JP2002536969A - 四価抗体の製造 - Google Patents

四価抗体の製造

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ハンナ、ナビル
ハリハラン、カンダサミイ
ラバール、マイケル、ジェイ
フイン、トリ、ビー
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アイデック ファーマスーティカルズ コーポレイション
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、医薬品組成物に使用する生物学的活性抗体二量体の新規調製方法に関するものである。当該二量体は、同じ抗原結合特異性を持つ２個の抗体分子でこれを構成することができ、還元可能なジスルフィド結合，又は還元不能なチオエーテル結合により結合させることができる（ホモ二量体）。或いは、当該二量体は、２つの異なる抗原に対する結合特異性を持つ２個の異なる抗体分子で構成することもできる（ヘテロ二量体）。これらの二量体は、膜抗原の高架橋誘発に使用することができる。さらに本発明は、癌及び自己免疫不全などの病気を治療する場合、生物学的に活性な抗体二量体を、選ばれた細胞集団の優先的殺滅又は生育抑制に使用する方法に関するものである。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の分野） 本発明は、一般に生物活性抗体二量体及びこのような二量体を含有する医薬品
として使用可能な組成物の新規調製方法に関するものである。これらの二量体は
、同じ抗原結合特異性を有し、還元可能なジスルフィド又は還元不能なチオエー
テル結合により結合する２個の抗体分子でこれを構成することもでき（ホモ二量
体）、或いは異なる抗原に対して結合特異性を有する２個の異なる抗体分子でこ
れを構成することもできる（ヘテロ二量体）。本主題の抗体二量体は、膜抗原に
高架橋を誘導する目的でこれを使用することができる。本発明は、さらに、癌及
び自己免疫不全などの病気の治療において、選ばれた細胞集団を優先的に殺し又
は優先的に抑制するために、生物活性抗体二量体を使用する方法に関するもので
ある。
【０００２】 （発明の背景） かつては、健康な組織をそのままにして悪性組織のみを標的としてこれに殺滅
剤を送り込むには、モノクローナル抗体の使用が理想的な方法であると考えられ
たこともあった。しかし、当該殺滅剤はこれをモノクローナル抗体に共役結合さ
せる必要があったために、この方法には臨床的な限界があった。従って、このよ
うな限界を緩和するするために二特異性抗体が開発された。当該二特異性抗体は
、二価であり続け、当該抗体の１本のアームは標的細胞に対して特異性を示し、
もう１本のアームは殺滅剤に対して特異性を示す抗体である。当該殺滅剤は毒素
，医薬，キレート化放射性同位元素，或いは特に細胞毒性を有するエフェクター
細胞であることが可能である。
【０００３】 モノクローナル抗体は、又特定細胞，例えば悪性組織に対して、抗体重鎖のＦ
ｃタンパク質と免疫系の他成分，例えば相補カスケードとの相互作用に基づき、
或いはＦｃγ受容体又は種々の細胞毒性エフェクター細胞種に結合することによ
り、治療活性を示すことも可能である。
【０００４】 細胞を殺す他の手段としては、膜抗体の架橋を誘発させる方法がある。前に実
施した研究によれば、膜Ｂ細胞標識を抗体架橋すると悪性Ｂ細胞の増殖を抑制す
ることができ（例えば表面ＩｇＭ; Valentineら, Eur. J. Immunol. 22: 3141 (
1992); 及びMHC クラスII, Newellら, PNAS 90: 10459 (1993)）、多くの場合生
体外においてアポトーシス（例えばプログラム化細胞死）を誘発させることがで
きる。
【０００５】 Shanら（Blood 91, 1644-1653）は、ヤギの抗マウスＩｇＧで架橋させたネズ
ミのＩＦ５抗体を使用してＣＤ２０抗原を高架橋すると、幾つかのヒトＢリンパ
腫細胞系の生育が生体外で抑制されることを証明した。ＣＤ１９及びＣＤ２２に
ついても、膜結合ＭＡｂの架橋を抗マウスＩｇＧで増幅することにより、これと
類似の結果が得られることが報告されている（Chaouchiら, J. Immunol. 154: 3
096 (1995)）。
【０００６】 これら表面膜標識の高架橋が、Ｃ２Ｂ８（ＣＤ２０に対して特異性を有するキ
メラ性モノクローナル抗体）のように、ＭＡｂの既存抗腫瘍活性を増大し、治療
効果を強めることも可能であろう。従って、医薬品に使用し得る形式で細胞死を
誘発し得る分子は、新形成病を免疫治療するための魅力ある治療剤を提供できる
可能性がある。
【０００７】 明らかにこの目標を念頭に置いて、Wolffら（Cancer Res. 53: 2560-2565 (19
93)）及びGhetie（PNAS 94: 7509-7514 (1997)）は、癌腫関連表面抗原（ＢＲ９
６及びＨＥＲ−２）に対して、幾つかのＩｇＧ又はＩｇＧホモ二量体の化学合成
法について報告を行った。Ghetieの二量体は、幾つかのヒトＢ細胞標識（ＣＤ２
０，ＣＤ１９，ＣＤ２１，ＣＤ２２）に対する抗体も含んでいた。この方法では
、反応性チオールを抗体上に導入できるように設計されたリンカーを使用して分
子の一部を機能化し、他のＡｂ部分にはマレイミド基を導入するリンカーを使用
した。未反応リンカーから精製して混合すると、当該２種類の抗体は、２個のＩ
ｇＧ分子を結ぶチオエーテル（還元不能）架橋を形成し、300 kDaの四価抗体（
Ｃ2Ｈ2）2g分子を形成することにより錯体を生成する。
【０００８】 しかし不幸にして、300 kDa ＩｇＧホモ二量体の収率は非常に低く、20−30％
の範囲内であった（Ghetieら, PNAS 94: 7509-7514 (1997)）。精製ホモ二量体
のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを還元したところ、チオエーテル結合により結合して得
られた二量体の量はほんの僅かであることが分かった。即ち、この方法で得られ
る二量体の大部分が始めから存在したか、或いはジスルフィド架橋により生じた
ものであることが明らかになった。それにも拘わらず、Ｂ細胞標識ＣＤ１９，Ｃ
Ｄ２０，ＣＤ２１，ＣＤ２２を指向した抗癌腫（Ｈｅｒ−２）二量体だけがアポ
トーシス性を有し、ホモ二量体にはその性質が認められなかったが、精製二量体
の全てが生育抑制効果を示すことが分かった。さらに、抗ＣＤ１９ホモ二量体を
動物モデルで試験し、抗腫瘍活性を有することが分かった。しかし、当分野にお
いては、ホモ二量体，特に例えば増殖中の悪性Ｂ細胞集団中においてアポトーシ
スを開始できるホモ二量体又はヘテロ二量体を製造するためのさらに効率の良い
方法が必要である。
【０００９】 本発明においては、２個のモノクローナル抗体を使用した。即ち、ＣＤ２０（
Ｃ２Ｂ８）に対して特異性を有するマウス又はヒトのキメラ抗体，及びＣＤ２３
（ｐ５Ｅ８）に対して特異性を有するPrimatized（登録商標）抗体である。低グ
レード及び攻撃型Ｂ細胞リンパ腫は、Ｂ細胞抗原ＣＤ２０及びＣＤ２３を発現す
る。ＣＤ２０は、細胞内信号，Ｂ細胞の分化，及びカルシウム チャンネルの易
動化に関連する非グリコシル化35 kDa Ｂ細胞膜タンパク質である（Clarkら, Ad
v. Cancer Res. 52: 81-149 (1989); Tedderら, Immunol. Today 15: 450-54 (1
994)）。当該抗原は、ヒトＢ細胞系の初期標識として現れ、種々の抗原密度で同
時に正常及び悪性Ｂ細胞上の至る所に発現する。しかし、当該抗原は幹細胞又は
前Ｂ細胞集団，及び完全成熟血漿細胞上には存在しないので、抗体仲介治療のた
めの良い標的となっている。ＣＤ２３は、ＩｇＥに対する低親和性受容体である
。ＣＤ２３に対する抗体が、アレルギー性及び炎症性反応の治療に使用できるこ
とが示唆されている。事実、IDEC Pharmaceuticals, Inc.（本特許の被許諾者）
は、ＩｇＧ１アイソタイプの抗ＣＤ２３抗体を治療用途に使用する特許を現在出
願中である。ここで重要なのは、ＣＤ２３がＢ細胞，特にＢ細胞リンパ腫細胞上
に発現することである。
【００１０】 表面膜上に発現するＣＤ２０抗体分画はほんの少量でも、ＭＡｂの細胞外ドメ
インへの結合におけるＢ細胞機能の促進又は抑制活性は種々に変化した。例えば
、抗ＣＤ２０ ＭＡｂ（ＩＦＳ）は、最初は休息（G0）Ｂ細胞を活性化して（G1/
S/G2）増殖集団とすることが認められた（Clarkら, PNAS, USA 82: 1766-70 (19
85)）。さらに、Holderら（Eur. J. Immunol. 25: 3160-64 (1995）は、ＣＤ２
０表面抗原のＭＡｂ ＩＦ５架橋が、生体外において、増殖中の扁桃(tonsular)
Ｂ細胞を現在進行中のアポトーシス（プログラム化細胞死）から保護することを
示した。これとは対照的に、ＩＦ５とは異なるエピトープに結合する抗ＣＤ２０
抗体 Ｂ１（Tedderら, Immunol. Today 15: 450 (1994）は、休息Ｂ細胞集団と
は異なる挙動を示した（Tedderら, Eur. J. Immunol. 16: 881 (1986)）。
【００１１】 正常Ｂ細胞集団を使用た活性の間には差が認められるにも拘わらず、ネズミ抗
ＣＤ２０ ＭＡｂ（例えばＩＦ５，Ｂ１，Ｂ２０及び２Ｈ７）は、生体外におい
て増殖中のヒト（ＣＤ２０＋）リンパ腫細胞系の生育抑制に対して何の影響も与
えなかった。しかし、生体内においては、ひとリンパ腫マウス異種移植片モデル
を使用した腫瘍育成試験では、腫瘍育成に対して抑制効果が認められた（Press
ら, Blood 69: 584-591 (1987); Shanら, Blood 91: 1644-1653 (1998); Funako
shiら, J. Immunol. 19: 93-101 (1996); Hooijbergら, Cancer Res. 55: 840-8
46, (1995); 及びGhetieら, PNAS 94: 7509-7514, (1997）)。抗腫瘍活性の仲介
機構については未解明であるが、補体依存細胞殺滅（ＣＤＣ）又は抗体依存細胞
殺滅（ＡＤＣＣ）機構により仲介が行われているものと考えられる。これら両機
構とも、ＣＤ２０が結合した後におけるＭＡｂのＦｃ部分による宿主細胞機構の
活性化に依存する。事実、Funakoshiら（J. Immunol. 19: 93-101 (1996)）は、
生体内においてＦｃ受容体をＦ(ａｂ)2抗体でブロックした場合、２Ｈ７の抗腫
瘍活性がブロックされることを示している。
【００１２】 本発明で使用するキメラ性ＭＡｂ（Ｃ２Ｂ８）は、ヒトＢ細胞リンパ腫の治療
を行うために、IDEC Pharmaceutical Corporationで開発された（Reffら, Blood
83: 4350445, (1994)）。Ｃ２Ｂ８は、ネズミ抗体２Ｂ８に源を発し、チャイニ
ーゼ ハムスターの卵巣細胞にクローン化し、150 kDa ＩｇＧ単量体としてこれ
を発現させたものである。ＭＡｂ Ｃ２Ｂ８はヒトγ１重鎖及びヒトκ軽鎖定常
領域にカップリングした２Ｂ８ネズミ可変領域を維持している。そのネズミにお
ける対応型同様、Ｃ２Ｂ８に生育抑制力は認められず、生体外においてヒトリン
パ腫細胞系のアポトーシスを誘発することは無い。しかし、生体内でネズミ異種
移植片動物モデルを使用して試験を行った場合においては、明確な抗腫瘍活性を
示す。
【００１３】 キメラ性Ｃ２Ｂ８は、高能率でヒトの補体に結合して強いＦｃＲ結合を示し、
補体依存（ＣＤＣ）及び抗体依存（ＡＤＣＣ）の両機構により、生体外において
高能率でヒトのリンパ球を殺すことができる（Reffら, Blood 83: 435-445 (199
4)）。Ｃ２Ｂ８は、ヒトに関するフェーズＩ及びIIの臨床試験におけるＢ細胞の
枯渇に対しても強い効力を示した。しかし、それにも拘わらず、多くの関連副作
用融合に対しては安全であり、有効であることが明らかになった（Maloneyら, B
lood 84: 2457-2466 (1994); 及びMaloneyら, JCO 15 (10): 3266 (1997)）。
【００１４】 当該抗体は、低グレード濾胞性リンパ腫の患者において、48％の総括反応速度
を示した（McLaughlinら; JCO, 印刷中）。しかし、化学療法抵抗性を有する患
者においては当該反応速度が劇的に（34％）低下した。即ち、化学療法抵抗性を
有する患者は、最終化学療法に対して反応しなかった（McLaughlinら, Proc. Am
. Soc. Clin. Oncol. 16: 16a [抄録 #55] (1997）。さらに、タイプＡ組織性白
血病又は慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を持つ患者においては、当該抗体の活
性が低かった。従って、抗体免疫治療の有効性，特にＣ２Ｂ８又はＣＤ２３抗体
を使用する抗体免疫治療の有効性を高める必要性は、ヒト白血病及びリンパ腫患
者の治療において、高度の優先度を維持している。本明細書記載の方法で例示す
る抗ＣＤ２３抗体は、ＩＤＥＣにより開発された、ＩｇＧ１アイソタイプのプリ
マタイズ化（primatized） ＣＤ２３抗体である。
【００１５】 （発明の目的） 上記の説明に基づき、本発明の目的は、抗体治療に使用する新規治療薬，特に
抗体二量体を提供することにある。
【００１６】 さらに詳細に述べれば、ＣＤ２３又はＣＤ２０抗原或いはこれら両者に対して
