JP2002520055A

JP2002520055A - ヒトプレセニリン関連タンパク質

Info

Publication number: JP2002520055A
Application number: JP2000560248A
Authority: JP
Inventors: タング、ワイ・トム; コーレイ、ニール・シー; パターソン、チャンドラ
Original assignee: Incyte Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Incyte Corp
Priority date: 1998-07-16
Filing date: 1999-07-13
Publication date: 2002-07-09
Also published as: WO2000004150A1; EP1097203A1; US20040265891A1; US6783955B2; US20020082211A1; CA2333467A1; AU4992099A

Abstract

(57)【要約】本発明は、ヒトプレセニリン関連タンパク質（HPAP-1）並びにHPAP-1を同定及びコードするポリヌクレオチドを提供する。また、本発明は発現ベクター、宿主細胞、抗体、アゴニスト、及びアンタゴニストを提供する。更に、本発明はHPAP-1の発現に関わる疾患の診断、治療、又は予防の方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】技術分野本発明は、ヒトプレセニリン関連タンパク質(human presenilin-associated p
rotein)の核酸配列およびアミノ酸配列、並びに癌、免疫不全症、神経疾患、及
び生殖障害の予防・診断・治療におけるこれらの配列の利用法に関するものであ
る。

【０００２】発明の背景アルツハイマー病（AD）は、中枢神経系の変性障害であり、中高年の間で進行
性の記憶損失および認識の低下をもたらし、アミロイド沈着および神経細胞内の
神経原線維変化を含む広範な神経病理学的特徴を伴う。神経変性およびADに通じ
る病原の経路はよく分かっていないが、疾患に対して遺伝的感受性を与える少な
くとも3つの遺伝子座が確認されている（Schellenberg, GD. (1995) Proc. NatI
. Acad. Sci. 92:8552-8559; Sherrington, R.ら(1995) Nature 375:754-760）
。

【０００３】アポリポタンパク質E遺伝子のε4アレル（C112〜R）は、かなりの割合で晩期
発症型（60歳以上）の場合のADと関連している。βアミロイド前駆体タンパク質
（βAPP）の遺伝子における変異が、56歳以前に発症した少数の家族（事例の3％
未満）で発見されている。第3の遺伝子座（AD3）が、染色体14q24.3に対する遺
伝連鎖の研究によってマッピングされており、早期発症型の常染色体優性のADの
70％を占めるに至っている。早期発症型のADは、晩期発症型のADに比べて稀であ
るが、AD3遺伝子座は疾患の最も活動的な形態と関連している。

【０００４】染色体14qにおける既知の遺伝子の初期の研究は、AD3遺伝子座からそれらを除
外する結果となった。しかしながら、ADを推定上の常染色体優性の形質として分
離する21の系統の収集において行われた更なる研究は、AD3遺伝子座に関連する1
8を超える遺伝標識の選択、並びにこの領域内でコードされる少なくとも19の転
写物の単離に帰着した。これらの転写物の1つ（S182）が、複数の膜貫通ドメイ
ンを有し且つ内在性膜タンパク質に類似しているプレセニリン（PS-1又はI-467
）をコードすることが分かった。また、同様の遺伝子産物（プレセニリン-II、P
S-2）が、対象ADの異なる系統における染色体1に関して同定された（Levy-Labad
, E.ら(1995) Science 269:973-977）。PS-1及びPS-2の双方において、ミスセン
ス変異は、各々の系統における早期発症型の家族性のAD2と共に同時分離された
ものであることが分かった。変異が保存された遺伝子のドメインで生じ、通常の
無症候性の家族では見られないという事実は、その変異がADのこの形態に対する
病原であることを示唆している（Sherrington1ら前出; Levy-Lahadら前出）。全
ての場合において、変異はヌクレオチドの推定上の読み枠において見られ、その
位置においてコードされたアミノ酸を変化させると考えられる。また、正常なヒ
トプレセニリンの変異体（PS; I467、I463、及びI374）が報告されている。ヌク
レオチドの欠失又は選択的スプライシングによるこれらの変異体は、偏在的に発
現され、細胞内膜と結合する（Sahara, N.ら(1996) FEBS Lett. 26:7-11）。

【０００５】 PSの通常の細胞機能、より詳細には個別のADの細胞機能におけるこれらの変異
の効果は、依然として不明である。しかし、PSの概括的なトポロジーは、それが
、受容体、チャネルタンパク質、若しくは構造的膜タンパク質のような内在性膜
タンパク質であることを示唆している。更に、PS及びCaenorhabditis elegansタ
ンパク質、SPE-4及びSEL-12の間の類似性は、それらが類似の機能を有し得るこ
とを示唆している。SPE-4は、C.elegansにおける膜出芽および融合現象の際に、
可溶性および膜結合ポリペプチドの輸送および貯蔵に関与していると考えられる
。ヒトにおいて、PSは、恐らくβAPPの移動における類似の小胞輸送プロセスに
関与している可能性がある。その場合、PSにおける変異によって、βAPPの細胞
内の輸送が変更され、最終的にはβAPPプロセッシングの変更が誘導される。C.e
legansにおけるsel-12変異体の効果を救済(rescue)するための、PS-1及びPS-2並
びにそれらのAD関連変異を用いた研究によって、変異ヒトプレセニリンは、PS-1
及びPS-2に比べてsel-12変異を救済するための能力が低下していることが証明さ
れた（Levitan, Dら(1996) Proc. Natl. Acad. Sci. 93:14940-14944）。この結
果は、正常なPS-1及びPS-2に比べて変異PSの活性が低下しており、これがADの発
生に関わる要因であり得ることを示している。Levy-Lahad（前出）によれば、AD
関連PSにおける幾つかのアミノ酸変異が膜貫通ドメインの最初およびその付近で
見られ、変異が、膜におけるこれらのタンパク質の挿入若しくは固着に逆の効果
をもたらし得ることに注意されたい。

【０００６】新規なヒトプレセニリン関連タンパク質及びそれらをコードするポリヌクレオ
チドの開示は、癌、免疫不全症、神経疾患、及び生殖障害の診断・治療・予防に
役立つ新たな組成物を提供して当業者の要求を満たすものである。

【０００７】発明の概要本発明は、新規なヒトプレセニリン関連タンパク質（HPAP-1）、HPAP-1をコー
ドするポリヌクレオチド、並びに癌、免疫不全症、神経疾患、及び生殖障害の診
断、治療、又は予防のためのこれらの組成物の利用に基づくものである。

