【発明の詳細な説明】
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は、アスペルギルス属
糸状菌由来の新規プロモーター、およびその利用に関す
る。
【0002】
【従来の技術】麹菌アスペルギルス・オリゼ(Aspergill
us oryzae)を始めとするアスペルギルス属糸状菌は、古
くより清酒、味噌、醤油などの醸造産業において広く利
用されてきた微生物である。アスペルギルス属糸状菌
は、古くから醸造産業に使用されてきたことにより菌株
の安全性が広く認知されており、遺伝子組換えによるタ
ンパク質生産の宿主としての利用を考えた場合には、好
適に使用することが可能である。また、培養法、生成タ
ンパク質の分離精製法等の発酵技術に関しても多くの技
術的な蓄積がある。更に、各種加水分解酵素をはじめ多
くの有用酵素を菌体外に多量に分泌すること、真核生物
であるため大腸菌などの原核生物には無いタンパク質の
糖鎖付加機構を持っているなどの利点を有している。こ
れらの理由により、アスペルギルス属を始めとする糸状
菌を、遺伝子組換えによるタンパク質の高生産用宿主と
して利用することが期待されていた。
【0003】一方、遺伝子組換えによるタンパク質生産
において、目的とするタンパク質の生産量は、プロモー
ター、ターミネーターなどの転写に関わる因子、アミノ
酸コドンの種類など翻訳に関わる因子、タンパク質への
糖鎖付加、発現したタンパク質の細胞内での存在様式
(分泌過程における移動も含む)などの翻訳後に関わる
因子、遺伝子のコピー数、宿主由来のプロテアーゼなど
発現タンパク質の安定性に関わる因子など多くの因子に
より影響を受ける。これらのうちもっとも重要であり制
御しやすい因子は、プロモーターの選択である。そのた
め、これまでにも、糸状菌を宿主とした遺伝子組換えに
よる、様々な条件下での様々なタンパク質の効率的な生
産を実現するために、数々の糸状菌由来のプロモーター
が探索され公表されてきた。
【0004】これまでに公表された糸状菌由来のプロモ
ーターとしては、アスペルギルス・ニガー由来のグルコ
アミラーゼ遺伝子のプロモーター(Biotechnology, 198
7, 5, 368)、トリコデルマ・リーセイ由来のセロビオ
ハイドロラーゼI遺伝子のプロモーター(Biotechnolog
y, 1989, 7, 596)、アスペルギルス・オリゼ由来のα-
アミラーゼ遺伝子のプロモーター(Biotechnology, 198
8, 6, 1419)(特許3005618号)、アスペルギルス・ニ
ドランス由来のアルコールデヒドロゲナーゼI遺伝子の
プロモーター(Biotechnology, 1987, 5, 713)、アス
ペルギルス・オリゼ、アスペルギルス・ニガーのグリセ
ルアルデヒド-3-ホスフェイト デヒドロゲナーゼ(GAP-
DH)のプロモーター(特開平3-187392)などがある。特
にアスペルギルス・オリゼ由来のプロモーターに限れ
ば、これまでに公表されているプロモーターは上記のも
のの他に、特開平7-115976、特開平10-313864、特開平1
1-276170、特開平2001-224381記載のプロモーターなど
を挙げることができる。
【0005】これまでにも、上記の特許出願などにおい
て糸状菌における強力なプロモーターを利用した例は示
されているが、目的とするタンパク質の性質によって
は、使用するプロモーターを使い分けることが必要とな
る。また、糸状菌は固体培養によって多くのタンパク質
を多量に生産することが知られており、固体培養で強力
に作用するプロモーターを使用したタンパク質生産系も
検討されている。しかし、固体培養は培養条件を検討す
る際、多くの労力を必要とするため、液体培養で作用す
るプロモーターの開発も求められていた。
【0006】アスペルギルス・オリゼ由来のプロモータ
ーとして最も有名なものの1つにα−アミラーゼのプロ
モーターがある。このプロモーターは液体培養において
も強い転写活性化能を示し、遺伝子組換えによるタンパ
ク質生産系としての有用性が認められている(特許3005
618号)。しかし、培地中にデンプンやマルトース等の
プロモーター機能を誘導するための誘導物質を加える必
要があった。さらに加えた誘導物質の酵素による分解に
よりグルコースが生成するため、グルコースリプレッシ
ョンによりプロモーターの転写が抑制され、培養後期に
目的タンパク質の生産性が低下するといった問題があっ
た。
【0007】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
状況に鑑みてなされたものであり、その目的は、遺伝子
組換えによるタンパク質生産系に利用可能な新規プロモ
ーターを提供することにある。より詳細には、グルコー
スのような単糖によって発現制御可能である、あるいは
グルコース量の影響を受けず恒常的に発現が可能である
アスペルギルス属糸状菌由来のプロモーター、該プロモ
ーターを含むベクター、該ベクターを含む形質転換体、
該プロモーターを用いた組換え遺伝子の発現方法、およ
び該プロモーターを用いた組換えタンパク質の製造方法
を提供することを目的とする。
【0008】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するために鋭意研究を行った。まず、アスペル
ギルス・オリゼのEST解析結果を基にコンピューターを
用いたクラスタリングを行った。その結果、約16000のE
STは、約5000のコンティグ(遺伝子)に分類されること
が判明した。すなわち、この結果から約16,000のEST
は、約5,000の遺伝子から構成されていることが示唆さ
れた。さらにコンピューターによる解析を進め、それぞ
れの遺伝子について培養条件別のEST数を解析した(以
後、この解析データを発現頻度情報とする)。その結
果、液体培養においてグルコース存在下で転写発現の促
進される遺伝子のグループと、グルコース非存在下で転
写発現の促進される遺伝子のグループ、およびグルコー
スの存在非存在でほとんど影響が無く恒常的に転写発現
される遺伝子のグループを抽出した。それぞれの遺伝子
のプロモーター領域は、EST配列データを用いて作製し
たプライマーを使用したPCRによって単離した。
【0009】本発明者らは上記の如く、アスペルギルス
・オリゼよりグルコース存在非存在に関わらず恒常的に
目的タンパク質遺伝子の転写が可能なプロモーター、お
よび、グルコース存在下あるいは非存在下によって目的
タンパク質遺伝子の転写を活性化することが可能な新規
プロモーターを得ることに成功した。さらに、それらプ
ロモーターの下流にレポーターとなる遺伝子を連結し、
生産されたレポーターの活性値を指標とすることにより
上記の新規プロモーターのプロモーター活性を実証し、
本発明を完成させた。
【0010】このようなグルコース存在あるいは非存在
によって目的タンパク質遺伝子の発現制御を可能なプロ
モーターは、目的タンパク質の生産時期を制御する際に
有用である。また、グルコース量の影響を受けず恒常的
に目的タンパク質遺伝子の発現可能なプロモーターは、
培養全期にわたり目的タンパク質の生産を可能にするた
め大量生産に適していると考えられる。該プロモーター
の利用によって、アスペルギルス属を始めとする糸状菌
を、遺伝子組換えによるタンパク質の実用的な高生産用
宿主として使用することが可能になるものと大いに期待
される。
【0011】即ち、本発明は、遺伝子組換えによるタン
パク質生産系に利用可能な新規プロモーターに関し、よ
り具体的には、〔1〕 以下の(a)〜(c)のいずれ
かに記載のプロモーター活性を有するDNA、(a)配
列番号:76〜149のいずれかに記載の塩基配列から
なるDNA、(b)配列番号:76〜149のいずれか
に記載の塩基配列からなるDNAとストリンジェントな
条件下でハイブリダイズするDNA、(c)配列番号:
76〜149のいずれかに記載の塩基配列において、1
または複数の塩基が置換、欠失、付加、および/または
挿入された塩基配列からなるDNA、〔2〕 〔1〕に
記載のDNAの部分DNAであって、プロモーター活性
を有するDNA、〔3〕 アスペルギルス属糸状菌由来
である〔1〕または〔2〕に記載のDNA、〔4〕
〔1〕〜〔3〕のいずれかに記載のDNAを含むベクタ
ー、〔5〕 〔1〕〜〔3〕のいずれかに記載のDN
A、または〔4〕に記載のベクターを保持する形質転換
体、〔6〕 〔1〕〜〔3〕のいずれかに記載のDNA
の下流に遺伝子が機能的に結合したDNAを用いること
を特徴とする、遺伝子の発現方法、〔7〕 〔6〕に記
載の方法を用いたタンパク質の製造方法、を提供するも
のである。
【0012】
【発明の実施の形態】本発明者らは、プロモーター活性
を有する新規なDNAを見出した。本発明は、まず、プロ
モーター活性を有する新規なDNAを提供する。
【0013】本発明の上記DNAとしては、具体的には、
配列番号:76〜149のいずれかに記載された配列か
らなるプロモーター活性を有するDNAを挙げることがで
きる。該DNAは本発明者らにより、アスペルギルス・オ
リゼ由来のプロモーター活性を有するDNAとして新規に
見出されたものである。該DNAは、次の3つのグループ
に分類される。
(1)グルコース非存在下で発現の促進されるプロモー
ターDNAグループ(各DNAの塩基配列を配列番号:76〜
109に記載)
(2)グルコース存在・非存在下で発現の促進されるプ
ロモーターDNAグループ(各DNAの塩基配列を配列番号:
110〜133に記載)
(3)グルコース存在下で発現の促進されるプロモータ
ーDNAグループ(各DNAの塩基配列を配列番号:134〜
149に記載)
【0014】本発明の上記DNAは、プロモーター活性を
有するDNAの取得(単離)に利用することも可能であ
る。このDNAの単離においてはまず、本発明のDNAもしく
はその一部をプローブとして、または、本発明のDNAに
特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドをプラ
イマーとして、所望の生物から上記DNAと高い相同性を
有するDNAを単離することができる。一般的なハイブリ
ダイゼーション技術(Southern, EM., J Mol Biol, 197
5, 98, 503.)、またはPCR技術(Saiki, RK. et al., S
cience, 1985, 230, 1350.、Saiki, RK. et al., Scien
ce, 1988, 239, 487.)によって単離可能な、配列番
号:76〜149のいずれかに記載の塩基配列からなる
DNAとハイブリダイズするDNAもまた、本発明のDNAに含
まれる。すなわち、配列番号:76〜149のいずれか
に記載の塩基配列からなるDNA、もしくはその一部をプ
ローブとして、また配列番号:76〜149のいずれか
に記載の塩基配列からなるDNAに特異的にハイブリダイ
ズするオリゴヌクレオチドをプライマーとして、所望の
生物から配列番号:76〜149のいずれかに記載の塩
基配列からなるDNAと高い相同性を有するDNAを単離する
ことは、当業者にとって通常行い得ることである。この
ようなDNAを単離するためには、好ましくはストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイゼーション反応を行う。
本発明においてストリンジェントなハイブリダイゼーシ
ョン条件としては、6M 尿素、0.4% SDS、0.5×SSCの条
件、または0.1% SDS(60℃、0.3mol NaCl、0.03M クエ
ン酸ソーダ)のハイブリダイゼーション条件、あるいは
これらと同等のストリンジェンシーのハイブリダイゼー
ション条件を指す。よりストリンジェンシーの高い条
件、例えば、6M 尿素、0.4% SDS、0.1×SSCの条件下で
は、より相同性の高いDNAを単離できることが期待され
る。高い相同性とは、塩基配列全体で好ましくは50%以
上、さらに好ましくは70%以上、最も好ましくは90%以
上の配列の同一性を指す。
【0015】塩基配列の同一性は、カーリンおよびアル
チュールによるアルゴリズムBLAST(Proc. Natl. Acad.
