JP2002541205A - 皮膚および粘膜に関する生理学的並びに病理学的事象を制御するためのテトラヒドロクルクミノイドの使用方法およびそのテトラヒドロクルクミノイドの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ランダムな細胞内蛋白質架橋結合の制御、細胞電位の最適化、前悪性状態または悪性疾患の治療、細胞内トランスグルタミナーゼ活性の増強、リポフスチン形成による「老化斑」の減少のために使用され得るテトラヒドロクルクミノイド混合物に向けられる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】

本発明は、皮膚および粘膜に関する生理学的並びに病理学的事象を制御するた
めのテトラヒドロクルクミノイドの使用方法およびそのテトラヒドロクルクミノ
イドの製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】

体細胞の機能の大部分は、その細胞骨格すなわち、細胞の構造的枠組みにより
定められる。細胞骨格は、細胞質内の成分によって形成され、細胞の形態を維持
し、隣接細胞との接触を安定化し、エンドサイトーシス、エキソサイトーシス、
細胞運動のような特定の細胞機能を促進するものである。細胞骨格は、微小管、
ミクロフィラメント、中間径フィラメント、微小柱格子のような幾つかのフィラ
メント状構造を含んでいる。細胞骨格の形成に関与している蛋白質、特に微小管
関連蛋白質（ＭＡＰＳ）は細胞によって生産された後、さらにポストトランスレ
ーショナルモディフィケーションまたは架橋結合と呼ばれる過程を経て、細胞骨
格の機能に合わせて変化していく。この蛋白質の架橋は、細胞のホメオスタシス
の維持、生理的過程、細胞の成長と成熟に必要な事象である、細胞骨格の安定化
にとって必須の現象である。

【０００３】 蛋白質のポストトランスレーショナルモディフィケーションには、幾つかの化
学反応が含まれる。蛋白質のリン酸化は、細胞蛋白質のポストトランスレーショ
ナルモディフィケーションの最も一般的な機能の一例である。その他の例として
は、蛋白質のメチルエステル化、ＡＤＰ−リボシル化、蛋白質のグリコシル化、
ヒストンのアセチル化、ヒプシン形成、トランスグルタミナーゼ触媒反応などが
挙げられる。

【０００４】 細胞電位は、本発明の機能を理解する上で重要な細胞生理学の一面である。細
胞電位は、正や負に電荷した分子間の複雑なバランスによって維持されており、
この結果、細胞内の生理学的静止電位は、凡そ−７０ｍＶとなっている。この値
は細胞が健全な状態であることを示している。これに対し、細胞の最適静止電位
維持不能な状態は、例えば物理的または化学的バランスの急変、疾病過程、老化
による損傷や裂傷などの病的状態において生じる。最適静止電位は、トランスレ
ーション後の蛋白質のモディフィケーションや架橋結合などの生理学的過程に対
し影響を与えるのである。したがって、蛋白質の生理学的架橋結合が損なわれて
いないということは、細胞の最適静止電位維持能力を示しているとも言えるので
ある。

【０００５】 （架橋結合の有用な効果） 前述した蛋白質の架橋結合は、蛋白質のポストトランスレーショナルモディフ
ィケーションの１つの結果である。細胞骨格を形成する蛋白質において同定され
ている最も一般的な架橋結合によって、Ｎｅｅｅ−（ｇｇｇ−グルタミル）リジ
ンおよびＮ，Ｎ−ビス（ｇｇｇグルタミル）ポリアミンとなる。これら２種類の
架橋結合の形成は、トランスグルタミナーゼと呼ばれる一群の酵素の触媒活性に
よって促進される。体内にある周知のトランスグルタミナーゼの１つは、凝集蛋
白質因子ＸＩＩＩである。この因子はフィブリンの架橋を引き起こし、それが血
餅形成における安定化剤として作用する。この種のモディフィケーションは、蛋
白質架橋結合に基づく生命維持機構の１例であり、これは切り傷または外傷にお
ける出血を防ぐ。

【０００６】 トランスグルタミナーゼは、蛋白質架橋結合の生理学的過程の促進をもたらし
、通常の条件下で細胞分化を招く。したがって細胞は、例えば粘液分泌細胞、食
細胞、組織の構造を保護する上皮細胞、外皮細胞などとその目的を果たすことが
できる。トランスグルタミナーゼ活性の有無は、癌細胞の分化、特に皮膚癌メラ
ノーマにおいて重要な役割を演じている。メラノーマは、急速に広がる癌で未分
化の皮膚細胞が形成されることによるが、細胞分化能力の減少の程度は、トラン
スグルタミナーゼの活性抑制と大きく関連している。他方、患者の体内にトラン
スグルタミナーゼ活性を実験的に導入すると、メラノーマの進行の減速化、また
は逆行において有望な結果が得られた。トランスグルタミナーゼ誘発剤の例とし
ては、レチノール酸やメチルキサンチン類がある。メラノーマにおけるレチノイ
ドを用いた治療可能性は、細胞内トランスグルタミナーゼを活性化する能力に関
連していると思われる。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】

