JP2002542800A - 変異体ヒトｃｄ８０および組成物およびその作製および使用法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 改良されたワクチンおよびその使用法が開示されている。自己免疫疾患または移植片を持つ個体を処置するための免疫抑制組成物およびその使用法が開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】技術分野 本発明は個体を免疫化するための組成物および方法、免疫抑制剤、その成分お
よびそれらを作製するおよび使用する方法に関している。 背景技術 本発明は１９９９年４月３０日に出願された米国特許仮出願番号第６０／１３
１，７６４号（本明細書において援用される）に関係している。

【０００２】 ＣＤ２８はほとんどの成熟Ｔ細胞および胸腺細胞上で構成的に発現される細胞
表面糖蛋白質であり、一方、ＣＴＬＡ−４レセプターは休止Ｔ細胞には存在せず
、Ｔ細胞活性化後４８から７２時間のみで検出可能である。ＣＤ２８／ＣＴＬＡ
−４分子の主リガンドは専門的抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面に発現されるＢ７
．１（ＣＤ８０）およびＢ７．２（ＣＤ８６）である。少なくとも二つのレセプ
ター（ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４）および二つのリガンドが存在する生物学的
な理論的解釈は明らかではない。ＣＤ８０およびＣＤ８６抗原が機能的に類似し
ていることが初めに示されている。しかしながら、それらの発現の異なったパタ
ーンが決定された時、これらの共刺激性分子の異なった役割が最初に示唆された
。ＣＤ８６はＡＰＣ上で構成的に発現されており、およびＡＰＣの活性化後、Ｃ
Ｄ８６の発現が急速に上方制御され、続いて徐々にベースラインレベルに戻る。
ＣＤ８０の発現はＣＤ８６に比較すると遅れており、その発現は免疫応答開始後
、４８から７２時間で最大となる。ＣＤ８６は構成的に発現されおよびＣＤ８０
よりも早期に上方制御されるので、ＣＤ８６の発現が免疫応答の初期に重要であ
り、一方ＣＤ８０は二番目に重要であることが示唆された。

【０００３】 ＣＤ８０およびＣＤ８６間の機能的相違は、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４との
共刺激性分子の結合動力学のデータによりさらに示唆された。表面プラスモン共
鳴（ＳＰＲ）分析は両方のリガンドともＣＤ２８より高い結合力でＣＴＬＡ−４
へ結合することを示している。さらなる測定は、ＣＤ８６／ＣＴＬＡ−４複合体
はＣＤ８０／ＣＴＬＡ−４複合体よりも速く解離することを明らかにした。これ
らの結合性の相違と、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０の発現における類似の遅延を
結び合わせると、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０間の機能的関係はＣＴＬＡ−４お
よびＣＤ８６分子間の機能的関係よりも多分より強いことが示唆される。

【０００４】 インビトロおよびインビボにおけるＣＤ８０およびＣＤ８６の多機能性もまた
報告されている。抗ＣＤ８０（しかし抗ＣＤ８０ではない）抗体は自己免疫糖尿
病のマウスモデルにおいて疾患の発生を阻止するが、一方、実験的アレルギー性
脳脊髄炎のマウスモデルにおいてはこれらの抗体で逆の効果が観察されている。
いくつかの実験系は、抗原に対するＴ細胞応答の開始におけるＣＤ８６の重要な
役割を示しており、ＣＤ８０はこれらの細胞に対する調節的なシグナルを提供す
ることに重要な役割を果たしているようである。外因性ＣＤ８６の発現は，ＨＩ
Ｖ−１からのエンベロープ蛋白質によるＤＮＡワクチン接種後に、マウスＴ細胞
への重要な活性化シグナル提供することが観察されている（ＣＤ８０は提供しな
い）。同様の結果がＨＩＶ−１またはインフルエンザ抗原をコードしているＤＮ
ＡまたはマウスＣＤ８０およびＣＤ８６をコードしているプラスミドによるマウ
スの免疫化後に観察された。従って、ＣＤ８０およびＣＤ８６間の機能的相違は
、マウスで発現されたヒト共刺激性分子の異なった免疫原性とは結び付けられな
かった。外因性ヒトまたはマウスＣＤ８６（ＣＤ８０ではない）はＤＮＡ免疫化
の間、抗ウイルスＴ細胞活性化を刺激すると信じられている。

【０００５】 病原性抗原またはヒト疾患に関与する細胞に付随する抗原のような標的抗原に
対して個体を免疫するのにワクチンは有用である。ヒト疾患に関与する細胞に付
随する抗原には癌不随腫瘍抗原および自己免疫疾患に関与する細胞に付随する抗
原が含まれる。

【０００６】 そのようなワクチンの設計において、ワクチン接種した個体の細胞中に標的抗
原を産生するワクチンが、免疫系の内の細胞系を誘導するのに有効であることが
認められている。特に、生弱毒化ワクチン、無毒ベクターを使用する組換えワク
チンおよびＤＮＡワクチンはすべて、ワクチン接種した個体の細胞中に抗原の産
生を導き、免疫系の内の細胞系誘導を生じる。一方、蛋白質のみからなるサブユ
ニットワクチン、および殺されたまたは不活性化されたワクチンは体液性応答を
誘導するが良好な細胞性免疫応答を誘導しない。

【０００７】 病原体感染に対する保護を提供するため、および病原体感染、癌または自己免
疫疾患処置のための有効な免疫仲介治療を提供するため、細胞性免疫応答がしば
しば必要とされる。従って、生弱毒化ワクチン、無毒ベクターを使用する組換え
ワクチンおよびＤＮＡワクチンのようなワクチン接種した個体の細胞中に標的抗
原を産生するワクチンがしばしば良好である。

【０００８】 そのようなワクチンは病原体感染またはヒト疾患に対して予防的にまたは治療
的に個体を免疫するのにしばしば有効であるが、改良されたワクチンに対する要
求が存在している。促進された免疫応答を産生する組成物および方法が必要とさ
れている。

【０００９】 免疫化と対照的に、遺伝子治療は、その発現が核酸分子が投与された個体に治
療的利益を与える非免疫原性蛋白質をコードしている核酸分子を使用する。遺伝
子治療の特定の型は、個体中の免疫応答を調節し、それにより治療的利益を与え
る非免疫原性蛋白質をコードしている遺伝子材料の送達に関している。例えば、
個体において自己免疫疾患に関連する免疫応答を下方制御し、それにより個体に
治療的利益を与える非免疫原性蛋白質をコードしている遺伝子材料を送達するよ
うにプロトコールが設計できる。免疫応答を調節するための遺伝子治療プロトコ
ールで使用できる組成物および方法が必要とされている。

【００１０】 自己免疫疾患および細胞／組織／器官拒絶反応のような疾患を処置するため、
別の手段による免疫応答の調節が同様に望まれている。免疫応答を調節するため
、および免疫応答を調節するために有用な組成物を設計および発見するために使
用できる組成物および方法が必要とされている。発明の好適な態様の説明 抗原提示細胞（ＡＰＣ）がＴ細胞と相互作用する場合、ヒトＣＤ８０のＣ領域
が負のシグナルの変換を招くことを出願者は発見した。負のシグナルはＴ細胞活
性の減少を生じ、従って、Ｔ細胞へＡＰＣにより提示された抗原に対して発生さ
れる免疫応答の減少を生じる。特に、Ｔ細胞上のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）と
、主要組織適合抗原系（ＭＨＣ）蛋白質および抗原間の複合体の形成によりＡＰ
Ｃ上で形成されたＭＨＣ／抗原複合体との相互作用は、ＡＰＣ上に存在する共刺
激分子ＣＤ８０およびＣＤ８６とＴ細胞上のＣＤ２８分子間の相互作用により達
成される。そのような相互作用はＴ細胞活性化を起こし、免疫応答を上昇させる
。しかしながら、Ｔ細胞活性化に続いて、Ｔ細胞によりＣＴＬＡ−４が発現され
る。ＣＴＬＡ−４はＣＤ８０と相互作用し、そのような相互作用はＣＤ８０およ
びＣＤ８６とＣＤ２８との相互作用により起こされた先の共刺激効果を除去する
優性負シグナルを生じる。ＣＤ８０のＣＴＬＡ−４との相互作用の結果は、Ｔ細
胞が関与する免疫応答の減少である。

【００１１】 出願者の発見は本発明の二つの異なった特色を提供する。本発明の一つの特色
に従うと、ＣＤ８０の共刺激活性を持つが、ＣＴＬＡ−４とのＣＤ８０相互作用
に付随する負シグナルを変換しないＣＤ８０変異体およびそれをコードしている
核酸が提供される。そのようなＣＤ８０変異体は、蛋白質免疫原または免疫原を
コードしている核酸分子として送達される免疫原と一緒に、蛋白質またはそのよ
うな蛋白質をコードしている核酸として送達される免疫化プロトコールでの使用
に有用である。本発明のこの態様のＣＤ８０変異体は免疫化プロトコールにおけ
る分子補助剤である。本発明の別の特色に従うと、ＣＤ８０変異体およびそれを
コードしている核酸が提供され、それはＣＴＬＡ−４とのＣＤ８０相互作用に付
随する負シグナルを変換するようにＣＤ８０ Ｃ領域を持っている。そのような
ＣＤ８０変異体は自己免疫疾患および細胞、組織および器官移植に関連する免疫
抑制プロトコールの処置に有用である。負シグナルを提供するＣＤ８０変異体は
蛋白質またはそのような蛋白質をコードしている核酸として送達されるであろう
。本発明のこの特色のＣＤ８０変異体は自己免疫疾患／免疫抑制治療剤である。

【００１２】 ヒトＣＤ８０のヌクレオチドおよびアミノ酸配列はよく知られており、Ｆｒｅ
ｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３（８）：２７
１４−２７２２，Ｓｅｌｖａｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｉｍｍｕｎ ｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ３６（３）：１７５−１８１，Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａ
ｌ．（１９９１）Ｊ．Ｅｘ．Ｍｅｄ．１７４（３）：６２５−６３１，Ｌａｎｉ
ｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（１）：９７−１
０５，およびＧｅｎｂａｎｋ登録コードＰ３３６８１（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌ
ｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）（これらは各々が本明細書において援用される）に示され
ている。

【００１３】 ＣＤ８６（Ｂ７．２）はＡｚｕｍａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．１９９３ Ｎａｔｕｒ ｅ ３６６：７６−７９（本明細書において援用される）に最初に記載されてい
る。この文献の図２ＢはＢ７．２蛋白質のヌクレオチドおよび予測されるアミノ
酸配列を記載している。配列情報はまたＧｅｎｂａｎｋデータベースのＵ０４３
４３（本明細書において援用される）としても入手可能である。

【００１４】 ヒトＣＤ８０は２８８アミノ酸蛋白質（１−２８８）として発現され、成熟蛋
白質（３５−２８８）へ処理される。ＣＤ８０は四つの領域へ分割される：変異
（Ｖ）領域、定常（Ｃ）領域、膜貫通領域（ｔｍ）および細胞質尾部領域（ｃｔ
）。アミノ酸３５−２４２は蛋白質の細胞外ドメインを構成する。アミノ酸４３
−１２３はＶ領域を構成し、イムノグロブリン様Ｖ型ドメインとも称される。ア
ミノ酸１５５−２２３はＣ領域を構成し、イムノグロブリン様Ｃ２型ドメインと
も称される。アミノ酸２４３−２６３は膜貫通領域を構成している。アミノ酸２
６４−２８８は細胞質尾部を構成している。

【００１５】 本明細書で使用される場合、用語”ＣＤ８０変異体”、”Ｃ領域ＣＤ８０変異
体”、”Ｃ領域欠損ＣＤ８０変異体”および”ＣＤ８０ΔＣ変異体”は相互交換
的に使用され、機能性ＣＤ８０かまたはＣＤ８６Ｖ領域、少なくとも一つのＣＤ
８０の機能性非Ｃ領域を含み、Ｃ領域のすべてまたは一部の不在により、そのよ
うな分子がＣＴＬＡ−４との野生型ＣＤ８０Ｃ領域相互作用に付随する負シグナ
ルを変換しないように、ＣＤ８０の機能性Ｃ領域を含んでいない分子を示してい
ることを意味している。

【００１６】 本明細書で使用される場合、句”少なくとも一つのＣＤ８０の機能性非Ｃ領域
”および”ＣＤ８０の機能性Ｃ領域”で使用されるような”ＣＤ８０の機能性領
域”とはＣＤ８０からの完全蛋白質領域ならびに完全領域の活性を保持している
部分領域を示すことを意味している。例えば、ＣＤ８０の機能性Ｖ領域はＣＤ８
０のアミノ酸４３−１２３またはその断片を示し、ＣＤ２８へ結合する能力を保
持している他の配列（他のＣＤ８０配列を含んでいるがそれに制限されるわけで
はない）が含まれる。ＣＤ８０の機能性Ｃ領域はＣＤ８０のアミノ酸１５５−２
２３またはその断片を示し、ＣＴＬＡ−４への結合能力を保持しおよび負シグナ
ルを変換する他の配列（他のＣＤ８０配列を含んでいるがそれに制限されるわけ
ではない）を含む蛋白質が含まれる。従って、ＣＤ８０の機能性Ｃ領域を含まな
い蛋白質はＣＤ８０のアミノ酸１５５−２２３の断片を含んでいるが、そのよう
な断片はＣＴＬＡ−４へ結合せずおよび負シグナルを変換しない。機能性Ｃ領域
を含まない同様の蛋白質は、隣接する配列がコンホメーションまたは他の変化に
よりＣ領域を非機能的にするならば、アミノ酸１５５−２２３を含んでいる。Ｃ
Ｄ８０の機能性ｔｍはＣＤ８０のアミノ酸２４３−２６３またはその断片を示し
、それを含むＣＤ８０変異体蛋白質を細胞膜内へ繋ぎ止め、分泌を防止している
。ＣＤ８０の機能性ｃｔとはＣＤ８０のアミノ酸２６４−２８８またはその断片
を示し、変異体ＣＤ８０蛋白質が発現された場合、細胞質中に保持される。

【００１７】 本明細書で使用された場合、用語”Ｃ領域⁺ＣＤ８０蛋白質”および”Ｃ領域
蛋白質”とは相互交換的に使用され、機能性ＣＤ８０Ｃ領域を含み、およびＣ領
域のすべてまたは一部の存在によりそのような分子がＣＴＬＡ−４との野生型Ｃ
Ｄ８０Ｃ領域相互作用に付随する負シグナルを変換する蛋白質を示すことを意味
している。

【００１８】 本発明の一つの態様は、ワクチン接種、特にＤＮＡワクチン接種のための改良
された方法および組成物に関しており、ここで標的免疫原をコードしているＤＮ
Ａが個体へ投与され、そこでＤＮＡが取り込まれおよび発現され、免疫原に対す
る免疫応答が発生される。本発明の態様に従うと、ＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質を
コードしているＤＮＡは個体へ共送達され、そのようなＤＮＡの発現は免疫原に
対して誘導された免疫応答を促進するＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質を生成する。

【００１９】 標的抗原を発現しているワクチン接種個体の細胞中でのＣＤ８０ΔＣ変異体蛋
白質の共生成は、驚くほど促進された標的抗原に対する免疫応答を生じることが
発見された。ＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質をコードしているヌクレオチド配列の発
現可能形を提供することにより、ＤＮＡワクチン、組換えベクターワクチンおよ
び弱毒化ワクチンのようなワクチン接種された個体の細胞中で標的抗原を発現す
ることにより機能するワクチンが改良される。

【００２０】 抗原を生成している細胞中でのＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質の共生成は、抗原に
対する細胞免疫性の促進を生じる。従って、本発明はＤＮＡワクチン、サブユニ
ット無毒組換えベクターワクチンおよび弱毒化ワクチンのようなワクチンの一部
として、ワクチン接種体での発現のために必要な制御配列に作動可能なように連
結されたＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を提供す
ることにより改良されたワクチンを提供する。もしくは、ＣＤ８０ΔＣ変異体蛋
白質は免疫原または免疫原をコードしている遺伝子構築物と一緒に蛋白質補助剤
として送達される。

【００２１】 ＣＤ８０ΔＣ変異体が免疫化プロトコールにおいて分子補助剤として提供され
る本発明のいくつかの態様に従うと、ＣＤ８０ΔＣ変異体は機能性ＣＤ８０Ｖ領
域かまたはＣＤ８６Ｖ領域を含んでいる。ＣＤ８０ΔＣ変異体は機能性ＣＤ８０
Ｃ領域を含んでいない。いくつかの態様において、Ｃ領域は欠損されおよびＶ領
域は直接膜貫通領域へ連結されている。いくつかの態様において、ＣＤ８６Ｃ領
域がＣＤ８０Ｃ領域の代わりに挿入されている。いくつかの態様において、ＣＤ
８０ΔＣ変異体のＶ領域後に非ＣＤ８０、非ＣＤ８６配列が含まれている。いく
つかの態様はＣＤ８０膜貫通領域を含んでいる。いくつかの態様はＣＤ８６膜貫
通領域を含んでいる。いくつかの態様において、ＣＤ８０膜貫通領域が欠損され
、他の配列により置換されていない。いくつかの態様はＣＤ８０ｔｍの代わりに
非ＣＤ８０、非ＣＤ８６配列を含んでいる。いくつかの態様はＣＤ８０細胞質尾
部を含んでいる。いくつかの態様はＣＤ８６細胞質尾部を含んでいる。いくつか
の態様において、ＣＤ８０細胞質尾部が欠損され、他の配列により置換されてい
ない。いくつかの態様はＣＤ８０ｃｔの代わりに非ＣＤ８０、非ＣＤ８６配列を
含んでいる。ＣＤ８０ΔＣ変異体がＣＤ８０ΔＣ変異体をコードしている遺伝子
物質の投与により細胞へ送達される態様において、膜貫通領域および細胞質尾部
を含むＣＤ８０ΔＣ変異体が免疫応答の刺激に特に有用であることが発見された
。いくつかの態様において、ＣＤ８０ｔｍおよびＣＤ８０ｃｔが提供される。い
くつかの態様において、ＣＤ８６ｔｍおよびＣＤ８６ｃｔが提供される。いくつ
かの態様において、ＣＤ８０ｔｍおよびＣＤ８６ｃｔが提供される。いくつかの
態様において、ＣＤ８６ｔｍおよびＣＤ８０ｃｔが提供される。ＣＤ８０ΔＣ変
異体蛋白質の投与によりＣＤ８０ΔＣ変異体が細胞へ送達される態様において、
ＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質は可溶性蛋白質として提供され、ここでは膜貫通領域
および細胞質尾部が欠損され、いくつかの場合、可溶性残基に置き換えられてい
る。

【００２２】 本発明の特色は８０Ｖ、８０ｔｍおよび８０ｃｔを含み、８０Ｃを含まない単
離された蛋白質に関している；ここで該蛋白質は８０Ｖまたは８６Ｖまたは両方
を含み、任意に一つまたはそれ以上の８０ｔｍ、８６ｔｍ、８０ｃｔおよび８６
ｃｔを含んでおり、ここで； ８０ＶはＣＤ８０の変異ドメインまたはその機能的断片であり； ８６ＶはＣＤ８６の変異ドメインまたはその機能的断片であり； ８６ＣはＣＤ８６のＣドメインまたはその機能的断片であり； ８０ｔｍはＣＤ８０の膜貫通領域またはその機能的断片であり； ８６ｔｍはＣＤ８６の膜貫通領域またはその機能的断片であり； ８０ｃｔはＣＤ８０の細胞質尾部またはその機能的断片であり；および ８６ｃｔはＣＤ８６の細胞質尾部またはその機能的断片である。

【００２３】 いくつかの態様に従うと、次の式を持っている： Ｒ¹−Ｒ²−Ｒ³−Ｒ⁴−Ｒ⁵−Ｒ⁶−Ｒ⁷−Ｒ⁸−Ｒ⁹ 式中 Ｒ¹は０−５０アミノ酸であり； Ｒ²は８０Ｖまたは８６Ｖであり； Ｒ³は０−５０アミノ酸であり； Ｒ⁴は８６Ｃまたは０アミノ酸であり； Ｒ⁵は０−５０アミノ酸であり； Ｒ⁶は８０ｔｍまたは８６ｔｍであり； Ｒ⁷は０−５０アミノ酸であり； Ｒ⁸は８０ｃｔまたは８６ｃｔであり；および Ｒ⁹は０−５０アミノ酸である。

【００２４】 いくつかの態様において、Ｒ¹は０−２５アミノ酸であり；Ｒ³は０−２５アミ
ノ酸であり；Ｒ⁵は０−２５アミノ酸であり；Ｒ⁷は０−２５アミノ酸であり；お
よび／またはＲ⁹は０−２５アミノ酸である。

【００２５】 いくつかの態様において、Ｒ¹は０−１０アミノ酸であり；Ｒ³は０−１０アミ
ノ酸であり；Ｒ⁵は０−１０アミノ酸であり；Ｒ⁷は０−１０アミノ酸であり；お
よび／またはＲ⁹は０−１０アミノ酸である。