Sei. USA, 1990, 87, 2264-2268.、Karlin, S. & Alts
chul, SF., Proc Natl Acad Sci USA, 90, 5873.)を用
いて決定できる。BLASTのアルゴリズムに基づいたBLAST
Nと呼ばれるプログラムが開発されている(Altschul, S
F. et al., J Mol Biol, 1990, 215, 403.)。BLASTNを
用いて塩基配列を解析する場合は、パラメーターは、例
えばscore=100、wordlength=12とする。BLASTとGappe
d BLASTプログラムを用いる場合は、各プログラムのデ
フォルトパラメーターを用いる。これらの解析方法の具
体的な手法は公知である(http://www.ncbi.nlm.nih.go
v/)。
【0016】本発明のDNAは、通常微生物由来であり、
好ましくはアスペルギルス属糸状菌由来、より好ましく
はアスペルギルス・オリゼ由来であるが、プロモーター
活性を有するDNAであれば、特にその由来は制限されな
い。
【0017】また、本発明は、上記のDNAと構造的に類
似しており、かつプロモーター活性を有するDNAを提供
する。このようなDNAとしては、例えば、配列番号:7
6〜149のいずれかに記載の塩基配列において、1ま
たは複数の塩基が置換、欠失、付加、および/または挿
入された塩基配列からなり、プロモーター活性を有する
DNAを挙げることができる。このようなDNAもまた、本発
明のプロモーター活性を有するDNAの単離に使用するこ
とができる。このようなDNAを調製するために当業者に
よく知られた方法としては、例えば、上記ハイブリダイ
ゼーション技術、およびポリメラーゼ連鎖反応(PCR)
技術等が挙げられる。さらに上記DNAは、例えば、配列
番号:76〜149のいずれかに記載の塩基配列からな
るDNAに対して、site-directed mutagenesis法(Krame
r, W. & Fritz, HJ., Methods Enzymol,1987, 154, 35
0.)により変異を導入することにより調製することもで
きる。
【0018】また、上記のようにして調製されたDNAが
プロモーター活性を有するか否かは、当業者においては
レポーター遺伝子を用いた周知のレポーターアッセイ等
により検討することが可能である。該レポーター遺伝子
としては、その発現が検出可能なものであれば特に制限
されず、例えば、当業者において一般的に使用されるCA
T遺伝子、lacZ遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子、β−グ
ルクロニダーゼ(以下、GUS)遺伝子、およびGFP遺伝子等
を挙げることができる。また、遺伝子の発現または該遺
伝子によってコードされるタンパク質の活性を検出する
ことが可能な遺伝子をレポーターとして、該遺伝子の発
現、または該遺伝子によってコードされるタンパク質の
活性を評価することにより、任意のDNAがプロモーター
活性を有するか否かを検討することも可能である。
【0019】レポーター遺伝子の発現レベルは、該レポ
ーター遺伝子の種類に応じて、当業者に公知の方法によ
り測定することができる。例えば、レポーター遺伝子が
CAT遺伝子である場合には、該遺伝子産物によるクロラ
ムフェニコールのアセチル化を検出することによって、
レポーター遺伝子の発現レベルを測定することができ
る。レポーター遺伝子がlacZ遺伝子である場合には、該
遺伝子発現産物の触媒作用による色素化合物の発色を検
出することにより、また、ルシフェラーゼ遺伝子である
場合には、該遺伝子発現産物の触媒作用による蛍光化合
物の蛍光を検出することにより、また、GUS遺伝子であ
る場合には、該遺伝子発現産物の触媒作用によるGlucur
on(ICN社)の発光や5−ブロモ−4−クロロ−3−インド
リル−β−グルクロニド(X−Gluc)の発色を検出する
ことにより、さらに、GFP遺伝子である場合には、GFPタ
ンパク質による蛍光を検出することにより、レポーター
遺伝子の発現レベルを測定することができる。
【0020】また、上記以外の遺伝子をレポーターとす
る場合、該遺伝子の発現レベルの測定は、当業者に公知
の方法によって行うことができる。例えば、該遺伝子の
mRNAを定法に従って抽出し、このmRNAを鋳型としたノー
ザンハイブリダイゼーション法、またはRT-PCR法を実施
することによって該遺伝子の転写レベルの測定を行うこ
とができる。さらに、DNAアレイ技術を用いて、該遺伝
子の転写レベルを測定することも可能である。また、該
遺伝子からコードされるタンパク質を含む画分を定法に
従って回収し、本発明のタンパク質の発現をSDS-PAGE等
の電気泳動法で検出することにより、遺伝子の翻訳レベ
ルの測定を行うこともできる。さらに、該遺伝子からコ
ードされるタンパク質に対する抗体を用いて、ウェスタ
ンブロッティング法を実施し、該タンパク質の発現を検
出することにより、遺伝子の翻訳レベルの測定を行うこ
とも可能である。該遺伝子からコードされるタンパク質
の検出に用いる抗体としては、検出可能な抗体であれ
ば、特に制限はないが、例えばモノクローナル抗体、ま
たはポリクローナル抗体の両方を利用することができ
る。該抗体は、当業者に公知の方法により調製すること
が可能である。
【0021】また本発明は、上記DNAの部分DNAであっ
て、プロモーター活性を有するDNAも提供する。
【0022】本発明のDNAには、ゲノムDNA、および化学
合成DNAが含まれる。ゲノムDNAの調製は、当業者にとっ
て常套手段を利用して行うことが可能である。ゲノムDN
Aは、例えば、本発明のDNAを有する微生物からゲノムDN
Aを抽出し、ゲノミックライブラリー(ベクターとして
は、プラスミド、ファージ、コスミド、BAC、PAC等が利
用できる)を作製し、本発明のDNAを基に調製したプロ
ーブを用いてコロニーハイブリダイゼーション、あるい
はプラークハイブリダイゼーションを行うことにより調
製することが可能である。また、本発明のDNAに特異的
なプライマーを作成し、これを利用したPCRを行うこと
によって調製することも可能である。
【0023】また、本発明は、本発明のDNAを含むベク
ター、および、本発明のDNAまたは上記ベクターを保持
する形質転換体を提供する。本発明のベクターは、宿主
細胞(宿主菌)内において本発明のDNAを保持したり、
所望の遺伝子やタンパク質を発現させるために有用であ
る。また、本発明の形質転換体としては、例えば、所望
のタンパク質の製造や発現のための産生系として使用す
ることができる。
【0024】本発明におけるベクターとしては、特に制
限されず、当業者によって一般的に公知のベクターを使
用することが可能であるが、好ましくは、選択マーカー
を有するベクターである。該選択マーカーとしては、ア
ルギニン要求性などの栄養要求性相補遺伝子、アセトア
ミド資化などの炭素、窒素源資化遺伝子、オリゴマイシ
ン耐性などの薬剤耐性遭伝子等が例示できるが、これら
に制限されない。ベクターの例としては、pSal23 (Agri
c. Biol. Chem., 1987, 51, 2549-2555)やpNU1(Biosci.
Biotech. Biochem., 1997, 61, 1367-1369)等が挙げら
れる。また、ベクターには、ポリペプチド分泌のための
シグナル配列が含まれていてもよい。
【0025】また、上記宿主菌としては、アスペルギル
ス・オリゼをはじめ、その他のアスペルギルス属、ノイ
ロスボラ属、ペニシリウム属、トリコデルマ属等の微生
物を例示することができるが、これらに特に限定されな
い。本発明においては宿主菌としては、特に発現効率の
点から、アスペルギルス・オリゼを用いることが好まし
い。本発明のベクターによる宿主菌の形質転換は、当業
者においては、一般的に周知の方法、例えば塩化カルシ
ウム法、エレクトロポレーション法等により行うことが
できる。本発明のDNAまたはベクターを導入した宿主菌
は、例えば、使用した選択マーカーの種類に従って、適
当な選択用薬剤を含む公知の選択用培地を用いて培養を
行う。これにより本発明のDNAまたはベクターを保持す
る形質転換体を取得することができる。
【0026】また、本発明は、本発明のDNAの下流に遺
伝子が機能的に結合したDNAを用いることを特徴とする
遺伝子の発現方法、および、該方法を用いたタンパク質
の製造方法を提供する。
【0027】上記方法における好ましい態様としては、
本発明のDNAの下流に、発現させたい所望の遺伝子を機
能的に結合させたベクターを構築し、該ベクターで宿主
菌を形質転換し、生成した形質転換体を培養することに
より、上記遺伝子からコードされるタンパク質およびペ
プチドを生産させることができる。
【0028】本発明において、「機能的に結合した」と
は、本発明のプロモーター活性を有するDNAに転写因子
が結合することにより、下流の遺伝子の発現が誘導され
るように、本発明のDNAと該遺伝子とが結合しているこ
とをいう。従って、該遺伝子が他の遺伝子と結合してお
り、他の遺伝子産物との融合タンパク質を形成する場合
であっても、本発明のDNAに転写因子が結合することに
よって、該融合タンパク質の発現が誘導されるものであ
れば、上記「機能的に結合した」の意に含まれる。
【0029】本発明におけるタンパク質の製造方法とし
ては、当業者に公知の方法を適宜選択することにより行
うことができる。例えば、宿主細胞内または細胞外(培
地など)から単離し、実質的に純粋で均一なタンパク質
として精製することができる。タンパク質の分離、精製
は、通常のタンパク質の精製で使用されている分離、精
製方法を使用すればよく、何ら限定されるものではな
い。例えば、クロマトグラフィーカラム、フィルター、
限外濾過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈
降、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気
泳動法、透析、再結晶等を適宜選択、組み合わせればタ
ンパク質を分離、精製することができる。
【0030】また、タンパク質をグルタチオン S-トラ
ンスフェラーゼタンパク質との融合タンパク質として、
あるいはヒスチジンを複数付加させた組換えタンパク質
として宿主細胞内で発現させた場合には、発現させた組
換えタンパク質はグルタチオンカラムあるいはニッケル
カラムを用いて精製することができる。融合タンパク質
の精製後、必要に応じて、融合タンパク質のうち目的の
タンパク質以外の領域を、トロンビンまたはファクター
Xaなどにより切断し、除去することも可能である。
【0031】上記のクロマトグラフィーとしては、例え
ばアフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロ
マトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾
過、逆相クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー
等が挙げられる(Strategies for Protein Purificatio
n and Characterization: A Laboratory Course Manua
l. Ed Daniel R. Marshak et al., Cold Spring Harbor
Laboratory Press, 1996)。これらのクロマトグラフ
ィーは、液相クロマトグラフィー、例えばHPLC、FPLC等
の液相クロマトグラフィーを用いて行うことができる。
上記アフィニティークロマトグラフィーとしては、製造
したいタンパク質と親和性を有する抗体が結合したアフ
ィニティーカラムを例示することができる。この場合、
抗体はポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗
体であってもよい。
【0032】また、タンパク質を精製前又は精製後に適
当なタンパク質修飾酵素を作用させることにより、任意
に修飾を加えたり部分的にペプチドを除去することもで
きる。タンパク質修飾酵素としては、例えば、トリプシ
ン、キモトリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、プロ
テインキナーゼ、グルコシダーゼなどが用いられる。本
発明は、これらの精製方法を用い、高度に精製されたタ
ンパク質も包含する。
【0033】
【実施例】以下、本発明を実施例により、さらに具体的
に説明するが本発明はこれら実施例に制限されるもので
はない。
【0034】[実施例1] アスペルギルス・オリゼEST
配列情報の解析
アスペルギルス・オリゼRIB40株(ATCC42149)のEST配列
情報を解析することにより、各培養条件で発現している
遺伝子の数およびその種類、または、それぞれの遺伝子
の培養条件別のEST出現頻度(すなわち 発現頻度情報)
を導き出すことが可能である。そこで本発明者らは、コ
ンピューターを用いて全てのEST配列間で総当たりの相
同検索を行い、クラスタリングを行った。その結果、約
16,000のESTは、約5,000のコンティグ(遺伝子)に分類
された。本発明者らは、さらに、それぞれの遺伝子にお
けるEST数が5以上のもので、液体培養条件において良く
発現しているものを選択した。そしてさらに、グルコー
ス存在、非存在で発現が誘導される遺伝子グループとグ
ルコース存在非存在に関係なく恒常的に発現している遺
伝子グループに分類した。その結果を表1〜3に示し
た。
【0035】
【表1】
【0036】
【表2】
【0037】
【表3】
【0038】表中においては、以下のように示す。
AC/total: 各遺伝子における総EST数に占めるグルコー
ス存在下でのEST数の割合(%)
AN/total: 各遺伝子における総EST数に占めるグルコー
ス非存在下でのEST数の割合(%)
AC/AN: AN/totalに対するAC/totalの比率、AN/AC: AC/t
otalに対するAN/totalの比率
【0039】また、3つのグループの基準は、グルコー
ス非存在下で発現の促進されるグループ(AN/ACが3.0以
上のもの)(表1)、グルコース存在あるいは非存在下
でも恒常的に発現しているグループ(表2)、およびグ
ルコース存在下で発現の促進されるグループ(AC/ANが
3.0以上のもの)(表3)である。
【0040】[実施例2] プロモーターの単離と塩基配
列の決定
まずアスペルギルス・オリゼ菌体から染色体DNAの抽出
を行った。アスペルギルス・オリゼRIB40株(ATCC42149)
の胞子をACM培地(2% Malt extract, 0.2% Peptone, 4
% Glucose)に植菌し、30℃で一晩振とう培養した。そ
の後、飯村らの方法(Agric. Biol. Chem., 1987, 51,
323-328)に従って菌体から染色体DNAを抽出した。つい
でアスペルギルス・オリゼRIB40株の染色体DNAをEcoRV,
ScaI, DraI, PvuIIあるいはSspIのような6bpを認識し
平滑末端に切断する制限酵素で完全消化した後、Clonte
ch社製のUniversal Genome Walker kitに添付のアダプ
ターを、T4DNAリガーゼを用いて連結し、PCR用の染色体
DNAライブラリーを作製した。ついで各遺伝子の5'末端
に位置するESTの配列をもとに作製した表4〜6に示さ
れるようなプライマー(配列番号:1〜74)、および
アダプターに特異的に結合するプライマー(AP-1)(5'
- GTAATACGACTCACTATAGGGC -3'/配列番号:75)を使
用してPCRを行った。
【0041】
【表4】
【0042】
【表5】
【0043】
【表6】
【0044】PCR終了後、増幅産物をアガロース電気泳
動で確認し、作製したプライマー側から塩基配列を決定
した。得られた遺伝子上流領域の開始コドンATGの推定
は、以下のようにして行った。一般的にプロモーターと
は、遺伝子の開始コドンATGの上流500bp〜1000bpである
と考えられる。各遺伝子において最も上流に存在するES
Tおよび増幅した上流領域の塩基配列をGenBank等の遺伝
子データベースに対して相同性検索を行った。ついで相
同検索で高い相同性を有していた既知遺伝子の読み枠
(遺伝子中でタンパク質に翻訳される領域)を参考にそ
れぞれの遺伝子の開始コドンATGを推定した。このよう
にして推定された表1〜3の遺伝子No.1〜74の開始コド
ンATGから上流の領域をそれぞれプロモーター番号1〜
74とし、それぞれの配列を配列番号:76〜149と
して配列表に記載した。
【0045】[実施例3] レポーター遺伝子アッセイ用
プラスミドの構築
それぞれのプロモーターが、コンピューター解析結果で
得られた培養条件でレポーター遺伝子の発現を促進する
か検討した。レポーター遺伝子は、GUSをコードする遺
伝子uidA (Proc. Acad. Sci. U. S. A., 1986, 83, 844
7-8451)を使用した。検討は、図1に示すようなプロモ
ーターアッセイ用のプラスミドpPRO-GUSを構築し、つい
で単離したプロモーターをそれぞれこのプラスミドに挿
入し、アスペルギルス・オリゼに導入した後、生産され
たGUSの活性値を測定することにより行った。
【0046】このプロモーター解析用のプラスミドpPRO
-GUSは、以下のようにして構築した。アスペルギルス・
オリゼ由来のタカアミラーゼ遺伝子(taaG2: Gene, 198
9, 84, 319-327)のターミネーター領域を染色体DNAを鋳
型として、プライマーTaater-M(CCCCCCGGGTGAAGGGTGGA
GAGTATATG/配列番号:150)とプライマーTaater-R
(GGGGAATTCTAGTGGTTTGAACACTTCG/配列番号:151)
を使用して増幅後、EcoRIとSmaIで処理し、pUC19(Gen
e, 1985, 33, 103-119)のEcoRIからSmaIの領域に導入
した。ついでuidAをプライマーGUS-M(AAAGTCGACATGTTA
CGTCCTGTAGAAAC/配列番号:152)とプライマーGUS-
R(CCCCCCGGGTCATTGTTTGCCTCCCTGCTG/配列番号:15
3)を使用して増幅し、SmaIとSalIで処理し、先に構築
したプラスミドのSmaIからSalIの領域に導入した。さら
にこのプラスミドのHindIIIサイトにアスペルギルス・
オリゼの染色体DNAよりプライマーniaD-M1(GGGAAGCTTA
ACAGGCCCCAAATTCAATTA/配列番号:154)とプライマ
ーniaD-RV(GGGAAGCTTTGGATTTCCTACGTCTTCAAT/配列番
号:155) を使用して増幅した硝酸還元酵素遺伝子
(Biosci. Biotechnol. Biochem., 1995, 59, 1795-179
7)を導入し、pPRO-GUSを構築した。検討するプロモータ
ーは、pPRO-GUSのSalI,Sse8387Iに導入した。
【0047】[実施例4] アスペルギルス・オリゼniaD
突然変異株の取得
各種プロモーターを挿入したpPRO-GUSを使用して検討を
行う際、宿主としてアスペルギルス・オリゼのniaD突然
変異株が使用できる。アスペルギルス・オリゼのniaD突
然変異株は、塩素酸ナトリウム耐性を指標とすることで
分離できる(Mol. Gen. Genet., 1989, 218, 99-1041)。
本発明では、アスペルギルス・オリゼKBN616株(寄託番
号P-17333)からniaD突然変異株を分離し使用した。こ
のアスペルギルス・オリゼKBN616株(Aspergillus oryza
e KBN616)は、下記の通り寄託されている。
【0048】(イ)寄託機関の名称・あて名
名称:独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託
センター(旧 通商産業省工業技術院生命工学工業技術
研究所)
あて名:日本国茨城県つくば市東1丁目1番地1 中央
第6(郵便番号305−8566)
(ロ)寄託日(原寄託日):平成11年3月25日
(ハ)寄託番号 生命研菌寄第17333号(FERM P-1
7333)
【0049】上記の分離する方法は、以下の通りであ
る。まずアスペルギルス・オリゼKBN616株の胞子を塩素
酸ナトリウム培地(50mM Sodium chlorate, 10mM Urea,
0.2%KCl, 0.1% KH2PO4, 0.05% MgSO4・7H2O, 0.002% F
eSO4・7H2O)のプレートに塗抹し、塩素酸ナトリウム耐
性株を取得した。ついで得られた耐性株に実施例3で増
幅したniaDを導入することで2%グルコースを含むCzape
k-Dok培地(0.3% NaNO3, 0.2% KCl, 0.1% KH2PO4, 0.05%
MgSO4・7H2O, 0.002% FeSO4・7H2O)で生育が可能にな
る株を選択した。このようにして得られた株をアスペル
ギルス・オリゼKBN616(niaD-)株と命名し使用した。こ
の方法を用いれば、本発明で使用したアスペルギルス・
オリゼ以外でも比較的簡単に硝酸還元酵素変異株を作製
できる。
【0050】[実施例5] pPRO-GUSへの各種プロモータ
ーの挿入とアスペルギルス・オリゼへの導入
本発明では、配列番号:76〜149に示したプロモー
ター配列を参考にプライマーセットを作製し目的のプロ
モーターを増幅し、SalIおよびSse8387Iで切断後pPRO-G
USに導入した。例えば、配列番号:76のプロモーター
番号1の場合は、以下のようにしてpPRO-GUSに挿入し
た。配列番号:76のプロモーター配列を基に作製した
表7に記載のプロモーター番号1のプライマーセットを
使用してアスペルギルス・オリゼの染色体DNAを鋳型と
して、プロモーター番号1の断片を増幅した。増幅した
プロモーター番号1の断片には、Sse8387Iサイト(5'末
端)とSalIサイト(3'末端)が付加される。ついで得ら
れた断片をSalIおよびSse8387Iで切断後、pPRO-GUSのSa
lI、Sse8387Iサイトに導入した。
【0051】通常は、上記の方法によってプロモーター
断片のpPRO-GUSへの挿入が可能であるが、プロモーター
上にSalI認識サイトが存在する場合がある(例えば、プ
ロモーター番号14, 26, 27, 30, 36, 38,
41, 48, 65)。その場合にはプロモーター断片の
3'末端にXhoIサイトが付加されるようにプライマーを設
計した。このようなプライマーセットを使用し増幅した
プロモーター断片はXho IおよびSse8387Iで切断後、pPR
O-GUSのSalI、Sse8387Iサイトに導入した。
【0052】また、プロモーター上にSalIとXhoIの両認
識サイトがある場合は、以下の様にして行った(例え
ば、プロモーター番号7, 9, 19, 44, 64)。Sa
lI認識サイトおよびSse8387Iサイトを付加したプロモー
ターの断片をSse8387Iで切断後SalIで部分消化を行っ
た。ついで末端のSalI認識サイトのみが切断していると
考えられるプロモーター断片を電気泳動により分離し、
pPRO-GUSに導入した。以上の各プロモーターのpPRO-GUS
への導入に使用したプライマーセットは、表7〜9に示
した(配列番号:156〜229、および配列番号:2
30〜303)。
【0053】
【表7】
【0054】
【表8】
【0055】
【表9】
【0056】アスペルギルス・オリゼの形質転換は、Ba
llanceとTurnerの方法(Gene, 1985,36, 321)に従って行
った。得られたKBN616(niaD-)株の形質転換体は、サザ
ンハイブリダイゼーション法によって目的遺伝子が染色
体上のniaDの領域に1コピーで導入されていることを確
認した。同様にして、プロモーター番号2〜74を各々プ
ロモーター解析用プラスミドpPRO-GUSに挿入し、さら
に、各々のプロモーターを挿入したプラスミドによりア
スペルギルス・オリゼの形質転換を行った。
【0057】[実施例6] 形質転換株のGUS生産量の測
定
上記のようにして得られたアスペルギルス・オリゼKBN6
16(niaD-)の形質転換株を2%グルコースを含むCzapek-D
ok培地(0.3% NaNO3, 0.2% KCl, 0.1%KH2PO4,0.05%MgSO4
・7H2O, 0.002%FeSO4・7H2O)200mlに植菌し、30℃で20
時間振とう培養を行った。ついで1gの菌糸を滅菌水にて
洗浄後、AC培地(3%グルコースを含むCzapek-Dok培地)
あるいはAN培地(2%ピルビン酸を含むCzapek-Dok培
地)で培養後、菌体を回収し、破砕した。菌体中のGUS
活性をJeffersonらの方法(Proc.Acad. Sci. U. S. A.,
1986, 83, 8447-8451)で測定した結果を表10〜12
に示した。
【0058】
【表10】
【0059】
【表11】
【0060】
【表12】
【0061】1Uは、1分間に1nmolのp-ニトロフェノール
を精製する酵素量である。表から各グループのAC培地お
よびAN培地におけるGUS活性が確認され、プロモーター
として機能していることが実証された。
【0062】
【発明の効果】本発明者らによって、プロモーター活性
を有する新規なDNAが提供された。該DNAは、グルコース
のような単糖によって発現制御可能なプロモーター、ま
たはグルコース量の影響を受けず恒常的に発現可能なプ
