JP2003104906A - 抗癌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】優れた抗癌剤を提供する。 【解決手段】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドま
たはその塩は、優れたＣＴＬ誘導作用を有している。Ｍ
１６１抗原もしくはその部分ペプチドまたはその塩と癌
抗原とを組み合わせて用いることにより、癌を効率良く
予防・治療することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、Ｍ１６１抗原もし
くはその部分ペプチドをまたはその塩を含有するＣＴＬ
誘導剤、Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドをまた
はその塩を用いる癌の予防・治療方法などに関する。

【０００２】

【従来の技術】免疫系は、自己と非自己を識別し、外界
の攻撃から自己を守るべく発達・進化してきた生体防御
系である。系統発生的により primitive な基本免疫系
（innate immunity）と、多様性のあるリンパ球を中心
とする獲得免疫系（acquired immunity）から成り立っ
ている。基本免疫系は、自己にはない糖やリピドを認識
する系で、補体系、マクロファージ、樹状細胞、NK細胞
などがこれに含まれる。一方、獲得免疫系は、ペプチド
を認識する系で、リンパ球がエフェクター細胞である。
この両者は、独立して働くのではなく、基本免疫系から
のシグナル、すなわちサイトカインの産生や副刺激分子
の発現、抗原提示などによってリンパ球の活性化が誘導
される。この基本免疫系による一次応答がリンパ球によ
る選択的な二次応答の誘導に非常に重要であることが近
年提示されたことにより、基本免疫系の異物認識機構と
活性化機構が非常に注目を浴びるようになってきた（サ
イエンス（Science）２７２,５０，１９９６）。基本免
疫系の活性化は、病原微生物やウイルス感染防御のみで
なく抗腫瘍免疫においても重要であり、活性化に関わる
種々の因子の同定や機能解析がなされている。Ｍ１６１
抗原は分子量約４３ｋＤａの糖鎖をもたない膜蛋白質で
ある。ｃＤＮＡ解析より、Ｍ１６１抗原は２４個のアミ
ノ酸からなるシグナルペプチドを含む４２８個のアミノ
酸から構成された可溶型蛋白質であることが示唆された
が（ネイチャー・メディシン（Nature Medicine）３，
１１巻，１２６６，１９９７）、ｃＤＮＡをプローブと
したサザンハイブリダイゼーションと遺伝子クローニン
グの結果、Mycoplasma fermentans の遺伝子産物で、
Ｎ末端システイン残基がパルミチン酸で修飾されたリポ
プロテインであることが明らかとなった（ジャーナル・
オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol. Che
m.）２７３，１２４０７，１９９８）。すなわち、Ｍ１
６１抗原遺伝子には原核生物特有のプロモーター領域と
リボソーム結合部位のシャインダルガーノ配列が存在
し、シグナルシークエンスには、原核生物のリポプロテ
イン特有のシグナル配列（ＡＶＳＣ）が存在することが
明らかとなった。Ｍ１６１抗原遺伝子は、M. fermentan
s の遺伝子産物である monocyte differentiation / ac
tivation factor P48 の遺伝子（621bp）と塩基配列
で９９％の一致を示す。しかし、アミノ酸レベルでは、
Ｎ末端１１４アミノ酸が９７％の一致を示すにもかかわ
らず、Ｃ末端アミノ酸は全く異なっており、一次構造
上、両者は異なる分子である。

【０００３】Ｍ１６１抗原は補体Ｃ３の活性化能を有し
ている他、サイトカイン誘導活性を有しており、ＴＨＰ
−１細胞、レチノイン酸で処理してマクロファージ化し
たＴＨＰ−１細胞、ヒト monocytes からＩＬ−１β、
ＴＮＦ−β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８の産生を
誘導する。さらに、天然Ｔ細胞からＴｈ１／Ｔｈ２の分
化に影響を及ぼすサイトカインであるＩＬ−１０とＩＬ
−１２の産生もヒト monocytes において誘導する。M.
fermentans 由来の生理活性分子としては、これまでに
ＭＡＬＰ−２とＰ４８が報告されている。ＭＡＬＰ−２
は、２モルのパルミチン酸がＮ末端システイン残基に結
合した１４個のアミノ酸からなるリポペプチドで、マウ
スマクロファージに作用しＮＯ⁻産生を誘導する（ジャ
ーナル・エクスペアリメンタル・メディスン（J. Exp.
Med.）１８５，１９５１，１９９７）。１４個のアミノ
酸は、Ｍ１６１抗原のＮ末端アミノ酸と同一である。最
近、ＭＡＬＰ−２のもとの分子ＭＡＬＰ−４０４が同定
され、Ｍ１６１抗原と同一であることが明らかとなっ
た。一方、Ｐ４８は１６１個のアミノ酸からなる分子量
４８ｋＤａの蛋白質で、Ｎ末端９０個のアミノ酸がＭ１
６１抗原と相同しており、ヒトmonocytes や myelomono
cytic cell line に作用し炎症性サイトカイン（ＩＬ−
１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６)の産生を誘導する。さら
に、Ｍ１６１抗原は、未成熟樹状細胞の成熟化を誘導す
る。樹状細胞は、professional な抗原提示細胞といわ
れ、リンパ球の活性化に最も重要な細胞である。骨髄に
存在する前駆細胞から、サイトカインの刺激で分化し未
成熟樹状細胞（ｉＤＣ）となり各臓器に分布する。抗原
貪食後、成熟樹状細胞（ｍＤＣ）となり、リンパ節へと
移行しリンパ球に抗原を提示する。ｉＤＣは抗原の貪食
能が高く、costimulator は表現しておらずリンパ球を
活性化しない。一方、ｍＤＣは貪食能がなく、ＣＤ８
０、ＣＤ８６、ＣＤ８３といったcostimulatorを発現
し、リンパ球を活性化する。ｉＤＣからｍＤＣへの移行
には、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＣＤ４０Ｌといった生
体内分子あるいはＬＰＳＢＣＧ−ＣＷＳといった微生物
の構成成分による刺激が必要である。末梢血単球からＧ
Ｍ−ＣＳＦとＩＬ−４で分化させた未成熟樹状細胞を精
製Ｍ１６１抗原で刺激すると、成熟化のマーカーである
ＣＤ８３とＣＤ８６の発現とＩＬ−１２Ｐ４０の産生が
誘導されることから、Ｍ１６１抗原は樹状細胞の成熟化
を誘導しうることが明らかとなった。

【０００４】マイコプラズマはウイルスと細菌の中間に
属する微生物で、細胞壁をもっていないことが特徴であ
る。Ｍ１６１抗原の発現は、すべてのマイコプラズマ種
に見られるものではなく、M. fermentans に特異的であ
る。M. fermentans はヒトに細胞内寄生感染するが、そ
れ自身の病原性は報告されていない。最近、ＡＩＤＳ発
症を促進する cofactor ではないかと報告されており、
患者の末梢血からＤＮＡが検出されるが、この点は明ら
かではない。ホモロジーサーチにより、Ｍ１６１抗原の
特定のアミノ酸領域でホモロジーの高い分子が見い出さ
れる。これらは、Borreria、Treponema、Listeriaなど
のリポプロテインで、いずれもＮ末端システイン残基に
脂質が結合しており、免疫系を活性化する（Matsumoto
M. and Seya T., インターナショナル・ジャーナル・オ
ブ・モレキュラー・メディシン（Int. J. Mol. Med.）
３：２９１−２９５，１９９９）。このようなバクテリ
ア由来の分子を認識し、シグナルを細胞内へ伝達する分
子であるヒトの Toll ホモローグ（ＴＬＲ４）が、１９
９７年に Janeway らによってクローニングされた（ネ
イチャー（Nature）３８８，３９４，１９９７）。Toll
の細胞外はロイシンリッチリピートからなり細胞内はＩ
Ｌ−１Ｒのシグナリングドメインと共通で、サイトカイ
ンの産生や副刺激分子の発現を誘導する。Toll 様分子
は、植物や昆虫にも広く見い出されており、非常に基本
的な生体防御分子のひとつと考えられる。Drosophila
では最初に、背・腹決定に必須の分子として同定され、
その後、細菌感染時の抗真菌ペプチドの誘導に関与する
ことが明らかとなっている。Toll からのシグナルは、
ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６を経てＮＦ−ｋＢへ
とつながり、標的遺伝子の発現を誘導する。ヒト／マウ
スでは、Toll like receptor (TLR)は報告されているも
ので６種類あり、そのうちＴＬＲ−４がＬＰＳやlipote
ichoic acidsを、TLR-2が peptidoglycan やlipoprotei
n を認識し、シグナルを伝えることがノックアウトマウ
スを用いた解析で示されている（イムニティー（Immuni
ty）１１，４４３，１９９９）。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、優れた癌の
予防・治療剤などを提供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意研究を行った結果、（１）Ｍ１６
１抗原が予想外にも優れたＣＴＬ誘導作用を有するこ
と、（２）Ｍ１６１抗原と癌抗原とを併用することによ
り予想外にも癌を効率良く予防・治療できることを見出
した。本発明者らは、これらの知見に基づいて、さらに
検討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。

【０００７】すなわち、本発明は、（１）Ｍ１６１抗原
もしくはその部分ペプチドまたはその塩を含有してなる
ＣＴＬ誘導剤、（２）哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗原
もしくはその部分ペプチドまたはその塩の有効量を投与
することを特徴とするＣＴＬ誘導方法、（３）ＣＴＬ誘
導剤を製造するためのＭ１６１抗原もしくはその部分ペ
プチドまたはその塩の使用、（４）Ｍ１６１抗原もしく
はその部分ペプチドまたはその塩を含有してなるTh1細
胞誘導剤、（５）哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗原もし
くはその部分ペプチドまたはその塩の有効量を投与する
ことを特徴とするTh1細胞誘導方法、（６）Th1細胞誘導
剤を製造するためのＭ１６１抗原もしくはその部分ペプ
チドまたはその塩の使用、（７）Ｍ１６１抗原もしくは
その部分ペプチドまたはその塩と癌抗原とを組み合わせ
て成る医薬、（８）抗癌剤である前記（７）記載の医
薬、（９）サイトカイン誘導剤である前記（７）記載の
医薬、（１０）未成熟樹状細胞の成熟化誘導剤である前
記（７）記載の医薬、（１１）貧食促進剤である前記
（７）記載の医薬、（１２）ＣＴＬ誘導剤である前記
（７）記載の医薬、（１３）Th1細胞誘導剤である前記
（７）記載の医薬、（１４）哺乳動物に対して、Ｍ１６
１抗原もしくはその部分ペプチドまたはその塩の有効量
と癌抗原の有効量とを組み合わせて投与することを特徴
とする癌の予防・治療方法、（１５）哺乳動物に対し
て、Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドまたはその
塩の有効量と癌抗原の有効量とを組み合わせて投与する
ことを特徴とするサイトカイン誘導方法、（１６）哺乳
動物に対して、Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチド
またはその塩の有効量と癌抗原の有効量とを組み合わせ
て投与することを特徴とする未成熟樹状細胞の成熟化誘
導方法、（１７）哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗原もし
くはその部分ペプチドまたはその塩の有効量と癌抗原の
有効量とを組み合わせて投与することを特徴とする貧食
促進方法、（１８）哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗原も
しくはその部分ペプチドまたはその塩の有効量と癌抗原
の有効量とを組み合わせて投与することを特徴とするＣ
ＴＬ誘導方法、（１９）哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗
原もしくはその部分ペプチドまたはその塩の有効量と癌
抗原の有効量とを組み合わせて投与することを特徴とす
るTh1細胞誘導方法、（２０）抗癌剤を製造するための
Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドまたはその塩お
よび癌抗原の使用、（２１）サイトカイン誘導剤を製造
するためのＭ１６１抗原もしくはその部分ペプチドまた
はその塩および癌抗原の使用、（２２）未成熟樹状細胞
の成熟化誘導剤を製造するためのＭ１６１抗原もしくは
その部分ペプチドまたはその塩および癌抗原の使用、
（２３）貧食促進剤を製造するためのＭ１６１抗原もし
くはその部分ペプチドまたはその塩および癌抗原の使
用、（２４）ＣＴＬ誘導剤を製造するためのＭ１６１抗
原もしくはその部分ペプチドまたはその塩および癌抗原
の使用、（２５）Th1細胞誘導剤を製造するためのＭ１
６１抗原もしくはその部分ペプチドまたはその塩および
癌抗原の使用、（２６）Ｍ１６１抗原もしくはその部分
ペプチドと癌抗原との融合蛋白質またはその塩、（２
７）Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドのＣ末端に
癌抗原を連結した前記（２６）記載の融合蛋白質、（２
８）Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドと癌抗原と
を連結させることを特徴とする前記（２６）記載の融合
蛋白質またはその塩の製造法、（２９）前記（２６）記
載の融合蛋白質またはその塩を含有してなる医薬、（３
０）抗癌剤である前記（２９）記載の医薬、（３１）サ
イトカイン誘導剤である前記（２９）記載の医薬、（３
２）未成熟樹状細胞の成熟化誘導剤である前記（２９）
記載の医薬、（３３）貧食促進剤である前記（２９）記
載の医薬、（３４）ＣＴＬ誘導剤である前記（２９）記
載の医薬、（３５）Th1細胞誘導剤である前記（２９）
記載の医薬、（３６）哺乳動物に対して、前記（２６）
記載の融合蛋白質またはその塩の有効量を投与すること
を特徴とする癌の予防・治療方法、（３７）哺乳動物に
対して、前記（２６）記載の融合蛋白質またはその塩の
有効量を投与することを特徴とするサイトカイン誘導方
法、（３８）哺乳動物に対して、前記（２６）記載の融
合蛋白質またはその塩の有効量を投与することを投与す
ることを特徴とする未成熟樹状細胞の成熟化誘導方法、
（３９）哺乳動物に対して、前記（２６）記載の融合蛋
白質またはその塩の有効量を投与することを特徴とする
貧食促進方法、（４０）哺乳動物に対して、前記（２
６）記載の融合蛋白質またはその塩の有効量を投与する
ことを特徴とするＣＴＬ誘導方法、（４１）哺乳動物に
対して、前記（２６）記載の融合蛋白質またはその塩の
有効量を投与することを特徴とするTh1細胞誘導方法、
（４２）抗癌剤を製造するための前記（２６）記載の融
合蛋白質またはその塩の使用、（４３）サイトカイン誘
導剤を製造するための前記（２６）記載の融合蛋白質ま
たはその塩の使用、（４４）未成熟樹状細胞の成熟化誘
導剤を製造するための前記（２６）記載の融合蛋白質ま
たはその塩の使用、（４５）貧食促進剤を製造するため
の前記（２６）記載の融合蛋白質またはその塩の使用、
（４６）ＣＴＬ誘導剤を製造するための前記（２６）記
載の融合蛋白質またはその塩の使用、（４７）Th1細胞
誘導剤を製造するための前記（２６）記載の融合蛋白質
またはその塩の使用、（４８）Ｍ１６１抗原もしくはそ
の部分ペプチドまたはその塩および癌抗原を用いること
を特徴とする抗癌作用を有する物質のスクリーニング方
法，（４９）前記（４８）記載のスクリーニング方法で
得られる抗癌作用を有する物質、（５０）前記（４８）
記載のスクリーニング方法で得られる抗癌作用を有する
物質を含有してなる医薬、（５１）Ｍ１６１抗原もしく
はその部分ペプチドまたはその塩および癌抗原を用いる
ことを特徴とするＭ１６１抗原もしくはその部分ペプチ
ドまたはその塩の活性を増強する物質のスクリーニング
方法、（５２）前記（５１）記載のスクリーニング方法
で得られるＭ１６１抗原もしくはその部分ペプチドまた
はその塩の活性を増強する物質、（５３）前記（５１）
記載のスクリーニング方法で得られるＭ１６１抗原もし
くはその部分ペプチドまたはその塩の活性を増強する物
質を含有してなる医薬、（５４）Ｍ１６１抗原もしくは
その部分ペプチドまたはその塩および癌抗原を用いるこ
とを特徴とするサイトカインの誘導を促進する物質のス
クリーニング方法、（５５）前記（５４）記載のスクリ
ーニング方法で得られるサイトカインの誘導を促進する
物質、（５６）前記（５４）記載のスクリーニング方法
で得られるサイトカインの誘導を促進する物質を含有し
てなる医薬、（５７）Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペ
プチドまたはその塩および癌抗原を用いることを特徴と
するＣＴＬの誘導を促進する物質のスクリーニング方
法、（５８）前記（５７）記載のスクリーニング方法で
得られるＣＴＬの誘導を促進する物質、（５９）前記
（５７）記載のスクリーニング方法で得られるＣＴＬの
誘導を促進する物質を含有してなる医薬、（６０）Ｍ１
６１抗原もしくはその部分ペプチドまたはその塩および
癌抗原を用いることを特徴とするTh1細胞の誘導を促進
する物質のスクリーニング方法、（６１）前記（６０）
記載のスクリーニング方法で得られるTh1細胞の誘導を
促進する物質、（６２）前記（６０）記載のスクリーニ
ング方法で得られるTh1細胞の誘導を促進する物質を含
有してなる医薬、（６３）さらに未成熟樹状細胞を用い
ることを特徴とする前記（４８）、（５１）、（５
４）、（５７）または（６０）記載のスクリーニング方
法、（６４）Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドま
たはその塩、癌抗原および未成熟樹状細胞を用いること
を特徴とする未成熟樹状細胞の成熟化を誘導する物質の
スクリーニング方法、（６５）前記（６４）記載のスク
リーニング方法で得られる未成熟樹状細胞の成熟化を誘
導する物質、（６６）前記（６４）記載のスクリーニン
グ方法で得られる未成熟樹状細胞の成熟化を誘導する物
質を含有してなる医薬、（６７）Ｍ１６１抗原もしくは
その部分ペプチドまたはその塩、癌抗原および未成熟樹
状細胞を用いることを特徴とする貪食を促進する物質の
スクリーニング方法、（６８）前記（６７）記載のスク
リーニング方法で得られる貪食を促進する物質、（６
９）前記（６７）記載のスクリーニング方法で得られる
貪食を促進する物質を含有してなる医薬、（７０）前記
（２６）記載の融合蛋白質またはその塩を用いることを
特徴とする当該融合蛋白質またはその塩の作用を増強す
る物質のスクリーニング方法、（７１）前記（７０）記
載のスクリーニング方法で得られる、前記（２６）記載
の融合蛋白質またはその塩の作用を増強する物質、（７
２）前記（７０）記載のスクリーニング方法で得られ
る、前記（２６）記載の融合蛋白質またはその塩の作用
を増強する物質を含有してなる医薬、（７３）前記（２
６）記載の融合蛋白質またはその塩を用いることを特徴
とするサイトカインの誘導を促進する物質のスクリーニ
ング方法、（７４）前記（７３）記載のスクリーニング
方法で得られる、サイトカインの誘導を促進する物質、
（７５）前記（７３）記載のスクリーニング方法で得ら
れる、サイトカインの誘導を促進する物質を含有してな
る医薬、（７６）前記（２６）記載の融合蛋白質または
その塩を用いることを特徴とするＣＴＬの誘導を促進す
る物質のスクリーニング方法、（７７）前記（７６）記
載のスクリーニング方法で得られる、ＣＴＬの誘導を促
進する物質、（７８）前記（７６）記載のスクリーニン
グ方法で得られる、ＣＴＬの誘導を促進する物質を含有
してなる医薬、（７９）前記（２６）記載の融合蛋白質
またはその塩を用いることを特徴とするTh1細胞の誘導
を促進する物質のスクリーニング方法、（８０）前記
（７９）記載のスクリーニング方法で得られる、Th1細
胞の誘導を促進する物質、（８１）前記（７９）記載の
スクリーニング方法で得られる、Th1細胞の誘導を促進
する物質を含有してなる医薬、（８２）前記（２６）記
載の融合蛋白質またはその塩および未成熟樹状細胞を用
いることを特徴とする未成熟樹状細胞の成熟化を誘導す
る物質のスクリーニング方法、（８３）前記（８２）記
載のスクリーニング方法で得られる、未成熟樹状細胞の
成熟化を誘導する物質、（８４）前記（８２）記載のス
クリーニング方法で得られる、未成熟樹状細胞の成熟化
を誘導する物質を含有してなる医薬、（８５）前記（２
６）記載の融合蛋白質またはその塩および未成熟樹状細
胞を用いることを特徴とする貪食を促進する物質のスク
リーニング方法、（８６）前記（８５）記載のスクリー
ニング方法で得られる、貪食を促進する物質、（８７）
前記（８５）記載のスクリーニング方法で得られる、貪
食を促進する物質を含有してなる医薬、（８８）Ｍ１６
１抗原もしくはその部分ペプチドまたはその塩および癌
抗原を用いることを特徴とするＴＬＲ２を活性化させる
物質のスクリーニング方法、（８９）前記（８８）記載
のスクリーニング方法で得られる、ＴＬＲ２を活性化さ
せる物質、（９０）前記（８８）記載のスクリーニング
方法で得られる、ＴＬＲ２を活性化させる物質を含有し
てなる医薬、（９１）Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペ
プチドまたはその塩および癌抗原を用いることを特徴と
する（１）Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドまた
はその塩と（２）ＴＬＲ２および／またはβ２インテグ
リンとの結合性を変化させる物質のスクリーニング方
法、（９２）前記（９１）記載のスクリーニング方法で
得られる、（１）Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチ
ドまたはその塩と（２）ＴＬＲ２および／またはβ２イ
ンテグリンとの結合性を変化させる物質、（９３）前記
（９１）記載のスクリーニング方法で得られる、（１）
Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドまたはその塩と
（２）ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンとの結
合性を変化させる物質を含有してなる医薬、（９４）前
記（２６）記載の融合蛋白質またはその塩を用いること
を特徴とする（１）前記（２６）記載の融合蛋白質また
はその塩と（２）ＴＬＲ２および／またはβ２インテグ
リンとの結合性を変化させる物質のスクリーニング方
法、（９５）前記（９４）記載のスクリーニング方法で
得られる、（１）前記（２６）記載の融合蛋白質または
その塩と（２）ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリ
ンとの結合性を変化させる物質、（９６）前記（９４）
記載のスクリーニング方法で得られる、（１）前記（２
６）記載の融合蛋白質またはその塩と（２）ＴＬＲ２お
よび／またはβ２インテグリンとの結合性を変化させる
物質を含有してなる医薬、（９７）哺乳動物のＴＬＲ２
および／またはβ２インテグリンを活性化することを特
徴とする癌の予防・治療方法、（９８）哺乳動物に対し
て、ＴＬＲ２に対するリガンドまたはアゴニストの有効
量および／またはβ２インテグリンに対するリガンドま
たはアゴニストの有効量を投与することを特徴とする癌
の予防・治療方法、（９９）（１）Ｍ１６１抗原もしく
はその部分ペプチドまたはその塩、（２）癌抗原および
（３）他の抗癌剤とを組み合わせてなる医薬、（１０
０）哺乳動物に対して、（１）Ｍ１６１抗原もしくはそ
の部分ペプチドまたはその塩、（２）癌抗原および
（３）他の抗癌剤とを組み合わせて有効量を投与するこ
とを特徴とする癌の予防・治療方法、（１０１）抗癌性
併用剤を製造するための（１）Ｍ１６１抗原もしくはそ
の部分ペプチドまたはその塩、（２）癌抗原および
（３）他の抗癌剤の使用、（１０２）Ｍ１６１抗原もし
くはその部分ペプチドと癌抗原との融合蛋白質またはそ
の塩と他の抗癌剤とを組み合わせてなる医薬、（１０
３）哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗原もしくはその部分
ペプチドと癌抗原との融合蛋白質またはその塩と他の抗
癌剤とを組み合わせて有効量を投与することを特徴とす
る癌の予防・治療方法、（１０４）抗癌性併用剤を製造
するためのＭ１６１抗原もしくはその部分ペプチドと癌
抗原との融合蛋白質またはその塩と他の抗癌剤の使用、
（１０５）他の抗癌剤がチロシンキナーゼ阻害剤である
前記（９９）または（１０２）記載の医薬、（１０６）
他の抗癌剤がチロシンキナーゼ阻害剤である前記（１０
０）または（１０３）記載の方法、（１０７）他の抗癌
剤がチロシンキナーゼ阻害剤である前記（１０１）また
は（１０４）記載の使用等を提供する。さらに、（１０
８）部分ペプチドが配列番号：１で表されるアミノ酸配
列を有する前記（１）または（４）記載の剤、（１０
９）Ｍ１６１抗原が、配列番号：２で表されるアミノ酸
配列のＮ末端システイン残基のチオール基を介して脂質
が結合したペプチドである前記（１）または（４）記載
の剤、（１１０）部分ペプチドが、配列番号：１で表さ
れるアミノ酸配列のＮ末端システイン残基のチオール基
を介して脂質が結合したペプチドである前記（１）また
は（４）記載の剤、（１１１）脂質が１または２個の炭
素数２〜２４個の飽和脂肪酸である前記（１０９）また
は（１１０）項記載の剤、（１１２）脂質が２個のパル
ミチン酸である前記（１０９）または（１１０）項記載
の剤、（１１３）Ｍ１６１抗原が配列番号：２で表され
るアミノ酸配列を有する前記（７）記載の医薬、（１１
４）部分ペプチドが配列番号：１で表されるアミノ酸配
列を有する前記（７）記載の医薬、（１１５）Ｍ１６１
抗原が、配列番号：２で表されるアミノ酸配列のＮ末端
システイン残基のチオール基を介して脂質が結合したペ
プチドである前記（７）記載の医薬、（１１６）部分ペ
プチドが、配列番号：１で表されるアミノ酸配列のＮ末
端システイン残基のチオール基を介して脂質が結合した
ペプチドである前記（７）記載の医薬、（１１７）脂質
が１または２個の炭素数２〜２４個の飽和脂肪酸である
前記（１１５）または（１１６）記載の剤、および（１
１８）脂質が２個のパルミチン酸である前記（１１５）
または（１１６）記載の剤等を提供する。