【０００８】本発明は、SEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を含む実質的に
精製されたポリペプチドを特徴とする。

【０００９】また、本発明はSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片に対して少
なくとも90%以上のアミノ酸配列の同一性を有する実質的に精製された変異体を
提供する。更に本発明はSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を含
むポリペプチドをコードする単離され精製されたポリヌクレオチドを提供する。
更に本発明にはSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を含むポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドに対して少なくとも90%以上のポリヌクレ
オチド配列の同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオチドの変異配列が
含まれる。

【００１０】更に、本発明はSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を含むポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドに対して相補的な単離され精製されたポ
リヌクレオチドだけでなく、SEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片
を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと厳密な条件の下でハイブリ
ダイズする単離され精製されたポリヌクレオチドを提供する。

【００１１】更に、本発明はSEQ ID NO:2のポリヌクレオチド配列又はSEQ ID NO:2の断片を
含む単離され精製されたポリヌクレオチド、並びにSEQ ID NO:2のポリヌクレオ
チド配列又はSEQ ID NO:2の断片を含むポリヌクレオチドに対して少なくとも90%
以上のポリヌクレオチド配列の同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオ
チドの変異配列を提供する。また本発明は、SEQ ID NO:2のポリヌクレオチド配
列又はSEQ ID NO:2の断片を含むポリヌクレオチドに対して相補的な配列を有す
る単離され精製されたポリヌクレオチドを提供する。

【００１２】更に、本発明はSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を含むポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドの少なくとも断片を含む発現ベクターを
提供する。別の態様では、その発現ベクターは宿主細胞に包含される。

【００１３】更に、本発明はポリペプチドの製造方法を提供し、その方法には、（ａ）前記
ポリペプチドの発現に適した条件の下で、前記ポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチドの少なくとも断片を含む発現ベクターを含む宿主細胞を培養する過程
と、（ｂ）その宿主細胞の培地からポリペプチドを回収する過程とが含まれる。

【００１４】更に、本発明はSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を有する実
質的に精製されたポリペプチドを適切な製薬用担体と共に含む医薬品成分を提供
する。

【００１５】更に、本発明には前記ポリペプチドの精製されたアゴニストおよび精製された
アンタゴニストだけでなく、SEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片
を含むポリペプチドに結合する精製された抗体が含まれる。

【００１６】更に、本発明はHPAP-1の活性または発現の低下に関連する疾患の治療又は予防
の方法を提供し、その方法には、そのような治療が必要な被験者に対してSEQ ID
NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を有する実質的に精製されたポリペ
プチドを含む医薬品組成物を有効な量投与する過程が含まれる。

【００１７】更に、本発明はHPAP-1の活性または発現の増大に関連する疾患の治療又は予防
の方法を提供し、その方法には、そのような治療が必要な被験者に対してSEQ ID
NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を有するポリペプチドのアゴニスト
を有効な量投与する過程が含まれる。

【００１８】更に、本発明はサンプルにおけるポリヌクレオチドの検出方法を提供し、その
検出方法には、（ａ）サンプルの少なくとも1つの核酸と、前記ポリヌクレオチ
ドの相補配列とをハイブリダイズさせて、ハイブリダイゼーション複合体を形成
する過程と、（ｂ）前記ハイブリダイゼーション複合体を検出する過程であって
、該ハイブリダイゼーション複合体の存在が前記サンプルにおけるポリヌクレオ
チドの存在と相関性を有するような検出過程とが含まれる。一実施態様において
、その方法にはハイブリダイゼーション過程の前にポリヌクレオチドを増幅する
過程が更に含まれる。

【００１９】発明を実施するための形態本発明のタンパク質、核酸配列、及び方法について説明する前に、本発明は、
ここに開示した特定の装置、材料、及び方法に限定されるものではなく、その実
施形態は変更可能であることを理解されたい。また、ここで使用した専門用語は
、特定の実施例のみを説明する目的で用いたものであり、特許請求の範囲のみで
限定される本発明の範囲を限定することを意図したものではないことも理解され
たい。

【００２０】請求の範囲を含む本明細書において、単数形の「或る」及び「その（この）」
の表記は、文脈からそうでないことが明らかである場合以外は、複数の意味も含
むことに注意されたい。従って、例えば「或る宿主細胞」の表記には、複数のそ
のような宿主細胞が含まれ、この「抗体」の表記は、1またはそれ以上の抗体及
び当業者に周知のその等価物なども表している。

【００２１】特別に定義されていない限り、本明細書における全ての専門用語及び特定の用
語は、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者に一般に理解され
るものと同じ意味を有する。ここで説明したものと類似あるいは等価な方法、装
置、及び材料を本発明の実施や試験において使用可能であるが、本明細書におい
ては好適な方法、装置、材料を説明する。本発明で言及した全ての文献は、文献
で報告された本発明に関して用いられ得る株化細胞、プロトコル、試薬、及びベ
クターを説明・開示するために引用したものである。本明細書のあらゆる開示内
容は、本発明が従来発明によるそのような開示に先行し得ないことを認めるもの
と解釈してはならない。

【００２２】定義用語「HPAP-1」は、任意の種、詳細にはウシ、ヒツジ、ブタ、マウス、ウマ、及
び好ましくをヒトを含む特定の哺乳類の種から得られたものであって、天然、合
成、半合成か、或いは組換え体を起源として得られた実質的に精製されたHPAP-1
のアミノ酸配列若しくはその変異体を指す。

【００２３】用語「アゴニスト」は、HPAP-1と結合した場合にHPAP-1の効果を高めたり、その
効果の持続時間を延ばす分子を指す。アゴニストには、HPAP-1に結合してその作
用を調節するタンパク質、核酸、糖質、または任意の他の分子が含まれ得る。

【００２４】用語「アレル変異配列」は、HPAP-1をコードする遺伝子の対立形である。アレル
変異配列は、核酸配列における少なくともひとつの突然変異に起因し、変異した
mRNA或いはポリペプチドが生ずるが、それらの構造又は機能は変化する場合と変
化しない場合がある。与えられた任意の自然の遺伝子または組換え型の遺伝子に
は、アレル形がないもの、1つ存在するもの、或いは多数存在するものがある。
一般にアレル変異配列が生じる通常の変異は、ヌクレオチドの自然な欠失、付加
、または置換に因るものである。これらのタイプの変化の各々は、単独または他
の変化と組み合わされて、所定の配列において１またはそれ以上の回数で生じ得
る。