ロモーターであった。また、本発明者らによって、該プ
ロモーターを用いた遺伝子組換え技術により、所望の遺
伝子を発現させる方法、および所望のタンパク質および
ペプチドを製造する方法が提供された。
【0063】グルコース存在あるいは非存在によって目
的タンパク質遺伝子の発現制御を可能なプロモーター
は、目的タンパク質の生産時期を制御する際に有用であ
る。またグルコース量の影響を受けず恒常的に目的タン
パク質遺伝子の発現可能なプロモーターは、培養全期に
わたり目的タンパク質の生産を可能にするため大量生産
に適していると考えられる。該プロモーターの利用によ
って、アスペルギルス属を始めとする糸状菌を、遺伝子
組換えによるタンパク質の実用的な高生産用宿主として
使用することが可能になるものと大いに期待される。
【0064】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> Higeta Shoyu Co., Ltd.
National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
<120> Novel promoters derived from the genus Aspergillus
<130> H5-A0101
<140>
<141>
<160> 303
<170> PatentIn Ver. 2.0
<210> 1
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 1
ttcttggcga taatgtcatc gata 24
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 2
aacgacctca acaagaccgg gc 22
<210> 3
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 3
actccttctc ctccttctca cgctca 26
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 4
gtcaacgagg aaaacgatac c 21
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 5
aattcaagca aggcagtgtc t 21
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 6
tggagtggcc gacaaccttc 20
<210> 7
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 7
caggtgacgc ttctcgggga tg 22
<210> 8
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 8
ggagaagagc cgataagcgc cg 22
<210> 9
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 9
gctccttggc tatccttttg ct 22
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 10
tgcaggttca aagggtcacg g 21
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 11
ttacgagagt ggatggtgac gg 22
<210> 12
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 12
ccaactcggc gggaatgcag ggct 24
<210> 13
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 13
cagtgtgagt agtgctgccg ct 22
<210> 14
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 14
ggaggagacg ggtacgggtg ggaa 24
<210> 15
<211> 31
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 15
cgtcggtagc agcggcataa ccacggagct g 31
<210> 16
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 16
ggcattcgat tagggctttg gc 22
<210> 17
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 17
acccttgata cggataacga agacaa 26
<210> 18
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 18
gggcttcaca cctcacgacg acgatc 26
<210> 19
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 19
ttggtgggaa gacggacggg a 21
<210> 20
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 20
cgaaagcgga gaggtcgaag at 22
<210> 21
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 21
ggtcttgagc caggagggag cagagcgaga 30
<210> 22
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 22
taacgctcga taccggcaac g 21
<210> 23
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 23
atgaaggtct cggtaacgtg cttgaa 26
<210> 24
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 24
ctcgacatga aaagacgacg ca 22
<210> 25
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 25
cgttgaatga taagactccg gat 23
<210> 26
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 26
agctcggtgg acttctggta gc 22
<210> 27
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 27
tgacaacgtg accgttcttc ctca 24
<210> 28
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 28
gaccttcttc ttacgcttct taccac 26
<210> 29
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 29
tgttctcggt ctcaatggcg tt 22
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 30
agtctcagca cggtacttct 20
<210> 31
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 31
tgcagcttga ggtacatctt gggg 24
<210> 32
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 32
cccataggct tgcgcttcag ac 22
<210> 33
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 33
aacttctctc cgccgacctt gat 23
<210> 34
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 34
accccaggag aagttaccgg ac 22
<210> 35
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 35
gtaaccgacg acaccgatag cg 22
<210> 36
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 36
ggctttccct tcttgacggt gg 22
<210> 37
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 37
atatcggtga cggtgggagt g 21
<210> 38
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 38
cgacggagga cttggtgacg ttgt 24
<210> 39
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 39
gatcggcacc agcgcacgac 20
<210> 40
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 40
ttgaaaccga ttgtggggat ggtggt 26
<210> 41
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 41
tgtgccaagt gagagcatcg tccc 24
<210> 42
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 42
tccgacaaag actcatagcg 20
<210> 43
<211> 31
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 43
tgctgctgac caccgtaaga ctgctggtgg t 31
<210> 44
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 44
gagacgaccg gcgcgaagca tc 22
<210> 45
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 45
tcggatgagg cgcgggtctg c 21
<210> 46
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 46
ccttctgagc gcgggtaaga cg 22
<210> 47
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 47
ctggcggggg gagacaatac g 21
<210> 48
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 48
gtacagagcg tgaatgatac c 21
<210> 49
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 49
gggaagcacc accgaaggga 20
<210> 50
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 50
aaccgaagta gcaagcaaga ttttc 25
<210> 51
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 51
atgttacgga tgttcttcgg cttgtc 26
<210> 52
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 52
tagacattca tccgctccag ttcttg 26
<210> 53
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 53
gggcaccttg ttgagcttca gcttgtgaac 30
<210> 54
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 54
gtgtgtgtga aaaacgtgcc ca 22
<210> 55
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 55
tctcgaaagt cacggttgcg g 21
<210> 56
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 56
cgctccgttg tggatggagt caacagcaac 30
<210> 57
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 57
tctctgatct ggaaagtgga cg 22
<210> 58
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 58
aacaccacgg attctctgct ca 22
<210> 59
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 59
acttgtcgat gatgccctgc ca 22
<210> 60
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 60
cttgatggtg tagtcgggga tcttga 26
<210> 61
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 61
gctgagtatc tgcgaaatgt at 22
<210> 62
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 62
ctgggaaatg aggccgtaga ca 22
<210> 63
<211> 31
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 63
attcaccagt accggaggca atgatgagga t 31
<210> 64
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 64
caacgaagcg atggtgagtg c 21
<210> 65
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 65
atgcttatgc cagttgctcc g 21
<210> 66
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 66
gtaggcccaa actgtctatg a 21
<210> 67
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 67
gtaccaaacc ctccgacaag a 21
<210> 68
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 68
acaacgacag caatcttaaa tc 22
<210> 69
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 69
tgcaatggag aagtcaaggg g 21
<210> 70
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 70
ttgtatcctc catcggttga aagtac 26
<210> 71
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 71
ccgggcttat catcatcgtc atcgtcgtcg tcgg 34
<210> 72
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 72
gtgacggagc agcagacagc accagc 26
<210> 73
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 73
agcttcctgt ccatagagat aggcg 25
<210> 74
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 74
cgctggtgtg gtagaaatcc tt 22
<210> 75
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 75
gtaatacgac tcactatagg gc 22
<210> 76
<211> 1167
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 76
ctgaacgctc atggacgagg agcgattcca gcgagtaagt ggctggaaaa aaaatcgcaa 60
tgaacggaac agatgcacaa aggcaatttc gcttcccagg agattttctg ggatgcgctg 120
ttagggtgac ttgccgctat taccaatcag cggagagtcg gaagagttct tgccacatcc 180
gtgcccaaaa gtgggaattt ttctgcgcga gactaacgga ggaccccgtt tggggacgag 240
atgatgccaa gaattcagcc tttggatccg cacgccggaa gcccgaatga gagaaacaac 300
atggctcgcc tgtaaattga gccaactgtg cggggtaatc tgggattcaa tggtgcaatg 360
tctcactcca tgagggtcta agcagggact cagattcggg cgcaagtgcc gtttaggtca 420
atctccccca gacctgagag aagagaacaa atgagaatct gggggcggcc cggagttctg 480
accccaatgt tacaacgcta atgccatggc gtccccgcca ttgaatccta attgattgga 540
ttacagagaa acaattactc atggtttttg gtcgggtgca tgcttatgct tgtacaaccc 600
ccgttgaggt tggtcgtgag aaacatgccc taacatcccc aagcttttgc tggagggtga 660
ccgtcacgtt gtagcccctc cttgcttcgg agcccgaagg aatgtcacaa tgacatgcaa 720
tgtttgtaga acgacgacga tccaagccgc cccaaatctc agcggcacca gtcagagaag 780
tccagaccag cactcacggc gacgatccct acgacataat taaactcatc ctggtagctt 840
catacacccc cagaccaatc ccatggggca aatgatgggc ctctgcaacc taaacccgat 900
cctgctaaga ataacccacg ggctccattc tcctgatcca ttctggccga ggccggacct 960
gcccacgcat gtgagcttca ttgcggtccg tcgtgtatat atagagactg ctggaagcgc 1020
ctcgatggga gaaagaacag atcagagctc tccattcttt tggcaacgtt cttagcttct 1080
ctgcactcgg gcactcgttt ggtcttccca attatacata gatcacctta atcttaattc 1140
tacttaccag tctttcccgt caagatg 1167
<210> 77
<211> 476
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 77
atcagactat ggtggttagt tcaagactca tactgccggt caagccccat tcaatatccg 60
acagagcaat gaatgttgga aagtagatta gcctgaaaca tcccatgatt tcgtaggtcg 120
agactgtgat ggtctactta agttgactat cagattccgc attagagtaa aactgtatgg 180
attgcaaatc gtgcgtgcgc acatagcgca caacacgtag aaaatataag aacaatccag 240
gaaagaaaga tccagagcca aaggacagta actcaaatag ccgaccttgt ctgttgatag 300
tagcagttgt agtagaaaag gctgcaagac ttttgctggg gaatcggaat gtccgacacg 360
tgacctggca agagccgcta gggaacaacc ggcatccgac ttcgaccttt gcaactcaaa 420
cacaggtcca agagggatac catcaccgtc gtctcctccc catccattgc aagatg 476
<210> 78
<211> 555
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 78
atcatcactc aggaggaata cgctgccttc tacaagtctc tctccaatga ctgggaggat 60
cacctttgcc gtcaagcact tctccccgtt gagggtcagc tcgagttccg tgccatcctc 120
tatattccta agcgtgctcc tttcgacctc ttcgagacca agaagactaa gaacaacatc 180
aagctctatg ttcgccgtgt cttcatcacc gacgacgcca ccgacctcat ccctgagtgg 240
ctcagcttca tcaagggtgt tgttgattca gaggaccttc ctctcaaact tgtcccgtga 300
gaccctgcag cagaacaaga tcatgaaggt tatcaaaaag aacattgtca agaagaccct 360
tgagctcttc accgagattg ctgaagaccc gtgagcagtt tgacaagttc tactccgcct 420
tcagcaagaa catcaaactt ggtgtccacg aggatgctca gaaccgccca gactctcgct 480
aagctgctcc gttaccagtc caccaagtcg ggtgatgagg tcaccctccc ctctctgact 540
atgtcacccc gcatg 555
<210> 79
<211> 545
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 79
acccgcactc cctttattac tatttttatg acatcccttc tgttgggcgg cctctgtttt 60
tggtcgggac tctggtttgg tctgtttttg ttttattttt gttgcatgga ggcggttcat 120
gaagtgtata cccccttttg gttgttgcgc gcgacgttgt agatacaggt tccaaccgac 180
tgatcagtgt gctgatccca cagaatatcc gaaattcaaa caaatgaaaa aatatacata 240
caaaacaaga gacttacttg catccctgta gttgacttgt gtaggaatgg aagagacgag 300
aaagaaaggc cagggttcag gtactactaa ctggagaaac atacgtggtc ccggctgatc 360
tcccggcgct ctggttggct tagccgagcg ctaagcgtca ggcaagcgaa agccaacgtc 420
aaccaccgca accgtgtctt atcttcttca aacctcaccg ccagcgctcc agccttcgca 480
aacctcgcac tccatatcac cgatcttcag taccaacccg ttcggactgg atcgatctca 540
ccatg 545
<210> 80
<211> 893
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 80
