JP2003502286A

JP2003502286A - フタラジン誘導体の使用

Info

Publication number: JP2003502286A
Application number: JP2000616761A
Authority: JP
Inventors: ルービッシュヴィルフリート; ザドフスキーイェンス; コックミヒャエル; ヘーガートーマス
Original assignee: BASF SE
Current assignee: BASF SE
Priority date: 1999-05-11
Filing date: 2000-05-03
Publication date: 2003-01-21
Also published as: BG106056A; HUP0202477A2; NO20015462D0; KR20020000642A; WO2000067734A2; CZ20014038A3; ES2284499T3; EP1231982B1; SK286676B6; IL146148A0; CN1399573A; BR0010428A; AU5064000A; ATE357272T1; DE19921567A1; HUP0202477A3; DE50014190D1; WO2000067734A3; NO20015462L; TR200103236T2

Abstract

(57)【要約】本発明は、酵素ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼまたはＰＡＲＰ（EC 2.4.2.30）の阻害剤としてのフタラジン誘導体の使用、ＰＡＲＰ−ホモログ酵素の阻害剤としての使用に関し、かつ、特に前記フタラジン誘導体は、ＰＡＲＰ−相同酵素の選択的阻害作用を示す。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、酵素ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼまたはＰＡＲＰ（EC 2
.4.2.30）の阻害剤としてのフタラジン誘導体の使用、ＰＡＲＰ−相同酵素阻害
剤としての使用に関し、かつ、特に、これらのフタラジン誘導体はさらにＰＡＲ
Ｐ−相同酵素の選択的阻害を示す。

【０００２】ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）または、同様に公知のポ
リ（ＡＤＰ−リボース）シンターゼ（ＰＡＲＳ）は、細胞核中で見出された調節
酵素である（K.Ikai et al., J. Histochem. Cytochem. 1983, 31, 1261-1264）
。ＰＡＲＰはＤＮＡ切断の修復中において含まれるものであると推定される（M.
S. Satoh et al., Nature 1992, 356, 356-358）。ＤＮＡストランド中の損傷ま
たは切断は、酵素ＰＡＲＰの活性化を意味し、これが活性化される場合には、Ｎ
ＡＤからのＡＤＰ−リボースの移動を触媒する（Shaw, adv. Radiat. Biol., 19
84, 11, 1-69）。この間において、ニコチンアミドはＮＡＤから放出される。ニ
コチンアミドは、エネルギー担体ＡＴＰを消費しながら他の酵素によってＮＡＤ
に再度変換される。したがって、ＰＡＲＰの過剰な活性化は、ＡＴＰの非生理学
的な多量の消耗を引き起こし、かつ、これは、極端な場合において、細胞の損傷
および細胞死を導く。

【０００３】フリーラジカル、たとえば、過酸化物アニオン、ＮＯおよび過酸化水素が、細
胞中でＤＮＡ損傷を引き起こし、ＰＲＡＰを活性化させることは公知である。多
量のフリーラジカルの形成は、多くの病態生理学的状態において観察され、かつ
、このフリーラジカルの集積は、細胞または器官の損傷を導くかまたは寄与する
と推定される。これは、たとえば、卒中、心筋梗塞（C. Thiemermann et al., P
roc. Natl. Acad. Sci. USA, 1997, 94, 679-683）のような器官の虚血状態また
は腎臓の虚血を含むが、しかしながら、たとえば、心筋梗塞の渙散後に生じるよ
うな再灌流の損傷をも含む（上記参照：C. Thiemerman et al.）。したがって、
酵素ＰＡＲＰの阻害は、少なくとも部分的にこの損傷を妨げるかまたは緩和する
であろうと考えられる。よって、ＰＡＲＰ阻害剤は、多くの疾病を治療するため
の新規の治療的原理を示すものであろう。

【０００４】酵素ＰＡＲＰは、ＤＮＡ損傷の修復に影響を及ぼし、したがって、ガン治療の
一部を担い、それというのも、腫瘍組織上での優れた活動ポテンシャルが、細胞
分裂阻止活性を有する物質との組合わせにおいて観察されたからである（G. Che
m et al. Cancer Chemo. Pharmacol. 1988, 22,303）。

【０００５】さらに、ＰＲＡＰ阻害剤が、免疫抑制作用を示すことが見出された（D, Welti
n et al. Int. J. Immunopharmacol. 1995, 17, 265-271）。

【０００６】同様に、ＰＲＡＰは、免疫系が重要な部分を担う免疫学的疾患または疾病、た
とえば、リウマチ様関節炎および敗血性ショック中に含まれ、かつ、ＰＡＲＰ阻
害剤が、一連の疾患上で有益な効果を示すことが見出された（H. Kroeger et al
. Inflammation 1996, 20, 203-215; W. Ehrlich et al. Rheumatol. Int. 1995
, 15, 171-172; C. Szabo et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998, 95, 3867
-3872; S. Cuzzocrea et al. Eur. J. pharmacol. 1998, 342, 67-76）。

【０００７】さらに、ＰＡＲＰ阻害剤３−アミノベンズアミドは、循環不全モデルにおけ
る保護的効果を示した（S. Cuzzocrea et al., Br. J. Pharmacol. 1997, 121,
1065-1074）。

【０００８】同様に、酵素ＰＡＲＰの阻害剤が、糖尿病の治療のための薬剤として有効であ
ろう実験的証拠が示されている（V. Burkart et al. Nature Med. 1999, 5, 314
-319）。

【０００９】フタラジンおよびこれらの誘導体は、広範囲に使用される物質のクラスを表す
。しかしながら、付加的に、４位の置換基を有する２Ｈ−フタラジン−１−オン
は、今日まではあまり記載されていない。したがって、メチレンジアミド、メチ
レンウレアおよびメチレンイミドは、ポウズハイナスら（Phodzhynas et al.）
、Ｐｈａｒｍ．Ｃｈｅｍ．Ｊ．１９７３，７，５６６；Ｗ．マツカノワら（W. M
azkanowa et al.）、Ｚｈ．Ｏｂｓｈｃｈ．Ｋｈｉｍ．１９５８，２８，２８
２２およびＦ．Ｋ．モハメドら（F.K. Mohamed et al.）Ｉｎｄ．Ｊ．Ｃｈｅ
ｍ．Ｂ，１９９４，３３，７６９に記載されている。環状アミンおよびアミノ基
が双方とも環状であるアルキルアミンならびに脂肪族アミンは、Ｊ．シンハら（
J. Singh et al.）、Ｉｎｄ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｂ、１９８３、２２、１０８３、
Ｙ．エグシら（Y. Egushi et al.）、ＣｈｅｍＰｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９９
１、９、１８４６およびイヨキカイケンキュウショホウコク（Iyo Kizai
Kenkyuso Hokoku）、１９９８、１２、４１（CA91,91579）に記載されているが
、しかしながら、化合物は、抗アテローム作用、血小板凝集の抑制作用または血
圧低下作用に関して研究されているものである。ＷＯ９９／１１６４９では、４
位でフェニルピペラジニルメチル基を有し、かつ酵素ＰＡＲＰの阻害剤として記
載されているフタラジノンが示されている。

