 (5): 1139-48. Macreadie IG, Lowe MG, Curtain CC, Hewish D, Azad AA (1997) Cytotoxici
ty resulting from addition of HIV-1 Nef N-terminal peptides to yeast and
bacterial cells. Biochem Biophys Res Commun, 232 (3): 707-11. Martin F and Boulikas T (1998) The challenge of liposomes in gene ther
apy. Gene Ther Mol Biol 1, 173-214.
【０１１２】 Martin I, Pecheur EI, Ruysschaert JM, Hoekstra D (1999) Membrane fusio
n induced by a short fusogenic peptide is assessed by its insertion and
orientation into target bilayers. Biochemistry, 38(29): 9337-47. Martin I, Ruysschaert JM (1997) Comparison of lipid vesicle fusion ind
uced by the putative fusion peptide of fertilin (a protein active in spe
rm-egg fusion) and the NH2-terminal domain of the HIV2 gp41. FEBS Lett,
405(3):351-5. Massari S, Colonna R (1986) Gramicidin induced aggregation and size in
crease of phosphatidylcholine vesicles. Chem Phys Lipids, 39(3): 203-20. McLaughlin K, Coren G, Masters J, Brown R (1993) Binding activities of
cis-platin-damage-recognition proteins in human tumour cell lines. Int
J Cancer, 53(4): 662-6.
【０１１３】 Melino S, Rufini S, Sette M, Morero R, Grottes A, Paci M, Petruzzelli
R (1999) Zn(2+) ions selectively induce antimicrobial salivary peptide h
istatin-5 to fuse negatively charged vesicles. Identification and charac
terization of a zinc-binding motif present in the functional domain. Bio
chemistry, 38(30): 9626-33. Midoux P, monsigny M (1999) Efficient gene transfer by histidylated po
lylysine/pDNA complexes. Bioconjug Chem, 10(3): 406-11. (1990) Syntesis of platinum complexes of 2-aminomethylpyrrolidine deriva
tives for use as carrer ligands and their antitumor activities. Chem Pha
rm Bull (Tokyo). 38(4): 930-5.
【０１１４】 Morikawa K, Honda M, Endoh K, Matsumoto T, Akamatsu K, Mitsui H, Kozum
i M (1990) Synthesis of platinum complexes of 2-aminomethypyrrolidine de
rivatives for use as carrier ligands and their antitumor activities. Che
m Pharm Bull (Tokyo), 38(4): 930-5. Murata M, Kagiwada S, Hishida R, Ishiguro R, Ohnishi S, Takahashi S (1
991) Modification of the N-terminus of membrane fusion- active peptides
blocks the fusion activity. Biochem Biophys Res Commun, 179(2): 1050-5. Mymryk JS, Zaniewski E and Archer TK (1995) Cisplatin inhibits chromat
in remodeling, transcription factor binding, and transcription fromo the
mouse mammary tumor virus promoter in vivo. Proc natl Acad Sci USA 92,2
076-2080.
【０１１５】 Niidome T, Kimura M, Chiba T, Ohmori N, Mihara H, Aoyagi H (1997) Memb
rane interaction of syntetic peptides related to he putative fusogenic r
egion of PH-30 alpha, a protein in sperm-egg fusion. J Pept Res, 49(6):5
63-9. Oliver T and Mead G (1993) Testicalar cancer. Curr Opin Oncol 5,559-56
7. Ormerod MG, O’Neill C, Robertson D, Kelland LR, Harrap KR (1996) cis-
Diamminedichloroplatinum(II)-induced cell death through apoptosisi in se
nsitive and resistant human ovarian carcinoma cell lines. Cancer Chemoth
er Pharmacol, 37(5): 463-71. Pak CC, Erukulla RK, Ahl PL, Janoff AS, Meers P (1999) Elastase activa
ted liposomal delivery to nucleated cells. Biochim Biophys Acta, 1419(2)
:111-26.
【０１１６】 Papadopoulou MV, Ji M, Bloomer WD (1998) NLCQ-1, a novel hypoxic cytot
oxin potentiation of melphalan, cisDDP and cyclophosphamide in vivo. Int
J Radiat Oncol Biol Phys, 42(4): 775-9. Parente RA, Nir S, Szoka FC Jr (1988) pH-dependent fusion of phosphati
dylcholine small vesicles. Induction by a synthetic amphipathic peptide. J Biol Chem, 263(10): 4724-30. Partidos CD, Vohra P, Steward MW (1996) Priming of measles virus-speci
ffic CTL responses after immunization with a CTL epitope linked to a fus
ogenic peptide. Virology, 215(1): 107-10. Pecheur EI, Hoekstra D, Sainte-Marie J, Maurin L, Bienvenue A, Philipp
ot JR (1997) Membrane anchorage brings about fusogenic properties in a s
hort synthetic peptide. Biochemistry, 36(13): 3773-81. Vinaimont N, Verhee A, Duverger N, Brasseur R, Vandekerckhove J, Taver
nier J, Rosseneu M (1999) Characterization of functional residues in the
interfacial recognition domain of lecithin cholesterol acyltransferase
(LCAT). Protein Eng, 12(1): 71-8.
【０１１７】 Pereira FB, Goni FM, Muga A, Nieva JL (1997) Permeabilization and fusi
on of uncharged lipid vasicles induced by the HIV-1 fusion peptide adopt
ing an extended conformation: dose and sequence effects J, 73(4): 1977-8
6, Pil PM and Lippard SJ (1992) Specific Binding of Chromosomal Protein H
MGI to DNA Damaged by the Anticancer Drug Cisplatin. Science 256,234-237
. Pillot T, Drouet B, Queille S, Labeur C, Vandekerchkhove J, Rosseneu M
, Pincon-Raymond M, Chambaz J (1999) The nonfibrillar amyloid beta-pepti
de induces apoptotic neuronal cell death: involvement of its C-terminal
fusogenic domain, J Neurochem, 73(4): 1626-34.
【０１１８】 Pillot T, Goethals M, Vanloo B, Lins L, Brasseur R, Vandekerckhove J,
Rosseneu M (1997a) Specific modulation of the fusogenic properties of th
e Alzheimer beta-amyloid peptide by apolipoprotein E isoforms. Eur J Bio
chem, 243(3): 650-9. Pillot, Lins L, Goethals M, Vanloo B, Beatt J, Vandekerckhove J, Rosse
neu M, Brasseur R (1997b) The 118-135 Peptide of the human prion protein
forms amylord fibrits and induces liposome fusion. J Mol Biol, 274(3):
381-93. Prasad KN, Hernandez C, Edwards-Presad J, Nelson J, Robinson WA (1994)
Modification of the tamoxifen, cis-platin, DTIC, and interferon-alpha 2
b on human melanoma cells in culture by a mixture of vitamins, Nutr Canc
er, 22(3): 233-45.
【０１１９】 Rodriguez-Crespo I, Gomez-Gutierrez J, Nieto M, Peterson DL, Gavilanes
F (1994) Prediction of a putative fusion peptide in the S protein of he
patitis B virus. J Gen Virol, 75 (Pt3): 637-9. Rodriguez-Crespo I, Nunez E, Yelamos B, Gomez-Gutierrez J, Albar JP, P
eterson DL, Gavilanes F (1999) Fusogenic activity of hepadnavirus peptid
es corresponding to sequences downstream of the putative cleavage site.
Virology, 261(1): 133-42. Roth, J.A. など. (1996), “Retrovius-mediated wild-typep53 gene transf
er to tumors of patients with lung cancer” Nature Med. 2: 985-991.
【０１２０】 Schroth-Diez B, Ponimaskin E, Reverey H, Schmidt MF, Hermann A (1998)
Fusion activity of transmembrane and cytoplasmic domain chimeras of the
influenza virus glycoprotein hemagglutinin. J Virol, 72(1): 133-41. As second-line treatment in patients with advanced non-small cell lung
cancers refractory to cis-platin. Oncol Rcp, 6(4): 797-800. Suenaga M, Les S, Park NG, Aoyagi H, Kato T, Umeda A. Amako K (1989) B
asic amphipathic helical peptides induce destabilization and fusion of a
cidic and neutral liposomes. Biochim Biophys Acta, 981(1): 143-50 Toney JH, Donahue BA, Kellett PJ, Bruhn SL, Essigmann JM and Lippard S
J (1989) Isolation of cDNAs encoding a human protein that binds selectiv
ely to DNA modified by the anticancer drug cis-diammins-dichloroplatinum
(II). Proc Natl Acad Sci USA 86,8328-8332.
【０１２１】 Toumois H, Fabrie CH, Burger KN, Mandersloot J, Hilgers P, van Dalen H
, de Gier J, de Kruijff B (1990) gramicidin A induced fusion of large un
ilamellar dioleoylphosphatidylcholine vesicles and its relation to the i
nduction of type II nonbilayer structures. Biochemistry, 29(36): 8297-30
7. Ulrich AS, Tichelaar W, Forster G, Zschomig O, Weinkauf S, Meyer HW (1
999) Ultrastructural characterization of peptide-induced membrane fusion
and peptide self- assembly in the lipid bilayer. Biophys j, 77(2): 829-
41. Vergote I, Himmelmann A, Frankendal B, scheistroen M, Vlachos K, Trope
C (1992) Hexamethylmelamine as second-line therapy in platin-resistant
ovarian cancer, Gynecol Oncol, 47(3): 282-286. Vilpo JA, Vilpo LM, Szymkowski De, O’Donovan A and Wood RD (1995) An
XPG DNA repair defect causing mutagen hypersensitivity in mouse leukemia
L1210 cells. Mol Cell Biol 15, 290-297.
【０１２２】 Vonrche V, Callebaut I, Kettmann R, Brasseur R, bumy A, Portetelle D (
1992) The 19-27 amino acid segmennto of gp 51 adopts an amphiphilic stru
cture and plays a key role in the fusion events induced by bovine leukem
ia virus. J Biol Chem, 267(21): 15193-7. Zhang YQ, Jiang XT, Sun QR, Zhang GQ, Wang Y (1995) Studies on CDDP-al
bumin microspheres for hepatic arterial chemoembolization. Yao Hsueh Pao
, 30(7): 543-8 〔Article in Chinese〕
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、シスプラチン封入を示す。
【図２】 図２は、封入されたシスプラチンの注入の３〜４後でのSCIDマウスにおけるMC
F−７腫瘍の緩解を示す。
【図３】 図３は、シスプラチンによる処理を伴って又は伴わないでのSCIDマウスの腫瘍
の組織学を示す。図３Aは、SCIDマウスにおいて増殖された未処理のMCF−７腫瘍
を示す。40倍の倍率。腫瘍組織の構造特徴の相同パターンを注意すること。図３
Bは、シスプラチン−処理されたマウスを示す（４回の注射）。細胞はアポプト
シス性であり、構造体中に細胞のグループが存在し、そして核はアポプトシス細
胞の特徴であるより大きく且つより濃く染色する。図３Cは、筋肉への侵入を示
す、未処理の動物からの腫瘍を示す。20倍の倍率。図３Dは、シスプラチン−処
理されたマウスを示す。侵入は明白ではない。20倍の倍率。
【図４】 図４は、封入されたシスプラチンにより処理された動物（A）と未処理の動物
（B）との間の腫瘍サイズの肉眼で見える（視学的）差異を示す。
【手続補正書】
【提出日】平成１３年１１月２７日（２００１．１１．２７）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の名称】 シスプラチン及び他の薬剤又はリポソーム中に封入された遺伝
子を用いてのヒト癌のための療法
【特許請求の範囲】
【発明の詳細な説明】
【０００１】 発明の分野： 本発明は、リポソーム封入された薬剤及び供給システム、特にリポソーム封入
されたシスプラチンに関する。薬剤は、静脈内注入の後、種々のヒト悪性疾患に
おける癌細胞を殺害するのに有用である。
【０００２】 発明の背景： 本出願においては、種々の出版物、特許及び公開された特許明細書は、著者及
び日付により又は特許番号により言及される。出版物についての十分な引用文献
が、この開示又は請求の範囲の直前に提供される。それらの出版物、特許及び公
開された特許明細書の開示は、本発明が関与する技術の状態により十分に説明す
るために、引用により本明細書に組み込まれる。
【０００３】 シス−ジアミンジクロロ白金（II）シス−[Pt (NH3)2Cl2]2+、すなわち省略さ
れたシスプラチン又はシス−DDPは、精巣、卵巣癌の処理のための、及び頭及び
首の癌に対する最も広く使用されている抗腫瘍薬物の１つである。90％以上の精
巣癌がシスプラチンにより治癒される。最も重度の副作用は、腎毒性、骨髄毒性
及び胃腸刺激である（Oliver and Mead, 1993）。両眼神経障害が、160mg/m2の
シスプラチン及び640mg/m2のカルボプラチンにより処理された卵巣癌により影響
された患者において観察された（Caraceniなど., 1997）。シス−又はカルボプ
ラスチン耐性の上皮卵巣癌（最終治療の６日目以内での再発）を有する61人の患
者のグループにおける経口ヘキサメチルメラミン処理は、14％の客観的応答割合
を示した（Vergote など., 1992）。
【０００４】 カチオン性コレステロール誘導体は、治療剤を供給するために使用されて来た
。例えば、それらはホスファチジルエタノールアミンと共に混合され、そして音
波処理され、DNAと複合体化され、そしてエンドソーム区画からのサントゾル中
への侵入を仲介することができる小さな単層小胞が形成される。リポソーム配合
物の１つ、すなわちDC−Cholリポソームは、メラノーマに対する遺伝子療法臨床
試験に使用されて来た。ヒト免疫欠損ウィルス−１トランス活性タンパク質遺伝
子は、HIV-1長末端反復の制御下でレポーター遺伝子と共に同時供給された。シ
スプラチン耐性について選択され又はシスプラチン療法に失敗した患者から単離
されたヒト腫瘍細胞は、カチオン性リポソームにより高くトランスフェクトでき
た。 それらの結果は、シスプラチンによる一連の治療プロトコール及び悪性疾患の
ための遺伝子療法を示唆した（Farhoodなど., 1994）。
【０００５】 キャリヤーリガンドとして２−アミノ−メチルピロリジン誘導体から調製され
た種々の白金複合体が、マウスにおける皮下及び/又は腹腔内注入を用いてColon
26癌及びP388白血病に対するそれらの抗腫瘍活性について試験された。２−アミ
ノメチルピロリジンは、そのアミン誘導体において最も効果的なキャリヤーリガ
ンドであることがわかっている（Morikawa など、1990）。 最適な方法が、エマルジョン−加熱安定化方法によりシスプラチンアルブミン
微小球（Cis−DDP−AMS）（平均サイズは148ミクロンであった）を調製するため
の直交試験により確立された。白金の分布及び脱離半減時間は、それぞれ、Cis
−DDP−AMS対Cis−DDPによる肝動脈化学塞栓形成の後、3.36倍及び1.23倍、延長
された（Zhangなど., 1995）。
【０００６】 改良された治療性質を有する白金（II）−基材の化合物についての研究は、ウ
ラシル及びウリジンに結合される新規種類の水溶性第三世代シス−ジアミンジク
ロロ白金（II）複合体を企画し、そして合成を促進した。しかしながら、合成さ
れた化合物のどれも、処理された3種の細胞系に対していずれの有意な細胞毒性
活性も示さなかった（Kimなど., 1998）。
【０００７】 最適開発された生物還元剤４−［３−（２−ニトロイミダゾリル）−プロピル
アミノ］−７−クロロキノリン塩酸塩（NLCQ−１）は、骨髄毒性における同時増
強を伴なわないで、化学治療剤メルファラン（L−PAM）、シスプラチン（シスDD
P）及びシクロホスファミド（CPM）の抗腫瘍効果を増強することが見出された。
増強は、厳密には、予定通りであり、そしてNLCQ−１がシスDDPの45分前に与え
る場合、最適な効果（付加的効果よりも1.5〜２対数倍の殺害効果）が観察され
た。それらの結果は、臨床学的研究に基づけば、化学感作物質としてのHLCQ−１
の分類を支持する（Papudopoulouなど., 1998）。
【０００８】 シスプラチンによる第１線級の治療をこれまでに受けている、非−小細胞肺癌
（NSCLC）を有する患者における第２線級処理としてのシスプラチンとパシルタ
キセルとの組合せは、14人の患者において部分的な応答を達成した（40％）（St
athopoulasなど.,1997）。 Abraなど. (1999年８月31日に発行されたアメリカ特許第5,945,122号)は、ほ
とんど中性の脂質に閉じ込められた荷電されていないシスプラチンを含むリポソ
ーム組成物を記載する。しかしながら、Abra3の方法は、シスプラチン閉じ込め
についての本特許において開示されたアニオン脂質DPPGと比べて中性脂質を使用
する。
【０００９】 従って、従来の報告は、シスプラチン及び他の治療薬物のリポソーム仲介され
た供給が可能であることを示しているが、治療効率はシスプラチンの低い水溶解
性及び低い安定性により制限されて来た。治療効率はまた、薬物の高い毒性によ
っても制限される。従って、治療的に使用される場合、シスプラチン含有薬物の