特異性を有する新規抗体二量体を提供することが、本発明の目的である。
【００１７】 さらに詳細に述べれば、安定な抗体二量体，特にＩｇＧ又はＩｇＧホモ二量体
の高能率製造方法を提供することが、本発明の目的である。
【００１８】 抗体二量体の投与で構成される新規治療法を提供することが、本発明のもう一
つの目的である。
【００１９】 抗体二量体投与による癌，並びに自己免疫又はアレルギー性不全の新規治療方
法を提供することが、本発明のさらに他の目的である。
【００２０】 抗体二量体を含む治療用新規組成物，特に癌，アレルギー性不全，自己免疫不
全を治療するための新規組成物を提供することが、本発明のもう一つの目的であ
る。
【００２１】 （好ましい態様の詳細な説明） 本発明に係わる分野に精通した人なら、下記の説明により、本発明を利用し，
これを使用し，本発明者らがその発明を実施する上で考える最善の方法を編み出
すことができるであろう。
【００２２】 既に述べたように、本発明は一般に生物学的に活性な抗体二量体，及び当該抗
体二量体を含む医薬品組成物の調製方法に関するものである。本発明は、さらに
生物学的に活性な抗体二量体を、癌及び自己免疫不全などの病気の治療において
、選ばれた細胞集団を優先的に殺滅又は抑制するために使用する方法に関するも
のである。
【００２３】 前に化学的架橋剤を使用して、天然のモノクローナル抗体からホモ二量体を化
学的に発生させ、２個のＩｇＧ抗体の間にチオエーテル結合を導入したことが報
告されている（Ghetie, PNAS 94: 7509-7514 (1997)）。当該二量体は化学的に
機能を付与された抗体を使用して形成されているので、当該チオエーテル結合を
何処に導入するかを人為的に制御することはできない。その結果、Ghetieのこの
方法では、ホモ二量体が低収量でしか得られず、その結果天然のジスルフィド結
合ホモ二量体と化学的に発生したチオエーテル結合のホモ二量体の混合物しか得
られなかった。
【００２４】 ＩｇＧホモ二量体の収量を向上させ、化学純度の当該二量体を得る方法が必要
であったために、本出願者らは本発明の方法を開発する研究を開始した。本発明
は、一般に遺伝子工学的に当該抗体のＦｃアーム上の特定部位に導入したシステ
イン残基を有するモノクローナル抗体を使用し、反応性チオール基を化学的に導
入する必要性を取り除いたところが、Ghetieの方法と異なっている。
【００２５】 本発明の方法によれば、ホモ二量体の生成量は出発原料の40−50％にまで高ま
り、ジスルフィド又はチオエーテル結合抗体ホモ二量体，好ましくはＩｇＧ又は
ＩｇＧホモ二量体を調製するために本発明の方法を適用することができる。
【００２６】 さらに、本チオエーテル結合ホモ二量体の調製は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（還元）
ゲル法で測定した結果、Ghetieの方法と比較して高い効率が得られた。本方法に
おけるチオエーテル結合ホモ二量体の収率及び効率が高いために、Ghetieの方法
とは異なり、抗体の各アームが異なる抗原を指向する抗体ヘテロ二量体（好まし
くはＩｇＧ又はＩｇＧヘテロ二量体）の調製にも、本方法を使用することが可能
である。
【００２７】 又驚くべきことに、ＭＡｂ ２Ｈ７を使用するGhetieの抗ＣＤ２０二量体と比
較した場合、本発明の方法を使用するＣ２Ｂ８二量体（ホモ二量体及びヘテロ二
量体）が、増殖中の悪性Ｂ細胞集団中でアポトーシスの開始能力を有することは
意外であった。さらに重要なことは、Ghetieの方法で調製した二量体に比して、
培養液中のリンパ腫細胞に対してこれらの二量体がその能力において200倍もの
強力な生育抑制効果を示したことである。ホモ二量体（ジスルフィド結合による
）についても動物を使って評価したが、当該ホモ二量体も親分子のＣ２Ｂ８に比
して良好な治療活性を有することが明らかになった。
【００２８】 本発明で使用するモノクローナル抗体は、どんなモノクローナル抗体であって
も良く、特にＩｇＧに限定する必要は無い。さらに、どんな哺乳類宿主に由来す
るものであっても良い。例の中ではシステイン重鎖の位置444に遺伝子工学的な
修飾を加えたが、システインの位置はこの位置には限定されない。本発明はシス
テインを他の部位に導入する方法もこれを包含するものである。事実、当該抗体
上の他の部位の方が、システインの導入には適している可能性もある。この点に
関して、（１本のアーム上にある）システインの分子は隣接重鎖上のシステイン
に距離的に近いので、鎖内にジスルフィド結合が形成されてしまう可能性があり
、位置444へのシステイン導入は好ましくない可能性もある。従って、システイ
ンは他の部位，例えばシステイン分子同士が物理的に隔離されたドメインの外部
ループ上に置く方が好ましいであろう。こうすることにより、鎖内ジスルフィド
結合が形成される可能性が除かれ、又はこれを最低限に抑えることが可能であろ
う。
【００２９】 抗ＣＤ２０抗体の２Ｂ８に関して特に考えられる代替配置としては、セリン残
基を位置416に，グルタミン残基を位置420に，又はグリシン残基を位置421に移
す３つの方法がある。これらの部位は、二量体の形成量は高めたいけれども抗体
の親和性及びエフェクター機能はできるだけ維持したいという事実を意識して選
んだものである。又、他の部位においても有効な二量体形成が可能であることが
予想される。
【００３０】 システインのチオールがチオールとの反応性を有する他の抗体上に存在する基
と（ジスルフィド又はチオエーテル結合により）自由に結合できるように、鎖内
ジスルフィド結合はこれを除去することが望ましい。これらの反応には、システ
インのチオールをマレイミドでアルキル化する反応，隣接する２個のチオール基
をジスルフィド結合に酸化する反応，又はジスルフィド鎖内結合によりピリジル
基保護ジスルフィドと反応させる反応などがある。
【００３１】 当分野に精通した人であれば、種々の分子生物学的手法（部位指向突然変異生
成，ＰＣＲ突然変異生成，ランダム突然変異生成，制限フラグメントのサブクロ
ーン化，ＤＮＡ合成などを含むがこれらに限定はされない）を使用して、システ
インを適切な部位に挿入して抗体分子を得ることができる。下記の例においては
、部位指向突然変異生成法を使用した。従って組換え抗体の製造は、一般に抗体
の重鎖を適切な宿主細胞にコード化するような組換え遺伝子，及び適切な抗体軽
鎖をコード化するような組換え遺伝子の導入を含んでいる。トランスフェクトさ
れた細胞は、生体外でも生体内でもこれを生育することができる。
【００３２】 上記の通り、遺伝子工学的に修飾したシステインを重鎖の位置444に置いたた
めに、鎖内ジスルフィドが形成される結果となった。従って、二量体化を進行さ
せるためには、当該分子を部分還元してから二量体化させなければならない。導
入システインの配置を変えれば、この操作は不要になることが予想される。しか
し、これらの遺伝子操作分子にあっては、遺伝子操作抗体分子上の隣接システイ
ン分子間に形成されたジスルフィド（Ｓ−Ｓ）結合を、遊離チオールに還元しな
ければならない。本出願者らは、特定チオールを選択的に暴露するために、当該
抗体分子をジチオスレイトール（ＤＴＴ）で部分還元する方法を選んだ。37 ℃
で部分還元を行うには、１−３モルの範囲の過剰還元剤濃度が必要である。
【００３３】 しかし、これらの反応条件には修飾を加えることができる。例えば、当該反応
をこれより低い温度，或いはメルカプトアミン又はメルカプトエタノールなど他
の還元剤を使用して行わせることもできる。これらの反応条件は、これより過剰
モル濃度を高くして行わせる必要があるかも知れない。これらの条件変更は、当
分野に精通した人が日常的な実験を行うことにより、容易にこれを決定すること
ができる。ここで使用した限定条件下においては、これらの試薬は最も接近し易
いシステインを最初に還元するであろう。従って、遺伝子操作を行ったシステイ
ン分子はこれを正しい位置に置き、容易に還元できる状態に置くことが重要であ
る。こうすることにより、遺伝子操作したシステインが、他の抗体分子上に存在
するシステイン又は他のチオール反応基と結合を形成する可能性が増大する。さ
らに、導入されたシステインは、ＧｃγＲ結合又は補体の活性化を妨害しないよ
うに、重鎖上の正しい位置にこれを置かなければならない。その位置は、試行錯
誤実験を行うことによりこれを決定することができる。
【００３４】 本発明の方法により、ジスルフィド結合による二量体又はチオエーテル結合に
よる二量体を製造することができる。ジスルフィド結合の場合には、当該結合は
システイン上のチオール基の間で自然に形成される。チオエーテル結合に場合に
は、（チオール反応性を有する）マレイミド架橋剤を抗体に付加し、当該架橋剤
が２個の抗体分子の間で架橋を形成する。本発明に使用できるマレイミド架橋剤
は、その多くの種類が市販されている。これらの架橋剤が一方でチオール基に結
合し、他方で抗体上に元々存在する種々の分子（例えば、リシン，カルボキシル
基など）に結合する。このようにして、その特定位置にシステイン分子を含むよ
うに修飾された抗体と，他の未修飾抗体との間で二量体を形成させることができ
る。選択的に還元されたＭＡｂをＰＤ−１０カラムを使用して精製し、酸素を除
き、クエン酸ナトリウム（10 mM）及びＥＤＴＡ（１ mM）を添加した通常の生理
食塩水と平衡させるなど，特殊な条件を使用することにより、ジスルフィド結合
によるホモ二量体の形成を抑えることができ、従ってチオエーテル結合による二
量体のみを確実に形成させることができる。
【００３５】 Ghetieの方法では化学的に誘発された二量体だけでなく天然に存在した二量体
も一緒に得られた。本発明の方法では、それと異なり、仮に存在したとしても極
く少量の天然二量体しか得られず、高収率で所望の二量体を製造することができ
る。本発明により製造される二量体は、さらに驚くべきことに、慢性リンパ球白
血病（ＣＬＬ）患者から採取したＢ細胞のアポトーシス活性をも高めることがで
きた。抗体二量体を使用した場合、Ｂ細胞リンパ腫細胞だけが補体活性化を引き
出すために充分なＣＤ２０を発現するものと考えられたことも前にはあった。Ｃ
ＬＬ Ｂ細胞は低濃度のＣＤ２０を発現したが、補体が仲介するＣＬＬ Ｂ細胞の
殺滅を活性化しようという前の試みは不成功に終わった。従って、本発明の方法
により造られた二量体がＣＬＬ患者由来のＢ細胞に対してアポトーシス誘発能力
を示したことは、驚くべき事実である。
【００３６】 本発明の方法により造られた抗ＣＤ２３抗体は、下記を含む症状の治療にこれ
を使用することができる。
【００３７】 アレルギー性気管支肺アスペルギルス症，アレルギー性鼻炎自己免疫溶血性貧
血，黒色表皮症，アレルギー性接触皮膚炎，アジソン病，アトピー性皮膚炎，円
形脱毛症，全身脱毛症，アミロイドーシス，過敏症様紫斑病，アナフィーラクト
イド反応，無形成貧血，遺伝性血管性水腫，特発性血管性水腫，強直化脊椎炎，
頭蓋動脈炎，巨細胞動脈炎，高安動脈炎，一時的動脈炎，喘息，毛細血管拡張性
運動失調，自己免疫性卵巣炎，自己免疫性睾丸炎，自己免疫性ポリ内分泌不全，
ベーチェット病，ベルガー病，ブエルガー病，気管支炎，水疱性天疱瘡，慢性粘
膜皮膚カンジダ症，カプラン症候群，心筋梗塞後症候群，心膜切開後症候群，心
臓炎，腹腔スプルー，シャガス病，シェディアック−東症候群，シュルグ−シュ
トラウス病，コーガン症候群，寒冷凝集素病，クレスト症候群，クローン病，ク
リオグロブリン血症，原因不明線維形成肺胞炎，疱疹状皮膚炎，皮膚筋炎，糖尿
病，ダイアモンド−ブラックファン症候群，ディゲオルゲ症候群，円板状エリテ
マトーデス，好酸球性筋膜炎，上強膜炎，持久性隆起性紅斑，有縁性紅斑，多形
性紅斑，結節性紅斑，家族性地中海熱，フェルティ症候群，肺線維症，アナフィ
ラキシー様糸球体腎炎，自己免疫性糸球体腎炎，連鎖球菌後糸球体腎炎，移植後
糸球体腎炎，膜性糸球体症，グッドパスチャー症候群，対宿主性移植片病，免疫
仲介性肉芽腫症，環状肉芽腫，アレルギー性肉芽腫症，肉芽腫症性筋炎，グラー
ベ病，橋本甲状腺炎，新生児溶血病，特発性ヘモクロマトーシス，ヘーノッホ−
シェーネンライン紫斑病，慢性活性及び慢性進行性肝炎，組織球症Ｘ，過好酸球
増加症候群，特発性血小板減少性紫斑症，ジョブ症候群，若年性皮膚筋炎，若年
性慢性関節リューマチ，川崎病，角膜炎，乾性角結膜炎，ランドリ−ギラン−バ
ール−シュトロール症候群，らい腫らい，レフラー症候群，狼瘡，リエル症候群
，ライム病，リンパ腫様肉芽腫症，全身肥胖細胞症，混合結合組織病，多発性単
神経炎，マックル−ウェルズ症候群，粘膜皮膚リンパ節症候群，粘膜皮膚リンパ
節症候群，多中心性網内組織球増殖症，多発性硬化症，重症筋無力症，菌状息肉
腫，全身壊死性脈管炎，ネフローゼ症候群，オーバーラップ症候群，皮下脂肪組
織炎，発作性寒冷血色素症，発作性夜間血色素症，類天疱瘡，天疱瘡，紅斑性天
疱瘡，落葉状天疱瘡，尋常天疱瘡，ハト飼育者病，過敏性肺炎，結節性多発動脈
炎，リューマチ性多発筋痛，多発性筋炎，特発性多発神経炎，ポルトガル家族性
多発性神経障害，子かん前／子かん，一次胆管硬変，進行性全身硬化症（強皮症
），乾癬，乾癬性関節炎，肺胞たんぱく症，肺線維症（レイノード現象又は症候
群），ライデル甲状腺炎，ライター症候群（再発性ポリクロンドリティス），リ
ューマチ熱，リューマチ様関節炎，サルコイドーシス，強膜炎，強膜性胆管炎，
血清病，セザリ症候群，スヨグレン症候群，スティーブンス−ジョンソン症候群
，スティル病，亜急性硬化性汎脳炎，交感性眼炎，全身狼瘡性エリテマトーサス
，移植拒否反応，潰瘍性大腸炎，未分化結合組織病，慢性じんま疹，寒冷じんま
