JP2002541150A - チロシンキナーゼのインヒビターとしての置換１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明はタンパク質キナーゼ活性のインヒビターである式（Ｉ）の化合物および医薬上許容されるその塩、これらのピラゾールを含有する医薬用組成物並びにこれらのピラゾールの製造方法に関する。 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明はタンパク質キナーゼとりわけチロシンキナーゼおよびセリン／スレオ
ニンキナーゼのインヒビターであり、そのいくつかは新規化合物である４，５（
３，４）−２環式環融合を有する特定の３−アリールピラゾール、これらのピラ
ゾールを含有する医薬用組成物、並びにこれらのピラゾールの製造方法に関する
。

【０００２】 発明の背景 タンパク質キナーゼとして同定された酵素は少なくとも４００種
ある。これらの酵素は標的タンパク質基質のリン酸化を触媒する。リン酸化は通
常ＡＴＰからタンパク質基質へのリン酸基の移動反応である。リン酸が移動する
標的基質の特異的な構造はチロシン、セリンまたはスレオニン残基である。これ
らのアミノ酸残基がホスホリル移動の標的構造であるので、これらのタンパク質
キナーゼ酵素を一般にチロシンキナーゼまたはセリン／スレオニンキナーゼと称
する。

【０００３】 リン酸化反応、およびこれに対するホスファターゼ反応は、チロシン、セリン
およびスレオニン残基で多様な細胞内シグナル（典型的には細胞性レセプターに
より媒介される）、細胞機能の制御および細胞性プロセスの活性化または不活性
化に応答する無数の細胞性プロセスに関与する。タンパク質キナーゼのカスケー
ドはしばしば細胞内シグナルトランスダクションに関与し、これらの細胞性プロ
セスを理解するのに必要である。これらのプロセスの偏在のために、タンパク質
キナーゼは細胞質膜の必須部分として、または細胞質酵素として、または核に局
在して、しばしば酵素複合体の成分として見出される。多くの場合、これらのタ
ンパク質キナーゼは、細胞性プロセスが細胞内で起こるところ、および起こると
きを決定する酵素および構造タンパク質複合体に必須の要素である。

【０００４】 タンパク質チロシンキナーゼ タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）は細胞性タンパク質の特異的チロシン
残基のリン酸化を触媒する酵素である。これらの基質タンパク質はしばしば酵素
自体であるが、それらのこの翻訳後修飾は細胞増殖、活性化または分化を制御す
る分子スウィッチとして作用する（概要に関してはＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒお
よびＵｌｒｉｃｈ、Ｎｅｕｒｏｎ ９：３８３−３９１（１９９２）参照）。良
性および悪性増殖障害および免疫系の不適切な活性化によりもたらされる疾患（
例えば自己免疫不全）、移植片拒絶および移植片対宿主疾患などの病態で異常な
または過剰のＰＴＫ活性が観察された。加えて、内皮細胞特異的レセプターＰＴ
Ｋ例えばＫＤＲおよびＴｉｅ−２は血管形成のプロセスを媒介し、従って癌およ
び不適切な脈管形成に関与するその他の疾患（例えば糖尿病性網膜症、年齢に関
連する黄班変成による絨毛膜新生脈管形成、乾癬、関節炎、幼児性血管腫）の疾
患の進行の補助に関与する。

【０００５】 チロシンキナーゼはレセプター型（細胞外、膜貫通および細胞内ドメインを有
する）または非レセプター型（全体的に細胞内性である）でよい。

【０００６】 レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ） ＲＴＫは多様な生物学的活性を有する膜貫通レセプターの大きなファミリーか
らなる。現在のところ、少なくとも１９種の明確なＲＴＫサブファミリーが同定
されている。レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）ファミリーは種々の細胞型
の成長および分化に重要なレセプターを含んでいる（ＹａｒｄｅｎおよびＵｌｌ
ｒｉｃｈ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５７：４３３−４７８（１９８８
）；ＵｌｌｒｉｃｈおよびＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ、Ｃｅｌｌ ６１：２４３
−２５４（１９９０））。ＲＴＫの本来の機能はリガンド結合時に活性化され、
これによりレセプターおよび複数の細胞性基質がリン酸化され、続いて多様な細
胞性応答を生じる（ＵｌｌｒｉｃｈおよびＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ、Ｃｅｌｌ
６１：２０３−２１２（１９９０））。このようにレセプターチロシンキナー
ゼ媒介シグナルトランスダクションは特異的成長因子（リガンド）との細胞外相
互作用により開始され、続いて典型的にはレセプターの二量体形成、本来のタン
パク質チロシンキナーゼ活性の刺激およびレセプターリン酸基転移化が起こる。
それにより細胞内シグナルトランスダクション分子のための結合部位が作製され
、適当な細胞内応答（例えば細胞分割、分化、代謝性効果、細胞外微環境におけ
る変化）を促進する細胞質シグナル発生分子のスペクトルで複合体が形成される
に至る。（ＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒおよびＵｌｌｒｉｃｈ、Ｎｅｕｒｏｎ ９
：１−２０（１９９２））。

【０００７】 ＳＨ２（ｓｒｃホモロジー−２）またはリン酸チロシン結合（ＰＴＢ）ドメイ
ンを有するタンパク質は活性化されたチロシンキナーゼレセプターおよび高親和
性を有するその基質を結合し、シグナルを細胞に伝達する。双方のドメインはリ
ン酸チロシンを認識する（Ｆａｎｔｌら、Ｃｅｌｌ ６９：４１３−４２３（１
９９２）；Ｓｏｎｇｙａｎｇら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：２７７７
−２７８５（１９９４）；Ｓｏｎｇｙａｎｇら、Ｃｅｌｌ ７２：７６７−７７
８（１９９３）；Ｋｏｃｈら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：６６８−６７８（１９
９１）；Ｓｈｏｅｌｓｏｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１（２
）：２２７−２３４（１９９７）；およびＣｏｗｂｕｒｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ
．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．７（６）：８３５−８３８（１９９７））。レセプ
ターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）に結合する細胞内基質タンパク質のいくつかが
同定されている。それらを２つの主要なグループに分けることができる：（１）
触媒性ドメインを有する基質；および（２）このようなドメインを欠如するが、
アダプターとして役立ち、触媒的に活性な分子と結合する基質（Ｓｏｎｇｙａｎ
ｇら、Ｃｅｌｌ ７２：７６７−７７８（１９９３））。レセプターまたはタン
パク質とＳＨ２またはそれらの基質のＰＴＢドメインとの相互作用の特異性をリ
ン酸化されたチロシン残基を直接取り囲むアミノ酸残基により決定する。例えば
ＳＨ２ドメインおよび特定のレセプターのリン酸チロシン残基を取り囲むアミノ
酸配列間の結合親和性の差はそれらの基質リン酸化プロファイルにおいて観察さ
れる差に相関する（Ｓｏｎｇｙａｎｇら、Ｃｅｌｌ ７２：７６７−７７８（１
９９３））。観察により、各レセプターチロシンキナーゼの機能がその発現パタ
ーンおよびリガンド利用性のみならず、特定のレセプターにより活性化される下
流のシグナルトランスダクション経路の並びおよびそれらの刺激の時期および期
間によっても決定されることが示唆される。このように、特異的成長因子レセプ
ターおよび分化因子レセプターにより補充されるシグナル発生経路の選択性を決
定する重要な制御工程がリン酸化により提供される。

【０００８】 いくつかのレセプターチロシンキナーゼ、およびそこに結合する成長因子は血
管形成において役割を果たすことが示唆されたが、間接的に血管形成を促進でき
るものもある（ＭｕｓｔｏｎｅｎおよびＡｌｉｔａｌｏ、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ
ｌ．１２９：８９５−８９８（１９９５））。「胎児肝キナーゼ１（ＦＬＫ−１
）」として知られているあるレセプターチロシンキナーゼは、ＲＴＫのＩＩＩ型
サブクラスのメンバーである。ヒトＦＬＫ−１の別の名称は「キナーゼインサー
トドメイン含有レセプター」（ＫＤＲ）である（Ｔｅｒｍａら、Ｏｎｃｏｇｅｎ
ｅ ６：１６７７−１６８３（１９９１））。ＦＬＫ−１／ＫＤＲのまた別の名
称は、「脈管内皮細胞成長因子レセプター２」（ＶＥＧＦＲ−２）であり、それ
は高親和性でもってＶＥＧＦに結合するからである。ＦＬＫ−１／ＶＥＧＦＲ−
２のネズミ版はまたＮＹＫとも称されている（Ｏｅｌｒｉｃｈｓら、Ｏｎｃｏｇ
ｅｎｅ ８（１）：１１−１５（１９９３））。マウス、ラットおよびヒトＦＬ
Ｋ−１をコードするＤＮＡが単離され、ヌクレオチドおよびコードされるアミノ
酸配列が報告された（Ｍａｔｔｈｅｗｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ８８：９０２６−９０３０（１９９１）；Ｔｅｒｍａｎら、前出
；Ｔｅｒｍａｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１８
７：１５７９−１５８６（１９９２）；Ｓａｒｚａｎｉら、前出；およびＭｉｌ
ｌａｕｅｒら、Ｃｅｌｌ ７２：８３５−８４６（１９９３））。多くの研究に
よれば、例えばＭｉｌｌａｕｅｒら、前出で報告されているようにＶＥＧＦおよ
びＦＬＫ−１／ＫＤＲ／ＶＥＧＥＲ−２は各々脈管形成および血管形成と称する
脈管内皮細胞の増殖並びに血管の形成および新芽形成において重要な役割を果た
すリガンドレセプター対であることが示唆されている。

【０００９】 「ｆｍｓ様チロシンキナーゼ１」（Ｆｌｔ−１）と称する別のＩＩＩ型サブク
ラスＲＴＫはＦＬＫ−１／ＫＤＲに関連する（ＤｅＶｒｉｅｓら、Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２５５：９８９−９９１（１９９２）；Ｓｈｉｂｕｙａら、Ｏｎｃｏｇｅｎ
ｅ ５：５１９−５２４（１９９０））。Ｆｌｔ−１の別称は「脈管内皮細胞成
長因子１」（ＶＥＧＦＲ−１）である。現在のところ、ＦＬＫ−１／ＫＤＲ／Ｖ
ＥＧＥＲ−２およびＦｌｔ−１／ＶＥＧＥＲ−１サブファミリーは主に内皮細胞
に発現されることが見出されている。これらのサブクラスのメンバーはリガンド
の脈管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）ファミリーのメンバーにより特異的に刺激
される（ＫｌａｇｓｂｕｒｎおよびＤ‘Ａｍｏｒｅ、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ＆ Ｇ
ｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖｉｅｗｓ ７：２５９−２７０（１９９６）
）。脈管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）はＦＬＫ−１／ＫＤＲに対するよりもよ
り高度な親和性でもってＦｌｔ−１に結合し、血管内皮細胞に対し有糸分裂を誘
発する（Ｔｅｒｍａｎら、前出（１９９２）；Ｍｕｓｔｏｎｅｎら、前出；Ｄｅ
Ｖｒｉｅｓら、前出）。Ｆｌｔ−１は脈管の成長中の内皮構成に不可欠であると
考えられている。Ｆｌｔ−１発現はマウス胚における初期脈管成長および創傷の
治癒中の新生脈管形成に関係している（ＭｕｓｔｏｎｅｎおよびＡｌｉｔａｌｏ
、前出）。成熟器官例えば腎糸球体におけるＦｌｔ−１の発現により細胞成長に
関係しないこのレセプターの別の機能が示唆される（ＭｕｓｔｏｎｅｎおよびＡ
ｌｉｔａｌｏ、前出）。

【００１０】 前記したように、最近の知見によりＶＥＧＦが正常および病的な血管形成の双
方の刺激において役割を果たすことが示唆されている（Ｊａｋｅｍａｎら、Ｅｎ
ｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３３：８４８−８５９（１９９３）；Ｋｏｌｃｈら
、Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎ
ｔ ３６：１３９−１５５（１９９５）；Ｆｅｒｒａｒａら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎ
ｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ １８（１）：４−２５（１９９７）；Ｆｅｒｒａｒａら、
Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ（Ｌ．Ｄ．Ｇｏｌｄｂ
ｅｒｇおよびＥ．Ｍ．Ｒｏｓｅｎ編）、２０９−２３２（１９９７））。加えて
、ＶＥＧＦは脈管透過性の調節および増強にも関与している（Ｃｏｎｎｏｌｌｙ
ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：２００１７−２００２４（１９８９）；
Ｂｒｏｗｎら、Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ（Ｌ．
Ｄ．ＧｏｌｄｂｅｒｇおよびＥ．Ｍ．Ｒｏｓｅｎ編）、２３３−２６９（１９９
７））。

【００１１】 また別のｍＲＮＡのスプライシングから生じた異なる形態のＶＥＧＦが報告さ
れており、Ｆｅｒｒａｒａら（Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．４７：２１１−
２１８（１９９１））により記載されている４種が含まれる。分泌性であり、し
かも優先的に細胞結合するＶＥＧＦの種がＦｅｒｒａｒａら、前出により同定さ
れており、タンパク質はジスルフィド結合した二量体の形態で存在することが知
られている。

【００１２】 いくつかの関連するＶＥＧＦの相同体が最近同定された。しかしながら、その
正常な生理学的プロセスおよび疾患プロセスにおける役割は未だに解明されてい
ない。加えて、ＶＥＧＦファミリーのメンバーはしばしば多くの組織でＶＥＧＦ
と同時発現され、概してＶＥＧＦとヘテロ二量体を形成することができる。この
特性は恐らくヘテロ二量体のレセプター特異性および生物学的効果を変化させ、
以下に説明するようなその特異的機能の解明をさらに複雑化している（Ｋｏｒｐ
ｅｌａｉｎｅｎおよびＡｌｉｔａｌｏ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ
ｌ．１５９−１６４（１９９８）およびそこに引用されている参考文献）。

【００１３】 胎盤成長因子（ＰｌＧＦ）はＶＥＦＧ配列に有意な相同性を呈する（Ｐａｒｋ
ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２５６４６−２５６５４（１９９４）；
Ｍａｇｌｉｏｎｅら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ８：９２５−９３１（１９９３））。
ＶＥＧＦではｍＲＮＡの代替スプライシングにより異なる種のＰｌＧＦを生じ、
タンパク質は二量体の形態で存在する（Ｐａｒｋら、前出）。ＰｌＧＦ−１およ
びＰｌＧＦ−２は高度な親和性をもってＦｌｔ−１に結合し、ＰｌＧＦ−２はま
たニューロピリン−１とも強く結合する（Ｍｉｇｄａｌら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．２７３（３５）：２２２７２−２２２７８）が、ＦＬＫ−１／ＫＤＲのい
ずれとも結合しない（Ｐａｒｋら、前出）。ＰｌＧＦは、ＶＥＧＦが低濃度で存
在する場合、脈管透過性および内皮細胞に及ぼすＶＥＧＦのマイトジェン効果の
双方を強化することが報告されている（ヘテロ二量体を形成するためであると考
えられている）（Ｐａｒｋら、前出）。

【００１４】 ＶＥＧＦ−ＢはＦｌｔ−１／ＶＥＧＦＲ−１とも結合すると思われる２つのイ
ソ体として産生される（１６７および１８５残基）。それはウロキナーゼ型プラ
スミノーゲンアクチベーターおよびプラスミノーゲンアクチベーターインヒビタ
ー１の発現および活性を変調することにより、細胞外マトリックス分解、細胞付
着、および移動の制御において役割を果たし得る（Ｐｅｐｐｅｒら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５（２０）：１１７０９−１１７１４
（１９９８））。

【００１５】 ＶＥＧＦ−Ｃは元来リンパ性内皮細胞により主に発現されるＶＥＧＦＲ−３／
Ｆｌｔ−４のリガンドとしてクローン化された。その十分にプロセシングされた
形態であるＶＥＧＦ−ＣはＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ−２にも結合し、インビトロでの
内皮細胞の増殖および移動並びにインビボモデルでの血管形成を刺激する（Ｌｙ
ｍｂｏｕｓｓａｋｉら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５３（２）：３９５−４０
３（１９９８）；Ｗｉｔｚｅｎｂｉｃｈｌｅｒら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１
５３（２）：３８１−３９４（１９９８））。ＶＥＧＦ−Ｃのトランスジェニッ
ク過剰発現によりリンパ管のみの増殖および拡大が引き起こされるが、血管は影
響を受けない。ＶＥＧＦとは異なり、ＶＥＧＦ−Ｃの発現は低酸素により誘起さ
れない（Ｒｉｓｔｉｍａｋｉら、Ｊ．ＢＩｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３（１４）：８
４１３−８４１８（１９９８））。

【００１６】 最も最近見出されたＶＥＧＦ−Ｄは構造的にＶＥＧＦ−Ｃに非常に類似してい
る。ＶＥＧＦ−Ｄは少なくとも２つのＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ−３／Ｆｌｔ−４
およびＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ−２に結合し、活性化することが報告されている。そ
れは元来繊維芽細胞のｃ−ｆｏｓ誘導可能なマイトジェンとしてクローン化され
、肺および皮膚の間葉細胞に最も顕著に発現される（Ａｃｈｅｎら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９５（２）：５４８−５５３（１９
９８）およびそこに引用されている参考文献）。

【００１７】 ＶＥＧＦ−ＣおよびＶＥＧＦ−Ｄは、皮下組織に注射した場合、マイルズアッ
セイでインビボで脈管透過性の増強を誘起することが特許請求されている（ＰＣ
Ｔ／ＵＳ９７／１４６９６；ＷＯ９８／０７８３２、Ｗｉｔｚｅｎｂｉｃｈｌｅ
ｒら、前出）。それらが発現される組織の脈管透過性および内皮応答の変調にお
けるこれらのリガンドの生理学的役割および重要性はまだ明らかにされていない
。

【００１８】 ＶＥＧＦおよびＶＥＧＦＲのその他の相同体の新たな発見並びにリガンドおよ
びレセプターヘテロ二量体形成に関する先例に基づいて、かかるＶＥＧＦ相同体
の作用は、ＶＥＧＦリガンドヘテロ二量体の形成および／もしくはレセプターの
ヘテロ二量体形成、またはまだ見出されていないＶＥＧＦＲとの結合に関与し得
る（Ｗｉｔｚｅｎｂｉｃｈｌｅｒら、前出）。また、最近の報告ではニューロピ
リン−１（Ｍｉｇｄａｌら、前出）またはＶＥＧＦＲ−３／Ｆｌｔ−４（Ｗｉｔ
ｚｅｎｂｉｃｈｌｅｒら、前出）またはＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ−２以外のレセプタ
ーが脈管透過性の誘導に寄与し得ることが示唆されている（Ｓｔａｃｋｅｒ，Ｓ
．Ａ．、Ｖｉｔａｌｉ，Ａ．、Ｄｏｍａｇａｌａ，Ｔ．、Ｎｉｃｅ，Ｅ．および
Ｗｉｌｋｓ，Ａ．Ｆ．、「Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ」
Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｊａｎ
．（１９９８），Ｏｒｌａｎｄｏ，ＦＬ；Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄｉａｂｅｔｅｌ
ｏｇｉａ ４０：Ｓ１１８−１２０（１９９７））。これまでのところ、ＶＥＧ
Ｆ媒介脈管過透過性におけるＫＤＲの本質的な役割に関する直接的な証拠は開示
されていない。

【００１９】 非レセプターチロシンキナーゼ 非レセプターチロシンキナーゼは細胞外および膜貫通配列を欠如する細胞性酵
素の集まりを表す。現在のところ、１１個のサブファミリー（Ｓｒｃ、Ｆｒｋ、
Ｂｔｋ、Ｃｓｋ、Ａｂｌ、Ｚａｐ７０、Ｆｅｓ／Ｆｐｓ、Ｆａｋ、Ｊａｋ、Ａｃ
ｋおよびＬＩＭＫ）を含む２４個以上の非レセプターチロシンキナーゼが同定さ
れている。現在のところ、非レセプターチロシンキナーゼのＳｒｃサブファミリ
ーが最も多くのＰＴＫから成り、Ｓｒｃ、Ｙｅｓ、Ｆｙｎ、Ｌｙｎ、Ｌｃｋ、Ｂ
ｌｋ、Ｈｃｋ、ＦｇｒおよびＹｒｋを含む。酵素のＳｒｃサブファミリーは癌遺
伝子に連結している。非レセプターチロシンキナーゼに関するより詳細な論考は
Ｂｏｌｅｎ、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ８：２０２５−２０３１（１９９３）に記載さ
れており、これは出展明示により本明細書の一部とする。

【００２０】 チロシンキナーゼの多くは、ＲＴＫであっても非レセプターチロシンキナーゼ
であっても、癌、乾癬およびその他の過増殖性障害または過剰免疫応答などの多
くの病態に関係する細胞性シグナル発生経路に関係することが見出されている。

【００２１】 ＰＴＫを変調する化合物の開発 細胞増殖、異常細胞増殖に関係する疾患および障害の調節、制御および変調に
対して推測されるＰＴＫの重要性を考慮して、変異リガンド（米国特許第４９６
６８４９号）、可溶性レセプターおよび抗体（出願番号ＷＯ９４／１０２０２；
ＫｅｎｄａｌｌおよびＴｈｏｍａｓ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ／Ａｃａｄ／Ｓｃｉ．
９０：１０７０５−１０７０９（１９９４）；Ｋｉｍら、Ｎａｔｕｒｅ ３６２
：８４１−８４４（１９９３））、ＲＮＡリガンド（Ｊｅｌｌｉｎｅｋら、Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３：１０４５０−１０４５６；Ｔａｋａｎｏら、Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏ．Ｃｅｌｌ ４：３５８Ａ；Ｋｉｎｓｅｌｌａら、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ
Ｒｅｓ．１９９：５６−６２（１９９２）；Ｗｒｉｇｈｔら、Ｊ．Ｃｅｌｌｕ
ｌａｒ Ｐｈｙｓ．１５２：４４８−４５７（１９９２））およびチロシンキナ
ーゼインヒビター（ＷＯ９４／０３４２７；ＷＯ９２／２１６６０；ＷＯ９１／
１５４９５；ＷＯ９４／１４８０８；米国特許第５３３０９９２号；Ｍａｒｉａ
ｎｉら、Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．３５：２２６８
（１９９４））などの様々な研究法を用いて、レセプターおよび非レセプターチ
ロシンキナーゼ「インヒビター」を同定するための多くの試みが為されてきた。