（有害な架橋結合） しかし、細胞内蛋白質の架橋結合を制御して治療に用いることは、常に有用で
あるとは限らない。急激な非生理学的刺激によってランダムな大量の架橋結合が
行われると、細胞の老化が促進されるのである。細胞の組織化や分化しようとす
る目的に抗うランダムな架橋結合の性質に起因して、細胞老化を引き起こし、細
胞死のみならず、悪性腫瘍を含む病変をもたらす可能性があるのである。例えば
、紫外線によって生じた皮膚細胞内のフリーラジカルは、急激な蛋白質架橋結合
および蛋白質分解酵素の遊離を生じる可能性がある。この後者の事象は、細胞骨
格の破壊、および細胞の機能を低下させる細胞組織の急速な劣化を招くことにな
る。ここでリポフスチンという用語について述べておくが、特に深いものである
。

【０００８】 これは、「老化色素」または「肝斑」とも称され、恐らく細胞代謝および体組
織代謝の中断の結果として表皮および粘膜に生ずるものである。リポフスチンは
、細胞内のミトコンドリアおよび／またはリソソームの酸化による退化に起因し
ていることが判明している。リポフスチンは、高異化作用を発揮し、低同化作用
をもたらす代謝エラーの結果であると推定されている。ここで、リポフスチン形
成は一部にはトランスレーション後の蛋白のモディフィケーションの崩壊過程の
表現であり、この過程は、加齢過程を含めて全身疾患過程をも強めるものと仮定
する。

【０００９】 （関連技術） 前述したとおり、トランスグルタミナーゼは、生理学的な蛋白質架橋結合過程
の促進の役割を果たし、通常の条件下で、細胞分化、細胞成熟、適時老化を招く
ものとなる。細胞内トランスグルタミナーゼの活性がある一定の病理、例えばメ
ラノーマなどの悪性腫瘍において、阻害されている可能性があるというかなり多
くの証拠がある。メラノーマにおけるレチノイドやメチルキサンチン類のような
トランスグルタミナーゼ誘発剤を用いた治療可能性は、細胞内トランスグルタミ
ナーゼ類を活性化するそれらの能力と関連すると思われる。これによって、次に
細胞分化が生じ、これが実際の臨床において、未分化悪性細胞の数の減少による
疾病の進行の減速化を導くことになると考えられる。

【００１０】 テトラヒドロクルクミンやクルクミノイドなどのクルクミン誘導体は、フェノ
ール性抗酸化剤の一群として、文献によく認められている（Ｍａｊｅｅｄら、ク
ルクミノイド教本）。Ｍａｊｅｅｄらの米国特許第５，８６１，４１５号は、ウ
コン根から単離された天然物由来のクルクミノイド、すなわちクルクミン、ディ
メトキシクルクミン、ビスディメトキシクルクミンの配合物が生体防御作用とし
て評される広範囲の抗酸化防御を生み出すことを確証した。フリーラジカル形成
防止、およびフリーラジカル捕捉における介在に特徴付けられる生体防御作用は
、クルクミノイドと同じくテトラヒドロクルクミノイド（以下、ＴＨＣと称する
）によって行なわれる（Ｍａｊｅｅｄら、ウコンと治療的クルクミノイド、Ｋｅ
ａｔｓ出版、１９９６年およびＭａｊｅｅｄら、クルクミノイド抗酸化植物栄養
素、ニュートゥリサイエンスパブリッシャーズ（ＮｕｔｒｉＳｃｉｅｎｃｅ Ｐ
ｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）、１９９５年）。しかし、クルクミンやクルクミノイドに
比べて、テトラヒドロクルクミノイドは、より優れたフリーラジカル除去特性を
示す（Ｍａｊｅｅｄら、クルクミノイド教本）。テトラヒドロクルクミノイドの
もう１つの利点は、それらがあまり色の濃くないクルクミノイドであり、したが
って、あまり着色することなく局所に適用できることである。

