JP2002542486A

JP2002542486A - 腫瘍形成のマーカーとしてのテネイシン−ｃアイソフォーム

Info

Publication number: JP2002542486A
Application number: JP2000612753A
Authority: JP
Inventors: ザルディ・ルチアノ
Original assignee: ピロゲンソシエタアレスポンサビリタリミタータ
Priority date: 1999-04-20
Filing date: 2000-04-19
Publication date: 2002-12-10
Anticipated expiration: 2020-04-19
Also published as: EP1173766B1; ITFI990094A1; DE60014064D1; ITFI990094A0; IT1307864B1; DK1173766T3; EP1173766A1; CA2370666C; ATE277352T1; CA2370666A1; DE60014064T2; AU4401500A; WO2000063699A1; ES2226823T3; JP4577665B2; AU779015B2; US7109301B1

Abstract

(57)【要約】ＴＮ−ＣのｃＴＮ−Ｃアイソフォームを決定することに基づく、ヒト腫瘍を同定するための診断方法；前記方法において使用される断片抗体及びそれらの結合体；並びに治療のためにそれらを使用する方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（発明の分野）本発明は、組換えヒト抗体の断片(fragments)を用いてヒト腫瘍(neoplasias,
新生物)形成を非常に特異的に同定することのできる診断方法と、それら断片と
、それら断片の結合体(conjugates)とに関する。本発明はまた、治療的に有用な
製剤を調製するときに、それらの断片及び結合体を使用することにも関する。

【０００２】（当該技術の状況）腫瘍が成長する間、正常組織の細胞外マトリックス（以下「ＥＣＭ」という）
（腫瘍はＥＣＭにおいて成長する）は、新たな成分の合成及びタンパク質減成(p
roteolytic degradation)の諸過程によって再構築される(remodelled, 改造され
る)。腫瘍のＥＣＭ成分は、量的且つ質的な面で正常組織のＥＣＭ成分と相違する。
そして、このＥＣＭ成分は、腫瘍の発育・分化における主要な役割を果たす脈管
形成の間、腫瘍の成長と発育・分化を助ける条件を創り出す一因となる。

【０００３】テネイシン−Ｃ（以下「ＴＮ−Ｃ」という）は、ジスルフィド結合によって連
結された６個の類似サブユニットから成る糖タンパク質である。それは、単一遺
伝子によってコードされ(coded)、単一のプロモーター（促進因子）によって調
節される。「III型フィブロネクチンドメイン」（以下「ＦＮIII」と呼ぶ）と相同の９個
のタンパク質ドメイン(domains)は、選択的スプライシング(alternative splici
ng)として知られている機構によって、ヒトＴＮ−ＣのｍＲＮＡの中に含ませる
か、又はその中から取り除くことが可能であり、これらタンパク質ドメインは、
種々のタンパク質アイソフォーム(isoform, イソ型)を生じさせる。

【０００４】ＴＮ−Ｃアイソフォームは成人の正常組織の中に豊富に存在すること、及び上
記の９個のドメインのほとんど又は全てを含有するＴＮ−Ｃアイソフォームは腫
瘍組織中に非常に広く発現される(expressed)ことも知られている。現在入手可能な、ＴＮ−Ｃアイソフォームを同定するのに適した試薬は、それ
だけではヒトに使用するのが適切でないマウスのモノクローナル抗体（例えば、
免疫シンチグラフィー）であり；更に、それら試薬は、腫瘍組織及び健全な組織
の中に存在するアイソフォームと無差別的に反応する。

【０００５】従って、腫瘍組織中に単独で存在するアイソフォームの同定を可能にする方法
と試薬とを開発することは、非常に重要であることは明らかである。それらを開
発することによって、実際、非常に正確で特異性のある診断が可能となり、同時
に、薬剤又はもう１つの作用因子(effector)が、治療目的で腫瘍のみに到達する
ことが可能となる。