【００１０】４位でフェニキシメチル誘導体を有する２Ｈ−フタラジノンは、Ａ．Ｍ．ベル
ナルドら（A.M. Bernard et al.）、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ１９９８、３１７で
製造された。

【００１１】本発明は、一般式Ｉの新規フタラジン誘導体を記載しており、この場合、これ
は、驚くべきことに、ＰＡＲＰ阻害剤である。

【００１２】また、驚くべきことに、一般式Ｉのこれらの化合物が、ＰＡＲＰ−相同酵素を
阻害することが見出された。さらに、これらの化合物は、驚くべきことに、ＰＡ
ＲＰ−相同酵素の選択的阻害を示し、すなわち、化合物は、酵素ＰＡＲＰ自体よ
りも強力に相同酵素を阻害する。

【００１３】本発明によるフタラジンは、好ましくは、公知のＰＡＴＰ（PARP1）よりも５
倍強力にＰＡＲＰホモログ（ＰＡＲＰ２）を阻害する。

【００１４】ＰＡＲＰホモログは、特に、ＷＯ９９／６４５７２で記載されたホモログＰＡ
ＲＰ−２（ヒトＰＡＲＰ２）を意味する。これは、有利にはヒトの脳、心臓、
骨格筋、腎臓および肝臓から単離されてもよい。ヒトＰＡＲＰ２の発現は、他の
組織および器官においては著しく低い。

【００１５】ヒトの脳から単離されてもよいヒトＰＡＲＰ２およびその機能的等価物は、特
に卒中のための改善された阻害のための好ましい薬剤である。それというのも、
指標としてＰＡＲＰ２を基にした活性物質の改善は、ヒトの脳に使用するために
最適化された阻害剤の改善を可能にすると考えられるからである。しかしながら
、ＰＡＲＰ２に基づいて改善された阻害剤が、また、他の器官中のＰＡＲＰ−介
在型の病理学的状態の治療のために使用できることを除外することはできない。
本発明による蛋白質の組織分布に基づいて、特に重用な指標は、適切な器官の虚
血（脳の虚血（卒中）、心臓の虚血（心筋梗塞）、梗塞の渙散中または後の損傷
（たとえば、ＴＰＡ、レテプレースまたはレーザーまたはロタブレーターでの機
械的なもの）および心臓弁置換、動脈瘤切除および心臓移植中であるかまたは術
後の微小梗塞（microinfarct）、および腎臓の虚血（急性腎不全、急性腎機能不
全または腎臓移植の間および後の損傷）、肝臓または骨格筋の損傷）を含む。さ
らに考えられるのは、虚血、外傷（頭部外傷）、大量出血、クモ膜下出血および
卒中から生じる神経変性疾患、および多梗塞性痴呆、アルツハイマー病、ハンチ
ントン病およびてんかんのような神経変性疾患、特に全身性てんかん、たとえば
小発作、および強直間代性発作および部分てんかん発作、たとえば、側頭葉の部
分てんかん発作、および複雑部分発作の治療および予防である。さらに、前記タ
ンパク質は、極めて狭い冠状動脈および極めて狭い末梢動脈、たとえば脚部動脈
の血管再生の治療に関連していてもよい。付加的に、前記タンパク質は、腫瘍の
化学療法および転移の予防、ならびに炎症およびリウマチ性疾患、たとえばリウ
マチ様関節炎の治療の一部を担っていてもよい。さらに、これらおよび他の器官
の病理学的状態が考えられうる。

【００１６】ＰＡＲＰ２は、損傷を受けたＤＮＡによって活性化されるＰＡＲＰ１に類似し
ているが、しかしながらメカニズムはおそらく異なっている。ＤＮＡの修復にお
いて重要であることが考えられる。また、本発明のＰＡＲＰｓの阻害は、たとえ
ば癌の指標において有効であろう（たとえば、腫瘍患者の放射線増感作用におい
て）。

【００１７】ＰＡＲＰ１およびＰＡＲＰ２の結合パートナーに関して前記に示された特異的
なアッセイ系は、本発明によるタンパク質の活性阻害および選択性阻害を改善す
るために使用された。

【００１８】本発明によって提供される阻害作用は、ＰＡＲＰ２上で極めて顕著な阻害活性
を有するものである。この場合において、Ｋｉ値は約１０００ｎｍ未満、たとえ
ば７００ｎｍ未満、約１００ｎＭ未満および約３０ｎＭ、たとえば約１〜２０ｎ
Ｍであってもよい。

【００１９】本発明による好ましい阻害剤は、ＰＡＲＰ２に関する驚くべき顕著な選択性を
有している。したがって、本発明による阻害剤に関するＫｉ（ＰＡＲＰ１）：Ｋ
ｉ（ＰＡＲＰ２）の比は、たとえば、５を上廻る。他の阻害剤の群は、ＰＡＲＰ
１およびＰＡＲＰ２を同程度に阻害する。

【００２０】適したホスト微生物中での発現に関して、組み換え核酸構造体または組み換え
遺伝子構造体は、有利には、ホスト中で最適な遺伝子発現を可能にするホスト特
異的ベクター中に挿入する。ベクターは、当業者に公知であり、かつ、たとえば
、“クローニングベクター”中で見出すことができる（Pouwels P.H. et al., e
ditors, Elsevier, Amsterdam-New York-Oxford, 1985）。ベクターはプラスミ
ドの他に、さらには当業者に公知の他のすべてのベクター、たとえば、ファージ
、ウイルス、たとえばＳＶ４０、ＣＭＶ、バキュロウイルス、アデノウイルス、
トランスポゾン、ＩＳエレメント、ファスミド、コスミド、および直鎖または環
状のＤＮＡを意味する。これらのベクターは、ホスト微生物での自発的複製およ
び染色体複製を受けていてもよい。