【００１１】 最近、テトラヒドロクルクミンではなく、クルクミンが糖尿病ラットにおいて
コラーゲンの架橋を防止する効果を有することが判明した（Ｓａｊｉｔｈｌａｌ
ＧＢ、Ｃｈｉｔｈｒａ Ｐ，Ｃｈａｎｄｒａｋａｓａｎ Ｇ．，Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ Ｐｈａｍａｃｏｌ １９９８ Ｄｅｃ １５；５６（１２）：１６０７−１
４）。しかし、クルクミンのこの抗架橋結合の効果は、この化合物を非常に高用
量の経口投与により達成された（２００ｍｇ／ｋｇ体重）。また、コラーゲンの
架橋結合の進行を防止するクルクミンの効果は、治療効果よりも著しかったこと
も認められた。この研究の著者は、クルクミンの抗架橋結合機能がフリーラジカ
ルの消去によるものであり、これが次に、糖尿病におけるコラーゲンの架橋結合
の促進を防止しているのであろうと説明した。この研究は、糖尿病などの架橋結
合が促進されることが特徴となる条件においてクルクミンの使用により、過剰な
蛋白質架橋結合が防止され、またある程度治療されることを確認している。

【００１２】

【課題を解決するための手段】

（発明の説明） 本発明の機能は、細胞内蛋白質の架橋結合に対する制御、すなわち阻害および
刺激双方の効果に基づくホメオスタシスの維持と細胞の機能性にある。クルクミ
ンとその誘導体に関して、以前には知られていなかった該制御機能に関するもの
であり、クルクミノイドおよびテトラヒドロクルクミノイドについて過去に研究
され記載された抗酸化特性とは無関係のものである。これは生体過程に対する広
範囲な制御効果を達成する新規な方法である。生物における蛋白質架橋結合に対
する同様の制御効果については、単一化合物または配合製品何れによる開示も無
かった。以前に開示された化合物が、細胞内架橋結合の刺激または阻害において
、架橋過程に影響を与えるのに対し、本発明は、架橋結合調節剤（ＣＬＭ）すな
わち「クロスレグリン」として作用するという点で本質的に本発明は他の化合物
とは異なる。これらの用語は、本発明の機能を説明するためにここで用いたもの
である。ＣＬＭすなわちクロスレグリンは、本発明の組成物が、生理学的および
病理学的状態の双方において、同様に細胞のトランスレーション後のモディフィ
ケーションおよび架橋過程に有用な影響を及ぼすことを示している。本発明のＣ
ＬＭ効果は、「ＴＨＣを得る方法」に記載されるようにこの生産物の具体的な組
成を用いることにより達成する。この機能はまた、ＴＨＣ分子のモディフィケー
ション、例えばエーテルＴＨＣ、トリメチルエーテルＴＨＣ、ジメチルエーテル
ＴＨＣ、ベンジルエーテルＴＨＣおよびＴＨＣのカリウム塩、マグネシウム塩お
よび銅塩により生ずる。本発明の機能は、紫外線日焼けおよび紫外線に曝露され
た皮膚細胞における架橋結合（チミン２量体細胞のパーセント）を防止するなど
のイン・ビボ実験条件にて証明された。本発明の生物学的性質は、クルクミノイ
ドのそれに匹敵し、本組成物が黄色を欠いている事実にもかかわらず、これは依
然として、紫外線に対して黄色クルクミノイドのものに匹敵する保護効果を生じ
る。この活性は、ＴＨＣおよびクルクミノイドに特徴的な抗酸化効果と異なるも
のと思われる。

【００１３】 以下の項目は、本発明の詳細な機能を説明するものである。

【００１４】 １．最適な細胞電位と同様に、最適なトランスレーション後の蛋白質のモディフ
ィケーション、蛋白質架橋結合により特徴付けられた生理的状態において、ＴＨ
Ｃは、上記に例示された細胞の健全状態に干渉しないように提案されている。

【００１５】 ２．しかし、不十分な形態学的および機能的細胞分化、例えば前悪性状態または
悪性疾患により特徴付けられた状態において、ＴＨＣは、蛋白質のポストトラン
スレーショナルモディフィケーションおよび架橋結合および細胞電位の最適化に
寄与するであろう。これは、ＴＨＣのフェノール環とオレフィン結合との間の、
また蛋白質アミノ酸のＣＯＯ基と同じくＮＨ_２基との間の相互作用により生ずる
効果である。これにより生じた結合は、他の蛋白質との架橋結合を開始するであ
ろう「アンカー」として働くと思われる。

