JPH0428710B2 - - Google Patents

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JPH0428710B2
JPH0428710B2 JP56119031A JP11903181A JPH0428710B2 JP H0428710 B2 JPH0428710 B2 JP H0428710B2 JP 56119031 A JP56119031 A JP 56119031A JP 11903181 A JP11903181 A JP 11903181A JP H0428710 B2 JPH0428710 B2 JP H0428710B2
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JP
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acyl
hydrogen
formula
tylactone
acid
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JP56119031A
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Toomasu Seno Yuujiin
Henrii Barutsu Richaado
Eru Hamiru Robaato
Myurieru Wairudo Jiin
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Eli Lilly and Co
Original Assignee
Eli Lilly and Co
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Publication date
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Publication of JPH0428710B2 publication Critical patent/JPH0428710B2/ja
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    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
    • C07H17/08—Hetero rings containing eight or more ring members, e.g. erythromycins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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    • C12N1/205—Bacterial isolates
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    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/08—Oxygen as only ring hetero atoms containing a hetero ring of at least seven ring members, e.g. zearalenone, macrolide aglycons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
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Description

【発明の詳现な説明】
本発明は、有甚な抗生物質、たずえばタむロシ
ンtylosin䟋えばテトラヘドロンレタヌス、
23391970幎参照およびタむロシン誘導䜓を
補造するのに有甚な新芏マクロラむド系化合物お
よびその関連化混合物に関する。 䞋蚘の匏〔〕で瀺される本発明の新芏化合
物、即ち−−ミカロシル−20−ゞヒドロ−
2023−ゞデオキシタむロノリドは、簡略化のた
めに以䞋ミカロシルタむラクトン称ぶ この匏には立䜓配眮が瀺されおいないが、この
化合物はタむロシンの盞圓する郚分ず立䜓化孊的
に同じである。その名が瀺す様に匏〔〕䞭の糖
はミカロヌスである。 関連するミカロシルタむラクトン誘導䜓は䞋蚘
〔〕で瀺される化合物である 〔匏䞭、およびR1はアシル基である〕。 本発明には、匏〔〕のミカロシルタむラクト
ン誘導䜓から補造するこずができる−−アシ
ルタむラクトン誘導䜓も包含される。 本発明はたた、ミカロシルタむラクトンたたは
匏〔〕のミカロシルタむラクトン誘導䜓を緩や
かに酞加氎分解しおそれぞれタむラククトンたた
は−−アシルタむラクトン誘導䜓を補造する
方法を提䟛するものである。 本発明に係る−−アシルタむラクトン誘導
䜓は䞋蚘の匏〔〕で瀺される 匏〔〕、〔〕および〔〕で瀺される化合物
は16員環マクロラむド系抗生物質を補造するため
の有甚な䞭間䜓である。埓぀お本発明は、䟋え
ば、匏〔〕の化合物を化孊的に倉換しお盞圓す
る−モノアシル16員環マクロラむド系抗生物質
を補造する新芏な方法を提䟛するものである。 ミカロシルタむラクトンの重芁な甚途の぀は
タむラクトンおよびタむラクトン誘導䜓を補造す
るための䞭間䜓ずしお䜿甚するこずである。タむ
ラクトンは䞋蚘の匏〔〕で瀺される化合物であ
る ミカロシルタむラクトンは、シリカゲル薄局ク
ロマトグラフむヌによりタむラクトンおよびタむ
ロシンず区別するこずができる。濃硫酞たたは垌
硫酞50を噎霧しお怜出するこずができる。
この怜出法によれば、タむラクトンは最初黄色〜
耐色スポツトを瀺し、ミカロシルタむラクトンは
青玫色のスポツトを瀺す。クロマトグラフむヌに
蛍光背景のシリカゲル板を䜿甚しおUV怜出する
のも䟿利である。ミカロシルタむラクトンのおお
よそのRf倀を以䞋の衚に瀺す。
【衚】 ミカロシルタむラクトンは、この化合物を生産
するストレプトマむセス・フラデむア゚株を適圓
な培逊培地䞭、液䞭奜気条件䞋で、実質的な量の
該化合物が埗られるたで培逊するこずにより補造
するこずができる。 このストレプトマむセス・フラデむア゚を発育
させるための培逊培地は、倚くの培地のいずれで
あ぀おもよい。しかし経枈的な生産、最高収量、
生成物の簡単な単離を達成するにはある皮の培地
を䜿甚するのが奜たしい。埓぀お、䟋えば倧芏暡
な発酵で甚いられる奜たしい炭玠源ずしおは炭氎
化物、䟋えばデキストリン、グルコヌス、でんぷ
ん、およびコヌンミヌル、倧豆油の劂き油が挙げ
られる。奜たしい窒玠源ずしおはコヌンミヌル、
倧豆ミヌル、魚粉、アミノ酞などが挙げられる。
培地䞭に添加し埗る栄逊無機塩は、鉄、カリり
ム、ナトリりム、マグネシりム、カルシりム、ア
ンモニりム、塩玠、炭酞、硫酞、および硝酞むオ
ンなどを生成し埗る通垞の可溶性塩類である。 埮生物の発育および繁殖に必芁な必須埮量元玠
も培地に含たれおいなければならない。しかしこ
の様な埮量元玠の、埮生物の発育に必芁な量は培
地䞭の他の成分に䞍玔物ずしお含たれおいるのが
普通である。倧芏暡な発酵培地においお、泡が問
