JP2002543841A - ＴＧＦ−βスーパーファミリーの新規のメンバーであるＧＤＦ―１５の神経保護特性 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ニューロンおよびグリア細胞に由来しそしてドーパミン作動性（ＤＡ作動性）ニューロンに対する神経栄養効果を有するトランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）様タンパク質、該タンパク質をコードする核酸、該核酸を含むベクター、該核酸または該ベクターを含む宿主生物、該タンパク質に対して指向される抗体、該核酸、該ベクターまたは該タンパク質の産生のための方法、哺乳動物における神経変性障害の処置のための薬学的組成物、および該障害の検出のための診断キットに関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、ニューロンおよびグリア細胞に由来しそしてドーパミン作動性（Ｄ
Ａ作動性）ニューロンに対する神経栄養効果を有するトランスフォーミング成長
因子−β（ＴＧＦ−β）様タンパク質、該タンパク質をコードする核酸、該核酸
を含むベクター、該核酸または該ベクターを含む宿主生物、該タンパク質に対し
て指向される抗体、該核酸、該ベクターまたは該タンパク質の産生のための方法
、哺乳動物における神経変性疾患の処置のための薬学的組成物、ならびに該障害
の検出のための診断キットに関する。

【０００２】 ＴＧＦ−βスーパーファミリーのメンバーは、発達および維持（例えば、ボデ
ィープランの組織化、細胞増殖、分化、および細胞生存の制御）におけるそれら
の重要な多機能関与（implication）について公知である。依然として拡張して
いるＴＧＦ−スーパーファミリーとしては、ＴＧＦ−βイソ型１〜５、アクチビ
ン、インヒビン、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、成長／分化因子（ＧＤＦ）、ミ
ラー管阻害物質、Drosophila デカペンタプレジック（decapentaplegic）遺伝子
複合体、Xenopus Vg-1 遺伝子、およびグリア細胞株由来成長因子（ＧＤＮＦ）
の増大するサブファミリーおよび関連タンパク質が挙げられる。ＴＧＦ−βスー
パーファミリーの全てのメンバーは、いくつかの相同な構造を共有している。そ
れらは、成熟カルボキシ末端部分との複合体として分泌され得る、生物学的に不
活性なプロドメインを含む大きな前駆体（large precursor）分子として合成さ
れる。さらに、成熟生物活性タンパク質は、特徴的切断部位を使用するタンパク
質分解によって、産生される。最も明白には、成熟カルボキシ末端セグメントは
、高度に保存されたシステインノット（highly conserved cystein knot）を含
む。

【０００３】 ＴＧＦ−β様タンパク質はまた、神経幹細胞増殖の制御およびニューロンの維
持に関与し、該タンパク質ファミリーの新規のメンバーに対する非常に強い要求
がある。

【０００４】 従って、本発明の基礎を成す技術的問題は、神経変性疾患の処置および診断に
ついて好適である、神経栄養活性を有する、ＴＧＦ−β様タンパク質に関連する
新規の化合物を提供することである。

【０００５】 上記技術的問題に対する解決は、特許請求の範囲において特徴付けられるよう
な実施形態を提供することによって、達成される。

【０００６】 特に、本発明は、ニューロンおよびグリア細胞に由来し、ＤＡ作動性ニューロ
ンに対する神経栄養効果を有する、ＴＧＦ−β様タンパク質あるいはその機能的
に活性な誘導体または一部の一次アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を
含む核酸に関する。

【０００７】 用語「核酸」および「ヌクレオチド配列」は、内因的に発現される、半合成的
、合成的または化学的に修飾される核酸分子を指し、好ましくは、デオキシリボ
ヌクレオチドおよび／またはリボヌクレオチドおよび／または修飾ヌクレオチド
から実質的になる。さらに、用語「ヌクレオチド配列」は、エクソンを含み得、
ここで、ヌクレオチド配列は、一次アミノ酸配列をコードし、そして遺伝コード
に基づいて縮重され得る。用語「一次アミノ酸配列」は、三次および四次タンパ
ク質構造と無関係のアミノ酸配列をいう。

【０００８】 用語「ＴＧＦ−β様タンパク質」は、ＴＧＦ−βスーパーファミリーの特徴、
特に保存されたシステインに富むモチーフを示すタンパク質を指し、そして、プ
ロドメインを含む大きな前駆体（large precursor）分子ならびに特徴的切断部
位を使用するタンパク質分解によって産生される成熟生物活性タンパク質の両方
を包含する。

【０００９】 用語「機能的に活性な誘導体」および「機能的に活性な一部」は、ＤＡ作動性
ニューロンに対する神経栄養効果を少なくも示すタンパク質性（proteinaceous
）化合物をいう。上記に定義されるＴＧＦ−β様タンパク質の機能的に活性な形
態は、単量体、二量体および／またはオリゴマー形態、ならび神経栄養活性を有
するＴＧＦ−β様タンパク質の少なくとも２種類のモノマーを含むヘテロオリゴ
マー形態（例えば、ヘテロダイマー）であり得る。

【００１０】 表現「ニューロンおよびグリア細胞から誘導される」は、該タンパク質をコー
ドする遺伝子が、ニューロンおよびグリア細胞（例えば、プルキンエ細胞および
星状膠細胞）において転写および／または翻訳され、その結果、該ｍＲＮＡおよ
び／または該タンパク質が、当該分野で公知の方法（例えば、in situハイブリ
ダイゼーション、ＲＴ−ＰＣＲ、ノーザンまたはウェスタンブロット法）によっ
て検出され得ることを意味する。

【００１１】 表現「ＤＡ作動性ニューロンに対する神経栄養効果」は、それ自体でまたは他
の因子と組み合わせて、ナノモル範囲以下内の、ＤＡ作動性ニューロンに生存お
よび分化を与え得るタンパク質性活性をいう。