【００２２】 もっと最近では、チロシンキナーゼインヒビター様に作用する小型分子を同定
する試みが為されている。例えばビス・単環式、二環式またはヘテロ環式アリー
ル化合物（ＰＣＴ ＷＯ９２／２０６４２）およびビニレン・アザインドール誘
導体（ＰＣＴ ＷＯ９４／１４８０８）が一般にチロシンキナーゼインヒビター
として記載されている。スチリル化合物（米国特許第５２１７９９９号）、スチ
リル置換ピリジル化合物（米国特許第５３０２６０６号）、特定のキナゾリン誘
導体（ＥＰ出願番号０５６６２６６ Ａ１；Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ
．Ｐａｔ．８（４）：４７５−４７８（１９９８））、セレノインドールおよび
セレナイド（ＰＣＴ ＷＯ９４／０３４２７）、三環式・ポリヒドロキシル化合
物（ＰＣＴ ＷＯ９２／２１６６０）並びにベンジルホスホン酸化合物（ＰＣＴ
ＷＯ９１／１５４９５）が癌の処置に使用するためのチロシンキナーゼインヒ
ビターとして使用される化合物として記載されている。アニリノシノリン（ＰＣ
Ｔ ＷＯ９７／３４８７６）およびキナゾリン誘導体化合物（ＰＣＴ ＷＯ９７
／２２５９６；ＰＣＴ ＷＯ９７／４２１８７）が血管形成および脈管透過性の
インヒビターとして記載されている。

【００２３】 加えて、セリン／スレオニンキナーゼインヒビターとして作用する小型分子を
同定する試みが為されている。とりわけビス（インドリルマレイミド）化合物が
、その機能不全がＶＥＧＦ関連疾患の脈管透過性の変化に関係している特定のＰ
ＫＣセリン／スレオニンキナーゼイソ体を阻止するとして記載されている（ＰＣ
Ｔ ＷＯ９７／４０８３０；ＰＣＴ ＷＯ９７／４０８３１）。

【００２４】 従ってレセプターおよび非レセプターチロシン並びにセリン／スレオニンキナ
ーゼの活性を変調することによりシグナルトランスダクションを特異的に阻止し
、異常なまたは不適切な細胞増殖、分化または代謝を制御および変調する有効な
小型の化合物を同定することは望ましいことである。とりわけ、血管形成プロセ
スまたは浮腫、腹水、滲出、滲出液および高分子脈管外遊出に至る脈管過透過性
の形成並びにマトリックス沈着および関連する障害に必須であるチロシンキナー
ゼの機能を特異的に阻止する方法および化合物を同定することは有益であろう。

【００２５】 （発明の開示） 本発明は式Ｉ：

【００２６】

【化２】 の化合物および医薬上許容されるその塩を提供し；式中、 Ｌ_１は式（Ｅ）_ｓ（ＣＨ_２）_ｑの基を表し、ここでＥはＮＲ_２４、ＯまたはＳ
を表し、ｓは０または１であり、ｑは０から６の整数であり、ｓが１である場合
、ｑは少なくとも１であり、ここでアルキレン鎖は１つまたはそれ以上の：１つ
またはそれ以上のヒドロキシ、ハロまたは置換されていてもよいアミノで置換さ
れていてもよいＣ_１−６アルキル基；１つまたはそれ以上のヒドロキシ、ハロま
たは置換されていてもよいアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルコキシ基
；ヒドロキシ；ハロ；または置換されていてもよいアミノ；で置換されていても
よい； ＡはＣＯＮＨ、ＮＨＣＯ、ＳＯ_２ＮＨ、ＮＨＳＯ_２、またはＮＲ_２５を表し； Ｌ_２は式（ＣＨ_２）_ｒの基を表し、ここでｒは０から６の整数であり、ここで
アルキレン鎖は１つまたはそれ以上の：１つまたはそれ以上のヒドロキシ、ハロ
または置換されていてもよいアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基
；１つまたはそれ以上のヒドロキシ、ハロまたは置換されていてもよいアミノで
置換されていてもよいＣ_１−６アルコキシ基；ヒドロキシ；ハロ；または置換さ
れていてもよいアミノ；で置換されていてもよい； Ｒ_２は１つまたはそれ以上の：ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルコキシまたは
置換されていてもよいアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基；１つ
またはそれ以上の：ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルコキシまたは置換されてい
てもよいアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルコキシ基を表すか；または
Ｒ_２はハロ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルバモイル、Ｃ_１−６アルカノイ
ル基、（Ｃ_１−６アルコキシ）カルボニル基または置換されていてもよいアミノ
である； ｎは０、１、２または３を表す； Ｘはａ）置換されたメチレン、ｂ）カルボニル、ｃ）酸素、ｄ）式Ｃ＝ＮＯＲ _７ の基であって、ここでＲ_７はＨまたはＣ_１−４アルキル基を表す、ｅ）式ＮＲ _８ の基であって、ここでＲ_８はＨ、置換されていてもよいＣ_１−４アルキル基、
または置換されていてもよいフェニル、ｆ）式（ＣＨ_２）_ｎの基であって、ここ
でｎは１、２または３である、またはｇ）式Ｓ（Ｏ）_ｐの基であって、ここでｐ
は０、１または２である；を表す。

【００２７】 Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５およびＲ_６は別個にａ）Ｈ、ｂ）ハロ、ｃ）1つまたはそれ
以上の：ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルコキシ基、ハロまたは置換されていてもよい
アミノ基で置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基、ｄ）1つまたはそれ以上
の：ヒドロキシ；Ｃ_１−６アルコキシ基；ハロ；または置換されていてもよいア
ミノ基で置換されていてもよいＣ_１−６アルコキシ（ただしアルコキシ基の酸素
が結合した炭素にこれらの基が結合していない）、ｅ）置換されていてもよいフ
ェノキシ、ｆ）ヒドロキシ、ｇ）式ＣＯＲ_ａの基であって、ここでＲ_ａはヒドロ
キシ、Ｃ_１−６アルコキシ基を表すか、またはＲ_ａは置換されていてもよいアミ
ノ基を表す、ｈ）置換されていてもよいアミノ基、ｉ）Ｃ_１−６アルカノイル基
、ｊ）ニトロ、ｋ）置換されていてもよいフェニルＣ_１−６アルキル、ｌ）置換
されていてもよいフェニルＣ_１−６アルコキシ、ｍ）シアノ；またはｏ）Ｃ_{２− ４} アルケニル基または各々が1つまたはそれ以上の：Ｃ_１−６アルキル基、ハロ
で置換されていてもよいフェニルで置換されていてもよいＣ_１−６アルコキシ基
またはＣ_２−４アルキニル基を表す；および １）ＡがＳＯ_２ＮＨ、またはＮＨＳＯ_２である場合、 Ｒ_１はａ）置換されていてもよいフェニル、ｂ）置換されていてもよいヘテロ
アリール、ｃ）さらにＯ、ＳまたはＮから選択されるヘテロ原子を含有してもよ
く、Ｃ_１−６アルキル基で置換されていてもよい、窒素原子を含有する５、６ま
たは７員飽和へテロ環式環であって、ここで該飽和環は炭素またはヘテロ原子を
介して結合できる、ｄ）置換されていてもよいアミノ基またはｅ）Ｃ_１−６アル
コキシ基を表す； ２）ＡがＣＯＮＨ、またはＮＨＣＯである場合、 Ｒ_１はａ）ニトロまたは1つまたはそれ以上のハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１−６ア
ルコキシまたは置換されていてもよいアミノで置換されていてもよい1つまたは
それ以上のＣ_１−６アルコキシ基で置換されたフェニル、ｂ）置換されていても
よいヘテロアリール、またはｃ）さらにＯ、ＳまたはＮから選択されるヘテロ原
子を含有してもよく、Ｃ_１−６アルキル基で置換されていてもよい、窒素原子を
含有する５、６または７員飽和へテロ環式環であって、ここで該飽和環は炭素原
子を介して結合する、ｄ）Ｃ_１−６アルコキシ基を表す； ３）ＡがＮＲ_２５基を表し、ｑは少なくとも１である場合、 Ｒ_１はａ）置換されていてもよいフェニル、ｂ）置換されていてもよいヘテロ
アリール、またはｃ）置換されていてもよいアミノ基を表し；並びに ４）ＡがＮＲ_２５基を表し、ｑは０であり、ｓは０である場合、 Ｒ_１は置換されていてもよいヘテロアリールを表し； Ｒ_２４およびＲ_２５は別個にＨ；1つまたはそれ以上の：ヒドロキシ、Ｃ_１−
６アルコキシ基、ハロまたは置換されていてもよいアミノ基で置換されていても
よいＣ_１−６アルキル基；Ｃ_１−６アルカノイル基またはＣ_１−６アルキルスル
フォニル基；を表す（ただし２個のヘテロ原子が同一のｓｐ^３混成した炭素原子
に結合しない）。

【００２８】 ｎは０または１以外である場合、Ｒ_２基は同一かまたは異なっていてよいこと
は当業者には理解されよう。

【００２９】 置換されていてもよいアミノ基なる用語は式ＮＲｋＲ_１を意味し、式中Ｒｋお
よびＲ_１は別個に水素、Ｃ_１−１２アルキル基、Ｃ_１−１２アルコキシ基、Ｃ_{３ −１２} シクロアルキル基、フェニル基、フェニルＣ_１−６アルキル基、ヘテロア
リール基またはヘテロアリールＣ_１−６アルキル基を表し、ここで該基の各々は
1つまたはそれ以上の：Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、ヒドロキ
シ、ハロで置換されていてもよいか；またはＲｋおよびＲ_１は一緒に、それらが
結合する窒素原子と共にさらにＯ、ＳまたはＮから選択されるヘテロ原子を含有
してもよく、Ｃ_１−６アルキル基で置換されていてもよい５、６または７員飽和
へテロ環式環を表す。

【００３０】 フェニルおよびヘテロアリールに関して本明細書にて用いられる、置換されて
いてもよいなる用語は1つまたはそれ以上の：ａ）ハロ、ｂ）1つまたはそれ以上
の：ヒドロキシ、ハロ、置換されていてもよいアミノ基、またはＯ、ＳまたはＮ
から選択されるさらなるヘテロ原子を含有してもよく、Ｃ_１−６アルキル基で置
換されていてもよい５、６または７員飽和へテロ環式環（該飽和環は炭素原子を
介して結合する）で置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基、ｃ）1つまたは
それ以上の：ヒドロキシ；Ｃ_１−６アルコキシ基；ハロ；置換されていてもよい
アミノ基（ただしこれらの基がアルコキシ基の酸素に結合している炭素に結合し
ていない場合）、またはＯ、ＳまたはＮから選択されるさらなるヘテロ原子を含
有してもよく、Ｃ_１−６アルキル基で置換されていてもよい５、６または７員飽
和へテロ環式環（該飽和環は炭素原子を介して結合する）で置換されていてもよ
いＣ_１−６アルコキシ基、ｄ）置換されていてもよいフェノキシ、ｅ）ヒドロキ
シ、ｆ）式ＣＯＲａの基であって、式中Ｒａはヒドロキシ、Ｃ_１−６アルコキシ
基を表すか、またはＲａは式ＮＲｂＲｃの基を表し、ここでＲｂおよびＲｃは別
個に水素、Ｃ_１−１２アルキル基、Ｃ_３−１２シクロアルキル基またはフェニル
を表し、ここでアルキル基、シクロアルキル基およびフェニルは1つまたはそれ
以上の：ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_３−１２シクロアルキル基または式ＮＲｈＲｊの
アミノ基、ここでＲｈおよびＲｊは別個に水素またはＣ_１−６アルキル基を表す
か、またはＲｈおよびＲｊは一緒にそれらが結合する窒素原子と一緒にＯ、Ｓま
たはＮから選択されるさらなるヘテロ原子を含有してもよく、Ｃ_１−６アルキル
基で置換されていてもよい５、６または７員飽和へテロ環式環を表す、で置換さ
れていてもよい、ｇ）式ＮＲｄＲｅの基、ここでＲｄおよびＲｅは別個に水素、
Ｃ_１−１２アルキル基、Ｃ_３−１２シクロアルキル基もしくはフェニルまたは式
ＣＯＲｆの基（ここでＲｆは水素、Ｃ_１−１２アルキル基、Ｃ_３−１２シクロア
ルキル基、フェニルＣ_１−６アルキル基またはフェニルを表す）から選択され、
ここで各々の場合、アルキル基、シクロアルキル基、およびフェニルは1つまた
はそれ以上の：ハロ、ヒドロキシ、ニトロまたは式ＮＲｈＲｊのアミノ基（ここ
でＲｈおよびＲｊは前記で定義するとおりである）により置換されていてもよい
、ｈ）式Ｏ（ＣＨ_２）ｍＲｇの基であって、式中ｍは２、３、４または５であり
、Ｒｇはヒドロキシまたは式ＮＲｄＲｅの基を表し、ここでＲｄおよびＲｅは前
記で定義するとおりであるか；またはＲｇは式ＣＯＲａの基を表し、ここでＲａ
は前記で定義するとおりであり、ｍは１、２、３、４または５である、ｉ）ニト
ロ、ｊ）置換されていてもよいフェニルＣ_１−６アルキル、ｋ）置換されていて
もよいフェニルＣ_１−６アルコキシ、ｌ）シアノ、ｍ）Ｃ３−６アルケニルオキ
シ基、ｎ）ピリジルオキシまたはピリジルチオ基、ここでピリジン環は1つまた
はそれ以上の：トリフルオロメチルまたはニトロで置換されていてもよい、ｏ）
ヒドロキシアミノ、ｐ）アミノメチル、ｑ）ホルムアミドメチル、ｒ）Ｃ_１−６ アルキルチオ基、ｓ）フェニルまたはｔ）Ｃ_２−４アルケニル基または各々が1
つまたはそれ以上の：Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基またはハロで
置換されていてもよいフェニルで置換されていてもよいＣ_２−４アルケニル基、
で置換されていることを意味する。

【００３１】 ヘテロアリールなる用語は置換されていてもよい単環式または二環式芳香族へ
テロ環を意味し、ここでヘテロ環は窒素、イオウまたは酸素から選択される１、
２、３または４個のヘテロ原子を含有する。ヘテロアリール基は炭素またはヘテ
ロ原子を介して結合できる。適当なヘテロアリール基にはイミダゾリル、フリル
、ピローリル、チエニル、オキサゾリル、チアゾリル、イソキサゾリル、チアジ
アゾリル、オキサジアゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダ
ジニル、キノリル、イソキノリル、インダゾリル、ベンゾキサゾリル、ベンゾフ
リル、ベンゾチアゾリル、インドリジニル、イミダゾピリジニルまたはベンゾ（
ｂ）チエニルなどがあり、その各々は前記のように置換されていてもよい。

【００３２】 置換されていてもよいアミノ基が飽和へテロ環式環を表す場合、環はモルフォ
リノ、ペルヒドロチアジン−４−イル、ピペリジノ、ピロリジン−１−イル、ピ
ペラジン−１−イル、４−メチルピペラジン−４−イル、チアモルフォリニル、
ペルヒドロ−１，４−ジアゼピン−１−イルまたはペルヒドロアゼピニルである
のが好ましい。

【００３３】 置換されたメチレンなる用語は例えば1つまたはそれ以上の：ヒドロキシまた
はＣ_１−４アルキル基（ここでアルキル基はさらに式ＮＲｒＲｓの基（ここでＲ
ｒおよびＲｓは別個にＨまたはＣ_１−６アルキル基を表す）で置換されていても
よい）で置換されたメチレンを意味する。

【００３４】 本明細書にて記載される３個またはそれ以上の原子の鎖を含有するいずれの基
も、鎖が直鎖状または分岐鎖状でよい基を意味することは理解されよう。例えば
、アルキル基はプロピルを含んでなってよく、プロピルにはｎ−プロピルおよび
イソプロピルが含まれ、ブチルにはｎ−ブチル、セカンダリー・ブチル、イソブ
チルおよびターシャリー・ブチルが含まれる。Ｃ_３−１２シクロアルキル基なる
用語には架橋基、例えばアダマンチルが含まれる。本明細書にて用いられる「ハ
ロ」なる用語はフルオロ、クロロ、ブロモおよびインドを意味する。

【００３５】 好ましくはＸはＣＨ_２またはＳである。

【００３６】 式Ｉの好ましい化合物の第1群では、ＸはＣＨ_２であり、ＡはＮＲ_２５である
。

【００３７】 式Ｉの好ましい化合物の第２群では、ＸはＳであり、ＡはＮＲ_２５である。

【００３８】 式Ｉの好ましい化合物の第３群では、ＸはＣＨ_２であり、ＡはＨＮＳＯ_２であ
る。

【００３９】 式Ｉの好ましい化合物の第４群では、ＸはＣＨ_２であり、ＡはＳＯ_２ＮＨであ
る。

【００４０】 式Ｉの好ましい化合物の第５群では、ＸはＣＨ_２であり、ＡはＣＯＮＨである
。

【００４１】 式Ｉの好ましい化合物の第６群では、ＸはＣＨ_２であり、ＡはＨＮＣＯである
。

【００４２】 式Ｉの最も好ましい化合物では、ＸはＣＨ_２であり、ＡはＮＲ_２５であり、Ｌ _１ は（ＣＨ_２）_ｑであり、ここでｑは１から６の整数であり、アルキレン鎖は１
つまたはそれ以上の：１つまたはそれ以上のヒドロキシ、ハロ、または置換され
ていてもよいアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基；１つまたはそ
れ以上のヒドロキシ、ハロ、または置換されていてもよいアミノで置換されてい
てもよいＣ_１−６アルコキシ基；ヒドロキシ；ハロ；または置換されていてもよ
いアミノで置換されていてもよく；Ｌ_２は結合であり、Ｒ_１は置換されていても
よいピリジルである。

【００４３】 式Ｉの化合物は医薬上許容される酸との塩として存在できる。本発明はかかる
塩を包含する。かかる塩の例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、メタン
スルホン酸塩、硝酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、酒石
酸塩（例えば（＋）−酒石酸塩、（−）−酒石酸塩またはラセミ混合物を含むそ
の混合物）、コハク酸塩、安息香酸塩およびグルタミン酸のごときアミノ酸との
塩などがある。これらの塩を当業者に既知の方法により製造できる。

【００４４】 酸性置換基を有する特定の式Ｉの化合物は医薬上許容される塩基との塩として
存在できる。本発明はかかる塩をも包含する。かかる塩の例としては、ナトリウ
ム塩、カリウム塩、リジン塩およびアルギニン塩などがある。これらの塩を当業
者に既知の方法により製造できる。

【００４５】 式Ｉの特定の化合物およびその塩は１つ以上の結晶形態で存在でき、本発明は
各結晶形態およびその混合物を包含する。

【００４６】 式Ｉの特定の化合物およびその塩は溶媒和化合物、例えば水和物の形態でも存
在でき、本発明は各溶媒和化合物およびその混合物を包含する。

【００４７】 式Ｉの特定の化合物は１つまたはそれ以上のキラル中心を含有でき、異なる光
学活性形態で存在できる。式Ｉの化合物が１個のキラル中心を含有する場合、化
合物は２つの鏡像異性体の形態で存在し、本発明は鏡像異性体および鏡像異性体
の混合物の双方を包含する。当業者に既知の方法、例えば結晶化；例えば結晶化
、ガス−液体または液体クロマトグラフィーにより分離できるジアステレオマー
誘導体または複合体の形成；鏡像異性体特異的試薬を用いる1つの鏡像異性体に
選択的な反応、例えば酵素エステル化；または例えばキラル支持体、例えば結合
キラルリガンドを有するシリカ上で、またはキラル溶媒の存在下、キラル環境下
でのガス−液体または液体クロマトグラフィーにより分離できるジアステレオマ
ー塩の形成により鏡像異性体を分割できる。望ましい鏡像異性体が前記の分離方
法の1つにより別の化学物質に転換される場合、望ましい鏡像異性体形態を遊離
される別の工程が必要であることは理解されよう。また別に、光学的に活性な試
薬、基質、触媒または溶媒を用いて合成により、または不斉変換により、ある鏡
像異性体を別のものに変換することにより特異的鏡像異性体を合成できる。

【００４８】 式Ｉの化合物が１つ以上のキラル中心を含有する場合、それはジアステレオマ
ー形態で存在できる。当業者に既知の方法、例えばクロマトグラフィーまたは結
晶化によりジアステレオマー対を分離でき、各対の個々の鏡像異性体を前記のよ
うに分離できる。本発明は式Ｉの化合物の各ジアステレオマーおよびその混合物
を包含する。

【００４９】 式Ｉの特定の化合物は異なる互変異性形態でか、または異なる幾何異性体とし
て存在でき、本発明は式Ｉの化合物の各互変異性体および／または幾何異性体並
びにその混合物を包含する。

【００５０】 式Ｉの特定の化合物は異なる安定立体配座形態で存在でき、これを分離できる
。不斉単結合に関して制限された回転によって生じるねじれ不斉は、例えば立体
障害または環のひずみが原因であり、異なる配座異性体の分離が可能である。本
発明は式Ｉの化合物の各立体配座異性体およびその混合物を包含する。

【００５１】 式Ｉの特定の化合物は両性イオン形態で存在でき、本発明は式Ｉの化合物の各
両性イオン形態およびその混合物を包含する。

【００５２】 本発明の化合物はセリン／スレオニンおよびチロシンキナーゼのインヒビター
として有用である。とりわけ、本発明の化合物は過増殖性疾患において、とりわ
け血管形成のプレセスにおいて重要であるチロシンキナーゼのインヒビターとし
て有用である。これらの化合物は抗血管形成性であるので、これらは血管形成が
重要な構成要素である病態の進行を阻止するのに重要な物質である。