【００２５】ここで用いるHPAP-1をコードする「変異(altered)」核酸配列には、結果として
同一のHPAP-1またはHPAP-1の機能的特徴の少なくとも1つをともなうポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチドをもたらす種々のヌクレオチドの欠失、挿入、
または置換をともなうそれらの配列が含まれる。この定義には、HPAP-1の特定の
オリゴヌクレオチドプローブを用いて容易に検出可能な、或いは検出困難な多型
と、またHPAP-1をコードするポリヌクレオチド配列の正常の染色体の位置とは別
の所定の位置を有する、アレル変異配列に対する不適切な或いは予期しないハイ
ブリダイゼーションとが含まれる。コード化されたタンパク質もまた「変異」した
ものであり得て、サイレント変化を生ずるアミノ酸残基の置換、欠失、または挿
入を含み、結果的に機能的に等価HPAP-1となるものである。意図的なアミノ酸置
換は、HPAP-1の生物学的または免疫学的活性が保持される限りにおいて、残基の
極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒性の性質について
の類似性に基づき行なわれ得る。例えば、負に荷電したアミノ酸にはアスパラギ
ン酸およびグルタミン酸が含まれ、正に荷電したアミノ酸にはリジンおよびアル
ギニンが含まれ、同様な親水性値を有する非電荷の極性頭基を有するアミノ酸に
は、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グ
ルタミン、セリン、スレオニン、フェニルアラニン、及びチロシンが含まれる。

【００２６】用語「アミノ酸」または「アミノ酸配列」は、オリゴペプチド、ペプチド、ポリペ
プチド、又はタンパク質の配列、またはそれらの何れかの断片であり、自然発生
又は合成の分子を指す。HPAP-1の断片は、好ましくは約5〜約15個のアミノ酸の
長さを有し、HPAP-1の生物的活性又は免疫学的活性を保持しているものである。
この文脈において、「断片」、「免疫原性の断片」、または「抗原性の断片」は、好ま
しくは約5〜15のアミノ酸の長さ（最も好ましくは14のアミノ酸の長さ）であっ
てHPAP-1の生物学的活性または免疫学的活性を保持するHPAP-1の断片を指す。

【００２７】用語「増幅」は、核酸配列の追加の複製物を生成することであり、通常は当業
者に周知のポリメラーゼ連鎖反応（PCR）技術を用いて実施される。

【００２８】用語「アンタゴニスト」は、HPAP-1に結合した場合にHPAP-1の生物学的又は免
疫学的活性の効果の程度を低下させたり、効果の持続時間を短縮する分子を指す
。アンタゴニストには、タンパク質、核酸、糖質、或いはHPAP-1の作用を低下さ
せる任意の他の分子が含まれ得る。

【００２９】用語「抗体」は、完全な分子、並びに抗原決定基と結合し得るFa、F(ab)₂、及
びFvフラグメントのようなそれらの断片も指す。HPAP-1ポリペプチドに結合する
抗体は、無処置のポリペプチドを用いて、或いは免疫化する抗原として関与する
小型のペプチドを含むその断片を用いて調製することができる。動物（例えば、
マウス、ラット、またはウサギ）を免疫化するのに用いるポリペプチドまたはオ
リゴペプチドは、RNAの翻訳または化学的に合成されたものから得られ、必要な
らば担体タンパク質と結合可能である。ペプチドと化学的に結合する通常用いら
れる担体には、ウシ血清アルブミン及びサイログロブリン、キーホールリンペッ
トヘモシアニン（KLH）が含まれる。次に、この結合したペプチドを用いて動物
を免疫化する。

【００３０】用語「抗原決定基」は、特定の抗体と接触する分子の断片（即ち、エピトープ
）を指す。タンパク質またはタンパク質の断片を用いてホストの動物を免疫化す
る場合、このタンパク質の多くの領域が、抗原決定基（タンパク質の所定の領域
または3次元構造）と特異的に結合する抗体の産生を誘発し得る。抗原決定基は
抗体への結合について元の抗原（即ち、免疫応答を誘発するために用いられる免
疫原）と競合し得る。

【００３１】用語「アンチセンス」は、特定の核酸配列の「センス」鎖と相補的な核酸配列を
含む任意の成分を指す。アンチセンス分子は、合成や転写を含む任意の方法で作
り出すことができる。この相補的ヌクレオチドは、一度細胞内に導入されると、
細胞によって作られた天然の配列と結合して2重鎖を形成し、転写や翻訳を妨げ
る。「マイナス（−）」なる表現がアンチセンス鎖を指し、「プラス（＋）」な
る表現がセンス鎖を指すことがある。

【００３２】用語「生物学的に活性」は、自然発生の分子の構造的機能、調節機能、又は生
化学的機能を有するタンパク質を指す。同様に「免疫学的に活性」は、天然の、
組換え体の、又は合成のHPAP-1、若しくはその任意のオリゴペプチドの能力を指
し、適当な動物や細胞における特定の免疫応答を誘発し、特定の抗体に結合する
。

【００３３】用語「相補的」または「相補性」は、塩基対によるポリヌクレオチド同士の自
然な結合である。例えば、配列「5'A-G-T3'」は相補的配列「3'T-C-A5'」に結合
する。2つの1本鎖分子間の相補性は、幾つかの核酸のみが結合しているような「
部分的」なものも、或いは1本鎖分子間に完全な相補性が存在するような「完全」
なものもある。核酸鎖同士の相補性の程度は、核酸鎖同士のハイブリダイゼーシ
ョンの効率及び強さに大きな影響を与える。このことは、核酸鎖同士の結合によ
って左右される増幅反応や、ペプチド核酸（PNA）分子の設計及び使用において
特に重要である。

【００３４】ここで用いる「組成物」とは、概して所定のポリヌクレオチド配列またはアミ
ノ酸配列を含む任意の組成物を指す。この組成物には、乾燥した製剤、または水
溶液が含まれ得る。HPAP-1またはHPAP-1の断片をコードするポリヌクレオチドを
含む組成物は、ハイブリダイゼーションプローブとして利用できる。このプロー
ブは凍結乾燥した形態で保存することができ、糖質のような安定化剤と結合させ
ることができる。ハイブリダイゼーションにおいて、このプローブは、塩、界面
活性剤、及び他の物質（例えば、デンハート液、乾燥ミルク、サケ精子DNA等）
を含む水溶液に分散させることができる。