【００２１】構造体の発現前記の本発明による組み換え構造体を、適したホスト系に挿入し、かつ発現す
ることは有利である。これに関連して、クローニングおよび当業者に公知のトラ
ンスフェクション方法は、好ましくは、特別な発現系における前記核酸の発現を
もたらすために使用される。適した系は、たとえば、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔ
ｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ａｕｓｕｂ
ｅｌｅｔａｌ．，ＷｉｌｅｙＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ編、ＮｅｗＹ
ｏｒｋ１９９７に記載されている。

【００２２】適したホスト生物は、原則として、本発明による核酸、その対立変異体、その
機能性等価体または誘導体、あるいは組み換え核酸構造体の発現を可能にするす
べての微生物である。ホスト生物は、たとえば、バクテリア、真菌、イースト、
植物細胞または動物細胞を意味する。好ましい生物は、エシャリキア属のバクテ
リア、たとえば、大腸菌、放射菌、桿菌またはシュードモナス属、真核微生物、
たとえばサッカロミセスセレビシア（Saccharomyces serevisiae）、アスペルギ
ルス属、動物または植物からの高等真核細胞、たとえば、Ｓｆ９またはＣＨＯ細
胞である。

【００２３】また、必要である場合には、遺伝子生成物の発現は、形質転換動物のような形
質転換生物、たとえば、特にマウス、ヒツジまたは形質転換植物中で生じてもよ
い。また、形質転換生物は、いわゆるノックアウト動物または植物であってもよ
く、この場合、これは、相当する内在性遺伝子が、たとえば、変異または部分的
または完全な欠失によってスイッチオフ（switch off）されているものである。

【００２４】ホスト生物とベクターとの組み合わせは、生物、たとえばプラスミド、ウイル
スまたはファージ、たとえばＲＮＡ−ポリメラーゼ／プロモーター系を有するプ
ラスミド、ファージλ、μまたは他の弱毒性ファージまたはトランスポゾンおよ
び／または発現系を形成する他の有利な調節配列に相当する。発現系の用語は、
好ましくは、たとえば、哺乳類細胞、たとえば、ＣＨＯ細胞と、ベクター、たと
えばＰｃＤＮＡ３ｎｅｏベクターとの組み合わせを意味し、この場合、これは哺
乳類細胞に適している。

【００２５】前記に示したように、また、遺伝子生成物の発現は、有利には形質転換動物、
たとえば、マウス、ヒツジまたは形質転換植物中で生じる。同様に、核酸から導
かれるＲＮＡを有する無細胞翻訳系をプログラムすることも可能である。

【００２６】抗体の製造：ａｎｔｉ−ＰＡＲＰ２抗体の製造は、当業者に公知の方法でおこなわれる。抗
体は、ポリクローナル、モノクローナル、ヒトまたはヒト化抗体またはこれらの
フラグメント、一本鎖抗体または他の合成抗体、ならびに抗体フラグメント、た
とえばＦｖ、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）_２を意味する。適した製造方法は、たと
えば、キャンベル、Ａ．Ｍ．（Campbell, A.M.）、ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎ
ｔｉｂｏｄｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，（１９８７）ＥｌｓｅｖｉｅｒＶｅ
ｒｌａｇ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｏｘｆｏｒｄａｎｄｉ
ｎＢｒｅｉｔｌｉｎｇ，Ｆ．ａｎｄＤｕｅｂｅｌ、Ｓ．，Ｒｅｋｏｍｂｉ
ｎａｎｔｅＡｎｔｉｋｏｅｒｐｅｒ（１９９７），ＳｐｅｋｔｒｕｍＡｋａ
ｄｅｍｉｓｃｈｅｒＶｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．で記載されてい
る。

【００２７】例Ａ：ＰＡＲＰ２ｃＤＮＡの単離本発明のｃＤＮＡ配列は、最初に、ヒトの脳のｃＤＮＡライブラリー（Human
Brain 5'Stretch Plus cDNA Library, #HL3002a Clontech社）中のｃＤＮＡクロ
ーンの配列分析上で見出された。このクローンの配列は配列番号１に記載されて
いる。

【００２８】例Ｂ：酵素の製造比較例として、ヒトＰＡＲＰ１を当業者に公知の方法で、バキュロウイルス系
中で、組み換えによって発現させ、記載のように部分的に精製した（Shah et al
., Analytical Biochemistry 1995, 227, 1-13）。３０〜５０％純度のウシＰＡ
ＲＰ１（ｃ＝０．２２ｍｇ／ｍｌ、２５℃での特異的活性ＡＤＰ−リボース１
７０ｎｍｏｌ／分／ｍｇ総タンパク質）をＢＩＯＭＯＬから購入した（オーダー
番号ＳＥ−１６５）。ヒトＰＡＲＰ２をバキュロウイルス系（Bac-to-Bac Sys
tem, BRL LifeScience）中で組み換えによって発現させた。この目的のために、
相当するｃＤＮＡをｐＦＡＳＴＢＡＣ−１ベクター中にクローン化した。Ｅ．Ｃ
ｏｌｉ中への組み換えによる、組み換えバキュロウイルスＤＮＡの製造の後に、
昆虫細胞（Ｓｆ９またはｈｉｇｈｆｉｖｅ）を相当する組み換えバキュロウイ
ルスＤＮＡｓでトランスフェクトさせた。相当するタンパク質の発現は、ウエス
タンブロット分析によって証明した。ウイルス株を、当業者に公知の方法で増幅
させた。多量の組み換えタンパク質を、ＭＯＩ（インフェクションの多様性；細
胞に対するウイルスの割合）５〜１０で、ウイルスを含有する昆虫細胞培養物５
００ｍｌ（２×１０^６細胞／ｍｌ）のインフェクションによって感染させ、かつ
３〜４日に亘ってインキュベートした。その後に、昆虫細胞を遠心分離によって
ペレット化し、かつ、タンパク質をペレットから精製した。

【００２９】精製を、適切な特異的抗体を用いての酵素検出で、当業者に公知のタンパク質
精製の古典的方法によっておこなった。いくつかの場合において、また、タンパ
ク質を、３−アミノベンズアミドアフィニティ−カラム上で、記載されている
ように、アフィニティー精製した（Burtscher et al., Anal Biochem 1986, 152
: 285-290）。純度は９０％を上廻った。

【００３０】例Ｃ：ＰＡＲＰ２の活性およびＰＡＲＰ１およびＰＡＲＰ２上のエフェクター抑
制作用を測定するためのアッセイ系ａ）ポリ（ＡＤＰ−リボース）に対する抗体の製造ポリ（ＡＤＰ−リボース）は、ａｎｔｉ−ポリ（ＡＤＰ−リボース）抗体を生
産するための抗原として使用されてもよい。ａｎｔｉ−ポリ（ＡＤＰ−リボース
）抗体の製造は、文献中で記載されている（Kanai Y et al. (1974) Biochem Bi
ophys Res Comm 59:1, 300-306; Kawamaitsu H et al. (1984) Biochemistry 23
, 3771-3777; Kanai Y et al. (1978) Immunology 34, 501-508）。

