JP2003155295A - ７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドおよびその製造方法 - Google Patents
７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドおよびその製造方法Info
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- JP2003155295A JP2003155295A JP2002188849A JP2002188849A JP2003155295A JP 2003155295 A JP2003155295 A JP 2003155295A JP 2002188849 A JP2002188849 A JP 2002188849A JP 2002188849 A JP2002188849 A JP 2002188849A JP 2003155295 A JP2003155295 A JP 2003155295A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 スクアラミンなどの医薬の合成中間体として
有用な７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オ
ン−２０−カルバルデヒドを高純度で効率よく製造し得
る方法を提供すること。 【解決手段】 ３α，７α―ジヒドロキシ−５β−コラ
ン酸および／またはその塩を基質として７α−ヒドロキ
シ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデ
ヒドを生産するシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ）属に属する細菌を、３α，７α−ジヒドロキシ−５
β−コラン酸および／またはその塩を含む培地で培養す
ることを特徴とする７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−
エン−３−オン−２０−カルバルデヒドの製造方法。
有用な７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オ
ン−２０−カルバルデヒドを高純度で効率よく製造し得
る方法を提供すること。 【解決手段】 ３α，７α―ジヒドロキシ−５β−コラ
ン酸および／またはその塩を基質として７α−ヒドロキ
シ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデ
ヒドを生産するシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ）属に属する細菌を、３α，７α−ジヒドロキシ−５
β−コラン酸および／またはその塩を含む培地で培養す
ることを特徴とする７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−
エン−３−オン−２０−カルバルデヒドの製造方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、式（Ｉ）
【０００２】
【化１】
【０００３】で示される７α−ヒドロキシ−プレグナ−
４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドおよびその
製造方法に関する。本発明により提供される７α−ヒド
ロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバ
ルデヒドは、例えば、下式で示されるスクアラミン（ｓ
ｑｕａｌａｍｉｎｅ）などの医薬の合成中間体として有
用である。
４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドおよびその
製造方法に関する。本発明により提供される７α−ヒド
ロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバ
ルデヒドは、例えば、下式で示されるスクアラミン（ｓ
ｑｕａｌａｍｉｎｅ）などの医薬の合成中間体として有
用である。
【０００４】
【化２】
【０００５】スクアラミンは、グラム陽性菌、グラム陰
性菌、真菌などに対する強力な抗菌活性を有するととも
に、抗ガン活性を有することが報告され、新たな抗生物
質として注目されている化合物である［ジャーナル・オ
ブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅ
ｍ．）、６３巻、３７８６頁（１９９８年）；ジャーナ
ル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．
Ｃｈｅｍ．）、６３巻、８５９９頁（１９９８年）；Ｗ
Ｏ ９８／２４８００など参照］。
性菌、真菌などに対する強力な抗菌活性を有するととも
に、抗ガン活性を有することが報告され、新たな抗生物
質として注目されている化合物である［ジャーナル・オ
ブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅ
ｍ．）、６３巻、３７８６頁（１９９８年）；ジャーナ
ル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．
Ｃｈｅｍ．）、６３巻、８５９９頁（１９９８年）；Ｗ
Ｏ ９８／２４８００など参照］。
【０００６】
【従来の技術】従来、スクアラミンはサメの肝臓から抽
出されていたが、その抽出効率が０．００１〜０．００
２重量％と極めて低いため、化学的合成方法の検討が行
われてきた。スクアラミンの化学的合成方法としては、
１）３β−アセトキシ−５−コラン酸を出発原料とする
方法［テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒ
ｏｎ Ｌｅｔｔ．）、３５巻、８１０３頁（１９９４
年）参照］、２）３β−ヒドロキシ−５−コラン酸を出
発原料とする方法［ジャーナル・オブ・オーガニック・
ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）、６０巻、５
１２１頁（１９９５年）；ＷＯ ９４／１９３６６参
照］、３）２１−ヒドロキシ−２０−メチル−プレグナ
−４−エン−３−オンを出発原料とする方法［ＷＯ ９
８／２４８００；オルガニック・レターズ（Ｏｒｇ．Ｌ
ｅｔｔ．）、２巻、２９２１頁（２０００年）参照］、
４）スティグマステロールを出発原料とする方法［ジャ
ーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒ
ｇ．Ｃｈｅｍ．）、６３巻、３７８６頁（１９９８
年）；ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー
（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）、６３巻、８５９９頁（１
９９８年）；ＷＯ ９８／２４８００参照］が知られて
いる。
出されていたが、その抽出効率が０．００１〜０．００
２重量％と極めて低いため、化学的合成方法の検討が行
われてきた。スクアラミンの化学的合成方法としては、
１）３β−アセトキシ−５−コラン酸を出発原料とする
方法［テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒ
ｏｎ Ｌｅｔｔ．）、３５巻、８１０３頁（１９９４
年）参照］、２）３β−ヒドロキシ−５−コラン酸を出
発原料とする方法［ジャーナル・オブ・オーガニック・
ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）、６０巻、５
１２１頁（１９９５年）；ＷＯ ９４／１９３６６参
照］、３）２１−ヒドロキシ−２０−メチル−プレグナ
−４−エン−３−オンを出発原料とする方法［ＷＯ ９
８／２４８００；オルガニック・レターズ（Ｏｒｇ．Ｌ
ｅｔｔ．）、２巻、２９２１頁（２０００年）参照］、
４）スティグマステロールを出発原料とする方法［ジャ
ーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒ
ｇ．Ｃｈｅｍ．）、６３巻、３７８６頁（１９９８
年）；ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー
（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）、６３巻、８５９９頁（１
９９８年）；ＷＯ ９８／２４８００参照］が知られて
いる。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】上記１）、２）および
３）の方法でそれぞれ出発原料として用いる３β−アセ
トキシ−５−コラン酸、３β−ヒドロキシ−５−コラン
酸、２１−ヒドロキシ−２０−メチル−プレグナ−４−
エン−３−オンはいずれも高価である。また、上記１）
の方法ではスクアラミンを得るまでに１７工程を要し、
２）の方法では１９工程を要するなど反応操作が煩雑で
ある。したがって、これらの方法はスクアラミンの工業
的に有利な製造方法とは言い難い。
３）の方法でそれぞれ出発原料として用いる３β−アセ
トキシ−５−コラン酸、３β−ヒドロキシ−５−コラン
酸、２１−ヒドロキシ−２０−メチル−プレグナ−４−
エン−３−オンはいずれも高価である。また、上記１）
の方法ではスクアラミンを得るまでに１７工程を要し、
２）の方法では１９工程を要するなど反応操作が煩雑で
ある。したがって、これらの方法はスクアラミンの工業
的に有利な製造方法とは言い難い。
【０００８】一方、上記４）の方法では、出発原料とし
て用いるスティグマステロールは安価に入手可能である
が、スクアラミンの合成までには２０工程を要する。ま
た、４）の方法では、３位水酸基を選択的に酸化する工
程で使用する炭酸銀が高価であること、低温下でのオゾ
ン酸化工程を経由するので特殊な反応設備が必要なこ
と、などの問題点が存在しており、この方法も必ずしも
工業的に有利な方法とはいえない。
て用いるスティグマステロールは安価に入手可能である
が、スクアラミンの合成までには２０工程を要する。ま
た、４）の方法では、３位水酸基を選択的に酸化する工
程で使用する炭酸銀が高価であること、低温下でのオゾ
ン酸化工程を経由するので特殊な反応設備が必要なこ
と、などの問題点が存在しており、この方法も必ずしも
工業的に有利な方法とはいえない。
【０００９】本発明の目的は、スクアラミンなどの医薬
の合成中間体として有用な化合物を提供することにあ
る。本発明の他の目的は、上記の化合物を、入手容易な
原料より、高純度で効率よく製造し得る方法を提供する
ことにある。
の合成中間体として有用な化合物を提供することにあ
る。本発明の他の目的は、上記の化合物を、入手容易な
原料より、高純度で効率よく製造し得る方法を提供する
ことにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記目的
を達成するために鋭意検討を重ねた結果、３α，７α−
ジヒドロキシ−５β−コラン酸および／またはその塩を
原料として選び、該３α，７α−ジヒドロキシ−５β−
コラン酸および／またはその塩を微生物を用いた変換反
応に付すことにより、新規な化合物である７α−ヒドロ
キシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバル
デヒドが高純度で効率よく得られることを見出し、本発
明を完成するに至った。
を達成するために鋭意検討を重ねた結果、３α，７α−
ジヒドロキシ−５β−コラン酸および／またはその塩を
原料として選び、該３α，７α−ジヒドロキシ−５β−
コラン酸および／またはその塩を微生物を用いた変換反
応に付すことにより、新規な化合物である７α−ヒドロ
キシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバル
デヒドが高純度で効率よく得られることを見出し、本発
明を完成するに至った。
【００１１】本発明は、７α−ヒドロキシ−プレグナ−
４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドである。ま
た、本発明は、３α，７α―ジヒドロキシ−５β−コラ
ン酸および／またはその塩を基質として７α−ヒドロキ
シ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデ
ヒドを生産するシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ）属に属する細菌を、３α，７α−ジヒドロキシ−５
β−コラン酸および／またはその塩を含む培地で培養す
ることを特徴とする７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−
エン−３−オン−２０−カルバルデヒドの製造方法であ
る。
４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドである。ま
た、本発明は、３α，７α―ジヒドロキシ−５β−コラ
ン酸および／またはその塩を基質として７α−ヒドロキ
シ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデ
ヒドを生産するシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ）属に属する細菌を、３α，７α−ジヒドロキシ−５
β−コラン酸および／またはその塩を含む培地で培養す
