JP2003070471A - 固定化酵素及びその用途 - Google Patents
固定化酵素及びその用途Info
- Publication number
- JP2003070471A JP2003070471A JP2001265495A JP2001265495A JP2003070471A JP 2003070471 A JP2003070471 A JP 2003070471A JP 2001265495 A JP2001265495 A JP 2001265495A JP 2001265495 A JP2001265495 A JP 2001265495A JP 2003070471 A JP2003070471 A JP 2003070471A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- carbon atoms
- amino acid
- acid sequence
- substituted
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
- C07D205/04—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】固定化酵素を利用してＮ−置換環状イミノエス
テルから（Ｓ）−Ｎ−置換環状イミノ酸類を生産する方
法を提供すること。 【解決手段】特定のアミノ酸配列を有するタンパク質等
を、平均半径２００〜５００オングストロームの細孔を
有するスチレン−ジビニルベンゼン共重合体に固定化し
たことを特徴とする固定化酵素がＮ−置換環状イミノエ
ステルを（Ｓ）−Ｎ−置換環状イミノ酸類変換するため
の優れた能力を有することから、Ｎ−置換環状イミノエ
ステルに該固定化酵素を作用させることにより工業的に
有利に（Ｓ）−Ｎ−置換環状イミノ酸類を製造できる。
テルから（Ｓ）−Ｎ−置換環状イミノ酸類を生産する方
法を提供すること。 【解決手段】特定のアミノ酸配列を有するタンパク質等
を、平均半径２００〜５００オングストロームの細孔を
有するスチレン−ジビニルベンゼン共重合体に固定化し
たことを特徴とする固定化酵素がＮ−置換環状イミノエ
ステルを（Ｓ）−Ｎ−置換環状イミノ酸類変換するため
の優れた能力を有することから、Ｎ−置換環状イミノエ
ステルに該固定化酵素を作用させることにより工業的に
有利に（Ｓ）−Ｎ−置換環状イミノ酸類を製造できる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はＮ−ベンジルアゼチ
ジン−２−カルボン酸エチルエステルを不斉加水分解
し、（Ｓ）体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボン
酸を優先的に生産する能力を有するタンパク質を固定化
した固定化酵素、及び該固定化酵素を用いた（Ｓ）−Ｎ
−置換環状イミノ酸類の製造法に関する。
ジン−２−カルボン酸エチルエステルを不斉加水分解
し、（Ｓ）体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボン
酸を優先的に生産する能力を有するタンパク質を固定化
した固定化酵素、及び該固定化酵素を用いた（Ｓ）−Ｎ
−置換環状イミノ酸類の製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】一般
式（２）
式（２）
【化３】
（式中、Ｒ2は炭素数７〜１９のアラルキル基、炭素数
２〜５のアルキルカルボニル基、炭素数３〜６のアルケ
ニルカルボニル基、炭素数７〜１３のアリールカルボニ
ル基、炭素数８〜１０のアラルキルカルボニル基、炭素
数２〜９のアルキルオキシカルボニル基、炭素数８〜１
０のアラルキルオキシカルボニル基、炭素数３〜９のア
ルケニルオキシカルボニル基、炭素数７〜１３のアリー
ルオキシカルボニル基、炭素数１〜８のアルキル基、炭
素数２〜８のアルケニル基、炭素数６〜１２のアリール
基又は炭素数６〜１２のアリールスルホニル基を示す
が、該アラルキル基、アリールカルボニル基、アラルキ
ルカルボニル基、アラルキルオキシカルボニル基、アリ
ールオキシカルボニル基、アリール基又はアリールスル
ホニル基において、その芳香環に結合する水素原子の１
個以上は炭素数１〜８のアルキル基、炭素数１〜８のア
ルコキシ基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる少
なくとも１種で置換されていてもよく、該アルキルカル
ボニル基、アルケニルカルボニル基、アルキルオキシカ
ルボニル基、アルケニルオキシカルボニル基、アルキル
基又はアルケニル基における水素原子の１個以上は炭素
数１〜８個のアルコキシ基、ハロゲン原子及びニトロ基
から選ばれる少なくとも一種で置換されていてもよい。
ｎは１又は２を表す。）で示される（Ｓ）−Ｎ−置換環
状イミノ酸類は医薬等の中間体として有用な化合物であ
る。
２〜５のアルキルカルボニル基、炭素数３〜６のアルケ
ニルカルボニル基、炭素数７〜１３のアリールカルボニ
ル基、炭素数８〜１０のアラルキルカルボニル基、炭素
数２〜９のアルキルオキシカルボニル基、炭素数８〜１
０のアラルキルオキシカルボニル基、炭素数３〜９のア
ルケニルオキシカルボニル基、炭素数７〜１３のアリー
ルオキシカルボニル基、炭素数１〜８のアルキル基、炭
素数２〜８のアルケニル基、炭素数６〜１２のアリール
基又は炭素数６〜１２のアリールスルホニル基を示す
が、該アラルキル基、アリールカルボニル基、アラルキ
ルカルボニル基、アラルキルオキシカルボニル基、アリ
ールオキシカルボニル基、アリール基又はアリールスル
ホニル基において、その芳香環に結合する水素原子の１
個以上は炭素数１〜８のアルキル基、炭素数１〜８のア
ルコキシ基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる少
なくとも１種で置換されていてもよく、該アルキルカル
ボニル基、アルケニルカルボニル基、アルキルオキシカ
ルボニル基、アルケニルオキシカルボニル基、アルキル
基又はアルケニル基における水素原子の１個以上は炭素
数１〜８個のアルコキシ基、ハロゲン原子及びニトロ基
から選ばれる少なくとも一種で置換されていてもよい。
ｎは１又は２を表す。）で示される（Ｓ）−Ｎ−置換環
状イミノ酸類は医薬等の中間体として有用な化合物であ
る。
【０００３】そして、特開２００１−４６０８４号公報
において一般式（１）
において一般式（１）
【化４】
（式中、Ｒ1は炭素数１〜８のアルキル基、炭素数７〜
１９のアラルキル基、炭素数２〜５のアルケニル基又は
炭素数６〜１２のアリール基を表すが、該アルキル基に
おける水素原子の１個以上が炭素数１〜８のアルコキシ
基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる少なくとも
１種で置換されていてもよく、該アラルキル基又は該ア
リール基における芳香環に結合する水素原子の１個以上
が炭素数１〜８のアルキル基、炭素数１〜８のアルコキ
シ基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる１種以上
で置換されていてもよい。Ｒ2は炭素数７〜１９のアラ
ルキル基、炭素数２〜５のアルキルカルボニル基、炭素
数３〜６のアルケニルカルボニル基、炭素数７〜１３の
アリールカルボニル基、炭素数８〜１０のアラルキルカ
ルボニル基、炭素数２〜９のアルキルオキシカルボニル
基、炭素数８〜１０のアラルキルオキシカルボニル基、
炭素数３〜９のアルケニルオキシカルボニル基、炭素数
７〜１３のアリールオキシカルボニル基、炭素数１〜８
のアルキル基、炭素数２〜８のアルケニル基、炭素数６
〜１２のアリール基又は炭素数６〜１２のアリールスル
ホニル基を示すが、該アラルキル基、アリールカルボニ
ル基、アラルキルカルボニル基、アラルキルオキシカル
ボニル基、アリールオキシカルボニル基、アリール基又
はアリールスルホニル基において、その芳香環に結合す
る水素原子の１個以上は炭素数１〜８のアルキル基、炭
素数１〜８のアルコキシ基、ハロゲン原子及びニトロ基
から選ばれる少なくとも１種で置換されていてもよく、
該アルキルカルボニル基、アルケニルカルボニル基、ア
ルキルオキシカルボニル基、アルケニルオキシカルボニ
ル基、アルキル基又はアルケニル基における水素原子の
１個以上は炭素数１〜８個のアルコキシ基、ハロゲン原
子及びニトロ基から選ばれる少なくとも一種で置換され
ていてもよい。ｎは１又は２を表す。）で示されるＮ−
置換環状イミノエステル類に下記（ａ）〜（ｄ）のいず
れかのアミノ酸配列を有するタンパク質を作用させるこ
とを特徴とする一般式（２）で示される（Ｓ）−Ｎ−置
換環状イミノ酸類の製造方法が知られている。
１９のアラルキル基、炭素数２〜５のアルケニル基又は
炭素数６〜１２のアリール基を表すが、該アルキル基に
おける水素原子の１個以上が炭素数１〜８のアルコキシ
基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる少なくとも
１種で置換されていてもよく、該アラルキル基又は該ア
リール基における芳香環に結合する水素原子の１個以上
が炭素数１〜８のアルキル基、炭素数１〜８のアルコキ
シ基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる１種以上
で置換されていてもよい。Ｒ2は炭素数７〜１９のアラ
ルキル基、炭素数２〜５のアルキルカルボニル基、炭素
数３〜６のアルケニルカルボニル基、炭素数７〜１３の
アリールカルボニル基、炭素数８〜１０のアラルキルカ
ルボニル基、炭素数２〜９のアルキルオキシカルボニル
基、炭素数８〜１０のアラルキルオキシカルボニル基、
炭素数３〜９のアルケニルオキシカルボニル基、炭素数
７〜１３のアリールオキシカルボニル基、炭素数１〜８
のアルキル基、炭素数２〜８のアルケニル基、炭素数６