【０００８】

【発明の実施の形態】本発明に用いられるＭ１６１抗原
としては、ネイチャー・メディシン（NatureMedicine）
３，１１巻、１２６６頁，１９９７に記載のものを用い
ることができる。さらには、Ｍ１６１抗原としては、例
えば、ネイチャー・メディシン（NatureMedicine）３，
１１巻、１９９７の１２６７頁に記載のアミノ酸配列
（以下、アミノ酸配列Ａ）と実質的に同一のアミノ酸配
列を含有するペプチドなどが用いられ、これらペプチド
は温血動物（例えば、モルモット、ラット、マウス、ニ
ワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サル、ヒトなど
の哺乳動物や鳥類）の細胞［例えば、肝細胞、脾細胞、
神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサン
ギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細
胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細
胞、免疫細胞（例えば、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細
胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基
球、好酸球、単球など）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細
胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、もしくは
間質細胞、またはこれらの細胞の前駆細胞、幹細胞もし
くはガン化細胞など］もしくはそれらの細胞が存在する
あらゆる組識［例えば、脳、脳の各部位（例えば、嗅
球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳
皮質、延髄、小脳など）脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎
臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮
膚、筋肉、肺、消化管（例えば、大腸、小腸など）、血
管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾
丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋など］または
血球系の細胞もしくはその培養細胞株などに由来するペ
プチド、合成ペプチド、組換え型ペプチドの何れであっ
てもよい。

【０００９】アミノ酸配列Ａは具体的には配列番号：２
で表されるアミノ酸配列〔図１〕である。アミノ酸配列
Ａと実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質と
は、アミノ酸配列Ａと約７０％以上、好ましくは約８０
％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは
約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列を有する蛋
白質などが挙げられる。アミノ酸配列Ａと実質的に同一
のアミノ酸配列を有する蛋白質としては、例えば、前記
のアミノ酸配列Ａと実質的に同一のアミノ酸配列を有
し、アミノ酸配列Ａを有する蛋白質と実質的に同質の活
性を有する蛋白質などが好ましい。実質的に同質の活性
としては、例えば、シグナル伝達活性、サイトカイン誘
導活性、未成熟樹状細胞の成熟化誘導作用、貧食促進作
用、補体活性化作用などがあげられる。実質的に同質と
は、それらの活性が性質的に（例、生理化学的に、また
は薬理学的に）同質であることを示す。また、Ｍ１６１
抗原としては、例えば、アミノ酸配列Ａ中の１または２
個以上（好ましくは、１から７個程度、より好ましくは
１から５個程度、さらに好ましくは１から３個）のアミ
ノ酸が欠失したアミノ酸配列、アミノ酸配列Ａに１また
は２個以上（好ましくは、１から７個程度、より好まし
くは１から５個程度、さらに好ましくは１から３個）の
アミノ酸が付加または挿入されたアミノ酸配列、アミノ
酸配列Ａ中の１または２個以上（好ましくは、１から７
個程度、より好ましくは１から５個程度、さらに好まし
くは１から３個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換され
たアミノ酸配列、またはそれらを組み合わせたアミノ酸
配列を含有する蛋白質なども用いられる。

【００１０】Ｍ１６１抗原の部分ペプチドとしては、前
記したＭ１６１抗原の断片ペプチドであって、少なくと
も１０個以上、好ましくは１０〜５０個程度、特に好ま
しくは１０〜１５個程度のアミノ酸残基からなり、前記
したＭ１６１抗原と実質的に同質の活性を有するペプチ
ドなどが用いられる。この部分ペプチドは温血動物（例
えば、モルモット、ラット、マウス、ニワトリ、ウサ
ギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サル、ヒトなどの哺乳動物や
鳥類）の細胞［例えば、肝細胞、脾細胞、神経細胞、グ
リア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、
ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、
繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞
（例えば、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラ
ルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、
単球など）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨
芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、もしくは間質細胞、また
はこれらの細胞の前駆細胞、幹細胞もしくはガン化細胞
など］もしくはそれらの細胞が存在するあらゆる組識
［例えば、脳、脳の各部位（例えば、嗅球、扁桃核、大
脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小
脳など）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖
腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消
化管（例えば、大腸、小腸など）、血管、心臓、胸腺、
脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子
宮、骨、関節、骨格筋など］または血球系の細胞もしく
はその培養細胞株などに由来するペプチド、合成ペプチ
ド、組換え型ペプチドの何れであってもよい。実質的に
同質の活性としては、例えば、シグナル伝達活性、サイ
トカイン誘導活性、未成熟樹状細胞の成熟化誘導作用、
貧食促進作用、補体活性化作用、あるいはこれらから選
ばれる１もしくは２種以上の活性などがあげられる。実
質的に同質とは、それらの活性が性質的に（例、生理化
学的に、または薬理学的に）同質であることを示す。よ
り具体的には、Ｍ１６１抗原の部分ペプチドとしては、
例えば、配列番号：１で表されるアミノ酸配列と実質的
に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドなどが用いら
れる。配列番号：１で表されるアミノ酸配列と実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するペプチドとは、配列番
号：１で表されるアミノ酸配列と約７０％以上、好まし
くは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も
好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列
を有するペプチドなどが挙げられる。また、Ｍ１６１抗
原の部分ペプチドとしては、例えば、配列番号：１で表
されるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましく
は、１から７個程度、より好ましくは１から５個程度、
さらに好ましくは１から３個）のアミノ酸が欠失したア
ミノ酸配列、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列に
１または２個以上（好ましくは、１から７個程度、より
好ましくは１から５個程度、さらに好ましくは１から３
個）のアミノ酸が付加または挿入されたアミノ酸配列、
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１または２
個以上（好ましくは、１から７個程度、より好ましくは
１から５個程度、さらに好ましくは１から３個）のアミ
ノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または
それらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するペプチド
なども用いられる。

【００１１】Ｍ１６１抗原またはその部分ペプチドは、
ペプチド表記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末
端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列
番号：２で表されるアミノ酸配列を有するＭ１６１抗
原、配列番号：１で表されるアミノ酸配列を有するＭ１
６１抗原の部分ペプチドをはじめとするＭ１６１抗原ま
たはその部分ペプチドは、Ｃ末端がカルボキシル基（−
ＣＯＯＨ）、カルボキシレート（−ＣＯＯ⁻）、アミド
（−ＣＯＮＨ_２）またはエステル（−ＣＯＯＲ）の何れ
であってもよい。ここでエステルにおけるＲとしては、
例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル
もしくはｎ−ブチルなどのＣ_１−６アルキル基、例え
ば、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ_３−８シ
クロアルキル基、例えば、フェニル、α−ナフチルなど
のＣ_６−１２アリール基、例えば、ベンジル、フェネチ
ル、α−ナフチルメチルなどのＣ_６−１２アリール−Ｃ
_１−２アルキル基のほか、経口用エステルとして汎用さ
れるピバロイルオキシメチルエステルなどが用いられ
る。Ｍ１６１抗原またはその部分ペプチドがＣ末端以外
にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有して
いる場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化
されているものもＭ１６１抗原またはその部分ペプチド
に含まれる。この場合のエステルとしては、例えば、上
記したＣ末端のエステルなどが用いられる。さらに、Ｍ
１６１抗原またはその部分ペプチドには、分子内のアミ
ノ酸の側鎖上にある、例えば、ＯＨ、ＣＯＯＨ、Ｎ
Ｈ_２、ＳＨなどが適当な保護基（例えば、ホルミル基、
アセチル基などのＣ_１−６アシル基など）で保護されて
いるもの、糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複
合ペプチドなども含まれる。

【００１２】合成したＭ１６１抗原またはその部分ペプ
チドは、分子内に脂質が結合していることが望ましい。
該脂質は、ペプチドや蛋白質に結合し得る脂質であれば
特に限定されないが、例えば、脂肪酸、アシルグリセロ
ール類、リン脂質、スフィンゴリピド、糖脂質、グリセ
リンエーテル、テルペノイド、ステロールなどが挙げら
れる。脂肪酸としては、飽和脂肪酸（酢酸、プロピオン
酸、酪酸、カプロン酸、デカン酸、ラウリン酸、ミリス
チン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、
ベヘン酸、リグノセリン酸などの炭素数２〜２４個の飽
和脂肪酸）、不飽和脂肪酸（オレイン酸、バクセン酸、
リノール酸、α−リノレン酸、γ−リノレン酸、アラキ
ドン酸などの炭素数１５〜２４の不飽和脂肪酸）、α−
エレオステアリン酸、タリル酸、イサン酸、ラクロバシ
ル酸、ベルノル酸、プロスタグランジンなどが用いら
れ、なかでもパルミチン酸、ステアリン酸などの炭素数
２〜２４個の飽和脂肪酸が好ましい。アシルグリセロー
ル類（中性脂質とも呼ばれる）とは、グリセロールと前
記した脂肪酸とのモノエステル、ジエステルまたはトリ
エステルを言い、なかでもグリセロールと脂肪酸とのト
リエステルであるトリアシルグリセロールが好ましい。
リン脂質としては、リン酸の他、グリセロール、脂肪酸
または（および）窒素塩基を含んでいてもよい脂質が用
いられ、例えば、３−ｓｎ−ホスファチジルコリン、３
−ｓｎ−ホスファチジルエタノールアミン、３−ｓｎ−
ホスファチジルセリン、３−ｓｎ−ホスファチジルエタ
ノールアミン、１−アルコキシホスホリピド、３−ｓｎ
−ホスファチジルイノシトール、３−ｓｎ−ホスファチ
ジルグリセロールなどが用いられる。スフィンゴリピド
としては、セレブロシド、サイコシン、スフィンゴミエ
リンなどが用いられる。糖脂質としては、炭水化物とジ
アシルグリセロールを主成分とし、リン酸を含まない脂
質が用いられ、例えば、３−ｓｎ−モノガラクトシルジ
アシルグリセロール、３−ｓｎ−ジガラクトシルジアシ
ルグリセロール、３−ｓｎ−（６−スルホ−６−デオキ
シ−α−Ｄ−グリコシル）ジアシルグリセロールなどが
用いられる。グリセリンエーテルとしては、例えば、１
−アルキル−２，３−ジアシル−ｓｎ−グリセロール、
１−アルケニル−２，３−ジアシル−ｓｎ−グリセロー
ル、１−アルキル−２−アセチル−ｓｎ−グリセロール
−３−ホスホリルコリンなどが用いられる。テルペノイ
ドとしては、イソプレノイド重合体、β−カロチンなど
が用いられる。ステロールとしては、例えば、コレステ
ロールまたはそのエステルなどが用いられる。上記した
中でも、脂質としては、脂肪酸が好ましく、特にパルミ
チン酸、ステアリン酸などの炭素数２〜２４個の飽和脂
肪酸が好ましい。

【００１３】上記脂質とＭ１６１抗原またはその部分ペ
プチドとの結合位置は、特に限定されないが、上記した
Ｍ１６１抗原またはその部分ペプチドのＮ末端などが好
適である。また、上記脂質とＭ１６１抗原またはその部
分ペプチドとの結合様式も特に限定されないが、上記し
たＭ１６１抗原またはその部分ペプチドの構成アミノ酸
の側鎖上にある、例えば、ヒドロキシ基、カルボキシル
基、アミノ基、チオール基などを介して結合していても
よい。例えば、Ｍ１６１抗原またはその部分ペプチドが
配列番号：２または配列番号：１で表されるペプチドで
ある場合、Ｎ末端のシステイン残基のチオール基を介し
て脂質が結合していてもよい。例えば、Ｍ１６１抗原の
部分ペプチドとしては、配列番号：１で表されるアミノ
酸配列からなるペプチドのＮ末端システイン残基を介し
て２個の炭素数２〜２４個の飽和脂肪酸（特に、パルミ
チン酸）が結合したペプチドなどが好ましく、特に、式

【化１】 （式中、Ｐａｌはパルミチン酸を示す）で表されるＭＡ
ＬＰ−２などが好ましい。Ｍ１６１抗原またはその部分
ペプチドと脂質との結合は、自体公知の方法を用いて行
うことができる。例えば、ＭＡＬＰ−２は、ジャーナル
・エクスペアリメンタル・メディスン（J. Exp. Me
d.）, Vol. 185, Number 11, June 2, 1997, 1951-1958
に記載の方法に従って製造することができる。

【００１４】Ｍ１６１抗原またはその部分ペプチドの塩
としては、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好
ましい。この様な塩としては、例えば無機酸（例えば、
塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有
機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、
マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、
シュウ酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスル
ホン酸）との塩などが用いられる。また、無機塩基（例
えば、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属、カル
シウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属、アルミ
ニウムまたはアンモニウムなど）との塩、有機塩基（例
えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジ
ン、ピコリン、２，６−ルチジン、エタノールアミン、
ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、シクロヘ
キシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジ
ベンジルエチレンジアミンなど）との塩なども用いられ
る。

【００１５】Ｍ１６１抗原またはその部分ペプチド
（例、ＭＡＬＰ−２）またはその塩（以下、本発明のペ
プチド等と略記する）のプロドラッグとしては、生体内
における生理条件下で酵素や胃酸等による反応により本
発明のペプチド等に変換する化合物、すなわち酵素的に
酸化、還元、加水分解等を起こして本発明のペプチド等
に変化する化合物、胃酸等により加水分解等を起こして
本発明のペプチド等に変化する化合物などが用いられ
る。具体的には、本発明のペプチド等のプロドラッグと
しては、本発明のペプチド等のアミノ基がアシル化、ア
ルキル化、りん酸化された化合物（例えば、本発明のペ
プチド等のアミノ基がエイコサノイル化、アラニル化、
ペンチルアミノカルボニル化、（５−メチル−２−オキ
ソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メトキシカルボ
ニル化、テトラヒドロフラニル化、ピロリジルメチル
化、ピバロイルオキシメチル化、tert−ブチル化された
化合物等）；本発明のペプチド等の水酸基がアシル化、
アルキル化、りん酸化、ホウ酸化された化合物（例え
ば、本発明のペプチド等の水酸基がアセチル化、パルミ
トイル化、プロパノイル化、ピバロイル化、スクシニル
化、フマリル化、アラニル化、ジメチルアミノメチルカ
ルボニル化された化合物等）；本発明のペプチド等のカ
ルボキシ基がエステル化、アミド化された化合物（例え
ば、本発明のペプチド等のカルボキシ基がエチルエステ
ル化、フェニルエステル化、カルボキシメチルエステル
化、ジメチルアミノメチルエステル化、ピバロイルオキ
シメチルエステル化、エトキシカルボニルオキシエチル
エステル化、フタリジルエステル化、（５−メチル−２
−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチルエ
ステル化、シクロヘキシルオキシカルボニルエチルエス
テル化、メチルアミド化された化合物等）；等が挙げら
れる。これらの化合物は自体公知の方法によって本発明
のペプチド等から製造することができる。また、本発明
のペプチド等のプロドラッグは、広川書店１９９０年刊
「医薬品の開発」第７巻分子設計１６３頁から１９８頁
に記載されているような生理的条件で本発明のペプチド
等に変化するものであってもよい。

【００１６】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドま
たはその塩（以下、Ｍ１６１抗原と略記する）は、
（１）前述した哺乳動物の細胞または組織から自体公知
の方法によっても製造することもできるし、（２）ペプ
チド合成法に準じて製造することもできるし、（３）Ｍ
１６１抗原をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を
培養することによっても製造することができる。 〔哺乳動物の細胞または組織から製造する方法〕ヒトや
哺乳動物の組織または細胞から製造する場合、ヒトや哺
乳動物の組織または細胞をホモジナイズした後、酸など
で抽出を行い、該抽出液を逆相クロマトグラフィー、イ
オン交換クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィー
を組合せることによりＭ１６１抗原を単離精製すること
ができる。

【００１７】〔ペプチド合成法に準じて製造する方法〕
Ｍ１６１抗原またはそのアミド体は、自体公知のペプチ
ドの合成法に従って、あるいはＭ１６１抗原を適当なペ
プチダーゼで切断することによって製造することができ
る。ペプチドの合成法としては、例えば、固相合成法、
液相合成法のいずれによってもよい。すなわち、当該部
分ペプチドを構成し得る部分ペプチドもしくはアミノ酸
と残余部分とを縮合させ、生成物が保護基を有する場合
は保護基を脱離することにより目的のＭ１６１抗原を製
造することができる。公知の縮合方法や保護基の脱離と
しては、例えば、以下のからに記載された方法が挙
げられる。 Ｍ．ＢｏｄａｎｓｚｋｙおよびＭ．Ａ．Ｏｎｄｅｔｔ
ｉ、ペプチド シンセシス（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈ
ｅｓｉｓ），Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓ
ｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９６６年） ＳｃｈｒｏｅｄｅｒおよびＬｕｅｂｋｅ、ザ ペプチ
ド（Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９６５年） 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、丸善（株）
（１９７５年） 矢島治明および榊原俊平、生化学実験講座１、タンパ
ク質の化学IV、２０５、（１９７７年） 矢島治明監修、続医薬品の開発 第１４巻 ペプチド合
成 広川書店