【００３５】用語「コンセンサス配列」は、再度配列決定して不要な塩基が分離された核酸
配列か、XL-PCR kit (Perkin Elmer, Norwalk, CT)を用いて5‘方向及び／又は3
’方向に伸長して再度配列決定した核酸配列か、或いはフラグメントの組み合わ
せのためのコンピュータプログラム（例えば、GELVIEW^TM Fragment Assembly sy
stem, GCG, Madison WI）を用いて2種以上のインサイト社クローンの重複した配
列から組み合わせて作られた核酸配列である。いくつかの配列が伸長され、かつ
組み合わされてコンセンサス配列が作られる。

【００３６】用語「ポリヌクレオチドの発現と相関性を有する」とは、ノーザン解析による
HPAP-1をコードする核酸配列と同一か又は関連する核酸の存在の検出が、サンプ
ル内のHPAP-1をコードする核酸の存在を示しており、従ってHPAP-1をコードする
ポリヌクレオチドからの転写産物の発現と相関性を有している、ということを表
している。

【００３７】用語「欠失」は、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列における変化であり、
結果的に１個またはそれ以上のヌクレオチド若しくはアミノ酸残基が欠けること
である。

【００３８】用語「誘導体」は、ポリペプチド配列、又はポリヌクレオチド配列の化学修飾
を指す。ポリヌクレオチド配列の化学修飾には、例えば、水素からアルキル基、
アシル基、又はアミノ基への置換が含まれる。ポリヌクレオチド誘導体は、自然
発生の分子の生物学的又は免疫学的機能を保持しているポリペプチドをコードす
る。誘導体ポリペプチドは、グリコシル化、ポリエチレングリコール化(pegylat
ion)、または元のポリペプチドの生物学的又は免疫学的機能を保持する別の任意
のプロセスで修飾されたものである。

【００３９】用語「類似性」は、或る程度の相補性を意味する。部分的な類似性と、完全な
類似性の場合がある。用語「類似性」の代わりに「同一性」を用いることができる。
同一の配列が標的の核酸とハイブリダイズするのを少なくとも部分的に阻害する
部分的に相補的な配列は、「実質的に類似な」ことを指す。完全に相補的な配列
と標的配列とのハイブリダイゼーションの阻害は、緩やかな厳密性のもとで、ハ
イブリダイゼーションアッセイ（サザン法またはノーザン法、溶液ハイブリダイ
ゼーション等）を用いて検定可能である。実質的に類似な配列またはハイブリダ
イゼーションプローブは、緩やかな厳密性の下で完全に類似（同一）な配列との
結合について標的の配列と競合し、それを阻害する。このことは、緩やかな厳密
性の条件が、非特異的な結合を許容するようなものであるということを意味する
わけではなく、緩やかな厳密性の条件では2つの配列の相互の結合が特異的（即
ち選択的）相互作用であることが必要である。非特異的結合が存在しないことを
、部分的な程度の相補性（即ち約30%未満の類似性又は同一性）さえも有してい
ない第2の標的配列を用いることにより検査することができる。非特異的結合が
存在しない場合、概ね類似な配列またはプローブは第2の非相補的な標的配列と
ハイブリダイズしない。

【００４０】用語「同一性のパーセント」又は「同一性の%」は、2以上のアミノ酸または核酸配
列の比較において見出された配列の類似性の百分率を指す。同一性のパーセント
は、例えばMEGALIGNプログラム（DNASTAR, Inc.,Madison WI）を用いることによ
って電子的に決定できる。このMEGALIGNプログラムは、例えばclustal Method.
のような種々の方法に従い、2以上の配列の間のアライメントを作成することが
できる（例えば、Higgins,D.G.及びSharp,P.M.(1988)Gene 73:237-244を参照）
。clustalアルゴリズムは、全てのペアの間の距離を調べることによって配列を
クラスターに分類する。クラスターはペアでアライメントされ、次にグループに
おいてアライメントされる。2つのアミノ酸配列（例えば、配列A及び配列B）の
間の類似性のパーセンテージは、（配列Aと配列Bとの間で一致する残基の総数）
／（配列Aの長さ−配列Aにおけるギャップ残基(gap residues)の数−配列Bにお
けるギャップ残基の数）×100によって計算する。2つのアミノ酸の間の低い類似
性または非類似性のギャップは、類似性のパーセンテージの測定に含まれない。
また、核酸配列の間の同一性のパーセントは、例えばJotun Hein Methodのよう
な当業者に周知の他の方法により計算、即ちカウントできる（例えばHein, J.(1
990) Methods Enzymol. 183:626-645参照）。更に配列間の同一性は、例えばハ
イブリダイゼーション条件を変更することによる当業者に周知の別の方法によっ
て測定可能である。

【００４１】「ヒト人工染色体」（HACs）は6kb〜10MbのサイズのDNA配列を含んでおり、安定
した有糸分裂染色体の分離及び維持に必要な全ての要素を含む直鎖状の小染色体
である。

【００４２】用語「ヒト化抗体」は、抗体が本来の結合能力をそのまま保持しながらヒト抗
体により近づくように、非抗体結合領域におけるアミノ酸配列配列を置換した抗
体分子を指す。

【００４３】用語「ハイブリダイゼーション」は、相補的な塩基の間で形成される水素結合
の作用によって核酸の鎖が相補鎖と結合する任意の過程を指す。ハイブリダイゼ
ーション複合体は、溶液中で形成されるか（例えば、C₀t又はR₀t解析）、或いは
核酸は溶液中に存在する一方の核酸と適切な基板に固定されたもう一方の核酸と
の間で形成され得る。

【００４４】用語「挿入」或いは「付加」は、自然発生の分子にみられる配列に対して、1
個または2個以上のヌクレオチド、アミノ酸残基が各々組込まれるような、ヌク
レオチド配列或いはアミノ酸配列の変化を指す。

【００４５】用語「免疫応答」は、炎症、心的外傷、免疫不全症、又は伝染性もしくは遺伝性
の疾患に関連する容態を指す。これらの容態は、細胞および全身の防御系に作用
する種々の因子（例えばサイトカイン、ケモカイン、及び他のシグナル伝達分子
）の発現によって特徴づけられる。