【０００６】ドメインＣを含有するヒトＴＮ−Ｃアイソフォーム（以下「ｃＴＮ−Ｃ」とい
う）は、脈管構造において、高い段階のアストロサイトーマ増殖性細胞(astrocy
toma proliferating cells)（第III期）及びグリオブラストーマ(glioblastoma,
多形性神経膠芽腫)の近辺に大きく発現される。当該アイソフォームはまた、ヒ
トの肺腫瘍の脈管構造中に広く発現されるが、それらアイソフォームは、通常の
成人組織のいかなる組織にも検出されない。

【０００７】従って本発明は、ＴＮ−ＣのｃＴＮ−Ｃアイソフォームの存在を決定すること
に基づいて、生体内(in vivo)及び生体外(in vitro)における腫瘍組織を同定す
る方法に関する。本発明はまた、ｃＴＮ−Ｃ及びそれの結合体を認識することのできるリガンド
にも関する。本明細書において、用語「リガンド(ligands)」は、抗体；又はそれらの断片(
fragments, フラグメント)；又は他のあらゆる分子であってｃＴＮ−Ｃを認識す
ることができ、それ自体がｃＴＮ−Ｃと結合することのできる分子；を意味する
ものとして使用する。

【０００８】特に、本発明による「リガンド」は、組換えヒト抗体の断片であり、一層詳し
くは、ｓｃＦｖ断片である。実際、ｓｃＦｖ断片としての、ヒト抗体の小さい断
片は、従来の免疫グロブリンと比較して、肝臓には蓄積されず、免疫性ではなく
、組織内への一層優れた浸透を示す。

【０００９】本発明による有用な結合体は、既知技術により、一定の診断目的及び／又は治
療目的に適した分子に、ｃＴＮ−Ｃのためのリガンドを生化学的又は遺伝的に結
合させることによって得ることができる。リガンドとの結合に適した分子は、例
えば、放射性同位元素、蛍光物質、サイトカイン、毒素、光線感作物質、凝塊形
成剤等である。

【００１０】本発明による結合体を造るためには、上述のリガンド及びペプチド、又は他の
非タンパク性分子を使用することができる。本発明による、組換えヒト抗体ｓｃＦｖによって表わされるリガンドであって、
その配列が表１（ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．１）に記される該リガンド（以下「ＴＮ
１１」という）は、とりわけ興味深い。

【００１１】表１ＤＮＡ配列から推定されるＴＮ１１配列 1/1 31/11 CAG GTG CAG CTG GTG CAG TCT GGG GCT GAG GTG AAG AAG CCT GGG TCC TCG GTG
AAG GTC Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V
K V 61/21 91/31 TCC TGC AAG GCT TCT GGA GGC ACC TTC AGC AGC TAT GCT ATC AGC TGG GTG CGA
CAG GCC S C K A S G G T F S S Y A I S W V R
Q A 121/41 151/51 CCT GGA CAA GGG CTT GAG TGG ATG GGA GGG ATC ATC CCT ATC TTT GGT ACA GCA
AAC TAC P G Q G L E W M G G I I P I F G T A
N Y 181/61 211/71 GCA CAG AAG TTC CAG GGC AGA GTC ACG ATT ACC GCG GAC GAA TCC ACG AGC ACA
GCC TAC A Q K F Q G R V T I T A D E S T S T
A Y 241/81 271/91 ATG GAG CTG AGC AGC CTG AGA TCT GAG GAC ACG GCC GTG TAT TAC TGT GCG AGA
TCG AGA M E L S S L R S E D T A V Y Y C A R
S R 301/101 331/111 CGT ATT ACG ATT TTT GGA GGA GGT GCT TTC GAT ATC TGG GGC CGA GGC ACC ATG
GTC ACC R I T I F G G G A F D I W G R G T M
V T 361/121 391/131 GTC TCT TCA GGT GGG GGC GGT TCA GGC GGA GGT GGC AGC GGC GGT GGC GGA TCG
CAG TCC V S S G G G G S G G G G S G G G G S
Q S 421/141 451/151 GTG CTG ACT CAG CCT GCC TCC GTG TCT GGG TCT CCT GGA CAG TCG ATC ACC ATC
TCC TGC V L T Q P A S V S G S P G Q S I T I
S C 481/161 511/171 ACT GGA ACC AGC AGT GAT GTT GGT GGT TAT AAC TAT GTC TCC TGG TAC CAA CAA
CAC CCA T G T S S D V G G Y N Y V S W Y Q Q
H P 541/181 571/191 GGC AAA GCC CCC AAA CTC ATG ATT TAT GAG GGC AGT AAG CGG CCC TCA GGG GTT
TCT AAT G K A P K L M I Y E G S K R P S G V
S N 601/201 631/211 CGC TTC TCT GGC TCC AAG TCT GGC AAC ACG GCC TCC CTG ACA ATC TCT GGG CTC
CAG GCT R F S G S K S G N T A S L T I S G L
Q A 661/221 691/231 GAG GAC GAG GCT GAT TAT TAC TGC AGC TCA TAT ACA ACC AGG AGC ACT CGA GTT
TTC GGC E D E A D Y Y C S S Y T T R S T R V
F G 721/241 GGA GGG ACC AAG CTG ACC GTC CTA GGT G G T K L T V L G