【００１８】より具体的には、Ｍ１６１抗原またはその
アミド体の合成には、通常市販のペプチド合成用樹脂を
用いることができる。そのような樹脂としては、例え
ば、クロロメチル樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズ
ヒドリルアミン樹脂、アミノメチル樹脂、４−ベンジル
オキシベンジルアルコール樹脂、４−メチルベンズヒド
リルアミン樹脂、ＰＡＭ樹脂、４−ヒドロキシメチルフ
ェニルアセトアミドメチル樹脂、ポリアクリルアミド樹
脂、４−（２’，４’−ジメトキシフェニルヒドロキシ
メチル）フェノキシ樹脂、４−（２’ ，４’−ジメト
キシフェニル−Ｆｍｏｃアミノエチル）フェノキシ樹脂
などを挙げることができる。このような樹脂を用い、α
−アミノ基と側鎖官能基を適当に保護したアミノ酸を、
目的とする部分ペプチドの配列通りに、自体公知の各種
縮合方法に従い、樹脂上で縮合させる。反応の最後に樹
脂から部分ペプチドを切り出すと同時に各種保護基を除
去し、さらに高希釈溶液中で分子内ジスルフィド結合形
成反応を実施し、目的のＭ１６１抗原またはそのアミド
体を取得する。上記した保護アミノ酸の縮合に関して
は、ペプチド合成に使用できる各種活性化試薬を用いる
ことができるが、特に、カルボジイミド類がよい。カル
ボジイミド類としては、ＤＣＣ、Ｎ，Ｎ’ −ジイソプ
ロピルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ’ −（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミドなどが用いられ
る。これらによる活性化にはラセミ化抑制添加剤（例え
ば、ＨＯＢｔ、ＨＯＯＢｔ）とともに保護アミノ酸を直
接樹脂に添加するか、または、対称酸無水物またはＨＯ
ＢｔエステルあるいはＨＯＯＢｔエステルとしてあらか
じめ保護アミノ酸の活性化を行った後に樹脂に添加する
ことができる。

【００１９】保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用
いられる溶媒としては、ペプチド縮合反応に使用しうる
ことが知られている溶媒から適宜選択されうる。例え
ば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル
アセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド
類、塩化メチレン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化
水素類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、
ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジ
ン、ジオキサン、テトラヒドロフランなどのエーテル
類、アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル
類、酢酸メチル、酢酸エチルなどのエステル類あるいは
これらの適宜の混合物などが用いられる。反応温度は、
ペプチド結合形成反応に使用され得ることが知られてい
る範囲から適宜選択され、通常約−２０℃から５０℃の
範囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体
は通常１．５から４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン
反応を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保
護基の脱離を行うことなく縮合反応を繰り返すことによ
り十分な縮合を行うことができる。反応を繰り返しても
十分な縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセ
チルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化
することができる。

【００２０】原料のアミノ基の保護基としては、例え
ば、Ｚ、Ｂｏｃ、ｔｅｒｔ−ペンチルオキシカルボニ
ル、イソボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベン
ジルオキシカルボニル、Ｃｌ−Ｚ、Ｂｒ−Ｚ、アダマン
チルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロ
イル、ホルミル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジ
フェニルホスフィノチオイル、Ｆｍｏｃなどが用いられ
る。カルボキシル基は、例えば、アルキルエステル化
（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔｅｒ
ｔ−ブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロ
ヘプチル、シクロオクチル、２−アダマンチルなどの直
鎖状、分枝状もしくは環状アルキルエステル化）、アラ
ルキルエステル化（例えば、ベンジルエステル、４−ニ
トロベンジルエステル、４−メトキシベンジルエステ
ル、４−クロロベンジルエステル、ベンズヒドリルエス
テル化）、フェナシルエステル化、ベンジルオキシカル
ボニルヒドラジド化、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルヒ
ドラジド化、トリチルヒドラジド化などによって保護す
ることができる。セリンの水酸基は、例えば、エステル
化またはエーテル化によって保護することができる。こ
のエステル化に適する基としては、例えば、アセチル基
などの低級アルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイ
ル基、ベンジルオキシカルボニル基、エトキシカルボニ
ル基などの炭酸から誘導される基などが用いられる。ま
た、エーテル化に適する基としては、例えば、ベンジル
基、テトラヒドロピラニル基、ｔｅｒｔ−ブチル基など
である。チロシンのフェノール性水酸基の保護基として
は、例えば、Ｂｚｌ、Ｃｌ_２−Ｂｚｌ、２−ニトロベン
ジル、Ｂｒ−Ｚ、ｔｅｒｔ−ブチルなどが用いられる。
ヒスチジンのイミダゾールの保護基としては、例えば、
Ｔｏｓ、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼ
ンスルホニル、ＤＮＰ、ベンジルオキシメチル、Ｂｕ
ｍ、Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、Ｆｍｏｃなどが用いられる。原料
のカルボキシル基の活性化されたものとしては、例え
ば、対応する酸無水物、アジド、活性エステル［アルコ
ール（例えば、ペンタクロロフェノール、２，４，５−
トリクロロフェノール、２，４−ジニトロフェノール、
シアノメチルアルコール、パラニトロフェノール、ＨＯ
ＮＢ、Ｎ−ヒドロキシスクシミド、ＨＯＢｔ）とのエス
テル］などが用いられる。原料のアミノ基の活性化され
たものとしては、例えば、対応するリン酸アミドが用い
られる。

【００２１】保護基の除去（脱離）方法としては、例え
ば、Ｐｄ黒あるいはＰｄ−炭素などの触媒の存在下での
水素気流中での接触還元や、また、無水フッ化水素、メ
タンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリ
フルオロ酢酸あるいはこれらの混合液などによる酸処理
や、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、
ピペリジン、ピペラジンなどによる塩基処理、また、液
体アンモニア中ナトリウムによる還元なども用いられ
る。上記酸処理による脱離反応は、一般に約−２０℃か
ら４０℃の温度で行われるが、酸処理においては、例え
ば、アニソール、フェノール、チオアニソール、メタク
レゾール、パラクレゾール、ジメチルスルフィド、１，
４−ブタンジチオール、１，２−エタンジチオールなど
のようなカチオン補足剤の添加が有効である。また、ヒ
スチジンのイミダゾール保護基として用いられる２，４
−ジニトロフェニル基はチオフェノール処理により除去
され、トリプトファンのインドール保護基として用いら
れるホルミル基は上記１，２−エタンジチオール、１，
４−ブタンジチオールなどの存在下の酸処理による脱保
護以外に、希水酸化ナトリウム溶液、希アンモニアなど
によるアルカリ処理によっても除去される。原料の反応
に関与すべきでない官能基の保護ならびに保護基、およ
びその保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化な
どは公知の基または公知の手段から適宜選択しうる。

【００２２】目的とするＭ１６１抗原のアミド体を得る
別の方法としては、例えば、まず、カルボキシル末端ア
ミノ酸のα−カルボキシル基をアミド化して保護した
後、アミノ基側にペプチド鎖を所望の鎖長まで延ばした
後、該ペプチド鎖のＮ末端のα−アミノ基の保護基のみ
を除いた部分ペプチドとＣ末端のカルボキシル基の保護
基のみを除去した部分ペプチドとを製造し、この両部分
ペプチドを上記したような混合溶媒中で縮合させる。縮
合反応の詳細については上記と同様である。縮合により
得られた保護ペプチドを精製した後、上記方法によりす
べての保護基を除去し、所望の粗Ｍ１６１抗原を得るこ
とができる。この粗Ｍ１６１抗原は既知の各種精製手段
を駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥することで所望
のＭ１６１抗原のアミド体を得ることができる。Ｍ１６
１抗原のエステル体を得るには、例えば、カルボキシル
末端アミノ酸のα−カルボキシル基を所望のアルコール
類と縮合しアミノ酸エステルとした後、Ｍ１６１抗原の
アミド体と同様にして、所望のＭ１６１抗原のエステル
体を得ることができる。また、反応後は通常の精製法、
例えば、溶媒抽出、蒸留、カラムクロマトグラフィー、
液体クロマトグラフィー、再結晶などを組合せて目的の
部分ペプチドを単離精製することができる。上記方法で
得られるＭ１６１抗原が遊離体である場合は、公知の方
法によって適当な塩に変換することができるし、逆に塩
で得られた場合は、公知の方法によって遊離体に変換す
ることができる。

【００２３】〔Ｍ１６１抗原をコードするＤＮＡを含有
する形質転換体を培養することによって製造する方法〕
Ｍ１６１抗原をコードするＤＮＡとしては、Ｍ１６１抗
原をコードする塩基配列を含有するものであればいかな
るものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤ
ＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮ
Ａ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリーよ
り自体公知の方法により単離されたもの、合成ＤＮＡの
いずれでもよい。具体的には、ネイチャー・メディシン
（Nature Medicine）３，１２６６，１９９７；ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol.
Chem.）２７３，１２４０７，１９９８などに記載のｃ
ＤＮＡを用いることができる。ライブラリーに使用する
ベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミ
ド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前
記した細胞・組織よりｔｏｔａｌＲＮＡ画分またはｍＲ
ＮＡ画分を調製したものを用いて、直接Ｒｅｖｅｒｓｅ
Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ
Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（以下、ＲＴ−ＰＣＲ法
と略称する）によって単離することもできる。具体的に
は、本発明のＭ１６１抗原をコードするＤＮＡとして
は、例えば、配列番号：３で表わされる塩基配列を含有
するＤＮＡ、または配列番号：３で表わされる塩基配列
とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする
塩基配列を有し、本発明のＭ１６１抗原と実質的に同質
の活性（例、シグナル伝達活性、サイトカイン誘導活
性、未成熟樹状細胞の成熟化誘導作用、貧食促進作用、
補体活性化作用など）を有するペプチドをコードするＤ
ＮＡであれば何れのものでもよい。配列番号：３で表わ
される塩基配列とハイブリダイズできるＤＮＡとして
は、例えば、配列番号：３で表わされる塩基配列と約７
０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約
９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有
する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。ハイ
ブリダイゼーションは、公知の方法あるいはそれに準じ
る方法、例えば、モレキュラー・クローニング（Molecu
lar Cloning）２nd（J. Sambrook et al.,Cold Spring
Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従って
行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用
する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行な
うことができる。より好ましくは、ハイストリンジェン
トな条件に従って行なうことができる。該ハイストリン
ジェントな条件とは、例えば、ナトリウム濃度が約１９
〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜２０ｍＭで、温度が約
５０〜７０℃、好ましくは約６０〜６５℃の条件を示
す。特に、ナトリウム濃度が約１９ｍＭで温度が約６５
℃の場合が最も好ましい。より具体的には、配列番号：
２で表わされるアミノ酸配列を含有するＭ１６１抗原を
コードするＤＮＡとしては、配列番号：３で表わされる
塩基配列を含有するＤＮＡ〔図２〕などが用いられる。
Ｍ１６１抗原の部分ペプチドをコードするＤＮＡとして
は、例えば、（１）配列番号：３で表わされる塩基配列
を有するＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、または
（２）配列番号：３で表わされる塩基配列とハイストリ
ンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有
し、本発明のＭ１６１抗原と実質的に同質の活性（例、
シグナル伝達活性、サイトカイン誘導活性、未成熟樹状
細胞の成熟化誘導作用、貧食促進作用、補体活性化作用
など）を有するペプチドをコードするＤＮＡの部分塩基
配列を有するＤＮＡなどが用いられる。

【００２４】Ｍ１６１抗原をコードするＤＮＡのクロー
ニングの手段としては、Ｍ１６１抗原の部分配列をコー
ドする塩基配列を有する合成ＤＮＡプライマーを用いて
ＰＣＲ法によって増幅するか、または適当なベクターに
組み込んだＤＮＡ、また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ
ライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前
記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリーより自体
公知の方法により単離されたものをＭ１６１抗原の一部
あるいは全領域をコードするＤＮＡ断片もしくは合成Ｄ
ＮＡを用いて標識したものとのハイブリダイゼーション
によって単離することができる。ハイブリダイゼーショ
ンの方法は、例えば、モレキュラー クローニング（Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）２ｎｄ （ Ｊ.Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋ ｅｔ.ａｌ., Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈ
ａｒｂｏｒ Ｌａｂ.Ｐｒｅｓｓ，１９８９）に記載の方
法などに従って行うことができる。また、市販のライブ
ラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法
に従って行うことができる。ＤＮＡの塩基配列の変換
は、公知のキット、例えば、Ｍｕｔａｎｔ^ＴＭ−ｓｕｐ
ｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｋｍ（宝酒造（株））、Ｍｕｔａ
ｎｔ^ＴＭ−Ｋ（宝酒造（株））などを用いて、ＯＤＡ−
ＬＡ ＰＣＲ法、Ｇａｐｐｅｄ ｄｕｐｌｅｘ法、Ｋｕｎ
ｋｅｌ法などの自体公知の方法あるいはそれらに準じる
方法に従って行うことができる。

【００２５】クローン化されたＭ１６１抗原をコードす
るＤＮＡは目的によりそのまま、または所望により制限
酵素で消化したり、リンカーを付加したりして使用する
ことができる。該ＤＮＡはその５’末端側に翻訳開始コ
ドンとしてのＡＴＧを有し、また３’末端側には翻訳終
止コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有して
いてもよい。これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コドン
は適当な合成ＤＮＡアダプターを用いて付加することも
できる。Ｍ１６１抗原の発現ベクターは、例えば、
（イ）Ｍ１６１抗原をコードするＤＮＡから目的とする
ＤＮＡ断片を切り出し、（ロ）該ＤＮＡ断片を適当な発
現ベクター中のプロモーターの下流に連結することによ
り製造することができる。べクターとしては、大腸菌由
来のプラスミド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐ
ＵＣ１２，ｐＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミド
（例、ｐＵＢ１１０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由
来プラスミド（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファ
ージなどのバクテリオファージ、レトロウイルス，ワク
シニアウイルス、バキュロウイルスなどの動物ウイルス
などの他、ｐＡ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、
ｐＲｃ／ＲＳＶ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられ
る。プロモーターとしては、遺伝子の発現に用いる宿主
に対応して適切なプロモーターであればいかなるもので
もよい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場合は、
ＳＶ４０由来のプロモーター、レトロウイルスのプロモ
ーター、メタロチオネインプロモーター、ヒートショッ
クプロモーター、サイトメガロウイルスプロモーター、
ＳＲαプロモーターなどが挙げられる。これらのうち、
サイトメガロウイルスプロモーター、ＳＲαプロモータ
ーなどを用いるのが好ましい。宿主がエシェリヒア属菌
である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモータ
ー、ｒｅｃＡプロモーター、λＰ_Ｌプロモーター、ｌｐ
ｐプロモータなどが、宿主がバチルス属菌である場合
は、ＳＰ０１プロモーター、ＳＰ０２プロモーター、ｐ
ｅｎＰプロモーターなど、宿主が酵母である場合は、ｐ
Ｈ０５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプロ
モーター、ＡＤＨプロモーターなどが好ましい。宿主が
昆虫細胞である場合には、ポリヘドリンプロモーター、
Ｐ１０プロモ−ターなどが好ましい。

【００２６】発現ベクターには、以上の他に、所望によ
りエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加
シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以
下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有
しているものを用いることができる。選択マーカーとし
ては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒ
と略称する場合がある）遺伝子［メソトレキセート（Ｍ
ＴＸ）耐性］、アンピシリン耐性遺伝子（以下、Ａｍｐ
^ｒと略称する場合がある）、ネオマイシン耐性遺伝子
（以下、Ｎｅｏと略称する場合がある、Ｇ４１８耐性）
などが挙げられる。特に、ＣＨＯ（ｄｈｆｒ⁻）細胞を
用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択マーカーとして使用する場
合、目的遺伝子を含有する形質転換体をチミジンを含ま
ない培地によっても選択することができる。また、必要
に応じて、宿主に合ったシグナル配列を、Ｍ１６１抗原
のＮ末端側に付加することもできる。宿主がエシェリヒ
ア属菌である場合は、アルカリフォスファターゼ・シグ
ナル配列、ＯｍｐＡ・シグナル配列などが、宿主がバチ
ルス属菌である場合は、α−アミラーゼ・シグナル配
列、サブチリシン・シグナル配列などが、宿主が酵母で
ある場合は、メイテイングファクターα・シグナル配
列、インベルターゼ・シグナル配列など、宿主が動物細
胞である場合には、例えばインシュリン・シグナル配
列、α−インターフェロン・シグナル配列、抗体分子・
シグナル配列などがそれぞれ利用できる。このようにし
て構築されたＭ１６１抗原をコードするＤＮＡを含有す
るベクターを用いて、形質転換体を製造することができ
る。

【００２７】宿主としては、例えば、エシェリヒア属
菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞な
どが用いられる。エシェリヒア属菌の具体例としては、
エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌ
ｉ）Ｋ１２・ＤＨ１〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナ
ショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・
ザ・ユーエスエー（Ｐｒｏｃ. Ｎａｔｌ. Ａｃａｄ. Ｓ
ｃｉ. ＵＳＡ），６０巻，１６０（１９６８）〕，ＪＭ
１０３〔ヌクイレックアシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅ
ｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ），９巻，３０９
（１９８１）, ＪＡ２２１〔ジャーナル・オブ・モレキ
ュラー・バイオロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）〕，１２０巻，５１７
（１９７８）〕，ＨＢ１０１〔ジャーナル・オブ・モレ
キユラー・バイオロジー，４１巻，４５９（１９６
９）〕，Ｃ６００〔ジェネティックス（Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｓ），３９巻，４４０（１９５４）〕などが用いられ
る。バチルス属菌としては、例えば、バチルス・サブチ
リス（ＢａｃｉｌｌｕｓＳｕｂｔｉｌｉｓ）ＭＩ１１４
〔ジーン，２４巻，２５５（１９８３）〕，２０７−２
２１〔ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），９５巻．
８７（１９８４）〕などが用いられる。酵母としては、
例えば、サッカロマイセス セレビシエ（Ｓａｃｃｈａ
ｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＡＨ２２，Ａ
Ｈ２２Ｒ⁻，ＮＡ８７−１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ
−１２、シゾサッカロマイセス ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏ
ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）ＮＣＹＣ１
９１３、ＮＣＹＣ２０３６、サッカロマイセス ピキア
パストリス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｉｃｊ
ｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）などが用いられる。昆虫細胞
としては、例えば、ウイルスがＡｃＮＰＶの場合は、夜
盗蛾の幼虫由来株化細胞（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒ
ｕｇｉｐｅｒｄａ ｃｅｌｌ；Ｓｆ細胞）、Ｔｒｉｃｈ
ｏｐｌｕｓｉａ ｎｉの中腸由来のＭＧ１細胞、Ｔｒｉ
ｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉの卵由来のＨｉｇｈ Ｆｉｖｅ
^ＴＭ細胞、Ｍａｍｅｓｔｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ由来
の細胞またはＥｓｔｉｇｍｅｎａ ａｃｒｅａ由来の細
胞などが用いられる。ウイルスがＢｍＮＰＶの場合は、
蚕由来株化細胞（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ Ｎ細胞；Ｂｍ
Ｎ細胞）などが用いられる。該Ｓｆ細胞としては、例え
ば、Ｓｆ９細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１７１１）、Ｓｆ２
１細胞（以上、Ｖａｕｇｈｎ，Ｊ．Ｌ．ら、イン・ヴィ
ボ（ｉｎ ｖｉｖｏ），１３，２１３−２１７，１９７
７）などが用いられる。昆虫としては、例えば、カイコ
の幼虫などが用いられる〔前田ら、ネイチャー（Ｎａｔ
ｕｒｅ），３１５巻，５９２（１９８５）〕。動物細胞
としては、例えば、サル細胞ＣＯＳ−７，Ｖｅｒｏ，チ
ャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ，ＤＨＦＲ遺伝子欠損
チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（ｄｈｆｒ⁻ ＣＨ
Ｏ細胞），マウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２０，マウス
ミエローマ細胞，ラットＧＨ３，ヒトＦＬ細胞などが用
いられる。

【００２８】エシェリヒア属菌を形質転換するには、例
えば、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエ
ー（Ｐｒｏｃ. Ｎａｔｌ. Ａｃａｄ. Ｓｃｉ. ＵＳ
Ａ），６９巻，２１１０（１９７２）やジーン（Ｇｅｎ
ｅ），１７巻，１０７（１９８２）などに記載の方法に
従って行うことができる。バチルス属菌を形質転換する
には、例えば、モレキュラー・アンド・ジェネラル・ジ
ェネティックス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ＆Ｇｅｎｅｒａｌ
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）１６８巻，１１１（１９７９）な
どに記載の方法に従って行うことができる。酵母を形質
転換するには、例えば、メソッズ・イン・エンザイモロ
ジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ），
１９４巻，１８２−１８７（１９９１）、プロシージン
グズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイ
エンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエ−（Ｐｒｏｃ. Ｎａ
ｔｌ. Ａｃａｄ. Ｓｃｉ. ＵＳＡ）７５巻，１９２９
（１９７８）などに記載の方法に従って行うことができ
る。昆虫細胞または昆虫を形質転換するには、例えば、
バイオ／テクノロジー（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ），６，４７−５５（１９８８）などに記載の方法に
従って行うことができる。動物細胞を形質転換するに
は、例えば、細胞工学別冊８ 新 細胞工学実験プロト
コール．２６３−２６７（１９９５）（秀潤社発行）、
ヴィロロジー（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ），５２巻，４５６
（１９７３）に記載の方法に従って行うことができる。
このようにして、Ｍ１６１抗原をコードするＤＮＡを含
有する発現ベクターで形質転換された形質転換体を得る
ことができる。