【００４６】用語「マイクロアレイ」とは、所定の基板上に配列された個々のポリヌクレオ
チド又はオリゴヌクレオチドを配列したものを指す。同様に、用語「エレメント」
又は「アレイエレメント」は、支持体（基板）の表面に配置されたハイブリダイズ
可能なポリヌクレオチドを指す。

【００４７】用語「調節(modulate)」は、HPAP-1の活性の変化を指す。例えば、調節によっ
て、タンパク質活性の向上や低下、結合特性の変化、又はHPAP-1の生物学的、機
能的、免疫学的特性等の他の変化がもたらされる。

【００４８】ここで用いる「核酸」または「核酸配列」は、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチ
ド、ポリヌクレオチド、又はそれらの任意の断片を指す。また、これらの用語は
、1本鎖または2本鎖の、センス鎖又はアンチセンス鎖のゲノム起源又は合成起源
のDNA若しくはRNAや、ペプチド核酸（PNA）や、任意のDNA様若しくはRNA様物質
も指す。用語「断片（フラグメント）」は、SEQ ID NO:2を特別に同定する独特
のポリヌクレオチド配列の領域を含む核酸配列（例えば、同じゲノム内の任意の
別の配列とは異なる）を指す。例えば、SEQ ID NO:2の断片は、ハイブリダイゼ
ーション及び増幅技術に有用であり、また、関連するポリヌクレオチド配列から
SEQ ID NO:2を区別する類似性の測定にも有用である。SEQ ID NO:2の断片は、少
なくとも約ヌクレオチド15〜20個の長さである。SEQ ID NO:2及びこの断片に対
応するSEQ ID NO:2の領域の正確な長さは、断片の所期の目的に基づいた当業者
に周知の一般的な技術の1つを用いてルーチン的に決定できる。或いは、断片が
翻訳された場合には、機能的特徴（例えば、完全長のポリペプチドの抗原性等）
および構造的特徴（例えば、完全長のポリペプチドのATP結合部位等）を保持し
たポリペプチドを形成し得る。

【００４９】用語「操作可能に関連する」、即ち「操作可能に連結する」は、機能的に関係した
核酸配列を指す。プロモーターがコードされたポリペプチドの転写を制御する場
合、プロモーターはコード配列と操作可能に関連する、即ち操作可能に連結する
。操作可能に関連した、即ち操作可能に連結した核酸配列が、読み枠に存在ある
いは近接する際に、所定の遺伝因子（例えば、リプレッサー遺伝子）は、コード
されたポリペプチドには連続的に連結せずに、それでもポリペプチドの発現を制
御するオペレーター配列に結合する。

【００５０】用語「オリゴヌクレオチド」は、PCR増幅又はハイブリダイゼーションアッセ
イ、またはマイクロアレイで用いることができる核酸配列であって、長さが少な
くとも約6ヌクレオチドから約60ヌクレオチド程度のもので、好適には15〜30ヌ
クレオチド、より好適には20〜25ヌクレオチドであるものを指す。ここで用いる
「オリゴヌクレオチド」は、当技術分野において一般に定義されている用語「アン
プライマー」、「プライマー」、「オリゴマー」、及び「プローブ」と概ね同義
である。

【００５１】ここで用いる「ペプチド核酸」（PNA）は、リジンを末端とするアミノ酸残基
のペプチドバックボーンに結合した5ヌクレオチド以上の長さのオリゴヌクレオ
チドを含むアンチセンス分子又は抗遺伝子剤(anti-gene agent)を指す。末端の
リジンがその組成に溶解性を賦与している。PNAは相補的な1本鎖DNAやRNAに優先
的に結合して転写物の伸長を止め、またPNAをポリエチレングリコール化して細
胞におけるPNAの寿命を延ばすことが可能である（Nielsen, P.E.ら(1993) Antic
ancer Drug Des. 8:53-63）。

【００５２】用語「サンプル」は、その最も広い意味で用いられ、体液や、細胞から分離さ
れた染色体、細胞小器官、又は細胞膜からの抽出物や、細胞や、（溶液中の、或
いは基板に結合した）ゲノムのDNA、RNA、またはcDNAや、組織や、組織プリント
その他を含み得る。

【００５３】用語「特異的結合」または「特異的に結合する」は、抗体ならびにタンパク質
もしくはペプチド、抗体及びアンタゴニストの相互作用を指す。この相互作用は
、タンパク質の特定の構造（例えば、結合する分子が認識する抗原決定基、つま
りエピトープ）の存在に左右されることを意味している。例えば、抗体がエピト
ープ「A」に対して特異的である場合、標識された遊離した「A」及びその抗体を
含む反応において、エピトープA（つまり遊離し、標識されていないA）を含むポ
リヌクレオチドが存在することにより、抗体に結合した標識されたAの量が低下
する。

【００５４】用語「厳密（ストリンジェント）な条件」は、ポリヌクレオチドと特許請求の
範囲に記載されたポリヌクレオチドとのハイブリダイゼーションが可能な条件を
指す。厳密な条件は、塩濃度および温度によって規定される。幾つかの膜ベース
のハイブリダイゼーションにおいて、これらの条件は変更され得る（例えば、ホ
ルムアミド等の有機溶剤を溶液に添加する場合に温度を低下させる）。一般に、
塩の濃度を低下させることや、ハイブリダイゼーション温度を上昇させることに
よって厳密性が増す。

【００５５】用語「実質的に精製」は、天然の環境から取り除かれた核酸配列又はアミノ酸
配列であって、天然にはそれが結合して存在する他の構成成分から単離又は分離
されて、その構成要素が60%以上、好ましくは75%以上、最も好ましくは90%以上
除去された核酸配列又はアミノ酸配列である。

【００５６】用語「置換」は、それぞれ1個または2個以上のヌクレオチド或いはアミノ酸を
、別のヌクレオチド或いはアミノ酸に各々置換することを指す。

【００５７】ここで用いる「基板」とは、膜、フィルター、チップ、スライド、ウエハ、フ
ァイバー、磁気或いは非磁気のビーズ、ゲル、管、プレート、ポリマー、微細粒
子、毛管を含む適切な固体または半固体の支持体のことである。基板は、ポリヌ
クレオチドやポリペプチドが結合する壁、溝、ピン、チャンネル、及び孔などの
様々な表面形態をとることが可能である。