加工、及びシスプラチンの高い毒性に関与する困難性を低める必要が存在する。
本発明は、この必要性を満たし、そして同様に関連する利点も提供する。
【００１０】 発明の開示： １つの観点においては、本発明は、それらの内部膜と外部膜との二層間に異な
った脂質組成を有し、そして動物及びヒトへの静脈内注入の後、一次腫瘍及びそ
れらの転移部分に達することができるリポソーム中にシスプラチン及び他の正に
荷電された薬物を封入するための方法を提供する。１つの観点においては、前記
方法は、正に荷電され、そして抗腫瘍活性を付与された活性形のシスプラスチン
であるその水性形に加水分解によりシスプラチンを転換するために、シスプラチ
ンとDPPG（ジパルミトイルホスファチジルグリセロール）又は他の脂質分子との
間での複合体形成を包含する。
【００１１】 この段階でフソゲン性質を有する膜融合ペプチド及び他の分子が、複合体の細
胞膜を通しての侵入を改良するために添加され得る。水性シスプラチン−DPPGミ
セルは、小胞形成脂質、例えば予備製造されたリポソーム又は脂質と共に混合し
、続いて膜を通して透析し、そして押出し、シスプラチンを非常に高い効率で閉
じ込め、そして封入することによってリポソームに転換される。ドキソルビジン
又は他の正に荷電された化合物が、それらの配合においてシスプラチンに代わっ
て置換され得る。
【００１２】 封入されたシスプラチンは、種々のヒト固形腫瘍、例えば乳癌及び前立腺癌（
但し、それらだけは限定されない）を根絶することにおいて高い治療効率を有す
る。封入されたシスプラチンと封入されたドキソルビシン又は他の抗腫瘍薬物と
の組み合わせが、治療価値のあるものとして請求されている。また、封入された
シスプラチンと多くの抗癌剤、例えばp53、IL−１、IL−12、アンジオスタチン
及びリポソーム中に封入されたオンコスタチンとの組合せ、及び封入されたシス
プラチンとHSV−tk及び封入されたガンシクロビルとの組合せも、癌根絶におい
て治療的に価値あるものとして請求されている。
【００１３】 本発明を実施するための態様： 本発明の実施は、特にことわらない限り、免疫学、分子生物学、微生物学、細
胞生物学及び組換えDNAの従来の技法を用いるであろう。それらの方法は、次の
出版物に記載されている。例えば、Sambrookなど. Molecular Cloning: A Labor
atory Manual, 2nd edition (1989); Current Protocols in Molecular Biology
(F. M. Ausubel など. Eds., (1987); The series Methods in Enzymology (Ac
ademic Press, Inc.); “PCR: A Practical Approavh” (M. MacPherson など.,
IRL Press at Oxford University Press (1991)); PCR2: A Practical Approac
h (M. J. MacPherson, B.D. Hames and G. R. Taylor eds. (1995)); Antibodie
s, A Laboratory Manual (Harlow and Lane, eds. (1988)); 及びAnimal Cell C
ulture (R. I. freshney, ed. (1987))を参照のこと。
【００１４】 本明細書及び請求の範囲において使用される場合、単数形“不定冠詞”及び“
定冠詞”は、特にことわらない限り、複数の参照も包含する。例えば、用語“細
胞”とは、多くの細胞、例えばその混合物も包含する。 用語“含んで成る”とは、組成物及び方法が列挙される要素を包含するが、し
かし他の排除するものではない。組成物及び方法を定義するために使用される場
合、“〜から実質的に成る”とは、いずれかの必須の重要な他の要素の排除を意
味するであろう。従って、ここに定義する要素から実質的に成る組成物は単離及
び精製方法から微量の汚染物及び医薬的に許容できるキャリヤー、例えばリン酸
緩衝溶液、保存剤及び同様のものを排除しない。“〜からなる”とは、他の成分
中の微量元素の排除及び本発明の組成物の投与のための実質的な方法段階を意味
するのであろう。個々のそれらの推移用語により定義される態様は、本発明の範
囲内である。
【００１５】 用語“ポリヌクレオチド”及び“核酸分子”とは、いずれかの長さのヌクレオ
チドのポリマー形を言及するために交換可能的に使用される。ポリヌクレオチド
は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び/又はそれらの類似体を
含むことができる。ヌクレオチドは、いずれかの三次元構造を有し、そしていず
れかの知られているか又は未知の機能を行うことができる。用語“ポリヌクレオ
チド”とは、例えば一本鎖、ニ本鎖及び三本鎖ヘリックス分子、遺伝子又は遺伝
子フラグメント、エキソン、イントロン、mRNA, tRNA, リボザイム、cDNA, 組換
えポリヌクレオチド、枝分かれポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、いず
れかの配列の単離されたDNA、いずれかの配列の単離されたRNA、核酸プローブ及
びプライマーを包含する。核酸分子はまた、修飾された核酸分子を包含すること
ができる。
【００１６】 “遺伝子”とは、転写され、そして翻訳された後、特定のポリペプチド又はタ
ンパク質をコードすることができる少なくとも１つの読み取り枠を含むポリヌク
レオチドを言及する。 “組成物”とは、活性剤、及び他の不活性（例えば、検出剤又はラベル、又は
医薬的に許容できるキャリヤー）又は活性化合物又は組成物、例えばアジュバン
トの組合せを意味する。 “医薬組成物”とは、インビトロ、インビボ又はエクスビボでの診断又は治療
的使用のために組成物を適切にする不活性又は活性キャリヤーと活性剤との組合
せを包含する。
【００１７】 本明細書において使用される場合、用語“医薬的に許容できるキャリヤー”と
は、標準の医薬キャリヤー、例えばリン酸緩衝溶液、水及びエマルジョン、例え
ば油/水又は水/油エマルジョン、及び種々のタイプの湿潤剤のいずれかを包含す
る。組成物はまた、安定剤及び保存剤も含むことができる。キャリヤー、安定剤
及びアジュバントの例に関しては、Martin, Remington’s. sti., 15th Ed. (Ma
ck Pull. Co., Easton (1975)) を参照のこと。
【００１８】 “有効量”とは、有益な又は所望の結果をもたらすのに十分な量である。有効
量は、１又は複数回の投与、適用又は用量で投与され得る。「対象」、「個体」
又は「患者」は本明細書では互換的に使用され、これは脊椎動物、好ましくは哺
乳類、より好ましくはヒトを意味する。哺乳類は、ネズミ、サル、ヒト、家畜、
スポーツ用動物、及びペットを包含するが、但しそれらだけには限定されない。 “対照”とは、比較目的のための実験に使用される他の対象又はサンプルであ
る。対照は、“正”又は“負”であり得る。例えば、実験の目的が特定型の癌と
遺伝子の変更された発現レベルとの相互関係を決定するためである場合、正の対
照（そのような変更を担持し、そしてその疾病の症候特徴を示す対象又は対象か
らのサンプル）、及び負の対照（変更された発現及びその疾病の臨床学的症候を
欠いている対象又は対象からのサンプル）を使用することが一般的に好ましい。
【００１９】 “遺伝子供給ビークル”とは、宿主細胞中に挿入されたポリヌクレオチドを担
持することができるいずれかの分子として定義される。遺伝子供給ビークルの例
は、リポソーム、カチオン性リポソーム、ウィルス、例えばバキュロウィルス、
アデノ関連ウィルス、及びレトロウィルス、バクテリオファージ、コスミド、プ
ラスミド、菌類ベクター、及び種々の真核及び原核宿主における発現のために記
載された、及び遺伝子療法及び単純なタンパク質発現のために使用され得る、当
業界において典型的に使用される他の組換えビークルである。
【００２０】 “ウィルスベクター”とは、インビトロ、エクスビボ又はインビボのいずれか
で、宿主細胞中に供給されるべきポリヌクレオチドを含んで成る、組換え的に生
成されたウィルス又はウィルス粒子として定義される。ウィルスベクターの例は
、レトロウィルスベクター、アデノウィルスベクター、アデノ関連ウィルスベク
ター及び同様のものを包含する。遺伝子移行レトロウィルスベクターにより仲介
される観点においては、ベクター構造体は、レトロウィルスゲノム又はその一部
を含んで成るポリヌクレオチド、及び挿入されたポリヌクレオチドを言及する。
【００２１】 本明細書において使用される場合、“レトロウィルス仲介された遺伝子移行”
又は“レトロウィルストランスダクション”は、同じ意味を担持し、そして遺伝
子又は核酸配列が細胞に侵入し、そしてそのゲノムを宿主細胞ゲノム中に組み込
むウィルスにより宿主細胞中に安定して移行される工程を言及する。ウィルスは
、感染のその通常の機構を通して宿主細胞中に侵入し、又はそれが異なった宿主
細胞表面受容体又は細胞に侵入するリガンドに結合するよう修飾され得る。本明
細書において使用される場合、レトロウィルスベクターとは、ウィルス又はウィ
ルス様侵入機構を通して細胞中に外因性核酸を導入することができるウィルス粒
子を言及する。
【００２２】 レトロウィルスは、RNAの形でそれらの遺伝子情報を担持するが、しかしなが
ら、ウィルスが細胞を感染すると、そのRNAは、感染された細胞のゲノムDNA中に
組み込まれるDNA形に逆転写される。その組み込まれたDNA形は、プロウィルスと
呼ばれる。アデノウィル（Ad）又はアデノ関連ウィルス（AAV）おいては、ベク
ター構造体は、ウィルスゲノム又はその一部、及び挿入されるべきポリヌクレオ
チドを含んで成るポリヌクレオチドを言及する。
【００２３】 遺伝子の移行がDNAウィルスベクター、例えばアデノウィルス（Ad）又はアデ
ノ−関連ウィルス（AAV）により介在される観点において、ベクター構成はウィ
ルスゲノム又はその部分、及び挿入されるべきポリヌクレオチドを意味する。デ
ノウィルス（Ads）は、50以上の血清型を包含する、比較的十分に特徴づけられ
たウィルスの均質グループである（例えば、WO95/27071号を参照のこと）。Ads
は、容易に増殖し、そして宿主細胞ゲノム中への組み込みを必要としない。組換
えAd−由来のベクター、特に、野生型ウィルスの組換え及び生成のための可能性
を低くするそれらのベクターがまた構成されている。（WO95/00655号；WO95/119
84号を参照のこと）。野生型AAVは、宿主細胞ゲノム中に組み込む高い感染性及
び特異性を有する。（Hermonl and Muzyczka (1984) PNAS USA 81: 6466-6470;
Lebkowski など., (1988) Mol. Cell. Biol. 8: 3988-3996 を参照のこと）。
【００２４】 プロモーター、及びポリヌクレオチドが操作可能的に結合され得るクローニン
グ部位の両者を含むベクターは、当業界において良く知られている。そのような
ベクターは、インビトロ又はインビボでRNAを転写することができ、そして例え
ばStratagene (La Jolla, CA) 及びPromega Biotech (Madison, WI) から市販さ
れている。発現及び/又はインビトロ転写を最適化するためには、特別の可能性
ある不適切な他の翻訳開始コドン、又は転写又は翻訳のレベルで、発現を妨害し
、又は低めることができる他の配列を排除するためにクローンの5’及び/又は3
’未翻訳部分を除去し、付加し、又は変更することが必要である。他方では、コ
ンセンサンリボソーム結合部位が、発現を増強するために開始コドンの5’側に
すぐに挿入され得る。
【００２５】 遺伝子供給ビークルはまた、いくつかの非ウィルスベクター、例えばDNA/リポ
ソーム複合体及び標的化されたウィルスタンパク質DNA複合体を包含する。また
標的抗体又はそのフラグメントを含んで成るリポソームも本発明の方法に使用さ
れ得る。細胞への供給を増強するためには、本発明の核酸又はタンパク質は、細
胞表面抗原、例えばTCR、CD3又はCD4を結合する抗体又はその結合フラグメント
に結合され得る。
【００２６】 ポリヌクレオチドは、当業界において良く知られている方法を用いて、ベクタ
ーゲノム中に挿入される。例えば、挿入体及びベクター分子は、お互い対合し、
そしてリガーゼにより連結され得る個々の分子上に相補的末端を創造するために
制限酵素と、適切な条件下で接触せしめられ得る。他方では、合成核酸リンカー
が、制限されたポリヌクレオチドの末端に連結され得る。それらの合成リンカー
は、ベクターDNAにおける特定の制限部位に対応する核酸配列を含む。
【００２７】 さらに、終結コドン及び適切な制限部位を含むオリゴヌクレオチドは、例えば
、次のものの幾つか又はすべてを含むベクターに挿入のために連結される：選択
マーカー遺伝子、例えば哺乳類細胞における安定した又は過渡的なトランスフェ
クタントの選択のためのネオマイシン遺伝子；高レベルの転写のためのヒトCMV
の即時初期遺伝子からのエンハンサー/プロモーター配列；mRNA安定性のためのS
V46からの転写終結及びRNAプロセッシングシグナル；複製のSV40ポリオーマ起点
及び適切なエピソーム複製のためのColEI；種々の多クローニング部位；挿入さ
れたポリヌクレオチドの3’側の安定化要素；及びセンス及びアンチセンスRNAの
インビトロ転写のためのT7及びSP6 RNAプロモーター。他の手段は当業界におい
て良く知られており、そして入手できる。
【００２８】 “宿主細胞”とは、ベクター、又は外因性ポリヌクレオチド、ポリペプチド及
び/又はタンパク質の組み込みのための受容体であり得るいずれかの個々の細胞
又は細胞培養物を意味する。それはまた、単一の細胞の子孫も包含し、そしてそ
の子孫は、天然、突然又は意図的な突然変異誘発のために、元の親細胞と完全に
同一である必要はない（形態学的又はゲノム又は全体のDNA補体において）。細
胞は、原核又は真核細胞であり得、そして細菌細胞、酵母細胞、植物細胞、昆虫
細胞、動物細胞及び哺乳類細胞、例えばネズミ、ラット、サル又はヒトを包含す
るが、但しそれらだけには限定されない。
【００２９】 本明細書において使用される場合、用語“新形成細胞”、“新形成”、“腫瘍
”、“腫瘍細胞”、“癌”及び“癌細胞”（交換可能的に使用される）とは、比
較的自主増殖を示す細胞を言及し、その結果、それらは細胞増殖の制御の有意な
損失（すなわち、規則解除された細胞分裂）により特徴づけられる異常増殖表現
を示す。新形成細胞は、悪性又は良性であり得る。 “抑制する”腫瘍増殖とは、対照細胞に比較される場合、縮小される増殖状態
を示す。腫瘍細胞増殖は、当業界において知られているいずれかの手段、例えば
腫瘍サイズの測定、腫瘍細胞が増殖するかどうかの3H−チミジン組み込みアッセ
イを用いての決定、又は腫瘍細胞の計数により評価され得るが、但しそれらだけ
には限定されない。“抑制する”腫瘍細胞増殖とは、次の状態のいずれか又はす
べてを意味する：遅延及び停止する腫瘍増殖、並びに腫瘍縮小。
【００３０】 発明の態様： ミセル、リポソーム及びそれらを得るための方法： 体積単位当たりシスプラチンの含有率を増強し、その毒性を低め、静脈内注入
の後、一次腫瘍及びそれらの転移を標的化することができ、そして腫瘍の縮小及
びSCIDマウス担持のヒト腫瘍の完全な治療を示す、シスプラチンを脂質中に閉じ
込めるための新規方法が提供される。
【００３１】 シスプラチンは、そのニ価形で遷移重金属白金の1つの原子に結合されるシス
位置に２個の塩素原子及び２個のアミノ基を含む重金属複合体である。それはニ
官能価のアルキル化剤及びDNA合成を阻害するDNAインターカレーターである。１
つの形においては、シスプラチンは、300.1の分子量及び水における1mg/mlの制
限された溶解性の黄色の粉末である。それは、しばしば、アドリアマイシン、ビ
ンプラスチン、ブレオマイシン、プレドニゾン、ビンクリスチン、タキソール及
び他の抗腫瘍薬物、並びに放射線療法と組合して、癌患者、特に精巣癌、リンパ
腫、子宮内膜癌、膀胱癌、卵巣癌、頭及び首の鱗状細胞癌、乳癌及び多くの他の
悪性腫を有する患者の処理のために広く使用される。本発明者は、その脂質閉じ
込めの形でのその溶解性の上昇のために、患者の処理のために必要とされる合計
のシスプラチン体積の低下を主張する。
【００３２】 静脈内注入のために使用される体積は通常、24時間の注入の場合、多く投与さ
れる（成人患者当たり約180ml、又は約20〜120mg/m2）。それは、25〜80分の急
速相、続く58〜73時間の遅い二次相における血漿から明らかであり；それは血漿
タンパク質により結合され、そして腎臓により排泄される（処理された患者にお
ける重度の腎毒性を説明する）。用量関連の腎毒性は、強い水和化、マンニトー
ル、フロセミド及び他の薬剤により一部克服され得る。シスプラチンにより付与
される他の毒性は、耳毒性、吐気及び嘔吐、貧血及び軽い骨髄抑制を包含する（
The Merck Manual of Diagnosis and Therapy）。本発明は、従来技術の方法及
び組成物の限界を克服する。
【００３３】 従って、1つの観点においては、本発明は、シスプラチン混合物を形成するた
めに、シスプラチン及びホスファチジルグリセロール脂質誘導体（PGL誘導体）
を、１：１〜１：2.1の範囲で組合すことによって、シスプラチンミセルを生成
するための方法を提供する。他の態様においては、シスプラチン：PGL誘導体の
範囲は、１：1.2；１：1.4；１：1.5；１：1.6；１：1.8；１：1.9；１：2.0又
は１：2.1の範囲である。次に、混合物は、シスプラチンミセルを形成するため
に、有効量の少なくとも20％の有機溶媒、例えばエタノール溶液と組合される。
【００３４】 本明細書で使用する場合、「ホスファチジルグリセロール脂質誘導体」（PGL
誘導体）はミセルを形成する能力を有するいずれかの脂質誘導体であり、そして
負に荷電された実効ヘッド基を有する。これは、ジパルミトイルホスファチジル
グリセロール（DPPG）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール及びジカプ
リルホスファチジルグリセロールを包含するが、但しそれらだけには限定されな
い。1つの観点においては、10〜28個の炭素原子を有し、そして不飽和脂肪測鎖
を有するホスファチジル誘導体は、本発明の範囲内である。正（１：１）、中性
（１：２）又はわずかに負（１：2.1）の実効電荷を粒子に付与するモル比での
変動を有する負に荷電されたホスファチジルグリセロール脂質によるシスプラチ
ンの複合体化は、投与の後、身体における異なった組織の標的化を可能にするで
あろう。
【００３５】 しかしながら、負に荷電されたPGLによるシスプラチンの複合体化は、シスプ
ラチンの溶解性を増強することが示されており、従って、効果的な抗腫瘍治療の
ために必要とされる薬剤の体積を減じる。さらに、シスプラチン及び負に荷電さ
れたPGLの複合体化は、製造工程の間、薬剤損失を最少にする非常に高い封入効
率を進行せしめる。それらの複合体は、安定しており、沈殿物を形成せず、そし
て４℃での少なくとも４ヶ月間の貯蔵の後、治療効能を保持する。
【００３６】 本明細書において使用される場合、用語“シスプラチン”とは、類似体を包含
する。例としては、次のものを包含する：カルボプラチン、オルマプラチン、オ
キサプラチン、２−アミノメチルピロリジン（1，1−シクロブタンジカルボキシ
レート）白金、ロバプラチン、１−シクロブタン−ジカルボキシレート（２）−
（２−メチル−１，４−ブタンジアミン−N，N’）白金、ゼニプラチン、エンロ
プラチン、254−Sネダプラチン及びJM−216（ビス−アセテート−アミン−ジク
ロロヘキシルアミン−白金（IV））。
【００３７】 必ずしも明白に言及されないが、他の正に荷電された薬剤、例えば抗腫瘍薬物
ドキソルビシン（但し、これだけには限定されない）がシスプラチンに変わって
置換され得ることは理解されるべきである。他方では、中性である他の型の薬剤
は、正に荷電された基による誘導体化による正に荷電された薬剤へのそれらの転
換に基づいて使用され得る。中性又は負に荷電された抗癌又は他のタイプの薬剤
の正に荷電された分子への修飾は、有機合成において十分に確立されている多く
の方法により達成され得る。これは、例えば薬剤におけるヒドロキシル基をアミ
ノ基又はトリメチルアミノ基により置換し、従って化合物に正の電荷を導入する
ことによって達成され得る。アミノ基による環ヒドロキシル基の置換は、1998年
11月17日に発行されたアメリカ特許第5,837,868号（Wangなど.）に論じられてい
る。
【００３８】 上記方法は、その段階が上記に示される順序で行われることを必要としない。
例えば、前記方法は、溶液を形成するために、シスプラチンと有効量の少なくと
も20％の有機溶媒溶液とを組合すことによって実施され得る。上記溶液は１：１
〜１：２の範囲でホスファチジルグリセロール脂質（PCL）誘導体と組合わされ
、シスプラチンミセルを形成する。上記のように、シスプラチン：PGL誘導体の
範囲は、１：1.2；１：1.4；１：1.5：１：1.6；１：1.8；１：1.9：１：2.0；
又は１：2.1の範囲である。
【００３９】 いずれかの有機溶媒又はエタノールの配合物、又は二層システムを形成しない
いずれか他のアルコール、又は20％アルコールに相溶性である他の有機溶媒（す
なわち、クロロホルム）が、本明細書に記載される方法において有用である。例
えば、アルコール溶液は、少なくとも30％，35％，40％，45％〜90％（それらの
間でのいずれかの増大を包含する）のいずれかであり得る。好ましくは、アルコ
ール溶液は、DPPGに関して、30％エタノールであり、そして他の脂質に関しては
、最適な％は異なることができる。
【００４０】 １つの態様においては、負の実効電荷を有するペプチドによるDPPG分子の部分
置換は、標的物の細胞膜を通過できるフソゲン性質を有するシスプラチン複合体
を付与する。フソゲンペプチドはまた、それらの良好な暴露のためにPEGの遊離
端で共有結合され得る。最終シスプラチン/DPPG複合体での水性シスプラチンの
正の電荷を置換する少量のカチオン性脂質はまた、フソゲン性質を複合体に付与
し；カチオン性脂質（例えば、DDAP：ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロ
ミド；DMRIE：N−［１−（２，３−ジミリスチルオキシ）プロピル］−N, N−ジ
メチル−N−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウムブロミド；DMTAP：１，２−
ジミリストイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン；DOGS：ジオクタデシル
アミドグリシルスペルミン；DOTAP：N−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）
プロピル）−N，N，N−トリメチルアンモニウムクロリド；DPTAP：１，２−ジパ
ルミトイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン；DSTAP：１，２−ジステロ
イル−３−トリメチルアンモニウムプロパン）により置換される正の荷電の％は
、カチオン脂質の毒性のために低い。いくつかの配合物は、ミセルにおいて多量
のフソゲン両親媒性脂質DOPEを含む。
【００４１】 さらなる観点においては、シスプラチンミセルは、例えば薬剤供給への使用の
ためには、小胞形成脂質中に封入される。 脂質封入されたシスプラチンは、種々のヒト固形腫瘍、例えば乳癌、前立腺癌
、多形グリア芽腫、非小肺細胞癌、膵臓癌、頭及び首の鱗状細胞癌及びT−細胞
リンパ腫（但し、それらだでには限定されない）の根絶に高い治療効能を有する
。従って、もう１つの観点においては、本発明は、それらの内部及び外部膜二層
間に異なった脂質組成を有するリポソーム中に封入されたシスプラチン又は他方
では、他の正に荷電された抗腫瘍薬剤を用いての種々のヒト悪性疾患の処理方法
を提供する。
【００４２】 リポソーム封入された薬剤は、動物及びヒトへの静脈内注入の後、一次腫瘍及
びそれらの転移部分に達することができる。ドキソルビシン又は他の抗癌剤と封
入されたシスプラチンとの組合せは、シスプラチンのみよりも高い治療効果を有
する。また、封入されたシスプラチンと多くの抗癌遺伝子、例えばp53、IL−２
，IL−12，アンジオスタチン及び類似するタイプのリポソーム中に封入されるオ
ンコスタチンとの組合せ、及び封入されたシスプラチンとHSV−tk及び封入され
たガンシクロビルとの組合せは、癌根絶において高い治療効能を有する。
【００４３】 さらなる観点においては、本発明は、封入されたシスプラチンと次の遺伝子と
の組み合わせを提供する： （ｉ）CMV、β−アクチン又は他のプロモーターの制御下での野生型（wt）p53
cDNA発現ベクター、及びp53遺伝子の長期発現を維持することができる複製のヒ
ト起点；ウィルス複数イニシエータータンパク質、例えばT抗原を必要とする複
製の起点は、p53タンパク質がT抗原と強く相互作用するために、p53遺伝子の移
行のためには適切でない。
【００４４】 （ii）PAX5 cDNA発現ベクター、すなわちp53遺伝子のイントロン１内の短い（