【００５３】 ここで置換体の好ましい定義を提示する。

【００５４】 好ましいＲ_１は置換されていてもよいフェニル、置換されていてもよいチエニ
ル、置換されていてもよいピリジル、置換されていてもよいフリル、または置換
されていてもよいピロリルを表す。

【００５５】 より好ましいＲ_１は２−チエニル、３−チエニル、２−フリル、３−フリル、
２−ピリジル、３−ピリジルまたは４−ピリジルを表し、その各々は置換されて
いてもよく、モノ−、ジ−、トリ−置換されていてもよいフェニルでよく、ここ
で置換体は置換されていてもよいアルコキシ（とりわけメトキシ、３−モルフォ
リノプロポキシ、２−モルフォリノエトキシ、３−カルボキシプロポキシ、カル
ボキシメトキシ、２−カルボキシエトキシ、２−カルバモイルエトキシ、カルバ
モイルメトキシ、３−カルバモイルプロポキシ、２−ピペリジノエトキシ、２−
（ピペラジン−１−イル）エトキシ、２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ、
２−ジメチルアミノエトキシ、２−（ペルヒドロ−チアジン−４−イル）エトキ
シ、３−ピペリジノプロポキシ、３−（ピペラジン−１−イル）プロポキシ、３
−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ、３−ジメチルアミノプロポキシ、３−
（ペルヒドロチアジン−４−イル）プロポキシ）、低級アルキル（とりわけメチ
ル）、ハロ（とりわけフルオロおよびクロロ）、アリール（とりわけフェニル）
、ヒドロキシ、アリールオキシ（とりわけフェノキシ）、アリールアルコキシ（
とりわけベンジルオキシ）、低級ジアルキルアミノ（とりわけジメチルアミノ）
、低級ポリハロアルキル、低級ポリハロアルコキシ（とりわけジフルオロメトキ
シ）、ニトロ、シアノ、低級アルキルチオ（とりわけメチルチオ）、カルボキシ
、低級アルコキシカルボニル（とりわけメトキシカルボニル）、アミド（とりわ
けアセトアミドおよびベンズアミド）および置換されていてもよいカルバモイル
（とりわけカルバモイル、Ｎ−メチルカルバモイル、Ｎ−フェニルカルバモイル
）およびピリジルオキシまたはピリジルチオ基（ここでピリジン環が１つまたは
それ以上の：トリフルオロメチルまたはニトロで置換されていてもよい）から選
択する。

【００５６】 最も好ましいＲ_１は４−ピリジル、２−ホルムアミドメチル−４−ピリジル、
２−アミノメチル−４−ピリジル、２−（ヒドロキシアミジノ）−４−ピリジル
、２−カルバモイル−４−ピリジル、４−ピリジル−Ｎ−オキサイド、２−クロ
ロ−４−ピリジル、２−シアノ−４−ピリジル、５−メチル−２−フリル、５−
（２−ニトロ−４−トリフルオロメチルフェニル）フル−２−イル、フェニル。
４−メトキシフェニル、３−メトキシフェニル、２−メトキシフェニル、３，４
−ジメトキシフェニル、３，４，５−トリメトキシフェニル、４−（３−モルフ
ォリノプロポキシ）フェニル、４−（２−モルフォリノエトキシ）フェニル、４
−（３−カルボキシプロポキシ）フェニル、４−カルボキシメトキシフェニル、
４−（３−カルバモイルプロポキシ）フェニル、４−カルバモイルメトキシフェ
ニル、３−（３−モルフォリノ−プロポキシ）フェニル、３−（２−モルフォリ
ノエトキシ）フェニル、３−（３−カルボキシプロポキシ）フェニル、４−カル
ボキシメトキシフェニル、３−（３−カルバモイルプロポキシ）フェニル、３−
カルバモイルメトキシフェニル、２−ヒドロキシフェニル、３−ヒドロキシフェ
ニル、４−ヒドロキシフェニル、３−ヒドロキシー４−メトキシフェニル、４−
ヒドロキシ−３−メトキシフェニル、４−ジフルオロメトキシフェニル、３−ニ
トロフェニル、４−ニトロフェニル、３，５−ジ−ターシャリー・ブチル−４−
ヒドロキシフェニル、４−メチルフェニル、４−フルオロフェニル、２−クロロ
フェニル、３−クロロフェニル、４−クロロフェニル、２，４−ジクロロフェニ
ル、２−クロロ−５−ニトロフェニル、４−フルオロ−２−クロロフェニル、４
−メチルチオフェニル、４−ビフェニリル、３−フェノキシフェニル、４−フェ
ノキシフェニル、４−ベンジルオキシフェニル、４−ジメチルアミノフェニル、
４−ジエチルアミノフェニル、４−メトキシカルボニルフェニル、４−カルバモ
イルフェニル、４−シアノフェニル、４−Ｎ−メチルカルバモイルフェニル、４
−Ｎ−フェニルカルバモイルフェニル、４−アセトアミドフェニル、４−ベンズ
アミドフェニル、４−カルボキシフェニル、４−［Ｎ−（２−ジエチルアミノエ
チル）カルバモイル］フェニル、４−（プロプ−１−エニロキシ）フェニル、３
−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル、３−（Ｎ−（２−ジエチルアミノエチ
ル）−カルバモイルメトキシ）フェニル、３−［３−（Ｎ−（２−ジエチルアミ
ノエチル）カルバモイル）プロポキシ］フェニル、４−（Ｎ−（２−ジエチルア
ミノエチル）カルバモイルメトキシ）フェニル、４−［３−（Ｎ−（２−ジエチ
ルアミノエチル）カルバモイル）プロポキシ］フェニル、２−フリル、５−［３
，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−２−フリル、３−ブロモ−２−
チエニル、５−メトキシ−２−フリル、５−（２−ニトロ−４−トリフルオロメ
チルフェニル）−２−フリル、３−Ｎ−（２−モルフォリノエチル）カルバモイ
ルメトキシ）フェニル、３−［３−（Ｎ−（２−モルフォリノエチル）カルバモ
イル）プロポキシフェニル］、４−（Ｎ−（２−モルフォリノエチル）カルバモ
イルメトキシ）フェニル、４−（モルフォリノアセトアミド）フェニルおよび４
−［３−（Ｎ−（２−モルフォリノエチル）カルバモイル）プロポキシ］フェニ
ルを表す。

【００５７】 Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５およびＲ_６は別個に水素、ハロ（とりわけフルオロ）、置換
されていてもよい低級アルコキシ（とりわけメトキシ、３−モアルフォリノプロ
ポキシ、２−モルフォリノエトキシ、３−カルボキシプロポキシ、カルボキシメ
トキシ、２−カルボキシエトキシ、２−カルバモイルエトキシ、３−カルバモイ
ルプロポキシ、２−ピペリジノエトキシ、２−（ピペラジン−１−イル）エトキ
シ、２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ、２−ジメチルアミノエトキシ、２
−（ペルヒドロチアジン−１−イル）エトキシ、３−ピペリジノプロポキシ、３
−（ピペラジン−１−イル）プロポキシ、３−（ピロリジン−１−イル）プロポ
キシ、３−ジメチルアミノプロポキシ、３−（ペルヒドロチアジン−４−イル）
プロポキシ）、カルバモイルメトキシ、ヒドロキシプロピルオキシ、ヒドロキシ
エトキシ、（３−モルフォリノ）プロポキシおよび２−モルフォリノ）エトキシ
）、アミド（とりわけアセトアミドおよびベンズアミド）、置換されていてもよ
いカルバモイル（とりわけカルバモイル、Ｎ−メチルカルバモイルおよびＮ−フ
ェニルカルバモイル）、カルボキシ、ニトロ、およびアミノを表す。

【００５８】 より好ましくは、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５およびＲ_６は６，７−ジメトキシ、６，７
，８−トリメトキシ、６−フルオロ、６−アセトアミド、７−メトキシ、６−カ
ルバモイル、６−（Ｎ−メチルカルバモイル）、６−（Ｎ−フェニルカルバモイ
ル）、（３−モルフォリノ）プロポキシおよび２−モルフォリノ）−エトキシを
表す。

【００５９】 本明細書で用いる低級なる用語は１〜６個の炭素原子を有する基を意味する。

【００６０】 本発明の具体的な化合物には： ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール）−Ｎ−（４−ピ
リジル）ベンジルアミン Ｎ−［４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル
）フェニル］ベンゼンスルホンアミド ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
−（２−メトキシエチル）ベンズアミド ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
−（４−ニトロフェニル）ベンズアミド ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）イミ
ダゾール−１−イルアセトアニリド ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
−［２−（イミダゾール−１−イル）エチル］アニリン ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
−（２−モルフォリノエチル）ベンゼンスルホンアミド ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
−（２−メトキシエチル）ベンゼンスルホンアミド Ｎ−［２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル］−４−（１，４−ジヒドロイ
ンデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）ベンジルアミン Ｎ−［２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル］−４−（１，４−ジヒドロイ
ンデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）ベンゼンスルホンアミド ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
−（２−モルフォリノエチル）ベンジルアミン Ｎ−（４−エトキシフェニル）−４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−
ｃ］ピラゾール−３−イル）ベンジルアミン （Ｓ）−４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イ
ル）−Ｎ−（ピロリジン−２−イルメチル）ベンズアミド ４−（１Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
−［３−（イミダゾール−１−イル）プロピル］ベンジルアミン ４−（１Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
−（２−モルフォリノエチル）ベンジルアミン および医薬上許容されるその塩などがあり、個々の鏡像異性体および鏡像異性
体の混合物を含む。

【００６１】 本発明は式Ｉで表される化合物をチロシンキナーゼおよびセリン／スレオニン
キナーゼの酵素活性を阻止するのに十分な濃度で該キナーゼに投与することから
なる、該キナーゼの活性を阻止する方法を提供する。

【００６２】 本発明はさらに医薬的に有効量の前記の化合物および医薬上許容される担体ま
たは賦形剤を含む医薬用組成物におけるこれらの化合物の使用を包含する。これ
らの医薬用組成物を個体に投与して、血管形成に補助される疾患において血管形
成プロセスを遅延させるかもしくは停止させる、かまたは浮腫、滲出、滲出液も
しくは腹水症および脈管過透過性に関連するその他の状態を処置することができ
る。

【００６３】 （発明の詳細な説明） 本発明の化合物は抗血管形成特性を有する。これらの抗血管形成特性は血管形
成プロセスに必須であるタンパク質チロシンキナーゼを少なくとも部分的に阻止
することに起因する。この理由で、これらの化合物を関節炎、アテローム性動脈
硬化症、乾癬、血管腫、心筋血管形成、冠動脈および脳側枝、虚血性四肢血管形
成、創傷の治癒、消化性潰瘍ヘリコバクター関連疾患、骨折、ネコ引っ掻き熱、
ルベオーシス、新生血管緑内障および網膜症、例えば糖尿病性網膜症または年齢
に関連する黄班変性に関係する疾患のような病態に対する活性物質として使用す
ることができる。加えてこれらの化合物のいくつかは充実性腫瘍、悪性腹水症、
造血細胞癌および過増殖性障害例えば甲状腺過形成（とりわけグレーブス病）並
びに嚢（例えば多嚢胞性卵巣症候群（スタイン−レベンタール症候群）に特徴的
な卵巣間質の脈管過多）に対する活性物質として使用することができ、これはか
かる疾患が成長および／または転移のために血管細胞の増殖が必要であるからで
ある。

【００６４】 さらに、これらの化合物のいくつかを熱傷、慢性肺疾患、発作、ポリープ、ア
ナフィラキシー、慢性およびアレルギー性炎症、卵巣過剰刺激症候群、脳腫瘍関
連脳浮腫、高山病、外傷または低酸素症に誘起される脳または肺浮腫、眼球およ
び黄班浮腫、腹水症、並びに脈管過透過性、滲出、滲出液、タンパク質管外遊出
、すなわち浮腫が疾患の症状発現であるその他の疾患対する活性物質として使用
することができる。化合物はまたタンパク質管外遊出が繊維素および細胞外マト
リックス、間質増殖促進（例えば繊維症、硬変および手根管圧迫症候群）を招く
障害の処置にも有用であろう。

【００６５】 ＶＥＧＦは脈管過透過性および浮腫の形成に寄与することが知られている血管
形成成長因子でしかないという点で独特である。実際に、多くのその他の成長因
子の発現または投与に関連する脈管過透過性および浮腫がＶＥＧＦ産生に媒介さ
れるようである。炎症性サイトカインはＶＥＧＦ産生を刺激する。低酸素症の結
果多くの組織でＶＥＧＦの著明な上方制御に至り、従って梗塞、閉塞、虚血、貧
血または循環障害に関連する状況が典型的にはＶＥＧＦ／ＶＰＦ媒介の応答を呼
び起こす。脈管過透過性は浮腫に関係し、内皮を通過する交換を変化させ、高分
子管外遊出は、しばしば漏出を伴い、過剰のマトリックス沈着、間質増殖異常、
繊維症等に至り得る。従って、ＶＥＧＦ媒介の過透過性はこれらの病因論学的特
徴を有する障害の重要な原因となり得る。

【００６６】 前記で列挙した障害はＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ−２および／またはＦｌｔ−１／Ｖ
ＥＧＦＲ−１チロシンキナーゼに関係するタンパク質チロシンキナーゼにより有
意に媒介されると考えられる。これらのチロシンキナーゼの活性を阻止すること
により、病態の血管形成または脈管過透過性部分が著しく削られるので、列挙し
た障害の進行は阻止される。本発明の化合物の作用は特異的チロシンキナーゼの
選択性により、あまり選択的でないチロシンキナーゼインヒビターを用いた場合
に生じるであろう副作用を最小化する。

【００６７】 本発明の化合物はタンパク質キナーゼに対して阻止活性を有する。すなわち、
これらの化合物はタンパク質キナーゼによるシグナルトランスダクションを変調
する。本発明の化合物はセリン／スレオニンおよびチロシンキナーゼクラスのタ
ンパク質キナーゼを阻止する。とりわけ、これらの化合物はＫＤＲ／ＦＬＫ−１
／ＶＥＧＦＲ−２チロシンキナーゼの活性を選択的に阻止する。本発明の特定の
化合物はまた別のチロシンキナーゼ、例えばＦｌｔ−１／ＶＥＧＦＲ−１、Ｓｒ
ｃサブファミリーキナーゼ、例えばＬｃｋ、Ｓｒｃ、ｆｙｎ、ｙｅｓ等の活性を
も阻止する。さらに、本発明のいくつかの化合物はセリン／スレオニンキナーゼ
、例えば細胞サイクル工程において本質的な役割を果たすＣＤＫを著明に阻止す
る。本発明の包括的な化合物の特定のタンパク質キナーゼに対する強度および特
異性はしばしば変化し、置換基（すなわちＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５および
Ｒ_６）の特性、数および配置並びに立体配座制限の変更により最適化できる。加
えて、特定の化合物の代謝物はまた著明なタンパク質キナーゼ阻止活性を有し得
る。

【００６８】 本発明の化合物をかかる化合物を必要とする個体に投与した場合、これらの個
体において脈管過透過性および浮腫の形成を阻止する。これらの化合物は脈管過
透過性および浮腫の形成のプロセスに関与するＫＤＲチロシンキナーゼの活性を
阻止することにより作用すると考えられている。ＫＤＲチロシンキナーゼはまた
ＦＬＫ−１チロシンキナーゼ、ＮＹＫチロシンキナーゼまたはＶＥＧＦＲ−２チ
ロシンキナーゼとも称される。脈管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）またはその他
の活性化リガンド（例えばＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−ＤまたはＨＩＶ Ｔａｔタ
ンパク質）が脈管内皮細胞の表面に存在するＫＤＲチロシンキナーゼレセプター
に結合した場合、ＫＤＲチロシンキナーゼが活性化される。かかるＫＤＲチロシ
ンキナーゼ活性化の後、血管の過透過性を生じ、体液が血流から血管壁を通り、
間質腔に移動し、それにより浮腫の部位を形成する。漏出はまたしばしばこの応
答を伴う。同様に、過剰な脈管過透過性は決定組織および器官（例えば肺および
腎臓）の内皮を通る正常な分子交換を崩壊させ、それにより高分子の細胞外遊出
および沈着を引き起こす。ＫＤＲ刺激に対するこの急性の応答の後、これは引き
続いて血管形成プロセスを促進すると考えられており、ＫＤＲチロシンキナーゼ
刺激の延長により脈管内皮細胞の増殖およびケモタクシス、ならびに新規脈管の
形成に至る。活性化リガンドの産生の遮断、ＫＤＲチロシンキナーゼレセプター
に結合する活性化リガンドの遮断、レセプター二量体形成およびリン酸基転移の
防御、ＫＤＲチロシンキナーゼの酵素活性の阻止（酵素のリン酸化機能の阻止）
またはその下流のシグナル発生を妨害する別のメカニズムのいずれかにより、Ｋ
ＤＲチロシンキナーゼ活性を阻止することにより（Ｄ．Ｍｕｋｈｏｐｅｄｈｙａ
ｙら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：１２７８−１２８４（１９９８）およびそ
こに引用されている参考文献）、過透過性、並びに関連する細胞外遊出、続く浮
腫形成およびマトリックス沈着、および血管形成応答が阻止され、最小化され得
る。

【００６９】 本発明の好ましい化合物の１つの群は著明なＦｌｔ−１チロシンキナーゼ活性
阻止を有さないが、ＫＤＲチロシンキナーゼ活性を阻止する特性を有する（Ｆｌ
ｔ−１チロシンキナーゼはまたＶＥＧＦＲ−１チロシンキナーゼとも称される）
。ＫＤＲチロシンキナーゼおよびＦｌｔ−１チロシンキナーゼは共にＶＥＧＦが
各々ＫＤＲチロシンキナーゼレセプターおよびＦｌｔ−１チロシンキナーゼレセ
プターに結合することにより活性化される。Ｆｌｔ−１チロシンキナーゼ活性が
内皮維持および脈管機能において重要な事象を媒介し得るので、この酵素活性の
阻止により毒性または有害作用に至り得る。少なくともこのような阻止は血管形
成応答阻止、脈管過透過性の誘導および浮腫の形成の遮断には不必要であり、個
体にとって無駄であり、価値のないものである。本発明の特定の好ましい化合物
は、リガンドを活性化することにより活性化されるＶＥＧＦレセプターチロシン
キナーゼ（ＫＤＲ）の1つの活性を阻止するが、特定の活性化リガンドによりこ
れもまた活性化されるその他のレセプターチロシンキナーゼ、例えばＦｌｔ−１
は阻止しないので独特である。従って、本発明の好ましい化合物はそのチロシン
キナーゼ阻止活性において選択的である。

【００７０】 本発明の化合物はまた細菌性、菌類性潰瘍、モーレン潰瘍および潰瘍性大腸炎
の処置にも有用である。

【００７１】 本発明の化合物はまたウイルス感染例えば単純疱疹、帯状疱疹、ＡＩＤＳ、カ
ポジ肉腫、原生動物感染およびトキソプラズマ症、外傷後、放射線照射、発作、
子宮内膜症、卵巣過剰刺激症候群、全身性狼瘡、サルコイドーシス、滑膜塩、ク
ローン病、鎌状赤血球性貧血、ライム病、類天疱瘡、パジェット病、過粘度症候
群、オスラーウェーバーランジュ病、慢性炎症、慢性閉塞性肺疾患、喘息、リュ
ーマチ性関節炎並びに変形性関節症の場合に望ましくない血管形成、浮腫または
間質沈着を生じる症状の処置にも有用である。

【００７２】 本発明の化合物はまた、網膜症および黄班部変性に加えて、眼球および黄班浮
腫、眼球脈管新生疾患、強膜炎、ラジアル角膜切開、ブドウ膜炎、ビトリティス
（ｖｉｔｒｉｔｉｓ）、近視、眼小窩（ｏｐｔｉｃ ｐｉｔｓ）、慢性網膜剥離
、レーザー後合併症、結膜炎、シュタルガルト病およびイールズ病のごとき眼球
症状の処置にも有用である。

【００７３】 本発明化合物はまたアテローム性動脈硬化症、再狭窄、血管閉塞および頚動脈
閉塞性疾患のごとき心血管症状の処置にも有用である。

【００７４】 本発明の化合物はまた充実性腫瘍、肉腫（とりわけユーイング肉腫および骨肉
種）、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、白血病およびリンパ腫などの
造血性悪性疾患、腫瘍誘起の胸膜液滲出または心外膜液滲出、並びに悪性腹水症
のごとき癌に関連する症状の処置にも有用である。

【００７５】 本発明の化合物はまた緑内障、糖尿病性網膜症および微少血管症のごとき糖尿
病の症状の処置にも有用である。

【００７６】 前記で列挙した障害はＶＥＧＦレセプター（例えばＫＤＲおよびＦｌｔ−１）
に関与するタンパク質チロシンキナーゼ活性により著明に媒介されると考えられ
る。これらのレセプターチロシンキナーゼの活性を阻止することにより、病態の
血管形成の構成要素を著しく削除するので、列挙した障害の進行を阻止する。本
発明の化合物は、特異的チロシンキナーゼに対するその選択性により、選択性の
低いチロシンキナーゼインヒビターを使用した場合に生じ得る副作用を最小化さ
せる。

【００７７】 別の態様では、本発明は医薬品として、とりわけタンパク質キナーゼ活性、例
えばチロシンキナーゼ活性、セリンキナーゼ活性およびスレオニンキナーゼ活性
のインヒビターとして、最初に前記で定義した（但し書きを含める）式Ｉの化合
物の使用を提供する。さらに別の態様では、本発明はタンパク質キナーゼ活性の
阻止に用いる医薬品の製造における、最初に前記で定義した（但し書きを含める
）式Ｉの化合物を提供する。