【００１２】 上記で定義される核酸の好ましい実施形態において、ニューロンおよびグリア
細胞は、哺乳動物起源（例えば、ヒト、マウスまたはラット）である。

【００１３】 さらに好ましい実施形態において、ＴＧＦ−β様タンパク質は、神経変性事象
から保護する。このような神経変性事象は、例えば、酸化的損傷、フリーラジカ
ル、ニューロン死プログラムのメディエーターまたはエグゼキューター（例えば
カスパーゼ、ｂｃｌ−２ファミリーのプロ−およびアンチ−アポトーシスメンバ
ー）によって媒介され得る。毒性ラジカル損傷は、鉄（例えば、Ｆｅイオン）、
ＮＯおよび他のラジカルドナーによって、媒介され得る。従って、上記に定義さ
れるような核酸は、パーキンソン病（ＰＤ）を生じさせると示唆される、鉄によ
る中毒からＤＡ作動性ニューロンを保護し得るＴＧＦ−β様タンパク質をコード
する。

【００１４】 さらに好ましい実施形態において、本発明に従う核酸は、図７Ａに示されるヌ
クレオチド配列、または図８Ａに示されるヌクレオチド配列、または図８Ａに示
されるヌクレオチド配列のヌクレオチド４０〜３３３、あるいは機能的に活性な
ポリペプチドの発現へ導くそのような核酸の変異体を少なくとも含む。そのよう
な変異の例としては、１以上のヌクレオチドの欠失、挿入および置換、例えば、
保存アミノ酸置換へ導く変異（例えば、図８Ａに示されるヌクレオチド配列のヌ
クレオチド４０〜３３３［すなわち、ＴＧＦ−β様タンパク質において高度に保
存される７Ｃｙｓノット領域をコードするヌクレオチド配列の領域］の範囲にお
ける変異）を含む。

【００１５】 本発明のさらなる主題は、上記に定義される核酸を少なくとも含むベクターに
関する。用語「ベクター」は、上記に定義のヌクレオチド配列の増幅および／ま
たは発現のために使用され得るＤＮＡおよび／またはＲＮＡレプリコンをいう。
ベクターは、該配列の５’領域内に、その発現の制御に役立つ配列の任意の有用
な制御単位（例えば、プロモーター、エンハンサー、または他のストレッチ）を
含み得る。ベクターは、該ヌクレオチド配列の５’および／または３’領域内に
、該ヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質の検出および／または分
離に有用であるアミノ酸配列（例えば、Ｈｉｓ−ｔａｇ）をコードする配列をさ
らに含み得る。さらに、該ベクターは、アミノ酸配列をコードする該ヌクレオチ
ド配列の５’および／または３’領域内に、該ヌクレオチド配列によってコード
されるタンパク質を神経組織へ標的化させることおよび／または血液／脳関門の
透過に役立つ配列エレメントを含み得る。好適なベクターの例は、バキュロウイ
ルスベクターである。

【００１６】 本発明の別の実施形態は、上記に定義される核酸またはベクターを含む宿主生
物に関する。用語「宿主生物」は、ウイルス、細菌（例えば、大腸菌）、真菌、
植物、哺乳動物または昆虫あるいはその一部（例えば、Ｓｆ９細胞のような細胞
）を含む。

【００１７】 本発明のさらなる実施形態は、該タンパク質自体に関し、これは、上記に定義
される核酸によってコードされる。本発明に従うタンパク質の一次アミノ酸配列
の例は、図７Ｂおよび８Ｂにそれぞれ与えられる。本発明に従うタンパク質の一
次アミノ酸配列のさらなる例は、図８Ｂに示される配列のアミノ酸残基１４〜１
１１ならびに保存アミノ酸置換を有するその相同体を含む。

【００１８】 本発明のさらなる主題は、上記で定義されるタンパク質またはその機能的な誘
導体もしくは一部に対して指向される、抗体（これは、モノクローナルまたはポ
リクローナルであり得る）またはその機能的フラグメントに関する。本発明のさ
らなる主題は、上記で定義のタンパク質に指向されるアンタゴニスト、および上
記に定義のタンパク質の代替物としてのアゴニストに関する。

【００１９】 上記に定義のタンパク質の機能活性の調節はまた、正常な細胞における発現レ
ベルと比較して、上記に定義の核酸のヌクレオチド配列の発現を変化させること
によって、達成され得る。例えば、ｍＲＮＡをマスクするアンチセンス核酸また
はｍＲＮＡを切断するリボザイムが、発現を阻害するために使用され得る。ある
いは、上記に定義の核酸のヌクレオチド配列の発現を調節するプロモーターの効
率が、影響され得る。

【００２０】 本発明のさらなる実施形態は、上記に定義の核酸、ベクター、またはタンパク
質の産生のための方法に関し、該方法は、以下の工程を包含する： （ａ）上記に定義の宿主生物を、好適な培地中、好適な条件下で培養すること
；および （ｂ）培地および／または宿主生物から所望の産物を単離すること。

【００２１】 本発明に従うタンパク質の産生のための方法の好ましい実施形態は、宿主生物
として大腸菌のような細菌を使用する。上記に定義のタンパク質の発現は、次い
で、例えば当該分野において「封入体」として公知の細菌内のアモルファス凝集
物の、機能的に不活性な形態へ導き得る。従って、本発明の方法は、単離したタ
ンパク質を、単量体、二量体またはオリゴマー形態であり得る機能的に活性な形
態に再生および／または修飾するに役立つ工程をさらに含み得る。特に、本発明
は、その変質またはそうでなければ非天然の形態からの上記で定義のタンパク質
（好ましくは、ＧＤＦ―１５）の生物活性な二量体形態の産生のための方法をさ
らに包含する。本発明の該主題は、かなりの量の所望の二量体産物が、本発明に
従うタンパク質の単量体形態を再生条件へ供することによって得られるという予
想不可能な発見によって、達成される。従って、本発明はまた、上記に定義の方
法によって産生された二量体生物活性ＧＤＦ−１５に関する。