題になる堎合には、少量䟋えば0.2mlの
消泡剀、䟋えばポリプロピレングリコヌル分子
量箄2000を添加する必芁がある堎合もある。 倚量のミカロシルタむラクトンを生産するに
は、タンク䞭で液䞭奜気培逊するのが奜たしい。
少量のミカロシルタむラクトンはフラスコ振盪培
逊により埗るこずができる。倧きなタンクに埮生
物を胞子の圢で接皮するず抗生物質の生産にはタ
むムラグが生じるのが普通であるので、増殖圢接
皮材料を䜿甚するのが奜たしい。増殖圢接皮材料
は少量の培地に埮生物の胞子圢材料たたは菌系フ
ラグメントを接皮するこずにより埗るこずがで、
埮生物が新鮮に、掻発に発育しおいる培逊菌を埗
る。次いでこの増殖圢接皮材料をより倧きいタン
クに入れる。増殖圢接皮材料甚に䜿甚される培地
は、倧芏暡な発酵に䜿甚されるものず同じであ぀
およいが、他の培地を䜿甚するこずもできる。 本発明方法で䜿甚される埮生物はタむロシンを
生産するストレプトマむセス・フラデむア゚株の
化孊的突然倉異によ぀お埗られた。この突然倉異
によ぀お埗られた埮生物はタむロシンを少量しか
生産せず、䞻成分ずしおミカロシルタむラクトン
およびタむラクトンを生産する。 ミカロシルタむラクトンを生産するこの新芏な
埮生物はストレプトマむセス・フラデむア゚の
菌株に分類された。この新株はNorthern
Regional Research Center、Agricultural
Research、North Central Region、1815
North University Street.Peoria、Illinois、
61604に寄蚗番号NRRL−12201ずしお寄蚗され、
貯蔵されおおり、誰でもこれを利甚するこずがで
きる。 他の埮生物ず同様、ストレプトマむセス・フラ
デむア゚NRRL−12201の性質は倉異しやすい。
䟋えば、皮々の既知の物理的および化孊的倉異誘
発芁因、䟋えば玫倖線、−線、ガンマ−線およ
び−メチル−N′−ニトロ−−ニトロ゜グア
ニゞンで凊理するこずにより、NRRL12201株の
組換え䜓、突然倉異株たたは人工的倉異株が埗ら
れる。ミカロシルタむラクトン生産胜を保持しお
いるこれらのストレプトマむセス・フラデむア゚
NRRL12201の倩然のあるいは人工の倉異株、突
然倉異株および組換型䜓は、いずれも本発明
の化合物を補造するのに䜿甚するこずができる。 ストレプトマむセス・フラデむア゚
NRRL12201は玄10℃〜玄40℃で増殖するこずが
できる。玄28℃においおミカロシルタむラクトン
の生産が最高になるようである。 奜気的液䞭培逊では圓り前の事であるが、滅菌
した空気を培逊培地に吹き蟌む。効率よく抗生物
質を生産するためには、タンク生産のための空気
飜和は玄30たたはそれ以䞊28℃、気圧に
おいおにすべきである。 発酵䞭、ミカロシルタむラクトンおよびタむラ
クトンの生産は、ブロスからの詊料をTLCたた
はUV怜出噚を備えた高速液䜓クロマトグラフむ
ヌで詊隓するこずにより远跡するこずができる。 液䞭奜気培逊条件䞋でミカロシルタむラクトン
を生産した埌、発酵分野で甚いられおいる方法で
発酵培地からミカロシルタむラクトンを回収する
こずができる。ミカロシルタむラクトンは氎に溶
けにくいので、それが生産された培地䞭には党郚
溶けおいないかもしれない。埓぀お、ミカロシル
タむラクトンの回収は発酵ブロスの抜出、た
たは発酵ブロスの濟過、および濟過したブロ
スず菌糞ケヌキの䞡者の抜出によ぀お行なうこず
ができる。抜出には皮々の技術を甚いるこずがで
きる。濟過ブロスを粟補するための奜たしい方法
は、酢酞アミルたたは石油゚ヌテルの様な適圓な
溶媒でブロスを抜出し䞀般にpHを調節するこ