【００１６】 ３．細胞の老化状態、およびランダムな架橋結合が、例えば、紫外線の作用によ
る熱損傷により急激に引き起こされる状態において、望ましくない過程は、本発
明により防がれるであろう。ＴＨＣは、蛋白質アミノ酸のアミノ基およびカルボ
キシ基に付加することにより望ましくない架橋結合を防ぐであろう。このことは
、ランダムな架橋結合、すなわち「緩衝」作用に匹敵する機能による干渉をもた
らすと思われる。この「緩衝」作用は、他に細胞ホメオスタシスの低下、早すぎ
る老化および早すぎる細胞死を招く連鎖反応を効果的に停止させることとなる。

【００１７】 ４．本発明はまた、ＴＨＣの抗酸化性、具体的にはフリーラジカルを捕捉する本
発明の能力に基づく細胞内蛋白質のランダムな架橋結合の防止において総合的に
機能する。この抗酸化作用により、ランダムな架橋結合が加速される理由の１つ
である「超荷電」蛋白質分子の電位崩壊を促進させることが提案される。クロス
レグリンおよび抗酸化作用のこの組合せ機能は、リポフスチン形成による「老化
斑」および乾癬などの炎症状態の防止に特に適用できる。

【００１８】 ５．ＮＨ_２基またはＣＯＯ基に結合するＴＨＣ中の酸素源となる部分は、オレフ
ィンと共役結合しない状態となったパラ水酸基、およびフェノール環の水酸基か
らのものとなるであろう。

【００１９】 ６．クルクミノイド化合物（ｃｕｒｃｕｍｉｎ（ｏｉｄ）ｃｏｍｐｏｕｎｄ（ｓ
））と異なって、ＴＨＣ分子はより自由に回転でき、したがって「アンカー」反
応および／または「緩衝」反応のために反応性基にさらに良く接近できる。

【００２０】 ７．一方、前記のように本発明は細胞生理状態に比較的不活性であるので、クロ
スレグリンの機能は、細胞に作用するストレス度に比例して徐々に発現されるで
あろう。したがって、生体系におけるＴＨＣのクロスレグリンの機能は、生体系
の疾病の種類に依存するであろう。

【００２１】

【発明の実施の形態】

ＴＨＣを得る方法を説明する。 本発明のテトラヒドロクルクミノイドは、通常ウコン根として知られているウ
コンの根茎または植物系ショウガ科からの他の適切な植物から得られるクルクミ
ノイドの化学還元生成物である。

【００２２】 ウコンから得られるクルクミノイドを触媒的に還元した後結晶化工程で単離す
ると、テトラヒドロクルクミン（ＴＨＣ）は損失なく回収されるが、テトラヒド
ロビスディメトキシクルクミン（ＴＨＢＤＣ）およびテトラヒドロディメトキシ
クルクミン（ＴＨＤＣ）は相当量損失することが従来技術で知られている。結果
として、テトラヒドロクルクミノイド内の割合は親化合物であるクルクミノイド
のもともとの割合に比べて大きく変化する。クルクミノイドの割合は、クルクミ
ノイドの最適な生物活性と相関するので好ましい。米国特許第５，８６１，４１
５号には、生細胞の最大保護効果を提供する生物保護剤として特異的かつ最適な
割合にあるクルクミノイドが開示されている。

【００２３】 本発明は、ＴＨＣを回復させる新規でより効果的な方法を提供する。この方法
は、ＴＢＤＭＣおよびＴＤＭＣの損失を防ぎ、そしてＴＨＣの生物保護剤組成物
を提供する。

【００２４】 ＴＨクルクミノイド 従来技術の含有率％ 本発明の含有率％ テトラヒドロクルクミノイド ９０ ７５〜８５ テトラヒドロディメトキシクルクミン ９ １０〜２０ テトラヒドロビスディメトキシクルクミン １ ２〜４．５

【００２５】 ＴＨＣを製造する従来技術方法の概略 天然クルクミノイド（９５％） −１００グラム アセトン −１リットル Ｐｄ−Ｃ（触媒）５％ −２．５グラム

【００２６】 天然クルクミノイド溶液を水素化装置内に仕込んだ。触媒を注意深く添加し、
水素圧を約２ｋｇ／ｃｍ^２（約０．２ＭＰａ）に維持した。本反応は３から４時
間で完結する。そして触媒を濾別して除去する。アセトン溶液を真空下に濃縮す
る。残留物をトルエンから結晶化する。テトラヒドロ化合物は９２〜９４℃の融
点を有するクリームがかった白色粉体として結晶化している。

【００２７】 （本発明の方法） 本方法は、ヒドリド転移反応として知られている触媒的水素転移反応により、
クルクミノイド中の２つのオレフィン結合を飽和にする新規な方法を利用する。
以下はヒドリド転移方法の一例である。