〜１２のアリール基又は炭素数６〜１２のアリールスル
ホニル基を示すが、該アラルキル基、アリールカルボニ
ル基、アラルキルカルボニル基、アラルキルオキシカル
ボニル基、アリールオキシカルボニル基、アリール基又
はアリールスルホニル基において、その芳香環に結合す
る水素原子の１個以上は炭素数１〜８のアルキル基、炭
素数１〜８のアルコキシ基、ハロゲン原子及びニトロ基
から選ばれる少なくとも１種で置換されていてもよく、
該アルキルカルボニル基、アルケニルカルボニル基、ア
ルキルオキシカルボニル基、アルケニルオキシカルボニ
ル基、アルキル基又はアルケニル基における水素原子の
１個以上は炭素数１〜８個のアルコキシ基、ハロゲン原
子及びニトロ基から選ばれる少なくとも一種で置換され
ていてもよい。ｎは１又は２を表す。）で示されるＮ−
置換環状イミノエステル類に下記（ａ）〜（ｄ）のいず
れかのアミノ酸配列を有するタンパク質を作用させるこ
とを特徴とする一般式（２）で示される（Ｓ）−Ｎ−置
換環状イミノ酸類の製造方法が知られている。
【０００４】（ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配
列。 （ｂ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を優先的に生産す
る能力を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、か
つ配列番号１で示されるアミノ酸配列の一部からなるア
ミノ酸配列。 （ｃ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジンカルボン酸を優先的に生産する能力
を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、かつ配列
番号１で示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列か
らなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズするＤＮＡの塩基配列がコードするアミノ酸配列。 （ｄ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を優先的に生産す
る能力を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、か
つ配列番号１で示されるアミノ酸配列に対して６０％以
上のアミノ酸同一性を示すアミノ酸配列。
列。 （ｂ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を優先的に生産す
る能力を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、か
つ配列番号１で示されるアミノ酸配列の一部からなるア
ミノ酸配列。 （ｃ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジンカルボン酸を優先的に生産する能力
を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、かつ配列
番号１で示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列か
らなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズするＤＮＡの塩基配列がコードするアミノ酸配列。 （ｄ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を優先的に生産す
る能力を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、か
つ配列番号１で示されるアミノ酸配列に対して６０％以
上のアミノ酸同一性を示すアミノ酸配列。
【０００５】本発明は、前記（ａ）〜（ｄ）のいずれか
のアミノ酸配列を有するタンパク質を担体に固定化し、
得られた固定化酵素を一般式（１）で示されるＮ−置換
環状イミノエステルに作用させ、一般式（２）で示され
る（Ｓ）−Ｎ−置換環状イミノ酸類を工業的に有利に製
造する方法を提供することを課題とする。
のアミノ酸配列を有するタンパク質を担体に固定化し、
得られた固定化酵素を一般式（１）で示されるＮ−置換
環状イミノエステルに作用させ、一般式（２）で示され
る（Ｓ）−Ｎ−置換環状イミノ酸類を工業的に有利に製
造する方法を提供することを課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者は上記課題を解
決すべ鋭意検討した結果、下記（ａ）〜（ｄ）のいずれ
かのアミノ酸配列を有するタンパク質を平均半径２００
〜５００オングストロームの細孔を有するスチレン−ジ
ビニルベンゼン共重合体に固定化した固定化酵素が一般
式（１）で示されるＮ−置換環状イミノエステルを一般
式（２）で示される（Ｓ）−Ｎ−置換環状イミノ酸類に
変換する高い触媒活性を有し、大量スケールにおいても
高い変換率で一般式（２）で示される（Ｓ）−Ｎ−置換
環状イミノ酸類が得られることを見出し、本発明を完成
した。
決すべ鋭意検討した結果、下記（ａ）〜（ｄ）のいずれ
かのアミノ酸配列を有するタンパク質を平均半径２００
〜５００オングストロームの細孔を有するスチレン−ジ
ビニルベンゼン共重合体に固定化した固定化酵素が一般
式（１）で示されるＮ−置換環状イミノエステルを一般
式（２）で示される（Ｓ）−Ｎ−置換環状イミノ酸類に
変換する高い触媒活性を有し、大量スケールにおいても
高い変換率で一般式（２）で示される（Ｓ）−Ｎ−置換
環状イミノ酸類が得られることを見出し、本発明を完成
した。
【０００７】即ち、本発明は、１．下記（ａ）〜（ｄ）
のいずれかのアミノ酸配列を有するタンパク質を、平均
半径２００〜５００オングストロームの細孔を有するス
チレン−ジビニルベンゼン共重合体に固定化したことを
特徴とする固定化酵素（以下、本発明固定化酵素と記
す。）。 （ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列。 （ｂ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を優先的に生産す
る能力を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、か
つ配列番号１で示されるアミノ酸配列の一部のみからな
るアミノ酸配列。 （ｃ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジンカルボン酸を優先的に生産する能力
を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、かつ配列
番号１で示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列か
らなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズするＤＮＡの塩基配列がコードするアミノ酸配列。 （ｄ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を優先的に生産す
る能力を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、か
つ配列番号１で示されるアミノ酸配列に対して６０％以
上のアミノ酸同一性を示すアミノ酸配列。及び、
のいずれかのアミノ酸配列を有するタンパク質を、平均
半径２００〜５００オングストロームの細孔を有するス
チレン−ジビニルベンゼン共重合体に固定化したことを
特徴とする固定化酵素（以下、本発明固定化酵素と記
す。）。 （ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列。 （ｂ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を優先的に生産す
る能力を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、か
つ配列番号１で示されるアミノ酸配列の一部のみからな
るアミノ酸配列。 （ｃ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジンカルボン酸を優先的に生産する能力
を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、かつ配列
番号１で示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列か
らなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズするＤＮＡの塩基配列がコードするアミノ酸配列。 （ｄ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を優先的に生産す
る能力を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、か
つ配列番号１で示されるアミノ酸配列に対して６０％以
上のアミノ酸同一性を示すアミノ酸配列。及び、
【０００８】２．一般式（１）
【化５】
（式中、Ｒ1は炭素数１〜８のアルキル基、炭素数７〜
１９のアラルキル基、炭素数２〜５のアルケニル基又は
炭素数６〜１２のアリール基を表すが、該アルキル基に
おける水素原子の１個以上が炭素数１〜８のアルコキシ
基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる少なくとも
１種で置換されていてもよく、該アラルキル基又は該ア
リール基における芳香環に結合する水素原子の１個以上
が炭素数１〜８のアルキル基、炭素数１〜８のアルコキ