【００７８】 本発明では以下の定義が適用可能である： 「医薬上許容される塩」とは遊離塩基の生物学的有効性および特性を保持し、
塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸のごとき無機酸またはスルホン酸、カル
ボン酸、有機リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスル
ホン酸、サリチル酸、乳酸、酒石酸等のごとき有機酸との反応により得られるこ
れらの塩を意味する。

【００７９】 「アルキル」とは１〜４個の炭素を有する直鎖および分岐鎖基を含む飽和脂肪
族炭化水素を意味する。

【００８０】 「アルコキシ」とは「Ｏ−アルキル」基を意味し、ここで「アルキル」は前記
のように定義される。

【００８１】 医薬用処方 本発明の化合物をヒト患者に単独で、またはそれらを適当な担体または賦形剤
と混合した医薬用組成物として、少なくとも脈管過透過性、浮腫および関連する
障害を処置または改善する用量で投与することができる。これらの化合物の混合
物を単純な混合物として、または適当に処方した医薬用組成物として患者に投与
することもできる。さらに治療上有効量は不適切な新生脈管形成、過透過性障害
の進行、浮腫、ＶＥＧＦ関連過透過性および／またはＶＥＧＦ関連低血圧の予防
または軽減に至るのに十分な（1つまたは複数の）化合物の量を意味する。本出
願の化合物の処方および投与技術は「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ Ｐｈａｒｍａｃ
ｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ
．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，最新版に見出すことができる。

【００８２】 投与経路 適当な投与経路には、例えば経口、点眼、直腸、経粘膜、局所または腸内投与
；筋肉内、皮下、骨髄内注射、および鞘内、直接心室内、静脈内、腹腔内、鼻腔
内または眼内注射などの非経口分配などがある。

【００８３】 また別に、化合物を全身的よりもむしろ局所的な様式で、例えば化合物を、し
ばしばデポー製剤または徐放製剤で、水腫状部位に直接注射することにより投与
できる。

【００８４】 さらに、標的化薬物分配系、例えば内皮細胞特異的抗体でコーティングしたリ
ポソームで薬物を投与できる。

【００８５】 組成物／処方 本発明の医薬用組成物をそれ自体既知の様式で、例えば慣用的な混合、溶解、
顆粒化、糖剤作製、研和、乳化、カプセル化、捕捉（ｅｎｔｒａｐｐｉｎｇ）、
または凍結乾燥過程により製造できる。

【００８６】 このように本発明に従って使用するための医薬用組成物を、活性化合物の医薬
用に使用できる製剤への加工を容易にする賦形剤および佐剤を含んでなる１つま
たはそれ以上の生理学的に許容される担体を用いて常法で処方できる。適当な処
方は選択された投与経路に依存する。

【００８７】 注射用には、本発明の物質を水性溶液、好ましくは生理学的に適合するバッフ
ァー、例えばハンクス液、リンガー液、または生理学的塩バッファーで処方でき
る。経粘膜投与には、浸透すべきバリヤーに適した浸透剤を処方に用いる。かか
る浸透剤は一般に当該分野で既知である。

【００８８】 経口投与には、活性化合物を当該分野で既知の医薬上許容される担体と組み合
わせることにより、化合物を容易に処方できる。かかる担体により本発明の化合
物を錠剤、丸剤、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液糖に処方
でき、処置される患者が経口摂取できる。活性化合物を個体賦形剤と組み合わせ
、望む場合、得られた混合物を粉砕し、適当な佐剤を加えた後顆粒の混合物を加
工してもよく、錠剤または糖剤のコアを得ることにより、経口的に使用される医
薬用製剤を得ることができる。適当な賦形剤とりわけ充填剤は例えばラクトース
、スクロース、マンニトールまたはソルビトールなどの糖；セルロース製剤、例
えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、
ゼラチン、トラガントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセル
ロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピ
ロリドン（ＰＶＰ）などである。望む場合、崩壊剤、例えば架橋ポリビニルピロ
リドン、寒天、もしくはアルギン酸、またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウ
ムを加えてよい。

【００８９】 糖剤コアに適当なコーティングを施す。この目的で、濃縮糖液を用いることが
でき、これはアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル
、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタニウム、ラッカー溶液、
および適当な有機溶媒または溶媒混合物を含有してもよい。活性化合物の用量の
組み合わせの違いを明確にし、特徴づけるために染料または色素を錠剤または糖
状コーティングに加えてよい。

【００９０】 経口的に使用される医薬用製剤にはゼラチン製のプッシュ・フィットカプセル
並びにゼラチンおよび可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトール製の密封
軟カプセルなどがある。プッシュ・フィットカプセルは充填剤例えばラクトース
、結合剤例えばデンプン、および／または滑沢剤例えばタルクまたはステアリン
酸マグネシウム、所望により安定剤と混合した活性成分を含有できる。軟カプセ
ルでは、活性化合物を適当な液体、例えば脂肪油、液体パラフィン、または液体
ポリエチレングリコールに溶解または懸濁できる。加えて、安定剤を加えてよい
。経口投与用の全処方をこのような投与に適した投与量にできる。

【００９１】 バッカル投与用には、組成物を常法で処方された錠剤またはトローチ剤の形態
にできる。

【００９２】 吸入による投与用には、本発明に従って用いられる化合物は適当なプロペラン
ト、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテ
トラフルオロエタン、二酸化炭素またはその他の適当なガスを使用して、加圧パ
ックまたはネブライザーから提供されるエアロゾルスプレイの形態で都合よく分
配される。加圧エアロゾルの場合、規定量を分配するためのバルブを提供するこ
とにより投与量単位を決定できる。吸入器または注入器で使用するための、例え
ばゼラチンのカプセルおよびカートリッジを、化合物および適当な粉末基材例え
ばラクトースまたはデンプンの粉末混合物を含有するように処方できる。

【００９３】 化合物を注射例えばボーラス注射または連続注入により投与するための非経口
投与用に処方できる。注射用処方は保存剤を加えて単位投与量形態、例えばアン
プルまたは複数回投与用容器で提示できる。組成物を油性または水性ベヒクル中
、懸濁液、液剤、または乳剤のような形態にでき、懸濁剤、安定剤および／また
は分散剤のごとき処方用剤を含有できる。

【００９４】 非経口投与用の医薬用処方には水溶性形態の活性化合物の水溶液などがある。
さらに、活性化合物の懸濁液を適当な油性注射用懸濁液として調製できる適当な
親油性溶媒またはベヒクルには脂肪酸例えばゴマ油、または合成脂肪酸エステル
例えばオレイン酸エチルもしくはトリグリセリド、またはリポソームなどがある
。水性注射用懸濁液は懸濁液の粘性を高める物質、例えばカルボキシメチルセル
ロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなどを含有できる。懸濁
液はまた適当な安定剤または化合物の溶解性を高めて高濃度の溶液の調製を可能
にする物質を含有してもよい。

【００９５】 また別に、活性成分を適当なベヒクル、例えば滅菌パイロジェン不含水で使用
前に構成するための粉末形態にできる。

【００９６】 また化合物を、例えば慣用される坐剤基質例えばココアバターまたはその他の
グリセリドを含有する直腸用組成物例えば坐剤または保持浣腸に処方できる。

【００９７】 前記の処方に加えて化合物をデポー製剤にも処方できる。このような長時間作
用用処方を移植により（例えば皮下もしくは筋肉内にまたは筋肉内注射により）
投与できる。このように、例えば化合物を適当な重合性または疎水性物質（例え
ば許容される油中乳剤として）またはイオン交換樹脂を用いて、またはわずかに
可溶性の誘導体として、例えばわずかに可溶性の塩として処方することができる
。

【００９８】 本発明の疎水性化合物の医薬用担体の例としてはベンジルアルコール、無極性
界面活性剤、水−混和性有機重合体、および水相からなる共溶系である。共溶系
はＶＰＤ共溶系でよい。ＶＰＤは３重量／容量％ ベンジルアルコール、８重量
／容量％ 無極性界面活性剤ポリソルベート８０、および６５重量／容量％ ポ
リエチレングリコール３００の溶液であり、無水エタノールで容量を補う。ＶＰ
Ｄ共溶系（ＶＰＤ：５Ｗ）は５％デキストロース水溶液で１：１に希釈したＶＰ
Ｄからなる。この共溶系は疎水性化合物をよく溶解し、それ自体全身投与した場
合に毒性が低い。通常、共溶系の特性をその溶解性および毒性特性を壊すことな
く、かなり変化させることができる。さらに共溶成分自体を変更できる：例えば
、ポリソルベート８０の代わりにその他の低毒性無極性界面活性剤を用いること
ができ；ポリエチレングリコールの分画の大きさを変化させることができ；ポリ
エチレングリコール、例えばポリビニルピロリドンをその他の生体適合性重合体
と置き換えることができ；およびデキストロースをその他の多糖類と置換するこ
とができる。

【００９９】 また別に疎水性医薬用化合物のその他の分配系を用いることができる。疎水性
薬物の分配ベヒクルまたは担体の既知の例はリポソームおよび乳剤である。特定
の有機溶媒例えばジメチルスルフォキシドをも用いることができるが、通常毒性
の危険性が高くなる。さらに、徐放系、例えば治療用薬を含有する固体疎水性重
合体の半透性マトリックスを用いて化合物を分配することができる。種々の徐放
性物質が確立されており、当業者に既知である。徐放性カプセルはその化学的的
特性に依存して化合物を数週間から１００日以上にわたって放出する。治療薬の
化学的特性および生物学的安定性に依存して、タンパク質を安定化するためのさ
らなる試験計画を用いることができる。

【０１００】 医薬用組成物はまた適当な固体またはゲル相担体または賦形剤を含むことがで
きる。かかる担体または賦形剤の非限定例としては炭酸カルシウム、リン酸カル
シウム、種々の糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、および重合体例え
ばポリエチレングリコールなどがある。

【０１０１】 本発明の有機分子化合物の多くを医薬上適合する対イオンとの塩として提供で
きる。多くの酸、非限定例としては塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、マレイン
酸、コハク酸等を用いて医薬上適合する塩を形成できる。塩は水性またはその他
のプロトン性溶媒中で対応する遊離塩基形態よりもより可溶性になる傾向がある
。

【０１０２】 有効投与量 本発明での使用に適した医薬用組成物には、活性成分がその意図される目的を
達成するための有効量で含まれる組成物などがある。より具体的には治療上有効
量とは処置される対象の既存の症状の進行を防御するかまたは緩和するのに有効
な量を意味する。有効量の決定は十分に当業者の技術範囲内である。

【０１０３】 本発明の方法で用いられる何れかの化合物では、治療上有効量を最初に細胞ア
ッセイから推測できる。例えば、細胞および動物モデルで用量を処方して、細胞
アッセイで決定されるＩＣ５０などの循環濃度範囲を達成できる（すなわち規定
のタンパク質キナーゼ活性の最大阻止の５０％阻止する試験化合物の濃度）。３
〜５％ 血清アルブミンの存在下でＩＣ５０を決定するのが適当である。なぜな
らこのように決定することは化合物に及ぼす血漿タンパク質の結合効果に近いか
らである。このような常法を用いてヒトにおいて有用な用量をより正確に決定で
きる。さらに、全身投与用に最も好ましい化合物は、血漿中で安全に達成できる
レベルで、完全細胞においてタンパク質キナーゼシグナル発生を効果的に阻止す
る。

【０１０４】 治療上有効量とは患者の症状の改善に至る化合物の量を意味する。かかる化合
物の毒性および治療上の有効性を細胞培養または動物実験で、例えば最大耐用量
（ＭＴＤ）およびＥＤ５０（最大応答の５０％応答するのに有効な用量）を決定
するための標準的な医薬的方法により決定できる。毒性効果及び治療効果の用量
比は治療上の指標であり、ＭＴＤおよびＥＤ５０間の比率として表すことができ
る。高い治療指標を呈する化合物が好ましい。これらの細胞培養アッセイおよび
動物実験から得られるデータを、ヒトで用いられる用量範囲を処方するのに使用
できる。このような化合物の用量は、ほとんどまたは全く毒性のないＥＤ５０を
含む循環濃度の範囲内にあるのが好ましい。投与量は用いる投与形態および利用
する投与経路に依存してこの範囲内で変化し得る。正確な処方、投与経路および
用量は患者の症状を鑑み、個々の医師により選択され得る。（例えばＦｉｎｇｌ
ら、「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒ
ａｐｅｕｔｉｃｓ」チャプター１、１頁参照）。緊急の処置においては、急速な
応答を得るためにＭＴＤに近づく急性ボーラス投与または注入が必要である。

【０１０５】 投与量および間隔を個別に調整して、キナーゼ変調効果または最低有効濃度（
ＭＥＣ）を維持するのに十分な活性部分の血漿レベルを提供できる。ＭＥＣは各
化合物で変化するが、インビトロデータから推測できる；例えば本明細書で記載
するアッセイを用いてタンパク質キナーゼの５０〜９０％阻止を達成するのに必
要な濃度。ＭＥＣを達成するのに必要な用量は個々の特性および投与経路に依存
する。しかしながら、ＨＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイを用いて血漿濃度
を決定できる。

【０１０６】 ＭＥＣ値を用いて投与間隔をも決定できる。症状の望ましい改善効果が達成さ
れるまで、１０〜９０％の時間、好ましくは３０〜９０％の時間、最も好ましく
は５０〜９０％の時間ＭＥＣを越える血漿レベルを維持する投与計画を用いて化
合物を投与すべきである。局所投与または選択的な摂取、薬物の有効な局所濃度
は血漿濃度とは関連しないかもしれない。

【０１０７】 投与される組成物の量は、もちろん処置される対象、対象の体重、苦痛の重篤
度、投与の様式および指示する医師の判断に依存する。

【０１０８】 包装 望む場合、組成物を活性成分を含有する１つまたはそれ以上の単位投与形態を
含有できるパックまたはディスペンサー装置で提示できる。パックは例えば金属
またはプラスチック箔、例えばＰＴＰ包装を含んでなってよい。パックまたはデ
ィスペンサー装置は投与の指示書を添付してよい。適合する医薬用担体に処方さ
れた本発明の化合物を含んでなる組成物をも製造し、適当な容器に入れ、指示さ
れた症状の処置に関するラベルをつけることができる。本発明の化合物を例えば
流体エネルギー粉砕（ｆｌｕｉｄ ｅｎｅｒｇｙ ｍｉｌｌｉｎｇ）により得ら
れる非常に小型の粒子の形態で使用するのが有利である処方もある。

【０１０９】 本発明の組成物では、望む場合、活性化合物をその他の適合する薬理学的に活
性な成分と組み合わせてよい。例えば、本発明の化合物をＶＥＧＦの産生を阻止
または防御し、ＶＥＧＦに対する細胞内応答を低減させる、細胞内シグナルトラ
ンスダクションを遮断する、脈管過透過性を阻止する、炎症を低減させる、また
は浮腫もしくは新生脈管形成を阻止もしくは防御する１つまたはそれ以上の別の
医薬品と組み合わせて投与することができる。いずれの投与経路が適当である場
合も、本発明の化合物を別の医薬品に先行して、後続してまたは同時に投与する
ことができる。別の医薬品には、非限定例としては、抗浮腫ステロイド、ＮＳＡ
ＩＤＳ、ｒａｓインヒビター、抗ＴＮＦ剤、抗ＩＬ−１剤、抗ヒスタミン剤、Ｐ
ＡＦアンタゴニスト、ＣＯＸ−１インヒビター、ＣＯＸ−２インヒビター、ＮＯ
合成インヒビター、ＰＫＣインヒビターおよびＰＩ３キナーゼインヒビターなど
がある。本発明の化合物および別の医薬品は付加的または共同的のいずれかで作
用する。このように、脈管過透過性を阻止するおよび／または浮腫の形成を阻止
する物質のかかる組み合わせの投与により、いずれかの物質を単独で投与した場
合よりも、過増殖性障害、血管形成、脈管過透過性または浮腫の有害な影響から
大いに開放され得る。悪性障害の処置における抗増殖性または細胞毒性化学療法
剤または放射線照射の組み合わせが期待される。

【０１１０】 本発明はまた医薬品としての式Ｉの化合物の使用をも包含する。

【０１１１】 キナーゼのＳｒｃおよびＳｙｋファミリーの双方は免疫機能の制御において中
枢的な役割を果たす。現在ＳｒｃファミリーにはＦｙｎ、Ｌｃｋ、Ｆｇｒ、Ｆｅ
ｓ、Ｌｙｎ、Ｓｒｃ、Ｙｅｓ、ＨｃｋおよびＢｌｋなどがある。現在Ｓｙｋファ
ミリーにはＺａｐおよびＳｙｋのみが含まれると理解されている。キナーゼのＪ
ａｎｕｓファミリーは多くのレセプターを介する成長因子および前炎症性サイト
カインシグナルのトランスダクションに関与する。キナーゼのＴｅｃファミリー
のメンバーであるＢＴＫおよびＩＴＫが免疫生物学において果たす役割はあまり
よく理解されていないが、インヒビターによる変調は治療上有利であり得ること
が解っている。キナーゼＲＩＰ、ＩＲＡＫ−１、ＩＲＡＫ−２、ＮＩＫ、ＩＫＫ
−１およびＩＫＫ−２は重要な前炎症性サイトカインＴＮＦおよびＩＬ−１のシ
グナルトランスダクション経路に関与する。これらのキナーゼの１つまたはそれ
以上を阻止する能力により式Ｉの化合物は同種移植片の維持および自己免疫障害
の処置に有用な免疫変調物質として機能できる。Ｔセル活性化または炎症過程の
強化を制御する能力により、これらの化合物をかかる自己免疫疾患の処置に用い
ることができる。充実性器官の宿主対移植片または骨髄の移植片対宿主のいずれ
かの拒絶反応のために、現在利用可能な免疫抑制剤の毒性により移植は限定され
ており、治療指標を改善する有効な薬物があれば恩恵を被るであろう。遺伝子標
的実験により、骨再吸収に寄与する細胞である破骨細胞の生物学においてＳｒｃ
の本質的な役割が示されている。式Ｉの化合物はＳｒｃを制御する能力により、
骨粗鬆症、大理石骨病、パジェット病、腫瘍に誘起される高カルシウム血症の処
置および骨転移の処置においても有用であり得る。

【０１１２】 多くのプロテインキナーゼが癌原遺伝子であることが示されている。染色体切
断（第５染色体のｌｔｋキナーゼ切断点にて）、ＢＣＲを有するＡｂｌ遺伝子の
場合のような転座（フィラデルフィア染色体）、例えばｃ−ＫｉｔまたはＥＧＦ
Ｒなどで例示されるトランケーション、または変異（例えばＭｅｔ）の結果、そ
れらを癌原遺伝子から癌遺伝子産生物に変換する脱制御タンパク質が作製される
。その他の腫瘍では発癌遺伝子は自己分泌または傍分泌リガンド／成長因子レセ
プター相互作用により誘導される。ｓｒｃファミリーキナーゼのメンバーは典型
的には下流のシグナルトランスダクションに関与し、それにより発癌性およびそ
れ自体を強化し、過剰発現または変異により発癌性になり得る。これらのタンパ
ク質のタンパク質キナーゼ活性を阻止することにより疾患過程を崩壊させること
ができる。血管再狭窄はＥＧＦおよび／またはＰＤＧＦに促進される平滑筋およ
び内皮細胞増殖プロセスに関与し得る。ＰＧＦまたはＰＤＧＦｒキナーゼ活性の
阻止はこの現象を阻止するための有効な試験計画であり得る。このように、正常
なまたは異常なｃ−ｋｉｔ、ｃ−ｍｅｔ、ｖ−ｆｍｓ、ｓｒｃファミリーのメン
バー、ＥＧＦｒ、ｅｒｂＢ２、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＰＤＧＦｒ、ＦＧＦｒおよびそ
の他のレセプターまたはサイトソルチロシンキナーゼのキナーゼ活性を阻止する
式Ｉの化合物は、良性および新形成増殖性疾患の処置に有益であろう。

【０１１３】 多くの病理学的状態（例えば充実性１次腫瘍および転移、カポジ肉腫、リュー
マチ性関節炎、眼の不適切な新生脈管形成、乾癬およびアテローム性動脈硬化症
）では、疾患の進行は永続的な血管形成を条件とする。しばしば疾患組織または
関連する炎症性細胞、およびレセプターチロシンキナーゼに特異的な対応する内
皮細胞により産生されるポリペプチド成長因子（例えばＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ−２
、Ｆｌｔ−１／ＶＥＧＦＲ−１、Ｔｉｅ−２／ＴｅｋおよびＴｉｅ）は内皮細胞
成長の刺激、移動、構成、分化および新たに機能的な必須の脈管構造の確立に不
可欠である。

【０１１４】 「脈管透過性因子」の結果として、脈管過透過性を媒介するＶＥＧＦの活性、
ＶＥＧＦＲキナーゼのＶＥＧＦ刺激はまた腫瘍腹水の形成、脳および肺浮腫、胸
膜および心膜滲出、遅延型過敏反応、組織浮腫、並びに外傷、火傷、虚血、糖尿
病性合併症、子宮内膜症、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、心−肺バイパス形
成後の関連する低血圧および過透過性、および不適切な新生脈管形成による緑内
障または失明に至る眼浮腫に続く器官機能不全において重要な役割を果たすと考
えられている。ＶＥＧＦに加えて、最近同定されたＶＥＧＦ−ＣおよびＶＥＧＦ
−ＤおよびＨＩＶ−Ｔａｔタンパク質もまたＶＥＧＦＲキナーゼの刺激を介して
脈管過透過性応答を引き起こし得る。

【０１１５】 Ｔｉｅ−２はまたその補充、付着、制御および分化において役割を果たす造血
幹細胞の特定の集団においても発現され（Ｂｌｏｏｄ ８９：４３１７−４３２
６（１９９７））；このＴｉｅ−２発現集団を循環血管形成内皮前駆細胞として
も提供できる。従って内皮細胞特異的キナーゼのキナーゼ活性を阻止することが
できる式Ｉによる特定の物質はこれらの状況に関連する疾患の進行を阻止できる
。