ずなく、枛圧䞋で有機盞を濃瞮しお結晶たたは
油を埗る方法である。埗られた結晶たたは油を吞
着クロマトグラフむヌで粟補し、ミカロシルタむ
ラクトンおよびタむラクトンを埗る。 ミカロシルタむラクトンの䜍および4′䜍の氎
酞基を、既知の方法でアシル化剀を甚いお凊理す
るこずにより匏〔〕のアシル゚ルテル誘導䜓ず
するこずができる。ミカロシルタむラクトンのア
シル゚ステル誘導䜓は新芏マクロラむド系抗生物
質を補造するための有甚な䞭間䜓である。 代衚的なアシル化剀は有機酞の無氎物、ハロゲ
ニド通垞、塩基たたはその他の酞捕獲剀ず共に
䜿甚するおよび掻性゚ステルなどである。アシ
ル化は有機酞ずN′−ゞシクロヘキシルカル
ボゞむミドの劂き脱氎剀の混合物を甚いお行うこ
ずもできる。 この誘導䜓は䞀般に知られおいる゚ステル化法
により補造するこずができる。䟋えば、化孊量論
量たたはやや過剰のアシル化剀、䟋えばアシル無
氎物を甚い、有機溶媒、䟋えばピリゞン䞭、ほが
℃〜宀枩で、玄ないし玄24時間、゚ルテル化
が実質的に終了するたでこの化合物を凊理する。
゚ステル誘導䜓は、反応混合物から暙準的な方
法、䟋えば抜出、クロマトグラフむヌおよび結晶
化などにより分離するこずができる。 有甚な゚ステルは、炭玠数がないし18の脂肪
族、脂環匏、芳銙族、芳銙脂肪族、異項環匏のカ
ルボン酞、スルホン酞、およびアルコキシ炭酞を
包含する有機酞および硫酞、リン酞などの無機酞
の゚ステルである。 奜たしい゚ステルは、が炭玠原子数〜18の
モノカルボン酞たたはゞカルボン酞から導かれる
アシル基であるものである。 奜適な゚ステルの代衚的なものは、ギ酞、酢
酞、クロロ酢酞、プロピオン酞、酪酞、む゜バレ
リン吉草酞、グルクロン酞、アルコキシ炭
玠、ステアリン酞、シクロプロパンカルボン酞、
シクロヘキサンカルボン酞、β−シクロヘキシル
プロピオン酞、−アダマンタンカルボン酞、安
息銙酞、プニル酢酞、プノキシ酢酞、マンデ
ル酞および−チ゚ニル酢酞、アルキル−、アリ
ヌル−、およびアルアルキル−スルホン酞類、䞊
びに芳銙環にハロゲン、ニトロ、䜎玚アルコキシ
などの眮換基を有しおいるこずもあるアリヌル−
およびアルアルキル−酞類などから誘導されるも
のである。たた、コハク酞、マレむン酞、フマル
酞、マロン酞、フタル酞などのゞカルボン酞から
導かれるヘミ゚ステル類も奜適な゚ステルに包含
される。 匏〔〕、〔〕および〔〕で瀺される化合物
は16員環マクロラむド系抗生物質を補造するため
の有甚な䞭間䜓である。䟋えば匏〔〕のミカロ
シルタむラクトンを緩和な酞性条件䞋で加氎分解
しおタむラクトン〔〕を埗るこずができる。同
様にしお、匏〔〕のミカロシルタむラクトン誘
導䜓を加氎分解しお盞圓する匏〔〕の−−
アシルタむラクトン誘導䜓を埗るこずができる。 緩和な酞加氎分解条件は圓業者には知られおい
る。加氎分解するにはpHが玄たたはそれ以䞋
の適圓な溶液を䜿甚するこずができる。極性有機
共溶媒Cosolvent、䟋えば゚タノヌルの劂き
アルコヌルを、反応䜓を溶液状態に保぀ために溶
液䞭に含たせるべきである。この方法は玄20〜玄
100°で行なうこずができる。加氎分解に必芁な反
応時間は反応混合物のpHおよび反応枩床によ぀
お倉わる。pHが高い皋反応速床は遅くなり、反
応枩床が高い皋反応速床は速い。この反応は、ミ
カロシルタむラクトンたたは−−アシルミカ
ロシルタむラクトン誘導䜓を、ミカロシル基を陀
去しおタむラクトンたたは−−アシルタむラ
クトンを埗るに十分な時間、緩和な酞溶液で凊理
するこずによ぀お行なわれる。 タむラクトンはタむロシンたたはタむロシン関
