JP2002526407A - フルボ酸、および種々の状態の処置におけるその使用 - Google Patents
フルボ酸、および種々の状態の処置におけるその使用Info
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Abstract
Description
おけるその使用に関する。
る(MacCarthe et al.,1990)。これらの物質は、pHの
関数としての水中溶解度に基づいて、フミン酸、フルボ酸およびフミンに分ける
ことができる。フルボ酸は、すべてのpH条件下で水溶性であり、一般にフミン
酸より分子サイズおよび分子量が小さくかつ色濃度が低い画分である。
〜95%はフルボ酸である。土中ではフミン酸がフルボ酸より3〜5倍多く(S
tevenson,1982)、これに対し水中ではフルボ酸がフミン酸より9
〜10倍多い(Malcolm,1985)。
;Gramsch,1961) (ii)炎症(Salz,1974;Motohisa et al.,19
74) (iii)貧血症および高コレステロール血症(Soloveyva and
Lotosh,1984) (iv)フォン−ウィルブランド病(Lopez−Fernandez et
al.,1992)。
で調べられていなかった。 Wang ら(1996)は、フルボ酸と活性酸素フリーラジカルの相互作用
を調べ、ピート由来のフルボ酸がスーパーオキシドおよびヒドロキシルラジカル
を両方とも捕捉しうることを見出した。塩素処理水中にみられる高変異原性フラ
ノンおよびインビトロ反転ラット腸嚢系を用いて、フルボ酸がラット小腸からの
変異原物質の吸収を阻害することも示された(Clark and Chipm
an,1995)。
ashin−Beck disease)と関係するが、これはセレン欠乏食と
関連して起きるにすぎない(Peng and Xu,1987)。
または誘導体を有効成分として含む、殺菌性および静菌性をもつ組成物が開示さ
れている。これらの組成物は消毒剤として有用であると記載されている。
分として含む医薬組成物が提供される。
できる。 局所投与の場合、組成物は局所投与に適した液剤、パスタ剤、軟膏剤、散剤ま
たは他の剤形で提供できる。
テルまたは誘導体の使用が提供される。状態は、たとえば炎症、アクネ、湿疹、
または細菌もしくは真菌もしくはウイルス感染症であってよい。
より誘導されるフルボ酸であることが好ましい。このようなフルボ酸を、以下に
おいて”オキシフルボ酸またはOFA”と呼ぶ。
の異なる化合物を同定した。それらの大部分がカルボン酸であった。それらの化
合物は大部分が通常の生理的代謝産物であり、生成物混合物中に有毒化合物は証
明されなかった。
クリーム剤中に4.5%または9.0%(質量)のオキシフルボ酸を含む。 好ましい態様の説明 本発明を実施するに際し、有効成分はフルボ酸、その塩、エステルまたは誘導
体である。前記のような好ましい官能基分析値をもつオキシフルボ酸について、
多数のインビトロおよびインビボ試験を行った。これらを以下に記載する。
g/ml)により、37℃で15分間処理した。これらの細胞をPMA(ミリス
チン酸酢酸ホルボール)(20ng/ml)で刺激し、フェリシトクロムC(1
mM)のスーパーオキシド阻害性還元を測定することにより、スーパーオキシド
産生を判定した。試験した両濃度で、有意のスーパーオキシド産生阻害がみられ
た(表1)。
ダーゼ(100mU/ml)酵素系を用いて、オキシフルボ酸(25ug/ml
)のスーパーオキシド捕捉活性を判定した。オキシフルボ酸はスーパーオキシド
捕捉活性を示した(表2)。
よび不存在下の両方で7日間同時培養することにより行われた。オキシフルボ酸
は細胞増殖の用量関連阻害を生じた(図1)。
生に及ぼす作用 フィトヘマグルチニン(PHA)刺激したヒトリンパ球培養物を60、80お
よび100μg/mlのオキシフルボ酸で2日間処理した後、細胞を遠心分離し