【００２８】 １．撹拌器および還流冷却器を装着した３リットル丸底フラスコに酢酸エチル１
リットルを仕込む。

【００２９】 ２．前述した生物保護剤組成物、すなわちクルクミン（Ｃ）７０〜８０％、ディ
メトキシクルクミン（ＤＭＣ）１５〜２０％およびビスディメトキシクルクミン
（ＢＤＭＣ）２．５〜６．５％である天然のクルクミノイド２５０グラムを溶液
に仕込み、室温にて均一に撹拌する。

【００３０】 ３．この混合物にトリエチルアミン１リットル、続いてパラジウムカーボン１２
グラムおよび蟻酸８０ｍｌを仕込む。

【００３１】 ４．混合物を撹拌した後８０℃で１２時間還流させた。

【００３２】 ５．周期的に蟻酸を５ｍｌづつ還流させながら２時間間隔で仕込んだ。

【００３３】 ６．反応の完結を検出するためにＴＬＣを調べた（システム：シリカプリコート
０．２５ｍｍ厚板／クロロホルム：メタノール＝９：１）。

【００３４】 ７．反応完結後、反応混合物を室温に冷却した。パラジウム触媒を除去するため
に濾過し、酢酸エチル５０ｍｌで洗浄した。

【００３５】 ８．酢酸エチルおよびトリエチルアミンを留去した（留出物２リットルを得た）
。

【００３６】 ９．そして粗製物をトルエン（３×５００ｍｌ）で抽出した。

【００３７】 １０．トルエン抽出物を５％ＨＣｌ２００ｍｌおよび水３×５００ｍｌで洗浄し
、硫酸ナトリウムで乾燥させた。

【００３８】 １１．溶媒を真空下に除去し、およそ２００グラムの淡黄色ペーストを得た。

【００３９】 １２．ペーストをエーテル２００ｍｌに懸濁し、濾過し、そして真空下に乾燥し
、テトラヒドロクルクミノイドの淡黄色粉末を得た。収量１７５グラム（７０％
）。

【００４０】 分析評価 ＴＨＣ ７５から８５％ ＴＨＤＨＣ １０から２０％ ＴＨＢＤＭＣ ２から４．５％

【００４１】 ヒドリド転移反応の他の方法において、Ｐｄ／Ｃおよび酢酸の存在下、（触媒
的水素転移剤として）蟻酸アンモニウムまたはリン酸二水素ナトリウムを用いて
クルクミノイドを処理した。１００から１１０℃、２０から３０分で反応は完結
する。本方法ではテトラヒドロクルクミノイドが５０％得られる。

【００４２】 ＴＨＣは、０．０２５％から５％の濃度範囲で適切な媒体中または経皮貼布な
どの圧着装置ともに、０．０２５％から５％の濃度範囲で皮下注射または経皮貼
布の形で、または用量当たり５ｍｇから５００ｍｇまたは体重１ｋｇ当たり０．
０８３〜８．３ｍｇの濃度範囲で経口投与用量形で局所的に投与できる。ＴＨＣ
はヒトおよび動物の使用にふさわしい。

【００４３】 投与の他の経路は、肺、スプレー式点鼻薬、静脈、筋内、腹膜内、くも膜下腔
内、膣、および直腸に送達するためのエアゾール噴霧器または他の装置を含むが
これらに限定されるものではない。ファージに送達するための媒体として用いる
ことができる賦形剤は当業者に明白である。

【００４４】 局所投与のためのテトラヒドロクルクミノイド組成物は原則的に無色であるべ
きである。用語「原則的に無色」とは、組成物が着色物を含まないかまたは組成
物が局所投与で皮膚に染みをつけない程度の少量の着色物を含むものであること
を意味している。

【００４５】 用語「着色除去クルクミン」とは、本発明におけるテトラヒドロクルクミノイ
ド混合物である。

【００４６】 タンパク架橋を開始するため、タンパクのアミノ酸用「アンカー」として作用す
るＴＨＣ分子。この機構は生理学的架橋の一因となる。

【００４７】

【化１】

【００４８】 ＵＶ沈降架橋におけるランダムな架橋を防ぐ緩衝剤として作用するＴＨＣ分子
。この機構は生理学的架橋を防ぐ一因となる。

【００４９】

【化２】

【００５０】 紹介：本研究はＳＤラットに対する着色除去クルクミンの急性経口毒性を調べ
るために設計した。Ｇａｉｔｏｎｄｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅガイドライン、ＣＩ
Ｂ、ニューデリーに既述されているガイドラインに従って行った。プロジェクト
番号 ４９５２