【００５８】用語「形質転換」の定義は、外来性のDNAが入り込みレシピエント細胞を変化
させるプロセスを意味する。形質転換は、当業者に周知の種々の方法を用いた天
然または人工の条件の下で起こり、また外来性の核酸配列を原核細胞または真核
細胞の宿主細胞に導入するための任意の既知の方法に基づき得る。形質転換の方
法は、形質転換される宿主細胞のタイプによって選択され、以下に限定はされな
いが、ウイルス感染、熱ショック、電気穿孔法（エレクトロポレーション）、リ
ポフェクション、及び微粒子銃を用いる方法が含まれる。このような「形質転換
された」細胞には、挿入されたDNAを自律的に複製するプラスミドとして、また
は宿主の染色体の一部として複製が可能な安定的に形質転換された細胞が含まれ
、またそれは限られた時間で導入されたDNAやRNAを一過性に発現する細胞を指す
。

【００５９】ここで用いるHPAP-1ポリペプチドの「変異体」は、1又は2以上のアミノ酸残基
が変異したアミノ酸配列である。この変異体は「保存的」変化を含むものであり
得、この場合、例えばロイシンをイソロイシンで置き換えるように、置換される
アミノ酸が類似な構造的及び化学的特性を有する。稀にではあるが、例えばグリ
シンがトリプトファンで置換されるように、変異体が「非保存的」に変化する場
合もある。類似した小さい変化には、アミノ酸の欠失または挿入、或いはその両
方が含まれる。例えばLASERGENEソフトウエア（DNASTAR）のような周知のコンピ
ュータプログラムを用いて、何れのアミノ酸残基が生物学的或いは免疫学的活性
を損なわずに置換、挿入、又は除去可能であるということを決定するガイダンス
を提供することができる。

【００６０】ポリヌクレオチド配列の文脈の中で用いられる「変異配列」とは、HPAP-1に関
連したポリヌクレオチド配列を包含し得る。この定義には、例えば「アレル」（
前述）、「スプライス」、「種」、「多形性」変異配列も含まれる。スプライス
変異配列は基準分子と有意な同一性を有し得るが、一般にmRNAプロセッシングの
際のエキソンの交互のスプライシングによってポリヌクレオチドの数が増減する
。対応するポリペプチドは、付加的な配列若しくは機能ドメインを有するか、或
いは配列若しくはドメインを含まない。種変異配列は、種によって異なるポリヌ
クレオチド配列である。生じたポリペプチドは、一般に互いに有意なアミノ酸同
一性を有する。多形性変異配列は、所定の個別の種の間の特定の遺伝子のポリヌ
クレオチド配列における変異である。また、多形性変異配列には、ポリヌクレオ
チド配列の1つの塩基が変化する「単一のヌクレオチド多形性」（SNP）が包含さ
れ得る。SNPの存在は、例えば、或る集団、病状、又は病状の性向を表し得る。

【００６１】発明本発明は、新規のヒトプレセニリン関連タンパク質（HPAP-1）、HPAP-1をコー
ドするポリヌクレオチド、並びに癌、免疫不全症、神経疾患、及び生殖障害の予
防、診断、又は治療のためのこれらの組成物の利用法の発見に基づくものである
。

【００６２】本発明のHPAP-1をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコン
ピュータ検索（例えば、BLAST）を用いて心臓の心房粘液腫cDNAライブラリー（L
ATRTUT02）からのインサイト社クローン1353337において初めて同定された。コ
ンセンサス配列、SEQ ID NO:2は、次に挙げる重複且つ／又は伸長された核酸配
列、インサイト社クローン、991723R6 (COLNNOTII)、1353337H1、1353337T6、及
び1353337F6 (LATRTUT02) 並びに3555771H1 (LUNGNOT31)から導出された。

【００６３】一実施例において、本発明は図１Ａ、図１Ｂ、及び図１Ｃに示すSEQ ID NO:1
のアミノ酸配列を含むポリペプチドを包含する。HPAP-1は、180個のアミノ酸の
長さであり、残基T103におけるカゼインキナーゼIIによる潜在的リン酸化部位と
、残基T70、T95、T103、及びS158におけるプロテインキナーゼCによる潜在的リ
ン酸化部位とを有する。膜貫通ドメインに対するHMMに基づく分析によって、HPA
P-1の約V85からF101までの残基ならびに約L130からV148まで残基の2つの領域が
、潜在的膜貫通領域として同定された。図２に示すように、HPAP-1は、ヒトプレ
セニリンI-463（GI 1244638; SEQ ID NO:3）と化学的および構造的相同性を共有
する。詳述すると、HPAP-1とヒトプレセニリンI-463は89％の同一性を有し、HPA
P-1に見られる4つの潜在的リン酸化部位を共に有する。更に、2つの潜在的膜貫
通ドメインが、ヒトプレセニリンI-463の膜貫通ドメインI及びIIに対応するHPAP
-1、並びに早期発症型の家族性のアルツハイマー病に関連するプレセニリンにお
けるミスセンス変異に対する2つの提案された部位に対応するHPAP-1の残基N131
及びM142において同定された。図３Ａ、図３Ｂ、及び図３Ｃに示すように、HPAP
-1の核酸配列（SEQ ID NO:2）は、ヒトプレセニリンI-463の核酸配列（GI 12446
37; SEQ ID NO:4）と化学的および構造的相同性を共有する。詳述すると、その2
つの配列は66％の同一性を有する。HPAP-1をコードする配列は、HPAP-1における
1番目から184番目のヌクレオチドまで延在する5'−UTRの存在によって、ヒトプ
レセニリンI-463に対する配列とは大きく異なる。更に、その2つの配列は、HPAP
-1の約656番目のヌクレオチドから分子の末端まで延在する3' 領域において大き
く異なる。約656番目から724番目までのヌクレオチドのSEQ ID NO:2の断片は、
約S158からT180までのアミノ酸残基のSEQ ID NO:1の断片をコードし、例えばハ
イブリダイゼーションプローブとして有用である。ノーザン分析は、種々のライ
ブラリーにおいてこの配列の発現を示し、これらの少なくとも44%が不死化した
もの即ち癌性であり、少なくとも26%が免疫反応に関連するものである。特に注
目すべきは、神経及び生殖組織におけるHPRAP-1の発現である。