10個のヌクレオチド）調節領域と相互作用する既知のp53遺伝子（wt及び変異体p
53遺伝子の両者）の唯一のサプレッサー。p53遺伝子療法における主要欠点は、
腫瘍においては、過剰発現され、そしてwt p53タンパク質と四重体化できるp53
の内因性突然変異誘発された形によるwt p53タンパク質の不活性化であり；前記
内因性p53遺伝子は、Pax5, すなわちp53遺伝子の可能性ある転写リプレッサーの
発現により抑制されるであろう。Wt p53 cDNAベクターは、イントロン１及び結
果的には、抑制性PAX5結合領域を欠いている。内因性変異体p53遺伝子発現を抑
制し、そして癌細胞から変異体p53を排除し、アポプトミス及び腫瘍抑制の誘発
を増強することが重要である。
【００４５】 （iii）単純ヘルペスウィルスチミジンキナーゼ（HSV−tk）遺伝子。単純ヘル
ペスウィルスチミジンキナーゼ（HSV−tk）自殺遺伝子はまた、動物モデル及び
ヒト患者のガンシクロビル（GCV）処理の後、DNA合成の中断を引き起こすp53及
びPax5遺伝子の組合せに包含され；これは、癌細胞における鎖の分裂を高め、そ
して鎖分裂に結合し、そしてDNA部位に損傷を与えることが知られているp53の腫
瘍サプレッサー機能を増強することが予測される。もう１つの態様においては、
ガンシクロビルが組合され、そしてリポソーム中に封入される。
【００４６】 遺伝子療法は、患者の体細胞中への治療遺伝子の導入を意図する生物医学的研
究の新時代である（Boulilas, 1998a; Martin and Boulikas, 1998により再考さ
れる）。２種の腫瘍障害が、体細胞遺伝子移行の好結果をもたらす適用を妨げる
：（１）形質導入される細胞の比率が小さいこと、及び（２）インビボ注入から
約３〜７日後での治療遺伝子の転写シグナルの喪失。
【００４７】 第１の問題は、（ｉ）遺伝子を担持する供給ビークルの標的細胞表面に達する
ことの無能性から（リポソーム−DNA複合体の大部分が血液循環から急速に排除
される）：（ii）細胞膜を通過することの困難性から、及び（iii）細胞による
インターナリゼーションの後、エンドゾームからのDNAの開放の困難性から；（i
v）核中への無能な取り組みから生じる。他は、数日間、循環に存続し、そして
腫瘍において濃縮する秘密リポソーム（Martin and Boulikas, 1998a）を使用し
て来た。しかしながら、従来の秘密リポソームは、癌細胞により摂取されない。
リポソームインターナリゼーション（フソゲンペプチド）を増強することが企画
される方法が、本明細書に開示される。
【００４８】 第２の問題は、子孫細胞間での細胞増殖の間、それらの希釈を導くヌクレアー
ゼ分解及び自律的に複製することの失敗による、又は宿主細胞の染色体中への組
み込みの後、外来性DNAの不活性化による核におけるプラスミドの損失に起因す
る。しかしながら、延長された期間、プラスミドの染色体外複製を維持すること
ができるヒト配列の使用（Teni Boulikasによる“Cloning mthod for tropping
human origins of replication”と称するアメリカ特許第5,894,060号を参照の
こと）は、この制限を克服するであろう。
【００４９】 封入されたシスプラチン（Lipoplatin（商標）と称する）又は封入されたドキ
ソルビシン、及びそれらの薬剤と遺伝子、例えばp53、PAX5及びHSV−tk/封入さ
れたガンシクロビル、IL−２，IL−12，GM−CSF，アンジオスタチン、IL−４，I
L−７，IFN−γ，TNF−α，RB，BRCA１，E１A，封入された５−フルオロシトシ
ンと組合してのシトシンデアミナーゼ、bcl−２, MDR−１，p21，p16, bax, bcl
−xs, E2F, IGF−１ VEGF，TGF−β遺伝子及び同様のものとの組合せの供給の
後、動物モデル及びヒトにおける腫瘍の緩和及び乳癌、前立腺癌及び他の癌の腫
瘍質量体積の低下がまた、本明細書に請求されている。
【００５０】 従って、本発明は、本発明の方法により得られる封入された薬剤又は他の中間
体と細胞とを接触することを含んで成る、シスプラチン又は他の治療剤を細胞に
供給するための方法をまた提供する。本発明の方法により得られる封入された薬
剤の有効量を対象に投与することを含んで成る、対象における腫瘍の増殖を阻害
するための方法がまた、本発明により提供される。前記方法は、インビトロ、エ
クスビボ又はインビボにおいて実施され得る。
【００５１】 従って、本発明はまた、封入された薬剤及びポリヌクレオチドを用いての組合
せ治療も提供する。本明細書において使用される場合、ポリヌクレオチドは、タ
ンパク質及びポリペプチドをコードする遺伝子類並びにリボザイム及びアンチセ
ンスをコードする配列を包含するが、但しそれらだけには限定されない。組合せ
治療は、２種の機構が異なっており、そして相乗性を達成できるので、いずれか
１つの処理よりも癌の根絶においてより効果的である。
【００５２】 例えば、損傷されたDNA領域及びDNAの遊離端に結合するp53タンパク質の性質
は知られており、そして重度に損傷された細胞におけるアポプトシスの機構を開
始する性質も知られている（Boulikas, 1998a により再考された）。癌細胞にお
けるDNAの遊離端は、移行されたwt p53の発現によりそれらの細胞におけるアポ
プトシス経路の誘発を増強するシスプラチンにより、損傷の後に生成されること
が予測される（多くの腫瘍は、突然変異誘発されたp53を有し、そしてこの経路
を効果的に誘発することはできない）。治療用ポリヌクレオチドはまた、ミセル
中に導入する前、遺伝子移行ベクター中に挿入され得る。
【００５３】 野生型p53遺伝子の移行は、多くの研究において、インビボ及び細胞培養にお
いて腫瘍細胞増殖を延長するために都合良く使用されて来た。アデノウィルス/p
53ベクターを用いての腫瘍内注入は、最近の臨床試験において肺腫瘍に対して（
Rothなど., 1996）及び動物モデルにおいて前立腺腫に対して（Boulikas，1998a
により再考される）、効果的であることが示されている。しかしながら、腫瘍内
注入方法は、癌の後期段階にしばしば関連する転移に対して適用できない。封入
されたシスプラチンによるp53遺伝子の全身性供給及び身体のいずれかの領域に
おける腫瘍の標的化は、癌治癒のための効果的な処理である。
【００５４】 本発明者は、動物モデル及び臨床試験において試験される患者における種々の
ヒト癌への、封入された５−フルオロシトシン、bcl−２，MDR−１, p21, p16,
bax, bcl-xs, E2F, IGF−1 VEGF, TGF−β，アンジオスタチン及び他の遺伝子と
組合して、wt p53, pax5, HSV−tk，GM−CSF, IL−12，IL−２，IL−４，IL−７
，IFN−γ，TMF−α，RB，BRCA１，E１A，シトシンデアミニアーゼ，並びに封入
されたシスプラスチン及び他の薬剤のリポゾーム供給を用いて、好都合な体細胞
遺伝子移行のための４種の重要障害を緩和するか又は部分的に克服するために手
段を提供する。
【００５５】 それらは、（ｉ）それらの毒性を低めるリポソーム中への薬剤及び遺伝子小球
の濃縮及び封入化；（ii）ポリエチレングリコール（PEG）、ヒアルロン酸又は
他のポリマーによる複合体の表面の被覆による固形腫瘍及び転移の標的化；（ii
i）フソゲンペプチド又は低い％のカチオン性脂質のために、癌細胞による薬剤
及びプラスミドの摂取の増強；及び（iv）治療遺伝子のエピソーム複製又は長期
発現及び高レベルの発現を維持することができる複製のヒト起点（ORI）を用い
ての遺伝子の維持された発現を包含する。
【００５６】 さらなる態様においては、ポリヌクレオチド又は遺伝子はさらに、数日よりも
むしろ数ヶ月間、遺伝子の発現を維持する調節DNA配列を含んで成る。これはよ
り少ない治療及び癌患者のより少ない苦しみをもたらす。これはまた、抗癌遺伝
子の高レベルの発現のために強い治療効果をもたらし；弱い調節DNAの制御下に
配置されるその同じ遺伝子は無効果であろう。
【００５７】 癌処理のためのいくつかの実験方法が、p53遺伝子供給を用いて企画されてお
り；本発明の新規性は、ヒト前立腺悪性腫瘍、特に進行した前立腺癌の半分以上
で過剰発現される内因性変異体p53形がPAX5発現ベクターを用いて制御されるこ
とにある。p53の突然変異誘導された形は主にそれらのDNA結合ドメインにおける
アミノ酸置換を有するが、しかしwt p53形とまだ四量体化することができ；p53
はテトラマーとして作用し、そしてヒト癌細胞における高レベルの内因性変異体
p53の存在は、供給されるwt p53の腫瘍サプレッサー機能を妨げる。
【００５８】 PAX5は、成長の間、身体構造を決定するホモドメインタンパク質であり；PAX5
は哺乳類成長の初期段階で、及び造血幹細胞における分化の間、成人において発
現され；p53遺伝子発現は成長する胚における細胞の早い増殖を可能にする成長
の初期段階でPAX5サプレッサータンパク質により排除される。PAX5は、成人の後
期段階でスイッチオフし、p53の発現を可能にし、そしてその腫瘍抑制機能の付
与及び特に造血細胞系におけるアポプトシスの調節を可能にする。
【００５９】 多くの供給システムが体細胞遺伝子移行に使用され、それらの個々は利点及び
欠点に関連している。組換えアデノウィルスは効果的に複製せず；組換えネズミ
レトロウィルスはランダムに組み込み、そしてクロマチン取り囲み不活性化され
；組換えAAVはランダムに組み込み、そして臨床学的有用性のために高い力価を
達成することはできない。すべては、パッケージング制限のために、3.5〜7.5kb
の外来性DNAの最大能力を有する。裸のDNAは、全身性供給の後、急速に分解され
る（半減期５分）。カチオン性リポソームは、毒性であり、心博以上には循環に
おいて生存せず、そして主に肺、肝臓及び心臓の内皮を標的化する。
【００６０】 “秘密（stealth）”リポソームのみが、腫瘍部位（また、肝臓及び脾臓）に
おいて濃縮することができ、そして血液循環において延長された期間、生存する
ことが証明されている（例えば、非秘密中性リポソームに関して数分、及びカチ
オン性リポソームに関して数秒に比較して、１日）。しかしながら、秘密リポソ
ームは、それらが、溶菌の後、数日間にわたってそれらの荷重を開放する細胞外
空間に残存する腫瘍細胞により容易に摂取されず（Martin and Boulikas, 1998
により再考されている）；しかしながら、下記式の本発明の観点は、フソゲンペ
プチドにより、又はそれらの内部二層で部分的カチオン性の脂質組成物又はDOPE
を提供することにより秘密リポソームを変性し、これは脂質二重層の混乱を生じ
させることにより、腫瘍細胞膜にそれらが入るのを助ける。
【００６１】 秘密リポソームにより動物における固形腫瘍において薬剤及び遺伝子小球の濃
縮及び摂取を達成すると、第２段階は、本発明の薬剤及び遺伝子標的化アプロー
チの効力である。M.D. Anderson Cancer Center でのヒト臨床試験は、非細胞肺
癌を有し、そしてシスプラチンを組合して腫瘍の部位でのAd5/CMV/p53組換えア
デノウィルスの局部注入を用いて、それらの腫瘍にp53突然変異を有することが
示されている患者における野生型p53遺伝子の移行を使用する。
【００６２】 この臨床試験の第１の結果は、p53の腫瘍内注入の後、有望である（Rothなど.
, 1996; Boulikas, 1998a により再考されている）。しかしながら、局部注入
は、進行した段階の悪性腫にしばしば関連する転移には適用できず；特に、前立
腺癌は、特に細胞により分泌されるインスリン−様成長因子I（IGF−I）による
前立腺腫瘍増殖における刺激に関する機構により骨への転移を付与する。従って
、全身性注入の後、腫瘍細胞塊状物中に濃縮することができる、本明細書におい
て提案される供給システムは、たぶん一次腫瘍のみならず、またその転移を処理
する。
【００６３】 提案されたシスプラチンリポソームは、本発明者の供給システムの性質のため
に、主に腫瘍を標的化するであろう。組換え治療における遺伝子は、複製DNA中
に組み込むHSV−tk及びガンシクロビルの使用のために、分裂細胞を主に標的化
し、そして秘密リポソームの使用のために、血管形成腫瘍を主に標的化する。従
って、秘密リポソームにより到達される肝臓及び脾臓細胞は、殺害されないであ
ろう。
【００６４】 さらなる態様においては、本明細書に記載されるリポソーム封入された薬剤は
、有効量のフソゲンペプチドをさらに含んで成る。フソゲンペプチドは、長いヘ
リックス軸にそって疎水性グラジエンドにより特徴づけられるヘリックス両親媒
性ペプチドの種類に属する。この疎水性グラジエントは、膜におけるペプチドの
偏向された挿入を引き起こし、従って、脂質コアを不安定化し、そしてそれによ
り、膜融合を増強する（Decoutなど., 1999）。
【００６５】 赤血球凝集素（HA）は、インフルエンザウィルスのホモトリマー表面糖タンパ
ク質である。感染においては、それは低pHで、ウィルス膜とエンドソーム膜との
間での膜融合を誘発する。個々のモノマーは、受容体−結合HA１ドメイン及び膜
−相互作用HA２ドメインから成る。HA２ドメインのNH2−末端領域（アミノ酸１
〜127）、いわゆる“融合ペプチド”は、標的膜中に挿入し、そしてウィルス膜
とエンドソーム膜との間での融合の誘発において決定的な役割を演じる。システ
インによる領域５〜14における８個のアミノ酸の置換及び回転ラベリング電子常
磁性共鳴に基づけば、ペプチドが、ホスフェート基から15オングストローム（Å
）の最大の深さを有する膜の水平面上から約25度傾いたα−ヘリックスを形成す
ると結論付けられる（Macoskoなど., 1997）。
【００６６】 インフルエンザウィルス赤血球凝集素HA−２からのフソゲンペプチドの使用は
、細胞によるトランスフェリン−ポリリシン−DNA複合体摂取の効率を非常に増
強し；この場合、ペプチドはポリリシンに結合され、そして複合体はトランスフ
ェリン−介在性エンドサイトーシスにより供給された（Boulikas, 1998aにより
再考される）。このペプチドは、配列：GLFEAIAGFIENGWEGMIDGGGYC（配列番号１
）を有し、そして酸性pHで高い卵黄ホスファチジルコリンにより調製されたリポ
ソームからの蛍光色素カルセインの開放を誘発することができ；このペプチドは
また、培養におけるCEM−SSリンパ球を用いて、0.1〜１mMの濃度で、アンチセン
スオリゴヌクレオチドの抗−HIV能力を10培まで高めることができた。このペプ
チドは、エンドソーム膜を不安定化し、そして分解するエンドソームのわずかに
より酸性の環境下でコンホメーションを変える（Boulikas, 1998aにより再考さ
れる）。
【００６７】 膜における負に荷電された脂質の存在は、いくつかのペプチドのフソゲン性質
の明示のために重要であり；ところが、フェルチリン、すなわち精子−卵融合に
関与する精子表面タンパク質の推定上の融合ドメインを表すペプチドのフソゲン
作用は、負に荷電された脂質の存在に依存する。しかしながら、HIV2ペプチドの
その作用は依存しなかった（Martin and Ruysschaert, 1997）。
【００６８】 例えば、インフルエンザウィルス赤血球凝集素HAのフソゲンペプチド上の２種
のドメインを分析するために、HAの細胞質末端及び/又はトランスメンブランド
メインがセンダイウィルスのフソゲン糖タンパク質Fのその対応するドメインに
より置換されたHA−キメラが企画された。細胞質末端がヒトニューロフィブロミ
ンタイプI（残基1441〜1518）又はc−Raf−１（残基51〜131）のペプチドにより
置換されたHAの構造体が製造された。
【００６９】 この構造体は、ワクシニアウィルス−T7ポリメラーゼ過渡的発現システムを用
いることによって、CV−１細胞において発現された。CV−１細胞と、親又はキメ
ラHAタンパク質により仲介される結合されたヒト赤血球（RBC）との間の膜融合
は、pHが低められた後、タンパク質−発現CV−１細胞の細胞質中への予備荷動さ
れRBCからの水性蛍光団カルセインの流れが生じたことを示した。これは、膜融
合が脂質二層の両葉状器官を包含し、そして水性融合孔の形式を導くことを示し
た（Schroth−Diezなど.,1998）。
【００７０】 注目すべき発現は、HIVのTATタンパク質が細胞膜を通過することができ（Gree
n and Loewenstein, 1988）、そしてTATの36個のアミノ酸ドメインが、異種タン
パク質に化学的に架橋される場合、細胞をトランスダクトする能力を付与したこ
とであった。TAT（YGRKKRRQRRR（配列番号２））の11アミノ酸のフソゲン（fuso
genic）ペプチドは、核局在化シグナルであることは意義がある（Boulikas，199
8bを参照のこと）。
【００７１】 HIVのもう1つのタンパク質、すなわち糖タンパク質gp41は、フソゲンペプチド
を含む。gp41エクトドメインの膜近位領域に由来する線状ペプチドは、抗−HIV
剤としての可能性ある用途を有し、そしてヘリックスコンホメーションを採用す
ることによって感染性を阻害する（Judiceなど., 1997）。HIV−１gp41の23個の
アミノ酸残基N−末端ペプチドは、負に荷電された大きな単層小胞を不安定化す
る能力を有する。カチオンの不在下で、主要構造は孔形成α−ヘリックスであり
、そしてCa2+の存在下で、そのコンホメーションは、卓越して延長されたフソゲ
ンβ−型構造に転換した。HIV（ala）（R22（A置換）を担持する）の融合活性は
70％低められ、ところが第２置換（V2（E））が包含される場合、フソゲン性は
完全に破壊され、このことは、それがα−ヘリックスではなく、しかしコレステ
ロール含有の電気的に中性の膜を活性的に不安定化するHIV−１融合ペプチドに
より採用される延長された構造であることを立証する（Pereira など., 1997）
。
【００７２】 プリオンタンパク質（PrP）は、ニューロン及びグリア細胞の表面で通常見出
される未知の機能の糖タンパク質である。それは、疾病、例えばウシ海綿状脳障
害、及びヒトにおけるCreutzfeldt−Jakob病に包含され、ここでPrPは、変更さ
れた形（PrPScと称する）に転換される。コンピューターモデリング計算によれ
ば、PrPの120〜133及び118〜135ドメインは、脂質二層中に斜行手段で挿入し、
そして封入されたカルセインの漏れを誘発するためにリボソームと相互反応でき
る傾斜された脂質結合ペプチドである（Pillotなど., 1997b）。
【００７３】 アルツハイマーアミロイドペプチドのC−末梢フラグメント（アミノ酸29〜40
及び29〜42）は、インビトロでリポソームの融合を誘発するウィルスタンパク質
の融合ペプチドの性質に関連する性質を有する。それらの性質は、細胞膜とアミ
ロイドペプヂドとの直接的な相互作用を仲介し、そしてアミロイドペプチドの細
胞毒性の一部を説明することができた。アルツハイマー病の病理学とアポリポタ
ンパク質E(apoE) 多彩現象との間の疫学的及び生化学的連鎖の観点においては、
アミロイドペプチドの３種の共通するapoEイソ形とC−末端フラグメントとの間
の可能性ある相互作用の試験は、apoE2及びapoE3のみが（apoE4ではない）、ア
ミロイドペプチドフソゲン及び凝集性質の可能性あるインヒビターであることを
示した。
【００７４】 アミロイド凝集体の形成に対するapoEの保護効果は、安定したapoE/アミロイ
ドペプチド複合体の形成により介在されると思われた（Pillotなど., 1997a；Li
nsなど., 1999）。11個のアミノ酸残基から成る両親媒性正味陰性ペプチド（WAE
II）のフソゲン性（fusogenic properties）は、そのペプチドがリポソーム膜に
結合される場合、強く促進され；ペプチドの融合活性はpH及び膜融合に無関係で
あるように思われ、そして標的膜は、リシン結合されたホスファチジルエタノー
ルアミン（PE−K）を組み込むことによって提供される正の電荷を必要とした。
結合されたペプチドはPE−Kとの非特異的静電相互作用を通して小胞の凝集を引
き起こすが、その遊離ペプチドはPE−K小胞の凝集を誘発しなかった（Pecheurな
ど., 1997）。
【００７５】 多くの研究は、細胞又はリポソームの膜における脂質二層への挿入の後、ペプ
チドのα−ヘリックス二次構造の安定化がペプチドの膜融合性質を担当すること
を示唆し；Zn2+が、α−ヘリックス構造を安定化するので、ペプチドのフソゲン
活性を増強する。例えば、ヒスタチン−５、すなわち認識される亜鉛結合モチー
フのC−末端の機能的ドメインに位置する唾液抗微生物ペプチドのHEXXHドメイン
は、らせん形コンホメーション形で存在する（Martinなど., 1999; Melinoなど.
, 1999; Curtain など., 1999）。
【００７６】 融合ペプチドは、ペプチド基材の遺伝子供給システムを創造するために、DNA
プラスミドにより配合されて来た。プラスミドを40〜200nmの超微粒子に縮合す
るために使用されるYKAKnWKペプチドと、エンドソームからのプラスミドの開放
を促進するよう企画されたpH−感受性溶解剤であるGLFEALLELLESLWELLLEA（配列
番号３）両親媒性ペプチドとの組合せが、β−ガラクトシダーゼレポーター遺伝
子を含む発現システムを増強した（Duguidなど., 1998）。
【００７７】 DOPE（ジオレイルホスファチジルエタノールアミン）はフソゲン脂質であり；
N−メトキシ−スクシニル−Ala−Ala−Pro−Val−DOPEのエラスターゼ分解は、
封入された蛍光プローブ、すなわちカルセインを細胞質中に供給するために、こ
の誘導体をDOPE（全体的に正の電荷）に転換した（Pakなど., 1999）。β−エン
ドフィンmRNAの領域に対して相補的な30個の塩基のオリゴデオキシヌクレオチド
配列は、それがフソゲン性質を付与されたジパルミトイル−DL−α−ホスファチ
ジル−L−セリンを含む小さな単層小胞（50nm）内に封入された後、細胞培養物
におけるβ−エンドフィン生成の濃度−依存性阻害を誘発した（Frestaなど., (
1998）。 本発明の方法において有用な追加のフソゲンペプチドが下記表１〜４に記載さ
れる。
【００７８】
【表１】
【００７９】
【表２】
【００８０】
【表３】
【００８１】
【表４】
【００８２】 ミセルが形成された後、それらは、薬剤含有リポソームを形成するために、有
効量の小胞形成脂質と共に混合される。本発明のための有用な脂質は、予備製造
された中性リポソーム、粉末での脂質、PEG−DSPE又は水素化された大豆ホスフ
ァチジルコリン（HSPC）を包含する。小胞−形成脂質は、外層の脂質組成物を提
供する最終複合体の特定の程度の流動性又は剛性を達成するよう選択される。そ
れらは10〜60％のコレステロールを含み、残りの量は、14〜22個の範囲の炭化水
素鎖長を有し、そして１又は複数の二重C＝C結合により飽和されたリン脂質、例
えばホスファチジルコリン（PC）又はホスファチジルエタノールアミン（PE）で
ある。
【００８３】 本発明に使用するための好ましい脂質は、コレステロール10〜60％、水素化さ
れた大豆ホスファチジルコリン（HSPC）40〜90％及び誘導体化された小胞−形成
脂質PEG−DSPE１〜７％である。リポソームは、親水性ポリマーPEGにより被覆さ
れる外側の脂質ニ層表面を提供する。PEG鎖は、1,000〜5,000ドルトンの分子量
を有する。他の親水性ポリマーは、ヒアルロン酸、ポリビニルピロリドン、DSPE
、ヒドロキシエチルセルロース及びポリアスパルトアミドを包含する。PEG−DSP
C及びPEG−HSPCは、Syngenaから市販されている。 小胞形成脂質との混合の前、エタノール又は他の有機溶媒は、当業界において
知られているいずれかの方法、例えば透析膜を通してのミセルの透析により除去
され得る。
【００８４】 診断及び治療方法： 本発明者は、ヒト癌、例えば乳癌、前立腺癌、結腸癌、非小肺癌、膵臓癌、精
巣癌、卵巣癌、頸部癌、頭及び首の鱗状細胞癌を有する対象、例えば哺乳類、例
えばマウス、ラット、サル及びヒト患者の治療を提供する。１つの観点において
は、リポソーム中に封入されたシスプラチンの静脈内注入、及び封入されたシス
プラチンと封入されたドキソルビシン、フルオロデオキシウリジン、ブレオマイ
シン、アドリアマイシン、ビンブラスチン、プレドニソン、ビンクリスチン、タ
キソール又は放射線療法、封入されたオリゴヌクレオチド、抗癌性質を付与され
たリボザイム及び多くの抗癌遺伝子、例えばp53/Pax5/HSV−tk遺伝子との組合せ
が提供される。１つのアプローチは、次の２種の主要部分から成る：（ｉ）癌細
胞を標的化する能力、及び（ii）癌細胞を殺害する本発明者のアプローチの有効
性。
【００８５】 従って、本発明は、本発明の方法により得られる封入された薬剤と細胞とを接
触することを含んで成る、細胞にシスプラチン又は他の治療剤を供給するための
方法をまた提供する。本発明の方法により得られる封入された有効量の薬剤を、
対象に投与することを含んで成る、対象における腫瘍の増殖を阻害するための方
法がまた、本発明により提供される。脂質/ミセル配合の組成に依存して、有効
量の封入された薬剤の静脈内投与により対象における固形腫瘍及び転移を標的化
するための方法、及び封入された薬剤の有効量の投与による対象者における腫瘍
の細胞膜を貫通させる方法を含んで成る、対象における腫瘍の細胞膜を侵入する