ることを特徴とする７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−
エン−３−オン−２０−カルバルデヒドの製造方法であ
る。
【００１２】
【発明の実施の形態】本発明において用いられるシュー
ドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属する細菌と
しては、例えばシュードモナス・プチダＤ４０１４（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｄ４０１４）菌
株（ＦＥＲＭ ＢＰ−２０５）に変異処理を施して得ら
れたシュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３５７−３
Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｄ４０１
４−Ａ３５７−３Ａ）菌株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８０７
０）が挙げられる。
ドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属する細菌と
しては、例えばシュードモナス・プチダＤ４０１４（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｄ４０１４）菌
株（ＦＥＲＭ ＢＰ−２０５）に変異処理を施して得ら
れたシュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３５７−３
Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｄ４０１
４−Ａ３５７−３Ａ）菌株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８０７
０）が挙げられる。
【００１３】シュードモナス・プチダＤ４０１４（Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａＤ４０１４）菌株お
よびシュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３５７−３
Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｄ４０１
４−Ａ３５７−３Ａ）菌株の菌学的性質を以下の表１お
よび表２に示す。
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａＤ４０１４）菌株お
よびシュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３５７−３
Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｄ４０１
４−Ａ３５７−３Ａ）菌株の菌学的性質を以下の表１お
よび表２に示す。
【００１４】
【表１】
【００１５】
【表２】
【００１６】シュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３
５７−３Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ
Ｄ４０１４−Ａ３５７−３Ａ）菌株の親株であるシュー
ドモナス・プチダＤ４０１４（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ｐｕｔｉｄａ Ｄ４０１４）株は、シュードモナス属
プチダ種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）に
属する細菌であり［特公平３−６９９１８号参照］、一
般に突然変異株はその親株と同じ種に属するものと考え
られていること、および上記の表１に示した菌学的性質
より、シュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３５７−
３Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｄ４０
１４−Ａ３５７−３Ａ）菌株はシュードモナス属プチダ
種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）に属する
細菌であると判定した。
５７−３Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ
Ｄ４０１４−Ａ３５７−３Ａ）菌株の親株であるシュー
ドモナス・プチダＤ４０１４（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ｐｕｔｉｄａ Ｄ４０１４）株は、シュードモナス属
プチダ種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）に
属する細菌であり［特公平３−６９９１８号参照］、一
般に突然変異株はその親株と同じ種に属するものと考え
られていること、および上記の表１に示した菌学的性質
より、シュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３５７−
３Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｄ４０
１４−Ａ３５７−３Ａ）菌株はシュードモナス属プチダ
種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）に属する
細菌であると判定した。
【００１７】本菌株は、シュードモナス・プチダＤ４０
１４−Ａ３５７−３Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕ
ｔｉｄａ Ｄ４０１４−Ａ３５７−３Ａ）菌株と命名さ
れ、ＦＥＲＭ ＢＰ−８０７０として独立行政法人産業
技術総合研究所、特許生物寄託センターに寄託、保管さ
れている。
１４−Ａ３５７−３Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕ
ｔｉｄａ Ｄ４０１４−Ａ３５７−３Ａ）菌株と命名さ
れ、ＦＥＲＭ ＢＰ−８０７０として独立行政法人産業
技術総合研究所、特許生物寄託センターに寄託、保管さ
れている。
【００１８】本発明による７α−ヒドロキシ−プレグナ
−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドの生産
は、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸および
／またはその塩を基質として、７α−ヒドロキシ−プレ
グナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドを生
産するシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に
属する細菌を、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラ
ン酸および／またはその塩を含む培地で培養することに
より行う。
−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドの生産
は、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸および
／またはその塩を基質として、７α−ヒドロキシ−プレ
グナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドを生
産するシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に
属する細菌を、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラ
ン酸および／またはその塩を含む培地で培養することに
より行う。
【００１９】３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン
酸の塩としては、例えば、３α，７α−ジヒドロキシ−
５β−コラン酸のナトリウム塩、カリウム塩などのアル
カリ金属塩またはカルシウム塩、マグネシウム塩などの
アルカリ土類金属塩などが挙げられる。培地中の３α，
７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸および／またはそ
の塩の濃度は、１〜３０ｇ／Ｌの範囲であるのが好まし
く、単離効率、細菌に対する阻害性などの観点からは５
〜２０ｇ／Ｌの範囲であるのがより好ましい。
酸の塩としては、例えば、３α，７α−ジヒドロキシ−
５β−コラン酸のナトリウム塩、カリウム塩などのアル
カリ金属塩またはカルシウム塩、マグネシウム塩などの
アルカリ土類金属塩などが挙げられる。培地中の３α，
７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸および／またはそ
の塩の濃度は、１〜３０ｇ／Ｌの範囲であるのが好まし
く、単離効率、細菌に対する阻害性などの観点からは５
〜２０ｇ／Ｌの範囲であるのがより好ましい。
【００２０】培地は、上記のシュードモナス（Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ）属に属する細菌が資化利用できる栄養
源を含有するものであればよい。炭素源としては、３
α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸および／また
はその塩を単一炭素源としてもよく、または３α，７α
−ジヒドロキシ−５β−コラン酸および／またはその塩
にグルコース、グリセリン、ペプトン、肉エキス、酵母
エキスなどを併用してもよい。窒素源としては、例えば
硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、硝酸カリウ
ムなどの無機窒素源；ペプトン、肉エキス、酵母エキス
などの有機窒素源などが用いられる。また、この他にリ
ン酸水素二カリウム、リン酸二水素カリウム、硫酸マグ
ネシウムなどの無機塩類が添加される。
ｄｏｍｏｎａｓ）属に属する細菌が資化利用できる栄養
源を含有するものであればよい。炭素源としては、３
α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸および／また
はその塩を単一炭素源としてもよく、または３α，７α
−ジヒドロキシ−５β−コラン酸および／またはその塩
にグルコース、グリセリン、ペプトン、肉エキス、酵母
エキスなどを併用してもよい。窒素源としては、例えば
硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、硝酸カリウ
ムなどの無機窒素源；ペプトン、肉エキス、酵母エキス
などの有機窒素源などが用いられる。また、この他にリ
ン酸水素二カリウム、リン酸二水素カリウム、硫酸マグ
ネシウムなどの無機塩類が添加される。
【００２１】培養条件に特に制限はないが、培養温度は
２８〜３２℃の範囲であるのが好ましく、２９〜３１℃
の範囲であるのがより好ましい。また、培地のｐＨは、
７〜９の範囲であるのが好ましく、７．７〜８．６の範
囲であるのがより好ましい。培養時間は、１２時間〜３
日間の範囲であるのが好ましい。培養は、振盪培養また
は通気攪拌培養などの好気条件下に行う。
２８〜３２℃の範囲であるのが好ましく、２９〜３１℃
の範囲であるのがより好ましい。また、培地のｐＨは、
７〜９の範囲であるのが好ましく、７．７〜８．６の範
囲であるのがより好ましい。培養時間は、１２時間〜３
日間の範囲であるのが好ましい。培養は、振盪培養また
は通気攪拌培養などの好気条件下に行う。
【００２２】このようにして細菌の培養を行うことによ
り、原料である３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラ
ン酸および／またはその塩が細菌により変換され、培養
液中に７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オ
ン−２０−カルバルデヒドが蓄積する。この際、蓄積さ
れた７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン
−２０−カルバルデヒドは、基質の３α，７α−ジヒド
ロキシ−５β−コラン酸および／またはその塩に比し
て、水に対する溶解度が著しく小さいため、培養液中に
析出沈澱する。該７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エ
ン−３−オン−２０−カルバルデヒドの分離採取は、例
えば、沈澱している７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−
エン−３−オン−２０−カルバルデヒドを含む培養液を
静置し、浮遊している菌体を含む培養液からデカンテー
ションにより分離することにより行うか、遠心分離また
は濾過助剤を用いる操作により得られる、菌体と７α−
ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カ
ルバルデヒドを含む混合物にメタノールを加えて、７α
−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−
カルバルデヒドを溶解させた後、菌体およびその他の不
溶物を除去して得られるメタノール溶液からメタノール
を減圧下に留去させることにより行う。この際、水を加