【００２６】 いくつかの態様において、蛋白質は ８０Ｖ／ｄｅｌｅ／８０ｔｍ／８０ｃｔ； ８０Ｖ／ｄｅｌｅ／８０ｔｍ／８６ｃｔ； ８０Ｖ／ｄｅｌｅ／８６ｔｍ／８０ｃｔ； ８６Ｖ／ｄｅｌｅ／８０ｔｍ／８０ｃｔ； ８６Ｖ／ｄｅｌｅ／８０ｔｍ／８６ｃｔ； ８６Ｖ／ｄｅｌｅ／８６ｔｍ／８０ｃｔ； ８０Ｖ／ｄｅｌｅ／８６ｔｍ／８６ｃｔ； ８０Ｖ／８６Ｃ／８０ｔｍ／８０ｃｔ； ８０Ｖ／８６Ｃ／８０ｔｍ／８６ｃｔ； ８０Ｖ／８６Ｃ／８６ｔｍ／８０ｃｔ； ８６Ｖ／８６Ｃ／８０ｔｍ／８０ｃｔ； ８６Ｖ／８６Ｃ／８０ｔｍ／８６ｃｔ； ８６Ｖ／８６Ｃ／８６ｔｍ／８０ｃｔ； ８０Ｖ／８６Ｃ／８６ｔｍ／８６ｃｔ； ８０Ｖ／ｄｅｌｅ／８０ｔｍ／ｄｅｌｅ； ８０Ｖ／ｄｅｌｅ／８６ｔｍ／ｄｅｌｅ； ８６Ｖ／ｄｅｌｅ／８０ｔｍ／ｄｅｌｅ； ８０Ｖ／８６Ｃ／８０ｔｍ／ｄｅｌｅ； ８０Ｖ／８６Ｃ／８６ｔｍ／ｄｅｌｅ； ８６Ｖ／８６Ｃ／８０ｔｍ／ｄｅｌｅ； ８６Ｖ／８６Ｃ／８０ｔｍ／ｄｅｌｅ； ８６Ｖ／８６Ｃ／ｄｅｌｅ／８０ｃｔ； ８０Ｖ／８６Ｃ／ｄｅｌｅ／８０ｃｔ； ８０Ｖ／ｄｅｌｅ／ｄｅｌｅ／８０ｃｔ； ８６Ｖ／ｄｅｌｅ／ｄｅｌｅ／８０ｃｔ； ８６Ｖ／８６Ｃ／ｄｅｌｅ／ｄｅｌｅ；および ８０Ｖから成る群より選択されるＣＤ８０変異体である。

【００２７】 いくつかの態様において、ＣＤ８０変異体は： Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８６Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８６Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８６Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８６Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８６Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８６Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８６Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８６Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８６Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８６Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８６Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８６Ｃ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８６Ｃ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８６Ｃ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ；および Ｒ−８０Ｖ−Ｒから成る群より選択される式を持っており；式中 ８０ＶはＣＤ８０の変異ドメインまたはその機能的断片であり； ８６ＶはＣＤ８６の変異ドメインまたはその機能的断片であり； ８６ＣはＣＤ８６のＣドメインまたはその機能的断片であり； ８０ｔｍはＣＤ８０の膜貫通領域またはその機能的断片であり； ８６ｔｍはＣＤ８６の膜貫通領域またはその機能的断片であり； ８０ｃｔはＣＤ８０の細胞質尾部またはその機能的断片であり； ８６ｃｔはＣＤ８６の細胞質尾部またはその機能的断片であり； ｄｅｌｅは０アミノ酸であり；および Ｒは各々独立して０−１００アミノ酸である。 いくつかの態様において、Ｒは各々独立して０−５０アミノ酸である。 いくつかの態様において、Ｒは各々独立して０−３０アミノ酸である。 いくつかの態様において、Ｒは各々独立して０−２０アミノ酸である。

【００２８】 本発明のいくつかの態様において、ＣＤ８０変異体は： Ｃドメインが欠損されたＣＤ８０； Ｃドメインが欠損されおよびＣＤ８０膜貫通領域がＣＤ８６膜貫通領域で置換
されたＣＤ８０； Ｃドメインが欠損されおよびＣＤ８０細胞質尾部領域がＣＤ８６細胞質尾部領
域で置換されたＣＤ８０； Ｃドメインが欠損されおよびＣＤ８０ＶドメインがＣＤ８６Ｖドメインで置換
されたＣＤ８０； Ｃドメインが欠損されおよびＣＤ８０ＶドメインがＣＤ８６Ｖドメインで置換
されおよびＣＤ８０膜貫通領域がＣＤ８６膜貫通領域で置換されたＣＤ８０； Ｃドメインが欠損されおよびＣＤ８０ＶドメインがＣＤ８６Ｖドメインで置換
されおよびＣＤ８０細胞質尾部領域がＣＤ８６細胞質尾部領域で置換されたＣＤ
８０； Ｃドメインが欠損されおよびＣＤ８０膜貫通領域がＣＤ８６膜貫通領域で置換
されおよびＣＤ８０細胞質尾部領域がＣＤ８６細胞質尾部領域で置換されたＣＤ
８０； ＣＤ８０ＣドメインがＣＤ８６Ｃドメインで置換されたＣＤ８０； ＣＤ８０ＣドメインがＣＤ８６Ｃドメインで置換されおよびＣＤ８０膜貫通領
域がＣＤ８６膜貫通領域で置換されたＣＤ８０； ＣＤ８０ＣドメインがＣＤ８６Ｃドメインで置換されおよびＣＤ８０細胞質尾
部領域がＣＤ８６細胞質尾部領域で置換されたＣＤ８０； ＣＤ８０ＣドメインがＣＤ８６Ｃドメインで置換されおよびＣＤ８０Ｖドメイ
ンがＣＤ８６Ｖドメインで置換されたＣＤ８０； ＣＤ８０ＣドメインがＣＤ８６Ｃドメインで置換されおよびＣＤ８０Ｖドメイ
ンがＣＤ８６Ｖドメインで置換されおよびＣＤ８０膜貫通領域がＣＤ８６膜貫通
領域で置換されたＣＤ８０； ＣＤ８０ＣドメインがＣＤ８６Ｃドメインで置換されおよびＣＤ８０Ｖドメイ
ンがＣＤ８６Ｖドメインで置換されおよびＣＤ８０細胞質尾部領域がＣＤ８６細
胞質尾部領域で置換されたＣＤ８０； ＣＤ８０ＣドメインがＣＤ８６Ｃドメインで置換されおよびＣＤ８０膜貫通領
域がＣＤ８６膜貫通領域で置換されおよびＣＤ８０細胞質尾部領域がＣＤ８６細
胞質尾部領域で置換されたＣＤ８０； Ｃドメインが欠損されおよび細胞質尾部領域が欠損されたＣＤ８０； Ｃドメインが欠損されおよび細胞質尾部領域が欠損されおよびＣＤ８０膜貫通
領域がＣＤ８６膜貫通領域で置換されたＣＤ８０； Ｃドメインが欠損されおよび細胞質尾部領域が欠損されおよびＣＤ８０Ｃドメ
インがＣＤ８６Ｃドメインで置換されたＣＤ８０； ＣＤ８０ＣドメインがＣＤ８６Ｃドメインで置換されおよびＣＤ８０膜貫通領
域がＣＤ８６膜貫通領域で置換されおよびＣＤ８０細胞質尾部領域がＣＤ８６細
胞質尾部領域で置換されたＣＤ８０； ＣＤ８０ＣドメインがＣＤ８６Ｃドメインで置換されおよび細胞質尾部領域が
欠損されたＣＤ８０； ＣＤ８０ＣドメインがＣＤ８６Ｃドメインで置換されおよび細胞質尾部領域が
欠損されおよびＣＤ８０膜貫通領域がＣＤ８６膜貫通領域で置換されたＣＤ８０
； ＣＤ８０ＶドメインがＣＤ８６Ｖドメインで置換されおよびＣＤ８０Ｃドメイ
ンがＣＤ８６Ｃドメインで置換されおよび細胞質尾部領域が欠損されたＣＤ８０
； ＣＤ８０ＶドメインがＣＤ８６Ｖドメインで置換されおよびＣＤ８０Ｃドメイ
ンがＣＤ８６Ｃドメインで置換されおよび膜貫通領域が欠損されたＣＤ８０； ＣＤ８０ＣドメインがＣＤ８６Ｃドメインで置換されおよび膜貫通領域が欠損
されたＣＤ８０； Ｃドメインが欠損されおよび膜貫通領域が欠損されたＣＤ８０； Ｃドメインが欠損されおよびＣＤ８０ＶドメインがＣＤ８６Ｖドメインで置換
されおよび膜貫通領域が欠損されたＣＤ８０； ＣＤ８０ＣドメインがＣＤ８６Ｃドメインで置換されおよび膜貫通領域が欠損
されおよび細胞質尾部領域が欠損されたＣＤ８０； Ｃドメインが欠損されおよび膜貫通領域が欠損されおよび細胞質尾部領域が欠
損されたＣＤ８０；および ＣＤ８０変異ドメインまたはその機能的断片から成る群より選択される。

【００２９】 ＣＤ８０ΔＣ変異体の蛋白質形はワクチンの成分として処方でき、またはＣＤ
８０ΔＣ変異体をコードしているコード配列を含む遺伝子構築物がワクチンの成
分として提供されてもよい。どちらの場合も、そのようなワクチンは予防的また
は治療的方法で使用されるであろう。

【００３０】 本発明のいくつかの好適な態様に従うと、免疫原およびＣＤ８０ΔＣ変異体を
コードしているコード配列を含むＤＮＡ分子を含んでいるＤＮＡワクチンが提供
される。本発明の改良はＤＮＡワクチンの核酸配列によりコードされている抗原
性標的の生成に加えたＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質の共生成のための遺伝子物質を
含んでいることに関している。

【００３１】 本発明は、遺伝子物質によりコードされている蛋白質およびペプチドに対する
免疫応答を誘導するため、個体の細胞内へ遺伝子物質を導入する方法に関してい
る。本方法は標的蛋白質をコードしているヌクレオチド配列およびＣＤ８０ΔＣ
変異体蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含む単一の核酸分子、または
一つは標的蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含み、および一つはＣＤ
８０ΔＣ変異体蛋白質をコードしているヌクレオチド配列の二つの核酸分子を持
っている組成物を該個体の組織へ投与する工程を含んでいる。核酸分子はプラス
ミドＤＮＡ、組換えベクターの核酸分子として、または弱毒化ワクチンに提供さ
れる遺伝子物質の一部として提供される。

【００３２】 本発明に従うと、病原体または異常な疾患関連細胞に対して個体を予防的およ
び／または治療的に免疫する組成物および方法が提供される。遺伝子物質は標的
蛋白質、即ち、標的化されるべき病原体または細胞上に観察される免疫原性蛋白
質と少なくとも一つのエピトープを共有するペプチドまたは蛋白質をコードし、
遺伝子物質はＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質をコードしている。遺伝子物質は個体の
細胞により発現されて免疫原性標的として働き、それに対して免疫応答が惹起さ
れる。生じた免疫応答は標的とされるべき病原体または細胞と反応し、および広
範囲なものである：体液性免疫応答に加え、細胞性免疫応答の両方の系が惹起さ
れる。本発明の方法は予防的および治療的免疫性を与えるために有用である。従
って、免疫化法は病原体攻撃または出現または特異的細胞の増殖から個体を保護
する方法、ならびに病原体感染、過増殖性疾患または自己免疫疾患を患っている
個体を処置する方法の両方を含んでいる。

【００３３】 本明細書で使用される場合、用語”標的蛋白質”および”免疫原”は相互交換
的に使用され、免疫応答の蛋白質標的として働く、遺伝子構築物によりコードさ
れたペプチドおよび蛋白質を示すことを意味している。標的蛋白質はそれに対し
て免疫応答が惹起できる蛋白質である。標的蛋白質は免疫原性蛋白質であり、病
原体、または癌細胞または自己免疫疾患に関与する細胞のような望まれない細胞
型からの蛋白質に含まれる少なくとも一つのエピトープを共有し、それに対する
免疫化が必要とされている。標的蛋白質に向けられた免疫応答は、標的蛋白質が
関与する特定の感染または疾患に対して個体を保護するおよび個体を治療するで
あろう。標的蛋白質は免疫応答が望まれる蛋白質と同一である必要はない。むし
ろ、標的蛋白質は免疫応答が望まれる蛋白質と交差反応する免疫応答を誘導でき
るものでなければならない。

【００３４】 本発明は標的蛋白質に対する広い免疫応答を惹起するのに有用である、即ち、
特に病原体または個体自身の”異常な”細胞に関係する蛋白質。本発明は病原体
蛋白質に対する免疫応答が病原体に対する保護的免疫性を与えるように、病原性
因子および生物体に対して個体を免疫化するのに有用である。本発明は、特に過
増殖性細胞に関連する標的蛋白質に対する免疫応答を惹起することにより、癌の
ような過増殖性疾患および障害と戦うのに有用である。本発明は特に自己免疫状
態に関与する細胞関連の標的蛋白質に対する免疫応答を惹起することにより、自
己免疫疾患および障害と戦うのに有用である。

【００３５】 本発明のいくつかの態様によると、標的蛋白質およびＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白
質をコードしているＤＮＡまたはＲＮＡが個体の組織細胞内へ導入され、そこで
発現され、標的蛋白質およびＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質を生成する。標的蛋白質
およびＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質をコードしているＤＮＡまたはＲＮＡ配列は個
体の細胞中での発現に必要とされる制御要素に各々連結されている。ＤＮＡ発現
のための制御要素にはプロモーターおよびポリアデニル化シグナルが含まれる。
加えて、コザック領域のような他の要素もまた遺伝子構築物に含まれているであ
ろう。好適な態様では、別々の発現可能形として提供される標的蛋白質およびＣ
Ｄ８０ΔＣ変異体蛋白質をコードしているヌクレオチド配列が含まれ、そこで標
的蛋白質およびＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質の各々は個体の細胞中での発現に必要
とされるそれら自身の制御要素の組に連結されている。しかしながら、本発明は
さらに標的蛋白質およびＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質が単一の遺伝子構築物として
提供される態様にも関している。そのような態様において、単一の発現可能形に
より生成されたポリ蛋白質が二つの別々の蛋白質へ処理されるか、または標的蛋
白質およびＣＤ８０ΔＣ変異体の両方として機能するキメラ蛋白質として存在す
るであろう。いくつかの態様において、二つまたはそれ以上標的蛋白質のコピー
および／または二つまたはそれ以上のＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質のコピーをコー
ドしている核酸配列は遺伝子構築物の単一の発現可能形で提供されるであろう。
コードされているポリ蛋白質は発現後にサブユニットへ処理されるかまたは機能
性ポリ蛋白質として維持されるであろう。

【００３６】 本明細書で使用される場合、用語”発現可能形”とは、個体の細胞中に存在す
る場合にコード配列が発現されるであろうように、標的蛋白質および／またはＣ
Ｄ８０ΔＣ変異体蛋白質をコードしているコード配列へ作動可能に連結された必
要制御要素を含んでいる遺伝子構築物を指している。

【００３７】 本明細書で使用される場合、用語”エピトープを共有している”とは、別の蛋
白質のエピトープと同一であるまたは実質的に同じである少なくとも一つのエピ
トープを含む蛋白質を指している。

【００３８】 本明細書で使用される場合、用語”実質的に同じであるエピトープ”とは、蛋
白質のエピトープとは同一の構造を持ってはいないが、それにも関わらず、その
蛋白質と交差反応する細胞性または体液性免疫応答を引き起こすエピトープを指
すことを意味している。

【００３９】 遺伝子構築物は、遺伝子発現に必要とされる制御要素に作動可能なように連結
された標的蛋白質および／またはＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質をコードしているヌ
クレオチド配列を含んでいる。本発明によると、標的蛋白質をコードしているヌ
クレオチド配列の発現可能形から成る遺伝子構築物およびＣＤ８０ΔＣ変異体蛋
白質をコードしているヌクレオチド配列の発現可能形から成る遺伝子構築物を含
む遺伝子構築物の組み合わせが提供される。遺伝子構築物の組み合わせを含むＤ
ＮＡまたはＲＮＡの生きている細胞内への取り込みにより、ＤＮＡまたはＲＮＡ
の発現および標的蛋白質およびＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質の生成が生じる。標的
蛋白質に対する驚くほど促進された免疫応答が生じる。

【００４０】 本発明はウイルス、原核生物および真核生物体（単細胞病原性生物体および多
細胞寄生虫のような）のようなすべての病原体に対して個体を免疫化するために
使用されるであろう。本発明は細胞に感染し、およびウイルスおよび原核生物（
淋菌、リステリアおよび赤痢菌のような）のような被包性でない病原体に対して
個体を免疫化するのに特に有用である。加えて、本発明はまた、それらが細胞内
病原体である生活周期の段階を含む原虫に対して個体を免疫化するのにも有用で
ある。本明細書で使用される場合、用語”細胞内病原体”とはその生殖または生
活周期の少なくとも一部で、宿主細胞内に存在しおよびそこで病原蛋白質を産生
するまたは産生する原因となるウイルスまたは病原性生物体を指すことを意味し
ている。表１は本発明によるワクチンが作製できるいくつかのウイルスファミリ
ーおよび属のリストである。表に掲げた抗原のような病原体抗原上に示されるエ
ピトープと同一かまたは実質的に同じである少なくとも一つのエピトープを含む
ペプチドをコードしているＤＮＡ配列含有ＤＮＡ構築物はワクチンに有用である
。さらに、本発明はまた、原核生物および真核生物を含む他の病原体ならびに表
２に掲げてあるような多細胞寄生虫に対して個体を免疫化するのにも有用である
。

【００４１】 病原体感染に対して保護する遺伝子ワクチンを製造するため、保護的免疫応答
が準備できる免疫原性蛋白質をコードしている遺伝子構成要素は、標的のための
コード配列として遺伝子構築物中に含まれていなければならない。病原体感染が
細胞内（それに対して本発明は特に有用である）であるにせよまたは細胞外であ
るにせよ、すべての病原体抗原が保護的応答を惹起することはありそうもない。
ＤＮＡおよびＲＮＡは両方とも比較的小さくおよび比較的容易に製造できるので
、本発明は多病原体抗原を含むワクチン接種を可能にするさらなる利点を提供す
る。遺伝子ワクチンに使用される遺伝子構築物は多くの病原体抗原をコードして
いる遺伝子構成要素を含むことができる。例えば、数個のウイルス遺伝子を単一
の構築物に含ませてもよく、それにより複数の標的を持つものが提供される。

【００４２】 表１および２は、感染から個体を保護するために遺伝子ワクチンが製造される
いくつかの病原性因子および生物体のリストである。いくつかの好適な態様にお
いて、病原体に対して個体を免疫化する方法はＨＩＶ、ＨＴＬＶまたはＨＢＶに
向けられたものである。

【００４３】 本発明の別の態様は、過増殖性疾患に特徴的である過増殖している細胞に対す
る広範囲な保護的免疫応答を与える方法、および過増殖性疾患を患っている個体
を処置する方法を提供する。本明細書で使用される場合、用語”過増殖性疾患”
とは細胞の過増殖により特徴付けられるような疾患および障害を指していること
を意味している。過増殖性疾患の例にはすべての形の癌および乾癬が含まれる。

【００４４】 免疫原性の”過増殖している細胞”関連蛋白質をコードしているヌクレオチド
配列を含む遺伝子構築物を個体の細胞内へ導入すると、ワクチン接種された個体
の細胞にこれらの蛋白質が産生されることが見いだされている。本明細書で使用
される場合、用語”過増殖性関連蛋白質”とは過増殖性疾患に関連する蛋白質を
指していることを意味している。過増殖性疾患に対して免疫するため、過増殖性
疾患に関連した蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物が
個体に投与される。

【００４５】 過増殖性関連蛋白質が有効な免疫原性標的であるようにするため、それは正常
な細胞と比較して、過増殖性細胞中で独占的にまたは高レベルで産生されるよう
な蛋白質でなければならない。標的抗原にはそのような蛋白質に観察される少な
くとも一つのエピトープを含む蛋白質、それらの断片およびペプチドが含まれる
。いくつかの場合、過増殖性関連蛋白質は蛋白質をコードしている遺伝子の突然
変異による生成物である。突然変異した遺伝子は正常の蛋白質とほとんど同じで
あるが、正常蛋白質では観察されない異なったエピトープを生じるわずかに異な
ったアミノ酸配列を持つ蛋白質をコードしている。そのような標的蛋白質にはｍ ｙｂ 、ｍｙｃ、ｆｙｎのような癌遺伝子、および転座遺伝子ｂｃｒ／ａｂｌ、ｒ ａｓ 、ｓｒｃ、Ｐ５３、ｎｅｕ、ｔｒｋおよびＥＧＲＦによりコードされている
ような蛋白質が含まれる。標的抗原としての癌遺伝子生成物に加え、抗癌処置お
よび保護的計画のための標的蛋白質には、Ｂ細胞リンパ球により作られる抗体の
可変領域およびＴ細胞リンパ球のＴ細胞レセプター可変領域が含まれ、それらは
いくつかの態様において自己免疫疾患のための標的抗原としても使用される。腫
瘍細胞において高レベルで観察される蛋白質（モノクローナル抗体１７−１Ａに
より認識される蛋白質および葉酸結合蛋白質を含む）のような他の腫瘍関連蛋白
質が標的蛋白質として使用できる。

【００４６】 本発明は一つまたはそれ以上の癌のいくつかの形に対して個体を免疫化するた
めに使用されるであろうが、本発明は特定の癌が発現しやすい人または以前に癌
を発病し、従って再発しやすい人のような個体を予防的に免疫化するのに特に有
用である。遺伝学および技術ならびに疫学の発展は、個体における癌発生の可能
性および危険事前評価の決定を可能にしている。遺伝子スクリーニングおよび／
または家族健康履歴を用いて、特定の個人がいくつかの型の癌のどれか一つを発
生する可能性を予測することが可能である。

【００４７】 同様に、すでに癌が発生している、および癌を取り除く処置を受けたまたは寛
解期にある個体は特に再発しやすい。処置計画の一部として、そのような個体は
再発と戦うために、持っていると診断された癌に対して免疫できる。従って、個
体が癌の一つの型を持っていたことがあり、再発の危険性があることが解ったら
、癌の将来の出現と戦う免疫系を準備するために免疫化できる。

【００４８】 本発明は過増殖性疾患を患っている個体を処置する方法を提供する。そのよう
な方法において、遺伝子構築物の導入は、標的蛋白質を産生する過増殖性細胞と
戦うために個体の免疫系を向けさせるおよび促進する免疫療法剤として働く。

【００４９】 本発明は、自己免疫性に関係し、細胞レセプターおよび”自己”指向性抗体を
産生する細胞を含んだ標的に対して広範囲な保護的免疫応答を与えることにより
、自己免疫疾患および障害を患っている個体を処置するための方法を提供する。