【００５１】 物質および方法 試験物質： 提供者：サミケミカルズ アンド イクストラクト社、バンガロール 試料上のラベル：着色除去クルクミン、バッチ番号−ＣＲＣ／６５、ＡＲ番号
−ＢＬ８Ｃ ０４４５ 性状：クリーム色がかった白色結晶粉末 同定：ＩＲスペクトル、実施済み 溶解性：メタノール可溶 ＨＰＬＣ純度：９９．０％ プロジェクト番号 ４９５２

【００５２】 要約 今回報告した研究は、ＳＤラットに対する着色除去クルクミンの急性経口毒性
を調べるために設計した。トウモロコシ油中に懸濁させた試験物質を経口経路に
よりラットに投与した。ラットを処置後１４日間、生成物に関連する症状につい
て観察した。試験物質は、処置後２時間で初期症状として、全ての動物において
唾液分泌をおよび２種の動物においてポリウレアを引き起こした。全ての動物は
１４日間の試験期間を通して生存し、処置後２４時間で中毒症状から解放された
。 経口経路によるラット中の着色除去クルクミンのＬＤ_５０値は５０００ｍｇ
／ｋｇより高いことが分かった。

【００５３】 試験システム 種：ラット 種族：ＳＤ系 出所：ＬＬＴ．動物ハウス 性別：雄および雌 年齢：６から８週 体重範囲：１２０．５から１４１．９グラム 用量単位の動物数：性別毎に５ 無作為化：研究初期段階で性別毎に５匹の群を無作為に選択した。 順化：動物として何もせずに飼育し、同一の場所で育てた。 動物の識別：ケージ番号および個々の獣類への表示による 食餌：Ｎａｖ Ｍａｈａｒａｓｈｔｒａ Ｃｈａｋａｎ Ｏｉｌ Ｍｉｌｌｓ Ｌｔｄ．、プーナ製小球状飼料 水：任意のガラス製ボトル中水性保護純水 取り扱い：さやの床敷きを具備したポリプロピレン製ケージ中同一性のラット
をそれぞれ５匹づつ飼育した。温度を２０〜２４℃に、そして相対湿度を５０と
６０％の間に維持した。１２時間毎の昼夜サイクルを維持した。 経路：経口強制飼養 使用媒体：トウモロコシ油 用量：１０ｍｌ／ｋｇ

【００５４】 トウモロコシ油中に懸濁させた試験物質を経口強制飼養により両方の性別のラ
ットにそれぞれ一度づつ投与した。それまでの１６時間および試験物質投与後２
時間、ラットに餌を与えなかった。生成物に関連する中毒症状および死亡数に関
して、用量後１４日間動物を観察した。観察期間中に死亡した動物について検死
を行った。観察期間の最後に、もしあれば、生存している試験動物を犠牲にし、
解剖し、そして全体の病理学的異常性について検査した。

【００５５】

【表１】

【００５６】

【表２】

【００５７】 症状：群１− 処置後２時間で初期症状として、全ての動物において唾液分泌
が観察され、また２種の動物においてポリウレアが観察された。全ての動物は１
４日間の試験期間を通して生存し、処置後２４時間で中毒症状から解放された。 検死所見：肉眼では著しい変化はなかった。

【００５８】

【表３】

【００５９】 要約 本研究は、サミケミカルズ アンド イクストラクト社、バンガロール製着色
除去クルクミンの初期皮膚刺激性能を調べるために設計した。性別毎に３匹づつ
のラビットの無傷の部位および擦り切れた部位の両方のバックスキンを取り除く
ために、５００ｍｇ量の試験物質を塗布した。塗布したそれぞれの部位を注意深
く観察し、そして２４および７２時間でドレーズ法に従って反応を調べた。 着色除去クルクミンはラビットの皮膚に炎症を引き起こさなかった。 初期皮膚炎症数＝０．００

【００６０】 物質および方法 試験物質 提供者：サミケミカルズ アンド イクストラクト社、バンガロール 試料上のラベル：着色除去クルクミン、バッチ番号 ＣＲＣ／６５、ＡＲ番号
−ＢＬ８Ｃ ０４４５ 性状：クリーム色がかった白色結晶粉末 同定：ＩＲスペクトル、実施済み 溶解性：メタノール可溶 ＨＰＬＣ純度：９９．０％