ための方法がまた、提供され、ここで前記ミセルは遊離フソゲンペプチド又はフ
ソゲンペプチド−脂質接合体を含む。
【００８６】 前記方法は、インビトロ、エクスビボ又はインビボで実施され得る。 本発明の方法のインビトロ実施は、腫瘍生検の除去、又は腫瘍細胞を含む細胞
サンプルの培養を包含する。最終リポソーム複合体、又はシスプラチン封入の間
に生じるいずれかの中間体生成物（図１Aに示されるミセル）が、薬剤の組み込
みのために適切な条件下で細胞培養物と接触せしめられる。インビトロ方法は、
個々の患者のための最良の薬剤療法を決定するためのスクリーンとして有用であ
る。細胞成長又は増殖の阻害は、細胞又は腫瘍がこの療法により適切に処理され
ることを示す。個々の治療のための有効量の薬剤は、処理される腫瘍及び処理さ
れる対象により変化する。有効量は、当業者により実験的に決定され得る。
【００８７】 動物に投与される場合、前記方法は、個々の腫瘍型のための薬剤又は治療の効
能をさらに確かめるために有用である。適切な動物モデルの例として、SCIDマウ
ス又はヌードマウス（Balb/c NCR nu/nu 雌、Simonsen, Gilroy, CA）のグルー
プが、本明細書に定義されるように、約105〜約109個の癌又は標的細胞により皮
下接種され得る。腫瘍が確立されると、リポソームが投与される。
【００８８】 本明細書において使用される場合、“投与、供給される、又は投与される”と
は、究極的には、腫瘍塊状物に薬剤/リポソーム複合体を供給するいずれかの方
法を包含する。例としては、次のものを包含するが、但しそれらだけには限定さ
れない：局部適用、静脈内投与、非経口投与、又は腫瘍の周囲への皮下注射。腫
瘍サイズの低下を決定するための腫瘍測定は、週２度、カルパスを用いて、２次
元的に行われる。
【００８９】 インビボ投与に関しては、治療組成物は、非経口、すなわち静脈内、腹腔内、
皮下、鞘内、脊髄内、筋肉内、動脈内、門脈内又は腫瘍内投与される。より好ま
しくは、医薬組成物は、ボーラス注射により静脈内又は腫瘍内投与される。他の
方法においては、医薬製剤は、組織へのその製剤の直接的な適用により標的組織
と接触せしめられ得る。適用は、“局部”、“開放”又は“閉鎖”方法により行
われ得る。“局部”とは、環境、例えば皮膚、鼻咽頭、外耳道、眼、等に暴露さ
れる組織への医薬製剤の直接的な適用、肺、性殖器粘膜等への吸入を意味する。
“開放”とは、患者の皮膚の切開を包含し、そして医薬製剤が適用される基礎組
織の直接的な可視化を包含する。
【００９０】 これは、一般的に、手術方法、例えば肺に接近するための開胸、腹部内臓に接
近するための腹部開腹、又は標的組織への他の直接的手術アプローチにより達成
される。“閉鎖”方法とは、内部標的組織は直接的に可視化されないが、しかし
皮膚における小さな傷を通しての装置の挿入を通して接近される侵襲性方法であ
る。例えば、製剤は、針洗浄により腹膜に投与され得る。同様に、医薬製剤は、
腰椎穿刺、続いて、脊髄麻酔又は脊髄のメトラザミド画像化のために通常行われ
る患者の適切な位置決定の間、注入により髄膜又は脊髄に投与され得る。他方で
は、製剤は、内視鏡装置を通して投与され得る。
【００９１】 インビボ投与は、処理の間、１回の用量で、連続的又は断続的にもたらされ得
る。投与の最も効果的な手段及び用量を決定するための方法は、当業者に良く知
られており、そして治療のために使用される組成物、治療の目的、処理される標
的細胞、及び処理される対象により変化するであろう。１回又は複数回の投与が
、処置する医者により選択される用量レベル及びパターンにより行われ得る。剤
を投与するための適切な用量配合及び方法は、当業者により実験的に決定され得
る。
【００９２】 本発明の剤及び組成物は、医薬の製造に、及び従来の方法に従っての投与によ
るヒト及び他の動物の処理のために使用され得る。 理想的には、薬剤/脂質配合物は、疾病の部位で活性化合物のピーク濃度を達
成するよう投与されるべきである。これは、例えば、薬剤/脂質配合物の静脈内
注入により達成され得る。薬剤の所望する血液レベルが、疾病組織内に治療量の
活性成分を提供するために連続注入により維持され得る。効果的組合せの使用は
、個々の治療化合物又は薬剤が単独で使用される場合に必要とされるよりも低い
合計用量の個々の成分薬剤を必要とする治療的組合せを提供することが企画され
、それにより悪影響を低める。
【００９３】 薬剤/脂質配合物は単独で投与されることが可能であるが、少なくとも1つの上
記の活性成分を、そのための１又は複数の医薬として許容されるキャリヤー及び
任意には他の治療剤を含んで成る医薬配合物としてそれを提供することが好まし
い。個々のキャリヤーは、配合物中の他の成分と適合でき、そして患者に対して
無害であることにおいて、“許容できる”べきである。 本明細書に記載されるように、固形腫瘍への抗癌薬剤及び遺伝子の供給のため
のビークルの第３世代の企画は、存在する技法に対する次の５種の主要改良点の
結果であった：
【００９４】 １）立体的に安定化されたリポソーム中への抗腫瘍薬剤の封入は、多種のそれ
らの毒性を減じた。これは、化学療法を受ける癌患者の悪夢を終りにすることが
予測される。現在使用下のほとんどの抗腫瘍薬剤は、重度の副作用、例えば髪の
損失、嘔吐、体重の低下を有し、そして腎臓、脳、肝臓及びすべての他の生存組
織に梗塞形成及び損傷を引き起こす。本明細書に記載される抗腫瘍薬剤は、脂質
ニ層の内腔内に隠され、ほとんどの組織には見えず、そしてそれらの腫瘍標的中
に濃縮するが、しかし身体中のあらゆる組織においては濃縮しない。固形腫瘍に
よるそれらの摂取に基づいて、それらは正常な細胞を傷つけないで、癌細胞に特
定の細胞毒性効果を付与する。
【００９５】 ２）身体じゅうの固形腫瘍及びそれらの転移の標的化。95％以上の癌患者は、
一次腫瘍からではなく、転移に付随する合併症に屈服する。本発明の遺伝子及び
薬剤供給システムは、一次腫瘍のみならず、また腫瘍のサイズに関係なく、動物
及び身体におけるあらゆる転移に達する遺伝子及び薬剤小球の静脈内投与の後、
免疫系を回避するよう企画されている。それは、本発明の薬剤及び遺伝子担持の
ビークルの長い循環時間、及び形成（増殖する腫瘍における新脈管形成）のその
初期段階でのその不完全性及び漏れのために、及び増殖する固形腫瘍と正常な身
体組織との間での流体静力学的圧力の差異のために、腫瘍の血管内皮を通しての
それらの管外遊出に基づかれている。本発明のリポソームは、効果的な封入及び
腫瘍標的化を可能にする、それらの内部及び外部脂質層の間に異なった組成を有
する。
【００９６】 ３）癌細胞によるリポソーム小球の摂取。リポソーム小球は、細胞膜との融合
を促進することができる。他で開発された類似する“秘密”小球は、癌細胞の膜
バリヤーを通過することができない。 ４）抗癌薬剤、オリゴヌクレオチド及び遺伝子についてのほぼ100％のリポソ
ーム封入効率の達成が、主要な進歩である。これは、薬剤及び遺伝子の最少の損
失及び費用効率のより使用を意味する。それはまた、抗癌剤小球の製造において
、より単純な段階を付与した。 ５）本明細書に記載されるユニークな技術は、数日よりもむしろ数ヶ月間、抗
癌剤小球に遺伝子の発現を維持する制御DNA配列を同定することができる。これ
は、癌患者のより少ない処理及び低い苦痛を付与する。それはまた、高いレベル
の抗癌遺伝子の発現のために、強い治療効果を付与し；弱い調節のDNAの制御下
に配置された同じ遺伝子は無効化であろう。 次の例は、例示的であって、本発明を限定するものではない。
【００９７】 実施例 ミセル及び脂質−封入されたシスプラチンの調製： 封入のための１つの処理方法は、（A）約５mg/mlの最終シスプラチン濃度を達
成するために、少なくとも30％のエタノール、0.1MのトリスHCl（pH7.5）におい
て、シスプラチン（粉末又は他の形での）とDPPG（ジパルミトイルホスファチジ
ルグリセロール）又は他の負に荷電された脂質分子とを、１：１〜１：２のモル
比で混合する段階を包含する。シスプラチンとDPPGとの間のモル比の変動はまた
、異なった組織を標的化する治療価値のものである。
【００９８】 （B）50℃での加熱段階。段階A及びB間、黄色のシスプラチン粉末の沈殿物を
付与する傾向がある初期の粉末懸濁液を、ゲル（コロイド）形に転換し；段階A
及びBの間、正に荷電され、そして抗腫瘍活性を付与されたシスプラチンの活性
形である水性形（クロライド原子の加水分解及びプラスチンに結合される水分子
によるそれらの置換による）へのシスプラチンの転換が存在し；水性シスプラチ
ンを、30％エタノールにおいてミセル中に、負に荷電された脂質により同時に複
合体化する。このシスプラチン−DPPG静電複合体は、腫瘍根絶においては、遊離
シスプラチンよりも、すでに改良された性質を有する。
【００９９】 （C）その標的に達した後、腫瘍細胞膜を通過することにおける複合体（及び
段階Dの後の最終配合物の；下記参照のこと）の性質を、複合体にこの性質を付
与するペプチド及び他の分子の添加により改良する。（D）シスプラチン−DPPG
ミセル複合体を、予備製造されたリポソームの直接的な添加、続いて、塩溶液に
対する透析及びそれらを100〜160nmの直径に小さくするための膜を通しての押し
出しにより、シスプラチン−DPPG単層を封入するリポソーム又は他のタイプの複
合体に転換する（図１の下部）。それは、本発明の最終シスプラチン配合物の外
面の組成を決定する添加されたリポソームの脂質組成である。 工程（A）の変化はドキソルビシン及び他の正に荷電した抗癌化合物の封入を
可能にする。中性又は負に荷電された化合物への正に荷電されたグループの添加
は、同様に、リポソーム中へのそれらの封入を可能にする。
【０１００】 治療用途： 90日−開放エストロゲンペレットを、SCID雌マウスに皮下移植した。0.1mlのP
BS中7.5百万のMCF−７（ATCCから入手できるヒト乳癌）を、乳脂肪パッドで、マ
ウスに皮下注射した。腫瘍の確立の後、0.1mlのシスプラチンリボソームを、試
験静脈でマウスに静脈内注射した。結果は図２〜４に示される。 本発明は詳細且つ特定の態様で記載されて来たが、種々の変更及び修飾が本発
明の範囲内で行われ得ることは、当業者に明らかであろう。
【０１０１】 参考文献 Ban M. Hettich D, N (1994) Nephrotoxicity mechanism of cis-platinum (I
I) diamine dichloride in mice. Toxicol Lett, 71 (2): 161-8 Bellon SF, Coleman JH and Lippard SJ (1991) DNA Unwinding Produced by
Site-Specific Intrastrand Cross-Links of the Antitumor Drug cis-Diammine
dichlopoplatinum (II). Biochemistry 30, 8026-8035. Bongartz J-P, Aubertin A-M, Milhaud PG, and Lebleu B (1994) Improved b
iological activity of antisense oligonucleotides conjugated to a fusogen
ic peptide. Nucleic Acids Res 22, 4681-4688. Boulikas T (1992) Evolutionary consequences of preferential damage and
repair of chromatin domains. J. Mol. 35, 156-180.
【０１０２】 Boulikas, T (1996a) The nonuniform repair of active and inactiv chroma
tin domains. Int J Oncol 8, 65-75. Boulikas T (1996b) A. unified model explaining the preferential repair
of active over inactive genes and of the transcribed over the nontransc
ribed strand: a leading role for transcription factors and matrix anchor
age. Int J Oncol 8, 77-84. Boulikas T (1996c) DNA Iesion-recognizing proteins and the p53 connect
ion. Anticancer Res 16, 225-242. Boulikas T (1998a) Status of gene of gene therapy in 1997: molecular m
echanisms, disease targets, and clinical applications. Gene Ther Mol Bio
l 1, 1-172.
【０１０３】 Boulikas T (1998b) Nucleocytoplasmic trafficking: implications for the
nuclear import of plasmid DNA during gene therapy. Gene ther Mol Biol,
713-740. Brown SJ, Kellett PJ and Lippard SJ (1993) Ixrl, a Yeast Protein That
Binds to Platinated DNA and Confers Sensitivity to Cisplatin. Science 26
1, 603-605. Brutn SL, Pil PM, Essigrnan JM, Housman DE, and Lippard SJ (1992) Isol
ation and characterization of human cDNA clones encoding a high mobility
group box protein that recognizes structural distortions to DNA caused
by binding of the anticancer agent cisplatin. Proc Natl Acad Sci USA 89,
2307-2311.
【０１０４】 Buchanan RL and Gralla JD (1990) Cisplatin Resistance and Mechanism in
a Viral Test System: SV40 Isolates That Resist Inhibition by the Antitu
mor Drug Have Lost Regulatory DNA. Biochemistry 29, 3436-3442. Caraceni A, Martini C, Spatti G, Thomas A, Onofrj M (1997) Recovering
optic neuritis during systemic cisplatin and carboplatin chemotherapy. A
cta Neurol Scand, 96 (4): 260-1. Chao CC-K, Huang S-L and Lin-Chao S (1991) Ca2+-mediated inhibition of
a nuclear protein that recognizes UV-damaged DNA and is constitutively
overexpressed in resistant human cells: DNA-binding assay. Nucleic Acids
Res. Nucleic Acids Res. 19,6413-6418. Chu G and Chang E (1988) Xeroderma Pigmentosum Group E Cells Lack a Nu
clear Factor That Binds to Damaged DNA, Science 242, 564-567. Chu G and Chang E (1990) Cisplatin-resistant cells express increased l
evels of a factor that recognizes damaged DNA. Proc Natl Acad Sci USA 87
,3324-3327.
【０１０５】 Clugston CK, Mclaughlin K, Kenny MK and Brown R (1992) Binding of Huma
n Singles-Stranded DNA Binding Protein to DNA Damaged by the Anticancer
Drug cis-Diamminedichloroplatinum (II). Cancer Res 52,6375-6379. Creuzenet C, Durand C, Haertle T (1997) Interaction of alpha s2-and be
ta-casein signal peptides with DMPC and DMPG liposomes. Peptides, 18 (4)
: 463-72. Cutain, C, Separovic F, Nielsen K, Craink D, Zhong Y, Kirkpatrick A (1
999) The interactions of the N-terminal fosogenic peptide of HIV-I gp41
with neutral phospholipids. Eur Biophys J, 28 (5): 4270-36. Decout A, Labeur C, Vanloo B, Goethals M, Vandekerckhove J, Brasseur R
, Rosseneu M (1999) Contribution of the hydrophobicity grandient to the
secondary structure and activity of fusogenic peptides. Mol Membr Biol,
16 (3): 237-46.
【０１０６】 Donahue BA, Augot M, Bellon SF, Treiber DK, Toney JH, Lippard SJ and E
ssigmann JM (1990) Characterization of a DNA Damage-Recogition Protein f
rom Mammalian Cells That Binds Specifically to Intrastrand d(GPG) and d(
ApG) DNA Adducts of the Anticancer Drug Cisplatin. Biochemistry 29, 5872
-5880. Dugnid JG, Li C, Shi m, Logan MJ, Alila H, Rolland A, Tomlinson E, Spa
rrow JT, Smith LC (1998) A physicochemical approach for predicting the e
ffectiveness of peptidebased gene delivery systems for use in plasmid-ba
sed gene therapy. Biophys J, 74 (6): 2802-14. Eapen S, Green M, Ismail IM (1985) Kinetic studies on the diaqua form
of cis-platin and various nucleobases, J Inorg Biochem, 24 (3): 232-7. Eliopoulos AG, Kerr DJ, Herod J, Hodgkins L, Krajewski S, Reed JC, You
ng LS (1995a) The control of apoptosis and drug resistance in ovarian ca
ncer: influence of p53 and Bcl-2. Oncogene, 11 (7): 1217-28. Caraceni A, Martini C, Spatti G, Thomas A, Onofrij M (1997) Recovering
optic the c-myc but not the cH-ras promoter by platinum compounds. Bioc
hem Pharmacol, 50 (1): 33-8.
【０１０７】 Farhood H, Gao X, Son K, Yang YY, Lazo JS, Huang L, Barsoum J, Bottega
R, Epand RM (1994) Cationic liposomes for direct genc transfer in thera
py of cancer and other diseases. Ann N Y Acad Sci, 716: 23-34; discussio
n 34-5. Fresta M, Chillemi R, Spampinato S, Sciuto S, Puglisi G (1998) Liposom
al delivery of a 30-mer antisense oligodeoxynucleotide to inhibit proopi
omelanocortin expression. J Pharm. Sci, 87 (5): 616-25. Ghosh JK, Shai Y (1999) Direct Evidence that the N-Terminal Heptad Rep
eat of Sendai Virus Fusion Protein Participates in Membrane Fusin. J mol
Biol, 292 (3): 531-546.
【０１０８】 Green M and Loewenstein PM (1988) Autonomous functional domains of che
mically synthesized human immunodeficiency virus tat transactivator prot
ein. Cell 55, 1179-1188, Gupta D, Kothekar V (1997) 500 picosecond molecular dynamics simulatio
n of amphiphilic polypeptide Ac (LKKL) 4 NHEt with 1,2 di-mysristoyl-sn-
glycero-3-phosphorylcholine (DMPC) molecules. Indian J Biochem Biophys,
34 (6): 501-11 Holler E, bauer R, Bernges F (1992) Monofunctional DNA-platinum (II) a
dducts block frequentl DNA polymerases. Nucleic Acids Res 1992 May 11;20
(9): 2307-12.
【０１０９】 Hughes EN, Engelsberg BN and Billings PC (1992) Purification of Nuclea
r Proteins That Bind to Cisplatin-damaged DNA. J. Biol. Chem. 267,12520-
12527. Judice JK, Tom JY, Huang W, Wrin T, Vennari J, Petropoulos CJ, McDowel
l RS (1997) Inhibition of HIV type 1 infectivity by constrained alpha-he
lical peptides: implications for the viral fusion mechanism. Proc Natl A
cad Sci U S A, 94 (25): 13426-30. Kim JC, Lee MH, Choi SK (1998) Synthesis and antitumor evaluation of c
is-(1,2-diaminoethane) dichlopoplatinum (II) complexes linked to 5-and 6
-methyleneuracil and-uridine analogues, Arch Pharm Res, 21 (4): 465-9. Kono K, Nishii H, Takagishi T (1993) Fusion activity of an amphiphilic
polypeptide having acidic amino acid residues: generation of fusion act
ivity by alpha-helix formation and charge neutralization. Biochem biophy
s Acta, 1164 (1): 81-90.
【０１１０】 Lambert G, Decout A, Vanloo B, Rouy D, Duverger N, Kalopissis A, Vande