【００５０】 Ｔ細胞仲介自己免疫疾患にはリウマチ様関節炎（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ
）、シェーグレン症候群、サルコイドーシス、インシュリン依存性糖尿病（ＩＤ
ＤＭ）、自己免疫性甲状腺炎、反応性関節炎、強直性脊椎炎、強皮症、多発性筋
炎、皮膚筋炎、乾癬、脈管炎、ヴェグナー肉芽腫症、クローン病および潰瘍性大
腸炎が含まれる。これらの疾患の各々は、内因性抗原に結合し、自己免疫疾患に
関連した炎症性カスケードを開始させるＴ細胞レセプターにより特徴付けられる
。Ｔ細胞の可変領域に対するワクチン接種はＣＴＬが関与する免疫応答を惹起し
、これらのＴ細胞を除去する。

【００５１】 ＲＡにおいて、この疾患に関与するＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のいくつかの
特異的可変領域が同定されている。これらのＴＣＲにはＶβ−３、Ｖβ−１４、
Ｖβ−１７、およびＶα−１７が含まれる。従って、これらの蛋白質の少なくと
も一つをコードしているＤＮＡ構築物でのワクチン接種はＲＡに関与するＴ細胞
を標的とするであろう免疫応答を惹起するであろう。Ｈｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｄ．ｅ
ｔ ａｌ．，１９９１ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８
：１０９２１−１０９２５；Ｐａｌｉａｒｄ，Ｘ．，ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：３２５−３２９；Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｗ．Ｖ．，ｅｔ
ａｌ．，１９９２ Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０：３２６−３３３（こ
れらの各々は本明細書において援用される）を参照されたい。

【００５２】 ＭＳにおいて、この疾患に関与する抗体のいくつかの特異的可変領域が同定さ
れている。これらのＴＣＲにはＶβ−７、およびＶα−１０が含まれる。従って
、これらの蛋白質の少なくとも一つをコードしているＤＮＡ構築物でのワクチン
接種はＭＳに関与するＴ細胞を標的とするであろう免疫応答を惹起するであろう
。Ｗｕｃｈｅｒｐｆｅｎｎｉｇ，Ｋ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，１９９０ Ｓｃｉｅ ｎｃｅ ２４８：１０１６−１０１９；Ｏｋｓｅｎｂｅｒｇ，Ｊ．Ｒ．，ｅｔ
ａｌ．，１９９０ Ｎａｔｕｒｅ ３４５：３４４−３４６（これらの各々は本
明細書において援用される）を参照されたい。

【００５３】 強皮症において、この疾患に関与するＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のいくつか
の特異的可変領域が同定されている。これらのＴＣＲにはＶβ−６、Ｖβ−８、
Ｖβ−１４、およびＶα−１６、Ｖα−３Ｃ、Ｖα−７、Ｖα−１４、Ｖα−１
５、Ｖα−１６、Ｖα−２８、およびＶα−１２が含まれる。従って、これらの
蛋白質の少なくとも一つをコードしているＤＮＡ構築物でのワクチン接種は強皮
症に関与するＴ細胞を標的とするであろう免疫応答を惹起するであろう。

【００５４】 Ｔ細胞仲介自己免疫疾患を患っている患者を処置するためには（特にＴＣＲの
可変領域がまだ同定されていない場合）、滑液生検が実施できる。存在するＴ細
胞の試料を取り出すことができ、それらのＴＣＲの可変領域が標準法を使用して
同定される。遺伝子ワクチンはこの情報を用いて製造できる。

【００５５】 Ｂ細胞仲介自己免疫疾患には狼蒼（ＳＬＥ）、グレーブス病、重症筋無力症、
自己免疫性血小板減少症、喘息、クリオグロブリン血症、原発性胆汁性硬化症、
および悪性貧血が含まれる。これらの疾患の各々は、内因性抗原に結合し、自己
免疫疾患に関連した炎症性カスケードを開始させる抗体により特徴付けられる。
抗体の可変領域に対するワクチン接種はＣＴＬが関与する免疫応答を惹起し、こ
の抗体を産生するＢ細胞を除去する。

【００５６】 Ｂ細胞仲介自己免疫疾患を患っている患者を処置するためには、自己免疫活性
に関与する抗体の可変領域を同定しなければならない。生検が実施でき、炎症部
位に存在する抗体の試料を取り出すことができる。抗体の可変領域が標準法を使
用して同定できる。遺伝子ワクチンはこの情報を用いて製造できる。

【００５７】 ＳＬＥの場合、一つの抗原がＤＮＡであると信じられている。従ってＳＬＥに
対して免疫化されるべき患者においては、血清を抗ＤＮＡ抗体でスクリーニング
し、血清中に観察されたそのような抗ＤＮＡ抗体の可変領域をコードしているＤ
ＮＡ構築物を含むワクチンが製造できる。

【００５８】 ＴＣＲおよび抗体両方の可変領域間に共通の構造的特色はよく知られている。
特定のＴＣＲまたは抗体をコードしているＤＮＡ配列は一般的にＫａｂａｔ，ｅ
ｔ ａｌ．，１９８７ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉ ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｂｅｔｈｅｓ
ｄａ ＭＤ（本明細書において援用される）に説明されているようなよく知られ
た方法に従って見い出すことができる。加えて、抗体からの機能的可変領域クロ
ーニングの一般法はＣｈａｕｄｈａｒｙ，Ｖ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，１９９０ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：１０６６（本明細書に
おいて援用される）に見ることができる。

【００５９】 本発明は、ワクチン組成物（ＤＮＡワクチン、弱毒化生ワクチンおよび組換え
体ワクチンを含む）の一部として個体の細胞へ遺伝子構築物を送達する工程から
成る、個体を免疫化する改良された方法を提供する。遺伝子構築物は免疫調節蛋
白質をコードしおよびそれが発現を達成するためにワクチン中で機能できる制御
配列へ作動可能なように連結されているヌクレオチド配列から成っている。改良
されたワクチンは高められた細胞性免疫応答を生じる。

【００６０】 免疫化のいくつかの方法において、免疫原をコードしている遺伝子構築物およ
びＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質をコードしている遺伝子構築物が個体に投与される
。免疫化のいくつかの方法において、免疫原およびＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質の
両方をコードしている遺伝子構築物が個体に投与される。免疫化のいくつかの別
の方法において、免疫原およびＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質が個体に投与される。
免疫化のいくつかの別の方法において、蛋白質免疫原およびＣＤ８０ΔＣ変異体
蛋白質をコードしている遺伝子構築物が個体に投与される。免疫化のいくつかの
方法において、免疫原およびＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質をコードしている遺伝子
構築物が個体に投与される。

【００６１】 本発明の別の態様に従うと、自己免疫疾患および移植拒絶に関連する免疫応答
を抑制するためにＣＤ８０Ｃ領域蛋白質が提供される。ＣＤ８０Ｃ領域蛋白質は
機能性ＣＤ８０Ｃ領域を含んでいる。ＣＤ８０Ｃ領域の機能性断片はルーチン的
に同定できる。いくつかの態様において、ＣＤ８０Ｃ領域の機能性断片は６０ア
ミノ酸未満である。いくつかの態様において、ＣＤ８０Ｃ領域の機能性断片は５
０アミノ酸未満である。いくつかの態様において、ＣＤ８０Ｃ領域の機能性断片
は４０アミノ酸未満である。いくつかの態様において、ＣＤ８０Ｃ領域の機能性
断片は３０アミノ酸未満である。いくつかの態様において、ＣＤ８０Ｃ領域の機
能性断片は２０アミノ酸未満である。いくつかの態様において、ＣＤ８０Ｃ領域
の機能性断片は１５アミノ酸未満である。いくつかの態様において、ＣＤ８０Ｃ
領域の機能性断片は１０アミノ酸未満である。

【００６２】 いくつかの態様において、Ｖ領域が欠損されている。いくつかの態様において
、ＣＤ８０またはＣＤ８６Ｖ領域が存在している。いくつかの態様はＣＤ８６膜
貫通領域を含んでいる。いくつかの態様において、ＣＤ８０膜貫通領域は欠損さ
れており、他の配列で置換されていない。いくつかの態様は非ＣＤ８０、非ＣＤ
８６配列を含んでいる。いくつかの態様はＣＤ８０ｔｍの代わりに非ＣＤ８０、
非ＣＤ８６配列を含んでいる。いくつかの態様はＣＤ８０細胞質尾部配列を含ん
でいる。いくつかの態様はＣＤ８６細胞質尾部配列を含んでいる。いくつかの態
様において、ＣＤ８０細胞質尾部領域は欠損されており、他の配列で置換されて
いない。いくつかの態様はＣＤ８０ｃｔの代わりに非ＣＤ８０、非ＣＤ８６配列
を含んでいる。

【００６３】 いくつかの態様に従うと、非ＣＤ８０蛋白質は少なくともＣＤ８０のＣドメイ
ンまたはその機能的断片を含んでいる。本明細書で使用される場合、用語非ＣＤ
８０蛋白質とは野生型とは異なっているが、ＣＤ８０のＣドメインまたはその機
能的断片を含んでいる蛋白質を指すことを意味している。いくつかの態様におい
て、非ＣＤ８０蛋白質は次の式を持っている： Ｒ¹−Ｒ²−Ｒ³−Ｒ⁴−Ｒ⁵−Ｒ⁶−Ｒ⁷−Ｒ⁸−Ｒ⁹ 式中 Ｒ¹は０−５０アミノ酸であり； Ｒ²は８０Ｖまたは８６Ｖであり； Ｒ³は０−５０アミノ酸であり； Ｒ⁴は８０Ｃであり； Ｒ⁵は０−５０アミノ酸であり； Ｒ⁶は８０ｔｍまたは８６ｔｍであり； Ｒ⁷は０−５０アミノ酸であり； Ｒ⁸は８０ｃｔまたは８６ｃｔであり；および Ｒ⁹は０−５０アミノ酸であり ここで ８０ＶはＣＤ８０の変異ドメインまたはその機能的断片であり； ８６ＶはＣＤ８６の変異ドメインまたはその機能的断片であり； ８０ＣはＣＤ８０のＣドメインまたはその機能的断片であり； ８０ｔｍはＣＤ８０の膜貫通領域またはその機能的断片であり； ８６ｔｍはＣＤ８６の膜貫通領域またはその機能的断片であり； ８０ｃｔはＣＤ８０の細胞質尾部またはその機能的断片であり；および ８６ｃｔはＣＤ８６の細胞質尾部またはその機能的断片である。

【００６４】 本発明のいくつかの態様に従うと、少なくとも一つのＣＤ８０のＣ領域を含む
単離された非ＣＤ８０蛋白質は： Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ； Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ；および Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ； から成る群より選択される式を持っており、 ここで ８０ＶはＣＤ８０の変異ドメインまたはその機能的断片であり； ８６ＶはＣＤ８６の変異ドメインまたはその機能的断片であり； ８０ＣはＣＤ８０のＣドメインまたはその機能的断片であり； ８０ｔｍはＣＤ８０の膜貫通領域またはその機能的断片であり； ８６ｔｍはＣＤ８６の膜貫通領域またはその機能的断片であり； ８０ｃｔはＣＤ８０の細胞質尾部またはその機能的断片であり； ８６ｃｔはＣＤ８６の細胞質尾部またはその機能的断片であり； ｄｅｌｅは０アミノ酸であり；および 各々のＲは独立して０−１００アミノ酸である。 いくつかの態様において、各々のＲは独立して０−５０アミノ酸であり；いくつ
かの態様において、各々のＲは独立して０−３０アミノ酸であり；いくつかの態
様において、各々のＲは独立して０−２０アミノ酸である。

【００６５】 本発明のいくつかの態様において、非ＣＤ８０蛋白質は： 変異ドメインが欠損されたＣＤ８０変異体； 変異ドメインが欠損されおよび細胞質尾部が欠損されたＣＤ８０変異体； 細胞質尾部が欠損されたＣＤ８０変異体； 膜貫通領域が欠損されおよび細胞質尾部が欠損されたＣＤ８０変異体； ＣＤ８０変異ドメインの代わりにＣＤ８６変異ドメインが置換されたＣＤ８０
変異体； ＣＤ８０変異ドメインの代わりにＣＤ８６変異ドメインが置換されおよび細胞
質尾部が欠損されたＣＤ８０変異体； ＣＤ８０変異ドメインの代わりにＣＤ８６変異ドメインが置換されおよび膜貫
通領域が欠損されおよび細胞質尾部が欠損されたＣＤ８０変異体； ＣＤ８０膜貫通領域の代わりにＣＤ８６膜貫通領域が置換されたＣＤ８０変異
体； 変異ドメインが欠損されおよびＣＤ８０膜貫通領域の代わりにＣＤ８６膜貫通
領域が置換されたＣＤ８０変異体； ＣＤ８０変異ドメインが欠損され、細胞質尾部が欠損されおよびＣＤ８０膜貫
通領域の代わりにＣＤ８６膜貫通領域が置換されたＣＤ８０変異体； 細胞質尾部が欠損されおよびＣＤ８０膜貫通領域の代わりにＣＤ８６膜貫通領
域が置換されたＣＤ８０変異体； ＣＤ８０細胞質尾部の代わりにＣＤ８６細胞質尾部が置換されたＣＤ８０変異
体； 変異ドメインが欠損されおよびＣＤ８０細胞質尾部の代わりにＣＤ８６細胞質
尾部が置換されたＣＤ８０変異体； ＣＤ８０変異ドメインの代わりにＣＤ８６変異ドメインが置換されおよびＣＤ
８０膜貫通領域の代わりにＣＤ８６膜貫通領域が置換されたＣＤ８０変異体； ＣＤ８０変異ドメインの代わりにＣＤ８６変異ドメインが置換されおよびＣＤ
８０細胞質尾部の代わりにＣＤ８６細胞質尾部が置換されたＣＤ８０変異体； ＣＤ８０変異ドメインの代わりにＣＤ８６変異ドメインが置換されおよびＣＤ
８０膜貫通領域の代わりにＣＤ８６膜貫通領域が置換されおよび細胞質尾部が欠
損されたＣＤ８０変異体； 変異ドメインが欠損されおよびＣＤ８０細胞質尾部の代わりにＣＤ８６細胞質
尾部が置換されおよびＣＤ８０細胞質尾部の代わりにＣＤ８６細胞質尾部が置換
されたＣＤ８０変異体；および ＣＤ８０変異ドメインの代わりにＣＤ８６変異ドメインが置換されおよびＣＤ
８０細胞質尾部の代わりにＣＤ８６細胞質尾部が置換されおよびＣＤ８０細胞質
尾部の代わりにＣＤ８６細胞質尾部が置換されたＣＤ８０変異体； から成る群より選択される。

【００６６】 ＣＤ８０Ｃ領域蛋白質は蛋白質かまたはＣＤ８０Ｃ領域をコードしている遺伝
子構築物として提供される。野生型ＣＤ８０、ｄｅｌｅ／８０Ｃ／８０ｔｍ／８
０ｃｔ、ｄｅｌｅ／８０Ｃ／８０ｔｍ／８６ｃｔ、ｄｅｌｅ／８０Ｃ／８６ｔｍ
／８０ｃｔまたはｄｅｌｅ／８０Ｃ／８６ｔｍ／８６ｃｔをコードしているコー
ド配列を含む遺伝子構築物の送達は免疫抑制および自己免疫疾患の処置に特に有
益な結果を提供する。

【００６７】 本発明のこの態様の方法は自己免疫疾患および障害を処置するのに有用である
。当業者は自己免疫疾患および障害を持つ個体を同定できる。自己免疫疾患およ
び障害の例にはリウマチ様関節炎（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、シェーグレ
ン症候群、サルコイドーシス、インシュリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、自己免
疫性甲状腺炎、反応性関節炎、強直性脊椎炎、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、
乾癬、脈管炎、ヴェグナー肉芽腫症、クローン病および潰瘍性大腸炎のようなＴ
細胞仲介自己免疫疾患、および狼蒼（ＳＬＥ）、グレーブス病、重症筋無力症、
自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、喘息、クリオグロブリン血症
、原発性胆汁性硬化症、および悪性貧血のようなＢ細胞仲介自己免疫疾患が含ま
れる。

【００６８】 本発明のこの態様の方法はまた、骨髄および脳細胞移植片のような細胞移植、
角膜および皮膚移植片のような組織移植および筋形成術および肝臓、肺、腎臓お
よび心臓のような器官移植を含む移植法を受けている個体において免疫応答を抑
制するためにも有用である。

【００６９】 本発明の組成物を作製および送達する方法は一般的に免疫化プロトコールなら
びに非免疫治療プロトコールと同一である。 本明細書において使用する場合、用語”蛋白質”はペプチド、ポリペプチドお
よび蛋白質を含んだ蛋白様分子を含んでいる。本発明のいくつかの態様は核酸、
特にＤＮＡの投与による蛋白質の送達、その使用法に関している。例えば、免疫
化のいくつかの方法において、免疫原性蛋白質およびＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質
をコードしている核酸が個体に投与される。同様に、自己免疫疾患を処置するお
よび免疫抑制により移植片／移植臓器拒絶を防止するいくつかの方法において、
ＣＤ８０Ｃ領域をコードしている核酸が個体に投与される。本明細書において使
用する場合、用語”本発明の遺伝子構築物”とは、免疫原性蛋白質、ＣＤ８０Δ
Ｃ変異体蛋白質およびＣＤ８０Ｃ領域蛋白質をコードするコード配列を含む遺伝
子構築物を意味することが意図されており、それらは各々類似の手段で生成でき
およびそれらは本発明の方法で使用するために類似の方法で処方および投与でき
る。

【００７０】 ＤＮＡワクチンは米国特許第５，５９３，９７２号、米国特許第５，５８９，
４６６号、ＰＣＴ／ＵＳ９０／０１５１５、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０２３３８、Ｐ
ＣＴ／ＵＳ９３／０４８１３１、ＰＣＴ／ＵＳ９４／００８９９（これらは本明
細書において援用される）に記載されている。これらの出願に記載されている送
達プロトコールに加え、ＤＮＡを送達する別の方法が米国特許第４，９４５，０
５０および５，０３６，００６号（これらは本明細書において援用される）に記
載されている。ＤＮＡワクチンプロトコールは個体を免疫するために有用である
。これらの教えは本発明の態様に応用でき、自己免疫疾患および臓器移植拒絶を
持つ個体がＣＤ８０Ｃ領域蛋白質をコードしている遺伝子構築物を使用して処置
される。そのような態様において、免疫原をコードしているコード配列は提供さ
れない。

【００７１】 細胞により取り込まれた場合、遺伝子構築物は機能的染色体外分子として残存
し、および／または細胞の染色体ＤＮＡへ組み込まれる。ＤＮＡは細胞内へ導入
され、プラスミド形の別の遺伝子成分として残っているであろう。もしくは、染
色体内へ組み込むことができる直鎖状ＤＮＡが細胞内へ導入されてもよい。ＤＮ
Ａが細胞内へ導入された時、染色体内へのＤＮＡ組込みを促進する試薬が加えら
れる。組込みを促進するために有用なＤＮＡ配列はＤＮＡ分子に含まれていても
よい。もしくは、ＲＮＡが細胞に投与されてもよい。遺伝子構築物は動原体、テ
ロメアおよび複製起点を含んでいる線状ミニクロモソームとして提供されること
も意図されている。

【００７２】 本発明の遺伝子構築物は核酸分子の遺伝子発現に必要な制御要素を含んでいる
。その要素には：プロモーター、開始コドン、停止コドンおよびポリアデニル化
シグナルが含まれる。加えて、本発明の蛋白質をコードしている配列の遺伝子発
現にエンハンサーがしばしば必要とされる。これらの要素は所望の蛋白質をコー
ドしている配列へ作動可能なように連結されていること、および制御要素はそれ
らが投与された個体で作動可能であることが必要である。

【００７３】 開始コドンおよび停止コドンは一般的に所望の蛋白質をコードしているヌクレ
オチド配列の一部であると考えられている。しかしながら、これらの要素は遺伝
子構築物が投与された個体中で機能的であることが必要である。開始および停止
コドンはコード配列の読み枠内に存在しなければならない。

【００７４】 使用されるプロモーターおよびポリアデニル化シグナルは個体の細胞内で機能
的でなければならない。 本発明の実施に有用なプロモーターの例としては（特にヒトに対する遺伝子ワ
クチンの製造において）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、マウス乳腺腫瘍
ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）（ＨＩＶ
長い末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーターのような）、モロニーウイルス、ＡＬ
Ｖ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（ＣＭＶ前初期プロモーター、エプスタイ
ンバーウイルス（ＥＢＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）からのプロモーター
類、ならびにヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレア
チンおよびヒトメタロチオネインのようなヒト遺伝子からのプロモーター類が挙
げられるが、これらに制限されるわけではない。

【００７５】 本発明の実施に有用なポリアデニル化シグナルの例としては（特にヒトに対す
る遺伝子ワクチンの製造において）、ウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル
、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルおよびＬＴＲポリアデニル化シグナルが挙げ
られるが、これらに制限されるわけではない。特に、ｐＣＥＰ４プラスミド中に
存在するＳＶ４０ポリアデニル化シグナル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄ
ｉｅｇｏ，ＣＡ、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルと称される）が使用される。

【００７６】 ＤＮＡ発現に必要とされる制御要素に加え、他の要素もＤＮＡ分子に含まれて
いるであろう。そのような追加の要素にはエンハンサーが含まれる。エンハンサ
ーは：ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチンお
よびＣＭＶ、ＲＳＶおよびＥＢＶからのエンハンサーのようなウイルスエンハン
サーから成る群より選択されるであろうが、それらに制限されるわけではない。

【００７７】 遺伝子構築物を染色体外に維持するためおよび細胞中で構築物の多数のコピー
を生成するために、本発明の遺伝子構築物は哺乳類複製起点とともに提供できる
。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）からのプラスミドｐＣＥ
Ｐ４およびｐＲＥＰ４はエプスタインバーウイルス複製起点および組込みなしで
高コピーエピソーム複製を生み出す核抗原ＥＢＮＡ−１コード領域を含んでいる
。

【００７８】 免疫化応用に関するいくつかの好適な態様において、標的蛋白質、ＣＤ８０Δ
Ｃ変異体蛋白質、およびそのうえにそのような標的蛋白質に対する免疫応答をさ
らに促進する蛋白質のための遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含んで
いる核酸分子が送達される。そのような遺伝子の例はα−インターフェロン、ガ
ンマ−インターフェロン、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦ、上皮成長
因子（ＥＧＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−
１０およびＩＬ−１２のような他のサイトカインおよびリンホカインをコードし
ているものである。