【００２９】宿主がエシェリヒア属菌、バチルス属菌で
ある形質転換体を培養する際、培養に使用される培地と
しては液体培地が適当であり、その中には該形質転換体
の生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が含有せ
しめられる。炭素源としては、例えば、グルコース、デ
キストリン、可溶性澱粉、ショ糖など、窒素源として
は、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、コーンスチ
ープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆
粕、バレイショ抽出液などの無機または有機物質、無機
物としては、例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素ナ
トリウム、塩化マグネシウムなどが挙げられる。また、
酵母抽出物、ビタミン類、生長促進因子などを添加して
もよい。培地のｐＨは約５から８が望ましい。エシェリ
ヒア属菌を培養する際の培地としては、例えば、グルコ
ース、カザミノ酸を含むＭ９培地〔ミラー（Ｍｉｌｌｅ
ｒ），ジャーナル・オブ・エクスペリメンツ・イン・モ
レキュラー・ジェネティックス（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇ
ｅｎｅｔｉｃｓ），４３１−４３３，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒ
ｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮｅｗＹ
ｏｒｋ １９７２〕が好ましい。ここに必要によりプロ
モーターを効率よく働かせるために、例えば、３β-イ
ンドリルアクリル酸のような薬剤を加えることができ
る。宿主がエシェリヒア属菌の場合、培養は通常約１５
から４３℃で約３から２４時間行い、必要により、通気
や撹拌を加えることもできる。宿主がバチルス属菌の場
合、培養は通常約３０から４０℃で約６から２４時間行
い、必要により、通気や撹拌を加えることもできる。宿
主が酵母である形質転換体を培養する際、培地として
は、例えば、バークホ−ルダー（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅ
ｒ）最小培地〔Ｂｏｓｔｉａｎ，Ｋ．Ｌ．ら、プロシー
ジングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・
サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Ｐｒｏｃ.
Ｎａｔｌ. Ａｃａｄ. Ｓｃｉ. ＵＳＡ），７７巻，４５
０５（１９８０）〕や０．５％カザミノ酸を含有するＳ
Ｄ培地〔Ｂｉｔｔｅｒ，Ｇ．Ａ．らプロシージングズ・
オブ・ザ・ナショナル・アカテミー・オブ・サイエンシ
イズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Ｐｒｏｃ. Ｎａｔｌ.
Ａｃａｄ. Ｓｃｉ. ＵＳＡ），８１巻，５３３０（１９
８４）〕が挙げられる。培地のｐＨは約５から８に調整
するのが好ましい。培養は通常約２０℃から３５℃で約
２４から７２時間行い、必要に応じて通気や撹拌を加え
る。

【００３０】宿主が昆虫細胞または昆虫である形質転換
体を培養する際、培地としては、Ｇｒａｃｅ’ｓ Ｉｎ
ｓｅｃｔ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｇｒａｃｅ，Ｔ.Ｃ.Ｃ.,ネイ
チャー（Ｎａｔｕｒｅ），１９５巻，７８８（１９６
２））に非動化した１０％ウシ血清等の添加物を適宜加
えたものなどが用いられる。培地のｐＨは約６．２から
６．４に調整するのが好ましい。培養は通常約２７℃で
約３から５日間行い、必要に応じて通気や撹拌を加え
る。宿主が動物細胞である形質転換体を培養する際、培
地としては、例えば、約５から２０％の胎児牛血清を含
むＭＥＭ培地〔サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ），１２２
巻，５０１（１９５２）〕，ＤＭＥＭ培地〔ヴィロロジ
ー（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ），８巻．３９６（１９５
９）〕，ＲＰＭＩ １６４０培地〔ジャーナル・オブ・
ザ・アメリカン・メディカル・アソシエーション（Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｍｅｄｉｃ
ａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）１９９巻．５１９（１
９６７）〕，１９９培地〔プロシージング・オブ・ザ・
ソサイエティ・フォー・ザ・バイオロジカル・メディス
ン（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｏｃｉｅｔ
ｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉ
ｎｅ），７３巻，１（１９５０）〕などが用いられる。
ｐＨは約６から８であるのが好ましい。培養は通常約３
０℃から４０℃で約１５から６０時間行い、必要に応じ
て通気や撹拌を加える。以上のようにして、Ｍ１６１抗
原を培養培地中あるいは形質転換体中に生成せしめるこ
とができる。

【００３１】上記培養物からＭ１６１抗原を分離精製す
るには、例えば、下記の方法により行うことができる。
Ｍ１６１抗原を培養菌体あるいは細胞から抽出するに際
しては、培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞を集
め、これを適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾチーム
および／または凍結融解などによって菌体あるいは細胞
を破壊したのち、遠心分離やろ過によりペプチドの粗抽
出液を得る方法などが適宜用いられる。緩衝液の中に尿
素や塩酸グアニジンなどのペプチド変性剤や、トリトン
Ｘ−１００（商品名）などの界面活性剤が含まれていて
もよい。培養液中にＭ１６１抗原が分泌される場合に
は、培養終了後、それ自体公知の方法で菌体あるいは細
胞と上清とを分離し、上清を集める。このようにして得
られた培養上清、あるいは抽出液中に含まれるＭ１６１
抗原の精製は、自体公知の分離・精製法を適切に組み合
わせて行なうことができる。これらの公知の分離、精製
法としては、塩析や溶媒沈澱法などの溶解度を利用する
方法、透析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、およびＳＤＳ
−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法などの主として分
子量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィ
ーなどの荷電の差を利用する方法、アフィニティークロ
マトグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆
相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用
する方法、等電点電気泳動法などの等電点の差を利用す
る方法などが用いられる。かくして得られるＭ１６１抗
原が遊離体で得られた場合には、自体公知の方法あるい
はそれに準じる方法によって塩に変換することができ、
逆に塩で得られた場合には自体公知の方法あるいはそれ
に準じる方法により、遊離体または他の塩に変換するこ
とができる。なお、組換え体が産生するＭ１６１抗原
を、精製前または精製後に適当な蛋白修飾酵素を作用さ
せることにより、任意に修飾を加えたり、ポリペプチド
を部分的に除去することもできる。蛋白修飾酵素として
は、例えばトリプシン、キモトリプシン、アルギニルエ
ンドペプチダーゼ、プロテインキナーゼ、グリコシダー
ゼなどが用いられる。かくして生成するＭ１６１抗原ま
たはその塩は、特異抗体を用いたエンザイムイムノアッ
セイなどにより検出することができる。

【００３２】本発明で用いられる癌抗原としては、例え
ば、癌細胞またはその抽出物、癌原性蛋白質またはペプ
チド、癌細胞に選択的に発現している蛋白質またはペプ
チド、腫瘍、破壊腫瘍、癌細胞のアポトーシス小体など
が用いられる。これら癌抗原は患者から分離したもので
も、癌患者自身の生体内に有しているものであってもよ
い。癌細胞としては、治療対象とする癌細胞を用いるの
が好ましい。腫瘍としては、治療対象とする腫瘍を用い
るのが好ましい。破壊腫瘍としては、例えば、治療対象
とする腫瘍を破壊したものなどを用いるのが好ましい。
例えば、メラノーマの治療を目的とする場合は、患者か
ら分離したメラノーマの破壊細胞などを用いるのが好ま
しい。より具体的には、癌抗原としては、ＨＥＲ２蛋白
質、変異型ｐ５３蛋白質、変異型ｒａｓ蛋白質などの癌
原性蛋白質、パピローマウイルス由来のＥ−７蛋白質な
どの腫瘍ウイルス蛋白質、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、
ＣＥＡ（腫瘍胎児性抗原）などの腫瘍マーカー蛋白質、
また serological expression cloning (SEREX) などの
手法で同定される癌細胞抗原やインテレクチンなどが用
いられる。Ｍ１６１抗原またはその部分ペプチドと癌抗
原が連結した融合蛋白質としては、前記したＭ１６１抗
原またはその部分ペプチドと前記した癌抗原が任意の位
置で連結した蛋白質が用いられるが、特にＭ１６１抗原
またはその部分ペプチドのＣ末端に癌抗原を連結した蛋
白質が好ましい。上記の癌抗原および、Ｍ１６１抗原ま
たはその部分ペプチドと癌抗原が連結した融合蛋白質
は、上記のＭ１６１抗原の製造法に準じて製造すること
ができる。具体的には、ペプチド合成法によって製造す
る場合には、Ｍ１６１抗原のＣ末端のアミノ酸に続けて
癌抗原を同様の方法で合成し、Ｍ１６１抗原をコードす
るＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって
製造する場合には、Ｍ１６１抗原をコードするＤＮＡの
終始コドンの上流に癌抗原をコードするＤＮＡを直接ま
たは適当なリンカー配列に続けて挿入し、上記のＭ１６
１抗原をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養
することによって製造する方法に準じて製造することが
できる。

【００３３】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドま
たはその塩あるいはそのプロドラッグ（以下、本発明の
Ｍ１６１抗原と略記する）は樹状細胞の活性化とともに
クロスプライミング（クラスII-クラスI スイッチン
グ）のあとクラスIへの抗原提示によってＣＴＬを誘導
する。すなわち、Th1細胞を介さずにＣＴＬを誘導する
ことができる。また、Ｍ１６１抗原はＩＬ−１２、ＩＬ
−１８、ＩＮＦγ、ＴＮＦ−αなどのサイトカインを誘
発し、Th1細胞を誘導して、さらに上記のようなサイト
カインを連鎖反応的に産生することによってＣＴＬを誘
導することもできる。したがって、Ｍ１６１抗原もしく
はその部分ペプチドまたはその塩あるいはそのプロドラ
ッグは、優れたＣＴＬ誘導作用および／またはTh1細胞
誘導作用を有しているので、本発明のＭ１６１抗原を含
有する医薬組成物は、哺乳動物（例えば、マウス、ラッ
ト、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、
サル、ヒトなど）に対して、ＣＴＬ誘導剤および／また
はTh1細胞誘導剤として有用である。ＣＴＬ［細胞傷害
性Ｔリンパ球（Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ Ｌｙｍｐｈｏｃ
ｙｔｅ）］とは、キラー細胞とも呼ばれ、細胞傷害性細
胞であり、標的細胞を破壊する能力を持つＴリンパ球
で、前記癌抗原を提示する癌細胞を特異的に攻撃し抗腫
瘍性を発現する細胞のことである。未成熟樹状細胞には
シグナル伝達受容体（ＴＬＲ２）と抗原取り込み受容体
（補体の受容体ＣＲ３、すなわちβ２インテグリン）が
存在し、シグナルが未成熟樹状細胞の成熟および活性化
を、抗原取り込みが樹状細胞の抗原提示を誘起する。Ｍ
１６１抗原はこれら２種類の受容体に結合し樹状細胞の
エンドソームへの取り込みを受け、抗原提示を誘起する
とともにサイトカイン並びにＣＴＬを誘導し得るのでＭ
１６１抗原と癌抗原と組み合わせることにより優れた癌
免疫系を成立させることができる。したがって、本発明
のＭ１６１抗原と癌抗原とを組み合わせてなる医薬およ
び本発明の融合蛋白質またはその塩は、（１）ＴＨＰ−
１細胞、マクロファージ、ヒト単核細胞などからのサイ
トカイン誘導作用（サイトカイン産生誘導作用）、
（２）未成熟樹状細胞の成熟化誘導作用、（３）貧食促
進作用、（４）腫瘍免疫機構の活性化作用、（５）ＣＴ
Ｌ誘導作用、（６）Th1細胞誘導作用などを有している
ので、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ハムスタ
ー、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サル、ヒトな
ど）に対して、サイトカイン誘導剤、未成熟樹状細胞の
成熟化誘導剤、貧食促進剤、腫瘍免疫機構の活性化剤、
ＣＴＬ誘導剤、Th1細胞誘導剤などの抗癌剤として有用
である。特に、Ｍ１６１抗原と癌抗原とを組み合わせて
用いる場合は別々に用いるよりも融合蛋白質として用い
る方が好ましい。サイトカインとしては、例えば、イン
ターフェロン−α，−βまたは−γ、インターロイキン
−１、２、３、６、８、１０、１２または１８、腫瘍壊
死因子（ＴＮＦ）、リンホトキシン、コロニー刺激因子
（ＣＳＦ）、エリスロポエチン、上皮増殖因子（ＥＧ
Ｆ）、繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）などが挙げられ、
なかでもインターフェロン−γ、インターロイキン−１
２またはインターロイキン−１８などが好ましい。さら
には、Ｍ１６１抗原と癌抗原とを組み合わせてなる医薬
および本発明の融合蛋白質またはその塩は、哺乳動物
（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネ
コ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サル、ヒトなど）の癌（例、
乳癌、前立腺癌、膵癌、胃癌、肺癌、大腸癌（結腸癌、
直腸癌、肛門癌）、食道癌、十二指腸癌、頭頚部癌（舌
癌、咽頭癌）、脳腫瘍、神経鞘腫、非小細胞肺癌、肺小
細胞癌、肝臓癌、腎臓癌、胆管癌、子宮癌（子宮体癌、
子宮頸癌）、卵巣癌、膀胱癌、皮膚癌、血管腫、悪性リ
ンパ腫、悪性黒色腫、甲状腺癌、骨腫瘍、血管腫、血管
線維腫、網膜肉腫、陰茎癌、小児固形癌、カポジ肉腫、
ＡＩＤＳに起因するカポジ肉腫、上顎洞腫瘍、線維性組
織球腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫など）、白血病などの
悪性腫瘍などの予防・治療剤として有用である。本発明
のＭ１６１抗原、癌抗原、本発明の融合蛋白質またはそ
の塩は、毒性が低く、安全である。

【００３４】本発明のＭ１６１抗原または融合蛋白質ま
たはその塩を含有してなる医薬組成物は、毒性が低く、
医薬製剤の製造法で一般的に用いられている自体公知の
手段に従って、Ｍ１６１抗原または本発明の融合蛋白質
またはその塩をそのままあるいは薬理学的に許容される
担体と混合して、例えば錠剤（糖衣錠、フィルムコーテ
ィング錠を含む）、散剤、顆粒剤、カプセル剤、（ソフ
トカプセルを含む）、液剤、注射剤、坐剤、徐放剤等の
医薬製剤として、経口的又は非経口的（例、局所、直
腸、静脈投与等）に安全に投与することができる。Ｍ１
６１抗原と癌抗原とを組み合わせて用いる場合、これら
の薬物を別々にあるいは同時に、製剤に製剤化し、医薬
組成物として経口的にまたは非経口的に投与することが
できる。薬物を別々に製剤化した場合、別々に製剤化し
たものを使用時に希釈剤などを用いて混合して投与する
ことができるが、別々に製剤化した個々の製剤を、同時
に、あるいは時間差をおいて別々に、同一対象に投与し
てもよい。別々に製剤化したものを使用時に希釈剤など
を用いて混合して投与するためのキット製品（例えば、
粉末状の個々の薬物を含有するアンプルと２種以上の薬
物を用時に混合して溶解するための希釈剤などを含有す
る注射用キットなど）、別々に製剤化した個々の製剤
を、同時に、あるいは時間差をおいて別々に、同一対象
に投与するためのキット製品（例えば、個々の薬物を含
有する錠剤を同一または別々の袋に入れ、必要に応じ、
薬物を投与する時間の記載欄を設けた、２種以上の錠剤
を同時にあるいは時間差をおいて別々に投与するための
錠剤用キットなど）なども本発明の医薬に含まれる。さ
らに、Ｍ１６１抗原を単独で製剤化したものを癌抗原を
保持している患者に投与し、癌抗原リッチな環境下にＭ
１６１抗原を併存せしめるような態様も本発明の医薬に
含まれる。本発明の医薬組成物の製造に用いられてもよ
い薬理学的に許容される担体としては、製剤素材として
慣用の各種有機あるいは無機担体物質が挙げられ、例え
ば固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤及び崩壊
剤、あるいは液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁
化剤、等張化剤、緩衝剤及び無痛化剤等が挙げられる。
更に必要に応じ、通常の防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘
味剤、吸着剤、湿潤剤等の添加物を適宜、適量用いるこ
ともできる。賦形剤としては、例えば乳糖、白糖、Ｄ−
マンニトール、デンプン、コーンスターチ、結晶セルロ
ース、軽質無水ケイ酸等が挙げられる。滑沢剤として
は、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カ
ルシウム、タルク、コロイドシリカ等が挙げられる。結
合剤としては、例えば結晶セルロース、白糖、Ｄ−マン
ニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロー
ス、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニル
ピロリドン、デンプン、ショ糖、ゼラチン、メチルセル
ロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等が挙
げられる。崩壊剤としては、例えばデンプン、カルボキ
シメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカル
シウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、Ｌ−ヒ
ドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。溶剤とし
ては、例えば注射用水、アルコール、プロピレングリコ
ール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油、オリー
ブ油等が挙げられる。溶解補助剤としては、例えばポリ
エチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ−マン
ニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミ
ノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭
酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。懸
濁化剤としては、例えばステアリルトリエタノールアミ
ン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオ
ン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼト
ニウム、モノステアリン酸グリセリン等の界面活性剤；
例えばポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、
カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロ
ース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチル
セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等の親水性
高分子等が挙げられる。等張化剤としては、例えばブド
ウ糖、 Ｄ−ソルビトール、塩化ナトリウム、グリセリ
ン、Ｄ−マンニトール等が挙げられる。緩衝剤として
は、例えばリン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩等の
緩衝液等が挙げられる。無痛化剤としては、例えばベン
ジルアルコール等が挙げられる。防腐剤としては、例え
ばパラヒドロキシ安息香酸エステル類、クロロブタノー
ル、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒ
ドロ酢酸、ソルビン酸等が挙げられる。抗酸化剤として
は、例えば亜硫酸塩、アスコルビン酸、α−トコフェロ
ール等が挙げられる。

【００３５】本発明の医薬組成物において、本発明のＭ
１６１抗原または本発明の融合蛋白質またはその塩の含
有量は、製剤の形態によって相違するが、通常、製剤全
体に対して約０．１〜１００重量％、好ましくは約１０
〜９９．９重量％、さらに好ましくは約２０〜９０重量
％程度である。Ｍ１６１抗原と癌抗原とを組み合わせて
用いる場合の癌抗原の含有量は製剤の形態によって相違
するが、通常、製剤全体に対して約１０〜９９．９重量
％、好ましくは約２０〜９０重量％程度である。本発明
の医薬組成物において、本発明のＭ１６１抗原または本
発明の融合蛋白質またはその塩以外の成分の含有量は、
製剤の形態によって相違するが、通常、製剤全体に対し
て約１０〜９９．９重量％、好ましくは約２０〜９０重
量％程度である。本発明の医薬組成物の投与量は、投与
ルート、症状、患者の年令などによっても異なるが、例
えば、癌を治療する目的で経口的に投与する場合、１日
当たり体重１ｋｇあたり本発明のＭ１６１抗原または本
発明の融合蛋白質またはその塩として約０．００５〜５
０ｍｇ，好ましくは約０．０５〜１０ｍｇ、さらに好ま
しくは約０．２〜４ｍｇを１〜３回に分割投与できる。

【００３６】本発明の医薬組成物は、本発明のＭ１６１
抗原、本発明の融合蛋白質またはその塩以外に、適宜、
他の医薬と適量配合して、または適量併用して使用する
こともできる。このような配合あるいは併用する為の医
薬（以下、併用薬ともいう）としては、例えば、癌の治
療に供することのできる種々の抗癌剤（本明細書中、本
発明のＭ１６１抗原もしくはその部分ペプチド、そのプ
ロドラッグまたはその塩を含有してなる抗癌剤と区別す
るため、便宜上「他の抗癌剤」と称することもある）が
挙げられる。具体的には、免疫抑制作用の低い医薬、例
えば、内分泌療法薬（ＬＨ−ＲＨアゴニストおよびアン
タゴニスト、性ホルモンアンタゴニスト、性ホルモン合
成阻害薬など）、癌に選択的なチロシンキナーゼなどの
遺伝子産物（ＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２／ｅｒｂ−２、Ｈ
ＥＲ３／ｅｒｂ−３、ＨＥＲ４／ｅｒｂ−４、ＰＤＧＦ
受容体、ＶＥＧＦ受容体など）を標的とした医薬、さら
には癌ワクチン療法薬などが挙げられる。癌ワクチン療
法薬としては、（１）腫瘍抗原またはそれに類する腫瘍
細胞由来のタンパク質、その部分ペプチドまたはこれら
を含む融合タンパク質、（２）これらタンパク質または
ペプチドをコードし、生体内で発現しうるＤＮＡ断片や
それを含有するリポソーム、（３）そのＤＮＡ断片を含
むウイルスまたはプラスミドなどが挙げられる。癌ワク
チン療法薬として用いることのできる腫瘍細胞由来のタ
ンパク質としては、例えば、メラノーマ関連抗原（例、
ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１０
０、チロシンキナーゼなど）、前立腺特異抗原（ＰＳ
Ａ）、ＨＥＲ２タンパク質、ＭＵＣ−１ムチン、ｈＣ
Ｇ、ガストリン、熱ショックタンパク質、ヒトパピロー
ママウスのＥ７タンパク質、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、
変異Ｒａｓ蛋白などが挙げられる。このように本発明の
医薬組成物は単剤として使用しても優れた抗癌作用を示
すが、さらに他の抗癌剤と併用（多剤併用）することに
よって、その効果をより一層増強させることができる。
その他、併用による利点として、互いの薬剤の使用量を
削減することが可能となり、これによって副作用が軽減
し、癌患者のクオリティー・オブ・ライフ：Quality of
Life（例えば、Performance Stasisや疼痛の軽減、浮
腫の抑制、食欲増進、体重増加など）を改善することに
も大きく貢献することが挙げられる。例えば、他の抗癌
剤を併用する場合、他の抗癌剤によって癌患者の癌発生
部位において癌細胞のアポトーシスを誘発させ癌抗原の
放出を誘導し、癌患者自身の生体内に本発明の癌抗原
（例、アポトーシス小体）を増加せしめ、さらにＭ１６
１抗原を投与、同環境下に併存せしめることによって樹
状細胞を活性化、抗原提示誘起およびサイトカイン産生
誘導させるとともにＣＴＬ等の細胞性免疫を誘導し、癌
の治療効果を増強させることが可能である。