【００３１】特に、以下のものを使用した：ａｎｔｉ−ポリ（ＡＤＰ−リボース）抗体（ポ
リクローナル抗血清、ウサギ）、ＢＩＯＭＯＬ；オーダー番号ＳＡ−２７６、
Ａｎｔｉ−ポリ（ＡＤＰ−リボース）抗体（モノクローナル、マウス；クローン
１０Ｈ；ハイブリドーマ上清、アフェニティー精製されたもの）。

【００３２】ハイブリドーマ培養上清から得られた抗血清またはモノクローナル抗体は、プ
ロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって、当業者に公知の方法で
精製された。

【００３３】ｂ）ＥＬＩＳＡ−アッセイ材料：ＥＬＩＳＡ呈色試薬：ＴＭＢＭｉｘＳＩＧＭＡＴ−８５４０９６穴マイクロタイタープレート（FALCON Micro-Test IIIa¨ Flexible Assa
y Plate,#3912）をヒストン（SIGMA H-7755）で被覆した。この目的のために、
ヒストンをカーボネートバッファー（0.05M Na_２HCO_３; pH 9.4）中に、５０μ
ｇ／ｍｌの濃度で溶解した。マイクロタイタープレートの別個のウェルをそれぞ
れ、このヒストン溶液１５０μｌを用いて、室温で少なくとも２時間に亘ってか
または４℃で一晩に亘ってインキュベートした。その後に、室温で２時間に亘っ
てカーボネートバッファー中の１％濃度ＢＳＡ溶液（SIGMA, A-7888）１５０μ
ｌを添加することによって、ウェルをブロッキングした。引き続いて、これを洗
浄バッファー（1 X PBS中の0.05% Tween10; PBS(リン酸緩衝生理食塩水；Ｇｉｂ
ｏ，オーダー番号１００１０)：０．２１ｇ／ｌＫＨ_２ＰＯ_４、９ｇ／ｌ、Ｎ
ａＣｌ、０．７２６ｇ／ｌ、Ｎａ_２ＨＰＯ_４・７Ｈ_２Ｏ、ｐＨ７．４）を用いて
、３回に亘っての洗浄工程で洗浄した。洗浄工程は、すべてマイクロタイタープ
レート洗浄器（“Columbus”microtiter plate washer, SLT-Lab instrument, A
ustria）中でおこなった。

【００３４】酵素反応に関して必要であるのは、酵素反応溶液および基質溶液であり、それ
ぞれの場合においてプレミックスである。前記溶液の相対的な量は、アッセイの
ウェルの予定数に依存する。

【００３５】ウェル当たりの酵素反応溶液の組成：ＰＡＲＰ反応バッファー４μｌ（１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１００ｍ
ＭＭｇＣｌ_２、１０ｍＭＤＴＴ）ＰＡＲＰ１２０ｎｇ（ヒトまたはウシ）またはＰＡＲＰ２８ｎｇ活性化されたＤＮＡ４μｌ（１ｍｇ／ｍｌ；ＳＩＧＭＡ，Ｄ−４５２２）Ｈ_２Ｏ４０μｌウェル当たりの基質溶液の組成：ＰＡＲＰ反応バッファー（１０ｘ）５μｌＮＡＤ溶液０．８μｌ（１０ｍＭ，ＳＩＧＭＡＮ−１５１１）Ｈ_２Ｏ４４μｌ阻害剤を１ｘＰＡＲＰ反応バッファー中に溶解した。高濃度で阻害剤を溶解す
るのに時折使用されるＤＭＳＯは、２％の最終濃度までは必要なかった。酵素反
応のために、酵素反応溶液４０μｌをそれぞれのウェル中に装入し、かつ、阻
害剤溶液１０μｌを用いて、１０分間に亘ってインキュベートした。その後に
、酵素反応を、ウェル当たり基質溶液５０μｌを添加することによって開始し
た。反応を、室温で３０分に亘っておこない、かつ、その後に洗浄バッファーで
３回に亘って洗浄することによって停止した。

【００３６】使用された第１抗体は、１：５０００の希釈での特異的ａｎｔｉ−ポリ（ＡＤ
Ｐ−リボース）抗体であった。希釈は、抗体バッファー（ＰＢＳ中１％ＢＳＡ、
０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）中でおこなった。第１抗体のためのインキュベーシ
ョン時間は室温で１時間であった。洗浄バッファーで３回に亘っての連続的な洗
浄の後に、インキュベーションを、第２抗体（anti-マウスＩｇＧ、Ｆａｂフラ
グメント、ペルオキシダーゼ結合、Boehringer Mannheim, AOrder No. 1500.686
; anti-ラビットＩｇＧ、ペルオキシダーゼ結合、SIGMA, Order No. A-6154）を
用いて、抗体バッファー中１：１００００の希釈で、室温で１時間に亘っておこ
なった。洗浄バッファーを用いての３回に亘る洗浄に引き続いて、ウェル当たり
呈色試薬１００μｌ（TBA mix SIGMA）を用いて、室温で、約１５分間に亘っ
て呈色反応をおこなった。呈色反応は、２ＭＨ_２ＳＯ_４１００μｌを添加す
ることによって停止した。引き続いて、ＥＬＩＳＡプレートリーダー中で直ぐに
測定した（EAR340AT “Easy Reader”, SAT-Lab instruments, Austria）（４５
０ｎｍ対６２０ｎｍ）。測定の原理は、図６中に図示されている。

【００３７】種々の濃度を、供与量効果プロットの構築のために使用し、阻害剤のＫｉを測
定した。値は、特別な阻害剤濃度に関して三重複試験で得られる。相加平均は、
Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ^（Ｃ）Ｅｘｃｅｌを用いて測定した。ＩＣ_５０は、Ｍｉｃｒ
ｏｃａｌ^（Ｃ）ＯｒｉｇｉｎＳｏｆｔｗａｒｅを用いて測定した（５．０に対
する）（“Sigmoidak Fit”）。この方法で算定されたＩＣ_５０値のＫｉ値への
変換は、“キャリブレーション阻害剤（calibration inhibitors）”を使用して
おこなった。また、“キャリブレーション用の阻害剤”は、それぞれのアッセイ
中で測定された。“キャリブレーション用の阻害剤”のＫｉ値は、当業者に公知
の方法で、ディクソンダイアグラム（Dixon diagram）の分析によって、同様の
アッセイ系中で測定された。