kerckhove J, Chambaz J, Brasseur R, Rosseneu M (1998) The C-terminal hel
ix of human apolipoprotein all promotes the fusion of unilamellar liposo
mes and displaces apolipoprotein AI from high-density lipoproteins. Eur
J Biochem, 253(1): 328-38. Lee S, Aoki R, Oishi O, Aoyagi H, Yamasaki N (1992) Effectof amphiputh
ic peptides with different alpha-helical contents on liposome-fusion. Bi
ochim Biophys Acta, 1103(1): 157-62. Lelkes PI, Lazarovici P (1988) Pardaxin induces aggregation but not fu
sion of phosphatidylserine vesicies. FEBS Lett, 230(1-2): 131-6.
【０１１１】 Lins L, Thomas-Sounarmon A, Pillot T, Vandekerchkhove J, Rosseneu M, B
rasseur R (1999) Molecular determinants of the interaction between the C
-terminal domain of Alzheimer’s beta-amyloid peptide and apolipoprotein
E alpha-helices. J Neurochem, 73(2): 758-69. Macosko JC, Kim CH, Shin YK (1997) The membrane topology of the fusion
peptide region of influenza hemagglutinin determined by spin-labeling E
PR, J Mol Biol, 267 (5): 1139-48. Macreadie IG, Lowe MG, Curtain CC, Hewish D, Azad AA (1997) Cytotoxici
ty resulting from addition of HIV-1 Nef N-terminal peptides to yeast and
bacterial cells. Biochem Biophys Res Commun, 232 (3): 707-11. Martin F and Boulikas T (1998) The challenge of liposomes in gene ther
apy. Gene Ther Mol Biol 1, 173-214.
【０１１２】 Martin I, Pecheur EI, Ruysschaert JM, Hoekstra D (1999) Membrane fusio
n induced by a short fusogenic peptide is assessed by its insertion and
orientation into target bilayers. Biochemistry, 38(29): 9337-47. Martin I, Ruysschaert JM (1997) Comparison of lipid vesicle fusion ind
uced by the putative fusion peptide of fertilin (a protein active in spe
rm-egg fusion) and the NH2-terminal domain of the HIV2 gp41. FEBS Lett,
405(3):351-5. Massari S, Colonna R (1986) Gramicidin induced aggregation and size in
crease of phosphatidylcholine vesicles. Chem Phys Lipids, 39(3): 203-20. McLaughlin K, Coren G, Masters J, Brown R (1993) Binding activities of
cis-platin-damage-recognition proteins in human tumour cell lines. Int
J Cancer, 53(4): 662-6.
【０１１３】 Melino S, Rufini S, Sette M, Morero R, Grottes A, Paci M, Petruzzelli
R (1999) Zn(2+) ions selectively induce antimicrobial salivary peptide h
istatin-5 to fuse negatively charged vesicles. Identification and charac
terization of a zinc-binding motif present in the functional domain. Bio
chemistry, 38(30): 9626-33. Midoux P, monsigny M (1999) Efficient gene transfer by histidylated po
lylysine/pDNA complexes. Bioconjug Chem, 10(3): 406-11. Morikawa K, Honda M, Endo K, Matsumoto T, Akamatsu K, Mitsui H, Koizum
i M (1990) Syntesis of platinum complexes of 2-aminomethylpyrrolidine de
rivatives for use as carrer ligands and their antitumor activities. Chem
Pharm Bull (Tokyo). 38(4): 930-5.
【０１１４】 Morikawa K, Honda M, Endoh K, Matsumoto T, Akamatsu K, Mitsui H, Kozum
i M (1990) Synthesis of platinum complexes of 2-aminomethypyrrolidine de
rivatives for use as carrier ligands and their antitumor activities. Che
m Pharm Bull (Tokyo), 38(4): 930-5. Murata M, Kagiwada S, Hishida R, Ishiguro R, Ohnishi S, Takahashi S (1
991) Modification of the N-terminus of membrane fusion- active peptides
blocks the fusion activity. Biochem Biophys Res Commun, 179(2): 1050-5. Mymryk JS, Zaniewski E and Archer TK (1995) Cisplatin inhibits chromat
in remodeling, transcription factor binding, and transcription fromo the
mouse mammary tumor virus promoter in vivo. Proc natl Acad Sci USA 92,2
076-2080.
【０１１５】 Niidome T, Kimura M, Chiba T, Ohmori N, Mihara H, Aoyagi H (1997) Memb
rane interaction of syntetic peptides related to he putative fusogenic r
egion of PH-30 alpha, a protein in sperm-egg fusion. J Pept Res, 49(6):5
63-9. Oliver T and Mead G (1993) Testicalar cancer. Curr Opin Oncol 5,559-56
7. Ormerod MG, O’Neill C, Robertson D, Kelland LR, Harrap KR (1996) cis-
Diamminedichloroplatinum(II)-induced cell death through apoptosisi in se
nsitive and resistant human ovarian carcinoma cell lines. Cancer Chemoth
er Pharmacol, 37(5): 463-71. Pak CC, Erukulla RK, Ahl PL, Janoff AS, Meers P (1999) Elastase activa
ted liposomal delivery to nucleated cells. Biochim Biophys Acta, 1419(2)
:111-26.
【０１１６】 Papadopoulou MV, Ji M, Bloomer WD (1998) NLCQ-1, a novel hypoxic cytot
oxin potentiation of melphalan, cisDDP and cyclophosphamide in vivo. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 42(4): 775-9. Parente RA, Nir S, Szoka FC Jr (1988) pH-dependent fusion of phosphati
dylcholine small vesicles. Induction by a synthetic amphipathic peptide. J Biol Chem, 263(10): 4724-30. Partidos CD, Vohra P, Steward MW (1996) Priming of measles virus-speci
ffic CTL responses after immunization with a CTL epitope linked to a fus
ogenic peptide. Virology, 215(1): 107-10. Pecheur EI, Hoekstra D, Sainte-Marie J, Maurin L, Bienvenue A, Philipp
ot JR (1997) Membrane anchorage brings about fusogenic properties in a s
hort synthetic peptide. Biochemistry, 36(13): 3773-81. Peelman F, Vanloo B, Perez-Mendez O, Decout A, Uerschelde JL, Labeur C
, Vinaimont N, Verhee A, Duverger N, Brasseur R, Vandekerckhove J, Taver
nier J, Rosseneu M (1999) Characterization of functional residues in the
interfacial recognition domain of lecithin cholesterol acyltransferase
(LCAT). Protein Eng, 12(1): 71-8.
【０１１７】 Pereira FB, Goni FM, Muga A, Nieva JL (1997) Permeabilization and fusi
on of uncharged lipid vasicles induced by the HIV-1 fusion peptide adopt
ing an extended conformation: dose and sequence effects J, 73(4): 1977-8
6, Pil PM and Lippard SJ (1992) Specific Binding of Chromosomal Protein H
MGI to DNA Damaged by the Anticancer Drug Cisplatin. Science 256,234-237
. Pillot T, Drouet B, Queille S, Labeur C, Vandekerchkhove J, Rosseneu M
, Pincon-Raymond M, Chambaz J (1999) The nonfibrillar amyloid beta-pepti
de induces apoptotic neuronal cell death: involvement of its C-terminal
fusogenic domain, J Neurochem, 73(4): 1626-34.
【０１１８】 Pillot T, Goethals M, Vanloo B, Lins L, Brasseur R, Vandekerckhove J,
Rosseneu M (1997a) Specific modulation of the fusogenic properties of th
e Alzheimer beta-amyloid peptide by apolipoprotein E isoforms. Eur J Bio
chem, 243(3): 650-9. Pillot, Lins L, Goethals M, Vanloo B, Beatt J, Vandekerckhove J, Rosse
neu M, Brasseur R (1997b) The 118-135 Peptide of the human prion protein
forms amylord fibrits and induces liposome fusion. J Mol Biol, 274(3):
381-93. Prasad KN, Hernandez C, Edwards-Presad J, Nelson J, Robinson WA (1994)
Modification of the tamoxifen, cis-platin, DTIC, and interferon-alpha 2
b on human melanoma cells in culture by a mixture of vitamins, Nutr Canc
er, 22(3): 233-45.
【０１１９】 Rodriguez-Crespo I, Gomez-Gutierrez J, Nieto M, Peterson DL, Gavilanes
F (1994) Prediction of a putative fusion peptide in the S protein of he
patitis B virus. J Gen Virol, 75 (Pt3): 637-9. Rodriguez-Crespo I, Nunez E, Yelamos B, Gomez-Gutierrez J, Albar JP, P
eterson DL, Gavilanes F (1999) Fusogenic activity of hepadnavirus peptid
es corresponding to sequences downstream of the putative cleavage site.
Virology, 261(1): 133-42. Roth, J.A. など. (1996), “Retrovius-mediated wild-typep53 gene transf
er to tumors of patients with lung cancer” Nature Med. 2: 985-991.
【０１２０】 Schroth-Diez B, Ponimaskin E, Reverey H, Schmidt MF, Hermann A (1998)
Fusion activity of transmembrane and cytoplasmic domain chimeras of the
influenza virus glycoprotein hemagglutinin. J Virol, 72(1): 133-41. Stathopoulos GP, Rigatos S, Malamos NA (1999) Paclitaxel combined with
cis-platin as second-line treatment in patients with advanced non-small
cell lung cancers refractory to cis-platin. Oncol Rcp, 6(4): 797-800. Suenaga M, Les S, Park NG, Aoyagi H, Kato T, Umeda A. Amako K (1989) B
asic amphipathic helical peptides induce destabilization and fusion of a
cidic and neutral liposomes. Biochim Biophys Acta, 981(1): 143-50 Toney JH, Donahue BA, Kellett PJ, Bruhn SL, Essigmann JM and Lippard S
J (1989) Isolation of cDNAs encoding a human protein that binds selectiv
ely to DNA modified by the anticancer drug cis-diammins-dichloroplatinum
(II). Proc Natl Acad Sci USA 86,8328-8332.
【０１２１】 Toumois H, Fabrie CH, Burger KN, Mandersloot J, Hilgers P, van Dalen H
, de Gier J, de Kruijff B (1990) gramicidin A induced fusion of large un
ilamellar dioleoylphosphatidylcholine vesicles and its relation to the i
nduction of type II nonbilayer structures. Biochemistry, 29(36): 8297-30
7. Ulrich AS, Tichelaar W, Forster G, Zschomig O, Weinkauf S, Meyer HW (1
999) Ultrastructural characterization of peptide-induced membrane fusion
and peptide self- assembly in the lipid bilayer. Biophys j, 77(2): 829-
41. Vergote I, Himmelmann A, Frankendal B, scheistroen M, Vlachos K, Trope
C (1992) Hexamethylmelamine as second-line therapy in platin-resistant
ovarian cancer, Gynecol Oncol, 47(3): 282-286. Vilpo JA, Vilpo LM, Szymkowski De, O’Donovan A and Wood RD (1995) An
XPG DNA repair defect causing mutagen hypersensitivity in mouse leukemia
L1210 cells. Mol Cell Biol 15, 290-297.
【０１２２】 Vonrche V, Callebaut I, Kettmann R, Brasseur R, bumy A, Portetelle D (
1992) The 19-27 amino acid segmennto of gp 51 adopts an amphiphilic stru
cture and plays a key role in the fusion events induced by bovine leukem
ia virus. J Biol Chem, 267(21): 15193-7. Zhang YQ, Jiang XT, Sun QR, Zhang GQ, Wang Y (1995) Studies on CDDP-al
bumin microspheres for hepatic arterial chemoembolization. Yao Hsueh Pao
, 30(7): 543-8 〔Article in Chinese〕
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、シスプラチン封入を示す。
【図２】 図２は、封入されたシスプラチンの注入の３〜４後でのSCIDマウスにおけるMC
F−７腫瘍の緩解を示す。
【図３】 図３は、シスプラチンによる処理を伴って又は伴わないでのSCIDマウスの腫瘍
の組織学を示す。図３Aは、SCIDマウスにおいて増殖された未処理のMCF−７腫瘍
を示す。40倍の倍率。腫瘍組織の構造特徴の相同パターンを注意すること。図３
Bは、シスプラチン−処理されたマウスを示す（４回の注射）。細胞はアポプト
シス性であり、構造体中に細胞のグループが存在し、そして核はアポプトシス細
胞の特徴であるより大きく且つより濃く染色する。図３Cは、筋肉への侵入を示
す、未処理の動物からの腫瘍を示す。20倍の倍率。図３Dは、シスプラチン−処
理されたマウスを示す。侵入は明白ではない。20倍の倍率。
【図４】 図４は、封入されたシスプラチンにより処理された動物（A）と未処理の動物
（B）との間の腫瘍サイズの肉眼で見える（視学的）差異を示す。
【手続補正書】
【提出日】平成１３年１２月１０日（２００１．１２．１０）
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３Ａ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３Ａ】
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３Ｂ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３Ｂ】
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３Ｃ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３Ｃ】
【手続補正４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３Ｄ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３Ｄ】
【手続補正５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４Ａ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図４Ａ】
【手続補正６】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４Ｂ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図４Ｂ】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/573 Ａ６１Ｋ 31/573 31/704 31/704 31/7064 31/7064 31/7072 31/7072 45/00 45/00 47/28 47/28 47/34 47/34 47/42 47/42 48/00 48/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ， ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，Ｌ Ｃ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ， ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，Ｔ Ｊ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C076 AA19 BB13 CC27 DD63F DD70F EE23F EE41F FF16 4C084 AA13 AA19 MA02 MA24 MA66 NA10 ZB262 4C086 AA01 AA02 BA02 CB07 CB14 DA10 EA10 EA17 EA18 MA02 MA03 MA05 MA24 MA66 NA10 ZB26