シ基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる１種以上
で置換されていてもよい。Ｒ2は炭素数７〜１９のアラ
ルキル基、炭素数２〜５のアルキルカルボニル基、炭素
数３〜６のアルケニルカルボニル基、炭素数７〜１３の
アリールカルボニル基、炭素数８〜１０のアラルキルカ
ルボニル基、炭素数２〜９のアルキルオキシカルボニル
基、炭素数８〜１０のアラルキルオキシカルボニル基、
炭素数３〜９のアルケニルオキシカルボニル基、炭素数
７〜１３のアリールオキシカルボニル基、炭素数１〜８
のアルキル基、炭素数２〜８のアルケニル基、炭素数６
〜１２のアリール基又は炭素数６〜１２のアリールスル
ホニル基を示すが、該アラルキル基、アリールカルボニ
ル基、アラルキルカルボニル基、アラルキルオキシカル
ボニル基、アリールオキシカルボニル基、アリール基又
はアリールスルホニル基において、その芳香環に結合す
る水素原子の１個以上は炭素数１〜８のアルキル基、炭
素数１〜８のアルコキシ基、ハロゲン原子及びニトロ基
から選ばれる少なくとも１種で置換されていてもよく、
該アルキルカルボニル基、アルケニルカルボニル基、ア
ルキルオキシカルボニル基、アルケニルオキシカルボニ
ル基、アルキル基又はアルケニル基における水素原子の
１個以上は炭素数１〜８個のアルコキシ基、ハロゲン原
子及びニトロ基から選ばれる少なくとも一種で置換され
ていてもよい。ｎは１又は２を表す。）で示されるＮ−
置換環状イミノエステルに本発明固定化酵素を作用させ
ることを特徴とする、一般式（２）
１９のアラルキル基、炭素数２〜５のアルケニル基又は
炭素数６〜１２のアリール基を表すが、該アルキル基に
おける水素原子の１個以上が炭素数１〜８のアルコキシ
基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる少なくとも
１種で置換されていてもよく、該アラルキル基又は該ア
リール基における芳香環に結合する水素原子の１個以上
が炭素数１〜８のアルキル基、炭素数１〜８のアルコキ
シ基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる１種以上
で置換されていてもよい。Ｒ2は炭素数７〜１９のアラ
ルキル基、炭素数２〜５のアルキルカルボニル基、炭素
数３〜６のアルケニルカルボニル基、炭素数７〜１３の
アリールカルボニル基、炭素数８〜１０のアラルキルカ
ルボニル基、炭素数２〜９のアルキルオキシカルボニル
基、炭素数８〜１０のアラルキルオキシカルボニル基、
炭素数３〜９のアルケニルオキシカルボニル基、炭素数
７〜１３のアリールオキシカルボニル基、炭素数１〜８
のアルキル基、炭素数２〜８のアルケニル基、炭素数６
〜１２のアリール基又は炭素数６〜１２のアリールスル
ホニル基を示すが、該アラルキル基、アリールカルボニ
ル基、アラルキルカルボニル基、アラルキルオキシカル
ボニル基、アリールオキシカルボニル基、アリール基又
はアリールスルホニル基において、その芳香環に結合す
る水素原子の１個以上は炭素数１〜８のアルキル基、炭
素数１〜８のアルコキシ基、ハロゲン原子及びニトロ基
から選ばれる少なくとも１種で置換されていてもよく、
該アルキルカルボニル基、アルケニルカルボニル基、ア
ルキルオキシカルボニル基、アルケニルオキシカルボニ
ル基、アルキル基又はアルケニル基における水素原子の
１個以上は炭素数１〜８個のアルコキシ基、ハロゲン原
子及びニトロ基から選ばれる少なくとも一種で置換され
ていてもよい。ｎは１又は２を表す。）で示されるＮ−
置換環状イミノエステルに本発明固定化酵素を作用させ
ることを特徴とする、一般式（２）
【化６】
（式中、Ｒ2及びｎは前記と同じ意味を表す。）で示さ
れる（Ｓ）−Ｎ−置換環状イミノ酸類の製造方法（以
下、本発明製造方法と記す。）を提供する。
れる（Ｓ）−Ｎ−置換環状イミノ酸類の製造方法（以
下、本発明製造方法と記す。）を提供する。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明に用いられるタンパク質
（以下、本タンパク質と記す。）は、以下のアミノ酸は
配列を有する。 （ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列。 （ｂ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を優先的に生産す
る能力を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、か
つ配列番号１で示されるアミノ酸配列の一部のみからな
るアミノ酸配列。 （ｃ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジンカルボン酸を優先的に生産する能力
を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、かつ配列
番号１で示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列か
らなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズするＤＮＡの塩基配列がコードするアミノ酸配列。 （ｄ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を優先的に生産す
る能力を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、か
つ配列番号１で示されるアミノ酸配列に対して６０％以
上のアミノ酸同一性を示すアミノ酸配列。
（以下、本タンパク質と記す。）は、以下のアミノ酸は
配列を有する。 （ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列。 （ｂ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を優先的に生産す
る能力を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、か
つ配列番号１で示されるアミノ酸配列の一部のみからな
るアミノ酸配列。 （ｃ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジンカルボン酸を優先的に生産する能力
を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、かつ配列
番号１で示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列か
らなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズするＤＮＡの塩基配列がコードするアミノ酸配列。 （ｄ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を優先的に生産す
る能力を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、か
つ配列番号１で示されるアミノ酸配列に対して６０％以
上のアミノ酸同一性を示すアミノ酸配列。
【００１０】「ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２
−カルボン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）
体のＮ−ベンジルアゼチジンカルボン酸を優先的に生産
する能力を有するタンパク質」とは、例えばタンパク質
を含有する３．５ｍｌの１００ｍＭリン酸カリウム緩衝
液（ｐＨ７．０）中に、０．０２ｇのラセミ体のＮ−ベ
ンジルアゼチジンカルボン酸エチルエステル、１．０ｍ
ｌのメチル−ｔ−ブチルエーテルを添加することにより
反応液を調製し、この反応液を約３０〜３５℃にて１〜
２４時間振盪した後、得られた反応混合物を遠心分離し
て得られる水層中に存在する（Ｓ）体のＮ−ベンジルア
ゼチジン−２−カルボン酸の量を分析することにより当
該能力の有無を判定することができる。
−カルボン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）
体のＮ−ベンジルアゼチジンカルボン酸を優先的に生産
する能力を有するタンパク質」とは、例えばタンパク質
を含有する３．５ｍｌの１００ｍＭリン酸カリウム緩衝
液（ｐＨ７．０）中に、０．０２ｇのラセミ体のＮ−ベ
ンジルアゼチジンカルボン酸エチルエステル、１．０ｍ
ｌのメチル−ｔ−ブチルエーテルを添加することにより
反応液を調製し、この反応液を約３０〜３５℃にて１〜
２４時間振盪した後、得られた反応混合物を遠心分離し
て得られる水層中に存在する（Ｓ）体のＮ−ベンジルア
ゼチジン−２−カルボン酸の量を分析することにより当
該能力の有無を判定することができる。
【００１１】「配列番号１で示されるアミノ酸配列の一
部からなるアミノ酸配列」としては、例えば以下のアミ
ノ酸配列が挙げられる。 （ｉ）配列番号１で示されるアミノ酸配列のうち、アミ
ノ酸番号３５〜２５５で表されるアミノ酸配列。 （ｉｉ）配列番号１で示されるアミノ酸配列のうち、ア
ミノ酸番号７９〜２５５で表されるアミノ酸配列。
部からなるアミノ酸配列」としては、例えば以下のアミ
ノ酸配列が挙げられる。 （ｉ）配列番号１で示されるアミノ酸配列のうち、アミ
ノ酸番号３５〜２５５で表されるアミノ酸配列。 （ｉｉ）配列番号１で示されるアミノ酸配列のうち、ア
ミノ酸番号７９〜２５５で表されるアミノ酸配列。
【００１２】配列番号１で示されるアミノ酸配列をコー
ドする塩基配列としては、例えば配列番号２で示される
塩基配列が挙げられる。
ドする塩基配列としては、例えば配列番号２で示される
塩基配列が挙げられる。
【００１３】「配列番号１で示されるアミノ酸配列をコ