連化合物に生物孊的に倉換するこずができる。こ
の生物孊的倉換は、倉換菌の増殖培地にタむラク
トンを添加するこずによ぀お行なうこずができ
る。この倉換菌は、タむロシン自䜓を補造する
か、あるいはタむラクトン生産がブロツクされお
いるほかはタむロシン生産胜を有するストレプト
マむセス株であ぀およい。 タむラクトン生産はブロツクされおいるがタむ
ロシン生産胜を有する菌株は、タむロシン生産株
を倉異誘発物質で凊理し、タむロシンを生産し埗
ないものを生存菌株からふるいわけるこずによ぀
お埗るこずができる。これらのタむロシンを生産
し埗ない生存菌をさらにスクリヌニングし、どの
菌株がラむラクトンをも生産し埗ず、しかしタむ
ラクトンをタむロシンに倉換するこずができるか
を決める。これらの菌株は、遞択した生存菌の小
スケヌルの振盪フラスコ培逊基にタむラクトンを
添加し、タむロシンが生産されるかどうかを調べ
るこずによ぀お確認する。 ストレプトマむセス・フラデむア゚菌株
NRRL2702およびNRRL2703はタむロシンを生
産し埗るストレプトマむセス株の䟋である。遞択
菌株を埗るために䜿甚される兞型的な倉異誘発物
質は−メチル−N′−ニトロ−ニトロ゜グアニ
ゞンである。 タむラクトンおよび−−アシルタむラクト
ン誘導䜓は生合成のたたは代謝の研究のための暙
識化合物を補造するのに特に有甚である。タむラ
クトン郚分かあるいは加えた糖郚分のいずれかを
ラベル暙識化するこずによ぀お、生合成たた
は代謝経路の研究に有甚な特定の暙識化されたタ
むロシンを埗るこずができる。−−アシルタ
むラクトン誘導䜓のアシル眮換分も暙識化し埗る
郚䜍である。 以䞋に実斜䟋を挙げお本発明を曎に詳现に説明
する。 実斜䟋   ミカロシルタむラクトンの振盪フラスコ培逊 ストレプトマむセス・フラデむア゚
NRRL12201の凍結也燥ペレツトを枛菌氎〜
mlに分散した。この溶液の䞀郚0.5mlを以䞋
の組成の増殖培地150mlに接皮した。 成 分 量 コヌン浞挬液 1.0 酵母゚キス 0.5 あらびき倧豆 0.5 CaCO3 0.3 倧豆油粗 0.45 脱むオン氎 97.25 別法ずしお、ml容量の、液䜓窒玠䞭に保存し
たS.フラデむア゚NRRL12201の増殖培地を玠早
く解かし、増殖培地に接皮するのに甚いる。接皮
した増殖培地を、500mlの䞉角フラスコ䞭、29℃
で玄48時間、閉鎖箱型シ゚ヌカヌ䞊、300rpmで
むンキナベヌトした。 このむンキナベヌトした増殖培地0.5mlを、
以䞋の組成の生産培地mlに接皮した。 成 分 量 テンサむ糖密 2.0 ずうもろこし粉 1.5 魚粉 0.9 ずうもろこしグルテン 0.9 NaCl 0.1 NH42HPO4 0.04 CaCO3 0.2 倧豆油粗 3.0 脱むオン氎 91.36 この接皮した発酵培地を50mlのビンの䞭で、29
℃で玄日間、閉鎖箱型シ゚ヌカヌ䞊、300rpm
でむンキナベヌトした。  ミカロシルタむラクトンのタンク発酵 倚量の接皮材料を埗るために、に蚘茉した方
法ず類䌌の方法で補造したむンキナベヌト増殖培
地60mlを、以䞋の組成の第次増殖成長培地38
に接皮した。 成 分 量 ずうもろこし浞挬液 1.0 倧豆油粉 0.5 酵母゚キス 0.5 CaCO3 0.3 倧豆油粗 0.5 レシチン粗 0.015 æ°Ž 97.185 50NaOH溶液でpHを8.5に調節した。 この第次増殖培地を68のタンク䞭、29℃で
箄47時間むンキナベヌトした。 この様にしお埗た第次培地を以䞋の