Claims (28)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 シスプラチンミセルの生成方法であって、 ａ）シスプラチン混合物を形成するために、シスプラチン及びホスファチジル
    グリセロール脂質誘導体を、１：１〜１：２の範囲で組合し；そして ｂ）シスプラチンミセルを形成するために、段階ａ）の混合物と、有効量の少
    なくとも30％のエタノール溶液とを組合すことを含んで成る方法。
  2. 【請求項２】 シスプラチンミセルの生成方法であって、 ａ）シスプラチン/エタノール溶液を形成するために、シスプラチンと有効量
    の少なくとも30％のエタノール溶液とを組合し：そして ｂ）シスプラチンミセルを形成するために、前記溶液と、ホスファチジルグリ
    セロール脂質誘導体とを、１：１〜１：２の範囲で組合すことを含んで成る方法
    。
  3. 【請求項３】 前記ホスファチジルグリセロール脂質誘導体が、ジパルミト
    イルホスファチジルグリセロール（DPPG）、ジミリストイルホスファチジルグリ
    セロール（DMPG）、ジカプロイルホスファチジルグリセロール（DCPG）、ジステ
    アロイルホスファチジルグリセロール（DSPG）及びジオレイルホスファチジルグ
    リセロール（DOPG）から成る群から選択される請求項１又は２記載の方法。
  4. 【請求項４】 前記モル比が１：１である請求項１又は２記載の方法。
  5. 【請求項５】 有効量遊離フソゲンペプチド、フソゲンペプチド−脂質接合
    体又はフソゲンペプチド−PEG−HSPC接合体を、前記段階ａ）の混合物に組合す
    ことを含んで成り、ここで前記フソゲンペプチドは、N又はC−末端で一連の１〜
    ６個の負に荷電されたアミノ酸により誘導体化され、そして従って、静電的にア
    クアプラチンに結合できる請求項１又は２記載の方法。
  6. 【請求項６】 前記フソゲンペプチド又はフソゲンペプチド脂質接合体が、
    DOPE又はDOPE/カチオン性脂質を含んで成る請求項５記載の方法。
  7. 【請求項７】 請求項１又は２記載の方法により得られるシスプラチンミセ
    ル。
  8. 【請求項８】 請求項５記載の方法により得られるシスプラチンミセル。
  9. 【請求項９】 シスプラチンミセルを封入するための方法であって、有効量
    の小胞形成脂質と請求項１又は２記載のシスプラチンミセルを混合することを含
    んで成る方法。
  10. 【請求項１０】 請求項９記載の方法により得ることができる封入されたシ
    スプラチン。
  11. 【請求項１１】 前記脂質が、コレステロール10〜60％、水素された大豆ホ
    スファチジルコリン（HSPC）40〜90％及びポリエチレンリコール (PEG)−HSPC
    １〜７％から構成される予備製造された中性リポソーム、又は溶液での脂質、粉
    末での脂質及びPEG−DSPEから選択される請求項10記載の方法。
  12. 【請求項１２】 前記脂質が、10〜60％のコレステロールを含んで成る請求
    項10記載の方法。
  13. 【請求項１３】 対象に投与される場合、その免疫系のマクロファージ及び
    細胞を回避できるシスプラチン/脂質複合体を得るための方法であって、有効量
    の請求項９記載のシスプラチンミセルと、有効量のPEG−DSPE、PEG−DSPC又はヒ
    アルロン酸−DSPEとを混合することを含んで成る方法。
  14. 【請求項１４】 前記シスプラチンミセルからのエタノールの除去をさらに
    含んで成る請求項１又は２記載の方法。
  15. 【請求項１５】 前記エタノールの除去が、エタノールを除去するための透
    析膜を通してのミセルの透析による請求項14記載の方法。
  16. 【請求項１６】 請求項11記載の方法により得られる封入されたシスプラチ
    ン。
  17. 【請求項１７】 請求項13記載の方法により得られる封入されたシスプラチ
    ン。
  18. 【請求項１８】 細胞にシスプラチンを供給するための方法であって、前記
    細胞と、請求項15記載の封入されたシスプラチンとを接触せしめることを含んで
    成る方法。
  19. 【請求項１９】 細胞にシスプラチンを供給するための方法であって、前記
    細胞と、請求項17記載の封入されたシスプラチンとを接触せしめることを含んで
    成る方法。
  20. 【請求項２０】 対象における腫瘍の増殖を阻害するための方法であって、
    有効量の請求項16記載の封入されたシスプラチンを前記対象に投与することを含
    んで成る方法。
  21. 【請求項２１】 対象における腫瘍の増殖を阻害するための方法であって、
    有効量の請求項17記載の封入されたシスプラチンを前記対象に投与することを含
    んで成る方法。
  22. 【請求項２２】 対象における固形腫瘍及び転移を標的化するための方法で
    あって、有効量の請求項16又は17記載の封入されたシスプラチンの静脈内投与を
    含んで成る方法。
  23. 【請求項２３】 対象における腫瘍の細胞膜を侵入するための方法であって
    、請求項７記載の方法により得られる有効量のシスプラチンミセルを投与するこ
    とを含んで成る方法。
  24. 【請求項２４】 対象における腫瘍増殖を阻害するための方法であって、有
    効量の請求項10記載の封入されたシスプラチン、及びp53、pax5及びHSV−tk遺伝
    子から成る群から選択された遺伝子を前記対象に投与することを含んで成る方法
    。
  25. 【請求項２５】 有効量の封入されたガンシクロビルを投与することをさら
    に含んで成る請求項24記載の方法。
  26. 【請求項２６】 シスプラチンと組合されるべき遺伝子が、封入されたIL−
    ２、IL−４、IL−７、IL−12、GM−CSF，IFN−γ、TNF−α、RB、BRCA１、E1A、
    シトシンデアミナーゼ、並びに封入された５−フルオロシトシン、bcl−２、MDR
    −１、p21、p16、bcl−xs, E2F, IGFI, VEGF, TGF−β及び同様のもののいずれ
    か又はそれらの組合せである請求項24記載の方法。
  27. 【請求項２７】 請求項10記載の封入されたシスプラチン、及び封入された
    オリゴヌクレオチド、リボザイム、三重体（triplex）又はPNAを含んで成る組成
    物。
  28. 【請求項２８】 請求項10記載の封入されたシスプラチン、及びドキソルビ
    シン、フルオロデオキシウリジン、ブレオマイシン、アドリアマイシン、ビンブ
    ラスチン、プレドニゾン、ビンクリスチン及びタキソールから成る群から選択さ
    れた薬剤を含んで成る組成物。
JP2001536130A 1999-11-05 2000-10-27 シスプラチン及び他の薬剤又はリポソーム中に封入された遺伝子を用いてのヒト癌のための療法 Withdrawn JP2003513911A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/434,345 1999-11-05
US09/434,345 US6511676B1 (en) 1999-11-05 1999-11-05 Therapy for human cancers using cisplatin and other drugs or genes encapsulated into liposomes
PCT/US2000/029723 WO2001034130A1 (en) 1999-11-05 2000-10-27 Therapy for human cancers using cisplatin and other drugs or genes encapsulated into liposomes