【００６４】また、本発明はHPAP-1の変異体を含む。HPAP-1変異体は、HPAP-1アミノ酸配列
に対して好ましくは少なくとも80%、より好ましくは少なくとも90%、最も好まし
くは少なくとも95%以上のアミノ酸配列の同一性を有し、またHPAP-1の機能的も
しくは構造的特徴の少なくとも1つを含む。

【００６５】更に、本発明はHPAP-1をコードするポリヌクレオチドを包含する。特定の実施
例において、本発明はHPAP-1をコードするSEQ ID NO:2の配列を含むポリヌクレ
オチド配列を包含する。

【００６６】更に、本発明はHPAP-1をコードするポリヌクレオチドの変異配列を含む。特に
、そのようなポリヌクレオチドの変異配列は、HPAP-1をコードするポリヌクレオ
チド配列に対して少なくとも80%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましく
は少なくとも95%以上のポリヌクレオチド配列の同一性を有する。本発明の特定
の態様には、SEQ ID NO:2の変異配列が含まれ、それはSEQ ID NO:2に対して少な
くとも80%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%以上
のポリヌクレオチド配列の同一性を有する。上記のポリヌクレオチドの変異配列
は何れもHPAP-1の機能的または構造的特徴の少なくとも1つを含むアミノ酸配列
をコードすることが可能である。

【００６７】遺伝暗号の縮重の結果、既知の遺伝子及び自然発生の遺伝子のポリヌクレオチ
ド配列に対する最小の類似性を有する幾つかのものを含め、多数のHPAP-1をコー
ドするポリヌクレオチド配列が作り出されることが、当業者には理解されるであ
ろう。従って、本発明は、可能なコドン選択に基づく組合せの選択により作り出
され得るポリヌクレオチド配列の可能な全ての変異を考慮している。これらの組
合せは自然発生のHPAP-1のヌクレオチド配列に対し適用されるような標準のトリ
プレット遺伝暗号に従い作り出されるものであり、また全てのそのような変異は
ここに明確に開示されると考えられたい。

【００６８】 HPAP-1をコードするヌクレオチド配列及びその変異配列は、適切に選択された
厳密性の条件下に於いて、自然発生のHPAP-1のヌクレオチド配列に対してハイブ
リダイズ可能であることが好ましいが、それは非自然発生のコドンを含める等の
実質的に異なるコドンの用法を有するHPAP-1をコードするヌクレオチド配列を作
り出すのに有利である。特定のコドンが宿主により利用される頻度に従い、真核
生物又は原核生物の宿主に於いてペプチドの発現が起こる割合を高めるようにコ
ドンを選択することができる。コードされるアミノ酸配列を変化させることなし
にHPAP-1及びその誘導体をコードするヌクレオチド配列を実質的に変更する別の
理由は、自然発生の配列から作り出された転写物よりも長い半減期のようなより
望ましい特性を有するRNA転写物を作り出すためである。

【００６９】また本発明は、HPAP-1及びHPAP-1の誘導体をコードするDNA配列、またはその
断片を専ら合成化学によって作り出すことを含む。作製の後に、合成配列を当業
者によって周知の試薬を用いて任意の多数の利用可能な発現ベクター及び細胞系
に挿入することが可能である。更に、合成化学を利用してHPAP-1をコードする配
列又はそれらの任意のフラグメントに突然変異を導入し得る。

【００７０】また本発明に包含されるものには、種々の厳密な条件の下で、請求項に記載さ
れたポリヌクレオチド配列、また特にSEQ ID NO:2若しくはSEQ ID NO:2の断片に
対してハイブリダイズ可能なポリヌクレオチド配列が含まれる（例えば、Wahl,
G.M.及びS.L. Berger(1987) Methods Enzymol. 152:399-407；Kimmel, A.R.(198
7) Methods Enzymol. 152:507-511参照）。例えば、厳密な塩濃度は、通常は約7
50mM未満の塩化ナトリウム及び約75mM未満のクエン酸3ナトリウムであり、好ま
しくは約500mM未満の塩化ナトリウム及び約50mM未満のクエン酸3ナトリウムであ
り、最も好ましくは約250mM未満の塩化ナトリウム及び約25mM未満のクエン酸3ナ
トリウムである。例えばホルムアミド等の有機溶剤の非存在下では厳密性の低い
ハイブリダイゼーションとなり、一方で約35%以上のホルムアミド、最も好まし
くは約50%以上のホルムアミドの存在下において厳密性の高いハイブリダイゼー
ションとなる。厳密な温度条件は、通常は約30℃以上であり、より好ましくは約
37℃以上であり、最も好ましくは約42℃以上である。例えば、ハイブリダイゼー
ション時間、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）等の薬品濃度、キャリアDNAの含有
または排除等の変動する付加的なパラメーターは、当業者には周知である。これ
らの必要とする種々の条件を組合わせることによって、様々なレベルの厳密性が
実現される。好適な実施例では、温度30℃、750mMの塩化ナトリウム、75mMのク
エン酸3ナトリウム、及び1%のSDSにおいてハイブリダイゼーションが実施される
。より好適な実施例では、温度37℃、500mMの塩化ナトリウム、50mMのクエン酸3
ナトリウム、1%のSDS、35%のホルムアミド、及び100μg/mlの変性サケ精子DNA（
ssDNA）においてハイブリダイゼーションが実施される。最も好適な実施例では
、温度42℃、250mMの塩化ナトリウム、25mMのクエン酸3ナトリウム、1%のSDS、5
0%のホルムアミド、及び200μg/mlのssDNAにおいてハイブリダイゼーションが実
施される。これらの条件の有益な変更については、当業者には容易に理解される
であろう。