【００３８】ｂ）ＨＴＲＦ（均一系時間分解蛍光）アッセイＨＴＲＦＰＡＲＰアッセイ中でヒストンは、ＰＡＲＰによる改変のための標
的タンパク質として、間接的にＸＬ６６５蛍光体で標識される。抗体を直接的に
ユーロピウムクリプテート（cryptate）で標識する。ＸＬ６６５蛍光体が、空間
中で直接的に接触する場合には、この場合、これは、ヒストン上でポリ（ＡＤＰ
−リボース）に結合することによって保証され、その後に、エネルギー移動が可
能である。したがって、６６５ｎｍでの発光は、結合された抗体の量に直接的に
比例し、この場合、これは、同様に、ポリ（ＡＤＰ−リボース）の量に等しい。
したがって、測定されたシグナルは、ＰＡＲＰ活性に相当する。使用された材料
は、特に記載しない限りは、ＥＬＩＳＡ中で使用されたものと同一である（前記
参照）。

【００３９】ヒストン（Sigma M7755）を、Ｈｅｐｅｓバッファー（５０ｍＭ、ｐＨ＝７．
５）中で３ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解した。ビオチン化は、スルフォ−ＮＨＳ−Ｌ
Ｃ−ビオチン（Pierce, #21335T）でおこなった。１ヒストン当たり４ビオチン
のモル比で使用された。インキュベーション時間は９０分であった（RT）。その
後に、ビオチン化ヒストンを、Ｈｅｐｅｓバッファー（50mM, pH=7.0）中で、Ｇ
２５ＳＦＨＲ１０／１０カラム（Pharmacia, 17-0591-01）上で精製し、過
剰のビオチン化試薬を除去した。ａｎｔｉ−ポリ（ＡＤＰ−リボース）抗体を、
二官能性カップリング試薬を用いて、ユーロピウムクリプテートで標識した（Lo
pez E et al. Clin. Chem. 39/2, 196-201, 1993 USP 5534662）。精製を、Ｇ２
５ＳＦＨＲ１０／３０カラム上でおこなった。１抗体当たり３．１クリプテー
トのモル比が達成される。収率は２５％であった。結合体を、リン酸バッファー
（０．１ＭｐＨ＝７）中０．１％ＢＳＡの存在下で−８０℃で保存した。

【００４０】酵素反応のために、それぞれのウェルに以下のものをピペットで加えた：ＰＲＡＰＨＴＲＦ反応バッファー（５０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ８．０、１
０ｍＭＭｇＣｌ_２、１ｍＭＤＴＴ）中でＰＡＲＰ１（ヒトまたはウシ）２０μｇ
またはＰＡＲＰ２（ヒト）８ｎｇを有するＰＡＲＰ溶液１０μｌＰＡＲＰＨＴＲＦ反応バッファー中の活性化されたＤＮＡ（SIGMA D4522）１
０μｌ（５０μｇ／ｍｌ）ＰＡＲＰＨＴＲＦ反応バッファー中のビオチン化ヒストン１０μｌ（１．２
５μＭ）ＰＡＲＰＨＴＲＦ反応バッファー中の阻害剤１０μｌ前記試薬を、ＰＡＲＰＨＴＲＦ反応バッファー中ＮＡＤ溶液１０μｌ（
４００μＭ）の添加によって反応が開始される前に、２分間に亘ってプレインキ
ュベートした。反応時間は室温で３０分であった。

【００４１】その後に反応を、“レベレーション（Revelation）”バッファー（１００ｍＭ
トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．２、０．２ＭＫＦ、０．０５％ＢＳＡ）中のＰ
ＡＲＰ阻害剤１０μｌ（２５μＭ、Ｋｉ＝１０ｎＭ）を添加することによって
停止させた。

【００４２】その後に、ＥＤＴＡ溶液１０μｌ（SIGMA、E-7889、H_２Ｏ中０．５Ｍ）、“
レベレーション”バッファー中のＳａ−ＸＬ６６５（Packard Instruments）１
００μｌ（１５〜３１．２５ｎＭ）、“レベレーション”バッファー中のａｎｔ
ｉ−ＰＡＲＰクリプテート５０μｌ（１．６〜３．３ｎＭ）を添加した。

【００４３】測定は、３０分後に可能であった（４時間まで）。測定は、“ディスカバリー
ＨＴＲＦマイクロプレートアナライザー（Discovery HTRF Microplate Analyzer
）”（Packard Instruments）でおこなった。ｋｉ値を、ＥＬＩＳＡに関して記
載したように算定した。

【００４４】本発明は、式Ｉ

【００４５】

【化２】

【００４６】［式中、Ｒ^１は水素、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素、分枝または非分枝のＣ_１〜
Ｃ_６−アルキル、ＯＨ、ニトロ、ＣＦ_３、ＣＮ、ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＨ−ＣＯ−
Ｒ^１３、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、その際、Ｒ^１１およびＲ^１２は互い
に独立して、水素またはＣ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、かつ、Ｒ^１３は水素、Ｃ _１〜Ｃ_４−アルキル、フェニル−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルまたはフェニルであり、
かつ、Ａ^１は直鎖または分枝鎖のＣ_０〜Ｃ_６−アルキル基であり、かつ、Ａ^２はＮＲ^２、ＮＲ^２−Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、ＯおよびＳであり、かつ、Ｒ^２は水素およびＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、かつ、Ａ^３はそれぞれの場合において、５または６環の原子およびＮ，Ｓ，Ｏから選択
されたヘテロ原子３個までを有する芳香族環またはヘテロ芳香族環、たとえば、
フェニル、チオフェン、ピリジン、ピリミジン、ナフタレン、インドール、イミ
ダゾールであり、この場合、これは、さらにＲ^４および１個または２個のＲ^３に
よって置換されていてもよく、その際、Ｒ^３は水素、塩素、フッ素、臭素、ヨウ
素、分枝または非分枝のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、ＯＨ、ニトロ、ＣＦ_３、ＣＮ、
ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＳＯ_２ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＳＯ_２−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、Ｏ−
Ｐｈ、Ｏ−ＣＦ_３、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ^１３、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、そ
の際、Ｒ^１１およびＲ^１２は、互いに独立して、水素またはＣ_１〜Ｃ_４−アルキ
ルであり、かつ、Ｒ^１３は水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、フェニル−Ｃ_１〜Ｃ_４ −アルキルまたはフェニルであってもよく、Ｒ^４は水素、（Ｘ）_０，１−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル−ＮＲ^４１Ｒ^４２であり、そ
の際、ＸはＯ、ＳおよびＮＲ^４３であり、かつ、Ｒ^４１およびＲ^４２は、互いに
独立して、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルおよ
び３〜７員環の環式アミンであり、かつ、Ｒ^４３は水素およびＣ_１〜Ｃ_４−アル
キルであってもよい］の化合物およびその互変異性型、考えられうるエナンチオ
マー型またはジアステレオマー型、ならびにそのプロドラックに関する。