【００２２】 本発明のさらなる実施形態は、薬学的に許容される担体および／または希釈剤
と必要に応じて組み合わせて、上記で定義の核酸またはベクターまたはタンパク
質または抗体またはアンタゴニストまたはアゴニストを含む、薬学的組成物に関
する。薬学的組成物は、哺乳動物、好ましくはヒトにおける神経変性疾患の予防
および／または処置のために使用され得る。さらに、本発明に従う核酸のヌクレ
オチド配列の発現に関連する疾患の処置のための治療技術は、上記に定義の核酸
のヌクレオチド配列の発現を調節し得る上記に記載の薬剤（例えば、アンチセン
ス核酸、リボザイムおよび／またはプロモーター活性に影響を与えるための薬剤
）を使用して設計され得る。神経変性疾患は、好ましくは、急性および／または
慢性の神経学的および心理学的疾患であり、そして卒中（stroke）、パーキンソ
ン病、アルツハイマー病または他の痴呆症、ＣＮＳの感染、およびＣＮＳ伝達系
における障害に関連する精神医学的疾患（例えば、鬱病および精神分裂病）によ
って引き起こされ得る。

【００２３】 さらに好ましい実施形態において、本発明に従う薬学的組成物は、上記で定義
の核酸またはベクターまたはタンパク質または抗体またはアンタゴニストまたは
アゴニストに加えて、神経栄養活性を有する１以上の他の薬剤をさらに含む。好
ましい薬剤は、例えば、サイトカインあるいはその機能的に活性な誘導体または
一部である。本発明に従う薬学的組成物において使用される好ましいサイトカイ
ンは、ＧＤＦ（例えば、ＧＤＦ−５、ＧＤＦ−６、ＧＤＦ−７、ＧＤＦ−８およ
びＧＤＦ−９）、ＧＤＮＦ、ＴＧＦ（例えば、ＴＧＦ−αまたはＴＧＦ−β［例
えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２もしくはＴＧＦ−β３］）、アクチビンＡ、
ＢＭＰ（例えば、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−６、またはＢＭＰ−７、Ｂ
ＭＰ−１１、ＢＭＰ−１２）、ＢＤＮＦ、ＮＧＦ、ニューロトロフィン（例えば
、ＮＴ−３またはＮＴ−４）、ＥＧＦ、ＣＮＴＦならびにＦＧＦ（例えば、ＦＧ
Ｆ−２）からなる群から選択され得る。用語「ＧＤＮＦ」は、ＧＤＮＦ、ニュー
ルツリン（neurturin）およびパーセフィン（persephin）を含む。

【００２４】 本発明のさらなる主題は、哺乳動物、好ましくはヒトにおける、神経変性疾患
および／またはＣＮＳの感染（例えば、髄膜炎［例えば、細菌性髄膜炎］）の検
出のための、上記に定義の核酸、ベクター、タンパク質および／または抗体を含
む診断キットに関する。他の神経変性疾患の例は、上記に定義される通りである
。

【００２５】 以下の非限定的な実施例は、本発明を例示する： 実施例 ＧＤＦ−１５の同定 ＴＧＦ−β様タンパク質の保存システインノットモチーフを使用して、ＲＴ−
ＰＣＲおよびライブラリースクリーニングを使用する組み合わせアプローチは、
ニューロンから誘導されるＴＧＦ−βスーパーファミリーの新規のメンバーの全
長ｃＤＮＡ配列を明らかにした。ｃＤＮＡは、図７Ｂに示されるアミノ酸配列に
対応する、図７Ａに示される配列を有する。

【００２６】 図７Ａに示される配列の第１ヌクレオチドから３９ヌクレオチド上流に位置す
る可能性のある代替の翻訳開始コドンに従うと、対応するタンパク質はまた、図
７Ｂに示される配列のＮ末端に１３の追加のアミノ酸（ＭＰＧＱＥＬＲＴＬＮＧ
ＳＱ）を含み得る。

【００２７】 ＧＤＦ−１５と呼ばれるタンパク質を、バキュロウイルス系を使用して組換え
的に発現した。さらに、ネズミおよびラットＣ末端配列（ＨＲＴＤＳＧＶＳＬＱ
ＴＹＤＤＬ）から誘導される特異的ペプチドに対する抗体を、発現した。ヒト配
列（ＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬ）の対応する領域の高い相同性のために、
該抗体は、ヒトＧＤＦ−１５をも認識する。

【００２８】 ＣＮＳにおけるＧＤＦ−１５の局在 ＧＤＦ−１５アンチセンスＲＮＡプローブとのin situハイブリダイゼーショ
ン、ＲＴ−ＰＣＲならびにウェスタンブロット分析を、ＣＮＳにおけるＧＤＦ−
１５の分布を研究するために実施した（図１）。in situハイブリダイゼーショ
ンは、小脳におけるニューロン（特にプルキンエ細胞）におけるシグナル、およ
び新生児および成体ラットの脈絡叢における強い発現（図１Ａ）を明らかにした
。新生児および成体ラットの脳および末梢神経系の種々の領域から採取したサン
プルのＲＴ−ＰＣＲおよびウェスタンブロット法は、橋、延髄、中脳、線条、海
馬、皮質、および後根神経節（dorsal root ganglia）（図１Ｃ、Ｄ）における
ｍＲＮＡおよびタンパク質を検出することによって、これらの結果を示した。最
大レベルのｍＲＮＡの発現は、脈絡叢において見られた（図１Ａ）。上記Ｃ末端
ペプチドに対して惹起された抗体を、ウェスタンブロットのために使用した。新
生児ラットの種々の脳領域のサンプルの分析は、３１ｋＤａでの１つの明瞭なバ
ンドを明らかにした（図１Ｄ）。細胞性ＧＤＦ−１５の相対質量は、プロタンパ
ク質の３１ｋＤａの理論分子量とよく一致する。