疹，ブドウ膜炎，白斑，ウェーバ−クリスチャン病，ウェーゲナー肉芽腫症，ウ
ィスコット−アルドリッヒ症候群
【００３８】 これらの中で、抗ＣＤ２３抗体を投与することにより治療又は本抗体を提供し
得る優先的症状には、アレルギー性鼻炎，アトピー性皮膚炎，湿疹，ジョブ症候
群，喘息，及びアレルギー性症状，炎症性の病気及び症状などがある。
【００３９】 本発明の方法により造られる抗体分子は、抗体が治療に役立つような用途，例
えば哺乳類，特にヒトの癌及び自己免疫不全の治療に使用される医薬品組成物に
これを使用することができる。本発明の遺伝子操作抗体は、医薬品に使用し得る
担体ベヒクルと混合することによるなど，医薬品に使用できる組成物を調製する
ための公知の方法に従って、これを処方することができる。適切なベヒクル及び
その処方については、例えばRemington's Pharmaceutical Sciences（第16版, O
sol, A.編, Mack Easton社, PA, (1980)）の中にその記述がある。有効な投与に
適した医薬品に使用し得る組成物を形成するために、このような組成物に有効量
の抗体を単独に、又は適量の担体ベヒクル，例えば緩衝生理食塩水とともにこれ
を添加することができる。
【００４０】 本発明の治療用組成物は、その治療有効量，即ち特定症状，例えば癌又は自己
免疫性不全を治療するのに充分な量を患者に投与することができる。有効量は、
患者の体重，性別，年齢，及び医療歴に従って変化する。その他要因として、患
者の症状，投与方法などがある。一般に、当該組成物は、約0.01−約２ピコモル
/ml，さらに一般的には約0.0001−約200ピコモル/mlの範囲内でこれを投与する
。
【００４１】 医薬品として調製された組成物は、経口，鼻腔内，皮下，筋肉内，静脈内，動
脈内，腸管外投与を含む公知の方法により、これを患者に投与することができる
。
【００４２】 ここに本発明の総合的な説明を終了したので、さらに下記例により具体的な説
明を行う。但し、これらの例は説明の目的のみに使用するものであり、特に指定
された場合を除き、これにより本発明に限定を加えることは意図していない。
【００４３】 （例１） 遺伝子操作したＣ２Ｂ８／ＳＨ（ＮＴＢ＃：2012-85及び2092/64）の製造 ａ．Ｃ２Ｂ８／ＳＨ抗ＣＤ２０（バージョン１）細胞系の形成 個々のＬ2Ｈ2免疫グロブリン分子の間にジスルフィド結合を形成させることに
より、「尾−尾」二量体免疫グロブリン (Ｌ2Ｈ2)2分子を誘発できることは、Sh
opes（J. Immunol. 148 (9), 2918-2922, 1992）; 及びShopesら, WO 91/19515,
1991年12月26日）が前に報告している。Caronら（J. Exp. Med. 176: 1191-95
(1992)）も、これに似た方法を使用している。両グループは、Ｈ鎖の位置444に
あるセリン残基をシステインで置換することにより、重鎖のカルボキシル末端か
らシステインの４個のアミノ酸を人工的に導入した。
【００４４】 抗ＣＤ２０免疫グロブリンの二量体を創り出すために、本出願者らはこれと類
似の方法で、キメラ性抗ＣＤ２０抗体，Ｃ２Ｂ８の中にシステイン残基を導入し
た。ヒトκ軽鎖の定常ドメインに融合させたネズミの抗ヒトＣＤ２０軽鎖可変ド
メインのヌクレオチド，及びその予想されるアミノ酸配列を図１に示す。ヒトγ
１重鎖定常ドメインに融合させたネズミ抗ヒトＣＤ２０重鎖可変ドメインのヌク
レオチド，及びその予想アミノ酸配列を図２に示す。
【００４５】 従来のインビトロ部位指向突然変異生成法を使用することにより、本出願者ら
はプラスミドＤＮＡ中に移転移突然変異Ｃ−Ｇを行わせた（図３）。このＩＤＥ
Ｃ固有発現構造（Reffら, 米国特許出願，一連番号#08/819,866, 1997年３月14
日出願受理）は抗ＣＤ２０免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖，並びに固有ＣＨＯ細
胞系への相同的統合に必要な配列をコード化し（Reffら, 同上）、次にＧ４１８
及びメトトレキセート或いはＧ４１８又はメトトレキセートによる支配的選択が
行われる。このヌクレオチド突然変異により、当該コドンの第二塩基が変わり、
γ１重鎖のカルボキシル末端近くに存在する位置445の通常セリン残基を置換し
たシステイン残基がコード化される（図２参照）。
【００４６】 この発現構造（図３）を、元来ＣＨＯ ＤＧ−４４から誘導された，ＩＤＥＣ
のＣＨＯ細胞系指定１５Ｃ９の中へトランスフェクトした（Urlaubら, Som. Cel
l Mol. Gen. 12 (6): 555-566, 1986）。Ｇ４１８による選択後、高濃度の免疫
グロブリン製造クローン（３Ｆ９と命名）を単離した。３Ｆ９は約3.4 pg/細胞/
日の免疫グロブリンを造り出し、これを細胞生育媒体の中へ分泌する。免疫グロ
ブリンの生産性をＥＬＩＳＡアッセイにかけたところ、単量体，二量体又はオリ
ゴマーの如何を問わず、Ｌ2Ｈ2免疫グロブリン分子と判定された。ウェスタンブ
ロット分析により、分泌された免疫グロブリンの大部分は単量体（Ｌ2Ｈ2）であ
ることが明らかになった。しかし、その中の少量は二量体であり、オリゴマーの
量はそれよりも多かった。
【００４７】 次に５ nM メトトレキセート中で当該３Ｆ９細胞系を選別した。プラスミドコ
ード化ＤＨＦＲ遺伝子の遺伝子増幅（Altら, J. Biol. Chem. 253: 1357-1370 (
1978)）及び発現を人工的に誘発させるためには、メトトレキセート生育法を使
用することができる。付随的に、結合免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖遺伝子も増
幅され、その結果免疫グロブリン遺伝子の発現量が増加し、免疫グロブリンによ
るタンパク質製造量が高まる。遺伝子増幅により、我々は合計抗ＣＤ２０製造量
を有効に高めることができた。選別を行った後、3F9-50B11と呼ばれるクローン
を同定した。3F9-50B11は約6.3 pg/細胞/日の抗ＣＤ２０タンパク質を造り出す
。
【００４８】 ｂ．Ｃ２Ｂ８／ＳＨ（バージョンＩ）の精製 タンパク質Ａ（ｐＡ）カラムクロマトグラフ法を使用して、生育媒体（15 mg/
Lの12Ｌ）からＣ２Ｂ８／ＳＨを精製した。アジ化ナトリウム（最終濃度：0.01
％）を、媒体を含む当該Ｃ２Ｂ８／ＳＨ抗体に添加し、10 N ＮａＯＨでｐＨを7
.5に調節した。４−８ ℃の低温室中，約３ ml/分の速度で、ＰＢＳで洗浄した
ｐＡアフィニティーカラム（15 mlカラム，Bioprocess社製）に当該物質を加え
、少なくとも５カラム容積（100 ml）のＰＢＳで洗浄した。100 mlのクエン酸ナ
トリウム（0.1 M, ｐＨ＝3.5）を用いてｐＡカラムから抗体を溶出させ、１ Mト
リス塩基でこれを直ちにｐＨ７に中和した。Ｃ２Ｂ８／ＳＨ（ｐＡで精製）をＰ
ＢＳに対して透析（３日間に1000 ml x ４回）し、Amicon攪拌細胞濃縮器（MWCO
30,000）を使用して窒素（50 psi）下で約10 mg/mlに濃縮し、濾過（0.2 μm）
滅菌した。当該ｐＡ精製Ｃ２Ｂ８／ＳＨを４ ℃で保存した。分光分析法により
タンパク質濃度を測定した：ＭＡｂ（mg/ml)＝〔ＯＤ２８０における吸光度〕ｘ
〔希釈係数〕／1.7
【００４９】 ｃ．Ｃ２Ｂ８ホモ二量体の特性評価 抗体重鎖中に遺伝子操作チオール基を持つＣ２Ｂ８／ＳＨ ＩｇＧ（150 kDa）
は、分子間ジスルフィド結合により300 kDa ＩｇＧ／ＩｇＧホモ二量体を形成す
ることができる。分析用ＨＰＬＣ及び非還元性ＳＤＳ／ＰＡＧＥを使用して、形
成されたホモ二量体量を測定した。流量1.0 ml/分でアイソクラティカルに（iso
cratically）作動するBeckman 126 HPLC装置，並びに燐酸ナトリウム 100 mM,
塩化ナトリウム 150 mM, 及びｐＨ 6.8から成る移動相を使用して、分析用サイ
ズ排除型高性能液体クロマトグラフ法（ＳＥ−ＨＰＬＣ）を実施した。当該分離
操作は、7.8 x 300 mmのBioSil SEC 250-5カラム（Bio-Rad社カタログ番号：125
-0062）を使用し、室温で280 nmにおける吸光度を測定して実施した。Bio-Rad社
の外部ゲル濾過標準（Bio-Rad社カタログ番号：151-1901）と比較することによ
り、その分子量を推定した。
【００５０】 ＣＨＯ分泌Ｃ２Ｂ８／ＳＨの非還元性ＳＤＳ／ＰＡＧＥゲル（図５，レーン１
）は、150 kDa（ＩｇＧ）に主タンパク質バンドの存在を示している。また製剤
を幾つかＨＰＬＣ分析にかけた結果、ＭＡｂ含有生育媒体中に≦６％のＩｇＧ／
ＩｇＧホモ二量体（300 kDa）が存在することが分かった。ｐＡ精製及び濃縮を
行った後、３本の主要タンパク質バンドが観察された（図５，レーン２）。ＨＰ
ＬＣにより分子量測定を行った結果、150 kDa（80.3％），300 kDa（14.9％），
及び≧450 kDa（4.8％）の３本のタンパク質ピークが認められた。Ｃ２Ｂ８／Ｓ
ＨのｐＡ精製を何回か行って得られたＨＰＬＣの結果は、12.5−17.9％のホモ二
量体の存在を示した（図７，８）。この量は、ヘテロ二官能性架橋剤を使用して
ＩｇＧ単量体をカップリングさせたGhetieら（PNAS, USA 49: 7509-7514 (1997)
）のＭＡｂホモ二量体合成結果に対応している。
【００５１】 Ellmanら（Anal. Biochem. 94: 75-81 (1979)）の方法を用いて、二量体化後
に残存する反応性チオールの濃度（遊離ＳＨの濃度）を推定した。＞80％のＣ２
Ｂ８／ＳＨが単量体のまま残存したという観察結果にも拘わらず、検出された反
応性チオール量は非常に少なかった（＜0.2 SH基／ＭＡｂ）。この事実は、Ｉｇ
Ｇ重鎖上に遺伝子工学的に導入されたチオールが、恐らく分子間ジスルフィド架
橋によりブロックされていたことを示している。
【００５２】 （例２） （Nib #: 1966/84）：Ｃ２Ｂ８／ＳＨの選択的還元及びＣ２Ｂ８（ジスルフィド
結合）ホモ二量体の調製（図4.1） Ｃ２Ｂ８／ＳＨ調製時における二量体の生成割合を増すために、ｐＡ精製物を
２倍モル量 の濃縮した過剰ジチオスレイトール（ＤＴＴ）で部分還元し、ＰＢ
Ｓ中，通常雰囲気条件下で抗体二量体を形成させた。ＤＴＴを用いてＭＡｂを部
分還元し、アフィニティカラム用サンプルの調製（Goldenbergら, Bioconj. Che
m. 2: 275-280 (1991)）及び免疫共役サンプルの調製（Siegallら, Bioconj. Ch
em. 3:302-307 (1992); Willnerら, Bioconj. Chem. 4: 521-527 (1993)）を行
ったところ、その分子構造（150 kDa）及び抗原に対する結合能力が維持されて
いることが明らかになった。
【００５３】 ａ．Ｃ２Ｂ８／ＳＨの選択的還元 この方法では、ＩｇＧ又はＩｇＧ二量体がより効率的に構造変化できるように
、ＤＴＴを使用して分子内又は分子間ジスルフィド結合を部分還元した。ジチオ
スレイトール（DTT Pierce Product社 #20290）0.045 mgをカルシウム及びマグ
ネシウムを含まないＰＢＳ（ｐＨ＝7.4）中に溶かし、Ｎａ2-ＥＤＴＡ 3.5 mMを
含むｃｍｆＰＢＳ中のｐＡ精製ＭＡｂ Ｃ２Ｂ８／ＳＨ 21.8 mgにこの溶液を添
加して、最終比率 2.0モルＤＴＴ／ＭＡｂモルを得た。当該反応物を直ちに脱ガ
スし、これを窒素下，37 ℃で３時間インキュベートした。Sephadex G-25カラム
クロマトグラフ（PD-10カラム使用，Pharmacia Fine Chemicals社）を用いて当
該ＭＡｂを未反応物から精製し、ＰＢＳと平衡させた。メーカー指示に従って当
該ＭＡｂ含有分画を集め、平衡緩衝液（ＰＢＳ）の最終容積を3.0 mlとした。選
択還元したＣ２Ｂ８／ＳＨをさらに室温，空気中で２時間インキュベートした。
システイン 0.1 ml（100 mM）を添加して反応を停止させ、Ultrafuge（登録商標
）濃縮器を用いて30,00 MWCOで濃縮した。280 nmにおける吸光度から、タンパク
質濃度を求めた（１ mg/ml＝1.7 AU）。
【００５４】 ｂ．Ｃ２Ｂ８（-s-s-）ホモ二量体の特性評価 当該物質を４ ℃で保存し、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ法（図５，レーン４）及び分析
用ＨＰＬＣ（図７，表１）を用いて分析した。ジスルフィド結合ホモ二量体の量
は、出発原料における17.5％から選択還元−二量体化後における39.4％へと増加
していた。この方法による合成を繰り返した結果、集団における39.4％から出発
原料における51％の範囲の二量体が存在することが明らかになった。
【００５５】 調製用ＨＰＬＣを用い、300-kDa ジスルフィド（-s-s-）結合ホモ二量体を、
単量体及び高分子量集団から精製した。流量 4.0 ml/分においてアイソクラティ
クに（isocratically）作動するBeckman 126 HPLC装置（移動相：燐酸ナトリウ
ム 100 mM, 塩化ナトリウム 150 mM, ｐＨ＝6.8）を用い、調製用ＳＥ−ＨＰＬ
Ｃを実施した。分離は、21.5 x 300 mmのTosoHass TSK-Gel G3000-SWカラムに21
.5 x 75 mmのTosoHass TSK-Gel SWガードカラムを取り付け、これを用いて室温