えてメタノールを留去させると、７α−ヒドロキシ−プ
レグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドは
針状結晶として析出するため、分離回収が容易となる。
り、原料である３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラ
ン酸および／またはその塩が細菌により変換され、培養
液中に７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オ
ン−２０−カルバルデヒドが蓄積する。この際、蓄積さ
れた７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン
−２０−カルバルデヒドは、基質の３α，７α−ジヒド
ロキシ−５β−コラン酸および／またはその塩に比し
て、水に対する溶解度が著しく小さいため、培養液中に
析出沈澱する。該７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エ
ン−３−オン−２０−カルバルデヒドの分離採取は、例
えば、沈澱している７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−
エン−３−オン−２０−カルバルデヒドを含む培養液を
静置し、浮遊している菌体を含む培養液からデカンテー
ションにより分離することにより行うか、遠心分離また
は濾過助剤を用いる操作により得られる、菌体と７α−
ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カ
ルバルデヒドを含む混合物にメタノールを加えて、７α
−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−
カルバルデヒドを溶解させた後、菌体およびその他の不
溶物を除去して得られるメタノール溶液からメタノール
を減圧下に留去させることにより行う。この際、水を加
えてメタノールを留去させると、７α−ヒドロキシ−プ
レグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドは
針状結晶として析出するため、分離回収が容易となる。
【００２３】７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−
３−オン−２０−カルバルデヒド、例えば（２０Ｓ）−
７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２
０−カルバルデヒドは、その２０位ホルミル基を還元す
ることにより（２０Ｓ）−７α，２１−ジヒドロキシ−
２０−メチル−プレグナ−４−エン−３−オン（後述の
参考例２参照）に誘導される。この化合物は、さらに、
オルガニック・レターズ（Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．）、２
巻、２９２１頁（２０００年）に記載された方法により
スクアラミンに変換される。
３−オン−２０−カルバルデヒド、例えば（２０Ｓ）−
７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２
０−カルバルデヒドは、その２０位ホルミル基を還元す
ることにより（２０Ｓ）−７α，２１−ジヒドロキシ−
２０−メチル−プレグナ−４−エン−３−オン（後述の
参考例２参照）に誘導される。この化合物は、さらに、
オルガニック・レターズ（Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．）、２
巻、２９２１頁（２０００年）に記載された方法により
スクアラミンに変換される。
【００２４】
【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに具体的に
説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら制限さ
れるものではない。
説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら制限さ
れるものではない。
【００２５】参考例１
シュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３５７−３Ａの
取得方法 培地１（普通寒天培地）の斜面培地に一晩生育させたシ
ュードモナス・プチダＤ４０１４（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｄ４０１４、ＦＥＲＭＢＰ−２０
５）菌株の１白金耳を、予め試験管に準備した培地２
（ブイヨン液体培地）の１０ｍｌに植菌し、３０℃、２
００ｒｐｓで一晩振盪培養した。得られた培養液の１ｍ
ｌを予め試験管に準備した培地２（前記のとおり）の１
０ｍｌに植菌し、６時間振盪培養した。得られた培養液
を０．４５μｍのメンブレンフィルターで無菌的に濾過
集菌し、０．１Ｍリン酸緩衝液２０ｍｌで洗浄した後、
同緩衝液２５ｍｌに該フィルターに付着した菌を懸濁さ
せた。得られた菌液のうち４ｍｌに終濃度が５０μｇ／
ｍｌとなるようにＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジンを添加し、３０℃で１０分間振盪するこ
とにより、突然変異処理を行った。突然変異処理を施し
た菌液は、直ちに上記のリン酸緩衝液で１０倍に希釈
し、これを培地１の平板培地に５００〜１０００個のコ
ロニーを出現させるように希釈して塗布した後、３０℃
で一晩静置培養を行った。出現したコロニーをランダム
に培地１の平板培地に釣菌（５０個／プレート）し、翌
日それぞれを培地１（前記のとおり）の斜面培地に植菌
した。こうして得られた生育菌株を、予め滅菌した培地
３（組成：３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸
１０ｇ、水酸化ナトリウム１．１ｇ、硝酸アンモニウム
２ｇ、リン酸二水素一カリウム１ｇ、リン酸水素二カリ
ウム６ｇ、硫酸マグネシウム０．５ｇ、ペプトン０．５
ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、水道水
１Ｌ、ｐＨ７．８）の１０ｍｌを含む試験管に２白金耳
植菌し、３０℃、２００ｒｐｓで２４時間、振盪培養し
た。得られたそれぞれの培養液中の生産物を薄層クロマ
トグラフィーにより検定し、目的とする（２０Ｓ）−７
α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０
−カルバルデヒドを選択的に蓄積している一菌株を見出
し、これをシュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３５