attcaagcaa ggcagtgtct cagatctagt cggatcatga ttcagcatat agctcctggg 60
aaattccata tcaatatgat gggaaaacgg gtacatagat ttgcgtaacg aaatgccaac 120
aaaccctatt gaccccataa cgaaaccaca ataatacttt gcgaaattag ctagaacgtg 180
actaagaacc atgttcaaga ttaaaggtat ggttcgcccc cagactgggg tcgtaaatgt 240
attaccctac cgtaacaaag cttcaaaaac tccagtacaa tcagtcattt tattggtgca 300
agagggtatc cctagatgat tcttgcgtac cttttgtcag atgaaggttt tcatctcttg 360
gcatgttcgt gtctggggaa agtcaacagc ggtcaaagtc cagaactgat atatcacatt 420
tcactcctta gcgacagcca gctaggttta taggccccca ctgagttcct gcggtgtaag 480
aagggaccat ctggatattg gcgtcctgca tatgcagagc taatattact tgagtggagg 540
ctatggagct ccatccagcc cctggctcga tcctaagcac caatcaatgc ggggatcgtc 600
gatagtccag ccagacccct gatgattatg caagggttta cgagcgatgg aaatgagatg 660
gagctaacca caccaactat gggatattca tgatcttaaa tgctaaaagc agaagaaagc 720
atatgtctgg gcctcgctcg aaaaagttat aaaagggaca tcggatccct cccaaatctt 780
tcttcatcac aaacacaatc agctattcaa gcaaagcatc actccttgag cttcactcct 840
ttacaataat ttgcttcaaa gcatctaacc agcccaaccc aaccatcaaa atg 893
<210> 81
<211> 619
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 81
aaagtgctca atactattaa gggtaaagcc tctactggaa gccacagtgc aggcatgagc 60
cggtaaatga aggaaacatt aatgatttat gcaataccaa gcgaatttgg ccttaatatc 120
ccctgtaaat tggaactcat gcatgtatga caataatccg atctccgtgt aatcattggt 180
cgcattggat gatactatat ttttgtgcct gaggcaaaaa gaataccgat aacgttatcc 240
aatgaaaggc ctcttcttcc accaccgcta accgagcaaa caagggctta gggtttgtgt 300
ccacgtgaca ctacatgtct ccccactcga atttcgcact tgggctctca cttccggccg 360
ttgattgtcg cgctctcatc cgtcgtcgaa caaccagatc agacagtcaa gatggtgagt 420
ttaagccgca catagagacg aaccgcagaa tgttcaggtt atactaatat tttattcata 480
ggctcccgca cgcaagaagt ggtccaaggg caagggtatg caaatcacca tctcccatcc 540
atcctcccag cgaacgaacc tttccccgag caagatgtca agcgattttt gtgtgggcag 600
aggggttgtt tgggacatg 619
<210> 82
<211> 813
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 82
cgagggccag agccaattcg ctggccttga acgaagtctt caaatatggt ggccatggta 60
atatgttcac ggatcaatca tagactttca gtatcgggtt agcaagtcga gcccatatcg 120
cgggcatttg gagatggaac cacgatgtgc ttcctccgta caagtgcaag catgaggtgg 180
ggaacaatgc ctcaccgccg acgggaccga tcttatcagc cacagtggct gcgtgcccaa 240
ttgggaatgg tgtcccgtgc caagcctcaa ggtcgcttag ggtggcagcc ctaactcaac 300
ggaaatcaca aatccccaat ttcacgaacg agacccaacc ggcatacctc tctcgagcaa 360
ccacaacagt cgacaaaagt gagtcctacc ctgtctattt acccattata tttgaaggct 420
ttgttgctaa cagatttacc agatgggtaa gtgaaaaaaa tttccctctt cggacccctt 480
gaccctggcg aatcggtgcg gtgtatcccc ttgcgaacgt tgaacgacac gatgccggag 540
gaagaatgta tcgaggagga gcatgaaaat tatatggacc cgattcagcg aaggcgataa 600
tggtggattt tgtgaaaagg attttatttt agtacgaatg gacgttacgc acggtcggaa 660
aattggaatt tttacggtcg catatcgtgg aaaatattct cgactctcga gcatcgaaag 720
gattgacaac gtaccgcacg gaattcagcg caccgattct caccgctggg atgattgaac 780
gccactaatt gaagattttg aaagtgccaa atg 813
<210> 83
<211> 858
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 83
atttcaacta tttcccttct atttcctgga cgacaatgcc tccttgggat tatttaaaac 60
tttaatgaaa ccaggcaatt cagacgcctg agaataggat ttgagtatat cgggaaaacc 120
tcgtggtttg ggagcctgac gatttgcctc actggaacaa ctcaagtatg cagtgaacta 180
tggaagtttc tggtttccac ttcggatttg cctccactcg tcagagtgtc ccagagcagt 240
aaaatccatc atggaatttt ttacacttta acaaaagtct ggttacgggg ctataccgaa 300
acgggggcct gaggggaact agccccgaat gggattaaac ggctacgaca tcggatctgc 360
agtcgtactg cggatggagt cgtgactcag caggtcatga atgaatgcct cttccgtata 420
aattgacttt gactgcactg tcgccgctcc ttcttcatct ttgttcttct gcttatctgt 480
tcttcgcttc cattgtcttc ctccggtttg tgtccccttg ccgactctcc cgtctttgcc 540
ttcctatcta acaagtatat atatatagac tccccgtcct tatctgcctc cttatctacc 600
gtcccttccc catacctcct tctcggcgct tcaatctccc ttcaggacgt ccacgtcacc 660
cattcatagc ggccttgcca catcgctctc ttgactcctc actcatcact atttccgtat 720
aacgccggaa attccgtgag tcgctagcaa tcgttcacaa caagccgtaa tccgcctgct 780
ccaactcggc gcttatcggc tcttctccaa cgtcacctcc ttatccggct ccctacttgc 840
caccacccgc tcaacatg 858
<210> 84
<211> 488
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 84
ctgggtccat tagcaaaatt gaacgcatgg cctttgccac caagaattgt gcgcaaatga 60
ttttcagcgg tggagggtaa taagcgccaa caaaaaaggg gatggaaaga tgaaggtcac 120
ccattctaaa taaagcaaag attaaataca caaggccgct ctgacgtcga ccattcattc 180
aactttccgc cccgcttgat cggctcggcg gccccgccga cttgcttgag ctcgaggatg 240
actcgacttt ggacaacaca ctctctttaa cgcttgcggt cctttcaacc cctgcgtcaa 300
tctttagtta cactggttct ttgactttgt atcagttctg gggtgttctt tattcttcga 360
accaagcttc ccagctttca tcatctgacc cagtagagct ccgtctatcc gagagctcct 420
accatctttt tgaattttcc ccttctacac ttgctctccg gtcctttcaa aaacaatctg 480
aaacgatg 488
<210> 85
<211> 881
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 85
ttattcttag caaaacgctg ctcggtatat atccggcgag cttcatcaaa gtttatcctt 60
tggcgtttca tgatcttcat gatttgtcgt ttagcttggt tatccaaccc agccctagtg 120
tcaccatctg caatgttggc ggagaggtca aactgcgttg atgtcagccc cgcctctagg 180
tcatcggcga actagaaggt aggcggtcgt aaatgtaatc aggaactggg actagagaca 240
gccatcgggc ccgtgtaaga tagaggactt tgaactcgtc agcatgatat ccagactcgt 300
aactactttt tggttctgct tgagtgcaat atacctgtac cacaaaccac aacagagatt 360
gccaaaaaat atagaagata gtatgccatg gcaaataggt cagttggatg gctgctaggc 420
tgttcaaacg aaagacagtg ggagatgacg ttaatggctt cccgaatgtt ggatgtgagc 480
ggtaaactgt tgcgaagcgc aagtgatcaa aactctttac tatattcatg aatgagggat 540
tctcggctgg caggtagctg ccatcatcag cagcatatga tgctttaaga tggaaccagg 600
acaacccggt agcctagggg agatctacta gtcacgggga gaactgggaa ggctgcagaa 660
agaggcaagt gggtctgtgg ctgaacattt ctttgctgcc ttcgatctga ggcagcaacc 720
ctgctctcag gcgctatacc taaagtagtc cgcttagcga gattgcggac agccattctt 780
ggcgctggca cacacaatcc accgttcagt ataccagcct ttgtgtcgat tgatttcgat 840
ccgtcctcaa tccaccagcc tgaaagagat aatttacaat g 881
<210> 86
<211> 703
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 86
atcctgacca agaggttacg ctcgtacgtc acaaaagacg gcacaccttt ctactagtat 60
taaggaggct ccgggtttac ttatcttgac atcagcgggc catgcctttt taatggaaat 120
tggggaatga tccacaaaaa gcatgaaggg aaaacaagac aaaaaaaacg taattttcat 180
gaccaaacgc ttttatttaa tcttgttgta ttgttgcgat tctagaattg aaatagagca 240
attccgataa attttgtcgg gatacggtca tgtaaaagtc ggggatatac gttcattcat 300
tcatagatac attcatatca catacatagt tcgtaggttg agtcgcttgt gtgtcccggc 360
gtctgggggg ggggactcgt gagggaccca atcagctcgc taacgatttt cggcagccat 420
gacattcaca cagctttgcg cctttccaac ttcaaccaga ccaaaaaaac cccctcatcc 480
accacagtaa tcttttctgt gtctaggtac gttataattg tatctctggc cgtcaagatg 540
atttttacgc tcggaactgg tgaattcctg cagttttcgt gggcgggacc ctccggtttc 600
gtgggccaca attcgagcct ccaagcgacc gaaacagtcc tagagtgcga attgctgacc 660
ctcgatttta tagccctttt aggctcccct aattcacaaa atg 703
<210> 87
<211> 870
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 87
catactaaag gggacaagaa ctgtgatcgg catagacata acataataga tcagtcttat 60
tttgcatatg cagcaagcta gtgacgttca ccccaattga cctaatttta caaccaataa 120
taacgtccaa tacttcatac tacgttgaga cttatccacc atattgtctc aagctgcagt 180
gtggtcaatg tattcgttct ctttcaggca atccccacat tgcctgatcg ggtcttcccg 240
aggattcctg cgcatgaact attgattcag tatgccaggt acatctgaaa tatgatagat 300
ctcgcagcat ctactgaagt taaccgtaga aagtgtcttt cagacctggt gattggtccc 360
catcttgtcc atcacactga tgagtaccac tactaccatc cgtcagatct ggaattgatc 420
aaccactacg tccgaatatg gcaatcaaac agacttgaga aatacctcag taccaatttg 480
taggacagga aaagacataa atactgctct aacaccccga gtctctactc tcatcagcac 540
cacatctact ctcaatcaag catcactgat ccatcttctt tctgcaccgt tctgcaccac 600
tctacccttc agcccaccat gaagttccaa tctctctgca tgtctctctt ctgggccgcc 660
acgctggcgc tgcgcttccc gtcgagcctt ccgcggagtc tgcgcctcag ccctgcattc 720
ccgccgagtt ggcgaaggtt ctcacctctg tgccgaaaga ctcacccttg tattgtaagg 780
gtgattctca gcctgaaaag cgcgacggcg agccttccat tgaggagtgc ggggatgcgc 840
tgaaggctta cgatgccggg gaagaagatg 870
<210> 88
<211> 464
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 88
gtaaggcttc agatacgact cgatacacta tttcgcgcaa catgatcctc ataaccacca 60
tatgggttgc ttacttgatg aaaatctgag tgctattctt ggtgtaactt tgggctcaca 120
caataccatg ggggcggcat atcgggccaa gggcaaccac cctgacgaca catacgagac 180
gtaggagcat cccaccaata ctcatgcgat catgacctgc aacagcaaca cgattgctac 240
gaccaaccta tcatgatgac gcgtttagca tttggtggca atcaactcct tgaagcttgc 300
aaagctagtc gagcaacggc ggagtttgat tggcatgacc acagcaatcc agggggcgct 360
gtgcagcaga ccggatcgac ggccacacga catccaatcg cttccctcca tgatgatcat 420
ggtgaaggga ctcgacaggt cgatggactg gaagtatgcc gatg 464
<210> 89
<211> 572
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 89
aaggggggga ttgggtcagt gcttcaatag tgttactgat gtgtgtctta ctaagacgtt 60
tcctttgcta acattcatgg accatataga ggattgaatc cctcgaatag tgagatcaaa 120
tgagagatac tagctaagat agagcgtagt acttatcgtt agatgaagcc tcgttatagc 180
ccgatttccg caaaggtaca gcagctgttg gggcacagaa taccatgaga tgaatgtaca 240
ccaggggatg tacctattaa cttgtatccc agtgtcccta cacacgtatg taaatgaata 300
ggagaggggt aagaagtttg atgatcatct cgaatgggca tccttacagt ctggaaattc 360
ccaaaaggga aagcggctga cataagaagc cctatttagc ggcactaacc ccgaacgggg 420
atggtggatg ttagtcagcc gcccacagag ggaaatctcg ctacaccaca gcggccaaaa 480
atcccaagta ctgaatctcc gacgacctaa cctcctcgac ctgtcgacaa tacccgcgcc 540
ctccgtcttg accgcgcagc tccgtcaaga tg 572
<210> 90
<211> 517
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 90
atctgcgtcg gccatggttg caaggtgtcc gcgcgcttag tctaggaggg ggcaggtgac 60
cgatcaaccg ccggggggag aacgatccag gaggccacat gcagggaagc acgtagccgc 120
acaggtgggg aaatctcggg cgccagacga taggttaggt ttagggggta gttttggcaa 180
aattacaatg aaataataat gacaatgaac gaggtgtggt gacccgtgac ccgtcacttg 240
ttatctgatc taggaaagga caccaagtgg attctgggca gccaaacacg gaatccatgc 300
catgccggtc ggtcggcagc ggcggtgccg agagaggtca agattggcct gaggaacctt 360
ctctcacttc ccgcacaagc aacccgccgc ctttcttctt tctctccttc ccatcctcca 420
catactctcc tctccagccc tgtgttgttc gtcgctgacc ccggggatct ctcacaatgt 480
ttgccactag gaacttcgct ctccctgccc gccaatg 517
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<211> 811
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
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aaaaactcat ttccttcggc aatgatgatt tttcagcgta cggtagtggt atttatagct 60
ctttactgca gacgctctca ttatattata gttaggtaac gaggtcacgg agaggattcc 120
tgggacccgt tgagctacta tatataccgc gcctggggat gttaaactgt tcggggcctg 180
acatagtagg cctttctgac cttggtggtt gatagaacga tcacttgggg agttaatcta 240
ttacatgggc gacaattcca tggcattggt atatcgacag ataccagata tatatttcaa 300
ggtaagttgc taggcaggaa tcttaattct gcgaccaatc catttacccc cgtgtacaat 360
agaaagctgc ccaagttgct aatgatatag aagctctcgc gggtctcatc ctatcaatat 420
cgatcttcaa gactttctac ggaaacttgc tgggacaatg ccaagaaaag gagaggcgcg 480
attcccacgg aaaatgagaa cataaactca aaatatgaga tgcttccaaa ccaagcaggg 540
tgatcgatat ccgtgcgaaa gctaaagcac accctggtca agaagtttca agcataagaa 600
ccgttgggaa tacaccaggt gtacggagaa gaccgtaccc taaacgaaaa taacacgttg 660
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ccctcttttc ctcgcgtcca acttccttgc ctctttcttc ttcccctcat tctctcttta 780
ttgattatcc gattacagca ttctcaaaat g 811
<210> 92
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<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 92
atcagaaacg gtcgctgggc accagctcga tttttcccgt gatctctgtc gtcccccatg 60
aacttgcgcc tcagtgatat gagcacgaga tgatggatgg atcgcacaat ggtctggggt 120
attgaggttg aaggtcatgg ttactttctc cttgaaagaa attgttgcga gctgcgttcc 180
catactctga ctagacctgg aatggcttaa cagagatggg acgaacggcg tcaacactat 240
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cgcggagttg cgaactcgtg ctgaaaatgc atcgctagta gcaacgtccc attaccgatt 360