【００４７】式Ｉの化合物は、ラセミ体、鏡像異性的に純粋な化合物またはジアステレオマ
ーとして使用することができる。鏡像異性的に純粋な化合物が必要とされる場合
には、これらは、たとえば、式Ｉまたはその中間体の化合物で、適した光学的に
活性の塩基または酸を用いて古典的なラセミ分割をおこなうことによって得るこ
とができる。

【００４８】また、本発明は、式Ｉの化合物のメソマー（mesomer）または互変異性体の化
合物に関する。

【００４９】さらに、本発明は、化合物Ｉの生理学的に許容される塩に関し、この場合、こ
れは、化合物Ｉと適した酸または塩基との反応によって得ることができる。適し
た酸および塩基の例は、たとえば、ＦｏｒｔｓｃｈｒｉｔｔｅｄｅｒＡｒｚ
ｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ、１９６６、Ｂｒｉｎｋｈａｅｕｓｅｒ
Ｖｅｒｌａｇ、ｖｏｌｕｍｅ１０、ｐｐ．２２４−２８５に記載されている
。これらは、たとえば、塩酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、リン酸、メタンスルホ
ン酸、酢酸、蟻酸、マレイン酸、フマル酸等、ならびに水酸化ナトリウム、水酸
化リチウム、水酸化カリウムおよびトリスを含む。

【００５０】プロドラックは、生体内で、一般式Ｉの化合物に代謝可能な化合物を意味する
。典型的なプロドラックは、リン酸塩、アミノ酸のカルバメート、エステル等で
ある。

【００５１】本発明によるフタラジン誘導体Ｉは、種々の方法で使用することができ、この
場合、これは、文献中ですでに実施されている。

【００５２】可能な合成方法は、たとえば、ポウズハイナスら（Puodzhynas et al.）、Ｐ
ｈａｒｍ．Ｃｈｅｍ．Ｊ．１９７３，７，５６６，Ｗ．マツカノワら（W.Mazkan
owa et al.）、Ｚｈ．Ｏｂｓｈｃｈ．Ｋｈｉｍ．１９５８，３３，７６９，Ｊ．
シンハら（J.Singh et al.），Ｉｎｄ．Ｃｈｅｍ．Ｂ，１９８３，２２，１０８
３，Ｙ．エグシら（Y. Egushi et al.），ＣｈｅｍＰｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１
９９１，９，１８４６およびＩｙｏＫｉｚａｉｋｅｎｋｙｕｓｈｏＨｏｋ
ｏｋｕ，１９９８，１２，４１（CA 91,91579）またはこれらの中に記載されて
いる。本発明による化合物は、これら文献に記載された方法と同様に製造するこ
とができる。

【００５３】本発明中に含まれる置換されたフタラジンＩは、酵素ポリ（ADP-リボース）ポ
リメラーゼの酵素の阻害剤であり、かつ、特に、新規ＰＡＲＰ−相同酵素の選択
性を示す。

【００５４】置換されたフタラジン誘導体Ｉの阻害作用は、すでに文献中で記載されている
酵素アッセイを用いて、効果の指標として定められたＫｉで測定された。フタラ
ジン誘導体Ｉは、この方法で、酵素ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼまた
はＰＡＲＰ上の阻害効果に関して測定された。

【００５５】４−（４−フェニルピペラジン−１−イル）メチル−２Ｈ−フタラジン−１−
オンは、ＰＡＲＰ阻害剤としてＷＯ９９／１１６４９で記載されており、かつ構
造的には本発明の化合物に関連する。この化合物は、ＰＡＲＰ１阻害作用に関し
て示されたＨＴＲＦアッセイ中で試験された。しかしながら、この化合物は、弱
い作用のみを示した（１０μＭで３８％の阻害）。

【００５６】驚くべきことに、本発明による化合物は、ＰＡＲＰ酵素を阻害するばかりでな
く、より効果的である（表参照）。

【００５７】例ＰＡＲＰ１Ｋ_Ｉ／μＭ１０．６２４０．１９１１１．８０１６０．７８１７０．７４１８０．６９一般式Ｉの置換されたフタラジン誘導体は、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメ
ラーゼ（ＰＡＲＰ）、同様に公知のポリ（ＡＤＰ−リボース）シンターゼ（ＰＡ
ＲＳ）の阻害剤であり、したがって、これらの酵素の増加した活性に関連する疾
患の治療および予防に使用される。

【００５８】式Ｉの化合物は、虚血後の損傷の治療および種々の器官において予期される虚
血の予防のための薬剤を製造するために使用することができる。

【００５９】したがって、一般式Ｉの本発明のフタラジン誘導体は、虚血、外傷（頭部外傷
）、大量出血、クモ膜下出血および卒中後に生じる神経変性疾患、多梗塞性痴呆
、アルツハイマー病、ハンチントン病およびてんかん、特に、全身性てんかん発
作、たとえば小発作および強直間代性発作および部分的てんかん発作、たとえば
側頭葉のてんかん発作、および複雑部分発作のような神経変性疾患の治療および
予防、さらには、心性虚血後の心臓の損傷および腎性虚血後の腎臓の損傷、たと
えば、急性腎不全または急性腎臓不全、あるいは腎臓移植中または後に生じる損
傷の治療および予防に使用することができる。さらに、一般式Ｉの化合物は、急
性心筋梗塞およびその医学的渙散中および後に生じる損傷（たとえば、ＴＰＡ、
レテプラーゼ（reteplase）、ストレプトキナーゼまたはレーザーまたはロータ
ブレーター（Rotablator）による機械的なもの）および心臓弁弛緩、動脈瘤切除
および心臓移植中および後の微小梗塞の治療に使用することができる。同様に、
本発明のフタラジンＩは、極めて狭い冠状動脈の血管再生、たとえば、ＰＴＣＡ
およびバイパス手術、および極めて狭い末梢動脈の血管再生、たとえば、脚部動
脈の場合の治療に使用することができる。さらに、フタラジンＩは、腫瘍および
その転移の化学療法に有効であってもよく、かつ、炎症およびリウマチ性疾患、
たとえばリウマチ様関節炎の治療および糖尿病の治療に使用することができる。