組成の滅菌生産培地40に接皮した。 成 分 量 魚粉 0.92 ずうもろこし粉 1.57 ずうもろこしグルテン 0.92 CaCO3 0.21 NaCl 0.10 NH42HPO4 0.04 テンサむ糖密 2.10 倧豆油粗 3.15 レシチン粗 0.09 æ°Ž 90.90 50NaOH溶液を甚いおpHを7.2に調節した。 接皮した生産培地を68のタンク䞭、玄日間
28℃で発酵させた。発酵培地に滅菌空気を吹き蟌
んで溶解酞玠を玄30〜50に保ち、通垞の攪拌
噚を甚いお玄300rpmで攪拌した。 実斜䟋  ミカロシルタむラクトンおよびタむラクトンの
分離 実斜䟋、に蚘茉した方法で埗た発酵ブロス
900mlを石油゚ヌテル900mlで抜出した。
この石油゚ヌテル抜出物を空気流䞭で濃瞮しお油
を埗た。この油を少量の酢酞゚チル玄15mlに
溶解した。これにヘプタン玄15〜20mlを添加
した。酢酞゚チルを埐々に蒞発させお結晶化させ
た。この結晶を分離し、タむラクトンおよびミカ
ロシルタむラクトンの結晶混合物450mgを埗た。 残぀た党ブロスに同量のメタノヌルを加え、埗
られた溶液を濟過し、濟液を塩化メチレンで抜出
するこずにより、さらに生成物を埗るこずができ
た。 結晶混合物400mgをベンれンに溶解するこ
ずにより分離した。即ち、このベンれン溶液を、
シリカゲルwoelmカラムベンれン充填
に入れクロマトグラフむヌにかけた。溶出液をシ
リカゲル薄局クロマトグラフむヌでモニタヌした
溶離剀ベンれン酢酞゚チル、怜
出濃硫酞噎霧。カラムを先づベンれンで溶出
しお脂質を陀き、次いでベンれン酢酞゚チル
、ベンれン酢酞゚チル
1400mlおよびベンれン酢酞゚チルで
溶出しおタむラクトンおよびミカロシルタむラク
トンを分離した。容量玄150mlのフラクシペンを
集めた。タむラクトンが先づ溶出されフラクシ
ペン14〜19、埌でフラクシペン22〜26ミカ
ロシルタむラクトンが溶出された。それぞれを含
むフラクシペンを合わせ、枛圧䞋に蒞発させ、ヘ
プタンから結晶化させおタむラクトン160mgおよ
びミカロシルタむラクトン120mgを埗た。 ヘプタン、ヘキサンたたは酢酞゚チル−ヘキサ
ンから結晶化させたミカロシルタむラクトンは癜
色固䜓であり、玄182〜184℃で融解する。そのお
およその元玠組成は以䞋の通りである炭
玠67、氎玠、酞玠24。その実隓匏はC30
H50O8であり、分子量は玄538である。 クロロホルム䞭でのミカロシルタむラクトンの
赀倖吞収スペクトルを第図に瀺す。芳察された
吞収極倧は以䞋の通りである。cm-13640
、2941および2907二重線、st、2421V.
S.、1712st、1678、1623、1590st
、
1456、1404、1374、1359肩、13
14
、1284、1263V.S.、1229、1178
st、1157、1134V.S.、1109、1078
V.S.、1050、1025V.S.、1000st、98
4
st、962、920V.S.、911V.S.、887
、867、848肩、836および799
。ここでV.S.は非垞に匱い、は匱い、は
䞭皋床、stは匷い吞収を意味する。 䞭性゚タノヌル䞭でのミカロシルタむラクトン
の玫倖線吞収スペクトルは、玄282nmに極倧吞収
を瀺す cm568。 ミカロシルタむラクトンは以䞋の比旋光床を有
する〔〕25 D−46.4°Cl、CH3OH ミカロシルタむラクトンはほずんど氎に溶けな
いが、アセトン、メタノヌル、゚タノヌル、ゞメ
チルホルムアミド、クロロホルム、ゞ゚チル゚ヌ
テル、石油゚ヌテル、ベンれンおよびゞメチルス
ルホキシドの劂き有機溶媒に可溶である。 実斜䟋  4′−ゞ−−アセチル−−−ミカロシ
ルタむラクトン 実斜䟋によ぀お埗たミカロシルタむラクトン
20mgをピリゞン0.5mlに溶解した。無氎酢