【００２９】 ＧＤＦ−１５は脈絡叢に豊富にあるので、健康なヒト被験体ならびに種々の神
経学的疾患を有する患者のＣＳＦにおける該タンパク質の存在もまた、試験した
。脳サンプルにおいて検出される細胞内タンパク質とは対照的に、ＣＳＦサンプ
ルは、還元条件下で約１２ｋＤａでの単一バンドを明らかにし、これはＧＤＦ−
１５の分泌された成熟部分を示す。ＣＳＦにおける最大量のタンパク質が、細菌
性髄膜炎を有する患者において見られた（図２）。これらのデータをまとめると
、ＴＧＦ−βスーパーファミリーの新規のメンバーであるＧＤＦ−１５が、ＣＳ
Ｆを含むＣＮＳおよび末梢神経系の種々の領域で広範囲わたって発現されるとい
う証拠が提供される。さらに、ＧＤＦ−１５は、炎症性神経学的疾患を有する患
者のＣＳＦにおいて有意に増加され、神経学的疾患における診断ツールとしてＧ
ＤＦ−１５に対する抗体を使用する機会を提供する。

【００３０】 二量体の生物活性なＧＤＦ−１５の産生 ２μｇの単量体ＧＤＦ−１５タンパク質（例えば、大腸菌のような細菌におい
て産生される）を、２９１７．７μｌの溶解化（solubilisation）緩衝液（１Ｍ
ＮａＣｌ、５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ９．５）へ
溶解する。このように溶解したタンパク質へ、以下のものを添加する（総容量３
５８０μｌとなる）： ３５．８μｌ １００ｍＭ 酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ） ３５．８μｌ ２００ｍＭ 還元型グルタチオン（ＧＳＨ） ５９０．７μｌ ＣＨＡＰＳ（３−［（コラアミドプロピル）−ジメチアミノ
］−１−プロパンスルホン酸）。

【００３１】 ２０〜２２℃で４８時間のインキュベーション後、８０％を超える（典型的に
は９０％）の単量体タンパク質が、所望の二量体産物へ再生される。二量体の分
離を、逆相ＨＰＬＣのような標準のクロマトグラフィー方法によって実施する。

【００３２】 組換えヒトＧＤＦ−１５を使用する機能研究 バキュロウイルス系を使用して、ヒト組換えＧＤＦ−１５タンパク質の成熟部
分を、Ｓｆ９細胞において発現させた。しかし、全ての機能研究における同一の
結果が、細菌において発現される組換えヒトＧＤＦ−１５（これは、上記に記載
の再生方法によって再生されている）を使用する場合に得られる。ウェスタンブ
ロットは、還元および非還元条件下でそれぞれ、組換えタンパク質の単量体また
は二量体形態を示した。精製に続いて、該タンパク質を、ラット胚性中脳ＤＡ作
動性ニューロンに対するその生存効果について試験した。組換えＧＤＦ−１５の
Ｅ１４中脳細胞培養物への添加は、コントロール培養物と比較してインビトロで
７日後に生存するチロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）−陽性ニューロンの数を増
大させた（図３）。ＧＤＦ−１５のドーパミン栄養（dopaminotrophic）効果は
、ＴＧＦ−βスーパーファミリーおよびニューロトロフィンファミリーの他のメ
ンバー（例えば、ＴＧＦ−β、ＧＤＮＦ−サブファミリーメンバー、またはＢＤ
ＮＦ）の文献記載の（documented）生存促進活性に匹敵する。免疫細胞化学およ
び星状膠細胞特異的中間体フィラメントタンパク質ＧＦＡＰに対する抗体を使用
する中脳培養物の分析ならびに細胞増殖のためのアッセイは、ＧＤＦ−１５適用
は、細胞を数量的に増加させてそして星状膠細胞（これは、十分に確立された神
経栄養因子の供給源である）の成熟を促進することによっては、その生存促進効
果を示さないという証拠を提供した。これは、ＧＤＦ−１５は、ＦＧＦ−２また
はＢＭＰについて示されるように間接的でなく、直接的にドーパミン作動性ニュ
ーロンに作用するという証拠を提供する。

【００３３】 ＧＤＦ−１５がまた、ＰＤの見込みのある原因（例えば、鉄中毒）に対してＤ
Ａ作動性ニューロンを保護し得るかどうかを調べるために、鉄中毒化された中脳
ニューロンに対するその効果を試験した（図４Ａ、Ｂ）。鉄（Ｆｅ²⁺）に培養物
をさらすことによって、未処理コントロール培養物と比較して、ニューロン生存
が８０％減少した。細胞損失は、培養物をＦｅ²⁺とＧＤＦ−１５と共処理した場
合、５０％まで減少した。これらのデータは、ＧＤＦ−１５が鉄媒介化（酸化的
）損傷からＤＡ作動性ニューロンを保護することを強く示唆する。データはまた
、フリーラジカル、酸化的ストレス、ニューロン死プログラムのメディエーター
およびエグゼキューターによって媒介される神経変性事象を予防するかまたは減
速させる薬剤としての、ＧＤＦ−１５の使用を支持する。

【００３４】 さらに、ＧＤＦ−１５はまた、病巣化した（lesioned）ＤＡ作動性中脳ニュー
ロンをインビボで保護するということが、確認された。成体ラットの黒質線条系
を、左黒質（ＳＮ）の真上への６−ヒドロキシドーパミン（６−ＯＨＤＡ）の一
側性注射によって、病巣化させた。これらの実験の結果を、第１表ＡおよびＢに
それぞれ示す。第１表Ｂに示されるデータをまた、図５Ａに図示する。

【００３５】 第１表：アンフェタミン回転データ Ａ：アンフェタミン投与（５ｍｇ／ｋｇ 腹腔内）の５分後に始まる６０分間
についての１分当たりの回転

【００３６】

【表１】

【００３７】 Ｂ：平均値

【００３８】

【表２】

【００３９】 全てのラットは、アンフェタミンチャレンジの典型的な特徴、例えば、常同症
および立毛を示した。６−ＯＨＤＡのみで処理したラットは、１１．０±１．４
１（平均±ＳＤ）の回転速度を示し、黒質線条経路の少なくとも９５％の枯渇を
示す（Ungerstedtら（1970）、Brain. Res., 24, 485-493）。逆に、ＧＤＦ−１
５でもまた処理したラットは、非常に遅い速度（０．７５±０．８３）で回転し
、該タンパク質は左線条におけるドーパミンの６−ＯＨＤＡ誘発枯渇を効果的に
防止することを示す；図５Ａも参照のこと。