【００１２】（実験の部）「長い」ＴＮ−Ｃアイソフォームに対する抗体断片の分離ヒトｓｃＦｖのファージ表示(phage display)ライブラリーは、抗原として、
選択的スプライシング(alternative splicing, 択一的スプライシング)にかけら
れたＦＮIIIドメインを含有する「長い(long)」ＴＮ−Ｃ変異体を用いて選定し
た。前記の選定によって得られた細菌コロニーの培養基は、抗原として、選択的
スプライシングにかけられた「短い(short)」ＦＮIIIドメインを全く持たないか
又は「長い」ＦＮIIIドメインを全て含有するＴＮ−Ｃ変異体を使用するＥＬＩ
ＳＡ技術によって分析した。この研究によって、ＴＮ−Ｃの「長い」形態のための特異性抗体を生成するク
ローンを同定することが可能となった。前記クローンの細菌培養の上澄み液から
の、ＴＮ１１と称するｓｃＦｖは、（選択的スプライシングにかけられたＦＮII
Iドメインの全てを含有する）組換え断片Ａ〜Ｄとセファロース(Sepharose)での
カラム免疫クロマトグラフィー(immunochromatography)によって精製した。

【００１３】ＴＮ１１は、免疫ブロッティング(immunoblotting)技術によって更に特徴付け
られる。この技術によると、「長い」ＴＮ−Ｃ及び「短い」ＴＮ−Ｃと、ヒトＴ
Ｎ−Ｃの種々のドメインを含有する、種々の組換えタンパク質及び融合タンパク
質(recombinant and fusion proteins)（ＴＮＡ−Ｄ、ＴＮＢ−Ｄ、ＴＮ
Ｃ、ＴＮＢ、λＴＮ２７及びλＴＮＢＣ）との特異反応の評価が可能となる（
図１Ａ）。ＴＮ１１は、［選択相(selection phases)の間のＥＬＩＳＡ技術によ
って既に見出されている］「長い」形態のＴＮ−Ｃを認識するだけでなく；ドメ
インを含有する全てのタンパク質断片と特異反応を生じる；ということが、前記
技術によって証明される（図１Ｂ、Ｃ）。これは、ＴＮ１１によって認識された
エピトープがＴＮ−ＣのドメインＣの内部に位置しているという証拠であった。
類似の諸研究によって、ＴＮ１１は正常ヒト繊維芽細胞の培養基から精製された
ＴＮ−Ｃとは反応しないことが証明された。なぜなら、前記の細胞によって生成
されるＴＮ−ＣはドメインＣを含有しないからである。