でこれを実施した。コンピュータ画面を監視しながら手作業により、リアルタイ
ムで280 mmに吸光度を持つ微量分画を集めた。ＨＰＬＣ精製後においては、ホモ
二量体は一般に＞95％の純度を示した。
【００５６】 （例３） （Ntb #1966/78）：Ｃ２Ｂ８（チオエーテル結合）ホモ二量体の調製（図4.2） ａ．Ｃ２Ｂ８の選択的還元 ｐＡ精製Ｃ２Ｂ８／ＳＨ 5.45 mg（7.27 x 10-5 M）をｃｍｆＰＢＳ／ＥＤＴ
Ａ 0.5 ml中に溶解させ、これを２倍モル量の過剰ＤＴＴにより37 ℃で３時間か
け、例２記載の条件を用いて還元した。選択還元した当該ＭＡｂをPD-10カラム
に加え、クエン酸ナトリウム（10 mM）及びＥＤＴＡ（１ mM）を含み且つ塩酸（
生理食塩水／クエン酸塩緩衝液使用）でｐＨ＝6.3に緩衝させた脱酸素通常生理
食塩水で平衡させた。メーカー指示に従い、最初の抗体含有ピーク〔平衡緩衝液
（生理食塩水／クエン酸塩緩衝液）3.0 ml中〕を集めた。280 nmにおける吸光度
から、タンパク質濃度を測定した（１ mg/ml＝1.7 AU）。
【００５７】 Ellman試薬を用いて推定したチオール濃度（ＳＨ含有量）は、ＤＴＴ還元Ｃ２
Ｂ８／ＳＨ１モル当たりの遊離チオール量にして平均約２モルであった。ＳＤＳ
非還元ＰＡＧＥ法により、この選択還元法において分子構造が維持されることが
確認された。
【００５８】 ｂ．ホモ二量体（-s-）反応 ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ，Pierce Chemical Co., 製品番号：22319）
をＤＭＦで10 mMに希釈し、選択還元したＣ２Ｂ８／ＳＨにこれを添加し、最終
モル比を2.5モルＢＭＨ／モルＭＡｂとした。当該混合物を2.5時間，室温，Ｎ2
雰囲気中で回転させた。システイン 0.1 ml（ＰＢＳ中，100 mM）を添加して反
応を停止させ、４ ℃（通常雰囲気中）でこれを保存し、ＨＰＬＣによる分析及
び精製にこれを使用した。
【００５９】 例２記載の分析用ＨＰＬＣ法により、当該混合物を分析した。チオエーテル結
合（-s-）のＣ２Ｂ８ホモ二量体を含む分画（300 kDa）は、集めた全タンパク質
の28％を占めた（図７及び表１）。調製用ＨＰＬＣ（例２に記載）を用い、未精
製混合物から（-s-）ホモ二量体を精製した〔ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（非還元性）ゲ
ル及び分析用ＨＰＬＣによる純度：通常＞95％；結果は特に示さない〕。還元性
条件下でＳＤＳ／ＰＡＧＥを行って得た精製Ｃ２Ｂ８（-s-）ホモ二量体の分析
結果は、約22 kDa（Ｌ鎖），55 kDa（Ｈ鎖）及び110 kDa（Ｈ−Ｈ二量体）の位
置に３本の主要タンパク質バンドの存在を示した（図６，レーン７）。これに対
して、ジスルフィド結合ホモ二量体又は単量体Ａｂにおいては、22及び55 kDaの
位置に、予想通り２本のタンパク質バンドが存在した。
【００６０】 （例４） （Ntb #1266/85）：Ｃ２Ｂ８（チオエーテル結合）及びｐ５Ｅ８ヘテロ二量体の
調製（図4.3） ａ．Ｃ２Ｂ８の選択的還元 ２倍モルの過剰ＤＴＴ及び例２記載の条件を用い、精製Ｃ２Ｂ８／ＳＨ 10.9
mg〔ｃｍｆＰＢＳ（7.27 x 10-5 M）1.0 ml中〕を還元し（37 ℃, Ｎ2雰囲気,
３時間）、生理食塩水／クエン酸緩衝液で平衡させたPD-10カラムを用いて、こ
れを精製した。Ellman試薬を用いてチオールとＭＡｂのモル比を測定（例３に記
載）したところ、1.2という値が得られた。還元Ｃ２Ｂ８／ＳＨを、予めスクシ
ニミジル 4-(p-マレイミドフェニル)-ブチレート（ＳＭＰＢ，Pierce Chemical
Co., 製品番号：22315）で修飾したＭＡｂ ｐ５Ｅ８（抗ＣＤ２３）と直ちに混
合した。
【００６１】 ｂ．ＳＭＰＢ修飾ｐ５Ｅ８ ＭＡｂ ｐ５Ｅ８（ＰＢＳ中4.5 x 10-5 M）に６倍モルの過剰ＳＭＰＢ（ＤＭ
Ｆ中10 mM）を添加して、当該ＭＡｂ ｐ５Ｅ８を官能化し、当該混合物を室温で
２時間回転させた。生理食塩水／クエン酸緩衝液で平衡させたPD-10カラムを用
いて、当該ＭＡｂ分画を未反応物から精製した。分光分析法により、当該ＳＭＰ
Ｂ官能化ＭＡｂのタンパク質濃度を測定した。 ＭＡｂ（mg/ml）＝〔280 nmにおける吸光度〕ｘ〔希釈係数〕／1.5
【００６２】 ｃ．ヘテロ二量体の形成 ｐ５Ｅ８（11.37 mg）を含む1.5モル当量のＳＭＰＢを１モル当量の新しく還
元したＣ２Ｂ８／ＳＨ（8.0 mg）と室温，Ｎ2雰囲気中で１時間混合することに
より、ヘテロ二量体（抗ＣＤ２０／抗ＣＤ２３）を調製した。ヘテロ二量体を、
例２に記載した方法によりＨＰＬＣを用いて分析，精製した。図８及び表２に、
未精製及び精製ヘテロ二量体のＨＰＬＣクロマトグラムを、出発原料と比較して
示す。分析用ＨＰＬＣ（表２）並びに非還元性及び還元性ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル
図６で測定した300 kDa ヘテロ二量体の純度は＞95％であった（表２）。還元性
ＳＤＳ／ＰＡＧＥ（図６，レーン６）も、還元後において３本の主要タンパク質
バンドの存在を示し、その中には非還元性の110 kDaバンドを含んでいる。この
ことは、チオエーテル結合Ｈ−Ｈ二量体が形成する事実と一致している。
【００６３】 （例５） Ｃ２Ｂ８ホモ二量体及びＣ２Ｂ８／ｐ５Ｅ８ヘテロ二量体の結合活性 ＦＩＴＣ抗ヒトＩｇＧを使用して、間接免疫染色法により、単量体及び二量体
化抗体の種々の細胞に対する結合性を評価し、フローサイトメトリーを使用して
分析した（間接ＩＦ）。細胞（ＰＢＳ／ＦＣＳで緩衝したｃｍｆＰＢＳ／２％胎
児ウシ血清／0.1％アジ化ナトリウム 0.1 ml中, 2 x 106個の生育可能細胞を含
む）は、５回連続希釈抗体 0.1 mlを加え、氷の上で１時間インキュベートした
。ＰＢＳ洗浄液２ mlで細胞を遠心分離（200 x g）して２回洗浄し、ＦＩＴＣ共
役Ｇｏａｒ（Ｆａｂ’）2 抗ヒトＩｇＧ（Jackson Immunoresearch社製品#30869
, ＰＢＳ／ＦＣＳ緩衝液中に５ μg/ml加えたもの） 0.2 ml中に懸濁させた。氷
の上で30分間インキュベートした後、細胞を再びＰＢＳ中で洗浄し、新しく希釈
した0.5％ホルムアルデヒド 0.2 ml中に懸濁させ、キャップで蓋をし、４ ℃で
保存し、分析に使用した。フローサイトメトリー（FaCScan, Becton-Dickenson
社, カリホルニア州マウンテンビュー）により、細胞に結合した抗体量を測定し
た。
【００６４】 ａ．Ｃ２Ｂ８ホモ二量体 図９は、Ｃ２Ｂ８（ジスルフィド結合）ホモ二量体，Ｃ２Ｂ８，ＣＤ２０＋／
ＣＤ２３＋陽性細胞系上のＲＦ−２，ＳＫＷ，及びＳＢについて、ＭＡｂの結合
挙動を比較したものである。アイソタイプに見合う非結合性抗体の比較対照とし
て、ＲＦ−２を使用した。いずれの細胞系においても、Ｃ２Ｂ８の単量体及び二
量体に対して、類似の結合曲線が得られた。この事実は、ＣＤ２０抗原に対する
結合活性がほぼ等しいことを示唆している。
【００６５】 競合的結合アッセイを使用して、ＣＤ２０抗原に対するＣ２Ｂ８のホモ二量体
及び単量体の結合親和力を比較した（図１０）。最初にＳＫＷ細胞に種々の量の
５倍連続希釈ネズミ（抗ＣＤ２０）ＭＡｂ ２Ｂ８，及び0.1 ml（１ μg/ml）の
Ｃ２Ｂ８単量体又はホモ二量体を加え、これを氷の上で30分間インキュベートし
た。間接ＩＦ法（図９に記載）により、Ｃ２Ｂ８結合量を評価した。前に行った
実験から、ＦＩＴＣ抗ヒトＩｇＧがネズミ２Ｂ８抗体に対して活性を持たないこ
とが分かっている。Ｃ２Ｂ８の濃度（２Ｂ８抗体の結合に対して50％の抑制効果
を示した）は9.8 μg/mlであり、ホモ二量体の濃度は10.4 μg/mlであった。従
って、図９及び１０のデータは、300 kDa種へ二量体化しても、ＣＤ２０抗原へ
の結合親和力には著しい影響が無かったことを示している。図９に示した直接染
色法及びＦＣＭ分析の結果（チオエーテル結合のＣ２Ｂ８ホモ二量体を使用）は
、ジスルフィド結合二量体を使用して得られた結果とほぼ等しかった（データは
特に示さない）。
【００６６】 ｂ．Ｃ２Ｂ８／ｐ５Ｅ８ヘテロ二量体 ＳＫＷ（ＣＤ２０＋／ＣＤ２３＋）及びＤＨＬ４（ＣＤ２０＋／ＣＤ２３＋）
細胞上のＣ２Ｂ８／ｐ５Ｅ８ヘテロ二量体，Ｃ２Ｂ８，及びｐ５Ｅ８の結合状況
を図１１に示す。ＣＤ２３抗原陰性ＤＨＬ４細胞を含む両細胞系についても、単
量体とヘテロ二量体を比較した同様の結合曲線を得た。当該データは、ヘテロ二
量体が、抗ＣＤ２０ホモ二量体同様、ＣＤ２０抗原に対する完全官能結合を維持
していることを強く示唆している。
【００６７】 ＣＤ２３抗原に対するヘテロ二量体の結合活性を測定するために、先ずＳＫＷ
細胞（細胞数：1 x 106個，ＰＢＳ／ＦＣＳ緩衝液使用）に飽和量（10 μg/ml）
のネズミ（抗ＣＤ２０）ＭＡｂ ２ｂ８を加えてインキュベートし、次に単量体
又は二量体の抗体調製物をこれに結合させた（図１２）。ネズミ２Ｂ８は、単量
体及び二量体の結合をともに完全に抑制した。しかし、ｐ５Ｅ８又はヘテロ二量
体の結合には影響を与えなかった。これらのデータは、ヘテロ二量体が、Ｃ２Ｂ
８により二量体化した後においても、尚ＣＤ２３抗原に対する完全官能結合活性
を維持したことを示唆するものである。
【００６８】 （例６） ネズミ動物モデルにおけるＣ２Ｂ８ホモ二量体の抗腫瘍活性 ＢＡＬＢ/ｃ nu/nuマウスの体内において、組織培養液から採取したダウディ
ヒト リンパ腫の腫瘍系を確立し、ブリック腫をsc.接種することにより、これを
異種移植腫瘍として維持した。毎週１回、カリパスで直角の二方向に腫瘍の大き
さを測定した。大きさの測定結果から、下式に従って腫瘍の容積を推定した。 腫瘍の容積（mm3）＝長さｘ幅2／２
【００６９】 各実験で指定された種々のスケジュールに基づき、ＭＡｂをi.p.投与して治療
を行った。抗体をＰＢＳで希釈し、mg/マウスの単位で各マウスにi.p.投与した
。各グループに属するマウスは８匹であった。比較対照グループに対しては治療
を行わなかった。データは、比較対照グループ及び治療グループにおける腫瘍容
積の中央値として報告した。完全退行解析を行った結果、少なくとも２回の測定
（期間＞２週間）で腫瘍を検出できなかった。
【００７０】 確立されたダウディ腫瘍について試験したＣ２Ｂ８の抗腫瘍活性を、図１３及
び１４に示した。図１３は、低投与量（200 μg/マウス）におけるＣ２Ｂ８ホモ
二量体の抗腫瘍活性（投与スケジュール：５日毎ｘ３回注射，Ｑ5dx3）を、Ｃ２
Ｂ８単量体の投与量及び投与スケジュールを最適化（Ｑ5dx2）した場合の活性と
比較したものである。ＭＡｂ投与治療開始時の確立腫瘍の大きさは、50−150 mm 3 であった。この投与量及び投与スケジュールにおいて、Ｃ２Ｂ８ホモ二量体は
、投与量を最適化したＣ２Ｂ８と同等の腫瘍生育抑制効果を示した。65日目まで
に、Ｃ２Ｂ８ホモ二量体の投与量 200 μg x ３で治療したマウスの50％が完全
腫瘍退行を示した。1 mg x 2回の投与を行ったマウスの完全退行率は37.5％であ
った。
【００７１】 図１４は、大きさが150−250 mm3の確立腫瘍について、Ｃ２Ｂ８単量体又はホ
モ二量体200 μg/マウスに見合うスケジュール（Ｑ5dX3）で、活性を比較したも
のである。Ｃ２Ｂ８ホモ二量体で治療したマウスの腫瘍生育抑制の程度は、Ｃ２
Ｂ８単量体のほぼ等量を使用した場合より大きかった。この投与水準（0.2 mg/
マウス）において、ホモ二量体で治療したマウスの62.5％の腫瘍が完全に退行し
た。これに対して、単量体で治療したマウスで腫瘍が完全に退行した割合は25％
であった。
【００７２】 （例７） Ｂ細胞リンパ腫細胞に対するＣ２Ｂ８ジスルフィド結合ホモ二量体のアポトーシ
ス活性 ＴＵＮＥＬアッセイにより、ＣＤ２０+Ｂ細胞リンパ腫細胞に対するホモ二量
体のアポトーシス誘発能力を測定した。生育の対数相において、ジスルフィド結
合ホモ二量体を、ＤＨＬ−４（ＣＤ２０+）上のＣ２Ｂ８及びＲＦ２，ラモス（
ＣＤ２０+，ＣＤ２３+）並びにＳＫＤ（ＣＤ２０+，ＣＤ２３+）細胞（1 x 106
個細胞/ml）と比較した。当該細胞は、L-グルタミン（Irvine Scientific社）２
mM，ペニシリン−ストレプトマイシン（Irvine Scientific社）100 U/ml，及び
５％胎児ウシ血清（ＦＢＳ）を添加したRPMI 1640（Irvine Scientific社）を媒
体とし、37 ℃，５％ＣＯ2雰囲気のインキュベータ中でこれを増殖した。比較対
照として、培養液にＣ２Ｂ８単量体又は不適切アイソタイプ抗体（ＲＦ２）を加
えてインキュベートした。72時間インキュベートした後、細胞を遠心分離（350
x g，５分間）して収穫し、70％（容積比）のエタノール（氷冷）で30分間かけ
て固定した。当該固定細胞について、フローサイトメトリーに基づくＴＵＮＥＬ
アッセイにより、APO-BRDU（登録商標）キット（Pharmingen社）を使用し、メー
カー指示に従ってそのアポトーシス活性を分析した。Ｃ２Ｂ８ホモ二量体により
ＤＨＬ−４およびＳＫＷ細胞を処理した結果、細胞のアポトーシス死が使用抗体
の投与量に左右されることが明らかになった（図１５及び表III）。これに対し
て、細胞を同じ濃度のＣ２Ｂ８単量体又は比較対照抗体（ＲＦ２）で処理した場
合は、アポトーシスが起こる証拠は見いだされなかった。さらに、培養液中にお
いて自然アポトーシスを起こし易いラモス細胞（ＣＤ２０+バーキットリンパ腫