【００３７】本発明の医薬組成物に併用し得る併用薬を
以下に具体的に例示する。該「ホルモン療法剤」として
は、例えば、ホスフェストロール、ジエチルスチルベス
トロール、クロロトリアニセリン、酢酸メドロキシプロ
ゲステロン、酢酸メゲストロール、酢酸クロルマジノ
ン、酢酸シプロテロン、ダナゾール、アリルエストレノ
ール、ゲストリノン、メパルトリシン、ラロキシフェ
ン、オルメロキフェン、レボルメロキシフェン、抗エス
トロゲン（例、クエン酸タモキシフェン、クエン酸トレ
ミフェンなど）、ピル製剤、メピチオスタン、テストロ
ラクトン、アミノグルテチイミド、ＬＨ−ＲＨアゴニス
ト（例、酢酸ゴセレリン、ブセレリン、リュープロレリ
ンなど）、ドロロキシフェン、エピチオスタノール、ス
ルホン酸エチニルエストラジオール、アロマターゼ阻害
薬（例、塩酸ファドロゾール、アナストロゾール、レト
ロゾール、エキセメスタン、ボロゾール、フォルメスタ
ンなど）、抗アンドロゲン（例、フルタミド、ビカルタ
ミド、ニルタミドなど）、５α-レダクターゼ阻害薬
（例、フィナステリド、エプリステリドなど）、副腎皮
質ホルモン系薬剤（例、デキサメタゾン、プレドニゾロ
ン、ベタメタゾン、トリアムシノロンなど）、アンドロ
ゲン合成阻害薬（例、アビラテロンなど）、レチノイド
およびレチノイドの代謝を遅らせる薬剤（例、リアロゾ
ールなど）などが挙げられる。

【００３８】該「化学療法剤」としては、例えばアルキ
ル化剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来抗癌剤
などが挙げられる。「アルキル化剤」としては、例え
ば、ナイトロジェンマスタード、塩酸ナイトロジェンマ
スタード−Ｎ−オキシド、クロラムブチル、シクロフォ
スファミド、イホスファミド、チオテパ、カルボコン、
トシル酸インプロスルファン、ブスルファン、塩酸ニム
スチン、ミトブロニトール、メルファラン、ダカルバジ
ン、ラニムスチン、リン酸エストラムスチンナトリウ
ム、トリエチレンメラミン、カルムスチン、ロムスチ
ン、ストレプトゾシン、ピポブロマン、エトグルシド、
カルボプラチン、シスプラチン、ミボプラチン、ネダプ
ラチン、オキサリプラチン、アルトレタミン、アンバム
スチン、塩酸ジブロスピジウム、フォテムスチン、プレ
ドニムスチン、プミテパ、リボムスチン、テモゾロミ
ド、トレオスルファン、トロフォスファミド、ジノスタ
チンスチマラマー、カルボコン、アドゼレシン、システ
ムスチン、ビゼレシンなどが挙げられる。「代謝拮抗
剤」としては、例えば、メルカプトプリン、６−メルカ
プトプリンリボシド、チオイノシン、メトトレキサー
ト、エノシタビン、シタラビン、シタラビンオクフォス
ファート、塩酸アンシタビン、５−ＦＵ系薬剤（例、フ
ルオロウラシル、テガフール、ＵＦＴ、ドキシフルリジ
ン、カルモフール、ガロシタビン、エミテフールな
ど）、アミノプテリン、ロイコボリンカルシウム、タブ
ロイド、ブトシン、フォリネイトカルシウム、レボフォ
リネイトカルシウム、クラドリビン、エミテフール、フ
ルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、ペ
ントスタチン、ピリトレキシム、イドキシウリジン、ミ
トグアゾン、チアゾフリン、アンバムスチンなどが挙げ
られる。「抗癌性抗生物質」としては、例えば、アクチ
ノマイシンＤ、アクチノマイシンＣ、マイトマイシン
Ｃ、クロモマイシンＡ３、塩酸ブレオマイシン、硫酸ブ
レオマイシン、硫酸ペプロマイシン、塩酸ダウノルビシ
ン、塩酸ドキソルビシン、塩酸アクラルビシン、塩酸ピ
ラルビシン、塩酸エピルビシン、ネオカルチノスタチ
ン、ミスラマイシン、ザルコマイシン、カルチノフィリ
ン、ミトタン、塩酸ゾルビシン、塩酸ミトキサントロ
ン、塩酸イダルビシンなどが挙げられる。「植物由来抗
癌剤」としては、例えば、エトポシド、リン酸エトポシ
ド、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビ
ンデシン、テニポシド、パクリタキセル、ドセタクセ
ル、ビノレルビンなどが挙げられる。

【００３９】該「免疫療法剤（ＢＲＭ）」としては、例
えば、ピシバニール、クレスチン、シゾフィラン、レン
チナン、ウベニメクス、インターフェロン、インターロ
イキン、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球コロ
ニー刺激因子、エリスロポイエチン、リンホトキシン、
ＢＣＧワクチン、コリネバクテリウムパルブム、レバミ
ゾール、ポリサッカライドＫ、プロコダゾールなどが挙
げられる。該「細胞増殖因子ならびにその受容体の作用
を阻害する薬剤」における、「細胞増殖因子」として
は、細胞の増殖を促進する物質であればどのようなもの
でもよく、通常、分子量が２０,０００以下のペプチド
で、受容体との結合により低濃度で作用が発揮される因
子が挙げられ、具体的には、（1）ＥＧＦ（epidermalgr
owth factor）またはそれと実質的に同一の活性を有す
る物質〔例、ＥＧＦ、ハレグリン（ＨＥＲ２リガンド）
など〕、（2）インシュリンまたはそれと実質的に同一
の活性を有する物質〔例、インシュリン、IＧＦ（insul
in-like growthfactor）−１、IＧＦ−２など〕、（3）
ＦＧＦ（fibroblast growth factor）またはそれと実質
的に同一の活性を有する物質〔例、酸性ＦＧＦ、塩基性
ＦＧＦ、ＫＧＦ（keratinocyte growth factor）、 Ｆ
ＧＦ-１０など〕、（4）その他の細胞増殖因子〔例、Ｃ
ＳＦ（colony stimulating factor）、ＥＰＯ（erythro
poietin)、ＩＬ−２（interleukin-2）、ＮＧＦ(nerve
growth factor)、ＰＤＧＦ（platelet-derived growth
factor）、ＴＧＦβ（transforming growth factor
β）、ＨＧＦ（hepatocyte growth factor）、ＶＥＧＦ
（vascular endothelial growth factor）など〕などが
挙げられる。該「細胞増殖因子の受容体」としては、上
記の細胞増殖因子と結合能を有する受容体であればいか
なるものであってもよく、具体的には、ＥＧＦ受容体、
ハレグリン受容体（ＨＥＲ２）、インシュリン受容体−
１、インシュリン受容体−２、 IＧＦ受容体、ＦＧＦ受
容体−１またはＦＧＦ受容体−２などが挙げられる。該
「細胞増殖因子の作用を阻害する薬剤」としては、ハー
セプチン（ＨＥＲ２レセプター抗体）やグリベック（メ
シル酸イマチニブ）、イレッサ（ゲフィチニブ、ZD183
9）、その他チロシンキナーゼ阻害作用を有するオキサ
ゾール誘導体などの複素環化合物（特開2001-34838
5）：例えば１−（４−｛４−［（２−｛（Ｅ）−２−
［４−（トリフルオロメチル）フェニル］エテニル｝−
１，３−オキサゾール−４−イル）メトキシ］フェニ
ル｝ブチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、１−
（３−｛３−［（２−｛（Ｅ）−２−［４−（トリフル
オロメチル）フェニル］エテニル｝−１，３−オキサゾ
ール−４−イル）メトキシ］フェニル｝プロピル）−１
Ｈ−１，２，３−トリアゾール、３−（１−｛４−［４
−（｛２−［（Ｅ）−２−（２，４−ジフルオロフェニ
ル）エテニル］−１，３−オキサゾール−４−イル｝メ
トキシ）フェニル］ブチル｝−１Ｈ−イミダゾール−２
−イル）−１，２−プロパンジオールまたはそれらの塩
等のチロシンキナーゼ阻害剤が挙げられる。塩として
は、薬学的に許容される塩が好ましく、例えば無機塩基
との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との
塩、塩基性または酸性アミノ酸との塩等が挙げられる。
無機塩基との塩の好適な例としては、例えばナトリウム
塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マ
グネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アルミニウム
塩；アンモニウム塩等が挙げられる。有機塩基との塩の
好適な例としては、例えばトリメチルアミン、トリエチ
ルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジ
エタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘ
キシルアミン、Ｎ,Ｎ'-ジベンジルエチレンジアミン等
との塩が挙げられる。無機酸との塩の好適な例として
は、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等と
の塩が挙げられる。有機酸との塩の好適な例としては、
例えばギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマール酸、シ
ュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リ
ンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、p-ト
ルエンスルホン酸等との塩が挙げられる。塩基性アミノ
酸との塩の好適な例としては、例えばアルギニン、リジ
ン、オルニチン等との塩が挙げられ、酸性アミノ酸との
塩の好適な例としては、例えばアスパラギン酸、グルタ
ミン酸等との塩が挙げられる。前記の薬剤の他に、Ｌ−
アスパラギナーゼ、アセグラトン、塩酸プロカルバジ
ン、プロトポルフィリン・コバルト錯塩、水銀ヘマトポ
ルフィリン・ナトリウム、トポイソメラーゼ１Ｉ阻害薬
（例、イリノテカン、トポテカンなど）、トポイソメラ
ーゼＩＩ阻害薬（例えば、ソブゾキサンなど）、分化誘
導剤（例、レチノイド、ビタミンＤ類など）、血管新生
阻害薬、α−ブロッカー（例、塩酸タムスロシンな
ど）、癌抗原、ＤＮＡ、レクチン、糖質、脂質なども用
いることができる。

【００４０】本発明のＭ１６１抗原、本発明の融合蛋白
質またはその塩（以下、本発明のＭ１６１抗原等と略称
する場合がある）と併用薬との併用に際しては、本発明
のＭ１６１抗原等と併用薬の投与時期は限定されず、本
発明のＭ１６１抗原等と併用薬とを、投与対象に対し、
同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよ
い。併用薬の投与量は、臨床上用いられている投与量に
準ずればよく、投与対象、投与ルート、疾患、組み合わ
せ等により適宜選択することができる。本発明のＭ１６
１抗原等と併用薬の投与形態は、特に限定されず、投与
時に、本発明のＭ１６１抗原等と併用薬とが組み合わさ
れていればよい。このような投与形態としては、例え
ば、（１）本発明のＭ１６１抗原等と併用薬とを同時に
製剤化して得られる単一の製剤の投与、（２）本発明の
Ｍ１６１抗原等と併用薬とを別々に製剤化して得られる
２種の製剤の同一投与経路での同時投与、（３）本発明
のＭ１６１抗原等と併用薬とを別々に製剤化して得られ
る２種の製剤の同一投与経路での時間差をおいての投
与、（４）本発明のＭ１６１抗原等と併用薬とを別々に
製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での同
時投与、（５）本発明のＭ１６１抗原等と併用薬とを別
々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路で
の時間差をおいての投与（例えば、本発明のＭ１６１抗
原等→併用薬の順序での投与、あるいは逆の順序での投
与）などが挙げられる。以下、これらの投与形態をまと
めて、本発明の併用剤と略記する。特に、癌の予防、治
療を目的とする場合には抗癌性併用剤ともいう。

【００４１】本発明の併用剤は、毒性が低く、例えば、
本発明のＭ１６１抗原または（および）上記併用薬を自
体公知の方法に従って、薬理学的に許容される担体と混
合して医薬組成物とすることができる。本発明の併用剤
の製造に用いられてもよい薬理学的に許容される担体と
しては、前記した本発明の医薬組成物に使用されるもの
と同様のものを使用することができる。本発明のＭ１６
１抗原等および併用薬とを同時に製剤化して単剤として
使用する場合、本発明の併用剤における本発明のＭ１６
１抗原等の含有量は、製剤の形態によって相違するが、
通常、製剤全体に対して約０．１〜１００重量％、好ま
しくは約１０〜９９．９重量％、さらに好ましくは約２
０〜９０重量％程度である。また、本発明の併用剤にお
ける併用薬の含有量は、製剤の形態によって相違する
が、通常、製剤全体に対して約０．１〜１００重量％、
好ましくは約１０〜９９．９重量％、さらに好ましくは
約２０〜９０重量％程度である。本発明の併用剤におい
て、本発明のＭ１６１抗原および併用薬以外の成分の含
有量は、製剤の形態によって相違するが、通常、製剤全
体に対して約１０〜９９．９重量％、好ましくは約２０
〜９０重量％程度である。本発明の併用剤における本発
明のＭ１６１抗原等と併用薬との配合比は、投与対象、
投与ルート、疾患等により適宜選択することができる。
本発明の併用剤の投与量は、本発明のＭ１６１抗原等お
よび併用薬の種類、投与ルート、症状、患者の年令など
によっても異なるが、例えば、癌を治療する目的で経口
的に投与する場合、１日当たり体重１ｋｇあたり本発明
のＭ１６１抗原等および併用薬として約０．００５〜５
０ｍｇ，好ましくは約０．０５〜１０ｍｇ、さらに好ま
しくは約０．２〜４ｍｇを１〜３回に分割投与できる。

【００４２】本発明のＭ１６１抗原等および併用薬物を
それぞれ別々に製剤化する場合も同様の含有量でよい。
本発明のＭ１６１抗原等と併用薬をそれぞれ別々に製剤
化して併用投与するに際しては、本発明のＭ１６１抗原
等と併用薬を含有する医薬組成物とを同時期に投与して
もよいが、併用薬を含有する医薬組成物を先に投与した
後、本発明のＭ１６１抗原等を含有する医薬組成物を投
与してもよいし、本発明のＭ１６１抗原等を含有する医
薬組成物を先に投与し、その後で併用薬を含有する医薬
組成物を投与してもよい。時間差をおいて投与する場
合、時間差は投与する有効成分、剤形、投与方法により
異なるが、例えば、併用薬を含有する医薬組成物を先に
投与する場合、併用薬を含有する医薬組成物を投与した
後１分〜３日以内、好ましくは１０分〜１日以内、より
好ましくは１５分〜１時間以内に本発明のＭ１６１抗原
等を含有する医薬組成物を投与する方法が挙げられる。
本発明のＭ１６１抗原等を含有する医薬組成物を先に投
与する場合、本発明のＭ１６１抗原等を含有する医薬組
成物を投与した後、１分〜１日以内、好ましくは１０分
〜６時間以内、より好ましくは１５分から１時間以内に
併用薬を含有する医薬組成物を投与する方法が挙げられ
る。

【００４３】さらに、本発明の医薬組成物または併用剤
は、例えば（１）手術、（２）遺伝子療法、（３）アン
ジオテンシンIIなどを用いる昇圧化学療法、（４）温熱
療法、（５）凍結療法、（６）レーザー焼灼法、（７）
放射線療法などの前または後、あるいはこれら２〜３種
を組み合わせた治療の前または後に使用することができ
る。この方法によって、耐性発現の阻止、無病期（Dise
ase-Free Survival）の延長、癌転移あるいは再発の抑
制、延命などの効果が得られる。また、本発明の医薬組
成物または併用剤による治療と、支持療法〔(i)各種感
染病の併発に対する抗生物質（例えば、パンスポリンな
どのβ−ラクタム系、クラリスロマイシンなどのマクロ
ライド系など）の投与、(ii)栄養障害改善のための高カ
ロリー輸液、アミノ酸製剤、総合ビタミン剤の投与、(i
ii)疼痛緩和のためのモルヒネ投与、(iv)悪心、嘔吐、
食欲不振、下痢、白血球減少、血小板減少、ヘモグロビ
ン濃度低下、脱毛、肝障害、腎障害、ＤＩＣ、発熱など
のような副作用を改善する薬剤の投与および(v)癌の多
剤耐性を抑制するための薬剤の投与など〕を組み合わせ
ることもできる。前記の処置を施す前または施した後
に、本発明の医薬組成物または併用剤を経口投与（徐放
性を含む）、静脈内投与（bolus、infusion、包接体を
含む）、皮下および筋注（bolus、infusion、徐放性を
含む）、経皮、腫瘍内および近位投与によって投与する
のが好ましい。 （１）手術、（２）アンジオテンシンIIなどを用いる昇
圧化学療法、（３）遺伝子療法、（４）温熱療法、
（５）凍結療法、（６）レーザー焼灼法、（７）放射線
療法の前に本発明の医薬組成物または併用剤を投与する
場合の時期としては、例えば、手術等の前、約１０分〜
約２４時間以内である。手術等の後に本発明の医薬組成
物または併用剤を投与する場合の時期としては、例え
ば、手術等の後、約１０分〜約２４時間以内である。

【００４４】また、本発明のＭ１６１抗原と癌抗原とを
組み合わせてなる医薬は、上記の本発明の併用剤におけ
る「併用薬」を「癌抗原」に代えて同様に製造し、使用
することができる。さらに、本発明のＭ１６１抗原と癌
抗原とを組み合わせてなる医薬に上記の併用薬を併用す
ることもできる。以下に、本発明の医薬の好ましい態様
について一例を挙げて説明する。例えば、治療対象とす
る癌が、乳癌、卵巣癌などであればチロシンキナーゼ活
性を有する受容体型蛋白質であるＨＥＲ２が過剰発現し
ている場合が多い。このようなＨＥＲ２陽性の患者に対
してはＨＥＲ２を癌抗原として用い、Ｍ１６１抗原と組
み合わせて投与することが考えられる。癌抗原として用
いるＨＥＲ２はアポトーシス小体として用いるのが好ま
しい。ＨＥＲ２陽性患者に対し、適量のＭ１６１抗原お
よびＨＥＲ２を投与することにより、樹状細胞が活性
化、抗原提示誘起およびサイトカイン産生が誘導される
とともに、ＣＴＬ等の細胞性免疫が誘導される。かかる
抗癌免疫療法に合わせて、チロシンキナーゼ阻害剤など
の併用薬を投与すればより効率的に癌を治療することが
できる。また、併用薬を癌抗原に代えて使用する例とし
ては、上記ＨＥＲ２陽性癌に、ＨＥＲ２の阻害薬（例え
ば、ＨＥＲ２のチロシンキナーゼ阻害薬など）を併用薬
として用いる。これによりＨＥＲ２陽性腫瘍に選択的に
細胞死を誘導でき、患者の生体内で効率的にＨＥＲ２陽
性腫瘍から癌抗原の放出を誘導できる。この癌抗原と適
量に投与されたＭ１６１抗原またはその塩により樹状細
胞が活性化、抗原提示誘起およびサイトカイン産性が誘
導されるとともに、ＣＴＬ等の細胞性免疫が誘導され
る。

【００４５】本発明のＭ１６１抗原もしくはその部分ペ
プチドまたはその塩（以下、本発明のＭ１６１抗原と略
記する）と癌抗原、さらに所望により樹状細胞（好まし
くは、未成熟樹状細胞）、マクロファージなどの活性化
抗原提示細胞（好ましくは、ＴＬＲ２および／またはβ
２インテグリンを発現した細胞）を用いることによっ
て、抗癌作用を有する物質（Ｘ）；具体的には 本発明のＭ１６１抗原に作用し、Ｍ１６１抗原の活性
を増強する物質（物質Ｘ１）、 サイトカインの誘導を促進する物質（物質Ｘ２）、 ＣＴＬの誘導を促進する物質（物質Ｘ３）、および／
または Th1細胞の誘導を促進する物質（物質Ｘ４） などをスクリーニングすることができ、さらに、Ｍ１６
１抗原、癌抗原および未成熟樹状細胞を用いることによ
って、 未成熟樹状細胞の成熟化を誘導する物質（物質Ｘ
５）、および／または （樹状細胞の）貪食を促進する物質（物質Ｘ６） などをスクリーニングすることができる。また、(i)Ｍ
１６１抗原、(ii)癌抗原および(iii)ＴＬＲ２および／
またはβ２インテグリンなどの受容体発現細胞（例、未
成熟樹状細胞など）を用いることによって、 ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンを活性化さ
せる物質（物質Ｘ７）、 Ｍ１６１抗原および癌抗原と、ＴＬＲ２および／また
はβ２インテグリンとの結合性を変化させる（阻害また
は促進する）物質（物質Ｘ８） などをスクリーニングすることができる。

【００４６】すなわち、本発明は、〔１〕標識化したＭ
１６１抗原および癌抗原を、ＴＬＲ２および／またはβ
２インテグリンに接触させた場合と、標識化したＭ１６
１抗原、癌抗原および被験化合物をＴＬＲ２および／ま
たはβ２インテグリンに接触させた場合における、標識
化したＭ１６１抗原のＴＬＲ２および／またはβ２イン
テグリンに対する結合量を測定し、比較することを特徴
とする、物質Ｘ（例、Ｘ７、Ｘ８）のスクリーニング方
法、〔２〕ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンを
発現した細胞（例、未成熟樹状細胞、ＴＨＰ−１細胞、
マクロファージ）またはその膜画分に標識化したＭ１６
１抗原および癌抗原を接触させた場合と、ＴＬＲ２およ
び／またはβ２インテグリンを発現した細胞またはその
膜画分に標識化したＭ１６１抗原、癌抗原および被験化
合物を接触させた場合における、標識化したＭ１６１抗
原のＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンに対する
結合量を測定し、比較することを特徴とする、物質Ｘ
（例、Ｘ７、Ｘ８）のスクリーニング方法、および
〔３〕ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンを発現
した細胞にＭ１６１抗原および癌抗原を接触させた場合
と、ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンを発現し
た細胞にＭ１６１抗原、癌抗原および被験化合物を接触
させた場合における、ＴＬＲ２および／またはβ２イン
テグリンを介した細胞刺激活性（例、サイトカインの産
生誘導促進作用、未成熟樹状細胞の成熟化、貧食促進作
用、ＣＴＬ誘導作用、Th1細胞誘導作用）を測定し、比
較することを特徴とする、物質Ｘ１〜Ｘ８のスクリーニ
ング方法を提供する。