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cacatatacg ggtgatgata gcaaccacta cgcgactaga ccatcggtcg atg 713
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<212> DNA
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aatggtaatc aacatcattc taatgtcatt aatttcaggt accacttagt cagcggaccc 60
agtgatcttc atccaaataa gatctcggta attggaaata cgatctcaat ctcaaagcaa 120
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ctaaccaaga aatcaactgc catctatttt aggatacatt gtgcgactac gtagaccgca 240
gaggtcgtaa tgaatcctct acatggtaac ctgtatagcc tgcaagtggt ttaatacagt 300
ctatggtcca tagtggtgat tgcattcctc aaagtgtacc tctagacgga ctgaaacggt 360
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tcattgatac aaagtaatct accaattaat gtttgacatc actggccttg gaaaccacaa 480
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atg 963
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<212> DNA
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actttgcgga agtcgtccct cttgtgtgct tggtatgctt cgcagcatgt gtccaggaag 60
tcggagccgg ccatcaatgc ctggccgcat gcggggatga cagagcccag gatggttaat 120
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gtcatggctg tctttgcctt ctcgaggctc gatgatatcg tctcttcatg cttgtcccat 240
gcttcagaaa gtaatttctt cagcgcagag ctggagggat agcagctgca catgctgccc 300
aggtacttcc atcctagtag atcgggtggt gaggtgggcg cgtccaacaa gagtcgccgt 360
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atcagggtca gtctgcggca atcccttgtt tgccattgga cggcaaaagg tctttgttta 60
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gaccccagac tgcgtggtgt ttcacattcg ggaatacagt ggtattcttt tccgaacttc 60
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<212> DNA
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ggatcggcca cgtgaacaca tcatttgtcc ctcatccctg tctgggcgcc tcaggccact 180
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ggcattgaca catcccgtga ctagacctcg cttaagggca tagggctttt gcacatgacg 300
ggcctcgcac aacctcatca cgagtctccc ggtgcttcac gacaaccaaa cccgacaagc 360
caagtacgcg acaacctccc ccttccccct gactcttcat tctctgaccc atagttccag 420
agaaaagccg tcaagatg 438
<210> 107
<211> 623
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 107
atctcgtggg ggaacagaaa tctggcagtc atttgcagta ttgggaggaa aatggcccat 60
ttcggtcaag tctgtttgtt tcagacttct ctgatgcagt tacgaattat gcatacgtga 120
gctgaaaaag ctccttgata gccaatacag attatctgac ctccacgaat tgttccatat 180
cacgtaaatg cgcgtaaccg actttctgtg tatcaggtat gaattacggg gcgcgaaatt 240
gtattacgcg cattaattac atatcaaacc taggcacttg tactccgtaa gccccagtta 300
atgagagcca tagattgtct agttcaacag ccaatgataa cggccataat ctacaatatc 360
cattcaaatt tcccgatagg aagtataatg tagggctagc ggcatataac cctacagcca 420
ggaatccaca acgggcctag tttctaggtt tacagcccta agccgtcgct tagacgaatc 480
tcagcccacc tcccaaccgc agcgtcgagc acaagagttg gcccgacgaa cgttcatcag 540
cgacacgaca cgacaaccca ctgtcccttc gcttttcgag tgctgttcga aaagcgacct 600
tgagaggaac acccgcaaaa atg 623
<210> 108
<211> 506
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 108
actcaagagc tactcctgta cttcaatcgt cggactatcg gctgggaagg ggaaagcatg 60
gtgaaaggtg tagagttgtt gttgattgtt gacccgtgta gaaattatac caggagagca 120
gttgcgcttg atttgccagt tcttgttatt tttttatgat tttattttta attatatgat 180
cccattgcat gaaaaagtgc cccccaggat ttaattgcca gggcggggca cacaaatcac 240
ttatgttttt ttttcccccg tttggttgcc aacgcagcca aacacacccc acctactggt 300
ctctcttcgg cggcgcggct ctaccttaac taataatcaa cttcaacgga ctctttcccc 360
ctctttcttc atcccacaca acaaataacc acttctattt ccttcatcta ctttgacacc 420
ctttcgcgga tcaccacctt ccttgcctca cctacttccg ttttctgacc gttctcccgt 480
cgcttctccg tccattattc accatg 506
<210> 109
<211> 770
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 109
atgtacaaac tgctcttcag gcggtgtcaa aagcccagaa tacttgttga ttactttatt 60
aaaaaaaatt cacctgagta gactagtcct aatcttcaaa caatttggac atttttaggg 120
aaattccata gaaaaggaaa ataagatttg ttcaaaaacg gtctagccga aaggtcccgg 180
gaatgggtgc tatgcggtat tggggctagc gccgcacttt ggactagggc aacttctcaa 240
gcgaaggcac agtgcgaaat tcacgatagt ccgacgacag cactcaactc cacgaccacc 300
caacgaccct tgcccgctgc gttcctggtg aagggctgca ggattagagg tgagtttact 360
atcgtcattc caagtgtttt cgatctcctc tttctgtttc accgttgcgt cgagtcttga 420
gcgttggtta tcgtgccgtg tgccgcttag cgattgaagt cgatcggatt agtttaaggg 480
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aagaacggaa aaattttttc acacatcgtc ttgtctccga tatacataaa ctatctgctt 600
gggctttgcg accgctatca gtgcattcga tttttgaccg ctcgctttct cacgatccaa 660
cgggaaactt gaaggggaaa tcaaaacaaa acggaactac tgcgtctacg ggttcttgat 720
agctaattgt ctttgttgtt gtccacagtc ccctcgaaac agcaaacatg 770
<210> 110
<211> 1016
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 110
atgccaccaa tggcagccag acttcacagt cgaaaccgga gtctacagcc taggacgctg 60
catctaaaat gagtttcctg ctgtctccat tgatgaatgt accatgttgc ctatggactg 120
agcctgaata aaaaagctca catgaagtta tcattatgag acttcctgtt gccttcgctt 180
ctactctgat ttctttttct tcttttttta ctatctatat acttcatctc tttcttccca 240
tttcctttat ttccctctac atttgggcct accatttcct ggtggtgttc acccttgctg 300
ctatcttagc cacttggtct gtattgtatg attccgaatg gcacattagg aaggcgatgc 360
acgtttccca ctttgtgctt ttgtatctat ttcattttct aaacgttcct gttttcttac 420
atttgtatgc cctgcgaaaa cccatccgtt ctcatctctc gcagtctttt aactcttgat 480
gattgaaggt agcaacaaca gaaaatggca aactaggtta agtaagatac ttgaatgaaa 540
tagtagtttt cgagttaacg cgttgtaagg cggtaatact tggtggcgga cgctaccgaa 600
ctttctgtac tacccttggc ccgtgtctag agcgcccgga gccgattctc catgtgcgac 660
gggagatgta ctaaatacta gtagtactag agtaatcgta gtagtcgttc tgtcgtattg 720
atacggcttt cgttggagac aacgttatgg ggtcaggagg aaaagccgaa attactagat 780
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cggcggttcc taaccgtaac aggaatagcg gcggcggcat cgcttaggtc agcccacact 900
cgttaagcgt tgtaaaatat gactttgcgg ccgattcaga gatagacact gtcactcacc 960
acttcgacga ctaacgacaa cagggtcaag atgtgagttc ccacgctggc gcaatg 1016
<210> 111
<211> 722
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
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actccccgta gtagagcatg tctagagcac cccatacagc aagcttacct aatccatcca 60
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aatggtggtc tgagtttatc gaaccgggtt tgtgggcaag gtatacgggg caaaggaaat 420
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<212> DNA
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ctggaatagc agccgtcaca tcggggatct cgagtttggc tttctccaag aaggagaatg 60
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<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 113
actaacagac ggagccgact cgaaagctgc agatatatta gcatatgaat ggactccctt 60
gacaaattat cagatctcaa atcgacaagg ttacttacga cgacggggga ccttgtaggt 120
cttggagtag acgcgactgt gattcaaaaa cgattagaat gatgcgacac agcatccatc 180
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<212> DNA
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<400> 114
actacgctat gctcgccaag gcccctgttc accacttctc tggtaacaac gtaagtgtcc 60
ctttgtcgct tatgtctctt tgctccgaca ctgccaacct tccctctgga aggaaagtcg 120
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<212> DNA
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acgccggcgg ctgaatttct cgacctggca ctttggcacc caaaatttcc aacttggaca 60
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<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
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ttgtgccaag tgagagcatc gtccctcatc tcatcatata tggatatatg tcgtatacct 60
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<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 117
gaatggtgga gcggaacgtt ctagattgat ggcctgaggc atatcaaaag tgaattagat 60
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ttcccttctg gagcaggtct ttttcttttt tcttttgaac ctcaccctcc catcgtcccg 540
tttctttctc tcttgattta acgatcttac gttgctgtac cttgtgagtc ttgtccccac 600
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tg 782
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<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 118
agagcatctt ttctccgccg agagccttgg gttcgtagca accagccgag taagacgagg 60
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<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
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tccatcctaa tacgactcac tatagggctc gagcggccgc ccgggcaggt atcggctctg 60
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<211> 764
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 120
ttctcctgca caaattttag ttcaatatga gatcgttacg acttgtctgc ttccatagtg 60
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ggagagctca ccagtagatc gaccgtttgc tttcacaagt ggggtatcgt cctctgagga 60
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<212> DNA
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cgaagagggg tccgtatatc gctggtttcg actacggtgg aaaggcgact tcggtgcagc 60
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tggctccata tggagtagtg catcatgcct atcagaacgt actatgtacc atcgcgggta 180
aaagatttac acgtaaaaag ctggggcaag aagaggagca aagaaaggca aagtaattag 240
tgacacaagg tgtgtcaaaa tgttaaaaac tagcaaagta tgatttaata gcagtccggt 300
atgtagtaat aatcccaagt accgaccacc ggcatgactt tctctctttg cgaaagggtg 360
gtcaggatgt aactatgtat ggggattgga ccgaggatcc attgtcagtc ctcattcttt 420
acggggagta gtgggaaatt tccggccggc ttcggcgtag gggctttcac acggtgggcg 480
gaaaaggaag tcgcgaccaa aacaattgag tcaagacggg gggataaagg cttctgcttt 540
gggccagata aaagtcgtga cttggtcaac ttcttttatc cttcgaaact ctcttctctc 600
ctgtactctt ttcccttact tcccccagat ctcgacgact aatcaccgtt ccacctggga 660
actaacatat tttccggagc tccgatctcc cccgtggtat atccatctat cagcagcttt 720
ctccggcgtg acgggagctt ccgactccac cgcccgctct ctccttccaa ccgaaaagct 780
tcaaagtgct tccctcgggt atacattatt cgccttttgg tgtaccccag acctgaatag 840
gtaagcaggg gagttttcct gggagttgcg attaccgatg gttaatccgc ttgggtatcc 900
aaggcatcag gtccgatcaa aatgatg 927
<210> 123
<211> 474
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 123
actctctggg ggcgattttt ttttttttcg cgcctaggcg gaggtgctct cacgttatct 60
tgccgcccat gaactattaa atcatttaaa gagcccatcg cttctctccc gccttcctcc 120
tgaaatcttc cccattcttc ctactacact ctgttatcac ggacctgatt cgtaccaatt 180
tgaccaccga tcattgtcga cccttatcca tagaacctac aggtttctcg ttgacactcc 240
gtcaccatgc ctttcactgc ttcgtaagtg agcccctatc accggcaccg cacgctgttg 300
cccactctcg gagtcatcct ttttcttctc tcatcgttgc gcttcatacc tatcaggagc 360
acggggaacg aaattgacta ggagctaaac tgactaacct gaatttagtg atatctgcaa 420
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<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 124
gagatatgtt agatccatta tgggaagtgg gtggaccttg aaaaagaaca gggggaggga 60
gacgcgcaga gggaattttc ctcagattct ctaattttgg agccgcatcc atggtgttcg 120
cgaagtatac gttgttggca ggcgaactaa aacagaacaa gctccaattg acagccgtaa 180
ataaagggag cttaatctcc gcatacaatc aatgctgacg gtcactgata aggggcttat 240
cgatatcgga gaacggcgga agttgttccg atcccgtgcc tcgcttagcg ggccgattag 300
ggcggagcgc gcacagcaga acattttggt gagccttcag cgacaccgcc ggccgtgaaa 360
ggaacccttc gactctcgac aaccatcccc atcaggcttt cggcaatcta tatcagtcgg 420
tatgtatatt gttgctgcta ttttttgatg aaatatattc gtgtctaggg actcccgttc 480
aacatcgaat cttttgattt ttgattttcc accgccccgg ccatgtactt ctgaaatcca 540
cgtcccctcc aaaaatcacg aaatcaccaa gcatcagatt gccaaagcaa aatctaacgc 600
attcttcttc tacagaccgt ccttcgaaca taatccgccc aagatg 646
<210> 125
<211> 615
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 125
ctgaagatgc ccaggattaa gttccctatg tagttactat atgtgtatga attggcaaga 60
gggtataaca atgaaaaata gtgaaagatg agtggtaatg gcacagcttt tacttgtttt 120
taataacgat accacacaat agctagagtt gtggaagcag aagtaggagt ctaggagggg 180