細胞系）を使用した場合は、これらの培養液にホモ二量体を添加すると、そのア
ポトーシスがさらに高められることが分かった（図１５）。
【００７３】 （例８） Ｂ細胞リンパ腫細胞上におけるＣ２Ｂ８−ｐ５Ｅ８チオエーテル結合ヘテロ二量
体のアポトーシス活性 ＣＤ２０+Ｂ細胞リンパ腫細胞にアポトーシスを誘発させるヘテロ二量体の能
力を、ＴＵＮＥＬアッセイにより測定した。Ｂリンパ腫細胞を生育させ、例７記
載の方法でこれを評価した。これを簡単に説明する。即ち、ヘテロ二量体の濃度
を変えてＤＨＬ−４およびＳＫＷ細胞の長期生育相に添加し、上記例７記載の方
法に従ってアポトーシスの誘発を試験した。比較対照として、培養液にＣ２Ｂ８
の単量体，ｐ５Ｅ８の単量体，及び不適切抗体（ＲＦ２）の比較対照を加えてこ
れをインキュベートした。図１６及び表IIIは、ＤＨＬ−４およびＳＫＷ細胞中
におけるＣ２Ｂ８ヘテロ二量体によるアポトーシス誘発状況（投与量依存型）を
示している。Ｃ２Ｂ８及びｐ５Ｅ８の単量体又は比較対照抗体（ＲＦ２）を添加
して培養した細胞では、アポププトシスが発生した徴候は認められなかった。
【００７４】 （例９） 正常Ｂ細胞のＣ２Ｂ８ホモ二量体仲介補体依存型細胞毒性 修飾フローサイトメトリーアッセイを使用して、補体依存型細胞毒性（ＣＤＣ
）機構によるＣ２Ｂ８ホモ二量体の末梢血液Ｂ細胞殺滅仲介能力を調べた。フィ
コール−ハイパック傾斜遠心分離法により、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を健
康なヒトドナーの血液から単離した。トリパンブルー染料排除法により求めた生
存可能性は＞98％であった。単離後直ちにチューブ１本当たり0.5−1 x 106個の
ＰＢＭＣにＣ２Ｂ８（-s-s-）ホモ二量体又は単量体を添加して室温で45分間イ
ンキュベートし、遠心分離及び上澄液を吸引除去し、２ mlのＨＢＳＳで洗浄し
て未結合抗体を除去した。得られた細胞ペレットを100 μlのウサギ補体（Cappe
l Cat. #55866，ＩＣＮ社）で種々の希釈度に再懸濁させ、37 ℃で60分間インキ
ュベートした。インキュベート後、10 μlの抗ＣＤ１９−ＦＩＴＣ抗体（Pharmi
ngen社）を添加した。細胞を氷の上で30分間インキュベートし、次に50 μl（20
μg/ml）の沃化プロピジウム（ＰＩ：Boehringer Mannheim社）を添加した。15
分後、全てのチューブに400 μlのＨＢＳＳを添加し、FACScan（Becton-Dickins
on社）により直ちに細胞を分析した。
【００７５】 WinListソフトウェアパッケージを使用して、メーカー（Variety Software Ho
use社）の指示に従ってデータを解析した。当該分析に使用したリンパ球サンプ
ルの純度をロイコゲート（ＣＤ４５陽性細胞）により測定した結果、95％以上で
あることが分かった。全リンパ球集団（ＣＤ４５+）の中のＣＤ１９+細胞（Ｂ細
胞系）集団を、さらに他の分析に回した。ＣＤ１９+細胞結合ＰＩの割合は、す
でに死滅し又はこれから死んで行く細胞の集団の割合を表している。当該ＣＤ１
９+細胞の割合は、WinList Softwareを使用して求めた。表Ｉのデータは、Ｃ２
Ｂ８ホモ二量体が末梢ＣＤ１９+Ｂ細胞のＣＤＣを有効に仲介することを示して
いる。補体のみを加え、１：10及び１：20の希釈度でインキュベートした細胞（
表IV）の細胞毒性は20％であったが、細胞をＣ２Ｂ８ホモ二量体とともにインキ
ュベートした場合、この値はそれぞれ34％及び41％にまで増加した（比較対照に
対して70％増加した）。補体を添加せずにインキュベートした比較対照細胞の細
胞毒性は10％以下であった（データは特に示さない）。
【表１】 表Ｉ ＣＤ１９−Ｂ細胞に対するＣ２Ｂ８二量体の補体依存型細胞毒性 a 抗体の試験は、予備実験で求めた最適濃度（２ μl/ml）で実施した。 b 細胞毒性（％）は、沃化プロピジウム染色が可能になるＣＤ１９+細胞−濃
度で求めた。
【００７６】 （例１０） Ｃ２Ｂ８ホモ及びヘテロ二量体によるＢ細胞リンパ腫の生育抑制 増殖抑制アッセイにより、ホモ二量体及びヘテロ二量体がＢリンパ腫細胞系Ｓ
ＫＷ及びＳＢの生育を直接抑制する能力を測定した。これについて簡単に説明す
る。即ち、種々の濃度のＣ２Ｂ８，ｐ５Ｅ８，Ｃ２Ｂ８ホモ二量体及びＣ２Ｂ８
−ｐ５Ｅ８を、96ウェルの平底プレートに加えた生育媒体（５％FBSRPMI-1640媒
体）200 μlの中に5 x 105個ずつ加え、37 ℃，５％ＣＯ2雰囲気中で96時間イン
キュベートした。インキュベーションの最後の18時間の間、レドックス染料のア
ラマーブルー（Biosource International社，Cat. DAL 1100）50 μlを各ウェル
に添加した。インキュベーションの終了後、プレートをシェーカー上で10分かけ
て室温まで冷却し、当該染料の細胞内還元量を測定し、96ウェルの蛍光計で530
nmの励起蛍光及び590 nmの放射蛍光の強度を読んだ。
【００７７】 得られた結果は相対蛍光単位（ＲＦＵ）で表した。生育抑制率（％）は下式を
用いて計算した。 〔１−（試験サンプルの平均ＲＦＵ−無抗体比較対照の平均ＲＦＵ）〕 ｘ 100％ 図１７に示すように、Ｃ２Ｂ８のホモ二量体及びヘテロ二量体は、生体外にお
けるＳＫＷ及びＳＢ細胞の生育に対して、投与量依存型の抑制効果を示した。我
々が前に見いだした通り、Ｃ２Ｂ８及びｐ５Ｅ８単量体は、ＳＫＷ及びＳＢ細胞
の生育に対して抑制効果を示さなかった。これに対して、Ｃ２Ｂ８（-S-S-）及
びＣ２Ｂ８−ｐ５Ｅ８（-s-）は投与量依存型の細胞生育抑制効果を示した。ホ
モ二量体に対するＩＣ５０値は、ＳＫＷ及びＳＢ細胞に対して0.625 μg/mlであ
ったが、ヘテロ二量体のＩＣ５０値は0.625 μg/mlから1.41 μg/mlに増加した
。
【００７８】 （例１１） Ｃ２Ｂ８単量体の架橋がＢ細胞リンパ腫の生育抑制に及ぼす効果 膜ＣＤ２０を高架橋することにより生物学的活性が高められる。高架橋のこの
能力については、Ｂ細胞リンパ腫細胞系を使用した増殖抑制アッセイで最初に証
明された。これについて簡単に説明する。即ち、10％ＦＣＳを含むRPMI-1640生
育媒体中の3 x 104個のＤＨＬ−４又はＳＢ細胞を96ウェルＵ底プレートの各ウ
ェルに加え、Ｃ２Ｂ８の濃度を増やしながらインキュベートした。37 ℃で１時
間インキュベートした後、50 μl/mlのネズミ モノクローン性抗ヒトＩｇＧ抗体
（Sigma Chemical Co.）を、最終濃度が10 μg/mlになるまで各ウェルに添加し
、さらに72時間インキュベートした。インキュベーションを行っている最後の18
時間の間、各ウェルの培養液に対して１ μCiの[3Ｈ]-チミジンをパルス状に添
加した。細胞を洗浄し、収穫し、自動液体シンチレーションカウンターを使用し
て細胞の放射能を測定した。
【００７９】 細胞増殖実験に関するデータを図１８に示す。これらのデータは、Ｂ細胞リン
パ腫表面のＣ２Ｂ８を二次抗体を用いて高架橋することにより、明確に投与量に
依存する細胞増殖の抑制効果が得られることを示している。この効果は、ＣＤ２
０−Ｂ細胞をＣ２Ｂ８の単量体とともにインキュベートした場合には観察されな
かった。ＣＤ２０ＨＳＢ細胞上で同様の条件下において試験した抗体は、何の効
果も示さなかった。この事実は、今回観察された効果がＢ細胞リンパ腫の表面に
存在するＣＤ２０分子により仲介されることを示唆している。さらに、細胞を添
加する前に培養ウェルを二次抗体無しに直接被覆してＣ２Ｂ８の架橋を行っても
、細胞生育に対する抑制効果が得られた（データは特に示さない）。この事実は
、上記の観察結果を確認するものである。
【００８０】 （例１２） ＣＬＬ患者から単離したＰＢＭＣに対するＣ２Ｂ８ジスルフィド結合ホモ二量体
のアポトーシス活性 慢性リンパ球白血病（ＣＬＬ）の診断を受けたヒトの患者からＣＤ２０+Ｂ細
胞を採取し、当該Ｂ細胞に対するＣ２Ｂ８ホモ二量体のアポトーシス誘発能力を
ＴＵＮＥＬアッセイにより求めた。ＣＬＬの診断を受けた提供者からリンパ球を
単離し、当該リンパ球上に存在するジスルフィド結合ホモ二量体のアポトーシス
誘発能力を、単量体のそれと比較した。提供者の血漿２％，L-グルタミン２ mM
及びペニシリン−ストレプトマイシン 100 U/mlを追加したRPMI 1640媒体中で、
ＰＢＭＣを培養した。比較対照として、培養液にＣ２Ｂ８単量体及び非結合性Ｍ
Ａｂ ＲＦ２を加えてインキュベートした。120時間インキュベートした後、細胞
を収穫し、70％エタノールで固定し、ＴＵＮＥＬアッセイにより前記（例７）の
方法に従ってアポトーシスの分析を行った。白血病細胞をＣ２Ｂ８ホモ二量体で
処理することにより、アポトーシスによる細胞死が、同じ濃度のＣ２Ｂ８単量体
又は比較対照抗体（ＲＦ２）で処理した細胞と比較して、約20％増加した（表II
）。全体として、自然アポトーシスによる高水準の細胞死がＣＬＬ−Ｂ細胞で観
察された。これらの結果は、当該試験に準最適培養条件を適用したために生じた
ものと考えられる。
【００８１】
【表２】 表II Ｃ２Ｂ８ホモ二量体によるＣＤ１９+／ＣＤ２０+Ｂ細胞（ＣＬＬ患者
から採取）のアポトーシス誘発 a ＴＵＮＥＬアッセイにより、例７の記載通りにアポトーシスの測定を実施し
た。 アポトーシスの程度は、サンプルのアポトーシス（％）を比較対照のアポト
ーシス（％）で割った値で表した。フローサイトメトリー分析は、Becton-Dicki
nson社のEACScan及びFACScan Research社のソフトウェアパッケージを使用して
実施した。最終データ解析はWinList ソフトウェア パッケージ（Variety Softw
are House社）を使用して行った。アポトーシス陽性細胞の割合は、背景蛍光，
自己蛍光を越える蛍光を発する細胞の割合（％）として求めた。
【図面の簡単な説明】
【図１】 抗ＣＤ２０抗体「二量体」軽鎖（バージョン１）のＤＮＡ及び推定アミノ酸配
列を示す。
【図２】 抗ＣＤ２０抗体「二量体」重鎖（バージョン１）のＤＮＡ及び推定アミノ酸配
列を示す。
【図３】 主題抗体を発現するために使用される発現構造の図式地図である。
【図４】 Ｃ２Ｂ８（αＣＤ２０）ホモ二量体及びＣ２Ｂ８／ｐ５Ｅ８ヘテロ二量体（α
ＣＤ２０／αＣＤ２３）の構造を示す。
【図５】 Ｃ２Ｂ８（-s-s-）ホモ二量体及びＣ２Ｂ８／ｐ５Ｅ８（-s-）ヘテロ二量体を
出発原料と比較したＳＤＳ／ＰＡＧＥの結果を示す。
【図６】 Ｃ２Ｂ８（-s-s-及び-s-）ホモ二量体及びＣ２Ｂ８／ｐ５Ｅ８（-s-）ヘテロ
二量体を出発原料と比較したＳＤＳ／ＰＡＧＥの結果を示す。
【図７】 Ｃ２Ｂ８ホモ二量体のＨＰＬＣ分析結果を示す。
【図８】 Ｃ２Ｂ８／ｐ５Ｅ８ヘテロ二量体（αＣＤ２０／αＣＤ２３二量体）のＨＰＬ
Ｃ分析結果を示す。
【図９】 Ｃ２Ｂ８（-s-s-）ホモ二量体とＣＤ２０陽性細胞系（ＳＫＷ及びＳＢ）の結
合を示す。
【図１０】 Ｃ２Ｂ８及びＣ２Ｂ８（-s-s-）ホモ二量体のＳＫＷ細胞に対する競合的結合
アッセイの結果を示す。
【図１１】 αＣＤ２０／αＣＤ２３ヘテロ二量体（Ｃ２Ｂ８／ｐ５Ｅ８）とＳＫＷ及びＤ
ＨＬ−４細胞系との結合を示す。
【図１２】 αＣＤ２０ Ｃ２Ｂ８ホモ二量体及びαＣＤ２０／αＣＤ２３／ｐ５Ｅ８ヘテ
ロ二量体とＳＫＷ細胞系（ＣＤ２０＋／ＣＤ２３＋）との結合を示す。
【図１３】 ダウディ（Daudi）腫瘍異種移植片上におけるＣ２Ｂ８化学（-s-s-）二量体の
抗腫瘍活性を示す。
【図１４】 ダウディ腫瘍異種移植片上におけるＣ２Ｂ８（-s-s-）二量体の抗腫瘍活性を
示す。
【図１５】 Ｃ２Ｂ８（-s-s-）ホモ二量体のアポトーシス活性を示す。
【図１６】 Ｃ２Ｂ８／ｐ５Ｅ８（s)ヘテロ二量体のアポトーシス活性を示す。
【図１７】 Ｂ−リンパ腫ＣＤ２０／ＣＤ２３陽性細胞系（ＳＢ及びＳＫＷ）の96時間連続
暴露後におけるＭＡｂに対する生育抑制効果を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 11/00 Ａ６１Ｐ 11/02 11/02 11/06 11/06 17/00 17/00 35/00 35/00 37/02 37/02 37/08 37/08 Ｃ０７Ｋ 16/46 Ｃ０７Ｋ 16/46 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ハリハラン、カンダサミイ アメリカ合衆国 カリフォルニア、サンデ ィエゴ、 パーク ビリッジ ロード 7414 (72)発明者 ラバール、マイケル、ジェイ アメリカ合衆国 カリフォルニア、サンデ ィエゴ、 ナイアガラ アベニュ 4445 (72)発明者 フイン、トリ、ビー アメリカ合衆国 カリフォルニア、サンデ ィエゴ、 スコピアス ウェイ 8996 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA44 CA04 DA02 EA04 GA11 HA01 HA15 4B064 AG27 CA10 CA19 CC24 CE10 DA01 DA05 4C085 AA13 BB31 BB36 CC22 DD31 DD58 DD62 EE01 GG01 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA41 BA50 CA40 DA76 EA22 EA28 FA40 FA50 FA74 GA21

Claims (46)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】（ｉ）希望する結合特異性を有し、組換えＤＮＡ突然変異生