【００１４】正常ヒト繊維芽細胞の培養基（ＧＭ−６１１４、ＡＴＣＣ、ロックビル(Rockv
ille)，ＭＤ，米国）；黒色腫由来の細胞（ＳＫＭＥＬ−２８、ＡＴＣＣ、ロッ
クビル，ＭＤ，米国）；並びに、ヒト・グリオブラストーマ及びヒト髄膜腫の組
織試料；から抽出された全ＲＮＡについて、次の諸プライマー(primers)を使用
して、ＲＴ−ＰＣＲ実験を行った：（ヒトＴＮ−Ｃ配列の塩基４５４２〜４５７１）５'ＧＣＴＡＣＣＣＣＣＴＡ
ＧＴＡＣＴＧＡＴＴＴＴＡＴＴＧＴＣＴＡ（ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．３）；（相補的配列、塩基５０２８〜５０４７）５'ＴＴＴＣＣＡＧＴＧＧＣＴＣＡ
ＧＡＣＴＧＣ（ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．４）；（相補的配列、塩基５３２２〜５３４５）５'ＣＴＧＧＴＣＴＧＡＧＴＣＴＴ
ＧＧＴＴＣＣＧＴＣＣ（ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．５）。

【００１５】ＴＮ−ＣのドメインＣは、細胞ＧＭ−６１１４及びＳＫＭＥＬ−２８の中にも
黒色腫の中にも存在しないが、ヒト・グリオブラストーマ断片から精製した、Ｔ
Ｎ−ＣのｍＲＮＡの中に存在することが、ＲＴ−ＰＣＲ実験により証明された。

【００１６】成人及び胎児の正常ヒト組織由来のｍＲＮＡと、ヒトＴＮ−Ｃ配列の２７０の
塩基（４６３０〜４８９９）を含有するｃＤＮＡプローブとを用いて、ノーザン
ブロット分析(Northern blotting analyses)を行い、それによって、このドメイ
ンのｍＲＮＡは胎児組織（脳、肝臓、腎臓）においてのみ発現し、成人組織のｍ
ＲＮＡ中には存在しないことが証明された（図２）。精製済み抗体ＴＮ１１の「長い」ＴＮに対する結合親和性(binding bond affi
nity)は、ビアコア(BIAcore)を用いた相互作用分析によって決定した。解離定数
は１．３×１０^-10であることが分かった。

【００１７】ＴＮ−ＣのドメインＣに対して特異的であるＴＮ１１を用いて、免疫組織化学
分析を行った。この分析によって、ドメインＣは正常成人組織(normal adult ti
ssues)中に見出だせないことが確認された。逆に言えば、全ＴＮ−Ｃの大きな存
在がある。これは、全てのヒトＴＮ−Ｃアイソフォームに対して特異的なモノク
ローナル抗体ＢＣ−４との反応によって立証される。なぜなら、このモノクロー
ナル抗体ＢＣ−４は、ヒトＴＮ−Ｃ分子の一定領域のエピトープを認識するから
である。更に、調べたグリオブラストーマのほとんど全てのもの（高度に陽性な腫瘍の
１５症例のうち１４症例）は非常に高いレベルのドメインＣを発現することも分
かった（表２及び図３）。特に、このＴＮ−Ｃアイソフォームの存在は主として
、腫瘍細胞巣のストロマ（図３Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ及びＧ）；並びに増殖細胞（図３
Ｆ）；の中の細胞増殖活性の高い領域の脈管構造の近辺において同定された。逆
に言えば、骨髄腫２３症例のうち２症例は脈管構造の近辺においてのみわずかに
陽性であった（表２及び図４）ことを除けば、脳の他の腫瘍では陽性反応は全く
生じなかった。また、肺腫瘍切片中のｃＴＮ−Ｃの大きな存在も、とりわけ、脈管構造の近辺
において、観察された。

【００１８】グリオブラストーマのクリオスタット切片の現場雑種形成(in situ hybridisa
tions) （図６Ａ及びＢ）は、ｃＴＮ−Ｃに対して特異的なＤＩＧ標識ｃＲＮＡ
プローブを用いて行った（図５）。得られた結果によって、ｃＴＮ−Ｃアイソフ
ォームは腫瘍細胞によって産生されるが、全ての腫瘍細胞によって産生される訳
ではないことが分かる。