【００６１】 試験システム 種：ラビット 種族：ニュージーランドホワイト 出所：セーラム インスティテュート オブ インディア社、プーナ 性別：雄および雌 年齢：健康な成体 体重範囲：２．００から２．４０ｋｇ 用量単位の動物数：性別毎に３匹 無作為化：研究初期段階で性別毎に３匹の群を無作為に選択した。 順化：処置前７日間。 動物の識別：ケージ番号および個々の耳への表示による 食餌：Ｎａｖ Ｍａｈａｒａｓｈｔｒａ Ｃｈａｋａｎ Ｏｉｌ Ｍｉｌｌｓ Ｌｔｄ．、プーナ製小球状飼料 水：任意のガラス製ボトル中水性保護純水 取り扱い：ステンレス鋼網状床敷きを具備したステンレス鋼製ケージ中ラビッ
トをそれぞれ個別に飼育した。温度を２０と２３℃の間に、そして相対湿度を５
０と６０％の間に維持した。１２時間毎の昼夜サイクルを維持した。 経路：経皮 用量：５００ｍｇ／部位

【００６２】 実験方法 性別毎に３匹のラビットを本研究に使用した。両部位上の毛髪を処置１日前に
電気バリカンにより除去した。５００ｍｇ量の試験物質をそれぞれの試験動物の
無傷の皮膚部位および擦り切れた皮膚部位に塗布した。擦過傷は角質層に浸透す
るが真皮には浸透しないことを注意すべきである。粘着テープを用いてそれぞれ
の処置領域にガーゼパッチを固定した。試験物質の経口摂取を避けるために、２
４時間首周りにプラスティック製首輪を着けたまま動物を一匹づつ飼育した。パ
ッチおよび吸収されなかった試験物質を２４時間後に除去した。塗布したそれぞ
れの部位を注意深く観察し、反応物を２４および７２時間でドレーズ法に従って
評価した。

【００６３】 皮膚反応のドレーズ評価−皮膚反応の類別 １．紅斑および乾燥痂皮形成 紅斑なし・・０ 極僅かの紅斑（ほとんど認知できない）・・１ はっきり明確な紅斑・・２ 中程度から重篤な紅斑・・３ 重篤な紅斑（ビート赤味）から僅かに乾燥痂皮形成（深い損傷）・・４ 全最大可能紅斑数：４

【００６４】 ２．水腫形成 水腫なし・・０ 極僅かの水腫（ほとんど認知できない）・・１ 僅かの水腫（隆起が明確であるはっきり明確な領域の端）・・２ 中程度の水腫（約１ｍｍの隆起）・・３ 重篤な水腫（１ｍｍより高い隆起および暴露領域外への広がり）・・４ 全最大可能水腫数：４

【００６５】

【表４】

【００６６】 結論 試験物質であるサミケミカルズ アンド イクストラクト社、バンガロール製
着色除去クルクミンがラビットの皮膚に炎症を引き起こさないことが、本研究に
より結論づけられる。 初期の皮膚炎症数０．００ ＤＲ．Ｒ．Ｍ．ＢＨＩＤＥ 研究管理者

【００６７】

【表５】

【００６８】

【表６】

【００６９】 雌のＳＫＨ−１マウス（８〜９週齢）をアセトン１００μｌでまたはアセトン
１００μｌ中の試験化合物で局所的に処置した。５分後、マウスをＵＶＢ（３０
ｍＪ／ｃｍ^２）で１回照射した。マウスを１時間後に殺し、皮膚試料をチミン二
量体アッセイ用として１０％ホルマリン−リン酸緩衝剤中に貯蔵した。

【００７０】

【表７】

【００７１】 雌のセンカーマウスをＵＶＢ（６０ｍＪ／ｃｍ^２）で照射した。ＵＶＢ照射５
分前に、アセトン１００μｌでまたはアセトン１００μｌ中の阻害剤で局所的に
マウスを処置した。８時間後、マウスを殺し、そして皮膚試料を除去して日焼け
細胞アッセイ用として１０％ホルマリン−リン酸緩衝剤中に貯蔵した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ， ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，Ｋ Ｐ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ， ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，Ｓ Ｇ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 マジェード ムハムド アメリカ合衆国 ニュージャージー 08854，ピスカタウェイ，ユニット＃６， エセルロードウエスト 121 (72)発明者 バドマエフ ウラジミール アメリカ合衆国 ニュージャージー 08854，ピスカタウェイ，ユニット＃６， エセルロードウエスト 121 Ｆターム(参考） 4C206 AA01 AA02 AA04 CB14 MA03 MA04 NA14 ZA89 ZB26 ZC02 ZC19