【００４０】 さらに、左線条における６−ＯＨＤＡ−誘発ドーパミン枯渇の上記防止がＳＮ
におけるニューロンに対するＧＤＦ−１５の神経保護効果によることを確認する
ために、ＳＮ緻密層部（ＳＮｐｃ）を、免疫細胞化学的に分析した。３つの個々
のレベルで測定したＳＮｐｃにおけるＴＨ陽性ニューロンのカウントを、第２表
Ａに示し、そして各ラットについての平均値を、それぞれ、第２表Ｂに示す。６
−ＯＨＤＡ処理したもの（ｎ＝４）についてならびに６−ＯＨＤＡおよびＧＤＦ
−１５で共処理したラット（ｎ＝４）についての全体平均値を、第２表Ｃに示す
。第２表Ｃに示すデータをまた、図５Ｂに図示する。結果は、６−ＯＨＤＡおよ
びＧＤＦ−１５でのラットの共処理は、６−ＯＨＤＡのみでの処理と比較して、
左線条におけるＴＨ陽性ニューロンのカウントの１０倍増加へ導いたことを示す
。従って、ＧＤＦ−１５は、ＴＨ免疫反応性ニューロンに対するその強力な神経
保護効果のために、左線条におけるドーパミンの６−ＯＨＤＡ誘発枯渇を防止す
る。

【００４１】 第２表：ＴＨ免疫細胞化学データ Ａ：ブレグマに対して３つのレベル（−２．８、−３．０および−３．２）
（Pellegrinoら、A stereotaxic atlas of the rat brain. Plenum Press, New
York, 1979に従う）での黒質部緻密層（substantial nigra pars compacta）に
おけるＴＨ陽性ニューロンのカウント

【００４２】

【表３】

【００４３】 Ｂ：個々のラットの平均値

【００４４】

【表４】

【００４５】 Ｃ：６−ＯＨＤＡ処理ラットの平均値、および６−ＯＨＤＡ＋ＧＤＦ−１５で
の共処理後の平均値

【００４６】

【表５】

【００４７】 要約すれば、上記インビボ研究は、左ＳＮの上かつ左側脳室（lateral ventri
cle）への６−ＯＨＤＡの直前でのＧＤＦ−１５の注射は、６−ＯＨＤＡで誘発
される病理的回転挙動を防止し（図５Ａ）、そしてＤＡ作動性ＳＮニューロンの
損失を有意に減少させた（図５Ｂ）ことを実証する。総合して、これらのデータ
は、ＧＤＦ−１５が、パーキンソン病における黒質線条変性の結果を緩和するた
めに有利に使用され得ることを示す。

【００４８】 ＴＧＦ−β１、ＯＰ−１（ＢＭＰ−７としても呼ばれる）、アクチビン、ＢＭ
Ｐ−２およびＧＤＦ−５によって活性化されるプラスミドＳｍａｄ結合エレメン
ト（plasmid Smad Binding Element）（ｐＳＢＥ）を使用して、ＧＤＦ−１５が
Ｓｍａｄタンパク質を介しての細胞内シグナルトランスダクションを誘発し得る
かどうかに関するさらなる問題に取り組んだ。ＳＢＥでのヒト骨芽細胞株（ｈＦ
ｏｂ）の一過性トランスフェクションは、ＧＤＦ−１５投与がルシフェラーゼシ
グナルを増加させることを示した（図６Ａ）。これらの結果は、ＧＤＦ−１５が
リポータ遺伝子構築物のＳｍａｄ応答プロモータエレメントを活性化することを
実証する。さらなる実験において、ＧＤＦ−１５による、安定なトランスフェク
ト化ミンク肺上皮細胞（ＭＬＥＣ）におけるプラスミノーゲンアクチベータイン
ヒビタープロモータ（ＰＡＩ）の誘発を試験した。ＭＬＥＣアッセイ（これは、
ＴＧＦ−β１、−β２、および−β３にのみ感受性である）は、ＧＤＦ−１５の
効果を全く示さなかった（図６Ｂ）。Ｓｍａｄ２およびＳｍａｄ３リン酸化はＴ
ＧＦ−βレセプターのＴＧＦ−β媒介活性化と特に関連するので、ＧＤＦ−１５
は、Ｓｍａｄ２／３経路を介してシグナル伝達をしないようであると結論付けら
れる。Ｓｍａｄ２／３、およびＢＭＰ媒介Ｓｍａｄ１／５経路の両方についての
応答エレメントである、ＳＢＥのＧＤＦ−１５依存活性化に関して、ＧＤＦ−１
５は、ＢＭＰ様レセプターへ結合することによってその細胞性効果を発揮するよ
うである。

【００４９】 要約 結論として、ＴＧＦ−βスーパーファミリーに属する、ニューロン細胞から誘
導される新規の神経栄養分子であるＧＤＦ−１５が、発見され、クローン化され
、発現され、そして機能的に特徴付けられた。