【０１１６】 式Ｉの化合物もしくはその塩またはその治療上有効量を含有する医薬用組成物
を良性および新形成性増殖性疾患並びに免疫系の障害の処置の用いることができ
る。このような疾患にはヒトにおける自己免疫疾患、例えばリューマチ性関節炎
、甲状腺炎、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、サルコイドーシス、炎症性腸疾患、重
症筋無力症、および全身性エリテマトーデス；乾癬、器官移植拒絶（例えば腎臓
拒絶、移植片対宿主疾患）、良性および新形成増殖性疾患、ヒトの癌例えば肺癌
、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および直腸癌、並び
にヒトにおける造血細胞（白血病およびリンパ腫）、および不適切な脈管形成に
関与する疾患例えば糖尿病性網膜症、年齢に関連する黄班変性による絨毛膜性新
生脈管形成並びに幼児性血管腫などがある。加えて、このようなインヒビターは
ＶＥＧＦ媒介の浮腫、腹水、滲出、および滲出液に関連する障害、例えば黄班浮
腫、脳浮腫および成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）などの処置に有用である。

【０１１７】 本発明の化合物はまた前記疾患の予防にも有用である。

【０１１８】 本発明の別の態様は、哺乳動物、とりわけヒトにおける脈管過透過性、血管形
成依存性障害、増殖性疾患および／または免疫系の障害を処置するための医薬品
の製造における式Ｉの化合物またはその塩の使用を提供する。

【０１１９】 本発明はまた脈管過透過性、不適切な新生脈管形成、増殖性疾患および／また
は免疫系の障害を処置する方法をも提供し、該方法はそれを必要とする哺乳動物
、とりわけヒトに治療上有効量の式Ｉの化合物を投与することからなる。

【０１２０】 これらのタンパク質キナーゼの阻止における化合物のインビトロでの強度は以
下に詳記する方法により判定できる。

【０１２１】 化合物の強度は、対照に相対する試験化合物による外来性基質（例えば合成ペ
プチド（Ｚ．Ｓｏｎｇｙａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３：５３６−５３９））
のリン酸化の阻止量により判定できる。

【０１２２】 バキュロウイルス系を用いるＫＤＲチロシンキナーゼ産生 ヒトＫＤＲ細胞内ドメインのコーディング配列（アミノ酸７８９〜１３５４）
をＨＵＶＥＣ細胞から単離したｃＤＮＡを用いてＰＣＲにより作製した。そして
、ポリＨｉｓ６配列を同様にこのタンパク質のＮ末端に導入した。このフラグメ
ントをＸｂａ １およびＮｏｔ １部位でトランスフェクションベクターｐＶＬ _１ ３９３にクローン化した。ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄトランスフェクション試薬（
ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）を用いて同時トランスフェクションにより組換えバキュ
ロウイルス（ＢＶ）を作製した。組換えＢＶをプラーク精製し、ウェスターン分
析により確認した。タンパク質産生のために、ＳＦ−９細胞をＳＦ−９００−Ｉ
Ｉ培地中２ｘ１０６／ｍｌで成長させ、細胞あたり０．５プラーク形成単位（Ｍ
ＯＩ）で感染させた。感染後４８時間に細胞を回収した。

【０１２３】 ＫＤＲの精製 トリトンＸ−１００溶解バッファー（２０ｍＭ トリス、ｐＨ８．０、１３７
ｍＭ ＮａＣｌ、１０％ グリセロール、１％ トリトンＸ−１００、１ｍＭ
ＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌ アプロチニン、１μｇ／ｍｌ ロイペプチン）５０
ｍｌを細胞培養１ｌからの細胞ペレットに加えて、（Ｈｉｓ）６ＫＤＲ（アミノ
酸７８９〜１３５４）を発現するＳＦ−９細胞を溶解した。ライゼートをＳｏｒ
ｖａｌ ＳＳ−３４ローター中１９０００ｒｐｍで、４℃で３０分間遠心した。
細胞ライゼートを５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．３Ｍ ＮａＣｌで平
衡にした５ｍｌ ＮｉＣｌ２キレーティング・セファロースカラムに適用した。
０．２５Ｍ イミダゾールを含有する同一のバッファーを用いてＫＤＲを溶出し
た。キナーゼ活性を測定するＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびＥＬＩＳＡアッセイ（以下
）を用いてカラム分画を分析した。精製されたＫＤＲを２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、
ｐＨ７．５、２５ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＤＴＴバッファーに交換して−８０
℃で保存した。

【０１２４】 ヒトＴｉｅ−２キナーゼ産生および精製 ヒト胎盤から単離されたｃＤＮＡを鋳型として用いて、ＰＣＲによりヒトＴｉ
ｅ−２細胞内ドメイン（アミノ酸７７５〜１１２４）のコーディング配列を作製
した。ポリＨｉｓ６配列をＮ末端に導入し、この構築物をＸｂｄ １およびＮｏ
ｔ １部位でトランスフェクションベクターｐＶＬ_１９３９にクローン化した。
組替えＢＶをＢａｃｕｌｏＧｏｌｄトランスフェクション試薬（ＰｈａｒＭｉｎ
ｇｅｎ）を用いて同時トランスフェクションにより作製した。組換えＢＶをプラ
ーク精製してウェスターン分析により確認した。タンパク質を産生するために、
ＳＦ−９昆虫細胞をＳＦ−９００−ＩＩ培地中２ｘ１０６／ｍｌで成長させ、０
．５のＭＯＩで感染させた。スクリーニングで用いられたＨｉｓタグ化キナーゼ
の精製はＫＤＲで記載されたものと類似していた。

【０１２５】 ヒトＦｌｔ−１チロシンキナーゼ産生および精製 バキュロウイルス発現ベクターｐＶＬ_１３９３（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ、Ｌｏ
ｓ Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ）を用いた。ポリＨｉｓ６をコードするヌクレオチド
配列を、ヒトＦｌｔ−１の全細胞内キナーゼドメイン（アミノ酸７８６〜１３３
８）をコードするヌクレオチド領域の５‘に配置した。ＨＵＶＥＣ細胞から単離
したｃＤＮＡライブラリーを用いてＰＣＲにより、キナーゼドメインをコードす
るヌクレオチド配列を作製した。ヒスチジン残基によりＫＤＲおよびＺＡＰ７０
の方法に類似の方法でタンパク質のアフィニティー精製が可能になった。ＳＦ−
９昆虫細胞を０．５多重度で感染させ、感染後４８時間で回収した。

【０１２６】 ＥＧＦＲチロシンキナーゼ供給源 ＥＧＦＲをＳｉｇｍａより購入し（Ｃａｔ＃Ｅ−３６４１；５００単位／５０
μｌ）、ＥＦＧリガンドをＯｎｃｏｇｅｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃ
ｔｓ／Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（Ｃａｔ＃ＰＦ０１１−１００）より入手した。

【０１２７】 ＺＡＰ７０の発現 使用したバキュロウイルス発現ベクターはｐＶＬ_１３９３（ＰｈａｒＭｉｎｇ
ｅｎ、Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ）であった。アミノ酸Ｍ（Ｈ）６ＬＶＰＲ
９ＳをコードするヌクレオチドをＺＡＰ７０全体をコードする領域（アミノ酸１
〜６１９）の５‘に配置した。ジャーカット固定Ｔセルから単離したｃＤＮＡラ
イブラリーを用いて、ＰＣＲによりＺＡＰ７０コーディング領域をコードするヌ
クレオチド配列を作製した。ヒスチジン残基によりタンパク質のアフィニティー
精製が可能になった（後記参照）。ＬＶＰＲ９Ｓブリッジはトロンビンによるタ
ンパク質溶解切断の認識配列を構成し、これにより酵素からのアフィニティータ
グの除去が可能になる。ＳＦ−９昆虫細胞を感染の多重度０．５で感染し、感染
後４８時間に回収した。

【０１２８】 ＺＡＰ７０の抽出および精製 ２０ｍＭ トリス、ｐＨ８．０、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、１０％ グリセロー
ル、１％ トリトンＸ−１００、１ｍＭ ＰＭＳＦ、１μｇ／ｍｌ ロイペプチ
ン、１０μｇ／ｍｌ アプロチニンおよび１ｍＭ オルトバナジウム酸ナトリウ
ムから成るバッファー中でＳＦ−９細胞を溶解した。可溶性ライゼートを５０ｍ
Ｍ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．３Ｍ ＮａＣｌで平衡にしたキレーティング
セファーロースＨｉＴｒａｐ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に供した。融合タンパク質
を２５０ｍＭ イミダゾールで溶出した。５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、
５０ｍＭ ＮａＣｌおよび５ｍＭ ＤＴＴを含有するバッファー中で酵素を保存
した。

【０１２９】 Ｌｃｋ供給源 ＬｃｋまたはＬｃｋのトランケートされた形態を市販により入手できる（例え
ばＵｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．（Ｓａｒａｎａｃ
Ｌａｋｅ，Ｎ．Ｙ．）およびＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ Ｉｎｃ．（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，Ｃａ））かまたは常法を用いて既知の天
然のまたは組換え供給源から精製できる。

【０１３０】 Ｃｄｃ２供給源 ヒト組換え酵素およびアッセイバッファーを市販により入手できる（Ｎｅｗ
Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ、米国）かまたは常法
を用いて既知の天然のまたは組換え供給源から精製できる。

【０１３１】 Ｃｄｃ２アッセイ 使用したプロトコルは若干の変更を加えた購入試薬と共に提供されたものであ
った。簡単には、５０ｍＭ トリス、ｐＨ７．５、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍ
Ｍ ＥＧＴＡ、２ｍＭ ＤＴＴ、０．０１％ Ｂｒｉｊ、５％ ＤＭＳＯおよび
１０ｍＭ ＭｇＣｌ２（市販のバッファー）に新鮮ＡＴＰ（３１μＣｉ／ｍｌ）
３００μＭおよび最終濃度３０μｇ／ｍｌのＩＩＩｓｓ型ヒストンを補充したも
のからなるバッファー中で反応を実施した。酵素の単位を含有する反応容量８０
μｌでインヒビターの存在下、または不在下で２５℃で２０分間反応を実施した
。１０％ 酢酸１２０μｌを添加して反応を終止させた。混合物をリン酸セルロ
ース紙にスポットして、組み込まれていない標識から基質を分離し、続いて各々
７５ｍＭ リン酸で５分間、３回洗浄した。液体シンチレーションの存在下でベ
ータカウンターによりカウントを測定した。

【０１３２】 本発明の特定の化合物は５０μＭ以下の濃度でｃｄｃ２を有意に阻止する。

【０１３３】 ＰＫＣキナーゼ供給源 ＰＫＣの触媒サブユニットを市販により入手できる（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）
。

【０１３４】 ＰＫＣキナーゼアッセイ 発表されている方法に従って放射活性キナーゼアッセイを行った（Ｙａｓｕｄ
ａ，Ｉ．、Ｋｉｒｓｈｉｍｏｔｏ，Ａ．、Ｔａｎａｋａ，Ｓ．、Ｔｏｍｉｎａｇ
ａ，Ｍ．、Ｓａｋｕｒａｉ，Ａ．、Ｎｉｓｈｉｚｕｋａ，Ｙ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎ
ｉｃａｔｉｏｎ ３：１６６，１２２０−１２２７（１９９０））。簡単には、
５０ｍＭ トリスＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭ ＤＴＴ
、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１００μＭ ＡＴＰ、８μＭ ペプチド、５％ ＤＭＳＯ
および３３Ｐ ＡＴＰ（８Ｃｉ／ｍＭ）からなるキナーゼバッファー中で全反応
を実施した。化合物および酵素を反応容器中で混合し、ＡＴＰおよび基質混合物
を添加して反応を開始した。停止バッファー（７５ｍＭ リン酸中５ｍＭ ＡＴ
Ｐ）１０μｌを添加して反応を終止させた後、混合物の一部をリン酸セルロース
フィルターにスポットした。スポットしたサンプルを７５ｍＭ リン酸中室温で
５〜１５分間、３回洗浄した。放射性標識の組み込みを液体シンチレーションカ
ウントの計数により定量化した。

【０１３５】 Ｅｒｋ２酵素供給源 組換えネズミ酵素およびアッセイバッファーを市販により入試できる（Ｎｅｗ
Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ、米国）かまたは常
法を用いて既知の天然または組換え供給源から精製できる。

【０１３６】 Ｅｒｋ２酵素アッセイ ５０ｍＭ トリス、ｐＨ７．５、１ｍＭ ＥＧＴＡ、２ｍＭ ＤＴＴ、０．０
１％ Ｂｒｉｊ、５％ ＤＭＳＯおよび１０ｍＭ ＭｇＣｌ２（市販のバッファ
ー）に新鮮１００μＭ ＡＴＰ（３１μＣｉ／ｍｌ）および３０μＭ ミエリン
塩基性タンパク質を補充したものからなるバッファー中で、供給者により推奨さ
れる条件下で反応を実施した。反応容量および組み込まれた放射活性を検定する
方法はＰＫＣアッセイに記載されているようにした（前記参照）。

【０１３７】 ＰＴＫに関する酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ） 酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いてチロシンキナーゼ
活性の存在を検出および測定した。例えばＶｏｌｌｅｒら、Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第２版（ＲｏｓｅおよびＦｒｉｅ
ｄｍａｎ編）（１９８０）の「Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｓｏ
ｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ」、３５９−３７１頁、Ａｍ．Ｓｏｃ．ｏｆ Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．に記載されている既知のプ
ロトコルに従ってＥＬＩＳＡを行った。

【０１３８】 開示されているプロトコルを特異的ＰＴＫに関する活性を決定するために適合
させた。例えばＥＬＩＳＡ実験を行うために好ましいプロトコルを以下に提示す
る。レセプターＰＴＫファミリーのその他のメンバーおよび非レセプターチロシ
ンキナーゼに関する化合物の活性を決定するためのプロトコルの適合は十分に当
業者の技術範囲内である。インヒビターの選択性を決定する目的でユニバーサル
ＰＴＫ基質（例えばポリ（Ｇｌｕ４、Ｔｙｒ）のランダム共重合、分子量２００
００〜５００００）をアッセイの見かけのＫｍのおよそ２倍の濃度でＡＴＰ（典
型的には５μＭ）と共に使用した。

【０１３９】 本発明の化合物のＫＤＲ、Ｆｌｔ−１、Ｔｉｅ−２、ＥＧＦＲおよびＺＡＰ７
０チロシンキナーゼ活性に及ぼす阻止効果を検定するために以下の方法を用いた
。

【０１４０】 バッファーおよび溶液 ＰＧＴ：ポリ（Ｇｌｕ、Ｔｙｒ）４：１ 粉末を−２０℃で保存。粉末をリン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に溶解して
５０ｍｇ／ｍｌの溶液にする。１ｍｌのアリコートを−２０℃で保存する。プレ
ート作製時にＧｉｂｃｏ ＰＢＳで２５０μｇ／ｍｌに希釈する。

【０１４１】 反応バッファー：１００ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、２０ｍＭ ＭｇＣｌ２、４ｍＭ
ＭｎＣｌ２、５ｍＭ ＤＴＴ、０．０２％ ＢＳＡ、２００μＭ ＮａＶＯ４、
ｐＨ７．１０。

【０１４２】 ＡＴＰ：１００ｍＭのアリコートを−２０℃で保存。水で２０μＭに希釈。

【０１４３】 洗浄バッファー：０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ。

【０１４４】 抗体希釈バッファー：ＰＢＳ中０．１％ ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）。

【０１４５】 ＴＭＢ基質：使用直前にＴＭＢ基質および過酸化溶液を９：１で混合するか、
またはＮｅｏｇｅｎのＫ−Ｂｌｕｅ基質を使用する。

【０１４６】 停止溶液：１Ｍ リン酸。

【０１４７】 方法 １．プレート調製： ＰＧＴ保存物（５０ｍｇ／ｍｌ、凍結）をＰＢＳで２５０μｇ／ｍｌに希釈す
る。Ｃｏｒｎｉｎｇ修飾平底高アフィニティーＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉ
ｎｇ ＃２５８０５−９６）のウェルあたり１２５μｌを加える。空のウェルに
ＰＢＳ１２５μｌを加える。密封テープで被覆し、３７℃で一晩インキュベート
する。洗浄バッファー２５０μｌで１回洗浄し、３７℃の乾燥インキュベーター
で約２時間乾燥する。密封バッグ中被覆したプレートを４℃で用時まで保存する
。

【０１４８】 ２．チロシンキナーゼ反応 水中２０％ ＤＭＳＯで４ｘ濃度で阻止溶液を調製する。

【０１４９】 反応バッファーの調製 酵素溶液を調製して、望ましい単位が５０μｌ中に含まれるように、例えばＫ
ＤＲでは反応物中ウェルあたり全量５０ｎｇで１ｎｇ／μｌにする。氷上で保存
する。

【０１５０】 ４ｘＡＴＰ溶液を水で２０μＭから１００ｍＭの保存物にする。氷上で保存す
る。

【０１５１】 酵素溶液をウェルあたり５０μｌ加える（典型的には、キナーゼの特異活性に
依存して５〜５０ｎｇ 酵素／ウェル） ２５μｌ ４ｘインヒビターを加える。

【０１５２】 阻止アッセイ用に２５μｌ ４ｘＡＴＰを加える。

【０１５３】 ０．０５Ｎ ＨＣｌをウェルあたり５０μｌ加えて反応を停止させる。

【０１５４】 プレートを洗浄する。

【０１５５】 ＊＊反応の最終濃度：５μＭ ＡＴＰ、５％ ＤＭＳＯ。

【０１５６】 ３．抗体結合 ＰＹ２０−ＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ）抗体（リン酸チロシン抗体）の１ｍｇ／ｍ
ｌアリコートをＰＢＳ中０．１％ ＢＳＡで２工程希釈（１００倍、次いで２０
０倍）により５０ｎｇ／ｍｌに希釈する。ウェルあたり１００μｌの抗体を加え
る。室温で１時間インキュベートする。４℃で１時間インキュベートする。

【０１５７】 プレートを４回洗浄する。

【０１５８】 ４．呈色反応 ＴＭＢ基質を調製し、ウェルあたり１００μｌ加える。

【０１５９】 ＯＤ６５０ｎｍで０．６に達するまでモニター観察する。

【０１６０】 １Ｍ リン酸で停止させる。プレートリーダー上で振盪する。４５０ｎｍで即
座にＯＤを読む。

【０１６１】 最適なインキュベーション時間および酵素反応条件は酵素調製でわずかに異な
り、各ロットで経験的に決定する。

【０１６２】 Ｌｃｋでは、類似のアッセイ条件下で利用した反応バッファーは１００ｍＭ
ＭＯＰＳＯ、ｐＨ６．５、４ｍＭ ＭｎＣｌ２、２０ｍＭ ＭｇＣｌ２、５ｍＭ
ＤＴＴ、０．２％ ＢＳＡ、２００ｍＭ ＮａＶＯ４であった。

【０１６３】 式Ｉの化合物により阻止される、本明細書で記載していないものを含めて同定
されたタンパク質チロシンキナーゼ、さらに同定されていないタンパク質チロシ
ンキナーゼの双方に関連する疾患の処置において、式Ｉの化合物を治療上利用で
きる。本明細書に例示される全化合物は５０μＭまたはそれ以下の濃度でＫＤＲ
キナーゼを著明に阻止する。本発明のいくつかの化合物は５０μＭまたはそれ以
下の濃度でその他のＰＴＫ例えばｌｃｋをも著明に阻止する。

【０１６４】 Ｔセル活性化のインビトロモデル マイトジェンまたは抗原で活性化すると、Ｔセルが誘起され、続く増殖相を補
助する成長因子であるＩＬ−２を分泌する。従って、Ｔセル活性化の代理として
、１次Ｔセルまたは適当なＴセル細胞系からのＩＬ−２産生かまたは１次Ｔセル
またはＴセル細胞系の細胞増殖のいずれかを測定することができる。これらのア
ッセイは共に文献に詳細に記載されており、そのパラメーターは十分に報告され
ている（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，
２巻、７．１０．１−７．１１．２）。

【０１６５】 簡単には、同種異型刺激細胞で同時培養することによりＴセルを活性化でき、
その方法を１方向混合リンパ球反応と称する。製造者の指示に従って、Ｆｉｃｏ
ｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅグラジエント（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）により応答および刺
激末梢血単核細胞を精製する。マイトマイシンＣ（Ｓｉｇｍａ）またはγ線照射
で処置して刺激細胞の有糸分裂を不活性化する。試験化合物の存在下または不在
下で２対１の比率で応答細胞および刺激細胞を同時培養する。典型的には１０^５ の応答細胞を５ｘ１０^４の刺激細胞と混合してＵ底マイクロタイタープレート（
Ｃｏｓｔａｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に置く（２００μｌ容量）。熱不活性化
したウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）か、または男
性ドナーからのプールしたヒトＡＢ血清のいずれか、５ｘ１０^−５ ２メルカプ
トエタノールおよび０．５％ ＤＭＳＯで補充したＲＰＭＩ １６４０中細胞を
培養する。回収の１日前に（典型的には３日に）培養物に^３Ｈ チミジン（Ａｍ
ｅｒｓｈａｍ）０．５μＣｉを適用する。培養物を回収し（Ｂｅｔａｐｌａｔｅ
ハーベスター、Ｗａｌｌａｃ）同位体の取り込みを液体シンチレーション（Ｂｅ
ｔａｐｌａｔｅ、Ｗａｌｌａｃ）により評価する。

【０１６６】 同一の培養系をＩＬ−２産生の測定によるＴセル活性化の評価に用いることが
できる。培養開始後１８〜２４時間後に上澄を除去し、製造者の指示に従って、
ＥＬＩＳＡによりＩＬ−２濃度を測定する。