Claims (17)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 患者のランダムな細胞内蛋白質の架橋結合を制御し、細胞電
   位を最適化するため、効果的な量のテトラヒドロクルクミノイドの混合物を必要
   な患者に投与する使用方法。
2. 【請求項２】 前記ランダムな細胞内蛋白質の架橋結合は、紫外線への曝露
   により生ずるものである請求項１に記載の使用方法。
3. 【請求項３】 前記のランダムな細胞内蛋白質の架橋結合は、悪性疾患に起
   因するものである請求項１に記載の使用方法。
4. 【請求項４】 前記細胞内蛋白質の架橋結合の制御は、前記のテトラヒドロ
   クルクミノイドをアミノ酸のアミノ基およびカルボキシ基に結合させることによ
   り制御するものである請求項１に記載の使用方法。
5. 【請求項５】 効果的な量のテトラヒドロクルクミノイドの混合物を、前悪
   性状態または悪性疾患を患う患者に投与することによる、患者の前悪性状態また
   は悪性疾患の治療方法。
6. 【請求項６】 前記悪性疾患はメラノーマである請求項５に記載の治療方法
   。
7. 【請求項７】 効果的な量のテトラヒドロクルクミノイドの混合物を、細胞
   内トランスグルタミナーゼ活性低下の細胞に投与することによる、細胞における
   細胞内トランスグルタミナーゼ活性の増強方法。
8. 【請求項８】 室温で酢酸エチルとクルクミノイドとを混合し、 水素移動試薬を触媒として添加し、続いてパラジウム炭素および酸を添加し、 周期的に前記の酸のアリコート（ａｌｉｑｕｏｔｓ）を添加しながらこの混合
   物を撹拌して還流し、 生じた混合物を室温まで冷却し、 この混合物をろ過して何れのパラジウム炭素をも除去し、 酢酸エチル中の混合物を洗浄し、 酢酸エチルを留去し、 生じた粗製塊をトルエンを用いて抽出してトルエン抽出液を得て、 トルエン抽出液をＨＣｌと水とで洗浄し、 その抽出液を乾燥し、 残存する全てのトルエンを減圧下で除去してペーストとし、 そのペーストをエーテルと混合してスラリーとし、ろ過し、および前記スラリ
   ーを減圧乾燥してテトラヒドロクルクミノイドを得るステップを含む、クルクミ
   ノイドの混合物の２つのオレフィン結合を飽和させた、テトラヒドロクルクミノ
   イドの製造方法。
9. 【請求項９】 前記クルクミノイドは、７０〜８０％のクルクミン、１５〜
   ２０％のディメトキシクルクミンおよび２．５〜６．５％のビスディメトキシク
   ルクミンを含んでなる請求項８に記載の製造方法。
10. 【請求項１０】 前記触媒として用いる水素移動試薬は、トリエチルアミン
    、ギ酸アンモニウムおよびリン酸二水素ナトリウムから成る群から選ばれる請求
    項８に記載の製造方法。
11. 【請求項１１】 前記酸は、ギ酸および酢酸から成る群から選ばれる請求項
    ８に記載の製造方法。
12. 【請求項１２】 室温で酢酸エチルとクルクミノイドを混合し、 水素移動試薬を触媒として添加し、続いてパラジウム炭素および酸を添加し、 生じた混合物を加熱し、 この加熱混合物を室温まで冷却し、 この混合物をろ過してパラジウム炭素を除去し、 全てのテトラヒドロクルクミノイドを回収する各ステップを含む、クルクミノ
    イドの混合物の２つのオレフィン結合を飽和させたテトラヒドロクルクミノイド
    の製造方法。
13. 【請求項１３】 ７５〜８５％のテトラヒドロクルクミン、１０〜２０％の
    テトラヒドロディメトキシクルクミンおよび２．０〜４．５％のテトラヒドロビ
    スディメトキシクルクミンを含んでなる実質的に無色の混合物。
14. 【請求項１４】 前記混合物は、局所投与に好適な形体である請求項１３に
    記載の混合物。
15. 【請求項１５】 ７５〜８５％のテトラヒドロクルクミン、１０〜２０％の
    テトラヒドロディメトキシクルクミンおよび２．０〜４．５％のテトラヒドロビ
    スディメトキシクルクミンを含んでなる混合物の効果的な量を患者に投与して、
    治療の必要な患者のリポフスチン形成による「老化斑」を減ずる方法。
16. 【請求項１６】 前記組成物を局所投与する請求項１３に記載の使用方法。
17. 【請求項１７】 テトラヒドロクルクミン、テトラヒドロディメトキシクル
    クミンおよびテトラヒドロビスディメトキシクルクミンを含んでなる無色の混合
    物。