７−３Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｄ
４０１４−Ａ３５７−３Ａ）と命名した。
取得方法 培地１（普通寒天培地）の斜面培地に一晩生育させたシ
ュードモナス・プチダＤ４０１４（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｄ４０１４、ＦＥＲＭＢＰ−２０
５）菌株の１白金耳を、予め試験管に準備した培地２
（ブイヨン液体培地）の１０ｍｌに植菌し、３０℃、２
００ｒｐｓで一晩振盪培養した。得られた培養液の１ｍ
ｌを予め試験管に準備した培地２（前記のとおり）の１
０ｍｌに植菌し、６時間振盪培養した。得られた培養液
を０．４５μｍのメンブレンフィルターで無菌的に濾過
集菌し、０．１Ｍリン酸緩衝液２０ｍｌで洗浄した後、
同緩衝液２５ｍｌに該フィルターに付着した菌を懸濁さ
せた。得られた菌液のうち４ｍｌに終濃度が５０μｇ／
ｍｌとなるようにＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジンを添加し、３０℃で１０分間振盪するこ
とにより、突然変異処理を行った。突然変異処理を施し
た菌液は、直ちに上記のリン酸緩衝液で１０倍に希釈
し、これを培地１の平板培地に５００〜１０００個のコ
ロニーを出現させるように希釈して塗布した後、３０℃
で一晩静置培養を行った。出現したコロニーをランダム
に培地１の平板培地に釣菌（５０個／プレート）し、翌
日それぞれを培地１（前記のとおり）の斜面培地に植菌
した。こうして得られた生育菌株を、予め滅菌した培地
３（組成：３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸
１０ｇ、水酸化ナトリウム１．１ｇ、硝酸アンモニウム
２ｇ、リン酸二水素一カリウム１ｇ、リン酸水素二カリ
ウム６ｇ、硫酸マグネシウム０．５ｇ、ペプトン０．５
ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、水道水
１Ｌ、ｐＨ７．８）の１０ｍｌを含む試験管に２白金耳
植菌し、３０℃、２００ｒｐｓで２４時間、振盪培養し
た。得られたそれぞれの培養液中の生産物を薄層クロマ
トグラフィーにより検定し、目的とする（２０Ｓ）−７
α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０
−カルバルデヒドを選択的に蓄積している一菌株を見出
し、これをシュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３５
７−３Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｄ
４０１４−Ａ３５７−３Ａ）と命名した。
【００２６】実施例１
シュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３５７−３Ａ
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｄ４０１４
−Ａ３５７−３Ａ）を培地１（前記のとおり）の斜面培
地に植菌し、３０℃で１日間培養した。次に、生育した
菌体の２白金耳を３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コ
ラン酸を含む培地３（前記のとおり）の液体培地１０ｍ
ｌに植菌し、３０℃で一晩振盪培養した後、得られた培
養液を同組成の培地３（前記のとおり）の１００ｍｌが
入った５００ｍｌ容の坂口フラスコに植菌し、３０℃、
２００ｒｐｓで４８時間培養した。なお、培養に供した
３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の総量は
１．１ｇ（２．８ｍｍｏｌ）である。得られた培養液を
５０００ｒｐｍで３０分間、遠心分離し、得られた菌体
と生成物の混合物に水１００ｍｌを入れて懸濁させた
後、再度、遠心分離処理を行うことにより該混合物を洗
浄した。該混合物にメタノール２００ｍｌを添加して生
成物を溶解した後、濾過して清澄なメタノール溶液を得
た。該メタノール溶液に水３０ｍｌを加えた後、ロータ
リーエバポレーターによりメタノールを一部留去し、次
いで、得られた濃縮液を冷却し、晶析した固形物を濾取
し、乾燥することにより、下記の物性を有する（２０
Ｓ）−７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オ
ン−２０−カルバルデヒド３１０ｍｇ（０．９０ｍｍｏ
ｌ、収率３２％）を得た。
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｄ４０１４
−Ａ３５７−３Ａ）を培地１（前記のとおり）の斜面培
地に植菌し、３０℃で１日間培養した。次に、生育した
菌体の２白金耳を３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コ
ラン酸を含む培地３（前記のとおり）の液体培地１０ｍ
ｌに植菌し、３０℃で一晩振盪培養した後、得られた培
養液を同組成の培地３（前記のとおり）の１００ｍｌが
入った５００ｍｌ容の坂口フラスコに植菌し、３０℃、
２００ｒｐｓで４８時間培養した。なお、培養に供した
３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の総量は
１．１ｇ（２．８ｍｍｏｌ）である。得られた培養液を
５０００ｒｐｍで３０分間、遠心分離し、得られた菌体
と生成物の混合物に水１００ｍｌを入れて懸濁させた
後、再度、遠心分離処理を行うことにより該混合物を洗
浄した。該混合物にメタノール２００ｍｌを添加して生
成物を溶解した後、濾過して清澄なメタノール溶液を得
た。該メタノール溶液に水３０ｍｌを加えた後、ロータ
リーエバポレーターによりメタノールを一部留去し、次
いで、得られた濃縮液を冷却し、晶析した固形物を濾取
し、乾燥することにより、下記の物性を有する（２０
Ｓ）−７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オ
ン−２０−カルバルデヒド３１０ｍｇ（０．９０ｍｍｏ
ｌ、収率３２％）を得た。
【００２７】得られた（２０Ｓ）−７α−ヒドロキシ−
プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒド
の一部を取り、これにメタノールを加えて１％溶液と
し、この溶液をＯＤＳ−８０ＴＭ（商品名、東ソー株式
会社製、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ）カラム（カラム温度
４０℃、カラムオーブン；Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＣＴＯ−