    成を介してその中に少なくとも１個のシステインコドンを導入する抗体分子の重
    鎖をコード化するＤＮＡ分子を得るか又はこれを構築し； （ii）当該ＤＮＡを適切な宿主細胞又は発現系の中に、希望する特異性を有
    する抗体分子の軽鎖をコード化するＤＮＡ分子とともに発現させて当該導入シス
    テイン残基を含む抗体分子を造り； (iii) 当該抗体分子を当該宿主細胞又は発現系から精製し； （iv）当該精製抗体分子を、当該抗体分子の分子内又は分子間ジスルフィド
    結合を部分還元して抗体二量体の機能を高めるに充分な量の適切な還元剤と接触
    させ； （ｖ）充分な時間をかけて二量体化を進行させ； （vi）システインを添加することにより，又はチオールブロッキング剤を添
    加した後で当該還元反応を終結させ又は終結させることなく； 抗体の二量体を製造する方法。
  2. 【請求項２】請求項１記載の方法で製造したＩｇＧ又はＩｇＧ二量体。
  3. 【請求項３】当該ＩｇＧ又はＩｇＧ二量体がホモ二量体である、請求項２
    記載のＩｇＧ又はＩｇＧ二量体。
  4. 【請求項４】ヘテロ二量体である、請求項２記載のＩｇＧ又はＩｇＧ二量
    体。
  5. 【請求項５】相補系成分の活性化能力を有するＩｇＧ又はＩｇＧ二量体が
    得られる、請求項１記載の方法。
  6. 【請求項６】相補カスケードを介して細胞を活性化し、これを殺すことの
    できるＩｇＧ又はＩｇＧ二量体が得られる、請求項１記載の方法。
  7. 【請求項７】細胞毒性エフェクター細胞上のＦｃγ受容体と結合できるＩ
    ｇＧ又はＩｇＧ二量体が得られる、請求項１記載の方法。
  8. 【請求項８】宿主免疫細胞上のＦｃγ受容体と結合できるＩｇＧ又はＩｇ
    Ｇ二量体が得られる、請求項７記載の方法。
  9. 【請求項９】プログラム化細胞死滅（アポトーシス）を開始できるＩｇＧ
    又はＩｇＧ二量体が得られる、請求項２記載の方法。
  10. 【請求項１０】当該ホモ二量体が抗ＣＤ２０ホモ二量体である、請求項３
    記載の二量体。
  11. 【請求項１１】当該抗ＣＤ２０二量体がＣ２Ｂ８ホモ二量体である、請求
    項１０記載の二量体。
  12. 【請求項１２】当該ホモ二量体が抗ＣＤ２３二量体である、請求項３記載
    の二量体。
  13. 【請求項１３】当該抗ＣＤ２３二量体がｐ３Ｅ８ホモ二量体である、請求
    項１２記載の二量体。
  14. 【請求項１４】当該二量体がＣＤ２３抗原及びＣＤ２０抗原或いはそのい
    ずれかの抗原に対して反応性を有する、請求項２記載の二量体。
  15. 【請求項１５】癌細胞を請求項１に従って製造された抗体二量体と接触さ
    せる、癌の治療方法。
  16. 【請求項１６】癌細胞を請求項１０記載のＡｂ二量体と接触させる、癌の
    治療方法。
  17. 【請求項１７】請求項１３記載のｐ５Ｅ８ホモ二量体の有効量をこのよう
    な治療を必要とする患者に投与する、アレルギー性不全の治療方法。
  18. 【請求項１８】当該不全がアレルギー性喘息，アレルギー性気管支肺アス
    ペルギルス症，アレルギー性鼻炎アトピー性皮膚炎，クローン病（Chrones dise
    ase），グラベス病，食物アレルギー，及びアレルギー性接触皮膚炎で構成され
    るグループから選ばれる、請求項１７記載の方法。
  19. 【請求項１９】当該癌がＣＬＬ又はＢ細胞のリンパ腫である、請求項１６
    記載の方法。
  20. 【請求項２０】請求項１記載の方法で造られる抗体二量体，及び医薬品に
    使用できる担体で構成される医薬品組成物。
  21. 【請求項２１】請求項８記載の医薬品組成物を、このような治療を必要と
    する患者に投与する治療方法。
  22. 【請求項２２】請求項１記載の方法で造られたＩｇＧ及びＩｇＧ二量体或
    いはその何れかの有効量をそれを必要とする患者に投与する、自己免疫不全の治
    療方法。
  23. 【請求項２３】当該ＩｇＧ又はＩｇＧ二量体が抗ｇｐ３９二量体である、
    請求項２２記載の方法。
  24. 【請求項２４】（ｉ）希望する結合特異性を有し、組換えＤＮＡ技術を使
    用して少なくとも１個のシステインコドンをその中へ導入する抗体分子の重鎖を
    コード化するＤＮＡ分子を得るか又はこれを構築し； （ii）適切な宿主細胞又は発現系の中に、希望する結合特異性を有する抗体
    分子の軽鎖をコード化するＤＮＡ分子とともに当該ＤＮＡ分子を発現させて当該
    導入システイン残基を含む抗体分子を製造し； (iii) 当該宿主細胞又は発現系から当該抗体分子を精製し； （iv）当該精製抗体分子を、当該抗体分子の分子内又は分子間のジスルフィ
    ド結合を部分的に還元するに充分な量の適切な還元剤と接触させて抗体二量体の
    機能を高め； （ｖ）他の抗体分子上に導入され、その中に導入されたシステイン基を有し
    ないチオール反応基を添加し、充分な時間をかけて二量体化反応を進行させ； （vi）システインを添加して還元反応を終結させ又は終結させることなく； 抗体二量体を製造する方法。
  25. 【請求項２５】当該チオール反応基がマレイミド基である、請求項２４記
    載の方法。
  26. 【請求項２６】当該チオール反応基がジチオピリダル基である、請求項２
    ４記載の方法。
  27. 【請求項２７】当該チオール反応基が反応性チオールである、請求項２４
    記載の方法。
  28. 【請求項２８】当該ＩｇＧが同じ又は異なるＩｇＧ下位クラスのＩｇＧで
    ある、請求項２３記載の方法により造られるＩｇＧ又はＩｇＧ二量体。
  29. 【請求項２９】当該二量体が異なるアイソタイプのＭＡｂ分子で構成され
    る、請求項２４記載の方法。
  30. 【請求項３０】当該ＩｇＧ又はＩｇＧ二量体がホモ二量体である、請求項
    ２４記載の方法。
  31. 【請求項３１】当該ホモ二量体がＣ２Ｂ８ホモ二量体である、請求項３０
    記載の方法。
  32. 【請求項３２】当該ホモ二量体がｐ５Ｅ８ホモ二量体である、請求項３０
    記載の方法。
  33. 【請求項３３】当該ホモ二量体がＣＤ２３抗原に対して反応性を有する、
    請求項３０記載の方法。
  34. 【請求項３４】当該ＩｇＧ又はＩｇＧ二量体が、２種類の異なるエピトー
    プに対して結合特異性を有するヘテロ二量体である、請求項２４記載の方法。
  35. 【請求項３５】当該ヘテロ二量体がＣＤ２０及びＣＤ２３抗原に対して反
    応性を有する、請求項３４記載の方法。
  36. 【請求項３６】当該ヘテロ二量体がＣ２Ｂ８又はｐ５Ｅ８ヘテロ二量体で
    ある、請求項３５記載の方法。
  37. 【請求項３７】（ｉ）希望する結合特異性を有し、部位特異性突然変異生
    成を介してその中へ少なくとも１個のシステインコドンを導入する抗体分子の重
    鎖をコード化するＤＮＡ分子を得るか又はこれを構築し； （ii）当該ＤＮＡ分子を、抗体の軽鎖をコード化するＤＮＡ分子とともに適
    切な宿主細胞の中に発現させて当該導入システイン残基を含む抗体分子を造り； (iii) 当該抗体分子を当該宿主細胞から精製し； （iv）当該精製抗体分子を、当該抗体分子の分子内又は分子間ジスルフィド
    結合を部分還元するに充分な量の適切な還元剤と接触させて抗体二量体の機能を
    高め； （ｖ）ビス−マレイミド架橋剤を使用して当該還元抗体分子を架橋させ； （vi）システインを添加して当該還元反応を終結させ又は終結させることな
    く； 抗体二量体を製造する方法。
  38. 【請求項３８】癌細胞を、請求項２８記載のＩｇＧ又はＩｇＧ二量体と接
    触させる、癌の治療方法。
  39. 【請求項３９】請求項３２記載の二量体の有効量をこのような治療を必要
    とする患者に投与する、アレルギー性不全の治療方法。
  40. 【請求項４０】当該癌がＣＬＬ又はＢ細胞のリンパ腫である、請求項３８
    記載の方法。
  41. 【請求項４１】請求項２８記載のＩｇＧ又はＩｇＧ二量体，及び医薬品に
    使用し得る担体で構成される、医薬品組成物。
  42. 【請求項４２】請求項４１記載の医薬品組成物をこのような治療を必要と
    する患者に投与する、癌の治療方法。
  43. 【請求項４３】請求項１０記載のＩｇＧ又はＩｇＧ二量体をこのような治
    療を必要とする患者に投与する、自己免疫不全の治療方法。
  44. 【請求項４４】請求項１５記載のＩｇＧ又はＩｇＧ二量体の有効量をこの
    ような治療を必要とする患者に投与する、アレルギー性不全の治療方法。
  45. 【請求項４５】ＭＡｂを遺伝子工学的に操作してシステイン分子を導入し
    、同じ抗体分子上にある姉妹重鎖間の分子内ジスルフィド架橋形成を抑制又は阻
    止し、ＩｇＧ又はＩｇＧ二量体或いはこれら両者を製造する方法。
  46. 【請求項４６】請求項４４記載の方法により製造されるＩｇＧ及びＩｇＧ
    二量体。
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WO (1) WO2000044788A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2017061474A (ja) * 2010-11-05 2017-03-30 ライナット ニューロサイエンス コーポレイション 操作されたポリペプチドコンジュゲートおよびトランスグルタミナーゼを用いてそれを作製する方法

Families Citing this family (150)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7129390B2 (en) * 1997-10-16 2006-10-31 Avigenics, Inc Poultry Derived Glycosylated Interferon Alpha 2b
EP1645291A1 (en) * 1999-05-07 2006-04-12 Genentech, Inc. Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to B cell surface markers
MXPA01011279A (es) * 1999-05-07 2002-07-02 Genentech Inc Tratamiento de enfermedades autoinmunes con antagonistas que se unene a los marcadores de superficie, de celulas b.
WO2002022212A2 (en) * 2000-09-18 2002-03-21 Idec Pharmaceuticals Corporation Combination therapy for treatment of autoimmune diseases using b cell depleting/immunoregulatory antibody combination
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
WO2002096948A2 (en) * 2001-01-29 2002-12-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Engineered tetravalent antibodies and methods of use
US20020159996A1 (en) * 2001-01-31 2002-10-31 Kandasamy Hariharan Use of CD23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders
CA2444661A1 (en) * 2001-01-31 2002-08-08 Idec Pharmaceutical Corporation Use of cd23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders
WO2002060485A2 (en) * 2001-01-31 2002-08-08 Idec Pharmaceuticals Corporation Use of immunoregulatory antibodies in the treatment of neoplastic disorders
US20060073141A1 (en) * 2001-06-28 2006-04-06 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
CA2476166C (en) * 2002-02-14 2011-11-15 Immunomedics, Inc. Anti-cd20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
US8287864B2 (en) * 2002-02-14 2012-10-16 Immunomedics, Inc. Structural variants of antibodies for improved therapeutic characteristics
US20030195431A1 (en) * 2002-04-10 2003-10-16 Sukhatme Vikas P. Observation of effects of body fluids on indicator cells for disease diagnosis