【００１９】また、脈管構造中におけるｃＴＮ−Ｃの発現も、（ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞を
使用した）ヌード・マウスでの、ヒト黒色腫の実験モデルで証明された。ヒト黒
色腫キャリヤのヌード・マウスに放射能標識ｓｃＦｖＴＮ１１を注入した。そ
れによって、腫瘍の脈管構造中においてのみ抗体特異蓄積が証明された。結論として、ＴＮ−ＣのｃＴＮ−Ｃアイソフォームが存在することの決定は、
種々のタイプの腫瘍を診断するための効果的な方法である。更に、腫瘍組織中に
おける前記アイソフォームの存在もまた、治療目的に有用である場合がある。

【００２０】

【表１】

【００２１】全ての腫瘍は、ｓｃＦｖＴＮ１２に対し高度に陽性であった。ｓｃＦｖＴ
Ｎ１２は、全てのＴＮ−Ｃアイソフォームを同定する。ＴＮ１１は、ドメインＣ
を含有するＴＮ−Ｃアイソフォームのみを同定する。 (1) この陽性症例は、幾つかの脈管構造においてのみ陽性を呈した。 (2) この陽性症例は、変異(transition)髄膜種であり、幾つかの脈管構造にお
いてのみ陽性を呈した。 (3) ７つの陽性症例のうち３症例は、結合組織において、幾つかの脈管構造に
おいて陽性を呈し、更に３症例は、幾つかの脈管構造においてのみ陽性を呈した
。 (4) ３つの陽性症例では、染色がわずかに認められた。

【００２２】

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】図１ＡはヒトＴＮ−Ｃのサブユニットの（ドメインの）構造モデルである。楕
円及び正方形の記号はそれぞれ、ＥＧＦ様及びＦＮ様の繰返し(repeats, 反復)
を表わす。また、アミノ終末ボタン及びフィブリノーゲン様終末ＣＯＯＨボタン
も示す。Ａ１からＤまでのＦＮ様繰返しには影を付けてある。この繰返しの発現
は、プレ−ｍＲＮＡの選択的スプライシングによって調節される。また、図の上
部には、使用した、ＴＮ−Ｃ−β−ガラクトシダーゼの融合タンパク質又は組換
えタンパク質を示す。矢印は、各々組換え抗体又はモノクローナル抗体のエピト
ープの位置を示す。Λは連続性を示す。図１Ｂはクーマシーブルーを用いて着色した（ドメインＡ１〜Ｄを含有する）
「長い」組換えタンパク質ＴＮ−Ｃ及び（ドメインＡ１〜Ｄを含有しない）「短
い」組換えタンパク質ＴＮ−Ｃの、ドデシル硫酸ナトリウム(Sodium Dodecyl Su
lphate)（４〜１８％ＳＤＳＰＡＧＥ）中での電気泳動；並びに、ｓｃＦｖ
ＴＮ１１及びＴＮ１２を用いて着色した免疫ブロット(immunoblots, イムノブ
ロット)である。図１ＣはｓｃＦｖＴＮ１１及びＴＮ１２で着色した、種々の融合タンパク質
及び組換えタンパク質（Ａ）の免疫ブロットである。左側に記す数値は、（キロ
ドルトン単位の）基準分子質量を示す。

【図２】（１）心臓、（２）脳、（３）胎盤、（４）肺、（５）肝臓、（６）骨格筋、
（７）腎臓及び（８）膵臓の成人ヒト組織；（１）脳、（２）肺、（３）肝臓及
び（４）胎盤の胎児ヒト組織；から得られたポリ（Ａ）に富むＲＮＡのノーザン
ブロット(Northern blots)である。このノーザンブロットは、本明細書中に記述
される、ｃＴＮ−Ｃアイソフォームに対して特異的であるｃＤＮＡプローブ；全
てのＴＮ−Ｃアイソフォームを認識するＨＴ１１プローブ；及びブロット規格化
のためのヒトＧ３ＰＤＨのｃＤＮＡ；を用いて得られる。左側の数値は、（ｋｂ
単位の）基準測定値を示す。