酞0.25mlを添加した。この混合物を宀枩で15
時間攪拌し、次いで枛圧䞋で濃瞮也固した。残留
物をメタノヌルシクロヘキサンに入れ、固圢物
が埗られるたで再蒞発させお4′−ゞ−−ア
セチル−−−ミカロシルタむラクトンを埗
た。 実斜䟋 〜 実斜䟋ず同様にしお、ただし無氎プロピオン
酞を甚いお4′−ゞ−−プロピオニル−−
−ミカロシルタむラクトンを埗た。 実斜䟋ず同様にしお、ただし無氎吉草酞を甚
いお4′−ゞ−−む゜バレリル−−−ミ
カロシルタむラクトンを埗た。 実斜䟋ず同様にしお、ただし無氎安息銙酞を
甚いお4′−ゞ−−ベンゟむル−−−ミ
カロシルタむラクトンを埗た。 実斜䟋ず同様にしお、ただし無氎−酪酞を
甚いお4′−ゞ−−−ブチリル−−
−ミカロシルタむラクトンを埗た。 実斜䟋  ミカロシルタむラクトンからタむラクトンの補
造 実斜䟋に埓぀お補造したミカロシルタむラクト
ンを塩酞の含氎メむタノヌル溶液pH1.8に溶
解した。加氎分解が終了するたでこの溶液を攟眮
し蒞気济䞊で玄30分間加枩する、次いで氎酞
化ナトリりムを加えおpH7.0に調節した。この溶
液を酢酞゚チル、ゞクロロメタンたたはクロロホ
ルムで抜出した。抜出液を也燥し、枛圧䞋で蒞発
させおタむラクトンを埗た。 ヘプタン、ヘキサンたたは酢酞゚チル−ヘキサ
ンから結晶化させたタむラクトンは癜色固䜓であ
り、玄162〜163℃で融解する。タむラクトンのお
およその元玠組成は以䞋の通りである炭
玠70、氎玠9.7、酞玠20.3。その実隓匏は
C23H38O5であり、分子量は玄394である。 クロロホルム䞭でのタむラクトンの赀倖吞収ス
ペクトルは、以䞋の極倧吞収を瀺すcm-1
3534、2924st、2398、2353、17
09
v.st、1678v.st、1626、1592v.st、
1458
st、1441肩、1404st、1379、1316
st、
1284、1181v.st、1143、1103、
1078、1049v.s.、1025、984v.st
、
958st、923、911肩、859、868
、
840、820v.sおよび661。ここでは
匱い、v.s.は非垞に小さい、は小さい、は䞭
皋床の、stは匷い、v.stは非垞に匷い吞収を衚わ
す。 䞭性゚タノヌル䞭でのタむラクトンの玫倖線吞
収スペクトルは282nmに極倧吞収を瀺す cm
560。 タむラクトンは以䞋の比旋光床を瀺す〔〕25 D
−55.23°Cl、CH3OH。 66氎性ゞメチルホルムアミド䞭でタむラクト
ンを電気滎定したずころ、滎定可胜基を有しない
こずがわか぀た。 タむラクトンは氎にほずんど溶けないがアセト
ン、メタノヌル、゚タノヌル、ゞメチルホルムア
ミド、クロロホルム、ゞ゚チル゚ヌテル、石油゚
ヌテル、ベンれンおよびゞメチルスルホキシドの
劂き有機溶媒に可溶である。 実斜䟋  −−アセチルタむラクトンの補
造。 実斜䟋で補造した4′−ゞ−−アセチル
−−−ミカロシルタむラクトンを、メタノヌ
ル0.1NHCl、pH1.5を甚い実斜䟋
の方法で加氎分解しお−−アセチルタむラク
トンを埗た。 実斜䟋 10〜13 実斜䟋ず同様にしお、実斜䟋の4′−ゞ
−−プロピオニル−−−ミカロシルタむラ
クトンから−−プロピオニルタむラクトンを
埗た。 実斜䟋ず同様にしお、実斜䟋の4′−ゞ
−−む゜バレリル−−−ミカロシルタむラ
クトンから−−む゜バレリルタむラクトンを
埗た。 実斜䟋ず同様にしお、実斜䟋の4′−ゞ
−−ベンゟむル−−−ミカロシルタむラク
トンから−−ベンゟむルタむラクトンを埗
た。 実斜䟋ず同様にしお、実斜䟋の4′−ゞ
−−−ブチリル−−−ミカロシルタむ
ラクトンから−−−ブチリルタむラク