AU2003227504A1 (en) 2002-04-15 2003-10-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha METHOD OF CONSTRUCTING scDb LIBRARY
AU2003281975B2 (en) 2002-11-19 2010-04-22 Clluone Diagnostics A/S Methods and kits for diagnosing and treating B-cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL)
PT1572744E (pt) 2002-12-16 2010-09-07 Genentech Inc Variantes de imunoglobulina e utilizações destas
WO2004065611A1 (ja) 2003-01-21 2004-08-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 抗体の軽鎖スクリーニング方法
WO2004091657A2 (en) 2003-04-09 2004-10-28 Genentech, Inc. Therapy of autoimmune disease in a patient with an inadequate response to a tnf-alpha inhibitor
AU2004252067B2 (en) * 2003-05-09 2012-04-12 Duke University CD20-specific antibodies and methods of employing same
ES2537738T3 (es) 2003-06-05 2015-06-11 Genentech, Inc. Terapia de combinación para trastornos de células B
JP4794301B2 (ja) 2003-06-11 2011-10-19 中外製薬株式会社 抗体の製造方法
AU2003280713A1 (en) * 2003-11-04 2005-05-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for producing antibody
US20050214286A1 (en) * 2004-01-27 2005-09-29 University Of Southern California Polymer-bound antibody cancer therapeutic agent
KR20150092374A (ko) 2004-06-04 2015-08-12 제넨테크, 인크. 다발성 경화증의 치료 방법
CA2573359A1 (en) * 2004-07-22 2006-02-02 Genentech, Inc. Method of treating sjogren's syndrome
EP1789070B1 (en) 2004-08-03 2012-10-24 Biogen Idec MA Inc. Taj in neuronal function
EP1776384B1 (en) 2004-08-04 2013-06-05 Mentrik Biotech, LLC Variant fc regions
ZA200702335B (en) * 2004-10-05 2009-05-27 Genentech Inc Method for treating vasculitis
JP4937138B2 (ja) 2005-01-05 2012-05-23 エフ−シュタール・ビオテヒノロギシェ・フォルシュングス−ウント・エントヴィックルングスゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング 相補性決定領域とは異なる分子の領域に設計された結合性を持つ合成免疫グロブリンドメイン
WO2006099481A2 (en) * 2005-03-14 2006-09-21 Medimmune, Inc. Macromolecules comprising a thioether cross-link
EP1870458B1 (en) 2005-03-31 2018-05-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha sc(Fv)2 STRUCTURAL ISOMERS
EP3050963B1 (en) 2005-03-31 2019-09-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for production of polypeptide by regulation of assembly
US8475794B2 (en) 2005-04-06 2013-07-02 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy with anti-CD74 antibodies provides enhanced toxicity to malignancies, Autoimmune disease and other diseases
US8349332B2 (en) 2005-04-06 2013-01-08 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Multiple signaling pathways induced by hexavalent, monospecific and bispecific antibodies for enhanced toxicity to B-cell lymphomas and other diseases
AU2006251647A1 (en) * 2005-05-20 2006-11-30 Genentech, Inc. Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
KR101367544B1 (ko) 2005-06-10 2014-02-26 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 메글루민을 함유하는 단백질 제제의 안정화제, 및 그의이용
CN101262885B (zh) 2005-06-10 2015-04-01 中外制药株式会社 含有sc(Fv)2的药物组合物
SI1904104T1 (sl) 2005-07-08 2013-12-31 Biogen Idec Ma Inc. Protitelesa SP35 in njihova uporaba
SI1912675T1 (sl) 2005-07-25 2014-07-31 Emergent Product Development Seattle, Llc zmanjšanje števila celic B z uporabo molekul, ki se specifično vežejo na CD37 in CD20
CN101267836A (zh) 2005-07-25 2008-09-17 特鲁比昂药品公司 单剂量cd20特异性结合分子的用途
US7422899B2 (en) 2005-10-05 2008-09-09 Biogen Idec Ma Inc. Antibodies to the human prolactin receptor
WO2007044887A2 (en) * 2005-10-11 2007-04-19 Transtarget, Inc. Method for producing a population of homogenous tetravalent bispecific antibodies
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
CA2629306A1 (en) 2005-11-23 2007-05-31 Genentech, Inc. Methods and compositions related to b cell assays
ES2654040T3 (es) 2006-03-31 2018-02-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Método de modificación de anticuerpos para la purificación de anticuerpos biespecíficos
CA2654317A1 (en) 2006-06-12 2007-12-21 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Single-chain multivalent binding proteins with effector function
WO2008086006A2 (en) 2007-01-09 2008-07-17 Biogen Idec Ma Inc. Sp35 antibodies and uses thereof
WO2008100995A1 (en) 2007-02-14 2008-08-21 Vaccinex, Inc. Humanized anti-cd100 antibodies
US7807168B2 (en) 2007-04-10 2010-10-05 Vaccinex, Inc. Selection of human TNFα specific antibodies
HUE037633T2 (hu) 2007-07-09 2018-09-28 Genentech Inc Diszulfidkötés redukciójának megelõzése polipeptidek rekombináns elõállítása során
WO2009043051A2 (en) * 2007-09-27 2009-04-02 Biogen Idec Ma Inc. Cd23 binding molecules and methods of use thereof
AU2008312406B2 (en) 2007-10-16 2014-03-06 Ares Trading S.A. Combination of BLyS inhibition and anti-CD 20 agents for treatment of autoimmune disease
WO2009051974A1 (en) 2007-10-17 2009-04-23 Nuvelo, Inc. Antibodes to cll-1
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US8227577B2 (en) * 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
CN101932333A (zh) 2007-12-26 2010-12-29 瓦西尼斯公司 抗c35抗体联合疗法和方法
EP2077281A1 (en) 2008-01-02 2009-07-08 Bergen Teknologioverforing AS Anti-CD20 antibodies or fragments thereof for the treatment of chronic fatigue syndrome
US7914785B2 (en) 2008-01-02 2011-03-29 Bergen Teknologieverforing As B-cell depleting agents, like anti-CD20 antibodies or fragments thereof for the treatment of chronic fatigue syndrome
PT2132228E (pt) 2008-04-11 2011-10-11 Emergent Product Dev Seattle Imunoterapia de cd37 e sua combinação com um quimioterápico bifuncional
CA2729961C (en) 2008-07-09 2018-05-01 Biogen Idec Ma Inc. Li113, li62 variant co2, anti-lingo antibodies
NZ590330A (en) * 2008-07-21 2012-08-31 Immunomedics Inc Structural variants of anti-cd20 antibodies for improved therapeutic characteristics
EP3301116A1 (en) 2008-08-25 2018-04-04 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Conserved influenza hemagglutinin epitope and antibodies thereto
AR073295A1 (es) 2008-09-16 2010-10-28 Genentech Inc Metodos para tratar la esclerosis multiple progresiva. articulo de fabricacion.