【００７９】 蛋白質産生を最大にするため、構築物が投与される細胞内での遺伝子発現に適
した制御配列が選択される。さらに、細胞内で最も効率的に転写されるコドンが
選択されるであろう。当業者は細胞内で機能的であるＤＮＡ構築物を製造できる
。

【００８０】 免疫化法にせよまたは免疫抑制法にせよ、本発明の方法は個体の組織に核酸分
子を投与する工程を含んでいる、いくつかの好適な態様において、核酸分子は筋
肉内、鼻腔内、腹腔内、皮下、経皮、静脈内、肺組織へのエアロゾル投与または
局所的に、または膣、直腸、尿管、口腔および舌下組織から成る群より選択され
る粘膜組織への潅注により投与される。

【００８１】 本発明の一つの態様は本発明の方法に有用な医薬組成物に関している。医薬組
成物は核酸分子、好適には個体の細胞においての発現に必要とされる制御要素に
作動可能なように連結されている一つまたはそれ以上の蛋白質をコードしている
ヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含んでいる。医薬組成物はさらに医薬とし
て受容可能な担体または賦形剤を含んでいる。用語”医薬として”とは当業者に
はよく知られおよび広く理解されている。本明細書において使用する場合、用語
”医薬組成物”および”注射可能医薬組成物”とは当業者に理解されているよう
な通常の意味を持っている。医薬組成物は無菌性、発熱物質、特定の問題ならび
に等張性およびｐＨに関して特別の標準に適合していることが必要とされる。例
えば、注射可能医薬は無菌で発熱物質を含んでいない。

【００８２】 本発明に従った医薬組成物は約１ｎｇから約１０，０００μｇのＤＮＡを含ん
でいる。いくつかの好適な態様において、医薬組成物は約２０００μｇ、３００
０μｇ、４０００μｇまたは５０００μｇのＤＮＡを含んでいる。いくつかの好
適な態様において、医薬組成物は約１０００μｇのＤＮＡを含んでいる。いくつ
かの好適な態様において、医薬組成物は約１０ｎｇから約８００μｇのＤＮＡを
含んでいる。いくつかの好適な態様において、医薬組成物は約０．１から約５０
０μｇのＤＮＡを含んでいる。いくつかの好適な態様において、医薬組成物は約
１から約３５０μｇのＤＮＡを含んでいる。いくつかの好適な態様において、医
薬組成物は約２５から約２５０μｇのＤＮＡを含んでいる。いくつかの好適な態
様において、医薬組成物は約１００μｇのＤＮＡを含んでいる。

【００８３】 本発明の遺伝子構築物を含む本発明に従った医薬組成物は使用されるべき投与
様式に従って処方される。当業者は遺伝子構築物を含むワクチンまたは非免疫原
性治療薬を容易に処方できる。筋肉内注射が投与様式として選択されて場合、等
張処方が好適には使用される。一般に、等張性のための添加物には塩化ナトリウ
ム、デキストロース、マンニトール、ソルビトールおよびラクトースが使用でき
る。いくつかの場合、リン酸緩衝液のような等張溶液が好適である。安定化剤に
はゼラチンおよびアルブミンが含まれる。いくつかの態様において、処方に血管
収縮剤が添加される。本発明に従った医薬製剤は無菌で発熱物質を含まないよう
に提供される。本発明に従った医薬組成物は核酸分子と組み合わされた送達成分
を含んでおり、さらに例えば、食塩水のような医薬として受容可能な担体または
賦形剤を含んでいる。核酸の送達を成功させることを可能にする任意の媒質が使
用できるであろう。当業者は本発明に使用されるであろう多数の医薬として受容
可能な媒質を容易に理解するであろう。適した医薬担体はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ，Ａ．Ｏｓｏｌ（本分野の
標準参考書、本明細書において援用される）に記載されている。

【００８４】 いくつかの態様において、核酸分子は促進剤の投与と連結して細胞へ送達され
る。促進剤はまたポリヌクレオチド機能促進剤または遺伝子ワクチン促進剤とも
称される。促進剤は１９９８年１１月３日に公開された米国特許第５，８３０，
８７６号、１９９７年１月１４日に公開された米国特許第５，５９３，９７２号
および１９９４年１月２６日に出願された国際出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ９４／０
０８９９号（これらは各々が本明細書において援用される）に説明されている。
加えて、促進剤は１９９８年４月１４日に公開された米国特許第５，７３９，１
１８号、１９９８年１１月１７日に公開された米国特許第５，８３７，５３３号
、１９９５年９月２８日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９５／１２５０２および１９
９５年３月３０日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９５／０４０７１（これらは各々が
本明細書において援用される）に説明されている。核酸分子とともに投与される
促進剤は核酸分子との混合物として投与されるか、または核酸分子と同時に、投
与前にまたは投与後に別々に投与される。さらに、トランスフェクト剤および／
または複製剤および／または催炎物質として機能するであろう、および促進剤と
ともに（または無しで）共投与されるであろう他の物質にはα−インターフェロ
ン、ガンマ−インターフェロン、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦ、上
皮増殖因子（ＥＧＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、
ＩＬ−１０およびＩＬ−１２のような成長因子、サイトカインおよびリンホカイ
ンが含まれ、ならびに線維芽細胞成長因子、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）の
ような表面活性剤、フロイント不完全アジュバント、モノホスホリル脂質Ａ（Ｍ
ＰＬ）を含むＬＰＳ類似体、ムラミールペプチド、キノン類似体およびスクアレ
ンおよびスクアレンのようなベシクル、およびヒアルロン酸が含まれる。免疫化
の方法に関連する態様において、好適には免疫応答を促進する補助薬剤が選択さ
れる。免疫抑制法に関連する態様においては、免疫応答を促進しない補助薬剤が
選択される。

【００８５】 いくつかの好適な態様において、本発明の遺伝子構築物は、局所麻酔剤の仲間
のような安息香酸エステル、アニリド、アミジン、ウレタンおよびそれらの塩酸
塩から成る群より選択された促進剤とともに処方されるかまたは一緒に投与され
る。

【００８６】 いくつかの好適な態様の促進剤は以下の式の一つを持っているであろう： Ａｒ−Ｒ¹−Ｏ−Ｒ²−Ｒ³ または Ａｒ−Ｎ−Ｒ¹−Ｒ²−Ｒ³ または Ｒ⁴−Ｎ−Ｒ⁵−Ｒ⁶ または Ｒ⁴−Ｏ−Ｒ¹−Ｒ⁷ 式中： Ａｒはベンゼン、ｐ−アミノベンゼン、ｍ−アミノベンゼン、ｏ−アミノベン
ゼン、置換ベンゼン、置換ｐ−アミノベンゼン、置換ｍ−アミノベンゼン、置換
ｏ−アミノベンゼン、ここでアミノベンゼン化合物中のアミノ基はアミノ、Ｃ₁
−Ｃ₅アルキルアミン、Ｃ₁−Ｃ₅，Ｃ₁−Ｃ₅ジアルキルアミンであり得、置換化
合物中の置換基はハロゲン、Ｃ₁−Ｃ₅アルキルおよびＣ₁−Ｃ₅アルコキシであり
； Ｒ¹はＣ＝Ｏであり； Ｒ²は分岐鎖アルキルを含むＣ₁−Ｃ₁₀アルキルであり； Ｒ³は水素、アミン、Ｃ₁−Ｃ₅アルキルアミン、Ｃ₁−Ｃ₅，Ｃ₁−Ｃ₅ジアルキ
ルアミンであり； Ｒ²＋Ｒ³は環式アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル置換環式アルキル、環式脂肪族
アミン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル置換環式脂肪族アミン、複素環、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル
Ｎ−置換複素環を含むＣ₁−Ｃ₁₀アルキル置換複素環を形成できる； Ｒ⁴はＡｒ、Ｒ²またはＣ₁−Ｃ₅アルコキシ、環式アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキ
ル置換環式アルキル、環式脂肪族アミン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル置換環式脂肪族ア
ミン、複素環、およびＣ₁−Ｃ₁₀アルキルＮ−置換複素環を含むＣ₁−Ｃ₁₀アルキ
ル置換複素環およびＣ₁−Ｃ₁₀アルコキシ置換複素環であり； Ｒ⁵はＣ＝ＮＨであり； Ｒ⁶はＡｒ、Ｒ²またはＣ₁−Ｃ₅アルコキシ、環式アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキ
ル置換環式アルキル、環式脂肪族アミン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル置換環式脂肪族ア
ミン、複素環、およびＣ₁−Ｃ₁₀アルキルＮ−置換複素環を含むＣ₁−Ｃ₁₀アルキ
ル置換複素環およびＣ₁−Ｃ₁₀アルコキシ置換複素環であり；および Ｒ⁷はＡｒ、Ｒ²またはＣ₁−Ｃ₅アルコキシ、環式アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキ
ル置換環式アルキル、環式脂肪族アミン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル置換環式脂肪族ア
ミン、複素環、およびＣ₁−Ｃ₁₀アルキルＮ−置換複素環を含むＣ₁−Ｃ₁₀アルキ
ル置換複素環およびＣ₁−Ｃ₁₀アルコキシ置換複素環である。

【００８７】 エステルの例には：ピペロカイン、メプリルカインおよびイソブカインのよう
な安息香酸エステル；プロカイン、テトラカイン、ブテタミンｐロポキシカイン
およびクロロプロカインのようなパラ−アミノ安息香酸エステル；メタブタミン
およびｐリマカインを含むメタ−アミノ安息香酸エステル；およびパレトキシカ
インのようなパラ−エトキシ安息香酸エステルが含まれる。アニリドの例にはリ
ドカイン、エチドカイン、メピバカイン、ブピバカイン、ピロカインおよびプリ
ロカインが含まれる。そのような化合物のその他の例にはジブカイン、ベンゾカ
イン、ジクロニン、プラモキシン、プロパラカイン、ブタカイン、ベノキシナー
ト、カルボカイン、メチルブピバカイン、ブタシンピクラート、フェナカイン、
ジオタン、ルクカイン、イントラカイン、ヌペルカイン、メタブトキシカイン、
ピリドカイン、ビフェナミンおよびコカイン、シンナモイルコカイン、トルキシ
リンおよびコカエチレン、および塩酸と複合体形成したすべてのそのような化合
物が含まれる。

【００８８】 好適な態様において、促進剤はブピバカインである。ブピバカインとメピバカ
イン間の相違はブピバカインはメピバカインのＮ−メチル基の代わりにＮ−ブチ
ル基を持っていることである。化合物はＮにＣ₁−Ｃ₁₀を持っているであろう。
化合物はプロカインおよびクロロプロカインのようにハロゲンで置換されていて
もよい。アニリドが好適である。

【００８９】 促進剤は遺伝子構築物に先立って、同時にまたは後に投与される。促進剤およ
び遺伝子構築物は同一の組成物に処方されてもよい。 ブピバカイン−ＨＣｌは化学的には２−ピペリジンカルボキサミド、１−ブチ
ル−Ｎ−（２，６−ジメチルフェニル）一塩酸塩、一水和物と称され、Ａｓｔｒ
ａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｉｎｃ．（Ｗｅｓｔｂ
ｏｒｏ，Ｍａｓｓ．）およびＳａｎｏｆｉ Ｗｉｎｔｈｒｏｐ Ｐｈａｒｍａｃ
ｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．）を含む多くの発売元から医薬
使用のために広く商業的に入手可能である。ブピバカインの市販品はメチルパラ
ビンとおよび無しで、およびエピネフリンとおよび無しで処方されている。任意
のそのような処方が使用されるであろう。本発明で使用されるであろう０．２５
％、０．５％および０．７５％の濃度で医薬での使用のために商業的に入手可能
である。必要ならば所望の効果を惹起する別の濃度（特に０．０５％−１．０％
間のもの）が調製される。本発明に従うと、約２５０μｇから約１０ｍｇのブピ
バカインが投与される。いくつかの態様において、約２５０μｇから約７．５ｍ
ｇが投与される。いくつかの態様において、約０．０５ｍｇから約５．０ｍｇが
投与される。いくつかの態様において、約０．５ｍｇから約３．０ｍｇが投与さ
れる。いくつかの態様において、約５から５０μｇが投与される。例えば、いく
つかの態様において、約５０μｌから約２ｍｌ、好適には５０μｌから約１５０
０μｌおよびより好適には等張医薬担体中、０．２５−０．５％ブピバカイン−
ＨＣｌおよび０．１％メチルパラビンの約１ｍｌがワクチンが投与される前に、
同時にまたは後にワクチンと同一部位に投与される。同様に。いくつかの態様に
おいて、等張医薬担体中、５０μｌから約２ｍｌ、好適には５０μｌから約１５
００μｌおよびより好適には０．２５−０．５％ブピバカイン−ＨＣｌの約１ｍ
ｌがワクチンが投与される前に、同時にまたは後にワクチンと同一部位に投与さ
れる。ブピバカインおよび任意の他の同様に作用する化合物（特に、局所麻酔薬
のファミリーに関連する化合物）は、細胞による遺伝子構築物の取り込みの望ま
れる容易さを提供する濃度で投与されるであろう。

【００９０】 本発明のいくつかの態様において、個体には遺伝子構築物の投与に先立って最
初に促進剤注射が行われる。即ち、例えば、遺伝子構築物の投与約１週間から１
０日前までに、個体に最初に促進剤が注射される。いくつかの態様において、遺
伝子構築物の投与の１から５日（いくつかの態様においては２４時間）前または
後に促進剤が注射される。もしくは、少しでも使用されるならば、促進剤は遺伝
構築物の投与と同時に、数分前または後に投与される。従って、促進剤および遺
伝子構築物を合わせて単一の医薬組成物を形成させてもよい。

【００９１】 いくつかの態様において、促進剤の投与と関連して遺伝子構築物が投与されな
い投与プロトコールを使用して、促進剤を含まない処方で、遺伝子構築物が促進
剤なしで投与される。

【００９２】 免疫化に関するいくつかの態様において、本発明の遺伝子構築物は弱毒化され
た生きている微生物または組換え微生物ベクター中に遺伝子物質の一部として保
持されるであろう。遺伝子ワクチンを改良するため、ＣＤ８０ＣＤ８０ΔＣ変異
体蛋白質コード配列の発現可能形を使用するのに加え、本発明は抗原をコードし
ている外来遺伝子を送達するために組換えベクターを使用する弱毒化生ワクチン
および改良されたワクチンに関している。外来抗原を送達するために弱毒化生ワ
クチンおよび組換え体ベクターを使用するワクチンの例は米国特許第４，７７２
，８４８；５，０１７，４８７；５，０７７，０４４；５，１１０，５８７；５
，１１２，７４９；５，１７４，９９３；５，２２３，４２４；５，２２５，３
３６；５，２４０，７０３；５，２４２，８２９；５，２９４，４４１；５，２
９４，５４８；５，３１０，６６８；５，３８７，７４４；５，３８９，３６８
；５，４２４，０６５；５，４５１，４９９；５，４５３，３６４；５，４６２
，７３４；５，４７０，７３４および５，４８２，７１３号（これらの各々は本
明細書において援用される）に記載されている。発現を達成するためにワクチン
接種体で機能できる制御配列に作動可能なように結合されたＣＤ８０ΔＣ変異体
蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物が提供される。遺
伝子構築物は本発明に従った改良されたワクチンを製造するために弱毒化生ワク
チンおよび組換えワクチンに取り込まれる。遺伝子構築物は組換えウイルスワク
チンのゲノムの一部であろうし、遺伝子物質は細胞の染色体内に組み込まれるか
または染色体外に残るであろう。非免疫応答誘導治療に関連するいくつかの態様
において、ＣＤ８０Ｃ領域蛋白質をコードしている核酸分子は、組換えウイルス
発現ベクターまたは他の適した送達手段のような種々の送達要素の一つを用いて
、適合宿主細胞でのそれらの導入および発現に影響するように細胞内へ送達され
る。一般に、ウイルスベクターは組換えアデノウイルスおよび組換えワクシニア
ウイルスのようなＤＮＡウイルス、または組換えレトロウイルスのようなＲＮＡ
ウイルスであろう。他の組換えベクターには細胞に感染でき、組換え遺伝子を発
現できる組換え原核生物が含まれる。組換えベクターに加えて、リポソームでの
カプセル化、トランスフェリン仲介トランスフェクションおよび他のレセプター
仲介手段のような他の送達手段も企図される。本発明は、等価な機能で働くおよ
びこれに関して続いて本分野で知られるようになる、発現ベクターのそのような
他の形および他の適した送達手段を含んでいるつもりである。本発明の好適な態
様において、ＤＮＡはアデノウイルス法により適格性宿主細胞へ送達される。当
業者はそのような手段により宿主細胞へＤＮＡを送達するこの技術を容易に理解
するであろう。本発明では好適にはアデノウイルスが含まれているが、本発明は
等価な機能で働く任意のウイルスを含んでいるつもりである。本発明の別の好適
な態様において、ＲＮＡはレトロウイルスの手段により適格性宿主細胞へ送達さ
れる。当業者はそのような手段により宿主細胞へＲＮＡを送達するこの技術を容
易に理解するであろう。ＲＮＡによりコードされている蛋白質を発現させるのに
働く任意のレトロウイルスが本発明に含まれていることが意図されている。

【００９３】 本発明のいくつかの態様は蛋白質およびその使用法に関している。例えば、免
疫化のいくつかの方法において、免疫原性蛋白質およびＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白
質が個体に投与される。同様に、免疫抑制により自己免疫疾患を処置しおよび移
植片／移植臓器拒絶を防止するいくつかの方法において、ＣＤ８０Ｃ領域蛋白質
が個体に投与される。本明細書で使用する場合、用語”本発明の蛋白質”とは、
免疫原性蛋白質、ＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質およびＣＤ８０Ｃ領域蛋白質を意味
することが意図されており、それらは各々類似の手段で生成できおよびそれらは
本発明の方法で使用するために類似の方法で処方および投与できる。

【００９４】 本発明の蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクター
を含んでいるベクターはルーチン的に製造できる。本明細書で使用される場合、
用語”組換え発現ベクター”とは適切な宿主内に導入された場合、コード配列の
発現を指示するために必要な遺伝子要素を含んでいるプラスミド、ファージ、ウ
イルス粒子または他のベクターを示していることを意味している。当業者は標準
技術および容易に利用可能な出発材料を用いて、本発明の蛋白質をコードしてい
る核酸分子を単離または合成し、およびそれを発現ベクター内へ挿入することが
できる。コード配列は必要な調節配列に作動可能なように連結される。発現ベク
ターはよく知られており、容易に利用可能である。発現ベクターの例には、プラ
スミド、ファージ、ウイルスベクターおよびその他の核酸分子または宿主細胞を
形質転換し、およびコード配列の発現を容易にするのに有用な担体を含んでいる
核酸分子が含まれる。本発明のいくつかの態様はＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質また
はＣＤ８０Ｃ領域蛋白質をコードしているヌクレオチド配列含む組換え発現ベク
ターに関している。本発明はＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質、ＣＤ８０ΔＣ変異体蛋
白質を含むキメラ蛋白質、またはＣＤ８０Ｃ領域蛋白質をコードしているヌクレ
オチド配列含む組換え発現ベクターに関している。

【００９５】 本発明はＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質、ＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質を含むキメラ
蛋白質、またはＣＤ８０Ｃ領域蛋白質をコードしているヌクレオチド配列含む組
換え発現ベクターを含んでいる宿主細胞に関している。蛋白質の産生のためのよ
く知られた組換え発現系で使用するための宿主細胞はよく知られており、容易に
利用可能である。宿主細胞の例には、大腸菌のような細菌細胞、Ｓ．セレビジエ のような酵母細胞、Ｓ．フルギペルダのような昆虫細胞、非ヒト哺乳動物組織培
養細胞チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、およびヒーラー細胞のよう
なヒト組織培養細胞が含まれる。

【００９６】 いくつかの態様において、例えば、当業者はよく知られた技術を用い、よく知
られた発現系で使用するため、市販品として入手可能な発現ベクター内へＤＮＡ
分子を挿入することができる。例えば、市販品として入手可能なプラスミドｐＳ
Ｅ４２０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）が大腸菌におけ
るＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質の製造に使用される。例えば、市販品として入手可
能なプラスミドｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ
）は酵母のＳ．セレビジエ株においての製造に使用される。例えば、市販品とし
て入手可能なＭＡＸＢＡＣ^TM完全バキュウロウイルス発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇ
ｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）は昆虫細胞においての製造に使用される。例
えば、市販品として入手可能なｐｃＤＮＡ ＩまたはｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔ
ｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）はチャイニーズハムスター卵巣細胞の
ような哺乳動物細胞においての製造に使用される。当業者はルーチン技術および
容易に入手可能な出発材料を用い、本発明の蛋白質を製造するためにこれらの市
販の発現ベクターおよび系またはその他を使用できる。（例えば、本明細書にお
いて援用されるＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏ ｎｉｎｇ ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ，第二版，Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）を参照されたい。）それ故、
所望の蛋白質は真核動物および原核動物系の両方で製造でき、蛋白質のプロセシ
ングを受けた形のスペクトルが得られる。

【００９７】 当業者は他の市販品として入手可能な発現ベクターおよび系を使用してもよい
し、よく知られた方法および容易に入手可能な出発材料を使用してベクターを製
造してもよい。プロモーターおよびポリアデニル化シグナル、および好適にはエ
ンハンサーのような必須の調節配列を含んでいる発現系は容易に入手可能であり
、種々の宿主について本分野では知られている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ，第二版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ
（１９８９）を参照されたい。

【００９８】 本発明の蛋白質をコードしているＤＮＡを含んでいる発現ベクターは適格性宿
主を形質転換するために使用され、続いて異種ＤＮＡの発現が起こる条件下で培
養および維持する。そのようにして産生された本発明の蛋白質は、当業者に理解
されおよび知られているように細胞を溶解することによりまたは培養培地から回
収される。当業者は、よく知られた技術を使用して、そのような発現系を用いて
製造された本発明の蛋白質を単離できる。本発明の蛋白質に特異的に結合する抗
体を使用して天然の供給源から本発明の蛋白質を精製する方法は、そのような抗
体を発生させる方法のように日常的である（Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．ａｎｄ Ｄ．Ｌ
ａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，１
９８８，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒ
ｅｓｓ、本明細書において援用される、を参照されたい）。そのような抗体は組
換えＤＮＡ方法論または天然起源物により産生された蛋白質を精製するために使
用されるであろう。