【０１６７】 Ｔセル活性化のインビボモデル Ｔセル活性化を直接測定することが知られているか、またはＴセルがエフェク
ターであることが解っている動物モデルで化合物のインビボ有効性を試験できる
。Ｔセルレセプターの定常部分をモノクローナル抗ＣＤ−３抗体（Ａｂ）とライ
ゲートすることによりインビボでＴセルを活性化できる。このモデルでは、放血
の２時間前にＢＡＬＢ／ｃマウスに抗ＣＤ３Ａｂ １０μｇを腹腔内投与する。
被験物質を投与される動物に、抗ＣＤ３Ａｂ投与の１時間前に１回用量の化合物
を前投与する。前炎症性サイトカインインターフェロン−γ（ＩＮＦ−γ）およ
び腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）の血清レベルはＴセル活性化の指標でありＥ
ＬＩＳＡにより測定される。特異的抗原例えばキーホールリンペットヘモシアニ
ン（ＫＬＨ）でのインビボＴセル初回免疫で類似のモデルを用い、続いて同一の
抗原で排液されるリンパ節細胞をインビトロで２次対抗する。前記するようにサ
イトカイン産生の測定値を用いて培養細胞の活性化状態を評価する。簡単には、
０日に完全フロイントアジュバントで乳化したＫＬＨ１００μｇでＣ５７ＢＬ／
６マウスを皮下で免疫する。免疫の１日前に動物を化合物を前投与し、続いて免
疫後１、２および３日に投与する。リンパ節排液を４日に回収し、その細胞を組
織培養培地（熱不活性化ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉ
ｅｓ）、５ｘ１０^−５ ２−メルカプトエタノールおよび０．５％ ＤＭＳＯを
補充したＲＰＭＩ １６４０）中６ｘ１０６／ｍｌで２４時間および４８時間の
両方で培養する。次いでＥＬＩＳＡにより自己分泌性Ｔセル成長因子インターロ
イキン−２（ＩＬ−２）および／またはＩＦＮ−γレベルに関して培養上澄を評
価する。

【０１６８】 リード化合物もまたヒト疾患の動物モデルにおいて試験できる。これらは実験
的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）およびコラーゲン誘起関節炎（ＣＩＡ）により
例示できる。ラットおよびマウスの双方でヒト多発性硬化症の態様を擬似するＥ
ＡＥモデルが報告されている（ＦＡＳＥＢ Ｊ．５：２５６０−２５６６（１９
９１）；ネズミモデル：Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．４（３）：２７８（１９８１）
；齧歯モデル：Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １４６（４）：１１６３−１１６８（１９
９１）に概説されている）。簡単には、マウスおよびラットをミエリン塩基性タ
ンパク質（ＭＢＰ）またはその神経性ペプチド誘導体およびＣＦＡの乳液で免疫
する。細菌性毒素例えばｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓの添加によ
り急性疾患を誘起できる。ＭＢＰ／ペプチド免疫動物のＴセルの養子移入により
疾患の再発／緩和が誘起される。

【０１６９】 ＩＩ型コラーゲンでの免疫によりＤＢＡ／１マウスにＣＩＡを誘起することが
できる（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １４２（７）：２２３７−２２４３）。抗原対抗
後１０日ほどの早期にマウスに関節炎の徴候が進行し、免疫後９０日ほどの長期
にわたって評価され得る。ＥＡＥおよびＣＩＡモデルの双方で、予防的に、また
は疾患の発症時に化合物を投与できる。有効な薬物は重篤度および／または発症
率を低減するはずである。

【０１７０】 １つまたはそれ以上の血管形成レセプターＰＴＫ、および／またはタンパク質
キナーゼ例えば炎症性応答の媒介に関与するｌｃｋを阻止する本発明の特定の化
合物はこれらのモデルにおいて関節炎の重篤度および発症率を低減させることが
できる。

【０１７１】 皮膚（Ａｎｎ.Ｒｅｖ.Ｉｍｍｕｎｏｌ. １０：３３３−３５８（１９９２）
；Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７（１２）：１７０１−１７Ｄ６（１９
９４）に概説されている）または心臓（Ａｍ．Ｊ．Ａｎａｔ．１１３：２７３（
１９６３））のいずれかのマウス同種移植片モデルにおいても化合物を試験でき
る。簡単には、全層植皮をＣ５７ＢＬ／６マウスからＢＡＬＢ／ｃマウスに移植
する。移植片を毎日試験し、６日の始めに拒絶の証拠に関して試験する。マウス
新生児心臓移植モデルにおいて、新生児心臓をＣ５７ＢＬ／６マウスから成熟Ｃ
ＢＡ／Ｊマウスの耳介に異所的に移植する。移植後４〜７日に心臓の拍動が始ま
り、解剖顕微鏡を用いて拍動の停止を探し、肉眼的に拒絶を評価できる。

【０１７２】 細胞性レセプターＰＴＫアッセイ 以下の細胞アッセイを用いて活性のレベルおよび本発明の種々化合物のＫＤＲ
／ＶＥＧＦＲ_２に及ぼす影響を決定した。当該分野で既知の技術を用いて、特異
的リガンド刺激を用いる類似のレセプターＰＴＫアッセイをその他のチロシンキ
ナーゼのための同一の経路に沿って設計できる。

【０１７３】 ウェスターンブロットにより測定されるヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）
におけるＶＥＧＦ誘起ＫＤＲリン酸化 １．ＨＵＶＥＣ細胞（プールしたドナーの細胞に由来）をＣｌｏｎｔｅｃｈ（
Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）より購入し、製造者の指示書に従って培養した。初
期継代（３〜８）のみをこのアッセイに用いた。組織培養用に完全ＥＢＭ培地（
Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて１００ｍｍ皿（Ｆａｌｃｏｎ組織培養用；Ｂｅｃｔ
ｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；Ｐｌｙｍｏｕｔｈ，英国）で細胞を培養した。

【０１７４】 ２．化合物の阻止効果を評価するために、細胞をトリプシン消化し、６ウェル
クラスタープレート（Ｃｏｓｔａｒ；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）の各ウェルに
０．５〜１．０ｘ１０^５セル／ウェルを播種した。

【０１７５】 ３．播種後３〜４日にプレートを全面成長の９０〜１００％した。全ウェルか
ら培地を除去し、細胞をＰＢＳ５〜１０ｍｌですすぎ、無添加ＥＢＭ塩基性培地
５ｍｌで１８〜２４時間インキュベートした（すなわち血清飢餓）。

【０１７６】 ４．ＥＢＭ培地１ｍｌ中インヒビターの連続希釈物（最終濃度２５μＭ、５μ
Ｍまたは１μＭ）を細胞に加え、３７℃で１時間インキュベートした。次いでヒ
ト組換えＶＥＧＦ１６５（Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）をＥＢＭ培地２ｍｌ中
最終濃度５０ｎｇ／ｍｌで全ウェルに加え、３７℃で１０分間インキュベートし
た。未処理またはＶＥＧＦで処理した対照細胞のみを用いてＶＥＧＦによるバッ
クグラウンドリン酸化およびリン酸化誘導を評価した。

【０１７７】 次いで１ｍＭ オルトバナジウム酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）を含有する冷Ｐ
ＢＳ５〜１０ｍｌで全ウェルをすすぎ、細胞を溶解し、プロテアーゼインヒビタ
ー（１ｍＭ ＰＭＳＦ、１μｇ／ｍｌ アプロチニン、１μｇ／ｍｌ ペプスタ
チン、１μｇ／ｍｌ ロイペプチン、１ｍＭ バナジウム酸Ｎａ、１ｍＭ フッ
化ナトリウム）および１μｇ／ｍｌ ＤＮアーゼを含有するＲＩＰＡバッファー
（５０ｍＭ トリスＨＣｌ、ｐＨ７、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ ＮＰ−４０
、０．２５％ デオキシコール酸ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡ）２００μｌ中
に掻き取った（全ての化学物質はＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎ
ｙ，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯより入手）。ライゼートを１４０００ｒｐｍで３０
分間遠心して核を排除した。

【０１７８】 次いで冷（−２０℃）エタノール（２容量）を添加して、等量のタンパク質を
最低で１時間、最大で一晩沈殿させた。５％ β−メルカプトエタノールを含有
するＬａｅｍｌｉサンプルバッファー（ＢｉｏＲａｄ；Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ
）でペレットを再構成し、５分間煮沸した。ポリアクリルアミドゲル電気泳動（
６％、１．５ｍｍ Ｎｏｖｅｘ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）でタンパク質を解
析し、Ｎｏｖｅｘ系を用いてニトロセルロース膜に移した。ウシ血清アルブミン
（３％）で遮断した後、タンパク質を抗ＫＤＲポリクローナル抗体（Ｃ２０、Ｓ
ａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，Ｃ
Ａ）で、または抗リン酸チロシンモノクローナル抗体（４Ｇ１０、Ｕｐｓｔａｔ
ｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌａｋｅ Ｐｌａｃｉｄ，ＮＹ）で４℃で一
晩プロービングした。洗浄およびヤギ抗ウサギまたはヤギ抗マウスＩｇＧのＨＲ
ＰコンジュゲートＦ（ａｂ）２と共に１時間インキュベートした後、発光化学ル
ミネサンス（ＥＣＬ）系（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａ
ｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｉｇｈｔ，ＩＬ）を用いてバンドを可視化した。

【０１７９】 本発明の特定の例は、５０μＭ未満の濃度で細胞性ＶＥＧＦ誘起ＫＤＲチロシ
ンキナーゼリン酸化を著明に阻止する。

【０１８０】 インビボ子宮浮腫モデル このアッセイはエストロゲン刺激の後、最初の数時間に生じるマウスの子宮重
量の急激な増加を阻止する化合物の能力を測定する。この初期の子宮重量増加の
発現は子宮脈管系の透過性の増加により引き起こされる浮腫によるものであるこ
とが知られている。Ｃｕｌｌｉｎａｎ−ＢｏｖｅおよびＫｏｓｓ（Ｅｎｄｏｃｒ
ｉｎｏｌｏｇｙ １３３：８２９−８３７（１９９３））により、エストロゲン
刺激子宮浮腫が子宮におけるＶＥＧＦ ｍＲＮＡの発現増加と一過性の関係が深
いことが示された。これらの結果はエストロゲン刺激後の急激な子宮重量増加を
著明に低減するＶＥＧＦに対する中和モノクローナル抗体を用いて確認された（
ＷＯ９７／４２１８７）。従って、この系をＶＥＧＦシグナル発生のインビボ阻
止並びに関連する過透過性および浮腫のモデルとして提供することができる。

【０１８１】 材料：全ホルモンをＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）またはＣａｌ Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ（Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）から凍結乾燥粉末として購入し、供給
者の指示書に従って調製した。

【０１８２】 ベヒクル成分（ＤＭＳＯ、Ｃｒｅｍａｐｈｏｒ ＥＬ）をＳｉｇｍａ（Ｓｔ．
Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。

【０１８３】 マウス（Ｂａｌｂ／ｃ、８〜１２週齢）をＴａｃｏｎｉｃ（Ｇｅｒｍａｎｔｏ
ｗｎ，ＮＹ）から購入し、動物保護および使用委員会ガイドラインに従って病原
体不含の動物施設で飼育した。

【０１８４】 方法： １日：Ｂａｌｂ／ｃマウスに妊馬血清性ゴナドトロピン（ＰＭＳＧ）１２．５
単位を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。

【０１８５】 ３日：マウスにヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）１５単位をｉ．ｐ．投与
した。

【０１８６】 ４日：マウスを無作為に５〜１０群に分割した。被験化合物を可溶性およびベ
ヒクルに依存して、１〜１００ｍｇ／ｋｇの用量範囲で、ｉ．ｐ．、ｉ．ｖ．ま
たはｐ．ｏ．経路で投与した。ベヒクル対照群にはベヒクルのみを投与し、２群
を未処置のままにした。

【０１８７】 ３０分後、実験用、ベヒクルおよび未処置群の１つに１７β−エストラジオー
ル（５００μｇ／ｋｇ）をｉ．ｐ．注射した。２〜３時間後、ＣＯ２吸入により
動物を屠殺した。正中線切開の後、各子宮を単離し、子宮頚のすぐ下並びに子宮
および卵管の接合部で切断して除去した。重量測定の前に子宮の完全性を損なわ
ないように注意深く脂肪および結合組織を除去した。処置群の平均重量を未処置
またはベヒクル処置群と比較した。スチューデントｔ−テストにより有意性を判
定した。非刺激対照群を用いてエストラジオール応答をモニター観察した。

【０１８８】 本発明の特定の化合物を種々の経路で全身的に投与した場合、浮腫の形成を阻
止する結果が示された。

【０１８９】 血管形成性レセプターチロシンキナーゼのインヒビターである本発明の特定の
化合物はまた新生脈管形成のＭａｔｒｉｇｅｌ移植モデルにおいても活性である
ことを示すことができる。Ｍａｔｒｉｇｅｌ新生脈管形成モデルは、腫瘍細胞を
産生する前脈管形成因子の存在により誘起される、皮下に移植された細胞外マト
リックスの明らかな「マーブル」内での新たな血管の形成に関与する（例えば：
Ｐａｓｓａｎｉｔｉ，Ａ．ら、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．６７（４）５１９−
５２８（１９９２）；Ａｎａｔ．Ｒｅｃ．２４９（１）：６３−７３（１９９７
）；Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６３（５）：６９４−７０１（１９９５）；Ｖ
ａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１５（１１）：１８５７−６（１９９５））。好ましくは、
モデルは３〜４日過ごし、最後には、新生脈管形成の顕微鏡的肉眼／造影スコア
、顕微鏡的微細血管密度決定、およびヘモグロビン定量（Ｄｒａｂｋｉｎ法）を
行い、続いてインヒビターで処置していない動物からの移植対対照を除去した。
また別に、モデルはｂＦＧＦまたはＨＧＦを刺激として用いることができる。

【０１９０】 １つまたはそれ以上の癌遺伝子、癌原遺伝子またはは増殖依存性タンパク質キ
ナーゼ、または血管形成レセプターＰＴＫを阻止する本発明の特定の化合物はま
たマウスにおける１次ネズミ、ラットまたはヒト異種移植片腫瘍の成長をも阻止
するか、またはネズミモデルにおける転移を阻止する。

【０１９１】 実施例 Ｉ．合成 式Ｉの化合物を以下のように調製した。以下では：

【０１９２】

【化３】 である。

【０１９３】 ０〜２５０℃の温度範囲で、所望により溶媒の存在下、式ＴＬ_１ ＣＯＲｔ（
ここでＲｔは脱離基例えばハロまたはアルコキシである）を式Ｈ２Ｎ−Ｌ_２−Ｒ _１ のアミンと反応させて、ＡがＣＯＮＨを表す式Ｉの化合物を調製できる。

【０１９４】 ０〜２５０℃の温度範囲で、所望により溶媒の存在下、ＡがＣＯＮＨを表す式
Ｉの化合物を還元化剤、例えば水素化アルミニウムリチウムと反応させて、Ｌ_１ ＡがＣＨ_２ＮＨを表す式Ｉの化合物を調製できる。

【０１９５】 また別に、０〜２５０℃の温度範囲で、所望により溶媒の存在下、還元化剤、
例えばトリアセトキシボロハイドライドナトリウムの存在下、式ＴＬ_１ ＣＨＯ
の化合物を式Ｈ２Ｎ−Ｌ_２−Ｒ_１のアミンと反応させて、式Ｌ_１ＡがＣＨ_２ＮＨ
を表す式Ｉの化合物を調製できる。

【０１９６】 また別に、Ｌ_１−Ａ−Ｌ_２−Ｒ_１の基はフェニル環に存在してよく、環系は以
下に記載するように構築でき、ここで

【０１９７】

【化４】 である。

【０１９８】 米国特許第３８４３６６５号および米国特許第３８４３６６６号に示される式
Ｉの化合物の環系を合成するために２つの一般的な方法がある。

【０１９９】 米国特許第３８４３６６５号では、不活性溶媒および触媒量の酸中、式ＩＩの
化合物を式ＩＩＩの芳香族スルフォニルヒドラジドと共に加熱してピラゾール環
の環化を行う。反応は好ましくは７５℃〜１００℃の温度で５〜３０時間実施し
、Ｒ_１が水素である式Ｉの化合物を得、

【０２００】

【化５】 式中、 ｐは０、１、２であり；Ｗは低級アルキルであり；およびＲ、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ _５ 、Ｒ_６およびＸは前記で定義するとおりである。酸または塩基触媒の存在下、
式ＩＶの適当に機能化した化合物を式Ｖのアルデヒドと反応させることにより式
ＩＩの化合物を調製する（Ｂｒａｕｎ，Ｒ．Ａ．；Ｍｏｓｈｅｒ，Ｗ．Ａ．、Ｊ
．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９５８、８０、２７４９）。

【０２０１】

【化６】 式Ｉの化合物の環系を調製する第２の方法は米国特許第３８４３６６６号に示
され、該方法では不活性溶媒、例えば芳香族炭化水素中、６〜２４時間、一般式
ＶＩの化合物を触媒量の有機カルボン酸または有機スルホン酸と共に７５〜１７
５℃に加熱し；

【０２０２】

【化７】 式中、Ｒ、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６およびＸは前記で定義するとおりである。

【０２０３】 不活性溶媒中一般式ＶＩＩの化合物をヒドラジンと反応させることにより式Ｖ
Ｉの化合物を調製する。反応は１５〜２０℃で２４時間まで行う。

【０２０４】

【化８】

【０２０５】 また別に、式ＶＩの化合物を単離せずに、直接式ＶＩＩの化合物をヒドラジン
と反応させて、例えば不活性溶媒、例えばメタノール中、酸触媒、例えば酢酸の
存在下、６０℃から用いる不活性溶媒の沸点までの温度範囲で式ＶＩＩの化合物
を過熱して、式Ｉの化合物を調製できる。

【０２０６】 式Ｉの化合物を式ＸＶＩの化合物：

【０２０７】

【化９】 （式中、Ｒ、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６およびＸは前記で定義するとおりである
）を不活性溶媒、例えばメタノール中、１５℃から用いる不活性溶媒の沸点まで
の温度範囲でヒドラジンと反応させて、式Ｉの化合物を調製することもできる。

【０２０８】 塩基性条件下で式ＶＩＩＩの化合物を式Ｖのアルデヒドとを反応させて一般式
ＶＩＩを有する化合物を調製する。反応は５〜１０℃の温度で３〜６時間行う。

【０２０９】

【化１０】 式中、 Ｙはいずれかの慣用される脱離基、例えば塩素、臭素、ヨウ素、トシレートま
たはメシレートであり、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６およびＸは前記で定義するとお
りである。

【０２１０】 不活性溶媒、例えばエタノール、ジクロロメタン、水またはその混合物中、０
℃〜１００℃の温度範囲で、塩基例えば水酸化ナトリウムの存在下、式ＩＩの化
合物をエポキシド化剤、例えば過酸化水素と反応させることにより式ＶＩＩの化
合物を調製することもできる。

【０２１１】 無機酸例えば塩酸、硫酸またはリン酸と反応させてＶＩを環化することもでき
る。低級アルカノール中、１５℃〜２０℃の温度で１２〜４８時間反応を実施す
る。次いで直鎖状エーテルまたは環状エタノール中８〜３０時間有機カルボン酸
または有機スルホン酸と共に５０℃〜１５０℃の温度まで加熱して、反応生成物
ＩＸをＩに芳香族化することができる。

【０２１２】

【化１１】

【０２１３】 不活性溶媒例えば芳香族炭化水素中、３５℃〜２００℃の温度で、５〜８時間
、式（ＲｘＣＯ）２Ｏ（構造Ｘ）（ここでＲｘはＣ_１−４アルキル基である）の
酸無水物と反応させることにより、化合物ＩＸをジアセチル化し、式ＸＩの化合
物を得ることできる。

【０２１４】

【化１２】

【０２１５】 次いで、不活性溶媒中４〜８時間、無機酸または有機酸と共に加熱して、化合
物ＸＩを化合物ＸＩＩに芳香族化できる。最終的に、不活性溶媒、例えば水また
は低級アルコール中、アルカリ金属またはアルカリ金属水酸化物の存在下、８〜
３０時間、５０℃〜１５０℃の温度に加熱して、化合物ＸＩＩをＩに変換できる
。

【０２１６】

【化１３】

【０２１７】 不活性溶媒、例えばメタノール中、３５〜１５０℃の温度範囲でヒドラジンと
反応させることにより、一般式ＩＩを有する化合物を式ＸＩＩＩの化合物に環化
できる。

【０２１８】

【化１４】

【０２１９】 所望により不活性溶媒、例えば炭化水素の存在下、１５〜２５０℃の温度範囲
で式ＸＩＩＩの化合物を脱水素化試薬、例えばイオウ、酸素、パラジウム、二酸
化マンガンまたは二酸化鉛と反応させて式Ｉの化合物を調製できる。

【０２２０】 前記の変換の具体的な例は米国特許第３８４３６６５号および米国特許第３８
４３６６６号に見出すことができる。

【０２２１】 対応するヒドラゾンのウォルフ−キシュナー還元により架橋カルボニルをメチ
レン基に変換することができる（Ｍｏｓｈｅｒ，Ｗ．Ａ．、Ｔａｗｆｉｋ，Ｅ．
−Ｚ、Ｌｉｐｐ，Ｄ．Ｗ．、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．３６：３８９０（１９７１
））。

【０２２２】 架橋カルボニルを機能化する別の方法および具体例を日本特許出願第ＪＰ６０
１３０５２１ Ａ２およびＢ．Ｌｏｅｖ、米国特許第３００４９８３号（１９
６０）に見出すことができる。

【０２２３】 −７８℃〜２５℃の温度範囲で、式ＸＩＶの化合物：

【０２２４】

【化１５】 を強塩基、例えばｎ−ブチルリチウムと反応させ、続いて式Ｒ_２ＣＯＧ（構造
ＸＶ）（式中Ｒ_２は前記で定義したとおりであり、ＧはＣ_１−６アルコキシ基を
表す）の化合物と反応させて式Ｉの化合物を調製できる。