agttgtccaa gtaaagtgga agaaccaaca tgccaaaata ccatggtata aataggaaca 240
gcacgattcc agacaaatca tttaggggaa agtttatcat ttgattggag caactagacc 300
gaattgggtc ttctgtctgg ggcgcggcga aacgtgaaac ggtcacaaac caagggaacc 360
tgcacgctgg gctcgtctgc tcacctgcac tactcagcaa ctcgcaaccg ccatttcaaa 420
agacgacggc cgacttcatc gaacttaaca cttccaggca acgcttcttt tcctctcccc 480
ctctctctat ctgctgctac cgccgcttga cctttcatct ggtagacgac tcctgtttct 540
ttcgtctttt ctttcgtctc ccctccttga agagccttgc atttgtcaac agttccccct 600
acaccgtcca tcatg 615
<210> 126
<211> 652
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 126
tcagtcggga agtaccaaaa tagtcattga atacggccga cgaagacggt atagttttag 60
ttgtgactca aaggaatgag ccaattggtt cataaaccat gggtgaacat tttgtaagga 120
agtgagccct atggacaaga atgtaaagct ttcagatggt tgctgagaaa ttcatcctac 180
ccatgggcga ctggaaacta ctgcatggta attaagcttt gacatttcac tcaatgacgg 240
ggagagtaag taatagtcag actgttacga gcgaggtaaa ttttggtaag gtaatgaggg 300
gtggaagcca gaaaagccgc taaacggcag aaaagattac caagaaaaaa cgcacatctc 360
agattttttt agcaaggaaa aaaaattccc actgagaaag tccccactct cgctttcttc 420
tccctctttt cccctcttcc accgtcctct tcctttcctc ccttcacctt cctctgtgaa 480
gcccactgtc tccctttttt tttaggagca acacacatag gcccttctgt cctataatat 540
tcaggtcgag ttagccctcg atcctgatcc tctgtgtgtc gtttcttcgt ttttgcactt 600
tactatacaa ccccgcctct aaggcttttc acaaaaaaaa accgccaaaa tg 652
<210> 127
<211> 584
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 127
acttggagta gatttggaaa agtgggtata aattatataa atatcgtctc gggaacccac 60
agatcaacat cgaattaatt tcgctctgtt attgtttgct cttgtcgcct atcaattcaa 120
ttctaaagag gattaagccg ttgagttgtt aatattattg ttattattga gaacaaaagg 180
agaggggggg ggggaaaggg aaaaaaagga aaaaaaaaac acggacaaga agcaaagttg 240
ggactagtgt actttgggcg aaaggctgga agaatcgaat gaatccatag gcccagacaa 300
atccgctcaa aaagaaggtg tcaaaatgcc gttagcacca aatgcactgc ttacgagttt 360
acataaaaca gcaatacaat cgcctgacgg acacctgact gacggatcac ggtttcccta 420
ccgttttgtt tttcttctcc caataaatcc tcccgcttct tcgttgccca acatcacctc 480
tacccccgtt tcccctatct caatcccatc gtctccccta caatcccttt ttcttacccc 540
ctaatacctt tttgtatcgc gatacttcat ccttcttcac aatg 584
<210> 128
<211> 796
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 128
aagcagaaga aagtacgtgt aatgactcga tcaaatgagg gtatctctac tagtagtacg 60
tagtctcata gctccgcctc ggctacctat cgggggtcgg cagtgtagct ccacttgtga 120
tcgtgacttg tacctatgag tcccgccaag gttacggtta ctaggtactc tgtagatagg 180
cggcgatcct tgcgcggatg tacattgtag gtacatggat agtatgtact gtatataccg 240
tcatttagta aggcaactaa ctaacttatc agcctagctc ccgagacggc cttacatcat 300
ccgcagcggc aatcagctcc acacccttgg atagtgataa gagacacaag gagttctgag 360
tatggtatta taagtgcagt gagttgggat gaaacagaga gatagaggga atactcctat 420
ttatcaatga acgtatacag acatacccca gcagcgttcc tggcggtatt gtaaaagggc 480
cgtaccttgg agatcaagtg atgagacacc cgtgatgcag gaactccact tcaatccaat 540
gacgcatcga gttgctccct gattggttga tacgcaggtc gctccgcaac cggtccgcat 600
cacctcactt ccctccccca gacctggagg tacctctccc gtccttctct ccctctccat 660
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aatagagtat tgctagtttt cttttgattt cgtctgttga ggtgctgctt ttttgtcgcc 780
gttgtcgccc accatg 796
<210> 129
<211> 572
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 129
atgtattcta accaattcaa taaaaagcat tattttataa tacagtcaca tagtcaaagg 60
aatatccagc aatggaactc tcaccttagt gtatcttgtt caaaatagcc caagcttagg 120
tcactttgaa ttttgaaagc gttctagaac tactaatctg tcggctgacg tcatggtgtt 180
agcccctccc ccactttaac acaactgtag tagtatttac ttaccctaaa gtactactag 240
tggtagtaac tagtagtacc cgccgattca gcatcgtcgg gtcattggcc cgccaaacta 300
tgagccattg aatccaagtt cttcctatgt ccttggatca tgacgacgtc acctaacgcc 360
ttgtctttcc cttgcactaa gtgacggcaa caacatgtga cctgtttcct gagctttaga 420
aaaggcccgt cctgttccac aaaccaactt gttcaaaaga acactcagat ttgattgagt 480
tttactatca gctcagatcg cctccaacat caatcagacc tttatttgat ttcgactgta 540
gactaggctc ctactcgcac tttgacacca tg 572
<210> 130
<211> 524
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 130
ccatcctaat acgactcact atagggctcg agcggccgcc cgggcagggt ctgaggcggg 60
gcgaagaaac ccctctttgt tattgttgag tgattatctg tttagttagg aaggagggtc 120
ctagagggat ccaggaacag gtaatgctaa gaaattgtct attcgctttc gctcgcattc 180
ttagccattc ttccacccgc cgatccgcta ttcaaaaata gccgttctat tctctttttc 240
ttcggaaaat actttctgcc ttctagcacc agccatccac atcataatta cttgccgtca 300
catgttgatg acgactcccc actgtggctg tgcaacgtgc ccctctctcc cacgtcatct 360
gtggctcgac tgctccgctc aaataaatac tcctgaattg ttcttccatt cctataactc 420
tctattattt caattgcacc ccctgctgat ataccgatct tgatatattc tctaccgaaa 480
accacattcc atcgtcacca tgtctgaacg cagcacagtc catg 524
<210> 131
<211> 1000
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 131
tccttggaag agctctcaaa catacttgca gaatacaggg tgcagactcc actcattcgc 60
ctcatttttc gacaccattg tgccttcgtc ccccgatggc gtccacccat ggaacctgag 120
cgttaattcc tgggtggact aatcactccg aaaggtccct ttttggggat ccattaccct 180
cttaccgcca taccccaggt cttgcgaccg cgctaatcgg gagcgatcga cgcgcggcac 240
ctcctcagta aagctgtgtc atcattgtaa attaccgtat cccggttgca tcatcctccg 300
ctgcccttgc ctgcttgggg gatcgaccta ttaagcccag ctatcttaca cctgctccca 360
tcctcctctt ctccaactcc tcatccatcc ttcctcctcc ttcttccttt tggtaccttg 420
tccatcgttg actcaccact cgagctatcc ttggaagagc tctcaaacat acttgcagaa 480
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ctgtaccttg tgttagacgt cactcttgtt gcccatcatg 1000
<210> 132
<211> 495
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 132
ggaatacgac tagatacttc agcacacacc atcactccgt acctcactca tatcagccta 60
caatcgccgt actcgaataa agatcttcat tgtcatatgc ttaattagag attcacgcga 120
atgggaggat ctagtattac aataccttta ccccctagaa gataggaaaa cgcgaaaacc 180
atgtatagag gatattataa ccttgcatac ttattatgat caggatttaa gatacataga 240
cgtatgttca cgtgactcgt gtaacaaaat gtccaatcat agtgtctgga tggtgaattt 300
gtgggggggt aatattatat aatctgggat agggccgacg ctctcgctta gccgactttt 360
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tgagtcgcag ctatg 495
<210> 133
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<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 133
taaacaagga cgtgaaaggc gaaaattgga tcctccagat ttcagagaga tccaacaatt 60
tcctagaata gtagttaatg gcggatccat atgttgttgg cagggtcgtc gtgcaggcgg 120
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cataattata tagaccctta gacttcaagc aaagcaaaaa taataatttt atatcgaatc 360
gttccgagtc tacgggcgta agatcgatac gtcaaagcag cgatgttttc ttggggcggg 420
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cacaatcctc tctcctcttc ccacctcccc ccaattacat ctcttcttca gagaaaccac 600
tctcccactc ctctgaaccc cattcacaat g 631
<210> 134
<211> 844
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 134
tctactaaac agattacttt tgaaaaaggc acatcagtat ttaaagcccg aatccttatt 60
aagcgccgaa atcaggcaga taaagccata caggcagata gacctctacc tattaaatcg 120
gcttctaggc gcgctccatc taaatgttct ggctgtggtg tacaggggca taaaattacg 180
cactacccga atcgatagaa ctactcattt ttatatagaa gtcagaattc atggtgtttt 240
gatcatttta aatttttata tggcgggtgg tgggcaactc gcttgcgcgg gcaactcgct 300
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tatg 844
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<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 135
ctgattcata accttgaact ttttttccct tttcttcttc ttcttttttt tccttttctt 60
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agtctgagaa caagggcaag atg 623
<210> 136
<211> 951
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 136
agggctcgag cgcccgcccg ggcaggacta ggtacatcaa cgagatagac gtagatggtg 60
tgaggtgcag agtgatgtaa atgagatggt tggtgtaata ggtgaacagt aggaagaagg 120
tggatgatga caaaagggag agcaaagccc cgcgtcatgg gtagtaccac ggctgataag 180
gtcgtcagtc aagagcggat cacggggtgg aggcggtgag cagccccaca cgtgagtcac 240
gatcagcctt gagccttcag gtgccccaag tcatccattt aatttgattt gatttatgtc 300
atcttcatta aacagatagc tcatggacac acgtcatatt ctcacgtggg gagcctgggt 360
gatgtcccgg tgatatcggg tctatagtgc cctacaaaga tgtactactg aactgagtag 420
ctgtgggtag atgcggtgtc cgcctccacc tgatcagcgg ctagactact ggtgcgcgct 480
gtctccatag agggctcttg ataggctctg ttcctggaac ttgtagtcgg tattacaatc 540
atagtcaagt tccaagagta tatataatcc caattctgtg atgactctca ctcaacttaa 600
tctcattaca agctgcatta tgacaagcca acaactttac atgcatgatc aactcgatgg 660
ccaatcctca acgcaatgca aaccaggcaa actacttatc acagcgtcat ctgactaagc 720
aggaactggg acatgtgcca aacaatgcaa acagcgtata tcccggatat tctgacgacg 780
agtggtccca tacagttcca gtccagagaa ggtaacctca cgattaggct acctctattt 840
cttgagatag gtggagccgt ttgagagagc gtgcacccac tcatatcgtt ccggtaccac 900
ctgatcattc catctatcag ccaattttca attccatctt ataaaactat g 951
<210> 137
<211> 951
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 137
acccaatata ttgaagtgcc acgcattttc atgagtttgg tggcagcttt cttggcacaa 60
agatactaac tgcctttcag gtgaaccgtg aatcagatcc caccgctcga agcttcttga 120
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ccgcatcgat ctccgcccac cgcatgaatc aaatcccatc aatccatcag cagatgagga 600
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cacgataccg atgtagtatc tcggagacgg tggcgaggca accgcctgtg aatgcttcga 780
tatgtccttg aaaatgggta tataaacccc ctcggagtcc ctcgaagagg atttacaatc 840
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tctcaagccg tcttcaaacg accatctttc agaacatcca tcataacaat g 951
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<211> 1200
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 138
acttcgtagg tactgggcgg agttgctgta aatttgtatt attgtttata aatgatcatc 60
gtgatgatct tgatagttgt atctgtaatc ctactcccgg ctacctagta tatattcgtt 120
tagatagagt cactccacta tgaggtcaga aaaaaatttt ttctttctgg tcttgccctc 180
tgttttgaga cagtatcttg gtgcatacca actaacgtct tatcctccgt tgtacagaat 240
acgcaatact cgatacaata ataccgtcgg taacgtcgat gtatcaacaa tgatagtttt 300
gtacagaatg gtgtatggaa gaactacgcg gtggtagata gtaagaaatt ctatgttgta 360
tgcaatatat agatccgcaa ggaggatatt atatactact ctgtaggtac tcttatggta 420
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ggtcaatggc gatggggaag gaagaatccg agggcgaatc aggattggaa ctggaccttg 600
cttattggaa aggtgcgaca cgataagggg ggaaactcag taggaacaac gggctcattc 660
ctgatcagaa gagaaaaaaa caggatttct ttcacctgca cccggtaata atattttccc 720
aatgtgaaaa aataagaggg atcaaaaatg aaaacgattg attaccgtgg tgatacacgt 780
actagtaagg taatttattt ttgtcgtagc aaggagggac caccccggtc tcaggtccac 840
cgtcctcggg ccacgactcc tttcttgcgc tcctggaaag ccaatccttc cttccctctt 900
ctgacgcttt tcttcgccat cccagtctct ccttctcttc ctctcccttt cctctctttt 960
cttgttgtgt caaaacgtgc ctacccaatc tgtgcacatc ctttcgctga aggaaccatc 1020
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ggatcccacc cctctttcaa ctctttgcga ctttgcgcta ctgttatctg gtaatcgata 1140
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<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 139
cttgcgcctt cagctagtat caaaaattta ttttaatccc aaggaggcca tgttgtggac 60
cacaatgccc tcagatccgt ttcaatttga caactttaat tccgattgtg gttctcttgt 120
tccaatctta ttattcttgt ctttttaatc tatcatacgt actccgtact tgttcatcat 180
agagcggcgg atacggtacc agataggtat agtctgatat tgcaaaggga tcgtcgacga 240
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cgtggcgata gggctgcgat gaccccgcca cgaggctcga gtgcccccga tccggtttag 360
cgccatacga ctgatcccgt tggactcgta tggtaccgaa accctcccaa agttgcggtg 420
gaaacctcgc atgaatttat agaaacatag cgtggcgtag tcctccatgt gatcccctga 480
ttggtcgaac catggacgat cccgaaaaac acaacctgcg cctcctcagc gagtgaagtt 540
gatactgtgg acttttttaa cttgggggac tgacgatcat cgggcagccc atcttaaaaa 600
caacgcgatt ctctcccgtc tgacacttcc tgccatctta ttattttatc tattctactc 660
atccacttcc ccttcttttc actcaccgtt cttctatcta tctatctatc tatctccgtt 720