【００６０】本発明による医薬品製剤は、治療的に有効量の化合物Ｉの他に常用の製薬学的
賦形剤を含む。

【００６１】局部的外用のために、たとえば、粉剤、軟膏剤または噴霧剤中で、活性成分は
通常の濃度で存在していてもよい。活性成分は、通常は０．００１〜１重量％、
好ましくは０．００１〜０．１重量％の量で存在する。

【００６２】内用において、製剤は１回量で投与される。体重ｋｇ当たり０．１〜１００ｍ
ｇが１回量である。製剤は、１日当たり、１回またはそれ以上の用量で、疾患の
性質および重症度に依存して投与されてもよい。

【００６３】要求される投与様式に関して適切な、本発明による医薬品製剤は、活性成分の
他に、常用のキャリアーおよび希釈剤を有する。局所的外用のために、製薬学的
賦形剤、たとえばエタノール、イソプロパノール、エトキシ化ヒマシ油、エトキ
シ化硬化ヒマシ油、ポリアクリル酸、ポリエチレングリコール、ポリエチレング
リコールステアレート、エトキシ化脂肪族アルコール、液体パラフィン、ワセリ
ンおよび羊毛脂を使用することが可能である。内用に適した例は、ラクトース、
プロピレングリコール、エタノール、デンプン、滑石、ポリビニルピロリドンを
使用することができる。

【００６４】また、抗酸化剤、たとえば、トコフェロールおよびブチル化ヒドロキシアニソ
ールおよびブチル化ヒドロキシトルエン、香味改善剤、安定化剤、乳化剤および
潤滑剤を使用することができる。

【００６５】製剤中で活性成分の他に存在する物質おおび医薬品製剤の製造中で使用される
物質は、毒性的に許容可能であり、特別な活性成分と相溶性であるものである。
医薬品製剤は、通常の方法で、たとえば活性成分と常用のキャリアーおよび希釈
剤とを混合させることによって製造される。

【００６６】医薬品製剤は、種々の方法で、たとえば、経口的、非経口的、例えば、輸液に
よる静脈内、皮下、腹腔内および局所的に投与されてもよい。したがって、可能
な形状は、錠剤、エマルション、輸液および注射液、ペースト剤、軟膏剤、ゲル
剤、クリーム、ローション、粉剤および噴霧剤である。

【００６７】例例１４（Ｎ（４−ヒドロキシフェニル）アミノメチル）−２Ｈ−フタラジン−１−オ
ン

【００６８】

【外１】

【００６９】例２４（Ｎ（４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）フェニル）アミノメチル）−
２Ｈ−フタラジン−１−オン

【００７０】

【外２】

【００７１】例３４（Ｎ（４−クロロフェニル）アミノメチル）−２Ｈ−フタラジン−１−オン

【００７２】

【外３】

【００７３】例４４（Ｎ−フェニルアミノメチル）−２Ｈ−フタラジン−１−オン

【００７４】

【外４】

【００７５】例５４（Ｎ（３−トリフルオロメチルフェニル）アミノメチル）−２Ｈ−フタラジン
−１−オン

【００７６】

【外５】

【００７７】例６４（Ｎ（２−シクロフェニル）アミノメチル）−２Ｈ−フタラジン−１−オン

【００７８】

【外６】

【００７９】例７４（Ｎ（４−メトキシフェニル）アミノメチル）−２Ｈ−フタラジン−１−オン

【００８０】

【外７】

【００８１】例８４（Ｎ（２，４−ジクロロフェニル）アミノメチル−２Ｈ−フタラジン−１−オ
ン

【００８２】

【外８】

【００８３】例９４（Ｎ（４−ニトロフェニル）アミノメチル）−２Ｈ−フタラジン−１−オン

【００８４】

【外９】

【００８５】例１０４−（Ｎ（３−メチルメルカプトフェニル）アミノメチル）−２Ｈ−フタラジン
−１−オン

【００８６】

【外１０】

【００８７】例１１４（Ｎ（２，４−ジフルオロフェニル）アミノメチル）−２Ｈ−フタラジン−１
−オン

【００８８】

【外１１】

【００８９】例１２４（Ｎ（４−フェノキシフェニル）アミノメチル）−２Ｈ−フタラジン−１−オ
ン

【００９０】

【外１２】

【００９１】例１３４（Ｎ（４−トリフルオロメトキシフェニル）アミノメチル）−２Ｈ−フタラジ
ン−１−オン

【００９２】

【外１３】

【００９３】例１４４（Ｎ（４−トリフルオロメチルフェニル）アミノメチル−２Ｈ−フタラジン−
１−オン）

【００９４】

【外１４】

【００９５】例１５４（Ｎ−メチル−Ｎ−フェニルアミノメチル）−２Ｈ−フタラジン−１−オン×
ＨＣｌ

【００９６】

【外１５】

【００９７】例１６４（Ｓ（４−クロロフェニル）メルカプトメチル）−２Ｈ−フタラジン−１−オ
ン

【００９８】

【外１６】

【００９９】例１７４（Ｓ（１−メチルイミダゾール−２−イル）メルカプトメチル）−２Ｈ−フタ
ラジン−１−オン例１８４（Ｎ（５−メチルメルカプト−１，３，４−トリアゾール−２−イル）アミノ
メチル）−２Ｈ−フタラジン−１−オン

【０１００】

【外１７】

【０１０１】例１９４（Ｓ（２−ピリジル）メルカプトメチル）−２Ｈ−フタラジン−１−オン

【０１０２】

【外１８】

【手続補正書】

【提出日】平成１４年１月２２日（２００２．１．２２）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３８