【００９９】 遺伝子構築物の例には、構築物がトランスフェクトされる細胞株で機能的であ
るプロモーターへ作動可能に連結された本発明の蛋白質をコードしているコード
配列が含まれる。構成的プロモーターの例にはサイトメガロウイルスまたはＳＶ
４０からのプロモーターが含まれる。誘導可能プロモーターの例にはマウス乳房
白血病ウイルスまたはメタロチオネインプロモーターが含まれる。当業者は容易
に入手可能な出発材料から、本発明の蛋白質をコードしているＤＮＡによる細胞
のトランスフェクションに有用な遺伝子構築物を容易に製造できる。そのような
遺伝子構築物は本発明の蛋白質の製造に有用である。

【０１００】 組換え技術により本発明の蛋白質を製造することに加え、自動化ペプチド合成
機もまた本発明の蛋白質を製造するために使用されるであろう。そのような技術
は当業者にはよく知られており、もし置換を持つ誘導体がＤＮＡにコードされた
蛋白質製造で提供されないならば有用である。

【０１０１】 本発明の蛋白質は以下の既知の技術により製造されるであろう。都合良くは、
Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄにより（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１５：２１４９
−２１５４（１９６３）、本明細書において援用される）最初に記載されている
固相合成技術を用いて蛋白質が製造される。他の蛋白質合成技術は、例えば、Ｍ
．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ ｅｔ ａｌ．，（１９７６）Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔ ｈｅｓｉｓ ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，２ｄ Ｅｄ．（本明細書に
おいて援用される）；Ｋｅｎｔ ａｎｄ Ｃｌａｒｋ−Ｌｅｗｉｓ，Ｓｙｎｔｈ ｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎ ｅ ，ｐ．２９５−３５８，ｅｄｓ．Ａｌｉｔａｌｏ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，（Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５）（本明細
書において援用される）；ならびに当業者には既知の他の参考文献に見ることが
できる。合成技術の要約はＪ．Ｓｔｕａｒｔ ａｎｄ Ｊ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇ，Ｓ ｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｌｉａ ，Ｐｉｅｒｃｅ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ（１９８４）（本
明細書において援用される）に見ることができる。溶液法による合成も、Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ，Ｖｏｌ．ＩＩ，３ｄ Ｅｄ．，ｐ．１０５−２３７，Ｎｅ
ｕｒａｔｈ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９７６）（本明細書において援用される）に説明され
ているように使用される。そのような合成で使用するための適当な保護基は前記
のテキストならびにＪ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏ ｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓ
ｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９７３）（本明細書において援用される）に見
いだされるであろう。

【０１０２】 一般に、これらの合成法には成長しているペプチド鎖への一つまたはそれ以上
のアミノ酸残基または適した保護アミノ酸残基の連続的添加が含まれている。通
常、第一のアミノ酸残基のアミノかまたはカルボキシル基は適した、選択的に除
去可能な保護基により保護されている。異なった、選択的に除去可能な保護基が
リジンのような反応性側鎖を含んでいるアミノ酸で利用される。

【０１０３】 固相合成を用いる場合、例えば、保護されたまたは誘導体化されたアミノ酸を
その非保護カルボキシルまたはアミノ基を通して不活性固体支持体へ結合する。
次にアミノまたはカルボキシル基の保護基を選択的に除去し、適切に保護された
相補的（アミノまたはカルボキシル）基を持っている配列の次のアミノ酸を混合
して固体支持体にすでに結合されている残基と反応させる。この新しく加えたア
ミノ酸残基からアミノまたはカルボキシル基の保護基を除去し、続いて次のアミ
ノ酸（適切に保護された）を加える、以下同じ。すべての所望のアミノ酸が適切
な配列で連結された後、残っている末端および側鎖保護基（および固体支持体）
は連続的にまたは同時に除去され、最終ペプチドが得られる。本発明のペプチド
は好適にはベンジル化またはメチルベンジル化アミノ酸を含んでいない。そのよ
うな保護基部分は合成の途中では使用してもよいがペプチドが使用される前には
除去される。コンホメーションを保持するために分子内結合を形成させるには、
別の所に説明されているような追加の反応が必要とされる。

【０１０４】 いくつかの態様において、蛋白質はトランスジェニック動物で産生される。本
発明はＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質またはＣＤ８０Ｃ領域蛋白質をコードしている
核酸配列を含む組換え発現ベクターを含むトランスジェニック非ヒト哺乳動物に
関している。組換え蛋白質を産生するのに有用なトランスジェニック非ヒト哺乳
動物は、必要な発現ベクターおよびトランスジェニック動物を発生させる技術と
ともによく知られている。一般に、トランスジェニック動物はＣＤ８０ΔＣ変異
体蛋白質またはＣＤ８０Ｃ領域蛋白質がコードされているヌクレオチド配列が哺
乳動物細胞特異的プロモーターへ作動可能なように連結されている組換え発現ベ
クターを含んでおり、それによりコード配列のみが哺乳動物細胞で発現され、そ
のように発現された組換え蛋白質は動物のミルクから回収される。Ｗａｇｎｅｒ
により１９８９年１０月１０日に公開された米国特許第４，８７３，１９１号お
よびＬｅｄｅｒにより１９８８年４月１２日に公開された米国特許第４，７３６
，８６６号（両方とも本明細書において援用される）の教えのような標準技術を
用いて、当業者はＣＤ８０ΔＣ変異体蛋白質またはＣＤ８０Ｃ領域蛋白質を産生
するトランスジェニック動物を製造することができる。好適な動物はヤギおよび
齧歯動物、特にラットおよびマウスである。

【０１０５】 本発明の蛋白質アミノ酸配列の保存的置換が企図された。本明細書で使用する
場合、”保存的置換”とは同様の構造および／または荷電特性を共有する他の残
基によるＣＤ８０残基のアミノ酸置換を示していることを意味している。当業者
は容易に、よく知られた保存的基に基づいたアミノ酸の保存的置換を持つ本発明
の蛋白質を設計することができる。

【０１０６】 本発明の医薬組成物は、活性成分が哺乳類体内の薬剤作用部位へ到達すること
を可能にする任意の手段により投与される。本発明の医薬組成物は局所または全
身的処置が望ましいか、および処置されるべき領域に依存して多くの方法で投与
される。投与は局所（眼、膣、直腸、鼻孔内、経皮を含む）、経口または非経口
であろう。経口で投与した場合ペプチドは消化されやすいので、経口処方は活性
成分を腸溶的に被覆するか何か、それを胃での分解から保護するように処方され
る。非経口投与には点滴静注、皮下、腹腔内または筋肉内注射、肺投与（例えば
、吸入または吹送による）または鞘内または脳室内投与投与が含まれる。好適な
態様において、非経口投与（即ち静脈内、皮下、経皮、筋肉内）が吸収を最適化
するために通常使用される。静脈内投与は注入ポンプの助けを借りて達成される
であろう。本発明の医薬組成物は乳濁液として処方されるであろう。

【０１０７】 当業者は本発明に使用されるであろう多数の医薬として受容可能な媒質を容易
に理解するであろう。適した医薬担体は、本明細書において援用され、本分野で
の標準参考書であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ，Ａ．Ｏｓｏｌに記載されている。局所投与のための処方には、
経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、座薬、スプレー、液剤および
散剤が含まれる。通常の医薬担体、水性、粉体または油性基剤、増粘剤などが必
要であるかまたは望ましいであろう。経口投与のための組成物には散剤または顆
粒剤、水性または非水媒質の懸濁剤または液剤、カプセル、サシェまたは錠剤が
含まれる。増粘剤、芳香剤、希釈剤、乳化剤、分散剤または結合剤が望ましい。
非経口、鞘内または脳室内投与のための組成物には、緩衝剤、希釈剤および他の
適した添加物を含んでいるであろう無菌水性溶液が含まれ、好適には無菌であり
発熱物質を含んでいない。本発明に従った静脈内投与に適した医薬組成物は無菌
であり発熱物質を含んでいない。非経口投与にためには、本発明のペプチドは、
例えば、溶液、懸濁液、乳剤または凍結乾燥粉末として処方できる。そのような
賦形剤の例は水、塩溶液、リンガー液、デキストロース溶液および５％ヒト血清
アルブミンである。リポソームおよび固定油のような非水賦形剤もまた使用され
るであろう。賦形剤または凍結乾燥粉末はその等張性（例えば、塩化ナトリウム
、マンニトール）および化学的安定性（例えば、緩衝液および保存剤）を維持す
る添加物を含んでいる。処方は通常使用される技術により滅菌される。例えば、
注射による投与に適した非経口組成物は重量で１．５％の活性成分を０．９％塩
化ナトリウム溶液に溶解することにより処方される。

【０１０８】 本発明に従った医薬組成物は１回量としてまたは複数回量で投与される。本発
明の医薬組成物は個々の治療薬としてまたは他の治療薬と組み合わせて投与され
る。本発明の処置は通常の治療と組み合わせてもよく、連続的にまたは同時に投
与される。

【０１０９】 用量は特定の薬剤の薬力学的特性および投与様式および経路；受容者の年齢、
健康状態および体重；徴候の性質および程度、同時に行っている処置、処置の頻
度および望まれる結果の様な既知の因子に依存して変化する。治療組成物の処方
およびその後の投与は当業者の範囲内であると思われる。通常、ペプチドの用量
は５０キログラムの体重当たり約１から３０００ミリグラム；好適には５０キロ
グラムの体重当たり約１０から１０００ミリグラム；より好適には５０キログラ
ムの体重当たり約２５から８００ミリグラムであろう。通常、１日当たり個体へ
８から８００ミリグラムを、１日１回から６回の分割量で、または徐放性放出形
で投与すると所望の効果を得ることが達成される。

【０１１０】 蛋白質が投与される方法に依存して、本発明の医薬組成物は最も有効であるよ
うに処方されおよび投与される。投与様式は本開示を考慮すると当業者には明ら
かであろう。

【０１１１】 本発明の方法はヒトおよび獣医学医薬の両方の分野で有用である。従って、本
発明は哺乳類、鳥類および魚類の遺伝子免疫化に関している。本発明の方法はヒ
ト、ウシ、ヒツジ、ウマ、イヌおよびネコ種を含む哺乳類種に特に有用であろう
。

【０１１２】 以下に示す実施例は本発明の特色の代表的な例を含んでいる。実施例は本発明
の範囲を制限するものではなく、むしろ例示の目的を務めるものである。加えて
、本発明の種々の特色は以下の説明により要約できるであろう。しかしながら、
この説明は本発明の範囲を制限することを意味しているものではなく、むしろ本
発明の種々の特色を強調しているものである。当業者は本発明の追加の特色およ
び態様を容易に理解できる。実施例 なぜＣＤ８６（しかしＣＤ８０ではない）がＴ細胞応答の増加に必要とされる
のかを決定する、およびＣＤ８０およびＣＤ８０のＶ−およびＣ−ドメインの両
方で発見された残基を含むＣ２８およびＣＴＬＡ−４への結合に関与するいくつ
かの決定的領域を持つＣＤ８６の構造機能分析をさらに研究するための努力にお
いて、Ｔ細胞活性化におけるＣＤ８０およびＣＤ８６の異なった領域の役割が、
ＤＮＡ免疫原およびＣＤ８０およびＣＤ８６分子のキメラまたは端が切り取られ
た形をコードしているＤＮＡによるマウスの共免疫化を使用して試験された。方法 構築物の製造 ＨＩＶ−１_MNエンベロープ蛋白質（ｐｃＥｎｖ）をコードしているＤＮＡワク
チン構築物は米国特許第５．５９３，９７２に記載されている。ヒトＣＤ８０お
よびＣＤ８６遺伝子はＢ細胞ｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌ
ｏ Ａｌｔｏ．ＣＡ）からクローン化され、発現ベクター、ｐＳＲαｎｅｏ１＋
内へ置かれた。より詳しくは、ＣＤ８０およびＣＤ８６の両方の遺伝子が、Ｋｉ
ｍ，ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔ．１５：６４１−６４５
（本明細書において援用される）に記載されているようにＰＣＲ増幅され、ＳＲ
αの下流ｐＳＲαｎｅｏ１＋内へ結合され、ｐＣＤ８０およびｐＣＤ８６発現ベ
クターが作製された。Ｅｘｐａｎｄ^TM Ｈｉｇｈ Ｆｉｄｅｌｉｔｙ Ｐｏｌｙ
ｍｅｒａｓｅシステム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ．Ｇｅｒｒｎ
ａｎｙ）を使用するＰＣＲ増幅により、これら二つの遺伝子のキメラおよび端が
切り取られた変異体が発生された。共刺激分子のこれらのすべての形の構築のた
め、ｐＣＤ８０およびｐＣＤ８６がＰＣＲ鋳型として使用された。以下のプライ
マーがこれらの反応に使用された： Ａ：ＣＴＧＣＴＴＧＣＴＣＡＡＣＴＣＴＡＣＧＴＣ−配列ＩＤ番号：１（フォワ
ード、ベクター） Ｂ：ＣＴＧＡＡＧＴＴＡＧＣＴＴＴＧＡＣＴＧＡＴＡＡＣＧ−配列ＩＤ番号：２
（リバース、ＣＤ８０） Ｃ：ＧＣＡＡＴＡＧＣＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＴＣＡ−配列ＩＤ番号：３（リバー
ス、ベクター） Ｄ：ＣＡＧＴＣＡＡＡＧＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＴＣＡＡＣＣ−配列ＩＤ番号：４
（フォワード、ＣＤ８６） Ｅ：ＧＧＧＡＡＧＴＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＴＧＡＣＡＧＴＴＣ−配列ＩＤ番号：
５（リバース、ＣＤ８６） Ｆ：ＴＣＡＧＴＧＣＴＴＧＣＴＧＡＣＴＴＣＣＣＴＡＣＡＣＣ−配列ＩＤ番号：
６（フォワード、ＣＤ８０） Ｇ：ＴＣＴＴＧＣＴＴＧＧＣＴＴＴＧＡＣＴＧＡＴＡＡＣＧＴＣＡＣ−配列ＩＤ
番号：７（リバース、ＣＤ８０） Ｈ：ＴＣＡＧＴＣＡＡＡＧＣＣＡＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＴＴＴＴＣＣ−配列ＩＤ
番号：８（フォワード、ＣＤ８０） Ｉ：ＴＣＣＴＣＡＡＧＣＴＣＡＡＧＣＡＣＴＧＡＣＡＧＴＴＣ−配列ＩＤ番号：
９（リバース、ＣＤ８６） Ｊ：ＴＣＡＧＴＧＣＴＴＧＡＧＣＴＴＧＡＧＧＡＣＣＣ−配列ＩＤ番号：１０（
フォワード、ＣＤ８６） Ｋ：ＴＣＴＧＧＡＴＣＣＴＣＡＴＣＴＴＧＧＧＧＣＡ−配列ＩＤ番号：１１（リ
バース、ＣＤ８０） Ｌ：ＴＣＴＧＧＡＴＣＣＴＣＡＴＴＴＣＣＡＴＡＧ−配列ＩＤ番号：１２（リバ
ース、ＣＤ８６） ＣＤ８０のＶドメインはＡおよびＢプライマーを使用して増幅され、ＣＤ８６
の膜貫通（ＴＭ）および細胞質尾部（Ｔ）はＣおよびＤプライマーを使用して増
幅された。これらの断片は続いて精製され、合併され、フォワード（ＣＴＧＣＴ
ＴＧＣＴＣＡＡＣＴＣＴＡＣＧＴＣ−配列ＩＤ番号：１）およびリバース（ＧＣ
ＡＡＴＡＧＣＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＴＣＡ−配列ＩＤ番号：３）プライマーを使
用する第二工程ＰＣＲ反応の鋳型として使用された。ＰＣＲ生成物はｐＳＲαｎ
ｅｏ１＋ベクター内へ連結され、得られたプラスミド（ｐＶ８０Ｃ８６Ｔ８６）
はＣＤ８０のＶドメインおよびＣＤ８６のＣ−、ＴＭ−およびＴ−領域を発現し
ているキメラ共刺激分子をコードしている。キメラ交差点はＣＤ８０の保存アラ
ニン１０６およびＣＤ８６中のアラニン１１１位であり、エキソン境界が尊重さ
れた。

【０１１３】 ＣＤ８６のＶドメインおよびＣＤ８０のＣ−、ＴＭ−およびＴ−領域をコード
している次のプラスミドｐＶ８６Ｃ８０Ｔ８０はＡおよびＥプライマーを使用す
るＣＤ８６Ｖ領域の増幅により構築された。ＣＤ８０のＣ−、ＴＭ−およびＴ−
領域をコードしているＰＣＲ断片はＣおよびＤプライマーを使用して増幅された
。第二段階ＰＣＲおよびクローニングは上に記載したように実行された。

【０１１４】 Ｃドメインのない共刺激分子の端切断形（ｐＶ８０ＣΔＴ８０、ｐＶ８６ＣΔ
Ｔ８６）もまた二工程ＰＣＲ技術により製造された。ｐＶ８０ＣΔＴ８０の場合
、ＶドメインはＡおよびＧプライマーを使用して増幅された。Ｃドメインが切り
取られた分子のＴＭ／Ｔ断片は、ｐＶ８０ＣΔＴ８０の場合Ｃ／Ｈプライマーお
よびｐＶ８６ＣΔＴ８６の場合Ｃ／Ｊを使用して増幅された。生じた構築物は増
幅により調製され、ｐＳＲαｎｅｏ１＋発現ベクター内へクローニングされた。
全ての構築物は本来の野生型ＣＤ８０およびＣＤ８６鋳型に対して配列が忠実で
あることが確認された。得られた欠損変異体はＣＤ８０のアミノ酸アスパラギン
酸１０７からトレオニン２００およびＣＤ８６のアラニン１１１からイソロイシ
ン２１１が欠けていた。両方の分子は各々のＣドメインの６から７膜近位アミノ
酸を維持するように構築された。

【０１１５】 最後に、ｐＣＤ８０（ｐＶ８０Ｃ８０ＴΔ）およびｐＣＤ８６（ｐＶ８６Ｃ８
６ＴΔ）のＴ領域欠損は、両方の場合とも各々フォワードとしてＡおよびリバー
スとしてＬプライマーを使用する一工程ＰＣＲにより発生させた。ＰＣＲ生成物
はｐＳＲαｎｅｏ１＋ベクター内へクローン化した。コードされたＣＤ８０蛋白
質は最初の細胞質尾部アミノ酸残基、アルギニンの後ろで終結している。ＣＤ８
６分子のために得られた遺伝子はヌクレオチド９４２後で終結しており、細胞質
尾部中の最初のリジンを維持している。

【０１１６】 すべてのキメラおよび端切断構築物ならびに野生型分子はｐＳＲαｎｅｏ１＋
ベクター内へクローン化された。遺伝子発現は、シミアンウイルス４０（ＳＶ４
０）初期プロモーターおよびヒトＴ細胞白血病ウイルス１型のロングターミナル
リピートのＲセグメントおよびＵ５配列の一部（Ｒ−Ｕ５’）から構成されるＳ
Ｒαプロモーターの制御下である。すべての構築物は本来の野生型ＣＤ８０およ
びＣＤ８６鋳型に対して配列が忠実であることが確認された。プラスミドの発現 ： これらの構築物の発現は、実験または対照プラスミドでトランスフェクトした
ヒト横紋筋肉腫（ＲＤ）細胞を使用する免疫蛍光およびフローサイトメトリー（
ＦＡＣＳ）アッセイにより分析した。細胞はＧｅｎｅ Ｐｕｌｓｅ（Ｂｉｏ−Ｒ
ａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用して５００μＦ静電容量および０．２５
ボルトのエレクトロポレーションによりトランスフェクトした。

【０１１７】 免疫蛍光アッセイのためには、トランスフェクトした細胞を２日間インキュベ
ートし、Ｆａｌｃｏｎ^R培養スライド（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｂ
ｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）に移した。次の日、細胞を洗浄し、メタノールで固定し（
３０’、ＲＴ）、抗ＣＤ８０（Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｍｉａｍｉ，ＦＬ）またはＣＤ
８６（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）モノクローナル抗体
とインキュベートした（１．５時間、３７℃）。スライドを洗浄し、ヤギ抗マウ
スＩｇＧ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉ
ｓ，ＩＮ）を用い３７℃で１．５時間染色した。スライドはＮｉｋｏｎ ＯＰＴ
ＩＰＨＯＴ蛍光顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ Ｉｎｃ．，Ｔｏｋｙｏ，ＪＡＰＡＮ）で観
察し、写真を撮った。