６Ａ 株式会社島津製作所製）を備えた高速液体クロマ
トグラフィー（ポンプ部；モデル５１０ ウォーターズ
社製）に注入した。移動相として水／メタノールの容量
比２７／７３の混合液（リン酸５０μｌ／Ｌ添加）を１
ｍｌ／分で流し、検出を屈折率方式（検出器；Ｓｈｏｄ
ｅｘ ＲＩ−７１ 昭和電工株式会社製）で行った。得
られたクロマトグラムにおける各ピークの面積比（デー
タ処理；Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｃ−Ｒ７Ａ ｐｌｕｓ 株
式会社島津製作所製）から上記（２０Ｓ）−７α−ヒド
ロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバ
ルデヒドの純度を求めたところ、９６％であった。
プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒド
の一部を取り、これにメタノールを加えて１％溶液と
し、この溶液をＯＤＳ−８０ＴＭ（商品名、東ソー株式
会社製、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ）カラム（カラム温度
４０℃、カラムオーブン；Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＣＴＯ−
６Ａ 株式会社島津製作所製）を備えた高速液体クロマ
トグラフィー（ポンプ部；モデル５１０ ウォーターズ
社製）に注入した。移動相として水／メタノールの容量
比２７／７３の混合液（リン酸５０μｌ／Ｌ添加）を１
ｍｌ／分で流し、検出を屈折率方式（検出器；Ｓｈｏｄ
ｅｘ ＲＩ−７１ 昭和電工株式会社製）で行った。得
られたクロマトグラムにおける各ピークの面積比（デー
タ処理；Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｃ−Ｒ７Ａ ｐｌｕｓ 株
式会社島津製作所製）から上記（２０Ｓ）−７α−ヒド
ロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバ
ルデヒドの純度を求めたところ、９６％であった。
【００２８】１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，
ＣＤＣｌ３ ，ＴＭＳ基準，ｐｐｍ）δ：９．５６８
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９５Ｈｚ），５．４２７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝１．９８Ｈｚ），３．９７−３．９８（１Ｈ，
ｂｓ），２．６３５（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝２．９６，
２．９６，１４．８４Ｈｚ），２．３０−２．５５（４
Ｈ，ｍ），１．１０−２．１０（１４Ｈ，ｍ），１．２
０５（３Ｈ，ｓ），１．１３９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９
４Ｈｚ），０．７６９（３Ｈ，ｓ）
ＣＤＣｌ３ ，ＴＭＳ基準，ｐｐｍ）δ：９．５６８
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９５Ｈｚ），５．４２７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝１．９８Ｈｚ），３．９７−３．９８（１Ｈ，
ｂｓ），２．６３５（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝２．９６，
２．９６，１４．８４Ｈｚ），２．３０−２．５５（４
Ｈ，ｍ），１．１０−２．１０（１４Ｈ，ｍ），１．２
０５（３Ｈ，ｓ），１．１３９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９
４Ｈｚ），０．７６９（３Ｈ，ｓ）
【００２９】参考例２
（２０Ｓ）−７α，２１−ジヒドロキシ−２０−メチル
−プレグナ−４−エン−３−オンの合成 実施例１と同様にして得られた（２０Ｓ）−７α−ヒド
ロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバ
ルデヒド２．００ｇ（５．８１ｍｍｏｌ）にエタノール
２０ｍｌを加え、攪拌しながら氷冷した。得られた溶液
に、水素化ホウ素ナトリウム０．１１ｇ（２．９１ｍｍ
ｏｌ）を加えた後、氷冷下で１時間撹拌した。得られた
反応液に３％塩酸を加えて中和し、エタノールを減圧下
で留去した。残留物に酢酸エチル１００ｍｌおよび水２
０ｍｌを加え洗浄し、次いで、水層を分離し、有機層を
無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過し、減圧下で濃
縮することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ）−７
α，２１−ジヒドロキシ−２０−メチル−プレグナ−４
−エン−３−オン１．７７ｇ（収率８８％）を得た。
−プレグナ−４−エン−３−オンの合成 実施例１と同様にして得られた（２０Ｓ）−７α−ヒド
ロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバ
ルデヒド２．００ｇ（５．８１ｍｍｏｌ）にエタノール
２０ｍｌを加え、攪拌しながら氷冷した。得られた溶液
に、水素化ホウ素ナトリウム０．１１ｇ（２．９１ｍｍ
ｏｌ）を加えた後、氷冷下で１時間撹拌した。得られた
反応液に３％塩酸を加えて中和し、エタノールを減圧下
で留去した。残留物に酢酸エチル１００ｍｌおよび水２
０ｍｌを加え洗浄し、次いで、水層を分離し、有機層を
無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過し、減圧下で濃
縮することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ）−７
α，２１−ジヒドロキシ−２０−メチル−プレグナ−４
−エン−３−オン１．７７ｇ（収率８８％）を得た。
【００３０】１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，
ＣＤＣｌ３ ，ＴＭＳ基準，ｐｐｍ）δ：５．７９６
（１Ｈ，ｓ），３．９６５（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１．９
８Ｈｚ），３．６３２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．９６，１
０．８８Ｈｚ），３．３７１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．９