【０２２５】 式ＩＶ、ＶＩＩＩ、ＸＩＶ、ＸＶおよびＸＶＩの化合物は市販により入手でき
、当業者で既知の方法により調製できる。

【０２２６】 当業者に既知の方法により、例えば適当なモル数に等価の３−クロロペル安息
香酸を用いて式Ｉ（式中、ＸはＳを表す）の化合物を酸化して、式Ｉ（式中、Ａ
はＳＯまたはＳＯ２を表す）の化合物を調製できる。

【０２２７】 当業者に既知の方法により、式Ｉ（式中、Ｘはカルボニルを表す）の化合物を
式Ｈ２ＮＯＲ_７の化合物と反応させて式Ｉ（式中、Ｘは式−Ｃ＝ＮＯＲ_７を表す
）の化合物を調製できる。

【０２２８】 当業者に既知の方法により、例えばピリジン−Ｎ−オキサイド媒介の転移によ
り、ピリジン環の２位で式Ｉ（式中、Ｒ_１＝４−ピリジル）の化合物をさらに機
能化できる。

【０２２９】 式Ｉの化合物の特定の置換基を当業者に既知の方法で相互変換できる。例えば
アルコキシ置換基を適当なエーテル切断試薬例えば臭化水素酸、三フッ化ホウ素
または塩酸ピリジンと反応させてヒドロキシ置換基を有する式Ｉの化合物を得る
ことができる。また別に、ヒドロキシ置換基を有する式Ｉの化合物をアルキル化
することによりアルコキシ置換基を有する式Ｉの化合物を調製することができる
。カルボン酸エステル置換基をカルボキシまたはアミド置換基に変換でき、カル
ボン酸置換基をカルボン酸エステルまたはアミド置換基に変換できる。当業者に
既知の方法でニトロ基をアミンに還元し、アミンをアシル化できる。

【０２３０】 特定の置換基が前記の方法に記載されたいくつかの試薬と反応し得ることは理
解されよう。このような場合、代替の方法を用いるかまたは反応性置換基を反応
前に保護し、反応後に脱保護するべきである。

【０２３１】 以下の実施例で本発明を説明するが、該実施例は説明のためだけに提示するも
のである。以下の方法の１つまたはそれ以上によりこれらの実施例の各々の最終
産物を特徴づけする：高速液体クロマトグラフィー；エレメント分析、核磁気共
鳴スペクトル、赤外線分光法および高分解能質量分光法。以下の略語を使用する
： ＩＭＳ＝工業用メチルアルコール ＬＣＭＳ＝液体クロマトグラフィー／質量分光法

【０２３２】 実施例１ ａ）インダン−１−オン（３，３ｇ）、４−ホルミル安息香酸メチル（５．０
ｇ）、ピペリジン（０．６ｍｌ）および氷酢酸（０．５ｍｌ）の混合物をスチー
ムバス上３時間加熱した。得られた固体の塊を工業用メチルアルコール（２００
ｍｌ）中で煮沸し、次いで熱濾過した。得られた固体残留物を工業用メチルアル
コールで洗浄し、乾燥して４−（１−オクソインダン−２−イリデンメチル）安
息香酸メチル（融点１９４〜１９８℃）を得た。

【０２３３】 ｂ）ａ）の生成物（１．５ｇ）をメタノール（１０ｍｌ）およびジクロロメタ
ン（１５ｍｌ）に懸濁し、０〜５℃で攪拌しながら、２Ｍ水酸化ナトリウム溶液
（２．７ｍｌ）を加え、次いで３０％ 過酸化水素を加えた（１００容量、１．
１ｍｌ）。混合物を０〜５℃で５分間、次いで周囲温度で２４時間攪拌した。ジ
クロロメタン（１００ｍｌ）を混合物に加え、次いでこれをブラインで洗浄し（
２ｘ５０ｍｌ）、乾燥し、濾過し、蒸発させて４−（１−オクソスピロ［インダ
ン−２，２‘−オキシラン］−３’−イル）安息香酸メチル（融点１６０〜１６
３℃）を得た。水相を５Ｍ 塩酸で酸性にし、ジクロロメタンで抽出し、４−（
１−オクソスピロ［インダン−２，２‘−オキシラン］−３’−イル）安息香酸
（融点２２０℃で分解）を得た。

【０２３４】 ｃ）ｂ）の４−（１−オクソスピロ［インダン−２，２‘−オキシラン］−３
’−イル）安息香酸（７８０ｍｇ）、メタノール（５０ｍｌ）、ヒドラジン水和
物（０．１８ｍｌ）および氷酢酸（６滴）を２４時間還流下煮沸した。混合物を
氷上で冷却し、濾過して４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾ
ール−３−イル）安息香酸（融点＞３２０℃）を得た。

【０２３５】 ｄ）ｃ）の生成物およびジクロロメタン（２５０ｍｌ）の混合物を周囲温度で
攪拌し、次いでオキサリルクロライド（５ｍｌ）および乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホ
ルムアミド（６滴）を加え、混合物を周囲温度で１０分間攪拌し、次いで還流下
９０分間煮沸する。減圧下溶媒を除去し、粗製酸塩化物を得、次の実験で直接使
用した。

【０２３６】 ｅ）ジクロロメタン（１５０ｍｌ）中ｄ）の酸塩化物（３．７３ｇ）を周囲温
度で攪拌し、次いでトリエチルアミン（３ｍｌ）、次いで４−アミノピリジン（
０．９ｇ）を加えた。混合物を周囲温度で３時間攪拌した。水（１５０ｍｌ）お
よび５Ｍ 水酸化ナトリウム溶液（５０ｍｌ）を加え、混合物を周囲温度で９０
分間攪拌した。混合物を濾過し、残留物をジクロロメタンおよび水で洗浄した。
濾液および洗浄液を組み合わせ、抽出し、ジクロロメタン層を蒸発乾固し、固体
を得、これを濾液から得られた元の固体と組み合わせ、シリカのフラッシュカラ
ムクロマトグラフィーにより、ジクロロメタン／エチルアルコール（１０：１）
を用いてＮ−（４−ピリジル）−４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ
］ピラゾール−３−イル）ベンズアミドを得た。

【０２３７】 ｆ）乾燥テトラヒドロフラン（５０ｍｌ）中周囲温度でｅ）の生成物の混合物
の一部を攪拌し、これに水素化アルミニウムリチウム（８３０ｍｇ）を加えた。
混合物を還流下１時間煮沸した。混合物を０〜５℃に冷却し、酢酸エチル（７０
ｍｌ）を加え、次いで水（７０ｍｌ）を加えた。混合物を１０分間攪拌し、濾過
して固体Ａを得た。水層を分離し、さらに酢酸エチル（１００ｍｌ）で抽出した
。固体Ａをエタノールと共に攪拌し、濾過した。酢酸エチル抽出物およびエタノ
ール濾液を組み合わせ、蒸発させた。得られた残留物をフラッシュクロマトグラ
フィーで、ジクロロメタン／エタノール（１０：１）を用いて精製し、４−（１
，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール）−Ｎ−（４−ピリジル）ベ
ンジルアミン（融点２７０〜２７４℃）を得た。

【０２３８】 実施例２ ａ）インダン−１−オン（２０．０ｇ）、４−ニトロベンズアルデヒド（２７
．０ｇ）、氷酢酸（３．０ｇ）およびピペリジン（３．０６ｇ）を窒素下９５℃
で３．５時間加熱した。混合物を２０℃まで冷却し、濾過して固体を得、工業用
メチルアルコールから再結晶し、２−（４−ニトロベンジリデン）インダン−１
−オンを得た。

【０２３９】 ｂ）ａ）（２８．０ｇ）の生成物をジクロロメタン（１００ｍｌ）およびメタ
ノール（１００ｍｌ）と共に２０℃で攪拌し、次いで２Ｍ 水酸化ナトリウム溶
液（５０ｍｌ）を加え、続いて過酸化水素（２０ｍｌ、１００容量）を加えた。
混合物を２０℃で２４時間攪拌した。さらに過酸化水素（１０．０ｍｌ、１００
容量）を加え、混合物をさらに２４時間攪拌した。さらに過酸化水素（１０．０
ｍｌ、１００容量）を加え、混合物を６４時間攪拌した。反応混合物を氷酢酸で
中和し、形成した固体を濾過して収集し、乾燥して３‘−（４−ニトロフェニル
）−１−オクソスピロ［インダン−２，２’−オキシラン］を得た。

【０２４０】 ｃ）ｂ）（１０．０ｇ）の生成物をエタノール（１８０ｍｌ）に溶解し、ヒド
ラジン水和物（１．７８ｇ）を得られた溶液に加え、続いて氷酢酸（３０滴）を
加えた。混合物を還流下５時間煮沸し、次いで２０℃まで冷却し、この温度で１
８時間放置した。濾過により固体を収集し、アセトンから再結晶し、３−（４−
ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール（融点
２６７〜２７０℃）を得た。

【０２４１】 ｄ）ｃ）の生成物（３．０ｇ）を工業用メチルアルコール（２００ｍｌ）に懸
濁し、炭素（２５０ｍｇ）上５％ パラジウムを加え、続いてギ酸アンモニウム
（２．０５ｇ）を加えた。混合物を攪拌し、７０℃で３時間攪拌し、次いで周囲
温度まで冷却し、次いで濾過した。濾液を減圧下濃縮し、ジクロロメタンで粉砕
し、４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）ア
ニリン（融点２５３〜２５４℃）を得た。

【０２４２】 ｅ）ｄ）の生成物（１．０ｇ）をジクロロメタン（３０ｍｌ）に溶解し、トリ
エチルアミン（０．６２ｍｌ）を加えた。混合物を０℃に冷却し、攪拌しながら
塩化ベンゼンスルホニル（０．７９ｇ）を加えた。混合物を２０℃に加温し、こ
の温度で２時間攪拌した。さらにトリエチルアミン（０．６２ｍｌ）および塩化
ベンゼンスルホニル（０．７９ｇ）を加え、混合物を周囲温度で４時間攪拌し、
次いで周囲温度で１６時間放置した。エーテル（８０ｍｌ）を加え、続いて水（
４０ｍｌ）を加えた。沈殿した固体を濾過により収集し、炭酸水素ナトリウムお
よびエーテルで洗浄し、次いで真空下６０℃で乾燥した。その物質をアセトンか
ら再結晶し、固体を得、これをシリカのフラッシュクロマトグラフィーによりジ
クロロメタンを用いて精製し、固体を得、これを４‘−（１−フェニルスルフォ
ニル（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）Ｎ−フ
ェニルスルフォニルアニリンと同定した。

【０２４３】 ｆ）ｅ）の生成物（０．５６ｇ）をメタノール（４０ｍｌ）に懸濁し、２Ｍ
水酸化ナトリウム溶液（５．３ｍｌ）を加えた。透明な溶液を得、これを２０℃
で２０分間攪拌した。混合物を２Ｍ 塩酸（７５ｍｌ）に注ぎ、得られた固体を
濾過により収集して固体を得、これを飽和炭酸水素ナトリウム（２５ｍｌ）およ
び酢酸エチル（２５ｍｌ）と共に３０分間攪拌し、次いで濾過してＮ−［４−（
１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）フェニル］ベ
ンゼンスルホンアミド（融点２８６〜２８８℃）を得た。

【０２４４】 実施例３ 実施例１ｄ）の酸塩化物（１００ｍｇ）、ジクロロメタン（５ｍｌ）、２−メ
トキシエタノール（２６μｌ）およびトリエチルアミン（８４μｌ）の混合物を
周囲温度で２０時間攪拌した。混合物を炭酸水素ナトリウム（飽和５ｍｌ）と共
に攪拌し、濾過した。濾液を蒸発させてフラッシュクロマトグラフィーにより、
移動相としてジクロロメタン／工業用メチルアルコール（２５：２）を用いて精
製し、無色固体の４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−
３−イル）−Ｎ−（２−メトキシエチル）ベンズアミドを得た。

【０２４５】 実施例４ 実施例１ｄ）の酸塩化物（１００ｍｇ）、ジクロロメタン（５ｍｌ）、４−ニ
トロアニリン（４１ｍｇ）およびトリエチルアミン（６４μｌ）の混合物を周囲
温度で２０時間攪拌した。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（５ｍｌ）と共に１
０分間攪拌し、次いで濾過した。固体をジクロロメタン、次いでアルコールで洗
浄し、乾燥させて、無色固体の４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］
ピラゾール−３−イル）−Ｎ−（４−ニトロフェニル）ベンズアミドを得た。

【０２４６】 実施例５ 実施例２ｄ）のアニリン（６ｍｇ）をジクロロメタン（２００ｍｌ）に溶解し
、次いでトリエチルアミン（７．４ｍｌ）を加えた。混合物を０℃に冷却し、次
いで塩化クロロアセチル（４．２ｍｌ）を攪拌しながら加え、混合物を２０℃ま
で加温した。混合物を濾過し、得られた固体を水、次いでエーテルで洗浄し、乾
燥してピラゾールの１−窒素および出発アニリンのＮＨ２基でクロロアセチル化
された中間体を得た。

【０２４７】 ｂ）ａ）の生成物（１．４ｇ）、イミダゾール（０．９５ｇ）およびテトラヒ
ドロフラン（４０ｍｌ）を還流下９０℃で、窒素下６時間煮沸した。混合物を濾
過し、濾液を減圧下で蒸発させ、残留物を得、これを酢酸エチルおよび２Ｍ 塩
酸間で分配した。得られた固体を濾過により収集し、乾燥して４−（１，４−ジ
ヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）イミダゾール−１−イル
アセトアニリド・ジヒドロクロライド（融点２６４〜２６６℃）を得た。

【０２４８】 実施例６ 実施例５の生成物（０．２７ｇ）をテトラヒドロフラン（３０ｍｌ）に窒素下
で攪拌しながら懸濁し、水素化アルミニウムリチウム（８７ｍｇ）を加えた。混
合物を２０℃で１８時間攪拌した。硫酸ナトリウムの飽和溶液（４０ｍｌ）で混
合物を消止し、次いで酢酸エチル（２ｘ３０ｍｌ）で抽出して固体を得、これを
エタノール（３ｍｌ）に溶解し、これに濃塩酸（１０滴）を加えた。エタノール
を除去し、黄色固体を得、これをエーテルで粉砕し、４−（１，４−ジヒドロイ
ンデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ−［２−（イミダゾール−１
−イル）エチル］アニリン・ジヒドロクロライド（融点２０５〜２０９℃）を得
た。

【０２４９】 実施例７ ａ）アセトン（７０ｍｌ）中塩化４−シアノベンゼンスルホニルの混合物を周
囲温度で攪拌し、次いでアセトン（１５ｍｌ）中２−モルフォリノエチルアミン
（６．７ｍｌ）を攪拌しながら滴加した。混合物を周囲温度で２時間攪拌し、次
いで蒸発させてアセトンを除去し、酢酸エチルを用いてシリカパッドを通して残
留物を溶出し、４−シアノ−Ｎ−２−モルフォリノエチルベンゼンスルホンアミ
ドを得た。

【０２５０】 ｂ）ａ）の生成物（０．６５ｇ）および乾燥トルエン（３０ｍｌ）を０〜５℃
で攪拌し、水素化ジイソブチルアルミニウム（１．０Ｍ シクロヘキサン溶液４
．４ｍｌ）を０〜５℃で加えた。添加後、溶液を３０分以上かけて周囲温度まで
加温し、次いで還流下沸騰するまで３０分以上かけて加温し、３時間煮沸した。
混合物を冷却し、１０〜１５℃で５Ｍ 塩酸（１０ｍｌ）を加えた。次いで混合
物を９０℃まで１０分間加温し、次いで冷却し、トルエン層を分離した。水層を
酢酸エチルで洗浄し、次いで５Ｍ 水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ７〜８ま
で中和した。この混合物を酢酸エチルで抽出し、乾燥し、蒸発させてゴム状物質
を得、真空下４０℃で乾燥させて固体を得、これを４−ホルミル−Ｎ−（２−モ
ルフォリノエチル）ベンゼンスルホンアミド（融点１１４〜１１６℃）と同定し
た。

【０２５１】 ｃ）ｂ）の生成物（２００ｍｇ）、２−ブロモインダノン（１４２ｍｇ）およ
び乾燥メタノール（３ｍｌ）を０℃で攪拌し、この混合物にメタノール（０．５
ｍｌ）中メトキシドナトリウム（４４ｍｇ）の溶液を加えた。混合物を０℃で２
時間攪拌し、固体を得、これを濾過により収集してメタノールで洗浄し、真空下
乾燥し、エポキシドを得た。

【０２５２】 ｄ）ｃ）の生成物（３．７ｇ）、ヒドラジン水和物（１ｍｌ）、氷酢酸（１０
滴）およびエタノール（１００ｍｌ）を還流下２６時間煮沸してＳｏｘｈｌｅｔ
抽出器の分子ふるい上でエタノール乾燥した。減圧下で溶媒を除去し、残留物を
フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、４−（１，４−ジヒドロインデ
ノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ−（２−モルフォリノエチル）ベ
ンゼンスルホンアミド（融点２１８〜２２０℃）を得た。

【０２５３】 実施例８ これは２−モルフォリノエチルアミンの代わりに２−メトキシエチルアミンを
用いた以外は実施例７に類似の方法で調製し、得られた生成物は ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
−（２−メトキシエチル）ベンゼンスルホンアミド であった。

【０２５４】 実施例９ ａ）インダン−１−オン（３．３ｇ）、４−ホルミル安息香酸メチル（５．０
ｇ）、ピペリジン（０．６ｍｌ）および氷酢酸（０．５ｍｌ）をスチームバス上
で３時間加熱した。固体の塊が得られ、工業用メチルアルコール（２００ｍｌ）
中煮沸し、次いで熱濾過した。得られた固体残留物を工業用メチルアルコールで
洗浄し、乾燥して４−（１−オクソインダン−２−イリデンメチル）安息香酸メ
チル（融点１９４〜１９８℃）を得た。

【０２５５】 ｂ）ａ）の生成物（１．５ｇ）をメタノール（１０ｍｌ）およびジクロロメタ
ン（５ｍｌ）に懸濁し、０〜５℃で攪拌しながら２Ｍ 水酸化ナトリウム溶液（
２．７ｍｌ）を加え、続いて３０％ 過酸化水素（１００容量、１．１ｍｌ）を
加えた。混合物を０〜５℃で５分間、次いで周囲温度で２４時間攪拌した。ジク
ロロメタン（１００ｍｌ）を混合物に加え、次いでこれをブライン（２ｘ５０ｍ
ｌ）で洗浄し、乾燥し、濾過し、蒸発させて４−（１−オクソスピロ［インダン
−２，２‘−オキシラン］−３’−イル）安息香酸メチル（融点１６０〜１６３
℃）を得た。水層を５Ｍ 塩酸で酸性にし、ジクロロメタンで抽出して４−（１
−オクソスピロ［インダン−２，２‘−オキシラン］−３’−イル）安息香酸（
融点２２０℃で分解）を得た。

【０２５６】 ｃ）４−（１−オクソスピロ［インダン−２，２‘−オキシラン］−３’−イ
ル）安息香酸メチル（７５０ｍｇ）、メタノール（３０ｍｌ）およびヒドラジン
水和物（０．１６ｍｌ）を周囲温度で攪拌しながら氷酢酸（６滴）を加えた。混
合物を還流下２４時間煮沸し、次いで周囲温度で２４時間放置し、次いで０℃ま
で冷却して濾過し、４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール
−３−イル）安息香酸メチル（融点２２４〜２２６℃）を得た。

【０２５７】 ｄ）ｃ）のエステル体およびＮ，Ｎ−ジエチルエチレンジアミン（７ｍｌ）を
還流下４．５時間煮沸した。混合物を周囲温度まで冷却し、次いで石油エーテル
（沸点４０〜６０℃、５０ｍｌ）を加えた。混合物を濾過し、アミドを得た。

【０２５８】 ｅ）アミド（２．７５ｇ）をテトラヒドロフラン（８０ｍｌ）に懸濁し、窒素
下周囲温度で攪拌しながら水素化アルミニウムリチウム（１．１４ｇ）を加えた
。混合物を３．５時間攪拌し、次いでさらに水素化アルミニウムリチウム（１．
１４ｇ）およびテトラヒドロフラン（４０ｍｌ）を加えた。２２．５時間後３回
目の水素化アルミニウムリチウムを加え、次いでこの混合物を２４時間攪拌した
。混合物を還流下２．５時間煮沸し、次いで周囲温度で一晩放置した。混合物を
窒素下で氷浴中冷却しながら攪拌しながら、酢酸エチル（１００ｍｌ）、続いて
水（１００ｍｌ）を加え、有機層を分離し、洗浄し、蒸発乾燥し、油状物を得、
これをシリカのフラッシュカラムクロマトグラフィーで酢酸エチル／エタノール
／トリエチルアミン（７：２：１）を用いて精製した。適当な分画を組み合わせ
、蒸発させてゴム状物質（０．８５ｇ）を得、これを加温しながらエタノール（
５ｍｌ）に溶解し、溶液に濃塩酸（０．６ｍｌ）を加えた。次いで混合物を減圧
下蒸発させて残留したゴム状の固体をエタノール（１０ｍｌ）で煮沸し、次いで
氷中で冷却し、Ｎ−［２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル］−４−（１，４
−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）ベンジルアミン・ト
リハイドロクロライド（融点２２５℃）を得た。

【０２５９】 実施例１０ この実施例は２−モルフォリノエチルアミンを用いる代わりにＮ，Ｎ−ジエチ
ルアミノエチルアミンを用いる以外は実施例７に類似の方法で調製した。得られ
た生成物はＮ−［２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル］−４−（１，４−ジ
ヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）ベンゼンスルホンアミド
・ジハイドロクロライド（融点１９２〜１９６℃）であった。