【０１１８】 ＦＡＣＳ分析のためには、ＲＤ細胞をＣＤ８０またはＣＤ８６分子をコードし
ている構築物（２μｇ）および緑色蛍光蛋白質発現ベクター｛１０μｇ（Ｃｌｏ
ｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡからのｐｃＧＦＰ）｝の混合物でトラン
スフェクトした。後者はトランスフェクション効率計算のための対照プラスミド
として使用された。実験プラスミドの発現はＰＥと抱合させたＣＤ８０またはＣ
Ｄ８６分子のＶドメインに対するモノクローナル抗体（両方ともＰｈａｒｍｉｎ
ｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから）を使用して確認された。簡単には、１
μｇの両方の抗Ｂ７抗体がトランスフェクトまたは対照細胞（１０ｘ１０⁵）に
加えられた。データはＣＥＬＬＱｕｅｓｔ^TMデータ収集およびソフトウエアを備
えたＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔ
ｏｍｅｔｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で分析した。異なっ
たＢ７分子を発現している細胞のトランスフェクション効率（蛍光強度）はＧＦ
Ｐを発現している細胞集団で測定された。動物の免疫化 ： 各々のＢａｌｂ／ｃマウスに、１００μｌのリン酸緩衝液（ＰＢＳ）および０
．２５％ブピバカイン−ＨＣｌ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ，Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）に再懸
濁した５０μｇの各々のＤＮＡ構築物を筋肉内に３回注射した（２週間離して）
。この用量は異なった分子補助剤（即ち、変異した、端が切断されたまたは野生
型共刺激遺伝子）の同時送達により得られる抗ウイルス免疫応答の促進を最大に
するために選択された。ＨＩＶ−１ ｇｐ１６０エンベロープ（ｐｃＥｎｖ）を
コードしている５０μｇのプラスミドは単独で、またはｐｃＥｎｖおよび５０μ
ｇの種々のＣＤ８０／８６構築物（分子補助剤）との混合物として注射された。
対照として、対照ベクターを注射したマウスおよび動物が使用された。いくつか
の実験において、動物には二つの分子補助剤（全体で１００μｇ）にｐｃＥｎｖ
（５０μｇ）を加えた混合物が３回注射された。最後の注射から２週間後、すべ
ての実験および対照動物からの脾臓細胞が単離され、Ｔ細胞応答およびサイトカ
イン産生の検出のために使用された。筋肉細胞の免疫組織化学的アッセイ ： 免疫された脚筋肉が浸潤検出のために免疫組織化学的に試験された（筋肉中の
リンパ球の存在）。簡単には、マウス大腿４頭筋に５０μｇの実験または対照プ
ラスミドと混合した５０μｇのｐｃＥｎｖを接種した。接種７日後、マウスを殺
し、大腿４頭筋を除去した。新鮮な筋肉組織はＯ．Ｃ．Ｔ．化合物（Ｓａｋｕｒ
ａ Ｆｉｎｅｔｅｋ ＵＳＡ，Ｉｎｃ．，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）中で凍結さ
せ、４ミクロン凍結切片が作製された。炎症の程度はヘモタキシリンおよびエオ
シン（Ｈ＆Ｅ）染色筋肉切片を試験することにより決定された。細胞障害性Ｔリンパ球アッセイ： ５時間の⁵¹Ｃｒ放出ＣＴＬアッセイが実施された。簡単には、エフェクターは
刺激細胞およびＣｏｎＡを含まない１０％ＲＡＴ−Ｔ−ＳＴＩＭ（Ｂｅｃｔｏｎ
Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）存在下で６日
間刺激された。抗原刺激のためには、ＨＩＶ−１エンベロープ蛋白質を発現する
組換え体ワクシニアウイルスで感染させた０．１％グルタルアルデヒド固定Ｐ−
８１５細胞が使用された（ｖＭＮ４６２）（ＮＩＨ ＡＩＤＳ Ｒｅｓｅｒｃｈ
ａｎｄ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍ）。標的細胞
として、組換え体（ｖＭＮ４６２、特異的）または野生型（ＷＲ、非特異的）ワ
クシニアウイルスで感染させたＰ−８１５細胞が使用された。両方の標的細胞は
１００ｍＣｉ／ｍｌ Ｎａ₂ ⁵¹ＣｒＯ₄で標識され、１００：１から１２．５：１
の範囲のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比でエフェクター細胞と混合された。パ
ーセント特異的溶解はＫｉｍ、１９９７、上記文献、に説明されているように決
定された。最大および最少放出は各々１０％トリトンＸ−１００および培地中の
標的細胞の溶解により決定された。”自発的放出”のカウントが”最大放出”の
２０％を超えたならば、アッセイは正当とは考えられなかった。標的の特異的溶
解を計算するため、特異的標的のパーセント溶解から非特異的標的のパーセント
溶解が差し引かれた。いくつかの実験において、ＣＤ８＋Ｔ細胞が、抗ＣＤ８モ
ノクローナル抗体（５３−６．７，ＡＴＣＣ）による処理により脾臓細胞の培養
液から除去され、続いて非毒性ウサギ補体（Ｓｉｇｍａ）とインキュベートされ
た。サイトカイン産生 ： 免疫細胞により放出された種々のサイトカインレベルは免疫応答の方向および
程度を反映している。従って、ＣＴＬアッセイのためにインビトロで刺激された
エフェクター細胞からの上清液が集められ、利用可能なＥＬＩＳＡキット（Ｂｉ
ｏｓｏｕｒｃｅ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ）を使用して、γＩＦＮ、ＩＬ−４
およびＩＬ−２の放出が試験された。結果 野生型およびＣＤ８０およびＣＤ８６の変異形をコードしているプラスミドの発 現 ： 一時的に対照または実験プラスミドでトランスフェクトされたＲＤ筋肉腫瘍細
胞でのＣＤ８０またはＣＤ８６構築物の異なった形の発現が最初に分析された。
免疫蛍光技術を使用し、実験細胞は野生型ならびに変異された共刺激性分子のす
べての異なった形を産生したが、対照細胞（ベクターのみでトランスフェクトさ
れた）は産生しないことが観察された。これらの分子のトランスフェクション効
率はＦＡＣＳ分析により研究された。これらの実験において、ＧＦＰをコードし
ている対照プラスミド、および共刺激分子の異なった形をコードしている実験構
築物の混合物がトランスフェクトされた。Ｂ７分子を発現している細胞の蛍光強
度は、ＧＦＰを発現している細胞集団にのみ検出された。この結果は、キメラお
よびＣＤ８６およびＣＤ８０の端切断形およびＣＤ８６野生型分子の大多数が同
様に発現されたことを示している（図３）。ＣＤ８０野生型（ｐＣＤ８０）およ
び細胞質尾部欠損ＣＤ８６（ｐＶ８６Ｃ８６ＴΔ）をコードしている二つの構築
物のみが他のプラスミドより相対的に高くトランスフェクト細胞表面上に発現さ
れた。ＣＤ８６およびＣＤ８０Ｖドメインの両方がウイルス特異的ＣＴＬ応答およびＴ ｈ１サイトカイン産生の活性化に重要である Ｂ７分子は細胞上に発現された適切なリガンド経由の抗原特異的Ｔ細胞活性化
の誘導において決定的な役割を果たしている。初期に、ＤＮＡ免疫原と一緒の野
生型ＣＤ８６（ＣＤ８０ｃＤＮＡではない）の投与は抗原特異的Ｔ細胞応答を促
進することが報告されている（Ｋｉｍ ｅｔ．ａｌ．，１９９７ 前記文献）。
この活性化におけるＣＤ８６のＶ領域の役割を決定するため、ＣＤ８０およびＣ
Ｄ８６のこれらの領域が交換され（表３）、およびウイルス蛋白質をコードして
いるプラスミドと一緒にこれらの分子をコードしている構築物でマウスが共免疫
された。陽性対照として、野生型ＣＤ８０およびＣＤ８６を発現する構築物がＤ
ＮＡ免疫原と一緒に共注射され、陰性対照マウスはベクターのみを受け取った。
最後の免疫接種２週間後、脾臓細胞の培養物で抗ウイルスＣＴＬ応答が分析され
た。

【０１１９】 バックグラウンドレベルの特異的死滅が対照動物から得られた脾臓細胞で観察
され、低レベルの死滅がｐｃＥｎｖまたはｐｃＥｎｖ＋ｐＣＤ８０で共免疫した
動物で観察された。しかしながら、ｐｃＥｎｖおよびｐＣＤ８６で共免疫したマ
ウスでは高レベルのエンベロープ−特異的ＣＴＬが生じた（表４）。従って、ｐ
ＳＲαｎｅｏ＋に挿入されたＣＤ８０およびＣＤ８６遺伝子を使用し（以前に使
用されたｐＣＤＮＡ３ベクターの代わりに）、ＤＮＡワクチン接種後の細胞性免
疫応答の調節にＣＤ８０およびＣＤ８６は異なった役割を果たしていることが確
認された。キメラ分子で免疫したマウスにおいて、抗ウイルスＣＴＬ応答が次に
分析された。ｐＶ８６Ｃ８０Ｔ８０およびｐｃＥｎｖでのマウスの共免疫化はウ
イルス特異的細胞毒性細胞を発生させなかったが、ｐＶ８０Ｃ８６Ｔ８６および
ｐｃＥｎｖ混合物でのマウスの免疫化はＥ：Ｔ比１：１００で４０％以上の抗Ｈ
ＩＶ−１ ＣＴＬ活性を誘導した。この応答はｐｃＥｎｖにｐＣＤ８６を加えて
注射したマウスにおける抗ウイルスＣＴＬ活性と同様であった（表４）。従って
、ＣＤ８０のＶ領域は、もしＣＤ８６分子のＣドメインおよび細胞質尾部ととも
に発現されたならば、ＣＤ８６のＶ領域と同様に抗原特異的Ｔ細胞活性化に重要
であった。しかしながら、ＣＤ８６のＶ領域はＣＤ８０分子のＣドメインおよび
細胞質尾部とともに発現された場合、機能的に沈黙していた。これらの結果はサ
イトカイン産生データにより支持された。ｐｃＥｎｖおよびｐｃＥｎｖにｐＣＤ
８６を加えて注射したマウスから得られた脾臓細胞からの上清は低レベルのＩＬ
−２を誘導したが、γＩＦＮまたはＩＬ−４は産生しなかった（表４）。対照的
に、ｐｃＥｎｖ＋ｐＣＤ８６およびｐｃＥｎｖ＋ｐＶ８０Ｃ８６Ｔ８６での共免
疫化はγＩＦＮおよびＩＬ−２両方の著しい抗原特異的促進を誘導したが（表４
）、ＩＬ−４は産生しなかった。

【０１２０】 これらの結果はＣＤ８６のＣドメインおよび／または細胞質尾部はＴ細胞の正
のシグナリングに重要であり、一方、ＣＤ８０の同じドメインは重要でないこと
を示唆しているであろう。もしくは、ＣＤ８０のＣドメインおよび／または細胞
質尾部はＴ細胞の負シグナルの提供に関与しているのかもしれない。抗原特異的Ｔ細胞活性化にＣＤ８６の細胞質尾部は決定的である Ｂ７の細胞質尾部は細胞表面上にリガンドを集積させることを可能にすること
によりインビトロＴ細胞共刺激に必要とされることが示されている。従って、Ｔ
細胞共刺激の細胞質尾部の役割を示すため、Ｂ７の細胞質尾部欠損変異体が構築
され、これらのプラスミド（ｐＶ８０Ｃ８０ＴΔまたはｐＶ８６Ｃ８６ＴΔ）お
よびｐｃＥｎｖがマウスに共注射された。ＣＤ８０またはＣＤ８６分子の端切断
形をコードしている両方の構築物は低レベルの死滅を誘導し、一方、ｐｃＥｎｖ
およびｐＣＤ８６の混合物で共免疫した動物は強い抗ウイルスＣＴＬ応答を示し
た（表４）。支持するデータがＴｈ１サイトカイン産生を分析することにより得
られた。

【０１２１】 細胞質尾部を持たないＣＤ８０およびＣＤ８６の両方の構築物はＤＮＡワクチ
ン共注射後にγＩＦＮ産生を促進しなかった。ｐＶ８６Ｃ８６ＴΔでのマウスの
共免疫化はｐｃＥｎｖまたはｐｃＥｎｖ＋ｐＶ８０Ｃ８０ＴΔを注射したマウス
と比較してＩＬ−２産生の小さな増加を誘導した。重要なことは、ｐｃＥｎｖに
野生型ＣＤ８６をコードしているＤＮＡを加えて共免疫化した対照動物はγＩＦ
ＮおよびＩＬ−２サイトカイン産生の著しい促進を誘導する（表４）。従って、
ＣＤ８６分子の細胞質尾部はＴ細胞活性化に重要であった。しかしながら、ｐｃ
Ｅｎｖ＋ｐＶ８０Ｃ８０ＴΔで共免疫化したマウスはＴ細胞活性化を誘導しなか
った。従って、負シグナリングにおけるＣＤ８０のＣドメインおよび／または細
胞質尾部の関与は決定できずに残っている。この質問に答えるため次のＣＤ８０
およびＣＤ８６のＣドメイン欠損変異体が構築された。ＣＤ８０の細胞質尾部ではなくＣドメインがＴ細胞への負シグナルの提供に関与 している 次の実験の組において、マウスはｐｃＥｎｖ免疫原およびＶドメインおよび細
胞質尾部のみをコードしているＣＤ８０（ｐＶ８０ＣΔＴ８０）およびＣＤ８６
（ｐＶ８６ＣΔＴ８６）分子でマウスが共免疫化された。対照として、マウスに
ｐｃＥｎｖのみおよびｐｃＥｎｖにｐＣＤ８０またはｐＣＤ８６を加えて注射し
た。これらの実験からの抗原特異的抗ウイルスＣＴＬ応答は図１に示されている
。ＣＤ８６の補助剤効果は劇的であり、ＣＤ８６Ｃドメイン欠損分子でもより弱
いが保持されていた。野生型およびＣＤ８０の細胞質尾部欠損形により誘導され
たＴ細胞活性化の非常に弱い効果（図１、表４）と鋭い対照をなして、ｐＶ８０
ＣΔＴ８０は抗Ｅｎｖ ＣＴＬ応答の共刺激に非常に有効であり（図１）、Ｃド
メインの喪失による機能の獲得を示している。細胞性免疫性の促進をさらに調べ
るため、ｐｃＥｎｖおよびＣドメイン欠損ＣＤ８０またはＣＤ８６をコードして
いるプラスミドで免疫したマウスの脾臓細胞を使用してＴｈ１サイトカイン産生
が調べられた。対照として、ｐｃＥｎｖにｐＣＤ８０かまたはｐＣＤ８６を加え
てマウスが共免疫された。ｐｃＥｎｖと一緒に共注射されたｐＶ８６ＣΔＴ８６
およびｐＶ８０ＣΔＴ８０キメラ遺伝子の両方ならびに野生型ＣＤ８６をコード
しているＤＮＡが同じようによくＴｈ１リンホカイン産生を誘導した（図２Ａお
よび２Ｂ）。

【０１２２】 これらの結果はＣＤ８０の細胞質尾部は機能的であり、インビボでのＴ細胞活
性化に重要であることを示している。さらに重要なことは、本データはＣＤ８０
（ＣＤ８６ではない）のＣドメインはＴ細胞に”負”シグナルを提供できるとい
う結論を支持している。次に、Ｔ細胞活性化におけるＣＤ８０Ｃドメインの阻害
的役割が分析された。ＣＤ８０のＣドメインはＣＤ８６分子によるＴ細胞活性化を阻害する 抗原特異的Ｔ細胞への負シグナルの提供におけるＣＤ８０のＣドメインの関与
を示すため、動物はＤＮＡ免疫原および分子補助剤の組み合わせで免疫された。
実験マウスはＤＮＡ免疫原およびｐＣＤ８６とｐＣＤ８０またはｐＣＤ８６とｐ
Ｖ８０ＣΔＴ８０の混合物で共免疫した。対照マウスにはｐｃＥｎｖのみが注射
されるか、またはｐｃＥｎｖにｐＣＤ８６、ｐＣＤ８０またはｐＶ８０ＣΔＴ８
０を加えて共注射された。抗ウイルスＣＴＬアッセイは実験および対照マウスか
ら得られた脾臓細胞で実施された。

【０１２３】 前に観察されたように、ＤＮＡ免疫原およびｐＣＤ８６またはｐＶ８０ＣΔＴ
８０はＣＴＬ活性の著しい促進を誘導した（図３）。しかしながら、ｐｃＥｎｖ
および野生型分子補助剤の組み合わせ（ｐＣＤ８６＋ｐＣＤ８０）で共免疫した
マウスはＣＴＬ応答を促進しなかった（溶解はｐｃＥｎｖによる対照群以上では
なかった）。重要なことは、ｐＣＤ８６およびｐＶ８０ＣΔＴ８０の組み合わせ
はワクチン接種動物で補助剤効果を誘導し、この効果はｐＣＤ８６にＤＮＡ免疫
原を加えて免疫した動物で誘導された効果と同様であった。従って、野生型ＣＤ
８０（しかし、Ｃドメイン欠損変異体ＣＤ８０ではない）はＤＮＡ免疫原と共送
達された場合に抗ウイルスＣＴＬ応答の促進を阻害する。観察された細胞毒性活
性におけるＣＤ８⁺Ｔ細胞の役割を確認するため、ＣＴＬ活性がこの細胞集団を
取り除いた後に測定された。脾臓細胞を抗ＣＤ８モノクローナル抗体および無毒
性ウサギ補体で処理した。ＣＤ８⁺Ｔ細胞の除去はＤＮＡ免疫原およびｐＣＤ８
６を共注射したマウスにおける抗ウイルスＣＴＬ活性の抑制を生じた。再び、ｐ
ｃＥｎｖ＋ｐＣＤ８０＋ｐｃＤ８６で共免疫したマウスにおいては抗ＨＩＶ−１
ＣＴｌ活性は観察されなかった（図４）。Ｃドメイン欠損ＣＤ８０の発現は野生型ＣＤ８０の発現よりも免疫した動物の筋 肉内へのより多いリンパ球浸潤を誘導した 対照またはｐｃＥｎｖ＋ｐＣＤ８０免疫化動物よりもｐｃＥｎｖ＋ｐＣＤ８６
で免疫したマウスでは筋肉内へのリンパ球の著しく多量の浸潤が報告されている
。浸潤細胞にはＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺Ｔ細胞の両方が含まれていた。従って、Ｔ
細胞と相互作用するＣドメイン欠損ＣＤ８０分子の能力をさらに決定するため、
ｐｃＥｎｖにｐＶ８０ＣΔＴ８０を加えてマウスを共注射後の筋肉組織内への細
胞浸潤が調べられた。対照として、ベクター単独またはｐｃＥｎｖにｐＣＤ８０
またはｐＣＤ８６を加えた混合物が注射された動物が使用された。ｐｃＥｎｖ＋
ｐＣＤ８６（しかしｐｃＥｎｖ＋ｐＣＤ８０ではない）の共注射は筋肉組織内へ
のリンパ球の劇的な浸潤を誘導した（図５）。正常動物は実際上浸潤を発生しな
い。より重要なことは、ＤＮＡ免疫原およびｐＶ８０ＣΔＴ８０で共免疫された
マウスの筋肉では浸潤がより大きいことである。従って、Ｃドメインの欠損はＣ
Ｄ８０の共刺激特性をＣＤ８６の野生型の特性に似るように変化させた。ＣＤ８０およびＣＤ８６Ｃドメイン欠損変異体はＣＴＬＡ−４に対して異なった 結合親和性を持っている 上に示したように、ＤＮＡ免疫原およびｐＣＤ８６またはｐＶ８０ＣΔＴ８０
によるマウスの共免疫化はＣＴＬ活性、Ｔｈ１サイトカイン産生および注射部位
の細胞の浸潤を促進した。対照的に、ＤＮＡ免疫原およびｐＣＤ８０の共免疫化
は同様の効果を示さなかった。我々はＣＤ８０のＣドメインの欠損は分子のＣＴ
ＬＡ−４に対する親和性を減少させると仮定した。このことはＴ細胞への強力な
負シグナルを提供する能力を生じさせる。ＣＤ８０およびＣＤ８６Ｃドメイン欠
損変異体間のＣＴＬＡ−４結合親和性の相違を比較するために表面プラスモン共
鳴を使用した。典型的には、レセプター（対抗レセプター）分子がセンサー表面
に固定され、異なった濃度の対抗レセプター（レセプター）が連続的にこのセン
サーを通して流れている。この方法論を使用し、ヒト可溶性ＣＴＬＡ−４は可溶
性ＣＤ８０と０．２−０．４μＭのＫ_Dで結合することが示された。問題とする
リガンドを発現している細胞が表面に固定された。細胞固定はリガンドの最少の
コンホメーションのゆがみで大部分の可溶性ＣＴＬＡ−４Ｉｇへの細胞表面ＣＤ
−８０エピトープの最大の接近を可能にする。膜二重層内の側方拡散はＣＴＬＡ
−４への結合によるＣＤ８０の物理学的オリゴマー化を可能にする。この方法を
用い、ＣＴＬＡ−４−ＩｇはＣＤ８０野生型およびＣＤ８０Ｃドメイン欠損分子
の両方でトランスフェクトされたＲＤ細胞へ特異的に結合することが示された。
重要なことは、この結合は濃度依存的であったことである。モノクローナル抗体
の結合から非特異的シグナルを差し引いた後、親和性が計算された。野生型ＣＤ
８０レセプターとのＣＴＬＡ−４−Ｉｇの会合は変異体ＣＤ８０よりも５倍速か
ったが（ｋ_onパラメーター）、一方、ＣＴＬＡ−４／ＣＤ８０複合体の解離は野
生型レセプターより２．８倍遅い（ｋ_offパラメーター）。これらの動力学の相
違のため、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ／ＣＤ８０野生型相互作用はＫ_Dに反映されてい
るようにＣＤ８０変異体よりも１４倍強い。定義上、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定
されたｋ_offおよびｋ_onパラメーターは細胞表面に発現されるレセプターの数に
は依存しない。従って、ＣＤ８０の定常領域の欠損はＣＤ８０−ＣＴＬＡ−４相
互作用自身に重大な効果を持っている。考察 現在の証拠はＴ細胞活性化の最も重要な共刺激経路の一つにＡＰＣ上のＣＤ８
０およびＣＤ８６が含まれていることを示している。これらの分子はＴ細胞表面
レセプター（ＣＤ２８またはＣＴＬＡ−４）と相互作用し、増殖およびサイトカ
イン分泌に重要な二次的シグナルを提供する。Ｔ細胞活性化の決定的共刺激シグ
ナルはＢ７リガンドへの結合後にＣＤ２８を通して提供される。対照的に、ＣＴ
ＬＡ−４は主として阻害シグナルを誘導する。ＣＤ８０およびＣＤ８６分子の機
能的役割を決めている証拠はより複雑である。いくつかの主としてインビトロモ
デルで、ＣＤ８０およびＣＤ８６両方がＴ細胞活性化に決定的役割を果たしてい
ることが示されている。しかしながら、ＣＤ８０よりも速いＣＤ８６の発現はＣ
Ｄ８６がＴ細胞免疫応答の開始により重要な役割を果たしていることを示唆して
いる。ＣＤ８０およびＣＤ８６間の相違はＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４と共刺激
分子の結合動力学のデータにより推測できる。最近、ＣＤ８０およびＣＤ８６分
子間の機能的相違もまたＤＮＡ免疫化を含む多くのモデル系で述べられている。