【００４７】本発明のスクリーニング方法の具体的な説
明を以下にする。まず、本発明のスクリーニング方法に
用いるＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンなどの
受容体（以下、受容体と略記する場合がある）として
は、公知の受容体を用いることができる。受容体は、自
体公知の手法を用いて、温血動物の組織や臓器から抽出
することもできる。しかし、ヒト由来の臓器は入手が極
めて困難なことから、スクリーニングに用いられるもの
としては、遺伝子組換技術を用いて大量発現させた受容
体が適している。具体的には、ヒトＴＬＲ２を製造する
には、例えば、ヒトのＴＬＲ２をコードするＤＮＡ（Ｒ
ｏｃｋ、Ｆ．Ｌ．ら, プロシーディング・オブ・ナショ
ナル・アカデミー・オブ・サイエンス・Ｕ．Ｓ．Ａ．
（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．
Ａ．）、 ９５巻、５８８〜５９３、１９９８年；Ｇｅ
ｎＢａｂｋ ＡＡＣ３４１３３）を哺乳動物や昆虫細胞
で発現することにより行うことができる。目的とする受
容体をコードするＤＮＡ断片には、通常、相補ＤＮＡが
用いられるが、必ずしもこれに制約されるものではな
く、例えば、遺伝子断片や合成ＤＮＡを用いてもよい。
受容体をコードするＤＮＡ断片を宿主動物細胞に導入
し、それらを効率よく発現させるためには、該ＤＮＡ断
片を昆虫を宿主とするバキュロウイルスに属する核多角
体病ウイルス（ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓ
ｉｓ ｖｉｒｕｓ；ＮＰＶ）のポリヘドリンプロモータ
ー、ＳＶ４０由来のプロモーター、レトロウイルスのプ
ロモーター、メタロチオネインプロモーター、ヒト・ヒ
ートショツクプロモーター、サイトメガロウイルスプロ
モーター、ＳＲαプロモーターなどの下流に組み込むの
が好ましい。発現した受容体の量と質の検査はそれ自体
公知の方法で行うことができる。例えば、文献〔Ｎａｍ
ｂｉ．Ｐ．ら、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル
・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．），２６７
巻，１９５５５〜１９５５９頁，１９９２年〕に記載の
方法に従って行うことができる。したがって、本発明の
スクリーニング方法において、受容体としては、それ自
体公知の方法に従って精製した受容体であってもよい
し、受容体を含有する細胞またはその膜画分を用いても
よい。本発明のスクリーニング方法において、受容体を
含有する細胞を用いる場合、該細胞をグルタルアルデヒ
ド、ホルマリンなどで固定化してもよい。固定化方法は
それ自体公知の方法に従って行うことができる。

【００４８】受容体を含有する細胞としては、受容体を
発現した宿主細胞をいうが、該宿主細胞としては、大腸
菌、枯草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが挙げられ
る。膜画分としては、細胞を破砕した後、それ自体公知
の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをい
う。細胞の破砕方法としては、Ｐｏｔｔｅｒ−Ｅｌｖｅ
ｈｊｅｍ型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワー
リングブレンダーやポリトロン（Ｋｉｎｅｌｌｍａｔｉ
ｃａ社製）のよる破砕、超音波による破砕、フレンチプ
レスなどで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させ
ることによる破砕などが挙げられる。細胞膜の分画に
は、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力
による分画法が主として用いられる。例えば、細胞破砕
液を低速（５００から３０００ｒｐｍ）で短時間（通
常、約１から１０分）遠心し、上清をさらに高速（１５
０００から３００００ｒｐｍ）で通常３０分から２時間
遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中に
は、発現した受容体と細胞由来のリン脂質や膜部分ペプ
チドなどの膜成分が多く含まれる。受容体を含有する細
胞や膜画分中の受容体の量は、１細胞当たり１０^２から
１０^８分子であるのが好ましく、１０^５から１０^７分子
であるのが好適である。なお、発現量が多いほど細胞抽
出物または膜画分当たりのＭ１６１抗原との結合活性
（比活性）が高くなり、高感度なスクリーニング系の構
築が可能になるばかりでなく、同一ロットで大量の試料
を測定できるようになる。

【００４９】物質Ｘ７またはＸ８をスクリーニングする
前記の〔１〕または〔２〕を実施するためには、適当な
受容体画分と、標識化したＭ１６１抗原、および適当な
癌抗原が必要である。受容体画分としては、天然型の受
容体画分か、またはそれと同等の活性を有する組換え型
受容体画分などが望ましい。ここで、同等の活性とは、
Ｍ１６１抗原に対する同等の結合活性などを示す。標識
化したＭ１６１抗原としては、例えば、〔^３Ｈ〕、〔
^１２５Ｉ〕、〔^１４Ｃ〕、〔^１３５Ｓ〕などで標識化さ
れたＭ１６１抗原などを利用することができる。

【００５０】具体的には、本発明のＭ１６１抗原と受容
体との結合性を変化させる（阻害または促進する）化合
物のスクリーニングを行うには、まず、受容体を含有す
る細胞またはその膜画分を、スクリーニングに適した緩
衝液に懸濁することにより受容体標品を調製する。緩衝
液には、ｐＨ４から１０（望ましくはｐＨ６から８）の
リン酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝液などのＭ１６１抗原
と受容体との結合を阻害しない緩衝液であればいずれで
もよい。また、非特異的結合を低減させる目的で、ＣＨ
ＡＰＳ、Ｔｗｅｅｎ−８０（商品名）（花王−アトラス
社製）、ジギトニン、デオキシコレートなどの界面活性
剤を緩衝液に加えることもできる。さらに、プロテアー
ゼによる受容体やＭ１６１抗原の分解を抑える目的でＰ
ＭＳＦ、ロイペプチン、Ｅ−６４（ペプチド研究所
製）、ペプスタチンなどのプロテアーゼ阻害剤を添加す
ることもできる。例えば、０．０１から１０ｍｌのＭ１
６１抗原受容体溶液に、一定量（５０００から５０００
００ｃｐｍ）の標識化したＭ１６１抗原および適当な癌
抗原を添加し、同時に１０^−４から１０^−１０Ｍの試験
化合物を共存させる。非特異的結合量（ＮＳＢ）を知る
ために大過剰の未標識のＭ１６１抗原を加えた反応チュ
ーブも用意する。反応は０から５０℃、望ましくは４か
ら３７℃で２０分から２４時間、望ましくは３０分から
３時間行う。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量
の同緩衝液で洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放
射活性を液体シンチレーションカウンターまたはγ−カ
ウンターで計測する。拮抗する物質がない場合のカウン
ト（Ｂ_０）から非特異的結合量（ＮＳＢ）を引いたカウ
ント（Ｂ_０―ＮＳＢ）を１００％とした時、特異的結合
量（Ｂ−ＮＳＢ）が例えば５０％以下になる試験化合物
を拮抗阻害能力のある候補物質として選択することがで
き、一方、特異的結合量（Ｂ−ＮＳＢ）が例えば１５０
％以上になる被験化合物を結合促進能力のある候補化合
物として選択することができる。

【００５１】物質Ｘ１〜Ｘ８（特に物質Ｘ１〜Ｘ７）を
スクリーニングする前記の〔３〕の方法を実施するため
には、例えば、受容体を介する細胞刺激活性（例えば、
サイトカイン誘導作用、未成熟樹状細胞の成熟化誘導作
用、貧食促進作用、腫瘍免疫機構の活性化作用、ＣＴＬ
誘導作用、Th1細胞誘導作用、アラキドン酸遊離、アセ
チルコリン遊離、細胞内Ｃａ^２＋遊離、細胞内ｃＡＭＰ
生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、
細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓ
の活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制す
る活性など）を公知の方法または市販の測定用キットを
用いて測定することができる。具体的には、まず、受容
体を含有する細胞をマルチウェルプレート等に培養す
る。スクリーニングを行なうにあたっては前もって新鮮
な培地あるいは細胞に毒性を示さない適当なバッファー
に交換し、試験化合物などを添加して一定時間インキュ
ベートした後、細胞を抽出あるいは上清液を回収して、
生成した産物をそれぞれの方法に従って定量する。細胞
刺激活性の指標とする物質（例えば、アラキドン酸な
ど）の生成が、細胞が含有する分解酵素によって検定困
難な場合は、該分解酵素に対する阻害剤を添加してアッ
セイを行なってもよい。また、ｃＡＭＰ産生抑制などの
活性については、フォルスコリンなどで細胞の基礎的産
生量を増大させておいた細胞に対する産生抑制作用とし
て検出することができる。細胞刺激活性を測定してスク
リーニングを行なうには、適当な受容体を発現した細胞
が必要である。受容体を発現した細胞としては、天然型
の受容体を有する細胞株（例、未成熟樹状細胞）、上記
の組換え型受容体を発現した細胞株などが望ましい。物
質Ｘ１〜Ｘ８の分類は、Ｍ１６１抗原に作用するか（物
質Ｘ１）、受容体に作用するか（物質Ｘ７〜８）、また
は受容体発現細胞またはそれにより誘導される細胞性免
疫系に作用するか（物質Ｘ２〜６）で区別することがで
きる。試験化合物としては、例えば、ペプチド、蛋白、
非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽
出液、植物抽出液、動物組織抽出液などが用いられ、こ
れら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化
合物であってもよい。

【００５２】物質Ｘ（例、Ｘ１〜８）のスクリーニング
用キットは、Ｍ１６１抗原、癌抗原、および受容体を含
有する細胞または受容体を含有する細胞の抽出画分を含
有するものである。本発明のスクリーニング用キットの
例としては、次のものが挙げられる。 １．スクリーニング用試薬 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液 Hanks' Balanced Salt Solution（ギブコ社製）に、０.
０５％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたも
の。孔径０.４５μｍのフィルターで濾過滅菌し、４℃
で保存するか、あるいは用時調製しても良い。 受容体標品 受容体を発現させたＣＨＯ細胞を、１２穴プレートに５
×１０⁵個／穴で継代し、３７℃、５％ＣＯ_２、９５％
ａｉｒで２日間培養したもの。 標識リガンド 市販の〔^３Ｈ〕、〔^１２５Ｉ〕、〔^１４Ｃ〕、
〔^３５Ｓ〕などで標識したＭ１６１抗原。水溶液の状態
のものを４℃あるいは−２０℃にて保存し、用時に測定
用緩衝液にて１μＭに希釈する。 リガンド標準液 Ｍ１６１抗原を０.１％ウシ血清アルブミン（シグマ社
製）を含むＰＢＳで１ｍＭとなるように溶解し、−２０
℃で保存する。

【００５３】２．測定法 １２穴組織培養用プレートにて培養した受容体発現Ｃ
ＨＯ細胞を、測定用緩衝液１ｍｌで２回洗浄した後、４
９０μｌの測定用緩衝液を各穴に加える。 １０^−３〜１０^−１０Ｍの試験化合物溶液を５μｌ加
えた後、標識リガンドを５μｌ加え、さらに癌抗原を適
量加える。室温にて１時間反応させる。非特異的結合量
を知るためには試験化合物の代わりに１０^−３Ｍのリガ
ンドを５μｌ加えておく。 反応液を除去し、１ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗浄す
る。細胞に結合した標識リガンドを０.２Ｎ ＮａＯＨ
−１％ＳＤＳで溶解し、４ｍｌの液体シンチレーターＡ
（和光純薬製）と混合する。 液体シンチレーションカウンター（ベックマン社製）
を用いて放射活性を測定し、Percent Maximum Binding
（ＰＭＢ）を次の式で求める。 ＰＭＢ＝［（Ｂ−ＮＳＢ）／（Ｂ_０−ＮＳＢ）］×１０
０ ＰＭＢ：Percent Maximum Binding Ｂ ：検体を加えた時の値 ＮＳＢ：Non-specific Binding（非特異的結合量） Ｂ_０ ：最大結合量

【００５４】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる物質は、前記したと
おり、抗癌作用を有する物質（Ｘ）、具体的には 本発明のＭ１６１抗原に作用し、Ｍ１６１抗原の活性
を増強する物質（物質Ｘ１）、 サイトカインの誘導を促進する物質（物質Ｘ２）、 ＣＴＬの誘導を促進する物質（物質Ｘ３）、 Th1細胞の誘導を促進する物質（物質Ｘ４）、 未成熟樹状細胞の成熟化を誘導する物質（物質Ｘ
５）、 （樹状細胞の）貪食を促進する物質（物質Ｘ６）、 ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンを活性化さ
せる物質（物質Ｘ７）、 Ｍ１６１抗原および癌抗原と、ＴＬＲ２および／また
はβ２インテグリンとの結合性を変化させる（特に、促
進する）物質（物質Ｘ８） などである。該物質としては、ペプチド、蛋白、非ペプ
チド性化合物、合成化合物、発酵生産物などが挙げら
れ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公
知の化合物であってもよい。該物質の塩としては、前記
した本発明の融合蛋白質の塩と同様のものが用いられ
る。

【００５５】本発明のスクリーニング方法で得られた物
質Ｘ（例、Ｘ１〜Ｘ８）を含有する医薬組成物は、哺乳
動物に対して、安全な貧食促進剤、サイトカイン誘導促
進剤、未成熟樹状細胞の成熟化誘導剤、ＣＴＬ誘導剤、
Th1細胞誘導剤などとして有用である。さらには、癌
（例、乳癌、前立腺癌、膵癌、胃癌、肺癌、大腸癌（結
腸癌、直腸癌、肛門癌）、食道癌、十二指腸癌、頭頚部
癌（舌癌、咽頭癌）、脳腫瘍、神経鞘腫、非小細胞肺
癌、肺小細胞癌、肝臓癌、腎臓癌、胆管癌、子宮癌（子
宮体癌、子宮頸癌）、卵巣癌、膀胱癌、皮膚癌、血管
腫、悪性リンパ腫、悪性黒色腫、甲状腺癌、骨腫瘍、血
管腫、血管線維腫、網膜肉腫、陰茎癌、小児固形癌、カ
ポジ肉腫、ＡＩＤＳに起因するカポジ肉腫、上顎洞腫
瘍、線維性組織球腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫など）、
白血病などの悪性腫瘍の予防・治療剤として有用であ
る。これらの物質Ｘを含有する医薬組成物は、前記した
本発明の融合蛋白質を含有する医薬組成物と同様にして
製造でき、使用することができる。また、上記物質Ｘ１
〜Ｘ８とは反対の作用を有する物質： Ｍ１６１抗原に作用し、Ｍ１６１抗原の活性を減弱す
る物質（物質Ｙ１）、 サイトカインの誘導を阻害する物質（物質Ｙ２）、 ＣＴＬの誘導を阻害する物質（物質Ｙ３）、 Th1細胞の誘導を阻害する物質（物質Ｙ４）、 未成熟樹状細胞の成熟化を阻害する物質（物質Ｙ
５）、 （樹状細胞の）貪食を阻害する物質（物質Ｙ６）、 ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンの活性を阻
害させる物質（物質Ｙ７）、 Ｍ１６１抗原および癌抗原と、ＴＬＲ２および／また
はβ２インテグリンとの結合性を変化させる（特に、阻
害する）物質（物質Ｙ８） もスクリーニングすることができるが、そのような物質
は下記の物質ＢおよびＣ１と同様にして用いることがで
きる。

【００５６】本発明の融合蛋白質またはその塩（以下、
本発明の融合蛋白質と略記する）と、ＴＬＲ２および／
またはβ２インテグリンなどの受容体とを用いることに
よって、 （１）本発明の融合蛋白質の作用を増強する物質
（Ａ）： 本発明の融合蛋白質に作用し、本発明の融合蛋白質と
ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンなどの受容体
との結合を促進する物質（物質Ａ１）、 本発明の融合蛋白質を活性化する物質（物質Ａ２）、
（２）本発明の融合蛋白質の作用を減弱する物質
（Ｂ）： 本発明の融合蛋白質に作用し、本発明の融合蛋白質と
ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンなどの受容体
との結合を阻害する物質（物質Ｂ１）、 本発明の融合蛋白質を不活化する物質（物質Ｂ２）、
（３）（ｉ）本発明の融合蛋白質と（ii）ＴＬＲ２およ
び／またはβ２インテグリンなどの受容体との結合性を
変化させる物質（Ｃ）： アンタゴニスト（物質Ｃ１）、 アゴニスト（物質Ｃ２）、などをスクリーニングする
ことができる。

【００５７】すなわち、本発明は、〔１〕標識した本発
明の融合蛋白質をＴＬＲ２および／またはβ２インテグ
リンに接触させた場合と、標識した本発明の融合蛋白質
および被験化合物をＴＬＲ２および／またはβ２インテ
グリンに接触させた場合における、標識した本発明の融
合蛋白質のＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンに
対する結合量を測定し、比較することを特徴とする、物
質Ａ，ＢまたはＣのスクリーニング方法、〔２〕ＴＬＲ
２および／またはβ２インテグリンを発現した細胞
（例、ＴＨＰ−１細胞、マクロファージ）またはその膜
画分に標識した本発明の融合蛋白質を接触させた場合
と、ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンを発現し
た細胞またはその膜画分に本発明の融合蛋白質および被
験化合物を接触させた場合における、本発明の融合蛋白
質のＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンに対する
結合量を測定し、比較することを特徴とする、物質Ａ、
ＢまたはＣのスクリーニング方法、および〔３〕ＴＬＲ
２および／またはβ２インテグリンを発現した細胞に本
発明の融合蛋白質を接触させた場合と、ＴＬＲ２および
／またはβ２インテグリンを発現した細胞に本発明の融
合蛋白質および被験化合物を接触させた場合における、
ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンを介した細胞
刺激活性（例、サイトカインの産生誘導作用、未成熟樹
状細胞の成熟化、貧食促進作用、ＣＴＬ誘導作用、Th1
細胞誘導作用）を測定し、比較することを特徴とする、
物質Ａ、ＢまたはＣのスクリーニング方法を提供する。

【００５８】本発明のスクリーニング方法の具体的な説
明を以下にする。まず、本発明のスクリーニング方法に
用いるＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンなどの
受容体（以下、受容体と略記する場合がある）として
は、公知の受容体を用いることができる。受容体は、自
体公知の手法を用いて、温血動物の組織や臓器から抽出
することもできる。しかし、ヒト由来の臓器は入手が極
めて困難なことから、スクリーニングに用いられるもの
としては、遺伝子組換技術を用いて大量発現させた受容
体が適している。具体的には、ヒトＴＬＲ２を製造する
には、例えば、ヒトのＴＬＲ２をコードするＤＮＡ（Ｒ
ｏｃｋ、Ｆ．Ｌ．ら, プロシーディング・オブ・ナショ
ナル・アカデミー・オブ・サイエンス・Ｕ．Ｓ．Ａ．
（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．
Ａ．）、 ９５巻、５８８〜５９３、１９９８年；Ｇｅ
ｎＢａｂｋ ＡＡＣ３４１３３）を哺乳動物や昆虫細胞
で発現することにより行うことができる。目的とする受
容体をコードするＤＮＡ断片には、通常、相補ＤＮＡが
用いられるが、必ずしもこれに制約されるものではな
く、例えば、遺伝子断片や合成ＤＮＡを用いてもよい。
受容体をコードするＤＮＡ断片を宿主動物細胞に導入
し、それらを効率よく発現させるためには、該ＤＮＡ断
片を昆虫を宿主とするバキュロウイルスに属する核多角
体病ウイルス（ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓ
ｉｓ ｖｉｒｕｓ；ＮＰＶ）のポリヘドリンプロモータ
ー、ＳＶ４０由来のプロモーター、レトロウイルスのプ
ロモーター、メタロチオネインプロモーター、ヒト・ヒ
ートショツクプロモーター、サイトメガロウイルスプロ
モーター、ＳＲαプロモーターなどの下流に組み込むの
が好ましい。発現した受容体の量と質の検査はそれ自体
公知の方法で行うことができる。例えば、文献〔Ｎａｍ
ｂｉ．Ｐ．ら、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル
・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．），２６７
巻，１９５５５〜１９５５９頁，１９９２年〕に記載の
方法に従って行うことができる。したがって、本発明の
スクリーニング方法において、受容体としては、それ自
体公知の方法に従って精製した受容体であってもよい
し、受容体を含有する細胞またはその膜画分を用いても
よい。本発明のスクリーニング方法において、受容体を
含有する細胞を用いる場合、該細胞をグルタルアルデヒ
ド、ホルマリンなどで固定化してもよい。固定化方法は
それ自体公知の方法に従って行うことができる。

【００５９】受容体を含有する細胞としては、受容体を
発現した宿主細胞をいうが、該宿主細胞としては、大腸
菌、枯草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが挙げられ
る。膜画分としては、細胞を破砕した後、それ自体公知
の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをい
う。細胞の破砕方法としては、Ｐｏｔｔｅｒ−Ｅｌｖｅ
ｈｊｅｍ型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワー
リングブレンダーやポリトロン（Ｋｉｎｅｌｌｍａｔｉ
ｃａ社製）のよる破砕、超音波による破砕、フレンチプ
レスなどで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させ
ることによる破砕などが挙げられる。細胞膜の分画に
は、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力
による分画法が主として用いられる。例えば、細胞破砕
液を低速（５００から３０００ｒｐｍ）で短時間（通
常、約１から１０分）遠心し、上清をさらに高速（１５
０００から３００００ｒｐｍ）で通常３０分から２時間
遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中に
は、発現した受容体と細胞由来のリン脂質や膜部分ペプ
チドなどの膜成分が多く含まれる。受容体を含有する細
胞や膜画分中の受容体の量は、１細胞当たり１０^２から
１０^８分子であるのが好ましく、１０^５から１０^７分子
であるのが好適である。なお、発現量が多いほど細胞抽
出物または膜画分当たりのＭ１６１抗原との結合活性
（比活性）が高くなり、高感度なスクリーニング系の構
築が可能になるばかりでなく、同一ロットで大量の試料
を測定できるようになる。