ードする塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな
条件下でハイブリダイズするＤＮＡ」とは、例えば、
「クローニングとシークエンス」（渡辺格監修、杉浦昌
弘編集、１９８９、農村文化社発行）等に記載されるサ
ザンハイブリダイゼーション法において、（１）高イオ
ン濃度下［例えば、６ＸＳＳＣ（９００ｍＭの塩化ナト
リウム、９０ｍＭのクエン酸ナトリウム）等が挙げられ
る。］に６５℃の温度条件下でハイブリダイズさせるこ
とにより配列番号１で示されるアミノ酸配列をコードす
る塩基配列からなるＤＮＡとＤＮＡ−ＤＮＡハイブリッ
ドを形成し、（２）低イオン濃度下［例えば、０．１Ｘ
ＳＳＣ（１５ｍＭの塩化ナトリウム、１．５ｍＭのクエ
ン酸ナトリウム）等が用いられる。］に６５℃の温度条
件で３０分間保温した後でも該ハイブリッドが維持され
るようなＤＮＡをいう。具体的には例えば、配列番号１
で示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列からなる
ＤＮＡや配列番号１で示されるアミノ酸配列をコードす
る塩基配列において、その一部の塩基配列が欠失、置換
若しくは付加された塩基配列からなるＤＮＡなどが挙げ
られる。
ードする塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな
条件下でハイブリダイズするＤＮＡ」とは、例えば、
「クローニングとシークエンス」（渡辺格監修、杉浦昌
弘編集、１９８９、農村文化社発行）等に記載されるサ
ザンハイブリダイゼーション法において、（１）高イオ
ン濃度下［例えば、６ＸＳＳＣ（９００ｍＭの塩化ナト
リウム、９０ｍＭのクエン酸ナトリウム）等が挙げられ
る。］に６５℃の温度条件下でハイブリダイズさせるこ
とにより配列番号１で示されるアミノ酸配列をコードす
る塩基配列からなるＤＮＡとＤＮＡ−ＤＮＡハイブリッ
ドを形成し、（２）低イオン濃度下［例えば、０．１Ｘ
ＳＳＣ（１５ｍＭの塩化ナトリウム、１．５ｍＭのクエ
ン酸ナトリウム）等が用いられる。］に６５℃の温度条
件で３０分間保温した後でも該ハイブリッドが維持され
るようなＤＮＡをいう。具体的には例えば、配列番号１
で示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列からなる
ＤＮＡや配列番号１で示されるアミノ酸配列をコードす
る塩基配列において、その一部の塩基配列が欠失、置換
若しくは付加された塩基配列からなるＤＮＡなどが挙げ
られる。
【００１４】「配列番号１で示されるアミノ酸配列に対
して６０％以上のアミノ酸同一性」とは配列番号１で示
される全アミノ酸を対象とする同一性であり、好ましく
は８０％以上のアミノ酸同一性を挙げることができる。
して６０％以上のアミノ酸同一性」とは配列番号１で示
される全アミノ酸を対象とする同一性であり、好ましく
は８０％以上のアミノ酸同一性を挙げることができる。
【００１５】本発明において、平均半径２００〜５００
オングストロームの細孔を有するスチレン−ジビニルベ
ンゼン共重合体（以下、本固定化担体と記す。）は通常
粒子状のものが用いられる。本固定化担体の比表面積は
通常１０〜１５００ｍ2／ｇであり、細孔容積は通常
０．１〜３ｍｌ／ｇである。かかる本固定化担体として
は、例えば「ダイヤイオンＨＰ２０」（三菱化学株式会
社商品名）が挙げられる。
オングストロームの細孔を有するスチレン−ジビニルベ
ンゼン共重合体（以下、本固定化担体と記す。）は通常
粒子状のものが用いられる。本固定化担体の比表面積は
通常１０〜１５００ｍ2／ｇであり、細孔容積は通常
０．１〜３ｍｌ／ｇである。かかる本固定化担体として
は、例えば「ダイヤイオンＨＰ２０」（三菱化学株式会
社商品名）が挙げられる。
【００１６】また、本発明固定化酵素を用いた反応の効
率の点から、上記本固定化担体は小粒子径のものが好ま
しく、具体的には例えば粒子径が平均５０〜２００μｍ
であるもの及び粒度分布において６０〜１１０μｍの粒
子径のものが６０％以上のものが好ましい。かかる小粒
径の本固定化担体としては、具体的には例えば「ダイヤ
イオンＨＰ２０ＳＳ」（三菱化学株式会社商品名）が挙
げられる。
率の点から、上記本固定化担体は小粒子径のものが好ま
しく、具体的には例えば粒子径が平均５０〜２００μｍ
であるもの及び粒度分布において６０〜１１０μｍの粒
子径のものが６０％以上のものが好ましい。かかる小粒
径の本固定化担体としては、具体的には例えば「ダイヤ
イオンＨＰ２０ＳＳ」（三菱化学株式会社商品名）が挙
げられる。
【００１７】本発明固定化酵素は、通常本タンパク質
と、本固定化担体とを接触させることにより製造するこ
とができる。本タンパク質と、本固定化担体とを接触さ
せる方法としては例えば本タンパク質を含有する溶液に
本固定化担体を加え攪拌する方法が挙げられる。
と、本固定化担体とを接触させることにより製造するこ
とができる。本タンパク質と、本固定化担体とを接触さ
せる方法としては例えば本タンパク質を含有する溶液に
本固定化担体を加え攪拌する方法が挙げられる。
【００１８】本タンパク質は、例えば特開２００１−４
６０８４号公報に記載された方法により、具体的には例
えばＥ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０５／ｐＹＨＮＫ２株（特開
２００１−４６０８４号公報に記載）を培養することに
より製造することができる。本タンパク質は、通常精製
タンパク質、粗精製タンパク質等の形態で本発明固定化
酵素の製造に用いられる。上記のＥ．ｃｏｌｉ ＪＭ１
０５／ｐＹＨＮＫ２株の培養物からの本タンパク質の精
製タンパク質または粗精製タンパク質を得る方法として
は、通常のタンパク質の精製において使用される方法を
適用することができ、例えば次の方法を挙げることがで
きる。
６０８４号公報に記載された方法により、具体的には例
えばＥ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０５／ｐＹＨＮＫ２株（特開
２００１−４６０８４号公報に記載）を培養することに
より製造することができる。本タンパク質は、通常精製
タンパク質、粗精製タンパク質等の形態で本発明固定化
酵素の製造に用いられる。上記のＥ．ｃｏｌｉ ＪＭ１
０５／ｐＹＨＮＫ２株の培養物からの本タンパク質の精
製タンパク質または粗精製タンパク質を得る方法として
は、通常のタンパク質の精製において使用される方法を
適用することができ、例えば次の方法を挙げることがで
きる。
【００１９】まず、微生物の培養物中の菌体を破砕（例
えば、微生物の培養物から遠心分離等によって菌体を集
めた後、菌体を超音波処理等の物理的破砕法に付する；
微生物の培養物にエタノール等の低級アルコールを加え
しばらく放置する等の方法で行われる。）する。得られ
た破砕液を遠心分離、メンブレンフィルター濾過等する
ことにより不溶物を除去して本タンパク質を含有する清
澄液を調製することができる。また、この清澄液をさら
に陽イオン交換クロマトグラフィー、陰イオン交換クロ
マトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、ゲルクロマ
トグラフィー等の分離精製方法を適宜用いて分画するこ
とにより、さらに本タンパク質を精製することもでき
る。
えば、微生物の培養物から遠心分離等によって菌体を集
めた後、菌体を超音波処理等の物理的破砕法に付する；
微生物の培養物にエタノール等の低級アルコールを加え
しばらく放置する等の方法で行われる。）する。得られ
た破砕液を遠心分離、メンブレンフィルター濾過等する
ことにより不溶物を除去して本タンパク質を含有する清
澄液を調製することができる。また、この清澄液をさら
に陽イオン交換クロマトグラフィー、陰イオン交換クロ
マトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、ゲルクロマ
トグラフィー等の分離精製方法を適宜用いて分画するこ
とにより、さらに本タンパク質を精製することもでき
る。
【００２０】本タンパク質と、本固定化担体とを接触さ
せる際の温度は、通常１〜３７℃、好ましくは５〜１５
℃の範囲であり、接触時間は通常１〜４８時間の範囲で
ある。接触時のｐＨは通常４〜１０、好ましくは６〜８
の範囲内である。
せる際の温度は、通常１〜３７℃、好ましくは５〜１５
℃の範囲であり、接触時間は通常１〜４８時間の範囲で
ある。接触時のｐＨは通常４〜１０、好ましくは６〜８
の範囲内である。
【００２１】本発明固定化酵素を製造する際に用いられ
る本固定化担体の量は、本タンパク質１０００Ｕ（１Ｕ
は１分間にラセミ−Ｎ−ベンジルアゼチジン−２−カル
ボン酸エチルエステルを加水分解して１μｍｏｌのＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を生成することが
できる本タンパク質の量）に対して、通常０．０１〜１
ｇ、好ましくは０．０８〜０．１２ｇの範囲である。
る本固定化担体の量は、本タンパク質１０００Ｕ（１Ｕ
は１分間にラセミ−Ｎ−ベンジルアゼチジン−２−カル
ボン酸エチルエステルを加水分解して１μｍｏｌのＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を生成することが
できる本タンパク質の量）に対して、通常０．０１〜１
ｇ、好ましくは０．０８〜０．１２ｇの範囲である。
【００２２】本固定化担体に本タンパク質が固定化され
たことは、例えば本タンパク質を含有した溶液のラセミ
−Ｎ−ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸エチルエス
テルを加水分解する能力を追跡することで判別すること
ができる。
たことは、例えば本タンパク質を含有した溶液のラセミ
−Ｎ−ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸エチルエス
テルを加水分解する能力を追跡することで判別すること
ができる。
【００２３】上記のようにして得られた本発明固定化酵
素は、濾過、遠心分離等によって単離することができ
る。
素は、濾過、遠心分離等によって単離することができ
る。
【００２４】次に、本発明製造方法について説明する。
本発明製造方法は、一般式（１）
本発明製造方法は、一般式（１）
【化７】
（式中、Ｒ1は炭素数１〜８のアルキル基、炭素数７〜
１９のアラルキル基、炭素数２〜５のアルケニル基又は
炭素数６〜１２のアリール基を表すが、該アルキル基に
おける水素原子の１個以上が炭素数１〜８のアルコキシ
基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる少なくとも
１種で置換されていてもよく、該アラルキル基又は該ア
リール基における芳香環に結合する水素原子の１個以上
が炭素数１〜８のアルキル基、炭素数１〜８のアルコキ
シ基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる１種以上
で置換されていてもよい。Ｒ2は炭素数７〜１９のアラ
ルキル基、炭素数２〜５のアルキルカルボニル基、炭素
数３〜６のアルケニルカルボニル基、炭素数７〜１３の
アリールカルボニル基、炭素数８〜１０のアラルキルカ
ルボニル基、炭素数２〜９のアルキルオキシカルボニル
基、炭素数８〜１０のアラルキルオキシカルボニル基、
炭素数３〜９のアルケニルオキシカルボニル基、炭素数
７〜１３のアリールオキシカルボニル基、炭素数１〜８
のアルキル基、炭素数２〜８のアルケニル基、炭素数６
〜１２のアリール基又は炭素数６〜１２のアリールスル
ホニル基を示すが、該アラルキル基、アリールカルボニ
ル基、アラルキルカルボニル基、アラルキルオキシカル
ボニル基、アリールオキシカルボニル基、アリール基又
はアリールスルホニル基において、その芳香環に結合す
る水素原子の１個以上は炭素数１〜８のアルキル基、炭
素数１〜８のアルコキシ基、ハロゲン原子及びニトロ基
から選ばれる少なくとも１種で置換されていてもよく、
該アルキルカルボニル基、アルケニルカルボニル基、ア
ルキルオキシカルボニル基、アルケニルオキシカルボニ
ル基、アルキル基又はアルケニル基における水素原子の
１個以上は炭素数１〜８個のアルコキシ基、ハロゲン原
子及びニトロ基から選ばれる少なくとも一種で置換され
ていてもよい。ｎは１又は２を表す。）で示されるＮ−
置換環状イミノエステルに本発明固定化酵素を作用させ
ることにより反応が進行する。
１９のアラルキル基、炭素数２〜５のアルケニル基又は
炭素数６〜１２のアリール基を表すが、該アルキル基に
おける水素原子の１個以上が炭素数１〜８のアルコキシ
基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる少なくとも
１種で置換されていてもよく、該アラルキル基又は該ア
リール基における芳香環に結合する水素原子の１個以上
が炭素数１〜８のアルキル基、炭素数１〜８のアルコキ
シ基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる１種以上
で置換されていてもよい。Ｒ2は炭素数７〜１９のアラ
ルキル基、炭素数２〜５のアルキルカルボニル基、炭素
数３〜６のアルケニルカルボニル基、炭素数７〜１３の
アリールカルボニル基、炭素数８〜１０のアラルキルカ
ルボニル基、炭素数２〜９のアルキルオキシカルボニル
基、炭素数８〜１０のアラルキルオキシカルボニル基、
炭素数３〜９のアルケニルオキシカルボニル基、炭素数
７〜１３のアリールオキシカルボニル基、炭素数１〜８
のアルキル基、炭素数２〜８のアルケニル基、炭素数６
〜１２のアリール基又は炭素数６〜１２のアリールスル
ホニル基を示すが、該アラルキル基、アリールカルボニ
ル基、アラルキルカルボニル基、アラルキルオキシカル
ボニル基、アリールオキシカルボニル基、アリール基又
はアリールスルホニル基において、その芳香環に結合す
る水素原子の１個以上は炭素数１〜８のアルキル基、炭
素数１〜８のアルコキシ基、ハロゲン原子及びニトロ基
から選ばれる少なくとも１種で置換されていてもよく、
該アルキルカルボニル基、アルケニルカルボニル基、ア
ルキルオキシカルボニル基、アルケニルオキシカルボニ
ル基、アルキル基又はアルケニル基における水素原子の
１個以上は炭素数１〜８個のアルコキシ基、ハロゲン原
子及びニトロ基から選ばれる少なくとも一種で置換され
ていてもよい。ｎは１又は２を表す。）で示されるＮ−
置換環状イミノエステルに本発明固定化酵素を作用させ
ることにより反応が進行する。
【００２５】該反応は、通常水の存在下に行われる。な
お、水は緩衝水溶液の形態であってもよい。水の量は一
般式（１）で示されるＮ−置換環状イミノエステル化合
物１モルに対して通常０．５モル以上であり、水を溶媒
として用いることもできる。また、該反応には、水に加
えて疎水性有機溶媒、親水性有機溶媒等の有機溶媒を共
存させることもできる。この場合の疎水性有機溶媒とし
ては、例えばｔ−ブチルメチルエーテル、イソプロピル
エーテル等のエーテル類、トルエン、ヘキサン、シクロ
ヘキサン、ヘプタン、イソオクタン等の炭化水素類が挙
げられ、親水性有機溶媒としては、例えばメタノール、
エタノール、２−プロパノール、１，１−ジメチルエタ
ノール等のアルコール類、アセトン等のケトン類、アセ
トニトリル等のニトリル類が挙げられる。これらの疎水
性有機溶媒や親水性有機溶媒は単独又は２種以上を組み
合わせて用いることができ、疎水性有機溶媒と親水性有
機溶媒とを組み合わせて用いることもできる。有機溶媒
を用いる場合、その使用量は一般式（１）で示されるＮ
−置換環状イミノエステル化合物１重量部に対して通常
１００重量部以下、好ましくは０．１〜５０重量部の範
囲である。
お、水は緩衝水溶液の形態であってもよい。水の量は一
般式（１）で示されるＮ−置換環状イミノエステル化合
物１モルに対して通常０．５モル以上であり、水を溶媒
として用いることもできる。また、該反応には、水に加
えて疎水性有機溶媒、親水性有機溶媒等の有機溶媒を共
存させることもできる。この場合の疎水性有機溶媒とし
ては、例えばｔ−ブチルメチルエーテル、イソプロピル
エーテル等のエーテル類、トルエン、ヘキサン、シクロ
ヘキサン、ヘプタン、イソオクタン等の炭化水素類が挙
げられ、親水性有機溶媒としては、例えばメタノール、
エタノール、２−プロパノール、１，１−ジメチルエタ
ノール等のアルコール類、アセトン等のケトン類、アセ
トニトリル等のニトリル類が挙げられる。これらの疎水
性有機溶媒や親水性有機溶媒は単独又は２種以上を組み
合わせて用いることができ、疎水性有機溶媒と親水性有
機溶媒とを組み合わせて用いることもできる。有機溶媒
を用いる場合、その使用量は一般式（１）で示されるＮ
−置換環状イミノエステル化合物１重量部に対して通常
１００重量部以下、好ましくは０．１〜５０重量部の範
囲である。
【００２６】該反応は、例えば水、一般式（１）で示さ
れるＮ−置換環状イミノエステル化合物及び本発明固定
化酵素、必要に応じてさらに有機溶媒等を含有した状態
で攪拌、振盪等により混合することにより行われる。
れるＮ−置換環状イミノエステル化合物及び本発明固定
化酵素、必要に応じてさらに有機溶媒等を含有した状態
で攪拌、振盪等により混合することにより行われる。
【００２７】該反応における反応液のｐＨは適宜選択さ
れるが、通常はｐＨ４〜１０範囲であり、反応初速度点
から好ましくはｐＨ６〜８の範囲である。反応温度は、
安定性、反応速度等の点から、通常は０〜７０℃、好ま
しくは０〜４０℃の範囲である。反応に用いられる本発
明固定化酵素の量は固定化酵素の触媒活性に応じて適宜
選択することができるが、一般式（１）で示されるＮ−
置換環状イミノエステル化合物１重量部に対して、通常
０．００１〜０．１重量部の割合である。
れるが、通常はｐＨ４〜１０範囲であり、反応初速度点
から好ましくはｐＨ６〜８の範囲である。反応温度は、
安定性、反応速度等の点から、通常は０〜７０℃、好ま
しくは０〜４０℃の範囲である。反応に用いられる本発
明固定化酵素の量は固定化酵素の触媒活性に応じて適宜
選択することができるが、一般式（１）で示されるＮ−
置換環状イミノエステル化合物１重量部に対して、通常
０．００１〜０．１重量部の割合である。
【００２８】反応の終点は、例えば、反応液中の一般式
（１）で示されるＮ−置換環状イミノエステル化合物の
反応率を液体クロマトグラフィー等により追跡すること
により決定することができる。通常、一般式（１）で示
されるＮ−置換環状イミノエステル化合物の反応率が５
０％を超えない時点で反応を終了するのが、選択性の点
から好ましい。反応時間は、通常約５分間〜約４日間の
範囲である。
（１）で示されるＮ−置換環状イミノエステル化合物の
反応率を液体クロマトグラフィー等により追跡すること
により決定することができる。通常、一般式（１）で示
されるＮ−置換環状イミノエステル化合物の反応率が５
０％を超えない時点で反応を終了するのが、選択性の点
から好ましい。反応時間は、通常約５分間〜約４日間の
範囲である。
【００２９】反応終了後は、例えば反応混合物を濾過
し、濾液を有機溶媒（ヘキサン、ヘプタン、ｔ−ブチル
メチルエーテル、酢酸エチル、トルエン等）と分液して
未反応の原料化合物を除き、水層を必要に応じてイオン
クロマトグラフィーに付して塩類を除いた後に、濃縮す
ることにより一般式（２）で示される（Ｓ）−Ｎ−置換
環状イミノ酸類を単離することができ、さらに必要に応
じてカラムクロマトグラフィー等により精製することも
できる。
し、濾液を有機溶媒（ヘキサン、ヘプタン、ｔ−ブチル
メチルエーテル、酢酸エチル、トルエン等）と分液して
未反応の原料化合物を除き、水層を必要に応じてイオン
クロマトグラフィーに付して塩類を除いた後に、濃縮す