【００５０】 神経系において、ＧＤＦ−１５のｍＲＮＡおよびタンパク質は、例えば中脳、
線条および皮質において検出され得るが、高レベルの該ｍＲＮＡおよび該タンパ
ク質は、脈絡叢および髄液（ＣＳＦ）においてそれぞれ見られる。興味深いこと
に、ＣＦＳにおけるタンパク質のレベルは、特定の神経学的疾患において、例え
ば細菌性髄膜炎を有する患者において増加される。その機能を解明するために、
ヒトＧＤＦ−１５の成熟形態を、バキュロウイルス発現系を使用して組換え的に
発現させた。発現によって、該タンパク質の生物活性二量体形態が合成された。
胚性ラット中脳ニューロンの分離した細胞培養物を使用するインビトロ実験は、
ＧＤＦ−１５が、パーキンソン病（ＰＤ）において変性するＤＡ作動性中脳ニュ
ーロンについての神経栄養因子として作用し得ることを明らかにした。ＧＤＦ−
１５はまた、ＰＤの原因となり得る、鉄による中毒からこれらのニューロンを保
護し得る。さらに、ＧＤｆ−１５はまたインビボでその神経保護効果を示すこと
が実証され得る。ＧＤＦ−１５が作用するシグナル伝達経路に関して、ＧＤＦ−
１５はＳｍａｄタンパク質を介しての細胞内シグナルトランスダクションを誘発
し得ることが確認された。

【００５１】 従って、ＧＤＦ−１５は、発生、成熟、および病巣化脳において重要な機能を
有し、これは、急性および慢性の神経学的およ心理学的疾患（例えば、卒中（st
roke）、アルツハイマー病および他の痴呆症、ならびにＣＮＳ伝達系における障
害に関連する精神医学的疾患）の処置および診断のためにＧＤＦ−１５を使用す
る選択肢を包含すると結論付けられ得る。

【００５２】 ６−ＯＨＤＡで病巣化される黒質線条ニューロンに対するＧＤＦ−１５の保護
効果を実証するインビボ研究のための方法 成体雌性Ｗｉｓｔａｒラットを、ケタミン（７５ｍｇ／ｋｇ 腹腔内）および
キシラジヌム（１５ｍｇ／ｋｇ 腹腔内）を使用して麻酔し、そしてＫｏｐｆ定
位フレームに配置した。ＧＤＦ−１５を、１０ｍＭリン酸緩衝化生理食塩水（Ｐ
ＢＳ）（ｐＨ７．４）中、２μｇ／μｌの最終濃度で使用した。４匹のラットに
、左黒質（ＳＮ）の真上に２０μｇのＧＤＦ−１５および左側脳室（ＬＶ）中へ
２０μｇのＧＤＦ−１５を注射した。これに続いて、直ぐに、６−ヒドロキシド
ーパミンヒドロブロミド（０．１％アスコルビン酸を含む０．９％生理食塩水４
μｌ中、遊離塩基として８μｇ）を、左内側前脳束（ＭＦＢ）へ注射した。４匹
の追加のラットは、６−ＯＨＤＡのみを受けた。定位共縦座標（Stereotaxic co
-ordinate）（Pellegrinoら、A stereotaxic atlas of the rat brain. Plenum
Press, New York, 1979）は以下の通りであった：ＳＮについて、ＡＰ−３．０
、ＬＶ＋２．５、ＤＶ−８．５；ＬＶについて、ＡＰ＋１．０、ＬＶ＋１．２、
ＤＶ−３．５；ＭＦＢについて、ＡＰ−２．２、ＬＶ＋１．５、ＤＶ−７．９。
全てのラットを、手術後７日で、挙動的に試験した。同側の（Ipsilateral）回
転を、（＋）−アンフェタミンスルフェート投与（５ｍｇ／ｋｇ 腹腔内）の５
分後に始まる６０分間にわたって、カウントした。手術後１０日で、全てのラッ
トを、クロロホルム／エーテルで終末に麻酔し、そして、５００単位ヘパリンを
含む２００ｍｌの冷０．１Ｍリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）
、続いて３００ｍｌの新たに調製したＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒドで、心
臓内で（intracardially）灌流させた。脳を除去し、そしてＰＢＳ中４％パラホ
ルムアルデヒドに一晩配置し、ＰＢＳ中３０％スクロース中に凍結保護し、次い
で凍結させた。ＳＮ緻密層部（ＳＮ pars compacta）（ＳＮｐｃ）を介しての連
続３０μＭ冠状凍結切片（coronal cryosection）を切断し、そしてチロシンヒ
ドロキシラーゼ（ＴＨ）のために免疫細胞化学的に染色した。切片を、ブロッキ
ング（blocking）溶液（ＰＢＳ中、３％正常ヤギ血清、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００）中に４℃で一晩、次いで、ブロッキング溶液中、ウサギ抗血清対Ｔ
Ｈの１：２０００溶液（Ａｆｆｉｎｉｔｉ Ｌａｂｓ、Ｕ．Ｋ．）中に４℃で一
晩インキュベートした。切片を、０．０２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含むＰ
ＢＳ中で５回洗浄し、次いで、１：１０００の西洋ワサビペルオキシダーゼ連結
抗ウサギＩｇＧ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ）の溶液中に一晩４℃でインキュベー
トした。既に述べたように洗浄した後、ＴＨ免疫染色を、３，３’−ジアミノベ
ンジジンを色原体として使用して、可視化した。切片を、ゼラチン化スライド上
に載せ、アルコール中で脱水し、キシレン中でクリアにし、そしてＤｅＰｅＸ（
登録商標）（Ｂｉｏ−Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎ
ｙ）に載せた。ＴＨ−免疫反応性ニューロンを、ブレグマに対して３レベル（−
２．８、−３．０、−３．２）各々で脳の両側のＳＮｐｃにおいてカウントした
（Pellegrinoら、1979）。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ＣＮＳにおけるＧＤＦ−１５の局在。（Ａ）ラット特異的ＧＤＦ−１５アンチ
センス−ＲＮＡプローブを用いて実施した成体ラット脈絡叢のin situハイブリ
ダイゼーションの写真画像。（Ｂ）精製ＧＤＦ−１５抗血清を用いての、還元条
件下でのヒト脳脊髄液（ＣＳＦ）の免疫ブロット分析の写真画像。（Ｃ）種々の
ＰＯラット脳領域（橋、延髄、皮質、海馬、線条）、後根神経節（ＤＲＧ）、培
養一次（primary）星状膠細胞（astr.）、乏突起神経膠細胞細胞株ＯＬＩ−ｎｅ
ｕ（ＯＬＩ）、および培養乏突起神経膠細胞先祖（progenitors）（Ｏ−２Ａ）
のＲＴ−ＰＣＲ。（Ｄ）精製ＧＤＦ−１５抗血清を用いての、天然条件下での（
ｃ）の対応する脳領域および細胞の免疫ブロット分析。