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2011247471A Division JP5711099B2 (ja) 1999-11-05 2011-11-11 シスプラチン及び他の薬剤又はリポソーム中に封入された遺伝子を用いてのヒト癌のための療法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2003513911A true JP2003513911A (ja) 2003-04-15
JP2003513911A5 JP2003513911A5 (ja) 2007-02-15

Family

ID=23723848

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2001536130A Withdrawn JP2003513911A (ja) 1999-11-05 2000-10-27 シスプラチン及び他の薬剤又はリポソーム中に封入された遺伝子を用いてのヒト癌のための療法
JP2011247471A Expired - Fee Related JP5711099B2 (ja) 1999-11-05 2011-11-11 シスプラチン及び他の薬剤又はリポソーム中に封入された遺伝子を用いてのヒト癌のための療法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2011247471A Expired - Fee Related JP5711099B2 (ja) 1999-11-05 2011-11-11 シスプラチン及び他の薬剤又はリポソーム中に封入された遺伝子を用いてのヒト癌のための療法

Country Status (15)

Country Link
US (3) US6511676B1 (ja)
EP (1) EP1156789B9 (ja)
JP (2) JP2003513911A (ja)
CN (1) CN100562311C (ja)
AT (1) ATE321541T1 (ja)
AU (1) AU777151B2 (ja)
CA (1) CA2358948C (ja)
CY (1) CY1105628T1 (ja)
DE (1) DE60027039T2 (ja)
DK (1) DK1156789T3 (ja)
ES (1) ES2261251T3 (ja)
GR (1) GR1004168B (ja)
PT (1) PT1156789E (ja)
TW (1) TWI259770B (ja)
WO (1) WO2001034130A1 (ja)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006502233A (ja) * 2002-08-02 2006-01-19 トランセーブ，インク． 白金凝集物およびその製造方法
JP2009528340A (ja) * 2006-03-03 2009-08-06 ブリカス，パルテニオス 癌治療
JP2013536867A (ja) * 2010-09-02 2013-09-26 ザ・スクリプス・リサーチ・インステイチユート ナノ粒子ベースの腫瘍標的化薬剤送達
JP5532921B2 (ja) * 2007-05-14 2014-06-25 コニカミノルタ株式会社 リポソーム
JP2017075142A (ja) * 2015-10-13 2017-04-20 株式会社ケーナインラボ ヒトを除く哺乳動物への薬剤の投与方法

Families Citing this family (111)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995011986A1 (en) * 1993-10-27 1995-05-04 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York METHOD FOR GENERATING A SUBTRACTED cDNA LIBRARY AND USES OF THE GENERATED LIBRARY
US5710137A (en) 1996-08-16 1998-01-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Use of a melanoma differentiation associated gene (mda 7) for reversing a cancerous phenotype
US6511676B1 (en) * 1999-11-05 2003-01-28 Teni Boulikas Therapy for human cancers using cisplatin and other drugs or genes encapsulated into liposomes
AU1931801A (en) * 1999-11-29 2001-06-04 Advanced Research And Technology Institute, Inc. Sustained percutaneous delivery of a biologically active substance
US20030072794A1 (en) * 2000-06-09 2003-04-17 Teni Boulikas Encapsulation of plasmid DNA (lipogenes™) and therapeutic agents with nuclear localization signal/fusogenic peptide conjugates into targeted liposome complexes
US7807780B2 (en) * 2000-07-21 2010-10-05 Revance Therapeutics, Inc. Multi-component biological transport systems
US20040220100A1 (en) * 2000-07-21 2004-11-04 Essentia Biosystems, Inc. Multi-component biological transport systems
ES2260321T3 (es) * 2000-12-07 2006-11-01 Universiteit Utrecht Holding B.V. Composicion para el tratamiento de transtornos inflamatorios.
US8658202B2 (en) * 2001-04-25 2014-02-25 Western University Of Health Sciences Coated drug delivery formulations
US6759058B1 (en) * 2001-04-25 2004-07-06 Western Center For Drug Development College Of Pharmacy Western University Of Health Sciences Enteric-coated proliposomal formulations for poorly water soluble drugs
EP1424898A4 (en) * 2001-08-20 2008-04-02 Transave Inc TREATMENT OF CANCER BY INHALATION OF STABLE FORMULATIONS CONTAINING PLATINUM
AU2002323266B2 (en) * 2001-08-20 2008-04-24 Transave, Inc. Method for treating lung cancers
WO2003028696A2 (en) * 2001-10-03 2003-04-10 Celator Technologies Inc. Compositions for delivery of drug combinations
CA2383259A1 (en) 2002-04-23 2003-10-23 Celator Technologies Inc. Synergistic compositions
US7850990B2 (en) 2001-10-03 2010-12-14 Celator Pharmaceuticals, Inc. Compositions for delivery of drug combinations
WO2003075890A1 (en) * 2002-03-05 2003-09-18 Transave, Inc. Methods for entrapment of bioactive agent in a liposome or lipid complex
US20030180348A1 (en) * 2002-03-22 2003-09-25 Levinson R. Saul Transcellular drug delivery system
US20090060992A1 (en) * 2002-05-08 2009-03-05 University Of Central Florida Research Foundation, Inc., Preparation of magneto-vesicles with DOPE/DDAB layers
US20050152962A1 (en) * 2002-06-12 2005-07-14 Metselaar Josbert M. Composition for treatment of inflammatory disorders
US9186322B2 (en) * 2002-08-02 2015-11-17 Insmed Incorporated Platinum aggregates and process for producing the same
EP1393720A1 (en) * 2002-08-27 2004-03-03 Universiteit Utrecht Vesicle-encapsulated corticosteroids for treatment of cancer
JP5118302B2 (ja) * 2002-10-29 2013-01-16 トランセイブ， インク． 抗感染剤の徐放
US7879351B2 (en) * 2002-10-29 2011-02-01 Transave, Inc. High delivery rates for lipid based drug formulations, and methods of treatment thereof
US7718189B2 (en) * 2002-10-29 2010-05-18 Transave, Inc. Sustained release of antiinfectives
JP4874548B2 (ja) * 2002-11-26 2012-02-15 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 勾配によるリポソームへの薬物充填方法
US7670604B2 (en) 2002-12-13 2010-03-02 Aurelium Biopharma, Inc. Vimentin directed diagnostics and therapeutics for multidrug resistant neoplastic disease
US7550256B2 (en) * 2002-12-13 2009-06-23 Aurelium Biopharma, Inc. Vimentin directed diagnostics and therapeutics for multidrug resistant neoplastic disease
WO2004055517A2 (en) * 2002-12-13 2004-07-01 Aurelium Biopharma Inc. Nucleophosmin directed diagnostics and therapeutics for multidrug resistant neoplastic disease
US7226748B2 (en) * 2003-01-03 2007-06-05 Aurelium Biopharma, Inc. HSC70 directed diagnostics and therapeutics for multidrug resistant neoplastic disease
US7358042B2 (en) * 2003-03-14 2008-04-15 Aurelium Biopharma, Inc. Triosephosphate isomerase directed diagnostics and therapeutics for multidrug resistant neoplastic disease
WO2004087105A1 (en) * 2003-04-02 2004-10-14 Celator Pharmaceuticals, Inc. Combination formulations of platinum agents and fluoropyrimidines
US20060165744A1 (en) * 2003-05-22 2006-07-27 Neopharm, Inc Combination liposomal formulations
DE602004024909D1 (de) * 2003-08-13 2010-02-11 Univ South Florida Platinkomplexe zur behandlung von tumoren
US20050153935A1 (en) * 2003-09-12 2005-07-14 Iversen Patrick L. Compound and method for treating androgen-independent prostate cancer
US20050095283A1 (en) * 2003-09-16 2005-05-05 Aphios Corporation Compositions and methods for topically treating diseases
US8062891B2 (en) 2003-10-24 2011-11-22 Gencia Corporation Nonviral vectors for delivering polynucleotides to plants
US8039587B2 (en) 2003-10-24 2011-10-18 Gencia Corporation Methods and compositions for delivering polynucleotides
US20090208478A1 (en) * 2003-10-24 2009-08-20 Gencia Corporation Transducible polypeptides for modifying metabolism
US8133733B2 (en) 2003-10-24 2012-03-13 Gencia Corporation Nonviral vectors for delivering polynucleotides to target tissues
US8507277B2 (en) 2003-10-24 2013-08-13 Gencia Corporation Nonviral vectors for delivering polynucleotides
US20090123468A1 (en) 2003-10-24 2009-05-14 Gencia Corporation Transducible polypeptides for modifying metabolism
CN100471493C (zh) * 2003-12-17 2009-03-25 梅比欧法姆股份有限公司 含有奥沙利铂的脂质体制剂
US9211248B2 (en) 2004-03-03 2015-12-15 Revance Therapeutics, Inc. Compositions and methods for topical application and transdermal delivery of botulinum toxins
AU2005251676B2 (en) 2004-03-03 2011-09-29 Revance Therapeutics, Inc. Compositions and methods for topical diagnostic and therapeutic transport
US8784881B2 (en) * 2004-03-05 2014-07-22 Board Of Regents, The University Of Texas System Liposomal curcumin for treatment of diseases
AU2005223654A1 (en) * 2004-03-18 2005-09-29 Transave, Inc. Administration of cisplatin by inhalation
WO2005107712A1 (en) 2004-05-03 2005-11-17 Hermes Biosciences, Inc. Liposomes useful for drug delivery
CN101001633A (zh) * 2004-05-21 2007-07-18 特兰萨夫公司 肺病和肺病前期病症的治疗
CA2584673A1 (en) * 2004-11-08 2006-05-26 Transave, Inc. Methods of treating cancer with lipid-based platinum compound formulations administered intraperitoneally
CN102499981B (zh) 2005-03-03 2016-08-03 雷文斯治疗公司 用于局部施用和经皮肤递送肉毒杆菌毒素的组合物和方法
US20060283742A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Canel Lightning Co. Ltd. Multi-lamp display packaging for lamps with collapsible lampshades
US20080088046A1 (en) * 2006-10-13 2008-04-17 Steffen Panzner Amphoteric liposomes, a method of formulating an amphoteric liposome and a method of loading an amphoteric liposome
CA2523032A1 (en) 2005-10-07 2007-04-07 Immunovaccine Technologies Inc. Vaccines for cancer therapy
DK2650365T3 (en) 2005-10-18 2016-12-05 Prec Biosciences RATIONAL MEGANUCLEASES constructed with altered sequence specificity and DNA binding affinity
US9107824B2 (en) * 2005-11-08 2015-08-18 Insmed Incorporated Methods of treating cancer with high potency lipid-based platinum compound formulations administered intraperitoneally
US20070190182A1 (en) * 2005-11-08 2007-08-16 Pilkiewicz Frank G Methods of treating cancer with high potency lipid-based platinum compound formulations administered intraperitoneally
WO2007056236A2 (en) * 2005-11-08 2007-05-18 Transave, Inc. Methods of treating cancer with lipid-based platinum compound formulations administered intravenously
US20070190180A1 (en) * 2005-11-08 2007-08-16 Pilkiewicz Frank G Methods of treating cancer with high potency lipid-based platinum compound formulations administered intravenously
CA2630538A1 (en) * 2005-11-30 2007-06-07 Celator Pharmaceuticals, Inc. Localized delivery of drug combinations
US20070122350A1 (en) * 2005-11-30 2007-05-31 Transave, Inc. Safe and effective methods of administering therapeutic agents
ES2594368T3 (es) 2005-12-08 2016-12-19 Insmed Incorporated Composiciones a base de lípidos de antiinfecciosos para tratar infecciones pulmonares
DE102006040647A1 (de) * 2006-08-30 2008-03-13 Robert Bosch Gmbh Handwerkzeugmaschine
AP2009004851A0 (en) 2007-01-16 2009-06-30 Music Foundation For Res Dev Compositions and methods for diagnosing, treating,and preventing prostate conditions
US20100196455A1 (en) * 2007-05-04 2010-08-05 Transave, Inc. Compositions of Multicationic Drugs for Reducing Interactions with Polyanionic Biomolecules and Methods of Use Thereof
US9114081B2 (en) 2007-05-07 2015-08-25 Insmed Incorporated Methods of treating pulmonary disorders with liposomal amikacin formulations
US9119783B2 (en) 2007-05-07 2015-09-01 Insmed Incorporated Method of treating pulmonary disorders with liposomal amikacin formulations
US9333214B2 (en) 2007-05-07 2016-05-10 Insmed Incorporated Method for treating pulmonary disorders with liposomal amikacin formulations
WO2009097011A1 (en) 2007-08-17 2009-08-06 Celator Pharmaceuticals, Inc. Improved platinum drug formulations
CN101827613A (zh) * 2007-09-27 2010-09-08 免疫疫苗技术有限公司 在包括连续疏水相的载体中的脂质体在体内输送多核苷酸中的应用
US20100209452A1 (en) * 2007-10-03 2010-08-19 Immunovaccine Technologies, Inc Compositions comprising an antigen, an amphipathic compound and a hydrophobic carrier, and uses thereof
WO2009049089A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Washington University In St. Louis Ligand directed toroidal nanoparticles for therapy and diagnostic imaging
CN101868180A (zh) 2007-10-09 2010-10-20 圣路易斯华盛顿州立大学 成像粒子
DK2215223T3 (da) 2007-10-31 2013-07-22 Prec Biosciences Inc Rationelt konstruerede enkeltkæde-meganucleaser med ikke-palindrome genkendelsessekvenser
KR100890317B1 (ko) 2008-05-08 2009-03-26 고려대학교 산학협력단 플라티늄 항암제 조성물 및 제제
EP2296696B1 (en) * 2008-06-05 2014-08-27 ImmunoVaccine Technologies Inc. Compositions comprising liposomes, an antigen, a polynucleotide and a carrier comprising a continuous phase of a hydrophobic substance
WO2009156706A1 (en) * 2008-06-27 2009-12-30 University Of Strathclyde Pulmonary drug delivery with vesicles comprising non-ionic surfactants
US20100068302A1 (en) * 2008-09-17 2010-03-18 Traslational Cancer Drugs Pharma, S.L. Methods and compositions for the treatment of cancer
WO2010114922A1 (en) * 2009-03-31 2010-10-07 Agios Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cancer having an aberrant egfr or kras genotype
TWI437001B (zh) * 2009-04-06 2014-05-11 Food Industry Res & Dev Inst 氮雜芬酮（ａｚａｐｈｉｌｏｎｅ）化合物於調節核荷爾蒙受體活性之用途
WO2010135714A2 (en) 2009-05-22 2010-11-25 The Methodist Hospital Research Institute Methods for modulating adipocyte expression using microrna compositions
CN102038640B (zh) * 2009-10-26 2013-11-13 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 一种含有胆固醇的peg修饰物的脂质体药物及其制备方法
US9808500B2 (en) 2009-12-17 2017-11-07 Washington University Antithrombotic nanoparticle
JP2013514999A (ja) 2009-12-17 2013-05-02 ワシントン・ユニバーシティ 抗血栓性ナノ粒子
JP2013527157A (ja) * 2010-04-15 2013-06-27 ワシントン・ユニバーシティ プロドラッグ組成物、プロドラッグナノ粒子およびその使用方法
PL220281B1 (pl) 2011-09-23 2015-09-30 Inst Biochemii I Biofizyki Polskiej Akademii Nauk Szczepionka DNA, sposób indukowania odpowiedzi immunologicznej, przeciwciała specyficznie rozpoznające białko hemaglutyniny H5 wirusa grypy i zastosowanie szczepionki DNA
ES2855474T3 (es) 2011-10-06 2021-09-23 Immunovaccine Technologies Inc Composiciones de liposomas que comprenden un adyuvante que activa o incrementa la actividad de TLR2 y usos del mismo
CN102525928B (zh) * 2012-02-20 2014-04-02 中国药科大学 一种顺铂长循环脂质体及其制备方法
JP6402097B2 (ja) 2012-05-21 2018-10-10 インスメッド インコーポレイテッド 肺感染症を処置するためのシステム
US9717724B2 (en) 2012-06-13 2017-08-01 Ipsen Biopharm Ltd. Methods for treating pancreatic cancer using combination therapies
AU2013202947B2 (en) 2012-06-13 2016-06-02 Ipsen Biopharm Ltd. Methods for treating pancreatic cancer using combination therapies comprising liposomal irinotecan
JP2015524467A (ja) * 2012-08-13 2015-08-24 レギュロン、インク.Regulon, Inc. Ｌｉｐｏｐｌａｔｉｎを使用するがんの処置方法
JP2015530387A (ja) 2012-09-04 2015-10-15 エライゾン ファーマシューティカルズ， エルエルシー 脂質複合体化シスプラチンによる肺癌の再発防止
ES2813340T3 (es) 2012-09-21 2021-03-23 Intensity Therapeutics Inc Método de tratamiento del cáncer
WO2014052634A1 (en) * 2012-09-27 2014-04-03 The University Of North Carolina At Chapel Hill Lipid coated nanoparticles containing agents having low aqueous and lipid solubilities and methods thereof
WO2014070659A1 (en) * 2012-10-29 2014-05-08 The Regents Of The University Of California Composition of viral vectors in lecithin liposomes, preparation method and treatment methods
US10124066B2 (en) 2012-11-29 2018-11-13 Insmed Incorporated Stabilized vancomycin formulations
KR101947053B1 (ko) 2013-10-18 2019-02-12 도이체스 크렙스포르슝스첸트룸 전립선 특이적 막 항원（ｐｓｍａ）의 표지된 억제제, 조영제로서의 이의 용도 및 전립선암 치료용 약제
PT3142643T (pt) 2014-05-15 2019-10-28 Insmed Inc Métodos para o tratamento de infeções mico bacterianas pulmonares não tuberculares
US11318131B2 (en) 2015-05-18 2022-05-03 Ipsen Biopharm Ltd. Nanoliposomal irinotecan for use in treating small cell lung cancer
TWI724018B (zh) 2015-08-20 2021-04-11 英商益普生生物製藥有限公司 用於癌症治療之組合療法
JP2018528185A (ja) 2015-08-21 2018-09-27 イプセン バイオファーム リミティド リポソーム型イリノテカン及びオキサリプラチンを含む組み合わせ療法を使用して転移性膵臓癌を治療するための方法
RU2732567C2 (ru) 2015-10-16 2020-09-21 Ипсен Биофарм Лтд. Стабилизированные фармацевтические композиции камптотецина
FI127460B (en) 2016-01-15 2018-06-29 Targovax Oy COMBINATION OF ADENOVIRUS AND CHEMOTHERAPY AGENTS FOR CANCER CARE
WO2017192290A1 (en) 2016-05-04 2017-11-09 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Methods of treating cancers overexpressing carm1 with ezh2 inhibitors and platinum-based antineoplastic drugs
FR3051674B1 (fr) * 2016-05-31 2019-11-08 Universite De Bourgogne Lipoproteines chargees en complexes de platine pour le traitement du cancer
JP2019533684A (ja) 2016-11-02 2019-11-21 イプセン バイオファーム リミティド リポソームイリノテカン、オキサリプラチン、５−フルオロウラシル（およびロイコボリン）を含む併用療法を用いる胃がんの処置
WO2019094648A1 (en) * 2017-11-08 2019-05-16 L.E.A.F. Holdings Group Llc Platinum complexes and uses thereof
CN108042490B (zh) * 2018-01-10 2020-09-15 华中科技大学 纳米载药系统、其制备方法、药物组合物及在治疗癌症中的应用
EP3773505A4 (en) 2018-03-30 2021-12-22 Insmed Incorporated PROCESS FOR THE CONTINUOUS MANUFACTURING OF LIPOSOMAL MEDICINAL PRODUCTS
JP7197106B2 (ja) * 2018-04-27 2022-12-27 国立大学法人北海道大学 脂質ナノ粒子
US11246945B2 (en) 2019-06-07 2022-02-15 National Defense Medical Center Cisplatin-loaded microbubbles, pharmaceutical composition for treatment of cancer, method for preparing pharmaceutical compositions and method for treating cancer