ることにより一般式（２）で示される（Ｓ）−Ｎ−置換
環状イミノ酸類を単離することができ、さらに必要に応
じてカラムクロマトグラフィー等により精製することも
できる。
【００３０】
【実施例】以下、本発明を実施例等によりさらに詳しく
説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものでは
ない。
説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものでは
ない。
【００３１】
【発明の効果】実施例１
水洗したダイヤイオンＨＰ２０ＳＳ（三菱化学株式会社
商品名）（ダイヤイオンＨＰ２０ＳＳ １２ｇと水３０
０ｍｌとを混合して３０分間攪拌し、濾過し、さらに水
４００ｍｌで洗浄したもの）と後記参考例により製造し
たタンパク質の清澄液６００ｇとを混合し、１０℃で１
８時間攪拌した。その後、濾過し、水４００ｇで洗浄し
て、固定化酵素１２．５ｇを得た。
商品名）（ダイヤイオンＨＰ２０ＳＳ １２ｇと水３０
０ｍｌとを混合して３０分間攪拌し、濾過し、さらに水
４００ｍｌで洗浄したもの）と後記参考例により製造し
たタンパク質の清澄液６００ｇとを混合し、１０℃で１
８時間攪拌した。その後、濾過し、水４００ｇで洗浄し
て、固定化酵素１２．５ｇを得た。
【００３２】１００ｍＭリン酸１カリウム−リン酸２カ
リウム緩衝液（ｐＨ７．０）３．５ｍｌに上記固定化酵
素５０ｍｇ及びｔ−ブチルメチルエーテル１．０ｍｌを
加え、３５℃で１５分間保持した。ここに、Ｎ−ベンジ
ルアゼチジン−２−カルボン酸エチルエステル０．０２
ｇを加え、３５℃で１６分間往復振盪（１２０ｓｔｒ／
ｍｉｎ）した。その後、ｔ−ブチルメチルエーテル１ｍ
ｌにこの反応混合物４００μｌを加え攪拌し、さらに遠
心分離（１２０００ｒｐｍ、５分間）した。得られた水
層のうち２００μｌを２０ｍＭリン酸１カリウム／アセ
トニトリル＝９０／１０に溶解し、０．２μｍフィルタ
ーで濾過した後、高速液体クロマトグラフィーに付し
て、Ｎ−ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸の生成を
確認することにより、得られた固定化酵素が目的とする
活性を有することを確認した。
リウム緩衝液（ｐＨ７．０）３．５ｍｌに上記固定化酵
素５０ｍｇ及びｔ−ブチルメチルエーテル１．０ｍｌを
加え、３５℃で１５分間保持した。ここに、Ｎ−ベンジ
ルアゼチジン−２−カルボン酸エチルエステル０．０２
ｇを加え、３５℃で１６分間往復振盪（１２０ｓｔｒ／
ｍｉｎ）した。その後、ｔ−ブチルメチルエーテル１ｍ
ｌにこの反応混合物４００μｌを加え攪拌し、さらに遠
心分離（１２０００ｒｐｍ、５分間）した。得られた水
層のうち２００μｌを２０ｍＭリン酸１カリウム／アセ
トニトリル＝９０／１０に溶解し、０．２μｍフィルタ
ーで濾過した後、高速液体クロマトグラフィーに付し
て、Ｎ−ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸の生成を
確認することにより、得られた固定化酵素が目的とする
活性を有することを確認した。
【００３３】実施例２
水７７ｇに上記実施例１で製造した固定化酵素０．５ｇ
及びＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸エチル６
５ｇを加え、１０℃で１０時間攪拌した。反応混合物に
メチルイソブチルケトン６５ｇとエタノール３６ｇとを
加え、さらに３０分間攪拌した。その後、反応混合物を
濾過し、濾液を分液した。水層にメチルイソブチルケト
ン６５ｇとエタノール６．５ｇとを加え３０分間攪拌し
た後、分液する操作を２回繰り返した。得られた水層を
減圧下（１０ＫＰａ以下）で濃縮して、粗（Ｓ）−Ｎ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸６０ｇ（４３重量
％）を得た。
及びＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸エチル６
５ｇを加え、１０℃で１０時間攪拌した。反応混合物に
メチルイソブチルケトン６５ｇとエタノール３６ｇとを
加え、さらに３０分間攪拌した。その後、反応混合物を
濾過し、濾液を分液した。水層にメチルイソブチルケト
ン６５ｇとエタノール６．５ｇとを加え３０分間攪拌し
た後、分液する操作を２回繰り返した。得られた水層を
減圧下（１０ＫＰａ以下）で濃縮して、粗（Ｓ）−Ｎ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸６０ｇ（４３重量
％）を得た。
【００３４】Ｎ−ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸
の分析条件 高速液体クロマトグラフィー カラム：ＯＤＳ−Ａ２１２（住化分析センター株式会社
製） 移動層：２０ｍＭリン酸１カリウム／アセトニトリル＝
９０／１０ 流速：１ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度：４０℃ 検出器：ＵＶ（２２０ｎｍ） Ｎ−ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸の保持時間：
５．５分
の分析条件 高速液体クロマトグラフィー カラム：ＯＤＳ−Ａ２１２（住化分析センター株式会社
製） 移動層：２０ｍＭリン酸１カリウム／アセトニトリル＝
９０／１０ 流速：１ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度：４０℃ 検出器：ＵＶ（２２０ｎｍ） Ｎ−ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸の保持時間：
５．５分
【００３５】次に、実施例１で使用したタンパク質の清
澄液の製造について、参考例を示す。 参考例 滅菌した液体培地（水１０００ｍｌにグリセロール５
ｇ、酵母エキス６ｇ、リン酸１カリウム４ｇ、リン酸２
カリウム９．３ｇを溶解したもの）１０ｍｌに５０ｍｇ
／ｍｌのアンピシリン水溶液１０μｌとＥ．ｃｏｌｉ
ＪＭ１０５／ｐＹＨＮＫ２株のグリセロールストック
（特開２００１−４６０８４号公報参照）０．１ｍｌと
を加え３０℃で９時間振盪した（得られた培養液を培養
液Ａと記す。）。滅菌した液体培地（水１３０００ｍｌ
にグリセロール２２５ｇ、酵母エキス１５０ｇ、総合ア
ミノ酸Ｆ２２５ｇ、リン酸１カリウム６０ｇ、硫酸マグ
ネシウム３６ｇ、硫酸第１鉄７水和物０．６ｇ及び塩化
カルシウム２水和物を溶解し、さらに水を加えて全量を
１５００００ｍｌにしたもの）１５０００ｍｌに４Ｍリ
ン酸水溶液と１４％（Ｗ／Ｗ）アンモニア水を加えｐＨ
７．０とした。ここに、上記の培養液Ａ７．５ｍｌを加
え３０℃で通気攪拌培養した。培養開始から１４時間経
過後に滅菌した液体培地（水１１００ｇとグリセロール
１５００ｇの混合物に酵母エキス２８０ｇ及び総合アミ
ノ酸Ｆ４２０ｇを溶解したもの）を徐々に加えた。ま
た、培養開始から１８時間後にisopropyl thio β-D-ga
lactosideを５０μＭとなるように加えた。培養開始か
ら４０時間後に、培養液にエタノール１９５０ｍｌを加
え、さらに３０℃で２４時間攪拌した。その後、この混
合物を６０００ｇとり、水６２００ｇと混合した。この
溶液を連続遠心処理（２００００ｒｐｍ、流速１３０ｇ
／ｍｉｎ）して、遠心上清液１１２００ｇを得た。この
遠心上清液にラジオライト♯２００（昭和化学工業株式
会社商品名） ２２０ｇを加えて攪拌し、さらにラジオ
ライト♯２００を通して濾過することにより、本タンパ
ク質の清澄液を得た。
澄液の製造について、参考例を示す。 参考例 滅菌した液体培地（水１０００ｍｌにグリセロール５
ｇ、酵母エキス６ｇ、リン酸１カリウム４ｇ、リン酸２
カリウム９．３ｇを溶解したもの）１０ｍｌに５０ｍｇ
／ｍｌのアンピシリン水溶液１０μｌとＥ．ｃｏｌｉ
ＪＭ１０５／ｐＹＨＮＫ２株のグリセロールストック
（特開２００１−４６０８４号公報参照）０．１ｍｌと
を加え３０℃で９時間振盪した（得られた培養液を培養
液Ａと記す。）。滅菌した液体培地（水１３０００ｍｌ
にグリセロール２２５ｇ、酵母エキス１５０ｇ、総合ア
ミノ酸Ｆ２２５ｇ、リン酸１カリウム６０ｇ、硫酸マグ
ネシウム３６ｇ、硫酸第１鉄７水和物０．６ｇ及び塩化
カルシウム２水和物を溶解し、さらに水を加えて全量を
１５００００ｍｌにしたもの）１５０００ｍｌに４Ｍリ
ン酸水溶液と１４％（Ｗ／Ｗ）アンモニア水を加えｐＨ
７．０とした。ここに、上記の培養液Ａ７．５ｍｌを加
え３０℃で通気攪拌培養した。培養開始から１４時間経
過後に滅菌した液体培地（水１１００ｇとグリセロール
１５００ｇの混合物に酵母エキス２８０ｇ及び総合アミ
ノ酸Ｆ４２０ｇを溶解したもの）を徐々に加えた。ま
た、培養開始から１８時間後にisopropyl thio β-D-ga
lactosideを５０μＭとなるように加えた。培養開始か
ら４０時間後に、培養液にエタノール１９５０ｍｌを加
え、さらに３０℃で２４時間攪拌した。その後、この混
合物を６０００ｇとり、水６２００ｇと混合した。この
溶液を連続遠心処理（２００００ｒｐｍ、流速１３０ｇ
／ｍｉｎ）して、遠心上清液１１２００ｇを得た。この
遠心上清液にラジオライト♯２００（昭和化学工業株式
会社商品名） ２２０ｇを加えて攪拌し、さらにラジオ
ライト♯２００を通して濾過することにより、本タンパ
ク質の清澄液を得た。
【００３６】
【発明の効果】本発明固定化酵素により工業的スケール
で効率的に一般式（２）で示される（Ｓ）−Ｎ−置換イ
ミノ酸類を製造することができる。
で効率的に一般式（２）で示される（Ｓ）−Ｎ−置換イ
ミノ酸類を製造することができる。
【００３７】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> Sumitomo Chemical Co. Ltd.