【０２６０】 実施例１１ この実施例はＮ，Ｎ−ジエチルエチレンジアミンを用いる代わりに２−モルフ
ォリノエチルアミンを用いる以外は実施例９に類似の方法で調製した。得られた
生成物は４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル
）−Ｎ−（２−モルフォリノエチル）ベンジルアミン・ジハイドロクロライド（
融点２６６〜２６９℃で分解）であった。

【０２６１】 実施例１２ これは２−メトキシエチルアミンを用いる代わりに４−エトキシアニリンを用
いる以外は実施例１に類似の方法で調製した。得られた生成物はＮ−（４−エト
キシフェニル）−４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−
３−イル）ベンジルアミン（融点１８０℃で分解）であった。

【０２６２】 実施例１３ これはＮ，Ｎ−ジエチルエチレンジアミンを用いる代わりに（Ｓ−（＋）−２
−（アミノメチル）ピロリジンを用いる以外は実施例９ｄ）に類似の方法で調製
した。得られた生成物は（Ｓ）−４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ
］ピラゾール−３−イル）−Ｎ−（ピロリジン−２−イルメチル）ベンズアミド
・ジハイドロクロライド（融点２２２〜２２６℃）であった。

【０２６３】 実施例１４ ａ）チオサリチル酸メチル（９．８９ｍｌ）をエタノール（１００ｍｌ）中メ
トキシドナトリウム溶液（１１．６ｇ）を攪拌しながら加えた。１５分後、エタ
ノール（１００ｍｌ）中臭化４‘−ブロモフェナシル（２０．０ｇ）を加え、混
合物を攪拌し、還流下１８時間煮沸した。混合物を冷却し、１０％ 塩酸（１５
０ｍｌ）で酸性にした。固体を収集し、直接次の実験に用いた。

【０２６４】 ｂ）ａ）の生成物（１８．０ｇ）を攪拌し、４Å分子ふるいを含むＳｏｘｈｌ
ｅｔ抽出器シンブルを装着したフラスコでエタノール（１５０ｍｌ）中還流下煮
沸した。氷酢酸１滴、続いてヒドラジン水和物（３．９ｍｌ）を加え、混合物を
煮沸し、還流下６４時間攪拌した。混合物を冷却し、沈殿物を収集し、次の実験
に直接使用した。

【０２６５】 ｃ）ｂ）の生成物（４．０ｇ）をテトラヒドロフラン（２００ｍｌ）に溶解し
、窒素下０℃で攪拌して、テトラヒドロフラン（１００ｍｌ）中水素化カリウム
（１．５３ｇ）の攪拌懸濁液に滴加した。添加後混合物を１５分間攪拌し、次い
で−７８℃に冷却した。ターシャリー・ブチルリチウム（１．５Ｍ ペンタン溶
液１７．０ｍｌ）を滴加し、この温度で４５分間攪拌した後ジメチルホルムアミ
ド（４．７ｍｌ）を加えた。温度を−７８℃で１時間保持し、次いで反応混合物
を緩除に周囲温度まで加温した。１Ｍ 塩酸（２００ｍｌ）を注意深く加えて混
合物を消止した。有機層を分離し、水、飽和炭酸水素塩、ブラインで洗浄し、次
いで乾燥し、濾過して蒸発させ、ワックス状の赤色固体を得、これをシリカのフ
ラッシュカラムクロマトグラフィーにより、移動層として石油エーテル（沸点２
６０〜２８０℃）中２０％ 酢酸エチルを用いて３−（４−ホルミルフェニル）
−１Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｃ］ピラゾール（融点２６１〜２６３℃
）を得た。

【０２６６】 ｄ）氷酢酸を含有する１，２−ジクロロエタン中ｃ）の生成物（１００ｍｇ）
、３−（１−イミダゾリル）プロピルアミン（５８ｍｇ）の溶液を周囲温度で１
時間攪拌した。トリアセトキシボロハイドライドナトリウム（８４ｍｇ）を加え
、混合物を周囲温度で１６時間攪拌した。さらにトリアセトキシボロハイドライ
ドナトリウム（９０ｍｇ）を加え、混合物を周囲温度で２４時間攪拌した。混合
物を攪拌飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（およそ２０ｍｌ）に注いだ。有機層を
分離し、水層をジクロロメタンで抽出した。有機層および抽出物を組み合わせ、
水で洗浄し、乾燥し、減圧下蒸発させて固体を得、これをエタノール（１５ｍｌ
）に溶解し、濃塩酸２滴を加えた。減圧下溶液を濃縮し、固体を得、これをジエ
チルエーテルで粉砕し、濾過して乾燥し、４−（１Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３
，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ−［３−（イミダゾール−１−イル）プ
ロピル］ベンジルアミン・トリハイドロクロライド（融点２０６〜２０８℃で分
解）を得た。

【０２６７】 実施例１５ この実施例は３−（４−ホルミルフェニル）−１Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３
，２−ｃ］ピラゾールを２−モルフォリノエチルアミンと反応させることにより
、実施例１４に類似の方法で調製し、４−（１Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２
−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ−（２−モルフォリノエチル）ベンジルアミ
ン・トリハイドロクロライド（融点２７０〜２７２℃）を得た。

【０２６８】 実施例Ａ 本発明の化合物を医薬用組成物の製造における使用を以下の記載により説明す
る。この記載では、「活性化合物」なる用語は本発明のいずれかの化合物を表す
が、とりわけ先行の実施例の１つの最終生成物であるいずれかの化合物を表す。

【０２６９】 ａ）カプセル カプセルの調製において、活性化合物の１０重量およびラクトースの２４０重
量を脱凝集化し、混和した。混合物を硬質ゼラチンカプセルに充填し、各カプセ
ルは活性化合物の単位用量または単位用量の一部を含有する。

【０２７０】 ｂ）錠剤 以下の成分から錠剤を調製する。

【０２７１】 重量比 活性化合物 １０ ラクトース １９０ トウモロコシデンプン ２２ ポリビニルピロリドン １０ ステアリン酸マグネシウム ３

【０２７２】 活性化合物、ラクトースおよびデンプンを脱凝集化し、混和して得られた混合
物をエタノール中ポリビニルピロリドンの溶液で顆粒化する。乾燥顆粒をステア
リン酸マグネシウムおよび残りのデンプンと混和する。次いで混合物を錠剤機で
圧縮して各々活性化合物の単位用量または単位用量の一部を含有する錠剤を得る
。

【０２７３】 ｃ）腸溶コーティング錠 前記のｂ）に記載の方法により錠剤を調製する。エタノール：ジクロロメタン
（１：１）中２０％ 酢酸フタル酸セルロースおよび３％ フタル酸ジエチルを
用いて常法により錠剤を腸溶コーティングする。

【０２７４】 ｄ）坐剤 坐剤の調製において活性化合物１００重量をトリグリセリド座剤基剤１３００
重量に組み込み、混合物を各々治療上有効量の活性成分を含有する坐剤に成形す
る。

【０２７５】 等価物 本発明をその態様に関して詳細に示し、記載したが、添付の請求の範囲により
定義される本発明の精神および範囲から逸脱することなく、形態および詳細にお
ける種々の変更をそこに加えることができることは当業者に理解されよう。当業
者は慣用される実験のみを用いて本明細書に具体的に記載した本発明の具体的な
態様に対する多くの等価物を認識し、または確認することができる。このような
等価物は請求の範囲の範囲内に包含されると考えられる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 1/04 Ａ６１Ｐ 1/04 3/10 3/10 7/10 7/10 9/00 9/00 9/10 9/10 9/14 9/14 11/00 11/00 15/18 15/18 17/02 17/02 17/06 17/06 19/00 19/00 19/02 19/02 27/02 27/02 27/06 27/06 29/00 29/00 31/04 31/04 35/00 35/00 37/08 37/08 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｄ 401/12 Ｃ０７Ｄ 401/12 403/04 403/04 403/12 403/12 495/04 １０３ 495/04 １０３ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＢＧ，Ｂ Ｒ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ ，ＪＰ，ＫＲ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＵ，ＳＧ， ＳＫ，ＴＲ，ＵＡ，ＵＳ，ＺＡ (72)発明者 ステイール，ロバート・ダブリユ イギリス国、ノツテインガム・エヌ・ジ ー・１・１ジー・エフ、ペニーフツト・ス トリート・アール・５ (72)発明者 ターナー，アリソン イギリス国、ノツテインガム・エヌ・ジ ー・１・１ジー・エフ、ペニーフツト・ス トリート・アール・５ (72)発明者 ウイルキンズ，デイビツド・ジエイ イギリス国、ノツテインガム・エヌ・ジ ー・１・１ジー・エフ、ペニーフツト・ス トリート・アール・５ (72)発明者 アーノルド，リー・デイー アメリカ合衆国、マサチユーセツツ・ 01581、ウエストバラ、ラグルズ・ストリ ート・216 Ｆターム(参考） 4C063 AA01 BB01 BB09 CC26 DD12 DD25 EE01 4C071 AA01 AA07 BB01 BB05 CC02 CC21 EE13 FF04 GG05 JJ01 JJ05 LL01 4C086 AA01 AA02 AA03 BC37 BC38 CB27 GA07 GA08 GA16 MA01 MA02 MA03 MA04 MA05 NA14 ZA07 ZA33 ZA36 ZA44 ZA45 ZA51 ZA68 ZA81 ZA86 ZA89 ZA96 ZB26 ZB35 ZC20 ZC35 ZC41

Claims (30)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式Ｉ： 【化１】 の化合物および医薬上許容されるその塩；式中、 Ｌ_１は式（Ｅ）_ｓ（ＣＨ_２） _ｑ の基を表し、ここでＥはＮＲ_２４、ＯまたはＳを表し、ｓは０または１であり
   、ｑは０から６の整数であり、ｓが１である場合、ｑは少なくとも１であり、こ
   こでアルキレン鎖は１つまたはそれ以上の：１つまたはそれ以上のヒドロキシ、
   ハロまたは置換されていてもよいアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキ
   ル基；１つまたはそれ以上のヒドロキシ、ハロまたは置換されていてもよいアミ
   ノで置換されていてもよいＣ_１−６アルコキシ基；ヒドロキシ；ハロ；または置
   換されていてもよいアミノ；で置換されていてもよい； ＡはＣＯＮＨ、ＮＨＣ
   Ｏ、ＳＯ_２ＮＨ、ＮＨＳＯ_２、またはＮＲ_２５を表し； Ｌ_２は式（ＣＨ_２）_ｒの基を表し、ここでｒは０から６の整数であり、ここで
   アルキレン鎖は１つまたはそれ以上の：１つまたはそれ以上のヒドロキシ、ハロ
   または置換されていてもよいアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基
   ；１つまたはそれ以上のヒドロキシ、ハロまたは置換されていてもよいアミノで
   置換されていてもよいＣ_１−６アルコキシ基；ヒドロキシ；ハロ；または置換さ
   れていてもよいアミノ；で置換されていてもよい； Ｒ_２は１つまたはそれ以上の：ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルコキシまたは
   置換されていてもよいアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基；１つ
   またはそれ以上の：ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルコキシまたは置換されてい
   てもよいアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルコキシ基を表すか；または
   Ｒ_２はハロ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルバモイル、Ｃ_１−６アルカノイ
   ル基、（Ｃ_１−６アルコキシ）カルボニル基または置換されていてもよいアミノ
   である； ｎは０、１、２または３を表す； Ｘはａ）置換されたメチレン、ｂ）カルボニル、ｃ）酸素、ｄ）式Ｃ＝ＮＯＲ _７ の基であって、ここでＲ_７はＨまたはＣ_１−４アルキル基を表す、ｅ）式ＮＲ _８ の基であって、ここでＲ_８はＨ、置換されていてもよいＣ_１−４アルキル基、
   または置換されていてもよいフェニル、ｆ）式（ＣＨ_２）_ｎの基であって、ここ
   でｎは１、２または３である、またはｇ）式Ｓ（Ｏ）_ｐの基であって、ここでｐ
   は０、１または２である；を表す。 Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５およびＲ_６は別個にａ）Ｈ、ｂ）ハロ、ｃ）1つまたはそれ
   以上の：ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルコキシ基、ハロまたは置換されていてもよい
   アミノ基で置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基、ｄ）1つまたはそれ以上
   の：ヒドロキシ；Ｃ_１−６アルコキシ基；ハロ；または置換されていてもよいア
   ミノ基で置換されていてもよいＣ_１−６アルコキシ（ただしアルコキシ基の酸素
   が結合した炭素にこれらの基が結合していない）、ｅ）置換されていてもよいフ
   ェノキシ、ｆ）ヒドロキシ、ｇ）式ＣＯＲ_ａの基であって、ここでＲ_ａはヒドロ
   キシ、Ｃ_１−６アルコキシ基を表すか、またはＲ_ａは置換されていてもよいアミ
   ノ基を表す、ｈ）置換されていてもよいアミノ基、ｉ）Ｃ_１−６アルカノイル基
   、ｊ）ニトロ、ｋ）置換されていてもよいフェニルＣ_１−６アルキル、ｌ）置換
   されていてもよいフェニルＣ_１−６アルコキシ、ｍ）シアノ；またはｏ）各々が
   1つまたはそれ以上の：Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基またはハロ
   で置換されていてもよいフェニルで置換されていてもよいＣ_２−４アルケニル基
   またはＣ_２−４アルキニル基を表す；および １）ＡがＳＯ_２ＮＨ、またはＮＨＳＯ_２である場合、 Ｒ_１はａ）置換されていてもよいフェニル、ｂ）置換されていてもよいヘテロ
   アリール、ｃ）窒素原子を含有する５、６または７員飽和へテロ環式環であって
   、これはさらにＯ、ＳまたはＮから選択されるヘテロ原子を含有してもよく、Ｃ _１−６ アルキル基で置換されていてもよく、ここで該飽和環は炭素またはヘテロ
   原子を介して結合できる、ｄ）置換されていてもよいアミノ基またはｅ）Ｃ_{１− ６} アルコキシ基を表す； ２）ＡがＣＯＮＨ、またはＮＨＣＯである場合、 Ｒ_１はａ）ニトロまたは1つまたはそれ以上のハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１−６ア
   ルコキシまたは置換されていてもよいアミノで置換されていてもよい1つまたは
   それ以上のＣ_１−６アルコキシ基で置換されたフェニル、ｂ）置換されていても
   よいヘテロアリール、またはｃ）さらにＯ、ＳまたはＮから選択されるヘテロ原
   子を含有してもよく、Ｃ_１−６アルキル基で置換されていてもよい、窒素原子を
   含有する５、６または７員飽和へテロ環式環であって、ここで該飽和環は炭素原
   子を介して結合する、ｄ）Ｃ_１−６アルコキシ基を表す； ３）ＡがＮＲ_２５基を表し、ｑは少なくとも１である場合、 Ｒ_１はａ）置換されていてもよいフェニル、ｂ）置換されていてもよいヘテロ
   アリール、またはｃ）置換されていてもよいアミノ基を表し；並びに ４）ＡがＮＲ_２５基を表し、ｑは０であり、ｓは０である場合、 Ｒ_１は置換されていてもよいヘテロアリールを表し； Ｒ_２４およびＲ_２５は別個にＨ；1つまたはそれ以上の：ヒドロキシ、Ｃ_{１−
   ６}アルコキシ基、ハロまたは置換されていてもよいアミノ基で置換されていても
   よいＣ_１−６アルキル基；Ｃ_１−６アルカノイル基またはＣ_１−６アルキルスル
   フォニル基；を表す（ただし２個のヘテロ原子が同一のｓｐ^３混成炭素原子に結
   合しない）。
2. 【請求項２】 ＸがＣＨ_２またはＳである請求項１に記載の化合物。
3. 【請求項３】 ＸがＣＨ_２であり、ＡがＮＲ_２５である請求項１に記載の化
   合物。
4. 【請求項４】 ＸがＳであり、ＡがＮＲ_２５である請求項１に記載の化合物
   。
5. 【請求項５】 ＸがＣＨ_２であり、ＡがＨＮＳＯ_２である請求項１に記載の
   化合物。
6. 【請求項６】 ＸがＣＨ_２であり、ＡがＳＯ_２ＮＨである請求項１に記載の
   化合物。
7. 【請求項７】 ＸがＣＨ_２であり、ＡがＣＯＮＨである請求項１に記載の化
   合物。
8. 【請求項８】 ＸがＣＨ_２であり、ＡがＨＮＣＯである請求項１に記載の化
   合物。
9. 【請求項９】 ＸがＣＨ_２であり、ＡがＮＲ_２５であり、Ｌ_１が（ＣＨ_２） _ｑ （ここでｑは１〜６の整数である）であり、アルキレン鎖は１つまたはそれ以
   上の：１つまたはそれ以上のヒドロキシ、ハロまたは置換されていてもよいアミ
   ノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基；１つまたはそれ以上のヒドロキ
   シ、ハロまたは置換されていてもよいアミノで置換されていてもよいＣ_１−６ア
   ルコキシ基；ヒドロキシ；ハロ；または置換されていてもよいアミノで置換され
   ていてもよく；Ｌ_２は結合であり、Ｒ_１は置換されていてもよいピリジルである
   、請求項１に記載の化合物。
10. 【請求項１０】 ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾー
    ル）−Ｎ−（４−ピリジル）ベンジルアミン Ｎ−［４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル
    ）フェニル］ベンゼンスルホンアミド ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
    −（２−メトキシエチル）ベンズアミド ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
    −（４−ニトロフェニル）ベンズアミド ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）イミ
    ダゾール−１−イルアセトアニリド ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
    −［２−（イミダゾール−１−イル）エチル］アニリン ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
    −（２−モルフォリノエチル）ベンゼンスルホンアミド ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
    −（２−メトキシエチル）ベンゼンスルホンアミド Ｎ−［２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル］−４−（１，４−ジヒドロイ
    ンデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）ベンジルアミン Ｎ−［２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル］−４−（１，４−ジヒドロイ
    ンデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）ベンゼンスルホンアミド ４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
    −（２−モルフォリノエチル）ベンジルアミン Ｎ−（４−エトキシフェニル）−４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−
    ｃ］ピラゾール−３−イル）ベンジルアミン （Ｓ）−４−（１，４−ジヒドロインデノ［１，２−ｃ］ピラゾール−３−イ
    ル）−Ｎ−（ピロリジン−２−イルメチル）ベンズアミド ４−（１Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
    −［３−（イミダゾール−１−イル）プロピル］ベンジルアミン ４−（１Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｃ］ピラゾール−３−イル）−Ｎ
    −（２−モルフォリノエチル）ベンジルアミン から選択される化合物であり、個々の鏡像異性体および鏡像異性体の混合物を
    含む、医薬上許容される塩。
11. 【請求項１１】 請求項１で定義される式Ｉの化合物を医薬上許容される希
    釈剤または担体と組み合わせて含んでなる医薬用組成物。
12. 【請求項１２】 医薬品として使用するための請求項１で定義される式Ｉの
    化合物。
13. 【請求項１３】 タンパク質キナーゼ活性を阻害するための医薬品として使
    用するための請求項１で定義される式Ｉの化合物。
14. 【請求項１４】 タンパク質キナーゼ活性の阻害に使用される医薬品の製造
    における、請求項１で定義される式Ｉの化合物の使用。
15. 【請求項１５】 タンパク質キナーゼの酵素活性を阻害するのに十分な濃度
    の式Ｉの化合物を該キナーゼに投与することからなるタンパク質キナーゼ活性を
    阻害する方法。
16. 【請求項１６】 該タンパク質キナーゼがチロシンキナーゼである請求項１
    ５に記載の方法。
17. 【請求項１７】 該チロシンキナーゼがレセプターチロシンキナーゼかまた
    は非レセプターチロシンキナーゼのいずれかである請求項１６に記載の方法。
18. 【請求項１８】 該チロシンキナーゼがＫＤＲ、ｆｌｔ−１、ＴＩＥ−２、
    Ｌｃｋ、Ｓｒｃ、ｆｙｎおよびｙｅｓから選択される請求項１７に記載の方法。
19. 【請求項１９】 該チロシンキナーゼの活性が血管形成に影響する請求項１
    ５に記載の方法。
20. 【請求項２０】 該チロシンキナーゼの阻害が抗血管形成性である請求項１
    ９に記載の方法。
21. 【請求項２１】 該チロシンキナーゼの阻害が癌、関節炎、アテローム性動
    脈硬化症、乾癬、血管腫、心筋血管形成、冠動脈および脳側枝脈管形成、虚血性
    四肢血管形成、角膜疾患、ルベオーシス、新生血管緑内障、黄班変性、創傷の治
    癒、消化性潰瘍ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）関連疾患、骨折、
    糖尿病性網膜症およびネコ引っ掻き熱から選択される病態の進行を阻止する請求
    項２０に記載の方法。
22. 【請求項２２】 該チロシンキナーゼの活性が脈管過透過性または浮腫の生
    成に影響する請求項１６に記載の方法。
23. 【請求項２３】 該チロシンキナーゼの阻害が抗浮腫性である請求項２２に
    記載の方法。
24. 【請求項２４】 該チロシンキナーゼの阻害が熱傷、慢性肺疾患、発作、ポ
    リープ、アレルギー性炎症、乾癬、黄班変性、糖尿病性網膜症、卵巣過剰刺激症
    候群、および脳腫瘍関連脳浮腫から選択される病態の進行を阻止する請求項２３
    に記載の方法。
25. 【請求項２５】 該チロシンキナーゼの阻害が抗腫瘍効果を有する請求項１
    ６に記載の方法。
26. 【請求項２６】 該チロシン活性の阻害が抗受精能または堕胎効果に関連す
    る請求項１６に記載の方法。
27. 【請求項２７】 該タンパク質キナーゼがセリンキナーゼである請求項１５
    に記載の方法。
28. 【請求項２８】 該タンパク質キナーゼがスレオニンキナーゼである請求項
    １５に記載の方法。
29. 【請求項２９】 該チロシンキナーゼがＫＤＲである請求項１６に記載の方
    法。
30. 【請求項３０】 本明細書に記載する手順。