【０１２４】 ＣＤ８６（しかしＣＤ８０ではない）がマウスのＤＮＡワクチン接種後に二次
的シグナルを提供するのにより重要である。しかしながら、ＣＤ８０ならびにＣ
Ｄ８６は、ミニ遺伝子をコードしているプラスミドＤＮＡで共発現された場合に
ＣＴＬ応答を促進させると報告されている。この結果は、天然の抗原よりもむし
ろ遊離のエピトープが独特に振る舞うことができることを示唆している他の報告
結果とは異なっている。異なった基からの結果の類似性は啓蒙的であり、ＣＤ８
６の発現はインビボ細胞性免疫応答の開始および広がりにおいてＣＤ８０よりも
重要であろうことを示唆している。

【０１２５】 Ｔ細胞活性化におけるＣＤ８０およびＣＤ８６分子の役割をさらに調べるため
、ＣＤ８０およびＣＤ８６のいくつかのキメラおよび欠損変異体形が構築された
（表３）。これらのプラスミドはＨＩＶ−１／ＥｎｖＤＮＡ免疫原とマウスに共
注射され、ＣＴＬ活性ならびにＴｈ１リンホカイン産生が決定された。キメラｐ
Ｖ８０Ｃ８６Ｔ８６ならびにｐＣＤ８６（ｐＣＤ８０ではない）はＴ細胞の活性
化を支持している（表４）。ＣＤ８０およびＣＤ８６Ｖドメインの両方がＴ細胞
を活性化できるのでこのことは明らかである。これらの結果はまたＣＤ８６のＣ
ドメインおよび細胞質尾部がＴ細胞活性化を支えることができることも示唆して
いる。注目すべきは、逆キメラ構築物（ｐＶ８６Ｃ８０Ｔ８０）は抗原特異的Ｔ
細胞刺激のために必要な共刺激シグナルを与えないことである。このことはＣＤ
８０のＣドメインおよび細胞質尾部はＴ細胞活性化に重要な阻害的役割を果たす
であろう可能性を生じさせる。細胞質尾部またはＣドメインを欠くＢ７分子の欠
損変異体が次に使用された。これはＴ細胞活性化または阻害におけるこれらの分
子領域の直接的役割評価を可能にする。

【０１２６】 ＣＤ８６の細胞質尾部は抗ウイルスＣＴＬ応答およびＴｈ１サイトカイン産生
に絶対的に必要であることがインビトロで観察されている（表４）。しかしなが
ら、ＣＤ８０細胞質尾部欠損分子（ｐＶ８０Ｃ８０ＴΔ）がＴ細胞活性化を誘導
できなかったことでこの分子の阻害領域をＣＤ８０Ｃドメインまたは細胞質尾部
に位置づけることを可能にしない。この疑問はマウスを免疫原およびＣドメイン
欠損ＣＤ８０分子をコードしている遺伝子で共免疫することにより解決された（
図１、２Ａおよび２Ｂ）。ｐＶ８０ＣΔＴ８０およびｐｃＥｎｖを共注射したマ
ウスで劇的なＴ細胞活性化の促進が観察された。CＤ８０の細胞質尾部は（CＤ８
８の細胞質尾部と同様に）Ｔ細胞活性化に関与しているようであり、Ｔ細胞の阻
害には関与していない。細胞質尾部は専門的ＡＰＣの表面上のこの分子の再分布
おおびオリゴマー化の両方に重要な役割を果たしている。重要なことには、イオ
ノマイシンおよび／またはＰＭＡによるＣＤ８０トランスフェクト細胞の活性化
は、３０ｋＤａホスホ蛋白質とCＤ８０細胞質尾部の会合を生じている。ＣＤ８
０架橋後、誘導的にチロシンがリン酸化された同じようなサイズの蛋白質が報告
されている。最後に、ＣＤ８６分子の引き金がＢ細胞中で新規イムノグロブリン
遺伝子の発現を活性化することが報告されている。これらの結果はＢ７分子がＡ
ＰＣに戻す直接的シグナルを提供することを強く示している。これらの結果なら
びに上に示した我々のデータに基づいて、Ｂ７はＡＰＣへの直接シグナルを提供
でき、それは順に細胞性免疫応答の活性化または阻害に重要である、ある種の分
子（サイトカイン、リンホカイン、ケモカインその他）の分泌／発現を誘導する
ことが仮定される。そのような分子の例にはＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１
２およびＴＮＦサイトカインが含まれ、それらは専門的ＡＰＣ上で産生され、免
疫活性化に有用な役割を果たしている。実際、最近これらのサイトカインはＤＮ
Ａ共免疫化の間に体液性および細胞性抗ウイルス免疫応答で直接的に示されてい
る。

【０１２７】 別の重要な観察は、ＣＤ８０（しかしＣＤ８６ではない）のＣドメインはなぜ
かＴ細胞の共刺激を阻害することである。少なくともＣドメイン欠損変異体は我
々の実験においてＴ細胞活性化を著しく増加させ（図１，２Ａ、および２Ｂ）、
一方、野生型分子はできなかった（表４）。最近の研究は、Ｔ細胞不活性化の機
構はＴＣＲの鎖によるＣＴＬＡ−４相互作用を通して仲介されることを示してい
る。従って、我々の実験はＣＤ８０のＶおよびＣドメインの両方がＣＴＬＡ−４
結合に必須であり、続いてＴＣＲを経て送られる阻害シグナルは同時に伝搬され
るＣＤ２８活性化シグナルを無効にすることを示唆している。この仮説を直接的
に試験するため、動物をＤＮＡ免疫原およびＣＤ８０およびＣＤ８６分子の組み
合わせで共免疫した。ＤＮＡ免疫原と一緒にｐＣＤ８０およびｐＣＤ８６の共注
射は、ｐＣＤ８６共刺激後に通常観察される強い抗ウイルスＣＤ８⁺ＣＤＬ応答
をなくした（図３、４）。重要なことには、ＣＤ８０分子のＣドメインを欠損形
はこの阻害シグナルを発生しなかった（図３）。従って、ＣＤ８０のＶおよびＣ
ドメインの両方を発現している分子はＴ細胞活性化を阻害するだけでなく、多分
ＣＴＬＡ−４への優先的な結合を通し、ＣＤ８０およびＣＤ８６分子両方のＶド
メインによるＣＤ２８リガンドの引き金を引くことにより提供される正のシグナ
ルに打ち勝つことができる。実際、ＣＤ２８よりもＣＴＬＡ−４シグナル伝達の
優性が示されており、そこでは同時のＣＴＬＡ−４架橋の結果としてＣＤ２８活
性化経路が直接的に阻害される。

【０１２８】 ＣＤ８０分子はＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４の両方に結合できるので、ＣＤ２
８活性化経路よりもＣＴＬＡ−４阻害経路を好む平衡に移行する重要な構造相違
がなければならない。表面プラスモン共鳴分析ではＣドメインの場合ＣＴＬＡ−
４およびＣＤ８０間の結合に１４倍の増加が測定された。この相違は実際により
高いようであり、ＣＴＬＡ−４およびＢ７の多価相互作用が起こっているのであ
ろう。ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０の個々の成分の解離速度は単一の解離と類似
している。しかしながら、ＣＤ８０は第二のＣＴＬＡ−４相互作用により保たれ
るであろうので、観察された解離速度はより遅いであろうし、それ故より安定な
ＣＴＬＡ−４／ＣＤ８０複合体を形成する。従って、もし膜ＣＤ８０または膜Ｃ
Ｄ８０Ｃドメイン欠損変異体への膜ＣＴＬＡ−の結合能の相違が計算されると、
それは１４の倍数であろう。データはＣＤ８０のＣドメインはＴ細胞活性化を防
止するだけでなく、この分子とＣＴＬＡ−４の構造機能性関係も変化させること
を明らかに示している。

【０１２９】 ＣＤ８０のＣドメイン欠損変異体をコードしている遺伝子の発現はＴ細胞活性
化を誘導するのみでなく、実験動物の筋肉内への大きな浸潤も誘導する。この浸
潤はｐＣＤ８６およびｐｃＥｎｖ共発現後に観察された浸潤よりもさらに大きか
った（図５）。最近、インビトロにおけるヒト筋肉細胞のＡＰＣ活性が報告され
た。サイトカインによる活性化後、ヒト筋原細胞は共刺激分子を発現でき、専門
的ＭＨＣクラスＩＩ限定ＡＰＣとして機能できる。加えて、Ｔ細胞活性化におけ
る筋肉細胞の影響も示されている。マウス筋肉細胞はＣＤ８６（しかしＣＤ８０
分子ではない）の発現によりＭＨＣクラスＩＩ限定ＡＰＣへ変換された。ここに
報告されているデータはｐｃＥｎｖによるＤＮＡ免疫化は注射部位内への免疫適
格細胞の少しの浸潤を誘導することを示しているとして説明できる。これらの浸
潤Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ分子および外因性ペプチドならびにＣＤ８６分子を
発現しているトランスフェクトされた筋肉細胞により活性化できる。活性化Ｔ細
胞は順にケモカイン産生するであろうので、炎症部位がより多くのＴ細胞で攻撃
される。従って、ｐｃＥｎｖ＋ｐＣＤ８６での共免疫化の場合、大きな浸潤が筋
肉組織で観察される（図５）。同じ機構がＤＮＡ免疫原およびｐＹ８０ＣΔＴ８
０での共免疫化後に適用されるであろう。しかしながら、ｐＣＤ８０およびｐｃ
Ｅｎｖの共免疫化は実験動物の筋肉組織に小さな浸潤のみしか誘導しない。もし
、ＣＤ８０分子はＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４の両方に結合できることを覚えて
いるとすれば、ＣＤ２８活性化経路よりもＣＴＬＡ−４阻害経路を好む平衡に移
行させる力がなければならない。野生型ＣＤ８０でトランスフェクトされた筋肉
細胞中のＣＤ８０のＣドメインの存在は、この組織における活性化リンパ球の浸
潤および／または増殖に非常に早期の阻害効果を持ち、ＣＴＬＡ−４への優先的
結合およびシグナル伝達を反映するようである。従って、注射部位のＴ細胞はケ
モカインを産生せずおよび免疫化領域内の他のリンパ球の移動を誘導しないであ
ろう（図５）。重要なことには、ＣＤ２８に対抗するようなＣＴＬＡ−４との相
互作用により優先的に機能する共刺激分子の一つが評価されていないであろうと
なかろうと、この相互作用の構造的基礎は未だに解明されていない。

【０１３０】 初期に、Ｂ７およびＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４分子の構造機能相関を調べた多く
の研究が部位特異的突然変異発生実験の結果を報告している。これらの研究を集
めると、ＣＴＬＡ−４結合に決定的なＣＤ８０のＶおよびＣドメインの２０残基
以上が示唆された。しかしながら、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ２８へのＣＤ８０分
子の相互作用に重要な正確な領域は決定されていない。マウスの脾臓およびリン
パ節はＣドメインを欠くＣＤ８０の別のスプライス形を持っていることが示され
ている。この天然に合成されたＩｇＶ分子はＣＤ２８＝Ｉｇに非常によく結合し
（ＣＤ８０と比較して）、しかしながら、そのＣＴＬＡ−４への結合は著しく抑
制されていた。少なくとも一つの組がＣＤ８０分子のＣドメインの欠損はＣＤ２
８＝ＩｇよりもＣＴＬＡ−４＝Ｉｇへの結合に対して大きな効果を持っていたこ
とを示している。重要なことには、ＣＤ８０のＩｇＶ様領域は、インビボで活性
化Ｔ細胞の増殖を活性化できたことである。インビボデータはＣＤ８０Ｃ欠損分
子により提供される有効な共刺激はこれらの結果を支持することを示している。
ＣＤ８０のＣドメインを発現している共刺激分子の阻害性質の説明はＣＤ２８と
比較されるように、ＣＴＬＡ−４によるＣＤ８０結合の増加した親和力をを考え
なければならない。最近の測定は、二量体ＣＴＬＡ−４へのＣＤ８０の結合親和
性は二量体ＣＤ２８よりもかなり強いことを示している。重要なことには、二量
体ＣＴＬＡ−４はＣＤ８６より強い親和力でＣＤ８０を結合する。このより強い
結合力から、この実験系においてなぜＣＴＬＡ−４誘導阻害シグナルが優性であ
るかを説明できるであろう。ＣＤ８０およびＣＤ８６のＬＴＬＡ−４結合領域の
重要な相違をさらに明らかにするため、両方のＣドメインの三次元モデルが構築
された。

【０１３１】 突然変異研究とＣＤ８０のＣドメインの三次元モデルの相関はレセプター結合
へいくつかの考察を提供する。ＣＤ８０およびＣＤ８６の両方ともＩｇ折り畳み
と配列相同性を示すことは両方とも同様のコンホメーションを採用することを示
唆している（表６）。その結果、ほとんどの突然変異分析はヒトおよびマウスＣ
Ｄ８０間の保存された残基およびＣＤ８０およびＣＤ８６間で保存された残基に
焦点を当ててきた。ＣＤ８０のＣドメイン中のいくつかの保存された残基がＣＴ
ＬＡ−４＝Ｉｇの結合に決定的であるようである（表６）。

【０１３２】 Ｑ１５７、Ｄ１５８，Ｅ１６２およびＬ１６３が鎖ＤおよびＥ間のループ中の
ドメインのアミノ末端および鎖Ｅの開始部位近傍に表面接近可能位置で空間的に
集合していることが確立された。他の残基（Ｆ１０８、Ｐ１１１およびＩ１１３
）は鎖Ａに位置している（表６参照）。突然変異分析に基づいて構築された第二
のモデルもまたＢ−Ｃループ中のＰ１３５およびＰ１３７ならびにＤ−Ｅループ
中のＱ１５７、Ｄ１５８およびＰ１５９のＣＴＬＡ−４に対する決定的役割を示
している。集合的に、レセプター結合に重要な残基はＡＢＣＥＤに位置しており
、ＩｇＣドメインに向けられている。

【０１３３】 図６はＣＤ８０分子のＣαをたどったものであり、ＣＴＬＡ−４結合領域残基
はＣＰＫ表現で示されており、Ｂ−Ｃループアミノ酸Ｐ１３５およびＰ１３７お
よびＤ−Ｅループ残基Ｑ１５７、Ｄ１５８およびＰ１５９が示されている。ＣＤ
８６の対応するモデルにおいては、表６および図６でイタリック体で示された４
残基挿入１４４−１４７（ＫＫＭＳ）が存在する。ＣＤ８６におけるこの挿入は
結合領域が有意に小さくなるように、ＣＤ８０と比較するとこの分子のＢ−Ｃル
ープのコンホメーションを変化させる。その挿入のため、Ｐ１５９およびＰ１３
５間の距離はＣＤ８０における１６ÅからＣＤ８６の対応する残基では１２Åへ
減少する。加えて、Ｑ１５７およびＰ１３７間の距離はＣＤ８０における１３Å
からＣＤ８６の対応する残基では１０Åへ減少する。従って、この挿入はＣＤ８
６分子におけるＣＴＬＡ−４結合の全表面領域をＣＤ８０の同じ領域よりも著し
く小さくするように、ＣＤ８０と比較してＣＤ８６分子のＢ−Ｃループのコンホ
メーションを変化させている（図６を比較されたい）。従って、ＣＤ８０および
ＣＤ８６のモデル形成は、これらの分子おいてＢ−Ｃループのコンホメーション
が異なっており、およびＣＤ８６におけるＫＫＭＳ挿入物はＣＴＬＡ−４への結
合親和性を減少させるのに重要な役割を果たしており、およびその結果、Ｔ細胞
を標的化している阻害シグナルが減少できることが示唆される。

【０１３４】 要約すると、ＣＤ８０のＶおよびＣドメインの結合／機能部位およびＣＴＬＡ
−４および／またはＣＤ２８リガンドへのＣＤ８６分子の低い利用度合いに関す
る矛盾は異なった実験室で使用された異なった抗原および実験系により説明され
るであろう。例えば、Ｔ細胞共刺激の多くの結果は抗ＣＤ３モノクローナル抗体
（第一のシグナル）およびＢ７（ＣＤ８０＝Ｉｇ，ＣＤ８６＝Ｉｇ）分子の可溶
性形（第二のシグナル）で得られている。このモデルは非常に重要なデータを生
み出す。しかしながら、最近公表された結果は共刺激分子のオリゴマー形を発現
する細胞のみがＴ細胞活性化を駆動できることを示している。一方、Ｔ細胞の共
刺激のためのＣＤ８０およびＣＤ８６トランスフェクト細胞の使用さえ最適モデ
ルとは考えられていない。ＣＴＬＡ−４は抗ＣＤ３および膜結合ＣＤ８０分子に
より引き金が引かれた後にＴＣＲζと相互作用すると報告されている。これらの
結果は適切なモデルはＭＨＣクラスＩ／ＩＩおよびＣＤ８０／ＣＤ８６を発現し
ているＡＰＣとＴＣＲおよびＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４を発現しているＴ細胞の相
互作用を含まなければならないことを示唆している。従って、ＡＰＣおよびＴ細
胞相互作用のためのインビボ生理学的条件がＴ細胞共刺激の機構を発見するため
にはより適切なものであろう。このモデル系を使用して、ＣＤ８０およびＣＤ８
６間、ならびにＣＤ８０分子のＶおよびＣドメイン間の機能的相違が示された。

【０１３５】 本研究はＴ細胞免疫応答制御のための新しい方法の開発に重要な情報を提供す
る。特に、Ｂ７リガンドの一つの形が、多分抗原特異的Ｔ細胞上に発現されるＣ
ＴＬＡ−４分子を優先的に誘発することにより、進行しているヒト免疫応答を不
活性化できるＶおよびＣドメインの両方を例えば含むように提供できる。そのよ
うな構築物は移植寛容性または自己免疫疾患の処置において重要な応用を持って
いる。逆に、Ｔ細胞活性化を阻害する能力が減少しているＣＤ８０のＶドメイン
の提供を通して、より有効な腫瘍ワクチン接種が共免疫化で得られる。加えて、
本明細書に記載した分子補助剤を使用して、改良された細胞性免疫を標的とした
ワクチンが提供されるであろう。

【０１３６】

【表１】 表１ ピコルナウイルスファミリー 属： ライノウイルス：（医学）感冒の〜５０％の場合に原因である エンテロウイルス：（医学）ポリオウイルス、コクサキーウイル ス、エコーウイルスおよびＡ型肝炎ウイルスのようなヒトエンテ ロウイスル アプトウイルス：（獣医学）これらは脚および口疾患ウイルスで ある 標的抗原：ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４、ＶＰＧ カルシウイルスファミリー 属： ウイルスのノーウォーク群：（医学）これらのウイルスは流行性 胃腸炎の重要な原因因子である トガウイルスファミリー 属： アルファウイルス：（医学および獣医学）例にはシンドビスウイ ルス、ロスリバーウイルスおよび東部＆西部ウマ脳炎が含まれる レオウイルス：（医学）ルベラウイルス フラリビリデゥーファミリー （医学）例にはデング熱、黄熱病、日本脳炎、セントルイス脳炎 およびダニ媒介脳炎ウイルス Ｃ型肝炎ウイルス （医学）これらのウイルスは未だにファミリーには加えられてい ないが、トガウイルスまたはフラビウイルスであると信じられて いる。トガウイルスに最も類似している。 コロナウイルスファミリー （医学および獣医学） 伝染性気管支炎ウイルス（家禽） ブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ブタ） ブタ赤血球凝集性脳脊髄炎（ブタ） ネコ感染性腹膜炎（ネコ） ネコ腸コロナウイルス（ネコ） イヌコロナウイルス（イヌ） ヒト呼吸コロナウイルスは感冒の〜４０％の場合を起こす、ＥＸ ．２２４Ｅ，０Ｃ４３ 注−コロナウイルスは非Ａ、ＢまたはＣ型肝炎を起こすかもしれ ない 標的抗原：Ｅ１−Ｍまたはマトリックス蛋白質とも呼ばれる Ｅ２−Ｓまたはスパイク蛋白質とも呼ばれる Ｅ３−ＨＥまたはヘマグルチン−エルテロース糖蛋白質（すべ てのコロナウイルスには存在しない） Ｎ−ヌクレオカプシド ラブドウイルスファミリー 属： ベシリオウイルス 狂犬病ウイルス：（医学および獣医学） 標的抗原： Ｇ蛋白質 Ｎ蛋白質 フィロビリデゥーファミリー ： （医学） マールブルグおよびエボラウイルスのような出血性熱ウイルス
パラミクソウイルスファミリー 属： パラインフルエンザウイルス タイプ１ パラインフルエンザウイルス タイプ３ ウシパラインフルエンザウイルス タイプ３ ルブラウイルス：（医学および獣医学） 流行性耳下腺炎ウイルス、パラインフルエンザウイルス タイ プ２、パラインフルエンザウイルス タイプ４、ニューカッス ル病ウイルス（ニワトリで重要な病原体） ニューミンウイルス：（医学および獣医学） 呼吸系発病ウイルス オルトミクソウイルスファミリー （医学） インフルエンザウイルス ブンヤウイルスファミリー 属： ブンヤウイルス：（医学）カリフォルニア脳炎、ラクロス、 静脈ウイルス：（医学）リフトバレー熱 ハンタウイルス：プレマラはヘマガギン熱ウイルス ナイロウイルス（獣医学）ナイロビシープ疾患 多くの未帰属のブンヤウイルスも アレナウイルスファミリー （医学） ＬＣＭ、ラサ熱ウイルス レオウイルスファミリー 属： レオウイルス：潜在的ヒト病原体 ロタウイルス：子供における急性胃腸炎 オルビウイルス：（医学および獣医学） クルチウイルス：コロラドダニ熱、レボンボ（ヒト）ウマ脳炎 、ブルータング レトロウイルスファミリー サブファミリー：オンコウイルス：（獣医学）（医学）ネコ白血病ウイル ス，ＨＴＬＶＩおよびＨＴＬＶＩＩ レンチウイルス：（医学および獣医学）ＨＩＶ、ネコ免 疫不全ウイルス、ウマ感染、貧血ウイルス スプマウイルス パポバウイルスファミリー サブファミリー：ポリオーマウイルス：（医学）ＢＫＵおよびＪＣＵウイ ルス サブファミリー：パピローマウイルス：（医学）癌またはパピローマの悪 性進行に関係する多くのウイルス型 アデノウイルス（医学） ＥＸ ＡＤ７、ＡＲＤ、ＯＢ−呼吸系疾患を起こす−２ ７５のようないくつかのアデノウイルスは腸炎を起こす
パルボウイルスファミリー（獣医学） ネコパルボウイルス：ネコ腸炎を起こす ネコ汎白血球減少症ウイルス イヌパルボウイルス ブタパルボウイルス ヘルペスウイルスファミリー サブファミリー：アルファヘルペスウイルス 属： 単純ウイルス（医学） ＨＳＶＩ、ＨＳＶＩＩ 水痘ウイルス：（医学および獣医学）仮性狂犬病ウイル ス−水痘-帯状疱疹ウイルス サブファミリー：ベータヘルペスウイルス 属： サイトメガロウイルス（医学） ＨＣＭＶ ムロメガロウイルス サブファミリー：ガンマヘルペスウイルス 属： リンホクリプトウイルス（医学） ＥＢＶ−（バーキットリンパ）ラジノウイルス ポックスウイルスサブファミリー サブファミリー：脊髄ポックスウイルス（医学および獣医学） オルトポックスウイルス 痘瘡（痘瘡） 痘瘡（牛痘） パラポックスウイルス−（獣医学） オイポックスウイルス−（獣医学） レポリポックスウイルス スイポックスウイルス サブファミリー：エンテモポックスウイルス ヘパドナウイルスファミリー：Ｂ型肝炎ウイルス 未同定：デルタ肝炎ウイルス。