、Amersham TM(Amersham International
Plc,英国バッキンガムシャー)からのBiotrak TMヒトインターロ
イキン2 ELISA系を用いて上清のIL−2レベルをアッセイした。
2産生を統計的に有意に低下させた(図2)。 インビボでの抗炎症性化合物としてのオキシフルボ酸の評価 1.ジニトロフルオロベンゼン感作マウスにおける評価 50匹のBALB C雌マウス(6〜7週令)を用い、Rheins et
al.(1987)記載の方法に従って、2,4−ジニトロ−1−フルオロベン
ゼン(DNFB)感作マウスにおけるオキシフルボ酸(4.5および9%クリー
ム剤、局所適用)の作用を評価した。マウスを剃毛腹部へのDNFB適用により
感作し、5群に分け、6日後に右耳を攻撃した。各群のマウスの炎症した耳を下
記のいずれかのクリーム剤で2日間局所治療した:対照クリーム剤、オキシフル
ボ酸4.5%、オキシフルボ酸9%、ジクロフェナク(dichlophena
c)ナトリウム1%(Voltaren Emulgel、登録商標)およびベ
タメタゾン0.1%(Betnovate、登録商標)。攻撃の前、ならびにそ
の24および48時間後に、耳の厚みをクロックゲージで測定した。
結果は、マウスを殺し、罹患した耳をパラフィンろうに包埋した後、顕微鏡によ
り確認された。
れなかった。 異なる操作から採取したオキシフルボ酸バッチ(98100055および98
110067)および同じ連続操作から連日採取した異なるバッチ(99030
086〜99030089)から得たクリーム剤間の変動の可能性を調べるため
の実験も行った。この試験では、1群当たり5匹のマウス7群を用いた。第1群
を対照クリーム剤で処置し、一方、他の6群を前記6種類の9%オキシフルボ酸
クリーム剤で処置した。この実験の結果を図4に示す。
の徴候はみられなかった。 前記実験と同様な結果が得られた。この場合も、オキシフルボ酸はこのモデル
の炎症を統計的に有意に阻害した。異なるオキシフルボ酸クリーム剤を用いて得
た結果について、分散分析(2元ANOVA)を行った。P値は、1日目につい
ては0.131、2日目については0.761である。したがって、試験した各
種試料間に有意差はなかった。
d Animal Hospital,プレトリア)により行われた。10臨床
例が試験に用いられた。この試験に適性であるためには、動物の皮膚に下記の事
象がなければならなかった:膨疹、紅斑、心因性掻痒および化膿。処置前に、病
変部を軽度、中等度、または重度に分類した。試験中には他の処置を行わなかっ
た。所有者に9%オキシフルボ酸クリーム剤を供給し、そのクリーム剤を罹患部
に1日2回適用するように指示した。この処置を7日間続けなければならなかっ
た。所有者に処置開始のちょうど7日後に再来するように依頼し、各症例を再び
臨床評価し、生検および写真撮影した。
臨床的にも病理学的にも炎症軽減がみられた。いずれの症例にも副作用は認めら
れなかった。大部分の場合、病変部の消炎は完全であり、再発しないことが認め
られた。慢性かつ持続的症例と記載した1例のみにおいて、所有者はそのイヌが
まだひどく掻きむしるので、3日後に再来した。そこで即効性コルチゾンを投与
たところ、イヌは好ましい反応を示した。この試験で得られた典型的な例が図5
にみられる。これらの写真は、左上腕内側に病変部をもつダルマシアン犬の処置
前および後に撮影された。処置前(図5A)には重度の膨疹、紅斑および化膿が
認められたのに対し、処置後(図5B)には紅斑および化膿がなく、ごくわずか
に残る膨疹のみが認められた。さらに、1回目の生検の生検病変は完全に治癒し
ていた。
ボ酸クリーム剤 方法: アレルギー性皮膚炎および湿疹の病変をもつ臨床例を、表3に示す各種動物に
おいて確認した。
置後に先の生検部位にできるだけ近い部位で生検を続けた。 ホルマリン固定した皮膚生検試料を組織学的試験に用いられる標準的ルーティ
ン法に従って処理し、パラフィンろうに包埋し、各6μmの切片を調製した。す