acttcagaca atcccacggg aatttagccc atacatccag acagatccac acatagaaca 780
acttgcacat caacaaatca acatcgtcgt catg 814
<210> 140
<211> 625
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 140
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caaaaagctt actggtagga aaaattggat agtcggcctc gtccctggtg tccttacata 120
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atcttatgat caattgattt acctgtgagg tgtgaatgat aaaagaagcc tgtcagacca 240
ctcttttcct ggttcttcca tctttccggt tgatcgctca gcatagcatc attattgccg 300
gcctaacctc gcatttcctg tcttccccaa ccgccatcca ccggtggaac cccttggggt 360
gtgcaagtaa agagctcccg aattttttta ctcattcgcc ttctcttctt tcgcctctta 420
ccggagcttc cccacccttt tttatttcca tcactttttc ttcctcggtt ctcttgcctc 480
cgtttaaata gtcttcctct tctctccacc tcaccaccgt aactctttca cctatcaaga 540
gggtatccgt caccgtcgac agtctcctcg tcttggttcg ggcatatccg aggtcttcga 600
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<211> 821
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 141
atttatgatt gtattgtgaa tggcgtcact atgtcagcat atctgaccta agcactacta 60
gtatggacca aacaatgtaa gaaataatac tccgtataca aagtatgtta attaacatca 120
gttttctact cttttttttt ccaattttgg gacctgctaa ggggctgcat cagtccaggg 180
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gccactaaga atcgtagtcc ctgtgtttac tttggagcct aggtgcaaga tactgaactt 360
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taacaacaat catgatatta gtggacaaca gccaacatca gtggagactc gttttgtgga 480
gcacaccatc ggtccgaatc ggctaggcgg tggcgccaga aaaagccaag ggctgggtaa 540
ggggtacagc aaaaaaaaaa aggtctcgcc acctcgggac tggaggtcct tgatcgtgca 600
gctttatcca ccaccggctt gtccctgaaa taccgcacac actctcttaa gtttttcaga 660
caaaagtctc tcgccggcgc tccctccctc acaacaaatc ctctcctttc tactttattt 720
cttctctttc cacccgataa ggccctacac atcggtatct attggtaaga caattgcaag 780
cgagccagtc gccctttgag cacaagtctg taaacactat g 821
<210> 142
<211> 590
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 142
aaatttaggg gggcgtaatg tactaatggc cccacgaagc acctgatccg acttcccaaa 60
acagatctag gccccgaggc tgtaccggca atactgtaca attattcgtc ggggatggtg 120
cattgtggcg ctggctgcaa acgtgcaatg gcggacctct attcttggtg gtacctgata 180
ccttaccata ccatctccgg caccccctaa accatgtgca tctaatacag gtacatctcc 240
catacataca tgctgggcct ccaaccgcca ggtgttcact gcttgttata attgatcttt 300
attttcctct cctcctcctc cttttccttt cttcttctgg ttgacatcgt tcgatctgtc 360
aacggccgtt ccctcgaccg attgatctca gtccccatat tcactttaca ctgtcatcgt 420
tatctccctc gtgcgggctt tagaattctt tattccccca cttcctttcg ctttaccccc 480
ccccttatcc ctcggtcact cgttcaaaac aaccatcgcc gccggttcct acaatatacc 540
accatattaa cacttctctc tcttaacttc cgtcccacta tataatcatg 590
<210> 143
<211> 544
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 143
actcagtttc cgttgggcct acttggtgag tggtcgttcc cacaaggtac gtagcgataa 60
aaactcttcc aatgttcacg cgatacatac catgtataga aaactgccgg agccaatgac 120
aatgatagta acgcgttttt gtcatcagtc atttattaat ccttgcaatt ggtcggttaa 180
gggtgaggac cttgtgctag tcgcgaatac aggtaccttg caagacgtct tttttagggc 240
acggatggag tacctttgga gtcggaatgg agaccttgtc tcatagacca atcacaagca 300
cgatgataaa ttatatctct atgtatagct gtgaaccttg ggggtgagta tctataccag 360
tatataaata tttgtacata ggatctggtg attgagagcc ttcttctttt tcttcttctt 420
cttttaaatc ttagctcctt tgtgacttta gccctatgcc acgagactac ttaataacct 480
gccagtatga cgatcaactc gggcccagaa actctcgcct ttcctgtgcc caacaacatc 540
aatg 544
<210> 144
<211> 1091
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 144
actggtaagc agccgccaat gcgcaggtac agtaccaact tacagtgtgc atgtatgtgc 60
atgagtgcag ttcccttcat ctatcttgtg atttccgggg tttatcatct gacacggact 120
ctacgcactt gcagcgtaat gatctcacag ctgatgtcta tcacatgaat aggtgcccag 180
gtatgtactg aactgtaggt aacttggtgc taatactacc gggagtacgg agtatttcgg 240
tcatgaagct tccctagaat aggagaatga aaattacatc caaggtaaaa aaagtacaag 300
tttactaatc agtgctaaga atatgggtat ctttcaccct acctgggaga gagaacaaat 360
aatatataga gcccagcatg ctgatatttt tgtttcctaa agccgataca catacaattg 420
gtacaacctg tagtaaatac gagtagtgag atgcccgtgg gtatttgttt acatcttgag 480
aggtatctgg ggcatgaacc tgggaggttg agaggaattt gagacaagga tcgggacagc 540
tcaaccattt ctgtattgcg gtaatgttgg ggggcacccg atttgctccg ttggctcaac 600
tgaggccaat tacaccgccg gaccacactg ggcctagtgc caggactcag gctagaaaga 660
caccaattag gtttagtgcc tccccaatgt ccccgacgtc ggttttgttt ttgcggtttg 720
agggggaacg gcaactggcc ttaggccgtc gagtgcctag tcgggcctag cacctagtta 780
aacttggagt acgtactccg ggtaatccat cctcgtagac tttatatttc caatctttcc 840
tgttctgttt ggctatcact gcttctcctt ccatctctac tttatcggct atttagatcg 900
ccccctcccc ggtcctccag tgtacacctt tcaaggacta ttccgagcgt ttggagttcg 960
attgaaagcg atcgtccccc cttgacttct ccattgcaaa caacaaccga cttcttctga 1020
tcccttaggc gacgaagccc ccagcatccc ttggtcaggg cccctttcag cgcttcccaa 1080
ggttagagat g 1091
<210> 145
<211> 538
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 145
ctgcttcagg taccggatcg actgaggaca atgcggccgg ggacgtgggt gttcgacttg 60
gcgttgcggt cgggttggcg ctgggagttg cggcattgca actttgaggt ggcatcgttg 120
atatcggaca atgtatattc cactcttgtc aggagagtgt gccgggtcta taatgtattt 180
actaaaattg gtttggattt gattagggaa atttttgatt agggttgcct gatcatatga 240
ttaaattctt cccggatccg agtggtctgt cccgtcagac cattcgggat gtccactcgt 300
cttggcttcg ttccaacaca atggtaaacg ttatataatg catgaaaatc atctgaacgg 360
tgattggaac ttctaaatca cccagcttag gattgtctca acatggagtc cttcaattct 420
actactgccc ttccccaaat ggcttcatat acagacctca tcaagctggc ccatcaaaac 480
cccaacctgt ccagcatgga aaacctctgg gaggcttact actcccattg gaacaatg 538
<210> 146
<211> 568
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 146
ctgttcctca ggaggcttgg aggagaatga aagttggaag tgacgggctt tgaagggaaa 60
aatggatgtg cttgggggtc cttgtggtca agcttaggct catttagaga ggtctcattc 120
attgaaaatt tagcagcttt accccctact gggttccatg tcgtcgcgga atttatggaa 180
ttcattaacg gtgcaggagg attacccgta ccggtgatac ggtaaggagg gaatgggccg 240
tccggcacac gtgacagacc gcctgcctgt cccaaccggc actttgcctt cttcgaactc 300
ctcctccccg tttctctttc ctcttcttgt cctgaaccca aaccctgcga acaaacgcgt 360
tactcgattt ggtcattctt cctccccctc aaaagcatca ttcctctttg ggcatctgtc 420
ttcacttccc ccagataatc cccattacct gcttcttcac attactctat ctttttcttt 480
tctcccttcc cccgtcgttc tacccttgtt ccagccatgg ccgacatcac tgccgtcggt 540
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<210> 147
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<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 147
cccaggagat attgcaccaa ttaaagatcg tacaatcatc cgggggctgc ctcaggtatc 60
aataagggat gccacgggtg gggatccgag ggaatgacat atcaaaccgg gaacagttga 120
aaggccaaga gaattaagta aagtattgag taaagcctga taaaaagatg tcacaatcat 180
cgacctgata ggacactgga actcagttca ttctttgccc tgcgaccact gactcacagg 240
tcatggaaat gttttggtat ttctcttggc ataggggttc atgttcatgt tcatcgggcg 300
gtgatgtgtg cctgaggctt ccaattgcca gtatcagatc cggatggaca tcattggaca 360
cgtagctttt ttcttgtttt atttatccct tccattgact acgagcaaaa atggagaaat 420
ggaacgaagg agactgatag tcagagaaac tatatgtata gccataggca attcaataga 480
tagtggttac aagaagatat gatatctctc tgttgttgac cgggcgatcg gatttaacgg 540
tggcaagtca taatcgtgct gccgaccctc acccgcattg gccgcgaaaa gttttcgggt 600
tgcgactagt gccgacgcca tccctttcaa atcctctcct cccggattca atttctttcc 660
atctcaatcc ctgctgagct tcaattgctt gacatttccc tcccatctcc ccactcctct 720
cttccctttt tctttttgtg tttagagcag agtacgactc ttcatataat ataatg 776
<210> 148
<211> 816
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 148
atccccagac ggcacttcag tatgtggagc aggctacgga gattctactg ctacctacat 60
ttgatgagat gctcctcaac tatcagatgt tcccggacgc tgttcccaag cagcttggtg 120
acgcagcatt ggagagcatg gtgagtaata aatgcccctt ttcgtttctt tcgcaatgat 180
tactgggtat acgttacaga aaagcactcc taacgctctc atcagaatct cagtgggcgg 240
actgttcgac gactacctgc tttgtcttta gtgttgtata gtaagcgtgc ccgatgtaat 300
actcgggagg ccgtccatgc tttgcgtacg gggattatgt cggaaattca agccaaggcg 360
gaagcacaat gaagggcaag accacacaga agaagaggac gtggggtatg agattctcat 420
atcagcaatt ggcgtaggac atgggtcaat aagatcttca agaatgcagt acaagaaaga 480
gagacgaatt tcgaacaggt aatggcatca ttgtagttgt cgggtttgtt tggctgtcat 540
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tccattgatc agagggttct tgatatcatc agtatg 816
<210> 149
<211> 674
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae
<400> 149
taaataatta tgcttgcgat ttatgtcggg tatttgggat agactcatgc attattagag 60
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tctcaaaata gaccaggttg tagctctatc atagataaaa tatttgtatt ttcttcttag 240
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cagttgacgt ggttcactgg gaaggtgaag aagtaatcat tacagtttga gcttattggg 360
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gatgacggca tagccgccct aggcatcagc atcacgggac ttagcggctt ttaccggcaa 480
ccgagcaaca gccaatcagg gagagcggct tttcccgtgg tttccttgtt gtttgggact 540
caaccttcaa cctcgctttt ccccaatcgc tttcctccct tcttctcccc tcaccgtttc 600
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tcacattcat aatg 674
<210> 150
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 150
ccccccgggt gaagggtgga gagtatatg 29
<210> 151
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 151
ggggaattct agtggtttga acacttcg 28
<210> 152
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 152
aaagtcgaca tgttacgtcc tgtagaaac 29
<210> 153
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 153
ccccccgggt cattgtttgc ctccctgctg 30
<210> 154
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 154
gggaagctta acaggcccca aattcaatta 30
<210> 155
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 155
gggaagcttt ggatttccta cgtcttcaat 30
<210> 156
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 156
aacctgcagg ctgaacgctc atggacgagg 30
<210> 157
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 157
aacctgcagg atcagactat ggtggttagt 30
<210> 158
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 158
aacctgcagg atcatcactc aggaggaata 30
<210> 159
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 159
aacctgcagg acccgcactc cctttattac 30
<210> 160
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 160
aacctgcagg attcaagcaa ggcagtgtct cag 33
<210> 161
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 161
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<210> 162
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 162
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<210> 163
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 163
aacctgcagg atttcaacta tttcccttct attt 34
<210> 164
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 164
aacctgcagg ctgggtccat tagcaaaatt gaac 34
<210> 165
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 165
aacctgcagg ttattcttag caaaacgctg 30
<210> 166
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 166
aacctgcagg atcctgacca agaggttacg 30
<210> 167
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 167
aacctgcagg catactaaag gggacaagaa ctg 33
<210> 168
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 168
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<210> 169
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 173
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<210> 174
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<210> 175
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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aacctgcagg aaagggaagg cccaatggcc 30
<210> 176
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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aacctgcagg aacgaggtcc ttcgacatag 30
<210> 177
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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aacctgcagg atcagggtca gtctgcggca 30