【図２】 還元条件下でのヒトＣＳＦにおけるＧＤＦ−１５のウェスタンブロット分析の
画像。分子量マーカー（Ｓｔ．）。細菌性髄膜炎を罹患する患者のＣＳＦサンプ
ル（レーン１）。コントロール患者のＣＳＦサンプル（レーン２）。

【図３】 中脳ニューロン培養物におけるＧＤＦ−１５の生存効果を示す実験の図表示。
培地のみ（コントロール）、感染していないＳｆ９細胞由来の精製溶解物（バキ
ュロコントロール）、感染したＳｆ９細胞の溶解物から精製したＧＤＦ−１５（
０．０１〜１ｎｇ／ｍｌ）、およびＧＤＮＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）で処理した、中
脳培養物（Ｅ１５／ＤＩＶ７）の生存しているチロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ
）免疫反応性ニューロンの数。データは、平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として与えら
れ、スチューデントのｔ−検定から誘導されるＰ値は、コントロール培養物と比
較して増加する生存について、***Ｐ＜０．００１、**Ｐ＜０．０１である。

【図４】 ＧＤＦ−１５のＦｅ²⁺（１００μＭ）処理培養物における保護効果。（Ａ）培
地のみ中（コントロール）、ＮＴ−４（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下、およびＧＤ
Ｆ−１５（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、Ｆｅ²⁺有りまたは無しで処理した、中
脳培養物（Ｅ１５／ＤＩＶ７）における生存しているＴＨ-免疫反応性ニューロ
ンの数の図表示。（Ｂ）培地のみ中（コントロール）、ＮＴ−４（１０ｎｇ／ｍ
ｌ）の存在下、およびＧＤＦ−１５（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、Ｆｅ²⁺で処
理した、中脳培養物（Ｅ１５／ＤＩＶ７）の生存しているＴＨ免疫反応性ニュー
ロンのパーセンテージの図表示。鉄を添加しない培養物の値を１００％に設定す
る。データは、平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として与えられ、スチューデントのｔ−
検定から誘導されるＰ値は、コントロール培養物と比較して増加する生存につい
て、*Ｐ＜０．０５である。

【図５】 ＧＤＦ−１５のインビボ神経栄養効果。（Ａ）一側性の６−ＯＨＤＡ（６−ヒ
ドロキシドーパミン）病巣を有するラットのアンフェタミン回転データの図表示
。１分当たりの回転を、アンフェタミン（５ｍｇ／ｋｇ 腹腔内）投与の５分後
に始まる６０分間の間、モニターした。（Ｂ）ＳＮｐｃにおけるＴＨ−陽性ニュ
ーロンのカウントの図表示。値は、非病巣側と比較した場合の、病巣側のＴＨ−
陽性ニューロンのパーセントとして与えられる。データは、平均＋／−ＳＥＭ（
ｎ＝４）として与えられる。スチューデントのｔ−検定から誘導されるＰ値は、
*Ｐ＜０．０５、**Ｐ＜０．０１、***Ｐ＜０．００１である。

【図６】 Ｓｍａｄタンパク質を介してのＧＤＦ−１５のシグナル伝達。（Ａ）一過性ト
ランスフェクト化ｈＦｏｂ細胞におけるＴＧＦ−β１およびＧＤＦ−１５による
Ｓｍａｄ結合エレメント（ＳＢＥ）の活性化を実証する実験の図表示。（Ｂ）安
定的トランスフェクト化ＭＬＥＣ細胞におけるＴＧＦ−β１〜−β３によっての
み活性化されるＰＡＩ−１プロモータはＧＤＦ−１５に応答しないことを示す実
験の図表示。

【図７】 ヒトプレ−プロ−成熟（pre-pro-mature）ＧＤＦ−１５の（Ａ）ｃＤＮＡおよ
び（Ｂ）対応するアミノ酸配列。ヌクレオチドおよびアミノ酸を、国際１文字コ
ードに従って短縮する。

【図８】 ヒト成熟ＧＤＦ−１５の（Ａ）ｃＤＮＡおよび（Ｂ）対応するアミノ酸配列。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１３年５月２５日（２００１．５．２５）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｐ 25/00 ４Ｃ０８５ 48/00 25/16 ４Ｃ０８６ Ａ６１Ｐ 25/00 25/18 ４Ｃ０８７ 25/16 25/24 ４Ｈ０４５ 25/18 25/28 25/24 31/04 25/28 43/00 １０５ 31/04 １２１ 43/00 １０５ Ｃ０７Ｋ 14/495 １２１ 16/22 Ｃ０７Ｋ 14/495 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/22 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 19/34 Ａ 1/21 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｐ 19/34 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 21/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｑ 1/68 5/00 Ａ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ， ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，Ｋ Ｐ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ， ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，Ｓ Ｇ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA21 CA04 DA02 EA02 FA02 GA11 HA01 HA12 HA15 HA17 4B063 QA01 QA19 QQ43 QR32 QR55 QS34 4B064 AG13 AG27 CA10 CA19 CC24 DA01 DA13 4B065 AA90X AA99Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA44 CA46 4C084 AA07 AA13 AA17 AA19 AA22 BA01 BA02 BA08 BA22 BA23 BA44 CA18 CA28 DA01 DB52 DB59 MA01 MA02 NA14 ZA011 ZA021 ZA121 ZA151 ZA161 ZA181 ZB211 ZB351 ZC411 ZC751 ZC752 ZC781 4C085 AA13 AA14 BB11 CC03 CC07 DD62 EE01 EE03 EE05 4C086 AA01 AA02 AA03 EA16 MA01 MA02 MA03 MA04 MA05 NA14 ZA01 ZA02 ZA12 ZA15 ZA16 ZA18 ZB21 ZB35 ZC41 ZC75 ZC78 4C087 AA01 AA02 BC83 CA12 MA01 MA02 NA14 ZA01 ZA02 ZA12 ZA15 ZA16 ZA18 ZB21 ZB35 ZC41 ZC75 ZC78 4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 CA45 DA21 EA21 EA50 FA74