べての切片をヘマトキシリンおよびエオシン染色法で着色した。
調べ、これらを表4に示すように等級づけした。処置病変の生検試料を同様に評
価した。
元の対照病変と比較できるにすぎないということを留意すべきである。
結果を、処置した病変の臨床所見に加えて提示する。
減したように思われる。 表面(浅い)滲出性皮膚炎(急性炎症)は、確実にすべての症例で治癒促進を
示した。肥厚性表皮(表皮肥厚症)は慢性状態であり、したがって処置に際して
ほとんど変化を示さなかった。処置病変1例を除くすべてにおいて、元の未処置
病変と比較して皮膚の炎症度も軽減した。
たがって、これらの結果を解釈する際に、関与因子として自然治癒を排除するこ
とはできない。
きわめて低い毒性を証明した。
らびに亜慢性経口および経皮毒性試験を行い、オキシフルボ酸液剤(25.4%
濃縮液剤)およびオキシフルボ酸クリーム剤(この場合、5.33%のオキシフ
ルボ酸を含有するように配合)を評価した。これらの試験の結果を表5および6
にまとめる。
て測定可能な毒性を生じなかったことを示す。
いた。オキシフルボ酸試験では、動物に1000mg/kg/日の有効物質を投
与した。5.33%オキシフルボ酸クリーム剤を、ラットの皮膚に1000mg
/kg/日の投与量で90日間適用した。異常な臨床徴候は認められず、試験中
に死亡した動物もなかった。被験物質を適用した動物の臨床病理状態および体重
の変化は比較的小さかった。
ルボ酸クリーム剤の抗微生物性を、周知の多数の病原体についてインビトロで評
価した。得られた結果を表7および8に示す。記号+は増殖、記号−は非増殖を
表す。
ボ酸液剤が細菌および真菌の増殖を阻害する効力を、数種類の被験生物について
SABS法730(インビトロ)に従って調べた。得られた結果を表9に示す。
被験生物に対してある程度の抗微生物活性または静菌もしくは静真菌効力を示す
ことが分かる。
試験を行い、このクリーム剤がUSP 23(1995)の要求を満たすことが
認められた。
F/5)中で増殖させた。ウイルス懸濁原液をタイトレートしてそれらの力価を
確認し、100×50%組織培養感染用量(100TCID50)/200μlを
含有するウイルス懸濁液を調製した。
な単層細胞培養物を、無血清MEM中で最低1時間洗浄して飢餓状態にした。飢
餓処理後、無血清MEM中のオキシフルボ酸2倍希釈液を100TCID50のウ
イルスと共に各ウェルに添加した。ミクロタイタートレーを37℃でインキュベ
ートし、毎日、7日間、CPEを調べた。100TCID50のウイルスを接種し
たオキシフルボ酸無添加ウェルを、陽性対照として用いた。CPEの発現は結合
阻害が起きなかったことを示す。
適切な単層細胞培養物を、無血清MEM中で最低1時間洗浄して飢餓状態にした
。飢餓処理後、100TCID50のウイルスをすべてのウェルに添加し、1〜2
時間吸着させた。吸着後、吸着していないウイルスを無血清MEMを用いてウェ
ルから洗い去った。次いで無血清MEM中のオキシフルボ酸2倍希釈液を適切な
ウェルに添加した。ミクロタイタートレーを37℃でインキュベートし、毎日、
7日間、CPEを調べた。100TCID50のウイルスを接種したオキシフルボ
酸無添加ウェルを、陽性対照として用いた。CPEの発現はウイルス複製阻害が
起きなかったことを示す。
用は、表10Aおよび10Bにみられる。
物の結合を阻害したのに対し、ウイルスの複製は0.469〜3.75mg/m
lの濃度で阻害された。サルロタウイルスSA11の場合、ウイルス複製の限定
阻害は0.103mg/mlという低い濃度で認められた。
る; ii)リンパ球由来の前炎症性サイトカインIL−2の産生を低下させる; iii)移植臓器拒絶反応に典型的な混合リンパ球反応を阻害する; iv)グラム陽性、グラム陰性、ならびに真菌性およびウイルス性のヒト病原
体に対してインビトロ活性をもつ; v)ジニトロフルオロベンゼン感作マウスにおいて誘発された接触過敏反応を
、ジクロフェナクナトリウムおよびベタメタゾンなど一般に用いられる抗炎症薬