【００６０】物質Ａ、ＢまたはＣをスクリーニングする
前記の〔１〕または〔２〕を実施するためには、適当な
受容体画分と、標識した本発明の融合蛋白質が必要であ
る。受容体画分としては、天然型の受容体画分か、また
はそれと同等の活性を有する組換え型受容体画分などが
望ましい。ここで、同等の活性とは、本発明の融合蛋白
質に対する同等の結合活性などを示す。標識した本発明
の融合蛋白質としては、例えば、〔^３Ｈ〕、
〔^１２５Ｉ〕、〔 ^１４Ｃ〕、〔^１３５Ｓ〕など標識され
た本発明の融合蛋白質などを利用することができる。

【００６１】具体的には、本発明の融合蛋白質と受容体
との結合性を変化させる（阻害または促進する）化合物
のスクリーニングを行うには、まず、受容体を含有する
細胞またはその膜画分を、スクリーニングに適した緩衝
液に懸濁することにより受容体標品を調製する。緩衝液
には、ｐＨ４から１０（望ましくはｐＨ６から８）のリ
ン酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝液などの本発明の融合蛋
白質と受容体との結合を阻害しない緩衝液であればいず
れでもよい。また、非特異的結合を低減させる目的で、
ＣＨＡＰＳ、Ｔｗｅｅｎ−８０（商品名）（花王−アト
ラス社製）、ジギトニン、デオキシコレートなどの界面
活性剤を緩衝液に加えることもできる。さらに、プロテ
アーゼによる受容体や本発明の融合蛋白質の分解を抑え
る目的でＰＭＳＦ、ロイペプチン、Ｅ−６４（ペプチド
研究所製）、ペプスタチンなどのプロテアーゼ阻害剤を
添加することもできる。例えば、０．０１から１０ｍｌ
のＭ１６１抗原受容体溶液に、一定量（５０００から５
０００００ｃｐｍ）の標識した本発明の融合蛋白質を添
加し、同時に１０^−４から１０^−１０Ｍの試験化合物を
共存させる。非特異的結合量（ＮＳＢ）を知るために大
過剰の未標識のＭ１６１抗原を加えた反応チューブも用
意する。反応は０から５０℃、望ましくは４から３７℃
で２０分から２４時間、望ましくは３０分から３時間行
う。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の同緩衝
液で洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射活性を
液体シンチレーションカウンターまたはγ−カウンター
で計測する。拮抗する物質がない場合のカウント
（Ｂ_０）から非特異的結合量（ＮＳＢ）を引いたカウン
ト（Ｂ_０―ＮＳＢ）を１００％とした時、特異的結合量
（Ｂ−ＮＳＢ）が例えば５０％以下になる試験化合物を
拮抗阻害能力のある候補物質として選択することがで
き、一方、特異的結合量（Ｂ−ＮＳＢ）が例えば１５０
％以上になる被験化合物を結合促進能力のある候補化合
物として選択することができる。

【００６２】物質Ａ、ＢまたはＣをスクリーニングする
前記の〔３〕の方法を実施するためには、例えば、受容
体を介する細胞刺激活性（例えば、サイトカイン誘導作
用、未成熟樹状細胞の成熟化誘導作用、貧食促進作用、
腫瘍免疫機構の活性化作用、ＣＴＬ誘導作用、Th1細胞
誘導作用、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細
胞内Ｃａ^２＋遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭ
Ｐ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細
胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低
下などを促進する活性または抑制する活性など）を公知
の方法または市販の測定用キットを用いて測定すること
ができる。具体的には、まず、受容体を含有する細胞を
マルチウェルプレート等に培養する。スクリーニングを
行なうにあたっては前もって新鮮な培地あるいは細胞に
毒性を示さない適当なバッファーに交換し、試験化合物
などを添加して一定時間インキュベートした後、細胞を
抽出あるいは上清液を回収して、生成した産物をそれぞ
れの方法に従って定量する。細胞刺激活性の指標とする
物質（例えば、アラキドン酸など）の生成が、細胞が含
有する分解酵素によって検定困難な場合は、該分解酵素
に対する阻害剤を添加してアッセイを行なってもよい。
また、ｃＡＭＰ産生抑制などの活性については、フォル
スコリンなどで細胞の基礎的産生量を増大させておいた
細胞に対する産生抑制作用として検出することができ
る。細胞刺激活性を測定してスクリーニングを行なうに
は、適当な受容体を発現した細胞が必要である。受容体
を発現した細胞としては、天然型の受容体を有する細胞
株、上記の組換え型受容体を発現した細胞株などが望ま
しい。物質ＡおよびＢと物質Ｃの分類は、本発明の融合
蛋白質に直接作用するか、または受容体に結合するかで
区別することができる。すなわち、スクリーニング方法
〔３〕で得られた物質のうち、スクリーニング方法
〔１〕または〔２〕で選択されない物質は物質Ａまたは
Ｂであり、スクリーニング方法〔１〕または〔２〕で選
択された物質は物質Ｃと判断できる。試験化合物として
は、例えば、ペプチド、蛋白、非ペプチド性化合物、合
成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物
組織抽出液などが用いられ、これら化合物は新規な化合
物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。

【００６３】物質Ａ、ＢまたはＣのスクリーニング用キ
ットは、本発明の融合蛋白質、受容体を含有する細胞ま
たは受容体を含有する細胞の抽出画分を含有するもので
ある。本発明のスクリーニング用キットの例としては、
次のものが挙げられる。 １．スクリーニング用試薬 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液 Hanks' Balanced Salt Solution（ギブコ社製）に、０.
０５％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたも
の。孔径０.４５μｍのフィルターで濾過滅菌し、４℃
で保存するか、あるいは用時調製しても良い。 受容体標品 受容体を発現させたＣＨＯ細胞を、１２穴プレートに５
×１０⁵個／穴で継代し、３７℃、５％ＣＯ_２、９５％
ａｉｒで２日間培養したもの。 標識リガンド 市販の〔^３Ｈ〕、〔^１２５Ｉ〕、〔^１４Ｃ〕、
〔^３５Ｓ〕などで標識した本発明の融合蛋白質 水溶液の状態のものを４℃あるいは−２０℃にて保存
し、用時に測定用緩衝液にて１μＭに希釈する。 リガンド標準液 本発明の融合蛋白質を０.１％ウシ血清アルブミン（シ
グマ社製）を含むＰＢＳで１ｍＭとなるように溶解し、
−２０℃で保存する。

【００６４】２．測定法 １２穴組織培養用プレートにて培養した受容体発現Ｃ
ＨＯ細胞を、測定用緩衝液１ｍｌで２回洗浄した後、４
９０μｌの測定用緩衝液を各穴に加える。 １０^−３〜１０^−１０Ｍの試験化合物溶液を５μｌ加
えた後、標識リガンドを５μｌ加え、室温にて１時間反
応させる。非特異的結合量を知るためには試験化合物の
代わりに１０^−３Ｍのリガンドを５μｌ加えておく。 反応液を除去し、１ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗浄す
る。細胞に結合した標識リガンドを０.２Ｎ ＮａＯＨ
−１％ＳＤＳで溶解し、４ｍｌの液体シンチレーターＡ
（和光純薬製）と混合する。 液体シンチレーションカウンター（ベックマン社製）
を用いて放射活性を測定し、Percent Maximum Binding
（ＰＭＢ）を次の式で求める。 ＰＭＢ＝［（Ｂ−ＮＳＢ）／（Ｂ_０−ＮＳＢ）］×１０
０ ＰＭＢ：Percent Maximum Binding Ｂ ：検体を加えた時の値 ＮＳＢ：Non-specific Binding（非特異的結合量） Ｂ_０ ：最大結合量

【００６５】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる物質は、前記したと
おり、（１）本発明の融合蛋白質の作用を増強する物質
（Ａ）： 本発明の融合蛋白質に作用し、本発明の融合蛋白質と
ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンなどの受容体
との結合を促進する物質（物質Ａ１）、 本発明の融合蛋白質を活性化する物質（物質Ａ２）、
（２）本発明の融合蛋白質の作用を減弱する物質
（Ｂ）： 本発明の融合蛋白質に作用し、本発明の融合蛋白質と
ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリンなどの受容体
との結合を阻害する物質（物質Ｂ１）、 本発明の融合蛋白質を不活化する物質（物質Ｂ２）、
（３）本発明の融合蛋白質とＴＬＲ２および／またはβ
２インテグリンとの結合を変化させる物質（Ｃ）： アンタゴニスト（受容体に結合するが、受容体を介し
た細胞刺激活性（例えば、貧食促進作用、腫瘍免疫機構
の活性化作用、サイトカイン誘導作用、未成熟樹状細胞
の成熟化誘導作用などを促進する活性または抑制する活
性などを示さない物質（物質Ｃ１））、 アゴニスト（受容体に結合し、受容体を介した細胞刺
激活性を示す物質（物質Ｃ２））などである。該物質と
しては、ペプチド、蛋白、非ペプチド性化合物、合成化
合物、発酵生産物などが挙げられ、これら化合物は新規
な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよ
い。該物質の塩としては、前記した本発明の融合蛋白質
の塩と同様のものが用いられる。

【００６６】本発明のスクリーニング方法で得られた物
質Ａは、本発明の融合蛋白質の作用を増強することがで
きるので、当該物質Ａを含有する医薬組成物は、哺乳動
物に対して、安全な貧食促進剤、サイトカイン誘導促進
剤、未成熟樹状細胞の成熟化誘導剤などとして有用であ
る。さらには、癌（例、乳癌、前立腺癌、膵癌、胃癌、
肺癌、大腸癌（結腸癌、直腸癌、肛門癌）、食道癌、十
二指腸癌、頭頚部癌（舌癌、咽頭癌）、脳腫瘍、神経鞘
腫、非小細胞肺癌、肺小細胞癌、肝臓癌、腎臓癌、胆管
癌、子宮癌（子宮体癌、子宮頸癌）、卵巣癌、膀胱癌、
皮膚癌、血管腫、悪性リンパ腫、悪性黒色腫、甲状腺
癌、骨腫瘍、血管腫、血管線維腫、網膜肉腫、陰茎癌、
小児固形癌、カポジ肉腫、ＡＩＤＳに起因するカポジ肉
腫、上顎洞腫瘍、線維性組織球腫、平滑筋肉腫、横紋筋
肉腫など）、白血病などの悪性腫瘍の予防・治療剤とし
て有用である。本発明のスクリーニング方法で得られた
物質Ｂは、本発明の融合蛋白質の作用を減弱することが
できるので、当該物質Ｂを含有する医薬組成物は、哺乳
動物に対して、安全なサイトカイン誘導阻害剤（サイト
カイン産生抑制剤）、未成熟樹状細胞の成熟化誘導阻害
剤、貧食抑制剤、ＣＴＬ誘導阻害などとして有用であ
る。さらに、アレルギー疾患、自己免疫疾患などの予防
・治療剤として有用である。本発明のスクリーニング方
法で得られた物質Ｃ１（アンタゴニスト）は、本発明の
融合蛋白質またはその塩の作用を抑制することができる
ので、当該物質Ｃ１を含有する医薬組成物は、哺乳動物
に対して、安全なサイトカイン誘導阻害剤（サイトカイ
ン産生抑制剤）、未成熟樹状細胞の成熟化誘導阻害剤、
貧食抑制剤、ＣＴＬ誘導阻害剤などとして有用である。
さらに、アレルギー疾患、自己免疫疾患などの予防・治
療剤として有用である。本発明のスクリーニング方法で
得られた物質Ｃ２（アゴニスト）は、Ｂ本発明の融合蛋
白質またはその塩と同様の作用を有しているので、当該
物質Ｃ２を含有する医薬組成物は、哺乳動物に対して、
安全な、サイトカイン誘導促進剤、未成熟樹状細胞の成
熟化誘導剤、貧食促進剤、ＣＴＬ誘導剤などとして有用
である。さらには、癌（例、乳癌、前立腺癌、膵癌、胃
癌、肺癌、大腸癌（結腸癌、直腸癌、肛門癌）、食道
癌、十二指腸癌、頭頚部癌（舌癌、咽頭癌）、脳腫瘍、
神経鞘腫、非小細胞肺癌、肺小細胞癌、肝臓癌、腎臓
癌、胆管癌、子宮癌（子宮体癌、子宮頸癌）、卵巣癌、
膀胱癌、皮膚癌、血管腫、悪性リンパ腫、悪性黒色腫、
甲状腺癌、骨腫瘍、血管腫、血管線維腫、網膜肉腫、陰
茎癌、小児固形癌、カポジ肉腫、ＡＩＤＳに起因するカ
ポジ肉腫、上顎洞腫瘍、線維性組織球腫、平滑筋肉腫、
横紋筋肉腫など）、白血病などの悪性腫瘍の予防・治療
剤として有用である。これらの物質Ａ、ＢまたはＣを含
有する医薬組成物は、前記した本発明の融合蛋白質を含
有する医薬組成物と同様にして製造でき、使用すること
ができる。

【００６７】さらに、本発明は、（１）哺乳動物のＴＬ
Ｒ２および／またはβ２インテグリンを活性化すること
を特徴とする癌の予防・治療方法、および（２）哺乳動
物に対して、ＴＬＲ２に対するリガンドまたはアゴニス
トの有効量、および／またはβ２インテグリンに対する
リガンドまたはアゴニストの有効量を投与することを特
徴とする癌の予防・治療方法を提供する。ＴＬＲ２に対
するリガンドまたはアゴニストとしては、例えば、Ｍ１
６１抗原またはその結合脂質を含むＮ末端部分ペプチド
などが用いられる。β２インテグリンに対するリガンド
またはアゴニストとしては、Ｍ１６１抗原またはその部
分ペプチドなどが用いられる。ＴＬＲ２および／または
β２インテグリンを活性化する物質としては、例えば、
Ｍ１６１抗原や本発明の融合蛋白質、物質Ｃ２またはそ
の塩などが用いられる。本発明の融合蛋白質または、物
質Ｃ２またはその塩を含む医薬組成物および哺乳動物へ
の投与量は、前記と同様である。

【００６８】本明細書および図面において、塩基やアミ
ノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ
Ｃｏｍｍｉｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎ
ｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅによる略号あるいは当該分野に
おける慣用略号に基づくものであり、その例を下記す
る。またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、
特に明示しなければＬ体を示すものとする。 ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ ：デオキシアデノシン三リン酸 ｄＴＴＰ ：デオキシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ ：デオキシグアノシン三リン酸 ｄＣＴＰ ：デオキシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム Ｇｌｙ ：グリシン Ａｌａ ：アラニン Ｖａｌ ：バリン Ｌｅｕ ：ロイシン Ｉｌｅ ：イソロイシン Ｓｅｒ ：セリン Ｔｈｒ ：スレオニン Ｃｙｓ ：システイン Ｍｅｔ ：メチオニン Ｇｌｕ ：グルタミン酸 Ａｓｐ ：アスパラギン酸 Ｌｙｓ ：リジン Ａｒｇ ：アルギニン Ｈｉｓ ：ヒスチジン Ｐｈｅ ：フェニルアラニン Ｔｙｒ ：チロシン Ｔｒｐ ：トリプトファン Ｐｒｏ ：プロリン Ａｓｎ ：アスパラギン Ｇｌｎ ：グルタミン ｐＧｌｕ ：ピログルタミン酸 ＊ ：終止コドンに対応する Ｍｅ ：メチル基 Ｅｔ ：エチル基 Ｂｕ ：ブチル基 Ｐｈ ：フェニル基 ＴＣ ：チアゾリジン−４（Ｒ）−カルボキサミド基 また、本明細書中で繁用される置換基、保護基および試薬を下記の記号で表記 する。 Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルフォニル ＣＨＯ ：ホルミル Ｂｚｌ ：ベンジル Ｃl₂Ｂzl ：２，６−ジクロロベンジル Ｂｏｍ ：ベンジルオキシメチル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Ｃｌ−Ｚ ：２−クロロベンジルオキシカルボニル Ｂｒ−Ｚ ：２−ブロモベンジルオキシカルボニル Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル ＤＮＰ ：ジニトロフェノール Ｔｒｔ ：トリチル Ｂｕｍ ：ｔ−ブトキシメチル Ｆｍｏｃ ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル ＨＯＢｔ ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール ＨＯＯＢｔ ：３,４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ− １,２,３−ベンゾトリアジン ＨＯＮＢ ：1-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシイミド ＤＣＣ ：Ｎ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド 本願明細書の配列表の配列番号は、以下の配列を示す。 〔配列番号：１〕ＭＡＬＰ−２のアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：２〕Ｍ１６１抗原のアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：３〕Ｍ１６１抗原のｃＤＮＡ配列を示す。

【００６９】

【実施例】以下に、実施例、参考例および試験例を挙げ
て本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれに
限定されるものではない。

【実施例１】 (１)Ｍ１６１抗原 １０．０g (２)乳糖 ６０．０g (３)コーンスターチ ３５．０g (４)ゼラチン ３．０g (５)ステアリン酸マグネシウム ２．０g Ｍ１６１抗原１０．０gと乳糖６０．０gおよびコーンス
ターチ３５．０gの混合物を１０重量％ゼラチン水溶液
３０ml（ゼラチンとして３．０g）を用い、１mmメッシ
ュの篩を通して顆粒化した後、４０℃で乾燥し再び篩過
した。得られた顆粒をステアリン酸マグネシウム２．０
gと混合し、圧縮した。得られた中心錠を、蔗糖、二酸
化チタン、タルクおよびアラビアゴムの水懸濁液による
糖衣でコーティングした。コーティングが施され た錠
剤をミツロウで艶出して１０００錠のコート錠を得た。

【００７０】

【実施例２】 (１)Ｍ１６１抗原 １０．０g (２)乳糖 ７０．０g (３)コーンスターチ ５０．０g (４)可溶性デンプン ７．０g (５)ステアリン酸マグネシウム ３．０g Ｍ１６１抗原１０．０gとステアリン酸マグネシウム
３．０gを可溶性デンプンの水溶液７０ml（可溶性デン
プンとして７．０g）で顆粒化した後、乾燥し、乳糖７
０．０gおよびコーンスターチ５０．０gと混合した。混
合物を圧縮して１０００錠の錠剤を得た。

【００７１】

【試験例１】Ｍ１６１抗原の抗腫瘍作用 Ｍ１６１抗原（２．５μｇ）を破壊腫瘍（Ｂ１６メラノ
ーマ、５×１０^６）と共に皮下注で４回、７日ごとに８
匹のＣ５７ＢＬ／６にpreimmunizationし、その後、腫
瘍（Ｂ１６メラノーマ、５×１０^６）を接種した。４週
間後、腫瘍の大きさを皮膚の上からノギスで測定した。
結果を表１に示す。 〔表１〕 腫瘍の大きさ １ｃｍ^３以下 １〜２ｃｍ^３ ２ｃｍ^３以上 対照 １匹 ３匹 ４匹 Ｍ１６１抗原投与 ５匹 ２匹 １匹 この結果、Ｍ１６１抗原（２．５μｇ）と破壊腫瘍（Ｂ
１６メラノーマ）との併用投与により、腫瘍が縮小する
ことが分かった。

【００７２】

【発明の効果】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチド
またはその塩は、優れたＣＴＬ誘導作用を有している。
Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドまたはその塩と
癌抗原とを組み合わせて用いることにより、癌を効率良
く予防・治療することができる。