トンを埗た。 実斜䟋 14 タむラクトンからタむロシンの補造 もずもずタむロシンを生産したがマクロラむド
環圢成がブロツクされおいるストレプトマむセ
ス・フラデむア゚株を実斜䟋、に蚘茉した方
法で培逊した。枩床は28℃で行な぀た。接皮48時
間埌、培逊物にタむラクトンを添加した。倚量の
タむロシンが生産されるたで、即ち、さらに玄
日間培逊を続けた。タむロシンの存圚は、ブロス
の詊料をタむロシンに察しお感受性を有するこず
が知られおいる埮生物に察しお詊隓するこずによ
り調べた。぀の有甚なアツセむ甚埮生物はスタ
フむロコツカス・アりレりスATCC9144である。
この生物孊的怜定は自動濁床法を甚いお奜適に実
斜した。その他の怜定法には薄局クロマトグラフ
むヌおよびUV怜出噚を備えた高速液䜓クロマト
グラフむヌがある。 実斜䟋 15 暙識化タシロシンの補造 暙識化したアセテヌト、プロピオネヌトたたは
ブチレヌトを培逊培地に添加するほかは実斜䟋
およびの方法でミカロシルタむラクトンを補造
した。この様にしお補造した暙識化したミカロシ
ルタむラクトンを䜿甚しお、実斜䟋の方法で暙
識化したタむラクトンを補造した。この暙識化タ
むラクトンを䜿甚しお、実斜䟋14の方法でタむロ
シンを補造した。この様にしおマクロラむド環䞊
を暙識化したタむロシンを埗た。 実斜䟋 16 −−アセチル−−−β−デ
゜サミニルタむラクトンの補造 実斜䟋10で補造した−−アセチルタむラク
トンを、ニトロメタン䞭シアン化氎銀の存圚䞋で
圓量の−α−ブロモ−−−アセチルデ゜
サミン臭化氎玠酞塩ず混合した20℃、10時間。
シリカゲルカラムクロマトグラフむヌにより
2′−−ゞアセチル−−−β−デ゜サミニル
タむラクトンを分離した。この化合物をメタノヌ
ル䞭、宀枩で攟眮しお2′−アセチル基を陀去する
ず−−アセチル−−−β−デ゜サミニル
タむラクトンが埗られた抗生物質−4365G1
の−−アセチル誘導䜓。
【図面の簡単な説明】
第図はクロロホルム䞭でのミカロシルタむラ
クトンの赀倖吞収スペクトルを瀺すグラフであ
る。

Claims (1)

  1. 【特蚱請求の範囲】  匏 匏䞭、は氎玠たたはアシル、は氎玠たたは
    匏 匏䞭、R1は氎玠たたはアシルを衚わすで瀺
    されるミカロシル基を衚わす。ただしが氎玠で
    ある堎合はアシル衚わす。 で瀺される化合物。  がアシルである時、が氎玠たたはR1が
    アシルであるミカロシル基である第項に蚘茉の
    化合物。  およびR1が、炭玠原子数〜18のモノた
    たはゞカルボン酞から導かれるアシル基である第
    項たたは第項のいづれかに蚘茉の化合物。  ミカロシルタむラクトンの名称を有する第
    項に蚘茉の化合物。  匏 匏䞭、は氎玠たたはアシル、は氎玠たた
    匏 匏䞭、R1は氎玠たたはアシルを衚わすで瀺
    されるミカロシル基を衚わす。ただしが氎玠で
    ある堎合はアシルを衚わす。 で瀺される化合物の補造方法であ぀お、同化し埗
    る炭玠源、窒玠源および無機塩を含有する培逊培
    地䞭、液䞭奜気条件䞋でストレプトマむセス・フ
    ラデむア゚NRRL12201株を培逊しおが氎玠、
    がR1が氎玠であるミカロシル基である匏
    の化合物を埗、次いで所望により、  アシル化しおおよびの䞀方たたは䞡方が
    アシルである匏の化合物を埗、  で埗た匏の化合物を緩やかに加氎分
    解しおが氎玠、がアシルである匏の
    化合物を埗るこずを特城ずする補造方法。
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