【０１３７】

【表２】 表２ 細菌病原体 病原性グラム陽性球菌には：肺炎球菌；ブドウ球菌；および連鎖球菌が含まれ
る。病原性グラム陰性球菌には：髄膜炎菌；および淋菌が含まれる。

【０１３８】 病原性グラム陰性杆菌には：腸内菌科、プソイドモナス、アシネトバクターお
よびエイケネラ；類鼻疽；サルモネラ；シゲラ症；ヘモフィラス症；モラクセラ
；軟性下疳；ブルセラ症；野兎病；エルシニア（パスツレラ）；ストレプトバシ
ラス モニリホルミスおよびスピリルム；リステリア菌；豚丹毒菌；ジフテリア
；コレラ；炭疽；ドノヴァン症（鼠径部肉芽腫）およびバルトネラ症が含まれる
。

【０１３９】 病原性嫌気性菌には：破傷風；ボツリヌス中毒症；他のクロストリジウム属；
結核；らい；およびその他のミコバクテリアが含まれる。病原性スピロヘータ症
には梅毒；トレポネマトーセス；苺腫；熱帯白斑性皮膚病および地方流行性梅毒
；およびレプトスピラ症が含まれる。

【０１４０】 より高等な細菌および病原性真菌により起こされるその他の感染には：放線菌
症；ノルカジア症；酵母菌症；分芽菌症；ヒストプラズマ症およびコクシジオイ
デス症；カンジダ症；アスペルギルス病および毛菌症；スポロトリコーシス；パ
ラコクシジオイデス症、ペエトリエリジウム症、トルロプシス症、菌腫およびク
ロモミセス症；および皮膚糸状菌症が含まれる。

【０１４１】 リケッチア感染にはリケッチアおよびリケッチア症が含まれる。 マイコプラズマおよびクラミジア感染の例には：マイコプラズマ肺炎；鼠径リ
ンパ肉芽腫；オウム病および出産期クラミジア感染が含まれる。 病原性真核生物 病原性原虫および蠕虫およびそれらによる感染には：アメーバ赤痢；マラリア
；リーシュマニア症；トリパノソーマ症；トキソプラズマ症；ニューモシスチス カリニ；バベシア症；ジアルジア症；旋毛虫症；フィラリア；住血吸虫症；線
虫症；吸虫症または吸虫類；および条虫（サナダムシ）感染が含まれる。

【０１４２】

【表３】

【０１４３】

【表４】

【０１４４】

【表５】

【０１４５】

【表６】

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は抗原特異的抗ウイルスＣＴＬ応答を示している実施例に記
載された実験からのデータを示している。

【図２】 図２Ａおよび２Ｂは種々の構築物により誘導されたリンホカイン
産生を示している実施例に記載された実験からのデータを示している。

【図３】 図３は構築物投与後のＣＴＬ活性を示している実施例に記載され
た実験からのデータを示している。

【図４】 図４はこの集団の細胞除去後に測定された構築物投与後のＣＴＬ
活性を示している実施例に記載された実験からのデータを示している。

【図５】 図５は構築物で免疫されたマウスの筋肉内へのリンパ球の浸潤を
示している実施例に記載された実験からの写真である。

【図６】 図６はＣＤ８０分子を図で示したものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 37/00 Ｃ０７Ｋ 14/705 37/06 19/00 Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 19/00 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ， ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，Ｋ Ｐ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ， ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，Ｓ Ｇ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (71)出願人 ホルタマン，マーク アメリカ合衆国イリノイ州60612，シカゴ， サウス・ウッド・ストリート 840，ユニ バーシティ・オブ・イリノイ (72)発明者 セカリー，ラフィック・ピー カナダ国ケベック アッシュ４エム ２エ ス２，サン・ローラン，オグラディ 2740 (72)発明者 ホルタマン，マーク アメリカ合衆国イリノイ州60612，シカゴ， サウス・ウッド・ストリート 840，ユニ バーシティ・オブ・イリノイ (72)発明者 ウェイナー，デイヴィッド・ビー アメリカ合衆国ペンシルバニア州19066， メリオン・ステイション，ビーカン・レイ ン 717 (72)発明者 アガドジャニアン，マイケル・ジー アメリカ合衆国ペンシルバニア州19116， フィラデルフィア，ケヴィン・コート 353 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA80 CA04 DA05 EA04 GA11 HA01 4C084 AA02 AA07 AA13 BA44 CA53 CA62 DC50 NA14 ZB012 ZB082 4C085 AA03 AA16 CC32 EE01 4C087 AA02 BC83 NA14 ZB01 ZB08 4H045 AA10 AA20 AA30 BA10 BA41 CA40 DA50 EA31 FA72 FA74

Claims (40)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ８０Ｖ、８０ｔｍおよび８０ｃｔの少なくとも一つを含み、
   ８０Ｃを含んでいない単離された蛋白質； ここで該蛋白質は８０Ｖかまたは８６Ｖまたは両方を含み、および任意に８６
   Ｃ、８０ｔｍ、８６ｔｍ、８０ｃｔおよび８６ｃｔの一つまたはそれ以上を含ん
   でおり、ここで： ８０ＶはＣＤ８０の変異ドメインまたはその機能的断片であり； ８６ＶはＣＤ８６の変異ドメインまたはその機能的断片であり； ８６ＣはＣＤ８６のＣドメインまたはその機能的断片であり； ８０ｔｍはＣＤ８０の膜貫通領域またはその機能的断片であり； ８６ｔｍはＣＤ８６の膜貫通領域またはその機能的断片であり； ８０ｃｔはＣＤ８０の細胞質尾部またはその機能的断片であり；および ８６ｃｔはＣＤ８６の細胞質尾部またはその機能的断片である。
2. 【請求項２】 ８０ＶはＣＤ８０の変異ドメインであり； ８６ＶはＣＤ８６の変異ドメインであり； ８６ＣはＣＤ８６のＣドメインであり； ８０ｔｍはＣＤ８０の膜貫通領域であり； ８６ｔｍはＣＤ８６の膜貫通領域であり； ８０ｃｔはＣＤ８０の細胞質尾部であり；および ８６ｃｔはＣＤ８６の細胞質尾部である請求項１に記載の単離された蛋白質。
3. 【請求項３】 次式を持つ請求項１に記載の単離された蛋白質： Ｒ¹−Ｒ²−Ｒ³−Ｒ⁴−Ｒ⁵−Ｒ⁶−Ｒ⁷−Ｒ⁸−Ｒ⁹ 式中 Ｒ¹は０−５０アミノ酸であり； Ｒ²は８０Ｖまたは８６Ｖであり； Ｒ³は０−５０アミノ酸であり； Ｒ⁴は８６Ｃまたは０アミノ酸であり； Ｒ⁵は０−５０アミノ酸であり； Ｒ⁶は８０ｔｍまたは８６ｔｍであり； Ｒ⁷は０−５０アミノ酸であり； Ｒ⁸は８０ｃｔまたは８６ｃｔであり；および Ｒ⁹は０−５０アミノ酸である。
4. 【請求項４】 式中： Ｒ¹は０−２５アミノ酸であり； Ｒ³は０−２５アミノ酸であり； Ｒ⁵は０−２５アミノ酸であり； Ｒ⁷は０−２５アミノ酸であり；および Ｒ⁹は０−２５アミノ酸である請求項３に記載の単離された蛋白質。
5. 【請求項５】 式中： Ｒ¹は０−１０アミノ酸であり； Ｒ³は０−１０アミノ酸であり； Ｒ⁵は０−１０アミノ酸であり； Ｒ⁷は０−１０アミノ酸であり；および Ｒ⁹は０−１０アミノ酸である請求項３に記載の単離された蛋白質。
6. 【請求項６】 ８０Ｖ／ｄｅｌｅ／８０ｔｍ／８０ｃｔ；８０Ｖ／ｄｅｌｅ
   ／８０ｔｍ／８６ｃｔ；８０Ｖ／ｄｅｌｅ／８６ｔｍ／８０ｃｔ；８６Ｖ／ｄｅ
   ｌｅ／８０ｔｍ／８０ｃｔ；８６Ｖ／ｄｅｌｅ／８０ｔｍ／８６ｃｔ；８６Ｖ／
   ｄｅｌｅ／８６ｔｍ／８０ｃｔ；８０Ｖ／ｄｅｌｅ／８６ｔｍ／８６ｃｔ；８０
   Ｖ／８６Ｃ／８０ｔｍ／８０ｃｔ；８０Ｖ／８６Ｃ／８０ｔｍ／８６ｃｔ；８０
   Ｖ／８６Ｃ／８６ｔｍ／８０ｃｔ；８６Ｖ／８６Ｃ／８０ｔｍ／８０ｃｔ；８６
   Ｖ／８６Ｃ／８０ｔｍ／８６ｃｔ；８６Ｖ／８６Ｃ／８６ｔｍ／８０ｃｔ；８０
   Ｖ／８６Ｃ／８６ｔｍ／８６ｃｔ；８０Ｖ／ｄｅｌｅ／８０ｔｍ／ｄｅｌｅ；８
   ０Ｖ／ｄｅｌｅ／８６ｔｍ／ｄｅｌｅ；８６Ｖ／ｄｅｌｅ／８０ｔｍ／ｄｅｌｅ
   ；８０Ｖ／８６Ｃ／８０ｔｍ／ｄｅｌｅ；８０Ｖ／８６Ｃ／８６ｔｍ／ｄｅｌｅ
   ；８６Ｖ／８６Ｃ／８０ｔｍ／ｄｅｌｅ；８６Ｖ／８６Ｃ／８０ｔｍ／ｄｅｌｅ
   ；８６Ｖ／８６Ｃ／ｄｅｌｅ／８０ｃｔ；８０Ｖ／８６Ｃ／ｄｅｌｅ／８０ｃｔ
   ；８０Ｖ／ｄｅｌｅ／ｄｅｌｅ／８０ｃｔ；８６Ｖ／ｄｅｌｅ／ｄｅｌｅ／８０
   ｃｔ；８６Ｖ／８６Ｃ／ｄｅｌｅ／ｄｅｌｅ；および８０Ｖから成る群より選択
   される請求項１に記載の蛋白質。
7. 【請求項７】 請求項１−６の任意の項の蛋白質部分および免疫原性部分か
   ら成るキメラ蛋白質。
8. 【請求項８】 請求項１−７の任意の項の蛋白質および免疫原性蛋白質また
   は免疫原をコードしているコード配列を含んでいる核酸分子を含んでいる組成物
   、ここで該コード配列は作動可能なように制御要素に結合されている。
9. 【請求項９】 請求項１−７の任意の項の蛋白質をコードしているコード配
   列を含む核酸分子、ここで該コード配列は作動可能なように制御要素に結合され
   ている。
10. 【請求項１０】 請求項９に記載の核酸分子を含んでいるプラスミド。
11. 【請求項１１】 さらに免疫原をコードしているコード配列を含んでいる請
    求項１０に記載のプラスミド、ここで該コード配列は作動可能なように制御要素
    に結合されている。
12. 【請求項１２】 さらに免疫原性蛋白質または免疫原をコードしているコー
    ド配列を含んでいる核酸配列を含んでいるプラスミドを含んでいる請求項１０ま
    たは１１に記載のプラスミドを含んでいる組成物、ここで該コード配列は作動可
    能なように制御要素に結合されている。
13. 【請求項１３】 請求項９に記載の核酸分子を含んでいる組成物を含んでい
    る組換えワクチンまたは弱毒化ワクチン。
14. 【請求項１４】 請求項１−１３の任意の項の主題物を含んでいる組換えワ
    クチン組成物または弱毒化ワクチン組成物。
15. 【請求項１５】 請求項１−１４の任意の項の主題物を含んでいる医薬組成
    物。
16. 【請求項１６】 請求項１−１５の任意の項に従った組成物を含んでいる組
    成物を投与することからなる免疫原に対して個体を免疫する方法。
17. 【請求項１７】 該免疫化が予防的である請求項１６に記載の方法。
18. 【請求項１８】 該免疫化が治療的である請求項１６に記載の方法。
19. 【請求項１９】 該免疫原がアレルゲンである請求項１６に記載の方法。
20. 【請求項２０】 該免疫原が病原体抗原である請求項１６に記載の方法。
21. 【請求項２１】 該免疫原が自己免疫疾患に関係する抗原である請求項１６
    に記載の方法。
22. 【請求項２２】 該免疫原が過増殖性疾患に関係する抗原である請求項１６
    に記載の方法。
23. 【請求項２３】 少なくともＣＤ８０のＣ領域またはその機能的断片を含ん
    でいる単離された非ＣＤ８０蛋白質。
24. 【請求項２４】 少なくともＣＤ８０のＣ領域を含んでいる請求項２３に記
    載の単離された非ＣＤ８０蛋白質。
25. 【請求項２５】 次式を持っている請求項２３に記載の単離された非ＣＤ８
    ０蛋白質： Ｒ¹−Ｒ²−Ｒ³−Ｒ⁴−Ｒ⁵−Ｒ⁶−Ｒ⁷−Ｒ⁸−Ｒ⁹ 式中 Ｒ¹は０−５０アミノ酸であり； Ｒ²は８０Ｖまたは８６Ｖであり； Ｒ³は０−５０アミノ酸であり； Ｒ⁴は８６Ｃまたは０アミノ酸であり； Ｒ⁵は０−５０アミノ酸であり； Ｒ⁶は８０ｔｍまたは８６ｔｍであり； Ｒ⁷は０−５０アミノ酸であり； Ｒ⁸は８０ｃｔまたは８６ｃｔであり；および Ｒ⁹は０−５０アミノ酸であり、 ここで ８０ＶはＣＤ８０の変異ドメインまたはその機能的断片であり； ８６ＶはＣＤ８６の変異ドメインまたはその機能的断片であり； ８０ＣはＣＤ８０のＣドメインまたはその機能的断片であり； ８０ｔｍはＣＤ８０の膜貫通領域またはその機能的断片であり； ８６ｔｍはＣＤ８６の膜貫通領域またはその機能的断片であり； ８０ｃｔはＣＤ８０の細胞質尾部またはその機能的断片であり；および ８６ｃｔはＣＤ８６の細胞質尾部またはその機能的断片である。
26. 【請求項２６】 式中： Ｒ¹は０−２５アミノ酸であり； Ｒ³は０−２５アミノ酸であり； Ｒ⁵は０−２５アミノ酸であり； Ｒ⁷は０−２５アミノ酸であり；および Ｒ⁹は０−２５アミノ酸である請求項２５に記載の単離された蛋白質。
27. 【請求項２７】 式中： Ｒ¹は０−１０アミノ酸であり； Ｒ³は０−１０アミノ酸であり； Ｒ⁵は０−１０アミノ酸であり； Ｒ⁷は０−１０アミノ酸であり；および Ｒ⁹は０−１０アミノ酸である請求項２５に記載の単離された蛋白質。
28. 【請求項２８】 Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−８０Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ； Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８０ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８０ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ； Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ； Ｒ−ｄｅｌｅ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ；および Ｒ−８６Ｖ−Ｒ−８０Ｃ−Ｒ−８６ｔｍ−Ｒ−８６ｃｔ−Ｒ； から成る群より選択される式を持っている請求項２３に記載の単離された非ＣＤ
    ８０蛋白質； 式中 ８０ＶはＣＤ８０の変異ドメインまたはその機能的断片であり； ８６ＶはＣＤ８６の変異ドメインまたはその機能的断片であり； ８０ＣはＣＤ８０のＣドメインまたはその機能的断片であり； ８０ｔｍはＣＤ８０の膜貫通領域またはその機能的断片であり； ８６ｔｍはＣＤ８６の膜貫通領域またはその機能的断片であり； ８０ｃｔはＣＤ８０の細胞質尾部またはその機能的断片であり； ８６ｃｔはＣＤ８６の細胞質尾部またはその機能的断片であり； ｄｅｌｅは０アミノ酸であり；および Ｒは各々独立して０−１００アミノ酸である。
29. 【請求項２９】 Ｒが各々独立して０−５０アミノ酸である請求項２８に記
    載の単離された非ＣＤ８０蛋白質。
30. 【請求項３０】 Ｒが各々独立して０−３０アミノ酸である請求項２８に記
    載の単離された非ＣＤ８０蛋白質。
31. 【請求項３１】 Ｒが各々独立して０−２０アミノ酸である請求項２８に記
    載の単離された非ＣＤ８０蛋白質。
32. 【請求項３２】 変異ドメインが欠損された変異体ＣＤ８０； 変異ドメインが欠損されおよび細胞質尾部が欠損された変異体ＣＤ８０； 細胞質尾部が欠損された変異体ＣＤ８０； 膜貫通領域が欠損されおよび細胞質尾部が欠損された変異体ＣＤ８０； ＣＤ８０変異ドメインの代わりにＣＤ８６変異ドメインが置換された変異体Ｃ
    Ｄ８０； ＣＤ８０変異ドメインの代わりにＣＤ８６変異ドメインが置換されおよび細胞
    質尾部が欠損された変異体ＣＤ８０； ＣＤ８０変異ドメインの代わりにＣＤ８６変異ドメインが置換されおよび膜貫
    通領域が欠損されおよび細胞質尾部が欠損された変異体ＣＤ８０； ＣＤ８０膜貫通領域の代わりにＣＤ８６膜貫通領域が置換された変異体ＣＤ８
    ０； 変異ドメインが欠損されおよびＣＤ８０膜貫通領域の代わりにＣＤ８６膜貫通
    領域が置換された変異体ＣＤ８０； 変異ドメインが欠損され、細胞質尾部が欠損されおよびＣＤ８０膜貫通領域の
    代わりにＣＤ８６膜貫通領域が置換された変異体ＣＤ８０； 細胞質尾部が欠損されおよびＣＤ８０膜貫通領域の代わりにＣＤ８６膜貫通領
    域が置換された変異体ＣＤ８０； ＣＤ８０細胞質尾部の代わりにＣＤ８６細胞質尾部が置換された変異体ＣＤ８
    ０； 変異ドメインが欠損されおよびＣＤ８０細胞質尾部の代わりにＣＤ８６細胞質
    尾部が置換された変異体ＣＤ８０； ＣＤ８０変異ドメインの代わりにＣＤ８６変異ドメインが置換されおよびＣＤ
    ８０膜貫通領域の代わりにＣＤ８６膜貫通領域が置換された変異体ＣＤ８０； ＣＤ８０変異ドメインの代わりにＣＤ８６変異ドメインが置換されおよびＣＤ
    ８０細胞質尾部の代わりにＣＤ８６細胞質尾部が置換された変異体ＣＤ８０； ＣＤ８０変異ドメインの代わりにＣＤ８６変異ドメインが置換されおよびＣＤ
    ８０膜貫通領域の代わりにＣＤ８６膜貫通領域が置換されおよび細胞質尾部が欠
    損された変異体ＣＤ８０； 変異ドメインが欠損されおよびＣＤ８０膜貫通領域の代わりにＣＤ８６膜貫通
    領域が置換されおよびＣＤ８０細胞質尾部の代わりにＣＤ８６細胞質尾部が置換
    された変異体ＣＤ８０；および ＣＤ８０変異ドメインの代わりにＣＤ８６変異ドメインが置換されおよびＣＤ
    ８０膜貫通領域の代わりにＣＤ８６膜貫通領域が置換されおよびＣＤ８０細胞質
    尾部の代わりにＣＤ８６細胞質尾部が置換された変異体ＣＤ８０； から成る群より選択される請求項２３に記載の単離された非ＣＤ８０蛋白質。
33. 【請求項３３】 請求項２３から３２の任意の項に記載の蛋白質をコードし
    ているコード配列を含む核酸分子、ここで該コード配列は作動可能なように制御
    要素に結合されている。
34. 【請求項３４】 請求項３３に記載の核酸分子を含んでいるプラスミド。
35. 【請求項３５】 請求項３４のプラスミドおよび／または請求項２３から３
    ２の任意の項に記載の蛋白質を含んでいる組成物。
36. 【請求項３６】 請求項３３に記載の核酸分子を含んでいる組成物を含んで
    いる組換えベクター。
37. 【請求項３７】 請求項２３−３６の任意の項の主題物を含んでいる医薬組
    成物。
38. 【請求項３８】 請求項２３−３７の任意の項に従った組成物を含んでいる
    組成物を投与することからなる個体の免疫抑制法。
39. 【請求項３９】 該個体が自己免疫疾患を持っている請求項３８に記載の方
    法。
40. 【請求項４０】 該個体が移植法を受けた、受けているまたは受けかけてい
    る請求項３８に記載の方法。