【補正方法】変更

【補正の内容】

【００３８】ｂ）ＨＴＲＦ（均一系時間分解蛍光）アッセイＨＴＲＦＰＡＲＰアッセイ中でヒストンは、ＰＡＲＰによる改変のための標
的タンパク質として、間接的にＸＬ６６５蛍光体で標識される。抗体を直接的に
ユーロピウムクリプテート（cryptate）で標識する。ＸＬ６６５蛍光体が、空間
中で直接的に接触する場合には、この場合、これは、ヒストン上でポリ（ＡＤＰ
−リボース）に結合することによって保証され、その後に、エネルギー移動が可
能である。したがって、６６５ｎｍでの発光は、結合された抗体の量に直接的に
比例し、この場合、これは、同様に、ポリ（ＡＤＰ−リボース）の量に等しい。
したがって、測定されたシグナルは、ＰＡＲＰ活性に相当する。測定の原理は、図７に図示されている。使用された材料は、特に記載しない限りは、ＥＬＩＳＡ
中で使用されたものと同一である（前記参照）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 17/02 Ａ６１Ｐ 17/02 19/02 19/02 25/00 25/00 25/08 25/08 25/10 25/10 25/12 25/12 25/14 25/14 25/16 25/16 25/28 25/28 29/00 29/00 １０１１０１ 31/04 31/04 35/00 35/00 35/04 35/04 37/00 37/00 41/00 41/00 43/00 １１１ 43/00 １１１Ｃ０７Ｄ 237/32 Ｃ０７Ｄ 237/32 // Ｃ０７Ｄ 401/12 401/12 403/12 403/12 Ｃ０７Ｍ 7:00 Ｃ０７Ｍ 7:00 9:00 9:00 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ミヒャエルコックドイツ連邦共和国シファーシュタットリレンガッセ 80 (72)発明者トーマスヘーガードイツ連邦共和国エディンゲン−ネッカーハウゼンラーテナウシュトラーセ 12 Ｆターム(参考） 4C063 AA01 BB08 BB09 CC28 CC41 DD11 DD25 DD28 EE01 4C086 AA01 AA02 BC41 GA16 MA01 MA04 NA14 NA15 ZA01 ZA06 ZA15 ZA16 ZA18 ZA36 ZA81 ZA89 ZA96 ZB07 ZB11 ZB15 ZB26 ZB35 ZC20 ZC35

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式Ｉ【化１】［式中、Ｒ^１は水素、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素、分枝および非分枝のＣ_１〜
Ｃ_６−アルキル、ＯＨ、ニトロ、ＣＦ_３、ＣＮ、ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＨ−ＣＯ−
Ｒ^１３、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、その際Ｒ^１１およびＲ^１２は、互い
に独立して、水素またはＣ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、かつＲ^１３は水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、フェニル−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルまたはフェニルであり、か
つ、Ａ^１は直鎖または分枝鎖のＣ_０〜Ｃ_６−アルキル基であり、かつ、Ａ^２はＮＲ^２、ＮＲ^２−Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル−、ＯおよびＳであり、かつ、Ｒ^２は水素およびＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、かつ、Ａ^３は、芳香族環またはヘテロ芳香族環であり、それぞれの場合において５〜６
環の原子、およびＮ，Ｓ，Ｏから選択されたヘテロ原子３個までを含有し、この
場合、これは、Ｒ^４および１個または２個のＲ^３によって置換されていてもよく
、その際、Ｒ^３は水素、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素、分枝および非分枝のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、ＯＨ、窒素、ＣＦ_３、ＣＮ、ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＳＯ_２ＮＲ^１ ^１ＮＲ^１２、ＳＯ_２−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、Ｓ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、Ｏ−
ｐｈ、Ｏ−ＣＦ_３、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ^１３、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、そ
の際、Ｒ^１１およびＲ^１２は互いに独立して、水素またはＣ_１〜Ｃ_４−アルキル
であり、さらにはＲ^１３は水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、フェニル−Ｃ_１〜Ｃ_４ −アルキルまたはフェニルであってもよく、Ｒ^４は水素、（Ｘ）_０，１−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル−ＮＲ^４１Ｒ^４２、その際、
ｘ＝Ｏ，ＳおよびＮＲ^４３であり、かつＲ^４１およびＲ^４２は互いに独立して、
水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルおよび３〜７員
環のアミンであり、かつ、Ｒ^４３は水素およびＣ_１〜Ｃ_４−アルキルである］の
化合物、あるいはその互変異性型、考えられうるエナンチオマー型またはジアス
テレオマー型、あるいはそのプロドラックの、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメ
ラーゼ（ＰＡＲＰ）の増加した活性を伴う疾患の予防または治療のための使用。
【請求項２】ＰＡＲＰホモログ酵素またはＰＡＲＳホモログ酵素の阻害剤
としての、請求項１に記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項３】化合物が、ＰＡＲＰ自体またはＰＡＲＳ自体と比較して、こ
れらのホモログを選択的に阻害する、ＰＡＴＰ−相同酵素またはＰＡＲＳ−相同
酵素の阻害剤としての、請求項１に記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項４】神経変性疾患および神経損傷を治療するための、請求項１か
ら３までのいずれか１項に記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項５】虚血、外傷または大量出血によって引き起こされる神経変性
疾患および神経損傷の治療のための、請求項４に記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項６】卒中および頭部外傷の治療のための、請求項４に記載の使用
。
【請求項７】アルツハイマー病、パーキンソン病およびハンチントン病の
治療のための、請求項４に記載の使用。
【請求項８】虚血による損傷の治療または予防のための、請求項１から３
までのいずれか１項に記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項９】てんかん、特に全身性てんかん発作、たとえば、小発作およ
び強直間代性発作および部分的てんかん発作、たとえば、側頭葉のてんかん発作
および複雑部分発作の治療のための薬剤を製造するための、請求項１から３まで
のいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１０】腎性虚血後の腎臓損傷の治療および腎臓移植間および移植
後の治療のための、請求項１から３までのいずれか１項に記載の式Ｉの化合物の
使用。
【請求項１１】心性虚血後の心臓損傷の治療のための、請求項１から３ま
でのいずれか１項に記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１２】心臓弁置換、動脈瘤切除および心臓移植の間および後に生
じるような、微小梗塞の治療のための、請求項１から３までのいずれか１項に記
載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１３】極めて狭い冠状動脈の血管再生、たとえばＰＴＣＡおよび
バイパス手術、あるいは極めて狭い末梢動脈、特に脚部動脈の血管再生の場合の
治療のための、請求項１から３までのいずれか１項に記載の式Ｉの化合物の使用
。
【請求項１４】急性心筋梗塞およびその医学的渙散または機械的渙散の間
および後の治療のための、請求項１から３までのいずれか１項に記載の式Ｉの化
合物の使用。
【請求項１５】腫瘍およびその転移を治療するための、請求項１から３ま
でのいずれか１項に記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１６】敗血症および敗血性ショックを治療するための薬剤を製造
するための、請求項１から３までのいずれか１項に記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１７】免疫性疾患、たとえば、炎症およびリウマチ性疾患、たと
えばリウマチ様関節炎を治療するための、請求項１から３までのいずれか１項に
記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１８】糖尿病を治療するための、請求項１から３までのいずれか
１項に記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１９】選択的なＰＡＲＰ２の阻害によって予防されるかまたは治
療される疾患の予防または治療のために、ＰＡＲＰ１よりも少なくとも５倍強く
ＰＡＲＰ２を阻害する化合物の使用。