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04506207A (ja) * 1989-03-31 1992-10-29 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア リポソームおよび脂質複合体組成物の調製

Family Cites Families (79)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2862498A (en) * 1957-06-14 1958-12-02 Don J Weekes Endotracheal tube
US3554673A (en) * 1969-01-31 1971-01-12 Sage Instr Inc Syringe pump
US3683908A (en) * 1969-10-20 1972-08-15 Tantrimudalige Anthony Don Mic Apparatus for sealing the oesophagus and providing artificial respiration
US4104357A (en) * 1973-01-10 1978-08-01 Monster Molding, Inc. Method of rotational molding about plural axes at low rotational speeds
US3931822A (en) * 1974-02-26 1976-01-13 Marici Frank N Automatic alternating cuff endo tracheal tube inflator
US4231365A (en) * 1978-01-30 1980-11-04 Scarberry Eugene N Emergency resuscitation apparatus
DE2816203C2 (de) * 1978-04-14 1982-07-15 Dr.Ing.H.C. F. Porsche Ag, 7000 Stuttgart Schalteinrichtung für ein elektrisch gesteuertes Brennstoff-Einspritzsystem bei Brennkraftmaschinen
GB2111394B (en) * 1981-12-16 1985-09-11 Archibald Ian Jeremy Brain Artificial airway device
US4553540A (en) * 1983-08-16 1985-11-19 Straith Richard E Airway
US4793327A (en) * 1986-01-21 1988-12-27 Frankel Alfred R Device for opening a patient's airway during automatic intubation of the trachea
MX9203808A (es) 1987-03-05 1992-07-01 Liposome Co Inc Formulaciones de alto contenido de medicamento: lipido, de agentes liposomicos-antineoplasticos.
US5203320A (en) * 1987-03-24 1993-04-20 Augustine Medical, Inc. Tracheal intubation guide
US5042469A (en) * 1987-03-24 1991-08-27 Augustine Medical, Inc. Tracheal intubation guide
US4832020A (en) * 1987-03-24 1989-05-23 Augustine Scott D Tracheal intubation guide
US4872483A (en) * 1987-12-31 1989-10-10 International Medical Products, Inc. Conveniently hand held self-contained electronic manometer and pressure modulating device
US4953547A (en) * 1989-01-26 1990-09-04 Poole Jr Samuel E Drug administering endotracheal respiration systems
GB2229367A (en) * 1989-03-22 1990-09-26 Archibald Ian Jeremy Brain Artificial airway device
US5549910A (en) 1989-03-31 1996-08-27 The Regents Of The University Of California Preparation of liposome and lipid complex compositions
US5013556A (en) * 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5174283A (en) * 1989-11-08 1992-12-29 Parker Jeffrey D Blind orolaryngeal and oroesophageal guiding and aiming device
US5038766A (en) * 1989-11-08 1991-08-13 Parker Jeffrey D Blind orolaryngeal and oroesophageal guiding and aiming device
IS1685B (is) 1990-12-11 1998-02-24 Bracco International B.V. Aðferð við að búa til fitukúlur (liposomes) sem eru gæddar auknum hæfileika til að draga í sig og halda í sér aðskotaefnum
GB9102821D0 (en) * 1991-02-11 1991-03-27 Brain Archibald Ian Jeremy An intubating laryngeal mask airway
US5747469A (en) 1991-03-06 1998-05-05 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions comprising DNA damaging agents and p53
US5339808A (en) * 1991-04-02 1994-08-23 Don Michael T Anthony Endotracheal-esophageal intubation devices
US5235973A (en) * 1991-05-15 1993-08-17 Gary Levinson Tracheal tube cuff inflation control and monitoring system
GB9119703D0 (en) * 1991-09-14 1991-10-30 Dingley John Medico-surgical device
MX9301163A (es) * 1992-03-05 1994-07-29 Brain Archibald Ian Jeremy Mascara laringea y metodo para su fabricacion.
GB9204754D0 (en) * 1992-03-05 1992-04-15 Brain Archibald Ian Jeremy Mould for manufacture of a laryngeal mask
US5249571A (en) * 1992-05-21 1993-10-05 Brain Archibald Ian Jeremy Laryngeal clamp airway
US5297547A (en) * 1992-07-30 1994-03-29 Brain Archibald Ian Jeremy Laryngeal mask construction
US5334761A (en) * 1992-08-28 1994-08-02 Life Technologies, Inc. Cationic lipids
US5355879A (en) * 1992-09-28 1994-10-18 Brain Archibald Ian Jeremy Laryngeal-mask construction
US5443063A (en) * 1993-08-31 1995-08-22 The Johns Hopkins University Cuffed oro-pharyngeal airway
US5599301A (en) * 1993-11-22 1997-02-04 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Motor control system for an automatic catheter inflation system
GB2285765B (en) * 1994-01-12 1997-10-29 Archibald Ian Jeremy Brain Forming tool for use with a laryngeal mask
US5529582A (en) * 1994-02-01 1996-06-25 Fukuhara; Tomio Apparatus for inserting laryngeal mask
US5582167A (en) * 1994-03-02 1996-12-10 Thomas Jefferson University Methods and apparatus for reducing tracheal infection using subglottic irrigation, drainage and servoregulation of endotracheal tube cuff pressure
JP3782123B2 (ja) * 1994-05-31 2006-06-07 住友ベークライト株式会社 咽腔用エアウエイ
US5569219A (en) * 1994-09-13 1996-10-29 Hakki; A-Hamid Collapsible catheter
GB9422224D0 (en) * 1994-11-03 1994-12-21 Brain Archibald Ian Jeremy A laryngeal mask airway device modified to detect and/or stimulate mescle or nerve activity
US5477851A (en) * 1995-01-26 1995-12-26 Callaghan; Eric B. Laryngeal mask assembly and method for removing same
GB9504657D0 (en) * 1995-03-08 1995-04-26 Neil Michael J O An improved artificial airway device
GB9505134D0 (en) * 1995-03-14 1995-05-03 Smiths Industries Plc Laryngeal mask airways
GB9505399D0 (en) * 1995-03-17 1995-05-03 Smiths Industries Plc Medico-surgical devices
US5908777A (en) 1995-06-23 1999-06-01 University Of Pittsburgh Lipidic vector for nucleic acid delivery
GB9513860D0 (en) * 1995-07-07 1995-09-06 Smiths Industries Plc Securing devices
MY115052A (en) * 1995-10-03 2003-03-31 Archibald Ian Jeremy Brain Laryngeal mask airway incorporating an epiglottic elevating mechanism
US5791341A (en) * 1995-12-19 1998-08-11 Bullard; James Roger Oropharyngeal stent with laryngeal aditus shield and nasal airway with laryngeal aditus shield
US5694929A (en) * 1996-02-26 1997-12-09 Christopher; Kent L. Method and apparatus for ventilation/oxygenation during guided insertion of an endotracheal tube
US5623921A (en) * 1996-04-10 1997-04-29 Kinsinger; J. William Laryngeal mask airway and method for its use
US5894060A (en) 1996-06-28 1999-04-13 Boulikas; Teni Cloning method for trapping human origins of replication
US5682880A (en) * 1996-07-26 1997-11-04 Brain; Archibald Ian Jeremy Laryngeal-mask airway with guide element, stiffener, and fiberoptic access
WO1998007409A1 (en) * 1996-08-23 1998-02-26 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Liposomes containing a cisplatin compound
US5738094A (en) * 1996-08-30 1998-04-14 Hoftman; Moshe Anesthesia/respirator mask with reduced nasal section enclosure and inflatable cuff
GB9619432D0 (en) * 1996-09-18 1996-10-30 Smiths Industries Plc Laryngeal mask assemblies
GB2318297B (en) * 1996-10-16 2000-04-12 Smiths Industries Plc A tracheal shield assembly
GB9622880D0 (en) * 1996-11-02 1997-01-08 Smiths Industries Plc Laryngeal mask airways and thier manufacture
GB9624029D0 (en) * 1996-11-19 1997-01-08 Smiths Industries Ltd Laryngeal mask airways and their manufacture
US5843475A (en) * 1996-12-06 1998-12-01 Board Of Regents, The University Of Texas System Delivery and activation through liposome incorporation of diaminocyclohexane platinum (II) complexes
GB9702337D0 (en) * 1997-02-05 1997-03-26 Smiths Industries Plc Laryngeal mask airways and their manufacture
US5827533A (en) 1997-02-06 1998-10-27 Duke University Liposomes containing active agents aggregated with lipid surfactants
US5743254A (en) * 1997-03-18 1998-04-28 Parker Medical Limited Partnership Orotracheal intubation guide
GB9705537D0 (en) * 1997-03-18 1997-05-07 Smiths Industries Plc Laryngeal mask assemblies
GB9705585D0 (en) * 1997-03-18 1997-05-07 Smiths Industries Plc Laryngeal mask assemlies
GB9705586D0 (en) * 1997-03-18 1997-05-07 Smiths Industries Plc Laryngeal mask assemblies
US6090800A (en) * 1997-05-06 2000-07-18 Imarx Pharmaceutical Corp. Lipid soluble steroid prodrugs
US5937860A (en) * 1997-04-10 1999-08-17 Cook; Daniel J. Laryngeal mask
GB9708568D0 (en) * 1997-04-29 1997-06-18 Smiths Industries Ltd Cuffed medico-surgical tubes
US5988167A (en) * 1997-05-02 1999-11-23 Kamen; Jack M. Foam cuff for laryngeal mask airway
US5850832A (en) * 1997-06-23 1998-12-22 Chu; Kyo Y. Laryngeal mask airway insertion guide
GB9721840D0 (en) * 1997-10-16 1997-12-17 Smiths Industries Plc Laryngeal mask assemblies
US6003510A (en) * 1997-12-04 1999-12-21 Anunta; Boonchuay Hand tool for introducing a laryngeal mask
GB9817537D0 (en) * 1998-08-13 1998-10-07 Brain Archibald Ian Jeremy A laryngear mask airway with mutually independant laterally-placed ultra-flexible eastric access/discharge and airway tubes
US6705318B1 (en) * 1999-04-09 2004-03-16 Archibald I. J. Brain Disposable LMA
US6390093B1 (en) * 1999-04-14 2002-05-21 Vital Signs, Inc. Artificial airway device and method of its use
US6511676B1 (en) * 1999-11-05 2003-01-28 Teni Boulikas Therapy for human cancers using cisplatin and other drugs or genes encapsulated into liposomes
US6427688B1 (en) * 2000-02-01 2002-08-06 Dura Pharmaceuticals, Icn. Dry powder inhaler
GB2383755B (en) * 2002-01-04 2004-02-25 Future Top Medical Environment Obturator for use with a laryngeal mask airway

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04506207A (ja) * 1989-03-31 1992-10-29 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア リポソームおよび脂質複合体組成物の調製

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006502233A (ja) * 2002-08-02 2006-01-19 トランセーブ，インク． 白金凝集物およびその製造方法
JP2009528340A (ja) * 2006-03-03 2009-08-06 ブリカス，パルテニオス 癌治療
JP5532921B2 (ja) * 2007-05-14 2014-06-25 コニカミノルタ株式会社 リポソーム
JP2013536867A (ja) * 2010-09-02 2013-09-26 ザ・スクリプス・リサーチ・インステイチユート ナノ粒子ベースの腫瘍標的化薬剤送達
JP2017075142A (ja) * 2015-10-13 2017-04-20 株式会社ケーナインラボ ヒトを除く哺乳動物への薬剤の投与方法

Also Published As

Publication number Publication date
CA2358948A1 (en) 2001-05-17
EP1156789B1 (en) 2006-03-29
US6511676B1 (en) 2003-01-28
DE60027039D1 (de) 2006-05-18
WO2001034130A1 (en) 2001-05-17
DE60027039T2 (de) 2007-04-12
DK1156789T3 (da) 2006-08-07
CN100562311C (zh) 2009-11-25
GR1004168B (el) 2003-02-26
CY1105628T1 (el) 2010-12-22
EP1156789B9 (en) 2006-06-28
PT1156789E (pt) 2006-08-31
TWI259770B (en) 2006-08-11
CA2358948C (en) 2010-01-05
CN1343118A (zh) 2002-04-03
ES2261251T3 (es) 2006-11-16
GR20000100384A (el) 2001-07-31
JP2012041364A (ja) 2012-03-01
ATE321541T1 (de) 2006-04-15
AU1104801A (en) 2001-06-06
US7393478B2 (en) 2008-07-01
EP1156789A4 (en) 2002-08-07
US20090280164A1 (en) 2009-11-12
US20030185879A1 (en) 2003-10-02
WO2001034130A9 (en) 2001-12-06
EP1156789A1 (en) 2001-11-28
JP5711099B2 (ja) 2015-04-30
AU777151B2 (en) 2004-10-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5711099B2 (ja) シスプラチン及び他の薬剤又はリポソーム中に封入された遺伝子を用いてのヒト癌のための療法
Jing et al. Novel cell-penetrating peptide-loaded nanobubbles synergized with ultrasound irradiation enhance EGFR siRNA delivery for triple negative Breast cancer therapy
TWI433693B (zh) 親脂藥物傳送媒介物及其使用方法
AU697343B2 (en) A liposomal delivery system for biologically active agents
Zhang et al. Functionalized cell nucleus-penetrating peptide combined with doxorubicin for synergistic treatment of glioma
WO2013173693A1 (en) Nanoparticles with enhanced entry into cancer cells
JPH06510036A (ja) 嚢胞性線維症の治療のための組成物および方法
Salzano et al. Transferrin-targeted nanoparticles containing zoledronic acid as a potential tool to inhibit glioblastoma growth
US8901100B2 (en) Tumor-specific delivery of therapeutic agents via liposomase
KR20220030945A (ko) 암의 치료를 위한 nrf2의 유전자 녹아웃
JP2022075622A (ja) 薬物送達キャリア及びそれを用いて多種類の治療剤を共同送達する医薬製剤
CN103655475B (zh) 靶向的脂质体
JP2001505529A (ja) Ｈｅｒ―２／ｎｅｕを過剰発現する癌細胞の化学療法への感作
TW202027796A (zh) 酸鹼敏感型脂質奈米粒用於包覆抗癌藥物和微小核醣核酸及其用途
MXPA01006862A (en) Therapy for human cancers using cisplatin and other drugs or genes encapsulated into liposomes
JP4450656B2 (ja) リポソームからなる遺伝子導入用キャリア
WO2013033838A1 (en) Liposomal formulations of cationic peptides and uses thereof
US10870690B2 (en) Protein therapeutant and method for treating cancer
Baehr Lysosome Disrupting Transformable Peptide Amphiphiles & Orally Available CRISPR-Cas Ribonucleoprotein for Genome Editing
WO2023004113A2 (en) Compositions and methods for using purified human rna editing enzymes
TWI377950B (en) Use of an anti-bacterial peptide for treating cancer

Legal Events

Date Code Title Description
A711 Notification of change in applicant

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711

Effective date: 20060130

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20060130

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20061225

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20061225

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20100907

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20101206

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20101213

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20110712

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20111111

A911 Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911

Effective date: 20120206

A761 Written withdrawal of application

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761

Effective date: 20120210