２，１０．８８Ｈｚ），２．６１２（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ
＝２．９７，２．９７，１４．８４Ｈｚ），２．４１５
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．９７，１４．８４Ｈｚ），２．
３−２．５（ｍ，２Ｈ），１．０−２．１（ｍ，１５
Ｈ），１．１９４（３Ｈ，ｓ），１．０５２（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．９２Ｈｚ），０．７４０（３Ｈ，ｓ）．
ＣＤＣｌ３ ，ＴＭＳ基準，ｐｐｍ）δ：５．７９６
（１Ｈ，ｓ），３．９６５（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１．９
８Ｈｚ），３．６３２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．９６，１
０．８８Ｈｚ），３．３７１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．９
２，１０．８８Ｈｚ），２．６１２（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ
＝２．９７，２．９７，１４．８４Ｈｚ），２．４１５
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．９７，１４．８４Ｈｚ），２．
３−２．５（ｍ，２Ｈ），１．０−２．１（ｍ，１５
Ｈ），１．１９４（３Ｈ，ｓ），１．０５２（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．９２Ｈｚ），０．７４０（３Ｈ，ｓ）．
【００３１】
【発明の効果】本発明によれば、スクアラミンなどの医
薬の合成中間体として有用な７α−ヒドロキシ−プレグ
ナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドを高純
度で効率よく製造することができる。
薬の合成中間体として有用な７α−ヒドロキシ−プレグ
ナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドを高純
度で効率よく製造することができる。
フロントページの続き
Ｆターム(参考） 4B064 AH07 CA02 CC06 CC07 CC12
CD02 CD07 CD09 CD20 CD21
CE08 CE15 DA01
4C091 AA02 BB05 CC01 DD01 EE07
FF01 GG02 GG13 HH01 JJ03
KK01 LL01 MM03 NN01 PA02
PA05 PB03 QQ01 RR20
Claims (3)
- 【請求項１】 ７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン
−３−オン−２０−カルバルデヒド。 - 【請求項２】 ３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラ
ン酸および／またはその塩を基質として７α−ヒドロキ
シ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデ
ヒドを生産するシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ）属に属する細菌を、３α，７α−ジヒドロキシ−５
β−コラン酸および／またはその塩を含む培地で培養す
ることを特徴とする７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−
エン−３−オン−２０−カルバルデヒドの製造方法。 - 【請求項３】 シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ）属に属する細菌がシュードモナス・プチダＤ４０１
４−Ａ３５７−３Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔ
ｉｄａ Ｄ４０１４−Ａ３５７−３Ａ）菌株（ＦＥＲＭ
ＢＰ−８０７０）である請求項２記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002188849A JP3917021B2 (ja) | 2001-09-04 | 2002-06-28 | ７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドおよびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001-267025 | 2001-09-04 | ||
| JP2001267025 | 2001-09-04 | ||
| JP2002188849A JP3917021B2 (ja) | 2001-09-04 | 2002-06-28 | ７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドおよびその製造方法 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003155295A true JP2003155295A (ja) | 2003-05-27 |
| JP2003155295A5 JP2003155295A5 (ja) | 2005-06-16 |
| JP3917021B2 JP3917021B2 (ja) | 2007-05-23 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002188849A Expired - Fee Related JP3917021B2 (ja) | 2001-09-04 | 2002-06-28 | ７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドおよびその製造方法 |
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| Country | Link |
|---|---|
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-
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- 2002-06-28 JP JP2002188849A patent/JP3917021B2/ja not_active Expired - Fee Related
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