Claims (26)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ニューロンおよびグリア細胞に由来し、そしてＤＡ作動性ニ
   ューロンに対する神経栄養効果を有するＴＧＦ−β様タンパク質あるいはその機
   能的に活性な誘導体または一部の一次アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配
   列を含む、核酸。
2. 【請求項２】 実質的にデオキシリボヌクレオチドおよび／またはリボヌク
   レオチドおよび／または修飾ヌクレオチドからなる、請求項１に記載の核酸。
3. 【請求項３】 前記ニューロンおよびグリア細胞が哺乳動物起源である、請
   求項１または２に記載の核酸。
4. 【請求項４】 前記タンパク質が、神経変性事象から保護する、請求項１〜
   ３のいずれか１項に記載の核酸。
5. 【請求項５】 前記神経変性事象が、酸化的損傷および／またはフリーラジ
   カル損傷および／またはニューロン死プログラムのメディエーターおよび／また
   はエグゼキューターによって媒介される、請求項４に記載の核酸。
6. 【請求項６】 前記フリーラジカル損傷のメディエーターが、鉄、ＮＯドナ
   ー、および他のフリーラジカルドナーからなる群から選択され、そして前記ニュ
   ーロン死プログラムのメディエーターおよびエグゼキューターが、カスパーゼな
   らびにｂｃｌ−２ファミリーのプロ−およびアンチ−アポトーシスメンバーから
   なる群から選択される、請求項５に記載の核酸。
7. 【請求項７】 少なくとも、図７Ａに示すヌクレオチド配列、または図８Ａ
   に示すヌクレオチド配列、または図８Ａに示すヌクレオチド配列のヌクレオチド
   ４０〜３３３、あるいは機能的に活性なポリペプチドの発現へ導くその変異体を
   含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の核酸。
8. 【請求項８】 少なくとも請求項１〜７のいずれか１項に記載の核酸を含む
   、ベクター。
9. 【請求項９】 少なくとも請求項１〜７のいずれか１項に記載の核酸または
   請求項８のベクターを含む、宿主生物。
10. 【請求項１０】 請求項１〜７のいずれか１項に記載の核酸によってコード
    される、タンパク質。
11. 【請求項１１】 請求項１０のタンパク質に対して指向される、抗体または
    その機能的フラグメント。
12. 【請求項１２】 請求項１０に記載のタンパク質に指向される、アンタゴニ
    スト。
13. 【請求項１３】 請求項１０のタンパク質の代替物としての、アゴニスト。
14. 【請求項１４】 請求項１〜７のいずれか１項に記載の核酸または請求項８
    のベクターまたは請求項１０のタンパク質の産生のための方法であって、該方法
    は、以下の工程： （ａ）請求項９の宿主生物を、好適な培地中、好適な条件下で培養すること；
    および （ｂ）該培地および／または該宿主生物から所望の産物を単離すること、 を包含する。
15. 【請求項１５】 薬学的に許容される担体および／もしくは希釈剤と必要に
    応じて組み合わせて、請求項１〜７のいずれか１項に記載の核酸、または請求項
    ８のベクター、または請求項１０のタンパク質、または請求項１１の抗体、また
    は請求項１２のアンタゴニスト、または請求項１３のアゴニストを含む、薬学的
    組成物。
16. 【請求項１６】 哺乳動物における神経変性疾患の予防および／または処置
    用の、請求項１５に記載の薬学的組成物。
17. 【請求項１７】 前記哺乳動物がヒトである、請求項１６に記載の薬学的組
    成物。
18. 【請求項１８】 前記神経変性疾患が、急性および／または慢性の神経学的
    および心理学的疾患の群から選択される、請求項１６または１７に記載の薬学的
    組成物。
19. 【請求項１９】 前記神経学的および心理学的疾患が、卒中（stroke）、パ
    ーキンソン病、アルツハイマー病または他の痴呆症、ＣＮＳの感染、およびＣＮ
    Ｓ伝達系における障害に関連する精神医学的疾患によって引き起こされる、請求
    項１８に記載の薬学的組成物。
20. 【請求項２０】 前記精神医学的疾患が、鬱病および精神分裂病からなる群
    から選択される、請求項１９に記載の薬学的組成物。
21. 【請求項２１】 １以上の神経栄養活性を有する薬剤あるいはその機能的に
    活性な誘導体または一部をさらに含む、請求項１５〜２０のいずれか１項に記載
    の薬学的組成物。
22. 【請求項２２】 前記薬剤がサイトカインである、請求項２１に記載の薬学
    的組成物。
23. 【請求項２３】 前記サイトカインが、ＧＤＦ、ＧＤＮＦ、ＴＧＦ、アクチ
    ビンＡ、ＢＭＰ、ＢＤＮＦ、ＮＧＦ、ＥＧＦ、ＣＮＴＦおよびＦＧＦからなる群
    から選択される、請求項２２に記載の薬学的組成物。
24. 【請求項２４】 哺乳動物における神経変性疾患および／またはＣＮＳの感
    染についての検出用の、請求項１〜７のいずれか１項に記載の核酸および／また
    は請求項８のベクターおよび／または請求項１０のタンパク質および／または請
    求項１１の抗体を含む、診断キット。
25. 【請求項２５】 前記感染が髄膜炎である、請求項２４に記載の診断キット
    。
26. 【請求項２６】 前記哺乳動物がヒトである、請求項２４または２５に記載
    の診断キット。