【００７３】

【配列表】 ［SEQUENCE LISTING］ <110> Takeda Chemical Industries, Ltd. <120> Anti-tumor agent <130> B02182 <150> JP 2001-182250 <151> 2001-06-15 <160> 3 <210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> Mycoplasma fermentans <400> 1 Cys Gly Asn Asn Asp Glu Ser Asn Ile Ser Phe Lys Glu Lys 1 5 10 <210> 2 <211> 428 <212> PRT <213> Mycoplasma fermentans <400> 2 Met Lys Lys Ser Lys Lys Ile Leu Leu Gly Leu Ser Pro Ile Ala Ala 1 5 10 15 Ile Leu Pro Ala Val Ala Val Ser Cys Gly Asn Asn Asp Glu Ser Asn 20 25 30 Ile Ser Phe Lys Glu Lys Asp Ile Ser Lys Tyr Thr Thr Thr Asn Ala 35 40 45 Asn Gly Lys Gln Val Val Lys Asn Ala Glu Leu Leu Lys Leu Lys Pro 50 55 60 Val Leu Ile Thr Asp Glu Gly Lys Ile Asp Asp Lys Ser Phe Asn Gln 65 70 75 80 Ser Ala Phe Glu Ala Leu Lys Ala Ile Asn Lys Gln Thr Gly Ile Glu 85 90 95 Ile Asn Asn Val Glu Pro Ser Ser Asn Phe Glu Ser Ala Tyr Asn Ser 100 105 110 Ala Leu Ser Ala Gly His Lys Ile Trp Val Leu Asn Gly Phe Lys His 115 120 125 Gln Gln Ser Ile Lys Gln Tyr Ile Asp Ala His Arg Glu Glu Leu Glu 130 135 140 Arg Asn Gln Ile Lys Ile Ile Gly Ile Asp Phe Asp Ile Glu Thr Glu 145 150 155 160 Tyr Lys Trp Phe Tyr Ser Leu Gln Phe Asn Ile Lys Glu Ser Ala Phe 165 170 175 Thr Thr Gly Tyr Ala Ile Ala Ser Trp Leu Ser Glu Gln Asp Glu Ser 180 185 190 Lys Arg Val Val Ala Ser Phe Gly Gly Gly Ala Phe Pro Gly Val Thr 195 200 205 Thr Phe Asn Glu Gly Phe Ala Lys Gly Ile Leu Tyr Tyr Asn Gln Lys 210 215 220 His Lys Ser Ser Lys Ile Tyr His Thr Ser Pro Val Lys Leu Asp Ser 225 230 235 240 Gly Phe Thr Ala Gly Glu Lys Met Asn Thr Val Ile Asn Asn Val Leu 245 250 255 Ser Ser Thr Pro Ala Asp Val Lys Tyr Asn Pro His Val Ile Leu Ser 260 265 270 Val Ala Gly Pro Ala Thr Phe Glu Thr Val Arg Leu Ala Asn Lys Gly 275 280 285 Gln Tyr Val Ile Gly Val Asp Ser Asp Gln Gly Met Ile Gln Asp Lys 290 295 300 Asp Arg Ile Leu Thr Ser Val Leu Lys His Ile Lys Gln Ala Val Tyr 305 310 315 320 Glu Thr Leu Leu Asp Leu Ile Leu Glu Lys Glu Glu Gly Tyr Lys Pro 325 330 335 Tyr Val Val Lys Asp Lys Lys Ala Asp Lys Lys Trp Ser His Phe Gly 340 345 350 Thr Gln Lys Glu Lys Trp Ile Gly Val Ala Glu Asn His Phe Ser Asn 355 360 365 Thr Glu Glu Gln Ala Lys Ile Asn Asn Lys Ile Lys Glu Ala Ile Lys 370 375 380 Met Phe Lys Glu Leu Pro Glu Asp Phe Val Lys Tyr Ile Asn Ser Asp 385 390 395 400 Lys Ala Leu Lys Asp Gly Asn Lys Ile Asp Asn Val Ser Glu Arg Leu 405 410 415 Glu Ala Ile Ile Ser Ala Ile Asn Lys Ala Ala Lys 420 425 <210> 3 <211> 1287 <212> DNA <213> Mycoplasma fermentans <400> 3 atgaaaaagt caaaaaaaat tttattagga ttgagtccta ttgctgctat tcttcctgca 60 gtagctgttt cttgtggaaa caacgatgaa tccaatattt cattcaaaga gaaagatatt 120 agtaaatata ccacaacaaa tgctaatgga aaacaagttg ttaaaaacgc tgaattgtta 180 aaattgaaac cagttcttat tacagatgaa ggtaaaattg atgataaatc atttaaccaa 240 tcagcttttg aagctttaaa agctataaat aaacaaactg gtattgaaat taacaatgtt 300 gaacctagct caaactttga aagtgcttac aacagtgcac tttcagccgg acacaaaatt 360 tgagtactta atggcttcaa acaccaacaa tctattaaac aatacattga tgctcacaga 420 gaagaacttg aaagaaatca aatcaaaatc attggtatcg actttgatat tgaaacagag 480 tacaagtgat tctactcatt acaattcaat attaaagaat ctgcatttac aacaggctat 540 gcaattgcaa gttgattaag tgaacaagat gaaagtaaaa gagttgttgc atcatttggt 600 ggaggtgcat tcccaggtgt tacaacattt aacgaaggtt ttgcaaaagg tattctatac 660 tacaaccaaa aacataaatc aagtaaaatt taccacacat cacctgttaa attagactca 720 ggttttactg ctggtgaaaa aatgaacact gttattaata atgttttatc ttcaacacca 780 gctgatgtta aatacaaccc acatgttatc ttatctgttg ctggacctgc tacatttgaa 840 actgtaagat tagcaaacaa aggtcaatat gtaattggtg ttgactcaga ccaaggcatg 900 attcaagaca aagacagaat tcttacatca gttctaaaac acattaaaca agctgtttat 960 gaaacattat tagatcttat tcttgaaaaa gaagaaggat ataaaccata tgtagttaaa 1020 gacaaaaaag cagacaaaaa atgaagccac tttggaactc aaaaagaaaa atgaatcggt 1080 gtcgcagaaa accacttctc aaatacagaa gaacaagcaa aaattaataa caaaattaaa 1140 gaagcaatta aaatgtttaa agaattacca gaagatttcg ttaaatatat taatagtgac 1200 aaagctttaa aagatggtaa taaaattgac aatgttagtg aaagattaga agcaattatt 1260 tctgctatta acaaggcagc aaaataa 1287

【図面の簡単な説明】

【図１】 Ｍ１６１抗原のアミノ酸配列を示す。

【図２】 Ｍ１６１抗原をコードするＤＮＡの塩基配列
を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １０７ Ａ６１Ｐ 43/00 １０７ ４Ｃ０８５ １１１ １１１ ４Ｈ０４５ １２１ １２１ Ｃ０７Ｋ 14/30 Ｃ０７Ｋ 14/30 14/82 14/82 19/00 19/00 Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/50 Ｚ 33/50 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ Ｆターム(参考） 2G045 AA34 AA35 BB14 BB50 BB51 CB01 DA13 DA36 FB02 FB03 FB07 FB08 4B024 AA01 AA11 BA36 BA45 CA04 CA07 DA02 DA05 EA02 EA04 GA11 HA15 4B063 QA18 QQ08 QR48 QX10 4B064 AG31 CA02 CA05 CA06 CA10 CA19 CC24 DA05 DA13 4C084 AA17 AA19 AA22 MA02 NA14 ZB09 ZB22 ZB26 ZC20 ZC41 4C085 AA03 BA99 BB01 BB11 BB12 BB17 CC03 CC04 CC05 CC21 CC31 DD21 DD62 EE01 EE03 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 BA41 CA11 CA41 DA75 DA86 EA28 EA51 FA72 FA74

Claims (107)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドま
   たはその塩を含有してなるＣＴＬ誘導剤。
2. 【請求項２】哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗原もしくは
   その部分ペプチドまたはその塩の有効量を投与すること
   を特徴とするＣＴＬ誘導方法。
3. 【請求項３】ＣＴＬ誘導剤を製造するためのＭ１６１抗
   原もしくはその部分ペプチドまたはその塩の使用。
4. 【請求項４】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドま
   たはその塩を含有してなるTh1細胞誘導剤。
5. 【請求項５】哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗原もしくは
   その部分ペプチドまたはその塩の有効量を投与すること
   を特徴とするTh1細胞誘導方法。
6. 【請求項６】Th1細胞誘導剤を製造するためのＭ１６１
   抗原もしくはその部分ペプチドまたはその塩の使用。
7. 【請求項７】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドま
   たはその塩と癌抗原とを組み合わせて成る医薬。
8. 【請求項８】抗癌剤である請求項７記載の医薬。
9. 【請求項９】サイトカイン誘導剤である請求項７記載の
   医薬。
10. 【請求項１０】未成熟樹状細胞の成熟化誘導剤である請
    求項７記載の医薬。
11. 【請求項１１】貧食促進剤である請求項７記載の医薬。
12. 【請求項１２】ＣＴＬ誘導剤である請求項７記載の医
    薬。
13. 【請求項１３】Th1細胞誘導剤である請求項７記載の医
    薬。
14. 【請求項１４】哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗原もしく
    はその部分ペプチドまたはその塩の有効量と癌抗原の有
    効量とを組み合わせて投与することを特徴とする癌の予
    防・治療方法。
15. 【請求項１５】哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗原もしく
    はその部分ペプチドまたはその塩の有効量と癌抗原の有
    効量とを組み合わせて投与することを特徴とするサイト
    カイン誘導方法。
16. 【請求項１６】哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗原もしく
    はその部分ペプチドまたはその塩の有効量と癌抗原の有
    効量とを組み合わせて投与することを特徴とする未成熟
    樹状細胞の成熟化誘導方法。
17. 【請求項１７】哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗原もしく
    はその部分ペプチドまたはその塩の有効量と癌抗原の有
    効量とを組み合わせて投与することを特徴とする貧食促
    進方法。
18. 【請求項１８】哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗原もしく
    はその部分ペプチドまたはその塩の有効量と癌抗原の有
    効量とを組み合わせて投与することを特徴とするＣＴＬ
    誘導方法。
19. 【請求項１９】哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗原もしく
    はその部分ペプチドまたはその塩の有効量と癌抗原の有
    効量とを組み合わせて投与することを特徴とするTh1細
    胞誘導方法。
20. 【請求項２０】抗癌剤を製造するためのＭ１６１抗原も
    しくはその部分ペプチドまたはその塩および癌抗原の使
    用。
21. 【請求項２１】サイトカイン誘導剤を製造するためのＭ
    １６１抗原もしくはその部分ペプチドまたはその塩およ
    び癌抗原の使用。
22. 【請求項２２】未成熟樹状細胞の成熟化誘導剤を製造す
    るためのＭ１６１抗原もしくはその部分ペプチドまたは
    その塩および癌抗原の使用。
23. 【請求項２３】貧食促進剤を製造するためのＭ１６１抗
    原もしくはその部分ペプチドまたはその塩および癌抗原
    の使用。
24. 【請求項２４】ＣＴＬ誘導剤を製造するためのＭ１６１
    抗原もしくはその部分ペプチドまたはその塩および癌抗
    原の使用。
25. 【請求項２５】Th1細胞誘導剤を製造するためのＭ１６
    １抗原もしくはその部分ペプチドまたはその塩および癌
    抗原の使用。
26. 【請求項２６】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチド
    と癌抗原との融合蛋白質またはその塩。
27. 【請求項２７】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチド
    のＣ末端に癌抗原を連結した請求項２６記載の融合蛋白
    質。
28. 【請求項２８】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチド
    と癌抗原とを連結させることを特徴とする請求項２６記
    載の融合蛋白質またはその塩の製造法。
29. 【請求項２９】請求項２６記載の融合蛋白質またはその
    塩を含有してなる医薬。
30. 【請求項３０】抗癌剤である請求項２９記載の医薬。
31. 【請求項３１】サイトカイン誘導剤である請求項２９記
    載の医薬。
32. 【請求項３２】未成熟樹状細胞の成熟化誘導剤である請
    求項２９記載の医薬。
33. 【請求項３３】貧食促進剤である請求項２９記載の医
    薬。
34. 【請求項３４】ＣＴＬ誘導剤である請求項２９記載の医
    薬。
35. 【請求項３５】Th1細胞誘導剤である請求項２９記載の
    医薬。
36. 【請求項３６】哺乳動物に対して、請求項２６記載の融
    合蛋白質またはその塩の有効量を投与することを特徴と
    する癌の予防・治療方法。
37. 【請求項３７】哺乳動物に対して、請求項２６記載の融
    合蛋白質またはその塩の有効量を投与することを特徴と
    するサイトカイン誘導方法。
38. 【請求項３８】哺乳動物に対して、請求項２６記載の融
    合蛋白質またはその塩の有効量を投与することを投与す
    ることを特徴とする未成熟樹状細胞の成熟化誘導方法。
39. 【請求項３９】哺乳動物に対して、請求項２６記載の融
    合蛋白質またはその塩の有効量を投与することを特徴と
    する貧食促進方法。
40. 【請求項４０】哺乳動物に対して、請求項２６記載の融
    合蛋白質またはその塩の有効量を投与することを特徴と
    するＣＴＬ誘導方法。
41. 【請求項４１】哺乳動物に対して、請求項２６記載の融
    合蛋白質またはその塩の有効量を投与することを特徴と
    するTh1細胞誘導方法。
42. 【請求項４２】抗癌剤を製造するための請求項２６記載
    の融合蛋白質またはその塩の使用。
43. 【請求項４３】サイトカイン誘導剤を製造するための請
    求項２６記載の融合蛋白質またはその塩の使用。
44. 【請求項４４】未成熟樹状細胞の成熟化誘導剤を製造す
    るための請求項２６記載の融合蛋白質またはその塩の使
    用。
45. 【請求項４５】貧食促進剤を製造するための請求項２６
    記載の融合蛋白質またはその塩の使用。
46. 【請求項４６】ＣＴＬ誘導剤を製造するための請求項２
    ６記載の融合蛋白質またはその塩の使用。
47. 【請求項４７】Th1細胞誘導剤を製造するための請求項
    ２６記載の融合蛋白質またはその塩の使用。
48. 【請求項４８】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチド
    またはその塩および癌抗原を用いることを特徴とする抗
    癌作用を有する物質のスクリーニング方法。
49. 【請求項４９】請求項４８記載のスクリーニング方法で
    得られる抗癌作用を有する物質。
50. 【請求項５０】請求項４８記載のスクリーニング方法で
    得られる抗癌作用を有する物質を含有してなる医薬。
51. 【請求項５１】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチド
    またはその塩および癌抗原を用いることを特徴とするＭ
    １６１抗原もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活
    性を増強する物質のスクリーニング方法。
52. 【請求項５２】請求項５１記載のスクリーニング方法で
    得られるＭ１６１抗原もしくはその部分ペプチドまたは
    その塩の活性を増強する物質。
53. 【請求項５３】請求項５１記載のスクリーニング方法で
    得られるＭ１６１抗原もしくはその部分ペプチドまたは
    その塩の活性を増強する物質を含有してなる医薬。
54. 【請求項５４】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチド
    またはその塩および癌抗原を用いることを特徴とするサ
    イトカインの誘導を促進する物質のスクリーニング方
    法。
55. 【請求項５５】請求項５４記載のスクリーニング方法で
    得られるサイトカインの誘導を促進する物質。
56. 【請求項５６】請求項５４記載のスクリーニング方法で
    得られるサイトカインの誘導を促進する物質を含有して
    なる医薬。
57. 【請求項５７】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチド
    またはその塩および癌抗原を用いることを特徴とするＣ
    ＴＬの誘導を促進する物質のスクリーニング方法。
58. 【請求項５８】請求項５７記載のスクリーニング方法で
    得られるＣＴＬの誘導を促進する物質。
59. 【請求項５９】請求項５７記載のスクリーニング方法で
    得られるＣＴＬの誘導を促進する物質を含有してなる医
    薬。
60. 【請求項６０】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチド
    またはその塩および癌抗原を用いることを特徴とするTh
    1細胞の誘導を促進する物質のスクリーニング方法。
61. 【請求項６１】請求項６０記載のスクリーニング方法で
    得られるTh1細胞の誘導を促進する物質。
62. 【請求項６２】請求項６０記載のスクリーニング方法で
    得られるTh1細胞の誘導を促進する物質を含有してなる
    医薬。
63. 【請求項６３】さらに未成熟樹状細胞を用いることを特
    徴とする請求項４８、５１、５４、５７または６０記載
    のスクリーニング方法。
64. 【請求項６４】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチド
    またはその塩、癌抗原および未成熟樹状細胞を用いるこ
    とを特徴とする未成熟樹状細胞の成熟化を誘導する物質
    のスクリーニング方法。
65. 【請求項６５】請求項６４記載のスクリーニング方法で
    得られる未成熟樹状細胞の成熟化を誘導する物質。
66. 【請求項６６】請求項６４記載のスクリーニング方法で
    得られる未成熟樹状細胞の成熟化を誘導する物質を含有
    してなる医薬。
67. 【請求項６７】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチド
    またはその塩、癌抗原および未成熟樹状細胞を用いるこ
    とを特徴とする貪食を促進する物質のスクリーニング方
    法。
68. 【請求項６８】請求項６７記載のスクリーニング方法で
    得られる貪食を促進する物質。
69. 【請求項６９】請求項６７記載のスクリーニング方法で
    得られる貪食を促進する物質を含有してなる医薬。
70. 【請求項７０】請求項２６記載の融合蛋白質またはその
    塩を用いることを特徴とする当該融合蛋白質またはその
    塩の作用を増強する物質のスクリーニング方法。
71. 【請求項７１】請求項７０記載のスクリーニング方法で
    得られる、請求項２６記載の融合蛋白質またはその塩の
    作用を増強する物質。
72. 【請求項７２】請求項７０記載のスクリーニング方法で
    得られる、請求項２６記載の融合蛋白質またはその塩の
    作用を増強する物質を含有してなる医薬。
73. 【請求項７３】請求項２６記載の融合蛋白質またはその
    塩を用いることを特徴とするサイトカインの誘導を促進
    する物質のスクリーニング方法。
74. 【請求項７４】請求項７３記載のスクリーニング方法で
    得られる、サイトカインの誘導を促進する物質。
75. 【請求項７５】請求項７３記載のスクリーニング方法で
    得られる、サイトカインの誘導を促進する物質を含有し
    てなる医薬。
76. 【請求項７６】請求項２６記載の融合蛋白質またはその
    塩を用いることを特徴とするＣＴＬの誘導を促進する物
    質のスクリーニング方法。
77. 【請求項７７】請求項７６記載のスクリーニング方法で
    得られる、ＣＴＬの誘導を促進する物質。
78. 【請求項７８】請求項７６記載のスクリーニング方法で
    得られる、ＣＴＬの誘導を促進する物質を含有してなる
    医薬。
79. 【請求項７９】請求項２６記載の融合蛋白質またはその
    塩を用いることを特徴とするTh1細胞の誘導を促進する
    物質のスクリーニング方法。
80. 【請求項８０】請求項７９記載のスクリーニング方法で
    得られる、Th1細胞の誘導を促進する物質。
81. 【請求項８１】請求項７９記載のスクリーニング方法で
    得られる、Th1細胞の誘導を促進する物質を含有してな
    る医薬。
82. 【請求項８２】請求項２６記載の融合蛋白質またはその
    塩および未成熟樹状細胞を用いることを特徴とする未成
    熟樹状細胞の成熟化を誘導する物質のスクリーニング方
    法。
83. 【請求項８３】請求項８２記載のスクリーニング方法で
    得られる、未成熟樹状細胞の成熟化を誘導する物質。
84. 【請求項８４】請求項８２記載のスクリーニング方法で
    得られる、未成熟樹状細胞の成熟化を誘導する物質を含
    有してなる医薬。
85. 【請求項８５】請求項２６記載の融合蛋白質またはその
    塩および未成熟樹状細胞を用いることを特徴とする貪食
    を促進する物質のスクリーニング方法。
86. 【請求項８６】請求項８５記載のスクリーニング方法で
    得られる、貪食を促進する物質。
87. 【請求項８７】請求項８５記載のスクリーニング方法で
    得られる、貪食を促進する物質を含有してなる医薬。
88. 【請求項８８】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチド
    またはその塩および癌抗原を用いることを特徴とするＴ
    ＬＲ２を活性化させる物質のスクリーニング方法。
89. 【請求項８９】請求項８８記載のスクリーニング方法で
    得られる、ＴＬＲ２を活性化させる物質。
90. 【請求項９０】請求項８８記載のスクリーニング方法で
    得られる、ＴＬＲ２を活性化させる物質を含有してなる
    医薬。
91. 【請求項９１】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチド
    またはその塩および癌抗原を用いることを特徴とする
    （１）Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドまたはそ
    の塩と（２）ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリン
    との結合性を変化させる物質のスクリーニング方法。
92. 【請求項９２】請求項９１記載のスクリーニング方法で
    得られる、（１）Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチ
    ドまたはその塩と（２）ＴＬＲ２および／またはβ２イ
    ンテグリンとの結合性を変化させる物質。
93. 【請求項９３】請求項９１記載のスクリーニング方法で
    得られる、（１）Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチ
    ドまたはその塩と（２）ＴＬＲ２および／またはβ２イ
    ンテグリンとの結合性を変化させる物質を含有してなる
    医薬。
94. 【請求項９４】請求項２６記載の融合蛋白質またはその
    塩を用いることを特徴とする（１）請求項２６記載の融
    合蛋白質またはその塩と（２）ＴＬＲ２および／または
    β２インテグリンとの結合性を変化させる物質のスクリ
    ーニング方法。
95. 【請求項９５】請求項９４記載のスクリーニング方法で
    得られる、（１）請求項２６記載の融合蛋白質またはそ
    の塩と（２）ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリン
    との結合性を変化させる物質。
96. 【請求項９６】請求項９４記載のスクリーニング方法で
    得られる、（１）請求項２６記載の融合蛋白質またはそ
    の塩と（２）ＴＬＲ２および／またはβ２インテグリン
    との結合性を変化させる物質を含有してなる医薬。
97. 【請求項９７】哺乳動物のＴＬＲ２および／またはβ２
    インテグリンを活性化することを特徴とする癌の予防・
    治療方法。
98. 【請求項９８】哺乳動物に対して、ＴＬＲ２に対するリ
    ガンドまたはアゴニストの有効量および／またはβ２イ
    ンテグリンに対するリガンドまたはアゴニストの有効量
    を投与することを特徴とする癌の予防・治療方法。
99. 【請求項９９】（１）Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペ
    プチドまたはその塩、（２）癌抗原および（３）他の抗
    癌剤とを組み合わせてなる医薬。
100. 【請求項１００】哺乳動物に対して、（１）Ｍ１６１抗
     原もしくはその部分ペプチドまたはその塩、（２）癌抗
     原および（３）他の抗癌剤とを組み合わせて有効量を投
     与することを特徴とする癌の予防・治療方法。
101. 【請求項１０１】抗癌性併用剤を製造するための（１）
     Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチドまたはその塩、
     （２）癌抗原および（３）他の抗癌剤の使用。
102. 【請求項１０２】Ｍ１６１抗原もしくはその部分ペプチ
     ドと癌抗原との融合蛋白質またはその塩と他の抗癌剤と
     を組み合わせてなる医薬。
103. 【請求項１０３】哺乳動物に対して、Ｍ１６１抗原もし
     くはその部分ペプチドと癌抗原との融合蛋白質またはそ
     の塩と他の抗癌剤とを組み合わせて有効量を投与するこ
     とを特徴とする癌の予防・治療方法。
104. 【請求項１０４】抗癌性併用剤を製造するためのＭ１６
     １抗原もしくはその部分ペプチドと癌抗原との融合蛋白
     質またはその塩と他の抗癌剤の使用。
105. 【請求項１０５】他の抗癌剤がチロシンキナーゼ阻害剤
     である請求項９９または１０２記載の医薬。
106. 【請求項１０６】他の抗癌剤がチロシンキナーゼ阻害剤
     である請求項１００または１０３記載の方法。
107. 【請求項１０７】他の抗癌剤がチロシンキナーゼ阻害剤
     である請求項１０１または１０４記載の使用。