と同程度に有効に阻害する(ただしこれら2薬剤は、著しい不都合な副作用を伴
う); vi)ネコおよびイヌにおいて化膿性外傷性皮膚炎に対するインビボ抗炎症活
性をもつ; vii)実験動物における毒性がきわめて低い 化合物である。
フで示す。
フで示す。
フで示す。
フで示す。
皮膚炎を治療した結果を写真で示す。
Claims (21)
- 【請求項1】 フルボ酸、その塩、エステルまたは誘導体を有効成分として含
む医薬組成物。 - 【請求項2】 組成物が、対象に経口または局所投与するためのものである、
請求項1に記載の医薬組成物。 - 【請求項3】 組成物が、局所投与に適した液剤、パスタ剤、軟膏剤、散剤ま
たは他の剤形で提供される、請求項2に記載の医薬組成物。 - 【請求項4】 対象がヒトまたは動物である、請求項2または3に記載の医薬
組成物。 - 【請求項5】 フルボ酸、その塩、エステルまたは誘導体が、オキシフルボ酸
、その塩、エステルまたは誘導体である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の
医薬組成物。 - 【請求項6】 オキシフルボ酸、その塩、エステルまたは誘導体が、下記の官
能基分析値をもつ、請求項5に記載の医薬組成物: 全酸基: 11.5〜15.5meq/g カルボキシル基: 8.5〜12.5meq/g フェノール性基: 2.3〜3.7meq/g。 - 【請求項7】 対象の状態を処置するのに使用するための、フルボ酸、その塩
、エステルまたは誘導体。 - 【請求項8】 状態が、炎症、アクネ、湿疹、または細菌もしくは真菌もしく
はウイルス感染症、またはその組合わせである、請求項7に記載のフルボ酸、そ
の塩、エステルまたは誘導体。 - 【請求項9】 状態の処置が、経口または局所投与によるものである、請求項
7または8に記載のフルボ酸、その塩、エステルまたは誘導体。 - 【請求項10】 対象がヒトまたは動物である、請求項7〜9のいずれか1項
に記載のフルボ酸、その塩、エステルまたは誘導体。 - 【請求項11】 フルボ酸、その塩、エステルまたは誘導体が、オキシフルボ
酸、その塩、エステルまたは誘導体である、請求項7〜10のいずれか1項に記
載のフルボ酸、その塩、エステルまたは誘導体。 - 【請求項12】 対象における状態の処置に用いる医薬の製造に使用するため
の、フルボ酸、その塩、エステルまたは誘導体。 - 【請求項13】 状態が、炎症、アクネ、湿疹、または細菌もしくは真菌もし
くはウイルス感染症、またはその組合わせである、請求項12に記載のフルボ酸
、その塩、エステルまたは誘導体。 - 【請求項14】 医薬が経口または局所投与用である、請求項12または13
に記載のフルボ酸、その塩、エステルまたは誘導体。 - 【請求項15】 対象がヒトまたは動物である、請求項12〜14のいずれか
1項に記載のフルボ酸、その塩、エステルまたは誘導体。 - 【請求項16】 フルボ酸、その塩、エステルまたは誘導体が、オキシフルボ
酸、その塩、エステルまたは誘導体である、請求項12〜15のいずれか1項に
記載のフルボ酸、その塩、エステルまたは誘導体。 - 【請求項17】 フルボ酸、その塩、エステルまたは誘導体を対象に投与する
工程を含む、対象の状態を処置する方法。 - 【請求項18】 状態が、炎症、アクネ、湿疹、または細菌もしくは真菌もし
くはウイルス感染症、またはその組合わせである、請求項17に記載の方法。 - 【請求項19】 投与が経口または局所による、請求項17または18に記載
の方法。 - 【請求項20】 対象がヒトまたは動物である、請求項17〜19のいずれか
1項に記載の方法。 - 【請求項21】 フルボ酸、その塩、エステルまたは誘導体が、オキシフルボ
酸、その塩、エステルまたは誘導体である、請求項17〜20のいずれか1項に
記載の方法。
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