<120> Immobilized Enzyme and Use thereof
<130> P153248
<160> 2
<210> 1
<211> 255
<212> PRT
<213> Aspergillus flavus
<400> 1
Met His Leu Pro Ile Lys Thr Leu Phe Val Ser Leu Leu Gly Ala Ser
1 5 10 15
Val Leu Ala Arg Pro Leu Pro Asn Asp Ala Leu Val Glu Arg Asn Ala
20 25 30
Pro Leu Asn Glu Phe Leu Ser Val Leu Leu Ser His Leu Pro Ala Ile
35 40 45
Asn Gly Ser Ile Thr Ala Val Ser Gly Leu Ile Thr Asp Phe Asp Gln
50 55 60
Leu Leu Ala Asp Ile Thr Gly Ala Gln Thr Thr Leu Asn Gly Phe Thr
65 70 75 80
Gly Ala Cys Thr Asp Tyr Thr Val Leu Phe Ala Arg Gly Thr Ser Glu
85 90 95
Pro Gly Asn Val Gly Val Leu Val Gly Pro Pro Leu Ala Glu Ala Phe
100 105 110
Glu Gly Ala Val Gly Ala Ser Ala Leu Ser Phe Gln Gly Val Asn Gly
115 120 125
Tyr Ser Ala Ser Val Glu Gly Tyr Leu Ala Gly Gly Glu Ala Ala Gly
130 135 140
Ser Lys Ala Met Ala Ser Gln Ala Ser Asp Ile Leu Ser Lys Cys Pro
145 150 155 160
Asp Thr Lys Leu Val Met Ser Gly Tyr Ser Gln Gly Cys Gln Ile Val
165 170 175
His Asn Ala Val Glu Gln Leu Pro Ala Glu His Ala Ser Lys Ile Ser
180 185 190
Ser Val Leu Leu Phe Gly Asp Pro Tyr Lys Gly Lys Ala Leu Pro Asn
195 200 205
Val Asp Ala Ser Arg Val His Thr Val Cys His Ala Gly Asp Thr Ile
210 215 220
Cys Glu Asn Ser Val Ile Ile Leu Pro Ala His Leu Thr Tyr Ala Val
225 230 235 240
Asp Val Ala Ser Ala Ala Asp Phe Ala Val Ala Ala Ala Lys Asn
245 250 255
<210> 2
<211> 768
<212> DNA
<213> Aspergillus flavus
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(768)
<400> 2
atg cat ctt cct atc aag act ctc ttt gtc tct ctc ctc gga gcc agc 48
Met His Leu Pro Ile Lys Thr Leu Phe Val Ser Leu Leu Gly Ala Ser
1 5 10 15
gtt ctc gca cgc cct ctt ccc aat gat gct ctc gtt gag aga aac gct 96
Val Leu Ala Arg Pro Leu Pro Asn Asp Ala Leu Val Glu Arg Asn Ala
20 25 30
ccc cta aac gag ttc ctc agc gtc ctt ctg tct cat ttg cct gcc att 144
Pro Leu Asn Glu Phe Leu Ser Val Leu Leu Ser His Leu Pro Ala Ile
35 40 45
aac ggc tct atc act gcg gtg tcg ggt ctg atc acc gat ttt gat caa 192
Asn Gly Ser Ile Thr Ala Val Ser Gly Leu Ile Thr Asp Phe Asp Gln
50 55 60
ttg ctt gct gac atc acc ggt gct caa aca acc ctg aat gga ttt act 240
Leu Leu Ala Asp Ile Thr Gly Ala Gln Thr Thr Leu Asn Gly Phe Thr
65 70 75 80
ggt gcc tgc acg gat tac acc gtt ctc ttc gcc cgc gga acc agt gag 288
Gly Ala Cys Thr Asp Tyr Thr Val Leu Phe Ala Arg Gly Thr Ser Glu
85 90 95
ccc gga aac gtt ggt gtc ctc gtc gga cct cct ctt gct gag gcg ttt 336
Pro Gly Asn Val Gly Val Leu Val Gly Pro Pro Leu Ala Glu Ala Phe
100 105 110
gag gga gcc gtc ggt gcg tcc gcc ttg agc ttc cag ggt gtc aac ggc 384
Glu Gly Ala Val Gly Ala Ser Ala Leu Ser Phe Gln Gly Val Asn Gly
115 120 125
tat tct gca tct gtc gag gga tat ttg gct gga ggt gaa gcc gct ggc 432
Tyr Ser Ala Ser Val Glu Gly Tyr Leu Ala Gly Gly Glu Ala Ala Gly
130 135 140
agc aag gca atg gca tct cag gcc agc gac att ctc tcc aag tgt ccc 480
Ser Lys Ala Met Ala Ser Gln Ala Ser Asp Ile Leu Ser Lys Cys Pro
145 150 155 160
gac acc aag ctt gtc atg agt ggc tat tcc cag ggc tgc cag att gtt 528
Asp Thr Lys Leu Val Met Ser Gly Tyr Ser Gln Gly Cys Gln Ile Val
165 170 175
cac aat gcc gtt gag caa ctt cct gcg gaa cac gca agc aag atc agc 576
His Asn Ala Val Glu Gln Leu Pro Ala Glu His Ala Ser Lys Ile Ser
180 185 190
agc gtc ctc ctt ttc gga gac cca tac aag ggc aag gct ctc ccc aac 624
Ser Val Leu Leu Phe Gly Asp Pro Tyr Lys Gly Lys Ala Leu Pro Asn
195 200 205
gtt gat gct tcc cgc gtc cac act gtg tgc cac gct gga gac act att 672
Val Asp Ala Ser Arg Val His Thr Val Cys His Ala Gly Asp Thr Ile
210 215 220
tgc gag aac agc gtt att att ctg ccc gct cac ttg acc tac gct gtt 720
Cys Glu Asn Ser Val Ile Ile Leu Pro Ala His Leu Thr Tyr Ala Val
225 230 235 240
gat gtg gct tct gcg gct gac ttc gct gtt gcg gct gca aag aac taa 768
Asp Val Ala Ser Ala Ala Asp Phe Ala Val Ala Ala Ala Lys Asn
245 250 255
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA03 BA11 CA02 HA14
4B033 NA26 NB34 NB68 NC04 ND08
ND12 NF02 NG09 NH09 NJ10
4B050 CC03 DD02 GG10 LL01 LL05
4B064 AD42 CA02 CA19 CA35 CA38
CB02 CD27 CE08 CE16 DA01
Claims (2)
- 【請求項１】下記（ａ）〜（ｄ）のいずれかのアミノ酸
配列を有するタンパク質を、平均半径２００〜５００オ
ングストロームの細孔を有するスチレン−ジビニルベン
ゼン共重合体に固定化したことを特徴とする固定化酵
素。 （ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列。 （ｂ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を優先的に生産す
る能力を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、か
つ配列番号１で示されるアミノ酸配列の一部からなるア
ミノ酸配列。 （ｃ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジンカルボン酸を優先的に生産する能力
を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、かつ配列
番号１で示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列か
らなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズするＤＮＡの塩基配列がコードするアミノ酸配列。 （ｄ）ラセミ体のＮ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸エチルエステルを不斉加水分解し、（Ｓ）体のＮ−
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸を優先的に生産す
る能力を有するタンパク質のアミノ酸配列であって、か
つ配列番号１で示されるアミノ酸配列に対して６０％以
上のアミノ酸同一性を示すアミノ酸配列。 - 【請求項２】一般式（１） 【化１】 （式中、Ｒ1は炭素数１〜８のアルキル基、炭素数７〜
１９のアラルキル基、炭素数２〜５のアルケニル基又は
炭素数６〜１２のアリール基を表すが、該アルキル基に
おける水素原子の１個以上が炭素数１〜８のアルコキシ
基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる少なくとも
１種で置換されていてもよく、該アラルキル基又は該ア
リール基における芳香環に結合する水素原子の１個以上
が炭素数１〜８のアルキル基、炭素数１〜８のアルコキ
シ基、ハロゲン原子及びニトロ基から選ばれる１種以上
で置換されていてもよい。Ｒ2は炭素数７〜１９のアラ
ルキル基、炭素数２〜５のアルキルカルボニル基、炭素
数３〜６のアルケニルカルボニル基、炭素数７〜１３の
アリールカルボニル基、炭素数８〜１０のアラルキルカ
ルボニル基、炭素数２〜９のアルキルオキシカルボニル
基、炭素数８〜１０のアラルキルオキシカルボニル基、
炭素数３〜９のアルケニルオキシカルボニル基、炭素数
７〜１３のアリールオキシカルボニル基、炭素数１〜８
のアルキル基、炭素数２〜８のアルケニル基、炭素数６
〜１２のアリール基又は炭素数６〜１２のアリールスル
ホニル基を示すが、該アラルキル基、アリールカルボニ
ル基、アラルキルカルボニル基、アラルキルオキシカル
ボニル基、アリールオキシカルボニル基、アリール基又
はアリールスルホニル基において、その芳香環に結合す
る水素原子の１個以上は炭素数１〜８のアルキル基、炭
素数１〜８のアルコキシ基、ハロゲン原子及びニトロ基
から選ばれる少なくとも１種で置換されていてもよく、