<210> 178
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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Synthesized Primer Sequence
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<211> 34
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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aacctgcagg tgacgtagct tgaaaaatag caac 34
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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aacctgcagg ttttaagtgt agaagataga acag 34
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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Synthesized Primer Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<211> 30
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<211> 30
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<211> 30
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<210> 190
<211> 30
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 190
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<210> 191
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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Synthesized Primer Sequence
<400> 191
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<211> 30
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<213> Artificial Sequence
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Synthesized Primer Sequence
<400> 192
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<210> 193
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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aacctgcagg actaacagac ggagccgact 30
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<211> 30
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 194
aacctgcagg actacgctat gctcgccaag 30
<210> 195
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<210> 196
<211> 30
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<213> Artificial Sequence
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Synthesized Primer Sequence
<400> 196
aacctgcagg ttgtgccaag tgagagcatc 30
<210> 197
<211> 30
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<213> Artificial Sequence
<220>
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Synthesized Primer Sequence
<400> 197
aacctgcagg gaatggtgga gcggaacgtt 30
<210> 198
<211> 30
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 198
aacctgcagg agagcatctt ttctccgccg 30
<210> 199
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 199
aacctgcagg tccatcctaa tacgactcac 30
<210> 200
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 200
aacctgcagg ttctcctgca caaattttag 30
<210> 201
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 201
aacctgcagg ggagagctca ccagtagatc 30
<210> 202
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 202
aacctgcagg cgaagagggg tccgtatatc 30
<210> 203
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 203
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<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 204
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<210> 205
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 205
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<211> 30
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 207
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 208
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 209
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 210
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 212
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 214
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<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 215
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 217
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<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 220
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 221
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 223
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 224
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<213> Artificial Sequence
<220>
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Synthesized Primer Sequence
<400> 226
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 228
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<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 229
aacctgcagg taaataatta tgcttgcgat 30
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 232
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 233
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 234
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 235
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 236
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 246
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 247
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 249
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 250
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 251
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<210> 252
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 252
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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<210> 254
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 254
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<210> 255
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 255
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 256
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 257
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 258
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<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 259
catctcgagc atcttcttac ggtcaacac 29
<210> 260
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 260
catgtcgacc atcttgacgg cttttctct 29
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 261
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 262
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 263
catgtcgacc atgtttgctg tttcgaggg 29
<210> 264
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 264
catgtcgacc attgcgccag cgtgggaac 29
<210> 265
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 265
catctcgagc attgggggtt catgattcg 29
<210> 266
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 266
catgtcgacc atgattgcgt ttctgttgg 29
<210> 267
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 267
catctcgagc atgtcggcgg tgttggtgg 29
<210> 268
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 268
catgtcgacc attttgagag ttggaggtg 29
<210> 269
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 269
catgtcgacc atgatggcgg tggcgaata 29
<210> 270
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 270
catctcgagc attttggcgt attagttgt 29
<210> 271
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 271
catgtcgacc atgatgaggg atgtgagtt 29
<210> 272
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 272
catgtcgacc atgatgtgta gtgtagagt 29
<210> 273
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 273
catgtcgacc atatcgaatc atgggctca 29
<210> 274
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 274
catgtcgacc attgtgtggg aggtcgtgc 29
<210> 275
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 275
catgtcgacc atcctagaat cccaaggtt 29
<210> 276
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 276
catgtcgacc atcattttga tcggacctg 29
<210> 277
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 277
catctcgagc atccccgctc aaggaaaac 29
<210> 278
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 278
catgtcgacc atcttgggcg gattatgtt 29
<210> 279
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 279
catgtcgacc atgatggacg gtgtagggg 29
<210> 280
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 280
catgtcgacc attttggcgg tttttttttg tg 32
<210> 281
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 281
catgtcgacc attgtgaaga aggatgaag 29
<210> 282
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 282
catgtcgacc atggtgggcg acaacggcg 29
<210> 283
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 283
catgtcgacc atggtgtcaa agtgcgagt 29
<210> 284
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 284
catgtcgacc atggactgtg ctgcgttca 29
<210> 285
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 285
catgtcgacc atgatgggca acaagagtg 29
<210> 286
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 286
catgtcgacc atagctgcga ctcaggtct 29
<210> 287
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 287
catgtcgacc attgtgaatg gggttcaga 29
<210> 288
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 288
catgtcgacc ataaatgcct tctgtgggg 29
<210> 289
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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Synthesized Primer Sequence
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catgtcgacc atcttgccct tgttctcag 29
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<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 290
catgtcgacc atagttttat aagatggaa 29
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<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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catgtcgacc attgttatga tggatgttc 29
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<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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catgtcgacc attgttatgt gatttcttc 29
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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Synthesized Primer Sequence
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catgtcgacc atgacgacga tgttgattt 29
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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catctcgagc atgatgtcgg tgtttttcg 29
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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catgtcgacc atagtgttta cagacttgt 29
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
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Synthesized Primer Sequence
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catgtcgacc atctctaacc ttgggaagc 29
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<213> Artificial Sequence
<220>
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Synthesized Primer Sequence
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catgtcgacc attgttccaa tgggagtag 29
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<211> 29
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<213> Artificial Sequence
<220>
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Synthesized Primer Sequence
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catgtcgacc atcctgggta ggagaaggg 29
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 301
catgtcgacc attatattat atgaagagt 29
<210> 302
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 302
catgtcgacc atactgatga tatcaagaa 29
<210> 303
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Artificially
Synthesized Primer Sequence
<400> 303
catgtcgacc attatgaatg tgagaggag 29
【図面の簡単な説明】
【図1】 レポーター遺伝子アッセイ用プラスミドpPRO
-GUSの構造を示す図である。
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(51)Int.Cl.7 識別記号 FI テーマコート゛(参考)
C12P 21/02 C12N 5/00 A
(72)発明者 町田 雅之
茨城県つくば市東1−1−1 独立行政法
人産業技術総合研究所つくばセンター内
(72)発明者 佐野 元昭
茨城県つくば市東1−1−1 独立行政法
人産業技術総合研究所つくばセンター内
Fターム(参考) 4B024 AA20 CA01 FA02 HA01
4B064 AG01 CA19 CC24
4B065 AB01 BA02 CA24