【図３】グリオブラストーマの切片の免疫組織化学分析であり、Ａ及びＢはｓｃＦｖ
ＴＮ１１を用いたもの；Ｃ、Ｅ、Ｆ及びＧはｓｃＦｖＴＮ１１（赤色）及びｍ
ＡｂＫＩ６７（褐色）を用いて得られる二重染色法によるもの；ＤはｓｃＦｖ
ＴＮ１１で染色された肺ガンの大脳転移の切片である。バー(bar)＝１０μ。

【図４】乳房の浸潤性導管ガン(invasive ductal carcinoma)の連続切片の免疫組織化
学分析であり、Ａ及びＣはｓｃＦｖＴＮ１２を用いたもの；Ｂ及びＤはｓｃＦ
ｖＴＮ１１を用いたもの；並びに、ＥはｓｃＦｖＴＮ１２を用い、Ｆはｓｃ
ＦｖＴＮ１１を用いて染色した髄膜種の連続切片もの；である。バー＝１０μ
。

【図５】現場(in situ)雑種形成試験に使用したｃＲＮＡプローブの特異性のサザンブ
ロット(Southern blot)によるデモンストレーションである。底部：臭化エチジ
ウムを用いたアガロース・ゲルの染色；１：ＴＮＦＮＡＬＬ（これは、ドメイ
ン２（III型）から、スプライシングにかけたドメインを含有するドメイン７（I
II型）までのヒトＴＮ−ＣのＤＮＡから成る）；２：ＴＮＦＮ１−８（ＴＮＦ
ＮＡＬＬの配列と同一であるが、スプライシングにかけたドメインを含有しない
）；３：全ＴＮＥＧＦ様ドメイン；４：ドメインＤ（III型）；５：ドメ
インＣ（III型）；６：ドメイン１（III型）；７：全ＴＮＥＧＦ様ドメイン
８〜１０；８：基準。頂部：上述のものと同一の断片のサザンブロットであって、ＤＩＧ標識プロー
ブを用いて交雑された(hybridised, 雑種形成された)ものである。右側の数字は
測定値（ｋｂ単位）である。