該アルキルカルボニル基、アルケニルカルボニル基、ア
ルキルオキシカルボニル基、アルケニルオキシカルボニ
ル基、アルキル基又はアルケニル基における水素原子の
１個以上は炭素数１〜８個のアルコキシ基、ハロゲン原
子及びニトロ基から選ばれる少なくとも一種で置換され
ていてもよい。ｎは１又は２を表す。）で示されるＮ−
置換環状イミノエステルに請求項１に記載の固定化酵素
を作用させることを特徴とする、一般式（２） 【化２】 （式中、Ｒ2及びｎは前記と同じ意味を表す。）で示さ
れる（Ｓ）−Ｎ−置換環状イミノ酸類の製造方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001265495A JP2003070471A (ja) | 2001-09-03 | 2001-09-03 | 固定化酵素及びその用途 |
| US10/231,478 US6936445B2 (en) | 2001-09-03 | 2002-08-30 | Enzyme preparation and method of using the same |
| DE60211105T DE60211105T2 (de) | 2001-09-03 | 2002-08-30 | Eine Verbindung die ein Enzym zur asymetrischen Hydrolyse von N-substituierten C3-C4 zyklischen imino-2-carboxylsäureester enthält und deren Verwendung |
| EP02256033A EP1316610B1 (en) | 2001-09-03 | 2002-08-30 | Preparation comprising an enzyme for asymmetrical hydrolysis of N-substituted C3-C4 cyclic imino-2-carboxylic acid ester and method of using the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001265495A JP2003070471A (ja) | 2001-09-03 | 2001-09-03 | 固定化酵素及びその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003070471A true JP2003070471A (ja) | 2003-03-11 |
Family
ID=19091951
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001265495A Pending JP2003070471A (ja) | 2001-09-03 | 2001-09-03 | 固定化酵素及びその用途 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6936445B2 (ja) |
| EP (1) | EP1316610B1 (ja) |
| JP (1) | JP2003070471A (ja) |
| DE (1) | DE60211105T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007114199A1 (ja) | 2006-03-28 | 2007-10-11 | Sumitomo Chemical Company, Limited | 光学活性（ｓ）－７－ヒドロキシ－６－メチルヘプタン－２－オンおよびその前駆体の製造方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8889373B2 (en) | 2010-08-12 | 2014-11-18 | Eastman Chemical Company | Enzyme catalyst immobilized on porous fluoropolymer support |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5292649A (en) * | 1983-03-29 | 1994-03-08 | Agency Of Industrial Science & Technology, Ministy Of International Trade & Industry | Method for reaction of lipase upon fatty acid |
| JP2794201B2 (ja) * | 1989-07-31 | 1998-09-03 | 味の素株式会社 | 固定化リパーゼ酵素剤 |
| JP3251646B2 (ja) | 1992-06-30 | 2002-01-28 | 東邦チタニウム株式会社 | 超高分子量ポリエチレン製造用固体触媒成分 |
| JPH0630774A (ja) * | 1992-07-17 | 1994-02-08 | Mitsubishi Kasei Corp | 固定化酵素剤 |
| US5839258A (en) * | 1995-11-28 | 1998-11-24 | Mitsubishi Chemical Corporation | Storing method for adsorbent particles |
| ATE466087T1 (de) * | 1999-06-04 | 2010-05-15 | Sumitomo Chemical Co | Esterase gene und verwendungen davon |
-
2001
- 2001-09-03 JP JP2001265495A patent/JP2003070471A/ja active Pending
-
2002
- 2002-08-30 EP EP02256033A patent/EP1316610B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-08-30 DE DE60211105T patent/DE60211105T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-08-30 US US10/231,478 patent/US6936445B2/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007114199A1 (ja) | 2006-03-28 | 2007-10-11 | Sumitomo Chemical Company, Limited | 光学活性（ｓ）－７－ヒドロキシ－６－メチルヘプタン－２－オンおよびその前駆体の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE60211105D1 (de) | 2006-06-08 |
| EP1316610B1 (en) | 2006-05-03 |
| EP1316610A1 (en) | 2003-06-04 |
| US20030124683A1 (en) | 2003-07-03 |
| DE60211105T2 (de) | 2007-07-05 |
| US6936445B2 (en) | 2005-08-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2019011236A1 (zh) | 一种立体选择性的转氨酶在不对称合成手性胺中的应用 | |
| WO2010067613A1 (ja) | Ｌ－サクシニルアミノアシラーゼ、およびこれを用いたｌ－アミノ酸の製造方法 | |
| WO2007010944A1 (ja) | 光学活性２－（ｎ－置換アミノメチル）－３－ヒドロキシ酪酸エステル類の製造方法 | |
| JP6039710B2 (ja) | Ｌ−アミノ酸の製造方法 | |
| JP2003070471A (ja) | 固定化酵素及びその用途 | |
| JPH0160239B2 (ja) | ||
| EP0283218A2 (en) | One-step enzymatic conversion of cephalosporin C and derivatives to 7-aminocephalosporanic acid and derivatives | |
| JPH10507631A (ja) | ４−メチルチオブチロニトリルの酵素による加水分解 | |
| JPH0656830A (ja) | （ｒ，ｓ）−３−キヌクリジノールのエナンチオメリックな濃縮法 | |
| CN110643650A (zh) | （s）-1-苄基-1，2，3，4，5，6，7，8-八氢异喹啉类化合物的制备方法 | |
| JP4192331B2 (ja) | 光学活性２−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキサン−６−カルボン酸誘導体の製造方法 | |
| JPH10210974A (ja) | エステラーゼ遺伝子及びその利用 | |
| US20060166337A1 (en) | Process for producing optically active erythro 3-cyclohexylserines | |
| JP4492765B2 (ja) | Ｌ−アリシンアセタールの製造法 | |
| JP3939833B2 (ja) | （ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの製法 | |
| JP5026833B2 (ja) | 光学活性（ｓ）−７−ヒドロキシ−６−メチルヘプタン−２−オンおよびその前駆体の製造方法 | |
| JP2666890B2 (ja) | 光学活性（＋）−４，４，４−トリフルオロ−３−（インドール−３−）酪酸の製造方法 | |
| WO2006123689A1 (ja) | 界面活性剤修飾酵素を用いたカルボン酸の製造方法 | |
| JP3715662B2 (ja) | 光学活性β−ヒドロキシカルボン酸及びその対掌体エステルの製造方法 | |
| US20020132848A1 (en) | Process for the preparation of allysine acetal | |
| JP4270910B2 (ja) | 光学活性２−ヒドロキシ−２−トリフルオロ酢酸類の製造方法 | |
| JPH11318486A (ja) | 光学活性シクロプロパンカルボン酸の製造法 | |
| JP4834208B2 (ja) | （２ｓ，３ｒ）−２，３−エポキシ酪酸エステルの製造法 | |
| JPH0253497A (ja) | 光学活性なマンデル酸の製法 | |
| JPH08256771A (ja) | アミダーゼ活性を有する新規タンパク質およびそれをコードする遺伝子 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050614 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20071225 |
|
| RD05 | Notification of revocation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7425 Effective date: 20080128 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20080204 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20080812 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080930 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20081209 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20081226 |
|
| A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20090220 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20110407 |