US8268314B2 (en) 2008-10-08 2012-09-18 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies
CA2738243C (en) 2008-10-29 2020-09-29 Wyeth Llc Formulations of single domain antigen binding molecules
CA2739352C (en) 2008-10-29 2021-07-13 Wyeth Llc Methods for purification of single domain antigen binding molecules
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
US20120003235A1 (en) 2008-12-31 2012-01-05 Biogen Idec Ma Inc. Anti-lymphotoxin antibodies
WO2010096394A2 (en) 2009-02-17 2010-08-26 Redwood Biosciences, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use
WO2010112194A1 (en) 2009-04-02 2010-10-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Antigen-binding polypeptides and multispecific antibodies comprising them
RU2598248C2 (ru) * 2009-04-02 2016-09-20 Роше Гликарт Аг Полиспецифичные антитела, включающие антитела полной длины и одноцепочечные фрагменты fab
PL2417156T3 (pl) 2009-04-07 2015-07-31 Roche Glycart Ag Trójwartościowe, bispecyficzne przeciwciała
KR20110124369A (ko) 2009-04-07 2011-11-16 로슈 글리카트 아게 이중특이적 항­ｅｒｂｂ­3／항­ｃ­ｍｅｔ 항체
WO2010115553A1 (en) 2009-04-07 2010-10-14 Roche Glycart Ag Bispecific anti-erbb-2/anti-c-met antibodies
KR101754433B1 (ko) 2009-05-08 2017-07-05 백시넥스 인코포레이티드 항-ｃｄ100 항체 및 이의 사용 방법
US8815242B2 (en) 2009-05-27 2014-08-26 Synageva Biopharma Corp. Avian derived antibodies
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
WO2010151341A1 (en) 2009-06-24 2010-12-29 The Feinstein Institute For Medical Research Method for treating chronic lymphocytic leukemia
CN102471375A (zh) * 2009-07-09 2012-05-23 F-斯塔生物技术研究和发展有限公司 稳定的免疫球蛋白恒定结构域
SG10201901417UA (en) 2009-08-11 2019-03-28 Genentech Inc Production of proteins in glutamine-free cell culture media
CA2781519A1 (en) 2009-09-16 2011-03-24 Genentech, Inc. Coiled coil and/or tether containing protein complexes and uses thereof
US9005926B2 (en) 2009-10-02 2015-04-14 Biogen Idec Ma Inc. Methods of preventing and removing trisulfide bonds
CN105001334A (zh) 2010-02-10 2015-10-28 伊缪诺金公司 Cd20抗体及其用途
AR080794A1 (es) * 2010-03-26 2012-05-09 Hoffmann La Roche Anticuerpos bivalentes biespecificos anti- vegf/ anti-ang-2
TW201138821A (en) 2010-03-26 2011-11-16 Roche Glycart Ag Bispecific antibodies
US20120100166A1 (en) 2010-07-15 2012-04-26 Zyngenia, Inc. Ang-2 Binding Complexes and Uses Thereof
EP2593476A2 (en) 2010-07-16 2013-05-22 Ablynx N.V. Modified single domain antigen binding molecules and uses thereof
MX340558B (es) 2010-08-24 2016-07-14 F Hoffmann-La Roche Ag * Anticuerpos biespecificos que comprenden fragmento fv estabilizado con disulfuro.
CN103347896B (zh) 2010-09-02 2017-06-13 瓦西尼斯公司 抗cxcl13抗体和其使用方法
JP5766296B2 (ja) 2010-12-23 2015-08-19 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ポリペプチド−ポリヌクレオチド複合体、およびエフェクター成分の標的化された送達におけるその使用
JP6162606B2 (ja) 2011-01-14 2017-07-12 レッドウッド バイオサイエンス， インコーポレイテッド アルデヒド−タグ付き免疫グロブリンポリペプチド及びその使用方法
EP2663579B1 (en) 2011-01-14 2017-04-26 The Regents of the University of California Therapeutic antibodies against ror-1 protein and methods for use of same
CN103403025B (zh) 2011-02-28 2016-10-12 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 单价抗原结合蛋白
KR101638224B1 (ko) 2011-02-28 2016-07-08 에프. 호프만-라 로슈 아게 항원 결합 단백질
CN106039306A (zh) 2011-03-30 2016-10-26 埃博灵克斯股份有限公司 使用针对TNFα的单结构域抗体治疗免疫病症的方法
DK2707383T3 (en) 2011-05-13 2018-07-23 Biogen Ma Inc PROCEDURES FOR PREVENTION AND REMOVAL OF TRISULPHIDE BINDINGS
CN106432506A (zh) 2011-05-24 2017-02-22 泽恩格尼亚股份有限公司 多价和单价多特异性复合物及其用途
EP2793941A1 (en) 2011-12-23 2014-10-29 F.Hoffmann-La Roche Ag Articles of manufacture and methods for co-administration of antibodies
KR20140127854A (ko) 2012-02-10 2014-11-04 제넨테크, 인크. 단일-쇄 항체 및 다른 이종다량체
NZ629828A (en) 2012-03-02 2017-05-26 Vaccinex Inc Methods for the treatment of b cell-mediated inflammatory diseases
JP6007310B2 (ja) 2012-04-05 2016-10-12 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ヒトｔｗｅａｋ及びヒトｉｌ１７に対する二重特異性抗体並びにその使用
WO2014001325A1 (en) 2012-06-27 2014-01-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for making antibody fc-region conjugates comprising at least one binding entity that specifically binds to a target and uses thereof
RU2639287C2 (ru) 2012-06-27 2017-12-20 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Способ отбора и получения высокоселективных и мультиспецифичных нацеливающих групп с заданными свойствами, включающих по меньшей мере две различные связывающие группировки, и их применения
MX353951B (es) 2012-07-04 2018-02-07 Hoffmann La Roche Anticuerpos de anti-teofilina y metodos de uso.
WO2014006124A1 (en) 2012-07-04 2014-01-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Covalently linked antigen-antibody conjugates
EP3339328A1 (en) 2012-07-04 2018-06-27 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-biotin antibodies and methods of use
PE20150361A1 (es) 2012-07-13 2015-03-14 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos anti-vegf/anti-ang-2 y su utilizacion en el tratamiento de enfermedades vasculares oculares
EP2872894B1 (en) 2012-07-13 2019-04-17 Innate Pharma Screening of conjugated antibodies
CN104662044B (zh) 2012-08-24 2018-10-30 加利福尼亚大学董事会 用于治疗ror1癌症并抑制转移的抗体和疫苗
CN115925957A (zh) 2013-02-08 2023-04-07 Irm责任有限公司 用于修饰抗体以制备免疫缀合物的特定位点
EP2961435B1 (en) * 2013-02-28 2019-05-01 ImmunoGen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
AU2013205589A1 (en) 2013-03-08 2014-09-25 Vaccinex, Inc. Anti-CXCL13 antibodies and associated epitope sequences
EP3424530A1 (en) 2013-03-15 2019-01-09 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
CN104341504B (zh) 2013-08-06 2017-10-24 百奥泰生物科技(广州)有限公司 双特异性抗体
EP3050896B1 (en) 2013-09-27 2021-07-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide heteromultimer
JP6422956B2 (ja) 2013-10-11 2018-11-14 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 多重特異性ドメイン交換共通可変軽鎖抗体
BR112016013562A2 (pt) 2013-12-20 2017-10-03 Hoffmann La Roche Anticorpos anti-tau(ps422) humanizados, seus usos, e formulações farmacêuticas
CA2930154A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Covalently linked helicar-anti-helicar antibody conjugates and uses thereof
BR112016014945A2 (pt) 2014-01-03 2018-01-23 F. Hoffmann-La Roche Ag conjugado, formulação farmacêutica e uso
CA2933384A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles
CN106456784A (zh) 2014-04-16 2017-02-22 拜康有限公司 包含摩尔过量的山梨醇的稳定蛋白质制剂
AR100978A1 (es) 2014-06-26 2016-11-16 Hoffmann La Roche LANZADERAS CEREBRALES DE ANTICUERPO HUMANIZADO ANTI-Tau(pS422) Y USOS DE LAS MISMAS
US11033637B2 (en) 2014-11-21 2021-06-15 University Of Maryland, Baltimore Targeted structure-specific particulate delivery systems
WO2016087416A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies
WO2016156440A1 (en) 2015-03-31 2016-10-06 Medimmune Limited A novel il33 form, mutated forms of il33, antibodies, assays and methods of using the same
AU2016271124C1 (en) 2015-05-30 2020-05-14 Molecular Templates, Inc. De-immunized, Shiga toxin a subunit scaffolds and cell-targeting molecules comprising the same
US9862763B2 (en) 2015-06-24 2018-01-09 Hoffmann-La Roche Inc. Humanized anti-tau(pS422) antibodies and methods of use
HUE057952T2 (hu) 2015-06-24 2022-06-28 Hoffmann La Roche Anti-transzferrin receptor antitestek testreszabott affinitással
EP3352760A4 (en) 2015-09-21 2019-03-06 Aptevo Research and Development LLC CD3 BINDING POLYPEPTIDES
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
JP6657392B2 (ja) 2015-10-02 2020-03-04 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性抗ヒトｃｄ２０／ヒトトランスフェリン受容体抗体及び使用方法
MA44334A (fr) 2015-10-29 2018-09-05 Novartis Ag Conjugués d'anticorps comprenant un agoniste du récepteur de type toll
WO2017115773A1 (ja) 2015-12-28 2017-07-06 中外製薬株式会社 Ｆｃ領域含有ポリペプチドの精製を効率化するための方法
GB201603291D0 (en) 2016-02-25 2016-04-13 Binding Site Group The Ltd Antibodies
WO2017189432A1 (en) 2016-04-26 2017-11-02 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
EA201990222A1 (ru) 2016-08-05 2019-07-31 МЕДИММЬЮН, ЭлЭлСи Антитела к o2 и пути их применения
CN109843917B (zh) 2016-10-19 2023-10-03 免疫医疗有限责任公司 抗o1抗体及其用途
MA50948A (fr) 2016-12-07 2020-10-14 Agenus Inc Anticorps et procédés d'utilisation de ceux-ci
GB201708262D0 (en) 2017-05-23 2017-07-05 Binding Site Group Ltd Assay for plasma cell associated disease
TWI728250B (zh) 2017-06-21 2021-05-21 美商基利科學股份有限公司 靶向hiv gp120及cd3之多特異性抗體
SG11202012043RA (en) 2018-07-03 2021-01-28 Gilead Sciences Inc Antibodies that target hiv gp120 and methods of use
AU2020329217A1 (en) 2019-08-12 2022-07-28 Aptevo Research And Development Llc 4-1BB and OX40 binding proteins and related compositions and methods, antibodies against 4-1BB, antibodies against OX40
GB202007047D0 (en) 2020-05-13 2020-06-24 Binding Site Group Ltd Mass spectrometry controls
CA3200314A1 (en) 2020-12-01 2022-06-09 Peter Pavlik Tumor-associated antigens and cd-3 binding proteins, related compositions, and methods
EP4355776A1 (en) 2021-06-14 2024-04-24 Argenx BV Anti-il-9 antibodies and methods of use thereof
WO2024194685A2 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Oxitope Pharma B.V. Anti-phosphocholine antibodies and methods of use thereof
WO2024194686A2 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Oxitope Pharma B.V. Anti-phosphocholine antibodies and methods of use thereof
US12116410B1 (en) * 2023-12-26 2024-10-15 Medicovestor, Inc. Methods of manufacturing dimeric antibodies

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6121424A (en) * 1991-11-25 2000-09-19 Enzon, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
WO1989000692A1 (en) * 1987-07-15 1989-01-26 The United States Of America, As Represented By Th Second generation monoclonal antibodies having binding specificity to tag-72 and human carcinomas and methods for employing the same
US6051225A (en) * 1988-10-19 2000-04-18 The Dow Chemical Company Family of high affinity, modified antibodies for cancer treatment
US5993813A (en) * 1988-10-19 1999-11-30 The Dow Chemical Company Family of high affinity, modified antibodies for cancer treatment
WO1991019515A1 (en) 1990-06-21 1991-12-26 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Oligomeric immunoglobulin constant domain mutant with enhanced complement-mediated cytolytic activity
GB9422383D0 (en) 1994-11-05 1995-01-04 Wellcome Found Antibodies
US6121022A (en) * 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6348581B1 (en) * 1996-10-31 2002-02-19 The Dow Chemical Company High affinity humanized anti-TAG-72 monoclonalantibodies
US6011138A (en) * 1997-02-20 2000-01-04 Idec Pharmaceuticals Corporation Gamma-1 anti-human CD23 monoclonal antibodies
US5830698A (en) 1997-03-14 1998-11-03 Idec Pharmaceuticals Corporation Method for integrating genes at specific sites in mammalian cells via homologous recombination and vectors for accomplishing the same
WO1999002567A2 (en) * 1997-07-08 1999-01-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for producing homoconjugates of antibodies which induce growth arrest or apoptosis of tumor cells
AU760854B2 (en) 1998-06-22 2003-05-22 Immunomedics Inc. Use of bi-specific antibodies for pre-targeting diagnosis and therapy

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2017061474A (ja) * 2010-11-05 2017-03-30 ライナット ニューロサイエンス コーポレイション 操作されたポリペプチドコンジュゲートおよびトランスグルタミナーゼを用いてそれを作製する方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2000044788A1 (en) 2000-08-03
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