【図６】ドメインＣのＤＩＧ標識プローブを用いた、ヒト・グリオブラストーマのクリ
オスタット切片(cryostat sections)に関する現場雑種形成試験の２倍拡大図で
ある。陽性信号は、大核(large nucleus)を持つ幾つかの腫瘍細胞においてのみ
目に見える。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１３年６月５日（２００１．６．５）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｇ０１Ｎ 33/574 ＢＧ０１Ｎ 33/574 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】組織及び／又は生物流体(biological fluids)の中のＴＮ−
ＣのｃＴＮ−Ｃアイソフォームを決定するための診断方法。
【請求項２】生体外で行う、請求項１記載の方法。
【請求項３】生体内で行う、請求項１記載の方法。
【請求項４】ＴＮ−ＣのｃＴＮ−Ｃアイソフォームを発現させる病理を同
定するための、請求項１記載の方法。
【請求項５】ＴＮ−ＣのｃＴＮ−Ｃアイソフォームを同定することのでき
るリガンド。
【請求項６】抗体及びそれらの断片及び同族の結合体；又は他のあらゆる
分子であって、ｃＴＮ−Ｃを同定することができ、それ自体がｃＴＮ−Ｃと結合
することのできる該分子；である、請求項５記載のリガンド。
【請求項７】ｓｃＦｖ又はそれの断片及び同族の結合体である、請求項６
記載のリガンド。
【請求項８】（ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．１とも呼ぶ）配列： 1/1 31/11 CAG GTG CAG CTG GTG CAG TCT GGG GCT GAG GTG AAG AAG CCT GGG TCC TCG GTG
AAG GTC Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V
K V 61/21 91/31 TCC TGC AAG GCT TCT GGA GGC ACC TTC AGC AGC TAT GCT ATC AGC TGG GTG CGA
CAG GCC S C K A S G G T F S S Y A I S W V R
Q A 121/41 151/51 CCT GGA CAA GGG CTT GAG TGG ATG GGA GGG ATC ATC CCT ATC TTT GGT ACA GCA
AAC TAC P G Q G L E W M G G I I P I F G T A
N Y 181/61 211/71 GCA CAG AAG TTC CAG GGC AGA GTC ACG ATT ACC GCG GAC GAA TCC ACG AGC ACA
GCC TAC A Q K F Q G R V T I T A D E S T S T
A Y 241/81 271/91 ATG GAG CTG AGC AGC CTG AGA TCT GAG GAC ACG GCC GTG TAT TAC TGT GCG AGA
TCG AGA M E L S S L R S E D T A V Y Y C A R
S R 301/101 331/111 CGT ATT ACG ATT TTT GGA GGA GGT GCT TTC GAT ATC TGG GGC CGA GGC ACC ATG
GTC ACC R I T I F G G G A F D I W G R G T M
V T 361/121 391/131 GTC TCT TCA GGT GGG GGC GGT TCA GGC GGA GGT GGC AGC GGC GGT GGC GGA TCG
CAG TCC V S S G G G G S G G G G S G G G G S
Q S 421/141 451/151 GTG CTG ACT CAG CCT GCC TCC GTG TCT GGG TCT CCT GGA CAG TCG ATC ACC ATC
TCC TGC V L T Q P A S V S G S P G Q S I T I
S C 481/161 511/171 ACT GGA ACC AGC AGT GAT GTT GGT GGT TAT AAC TAT GTC TCC TGG TAC CAA CAA
CAC CCA T G T S S D V G G Y N Y V S W Y Q Q
H P 541/181 571/191 GGC AAA GCC CCC AAA CTC ATG ATT TAT GAG GGC AGT AAG CGG CCC TCA GGG GTT
TCT AAT G K A P K L M I Y E G S K R P S G V
S N 601/201 631/211 CGC TTC TCT GGC TCC AAG TCT GGC AAC ACG GCC TCC CTG ACA ATC TCT GGG CTC
CAG GCT R F S G S K S G N T A S L T I S G L
Q A 661/221 691/231 GAG GAC GAG GCT GAT TAT TAC TGC AGC TCA TAT ACA ACC AGG AGC ACT CGA GTT
TTC GGC E D E A D Y Y C S S Y T T R S T R V
F G 721/241 GGA GGG ACC AAG CTG ACC GTC CTA GGT G G T K L T V L G を有する組換えヒト抗体の断片である、請求項６記載のリガンド。
【請求項９】請求項５〜８のいずれか１項に記載のリガンドと；放射性同
位元素、蛍光物質、サイトカイン、毒素、光線感作物質、凝塊形成剤等から成る
群から選ばれる１種の分子と；から成る結合体であって、診断及び／又は治療の
目的で使用することのできる上記結合体。
【請求項１０】ヒト組織及び生物流体の中にＴＮ−ＣのｃＴＮ−Ｃアイソ
フォームが存在することを、請求項５〜８のいずれか１項に記載のリガンドによ
って決定する、請求項１記載の診断方法。
【請求項１１】ヒト組織及び生物流体の中にＴＮ−ＣのｃＴＮ−Ｃアイソ
フォームが存在することを、請求項９に記載の結合体によって決定する、請求項
１記載の診断方法。
【請求項１２】ヒト病理を治療するための製剤を調製するために、請求項
５〜８のいずれか１項に記載のリガンドを使用する方法。
【請求項１３】ヒト病理を治療するための製剤を調製するために、請求項
９に記載の結合体を使用する方法。