【００７１】ハイブリダイゼーションの後の洗浄過程においても厳密性は変更し得る。洗浄
の厳密な条件は、塩濃度および温度によって規定できる。前述のように、塩濃度
を低下させるか、或いは温度を上昇させることで洗浄の厳密性が増大し得る。例
えば、洗浄過程の厳密な塩濃度の条件は、好ましくは約30mM未満の塩化ナトリウ
ム及び約3mM未満のクエン酸3ナトリウムであり、最も好ましくは約15mＭ未満の
塩化ナトリウム及び約1.5mM未満のクエン酸3ナトリウムである。洗浄過程の厳密
な温度の条件は、通常は約25℃以上であり、より好ましくは約42℃以上であり、
最も好ましくは約68℃以上である。好適実施例では、洗浄過程は、温度25℃、30
mMの塩化ナトリウム、3mMのクエン酸3ナトリウム、及び0.1%SDSにおいて実施さ
れる。より好適な実施例では、洗浄過程は、温度42℃、15mMの塩化ナトリウム、
1.5mMのクエン酸3ナトリウム、及び0.1%SDSにおいて実施される。最も好適な実
施例では、洗浄過程は、温度68℃、15mMの塩化ナトリウム、1.5mMのクエン酸3ナ
トリウム、及び0.1%SDSにおいて実施される。これらの条件の更なる変更につい
ては、当業者には容易に理解されるであろう。

【００７２】 DNA塩基配列決定方法および分析は当業者に周知のものである。その方法は、D
NAポリメラーゼＩのクレノウフラグメント、SEQUENASE酵素（Ameraham Pharmaci
a Biotech Ltd., Piscataway NJ）、Taqポリメラーゼ（Perkin Elmer Corp.）、
耐熱性T7ポリメラーゼ（Ameraham Pharmacia Biotech）、或いはELONGASE増幅シ
ステム（Life Technologies, Gaithersburg MD）に於いて発見されたようなプ
ルーフリーディングエキソヌクレアーゼ及びポリメラーゼの組合せのような酵素
を使用する。配列の準備は、例えばABI CATALYST 800（Perkin Elmer）若しくは
MICROLAB 2200（Hamilton Co., Reno NV）のような装置を熱サイクラー(th
ermal cyclers)と組合せることによって自動化することが好ましい。また、配列
決定は、ABI 373 or 377 sequencing systems （Perkin Elmer）若しくはMEGABA
CE 1000 capillary electrophoresis system（Molecular Dynamics, Inc., Sunn
yvale CA）等によって自動化可能である。配列は、当業者に周知のコンピュータ
プログラム及びアルゴリズムを用いて分析可能である（例えば、Ausubei, F.M.
(1997) Short Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York
NY, unit 7.7; Meyers, R.A. (1995) Molecular Biology and Biotechnology,
Wiley VCH, New York NYを参照）。

【００７３】 HPAP-1をコードする核酸配列は、部分的なヌクレオチド配列を用いて先行技術
に於いて周知の種々のPCR法をベースとした方法で伸長し、プロモータ及び調節
エレメントのような上流の配列を検出することができる。例えば、用いられる方
法の1つである制限部位PCR法は、一般的なプライマー及びネスト化プライマーを
用いてクローニングベクター内のゲノムDNAから未知の配列を増幅する（例えば
、Sarkar, G. (1993) PCR Methods Applic. 2:318-322を参照）。逆PCR法を用い
る別の方法では、多岐に伸長して環状化鋳型から未知の配列を増幅するプライマ
ーを用いる。この鋳型は、既知のゲノム遺伝子座及びその周辺の配列を含む制限
酵素断片に由来する。（Triglia, T.ら（1988）Nucleic Acids Res. 16:8186）
。第3の方法として、キャプチャーPCR法(capture PCR)には、ヒト及び酵母菌の
人工染色体DNAの既知の配列に隣接するDNA断片のPCR増幅が含まれる（例えば、L
agerstrom, M.ら（1991）PCR Methods Applic 1:111-119を参照）。この方法で
は、多数の制限酵素の消化及びライゲ−ションを用いて、PCRを行う前に未知の
配列の領域に組換え2本鎖配列を挿入することができる。また、未知の配列を回
収するのに用いられ得る他の方法が当業者に周知である（例えば、Parker, J.D.
ら (1991)Nucleic Acids Res. 19:3055-306を参照）。更に、PCR法、ネスト化
プライマー、PromoterFinderライブラリー（Clontech, Palo Alto, CA）を用い
て、ゲノムDNA内の歩行が可能である。この方法ではライブラリをスクリーニン
グする必要がなく、イントロン／エキソン移行部の発見に有用である。全てのPC
R法をベースとした方法については、プライマーは、OLIGO4.06 Primer Analysis
software（National Biosciences, Plymouth, MN）のような市販のソフトウェ
ア又は別の適切なプログラムを用いて、長さが22〜30ヌクレオチド、GC含有率が
約50%以上、また約68℃〜72℃の温度で鋳型に対してアニーリングするよう設計
され得る。

【００７４】完全長cDNAをスクリーニングするとき、大きなcDNAを含むようにサイズ選択さ
れたライブラリーを用いることが好ましい。また、遺伝子の5’領域を配列を含
むことが多いランダムプライムド(random-primed)ライブラリーは、oligo d(T)
ライブラリーで完全な長さのcDNAを得られない場合に好適である。またゲノムラ
イブラリーは、5’非転写領域における配列の伸長のために役立ち得る。

【００７５】配列決定やPCRの産物のヌクレオチド配列のサイズ分析または確認のために、
市販のキャピラリー電気泳動法システムを用いることができる。特に、キャピラ
リーシークエンシングでは、電気泳動分離のための流動性ポリマー、4つの異な
るヌクレオチドに特異的なレーザーで活性化される蛍光色素、及び放射された波
長の検出を行うCCDカメラを使用し得る。出力／光強度は適切なソフトウエア（
例えば、Perkin Elmer製のGENOTYPER及びSEQUENCE NAVIGATORソフトウェア）を
用いて電気信号に変換され、サンプルのローディングからコンピュータ解析及び
電子データ表示までの全過程がコンピュータ制御され得る。キャピラリー電気泳
動法は、特定のサンプル内に限られた量だけしか存在しないこともあるDNA断片
の配列決定に特に好適である。

【００７６】本発明の別の実施例では、HPAP-1をコードするポリヌクレオチド配列またはそ
の断片を組換えDNA分子に用いて、HPAP-1、その断片またはその機能的等価物の
適切な宿主細胞内における発現を指向することができる。遺伝暗号の固有の縮重
によって、実質的に同一、即ち機能的に等価なアミノ酸配列をコードする他のDN
A配列が作り出され、HPAP-1の発現のために用いることができる。

【００７７】限定はしないが遺伝子産物のクローニング、プロセシング及び／又は発現を改
変すること等の種々の理由により、HPAP-1をコードする配列を改変するために、
本発明のヌクレオチド配列を当業者に周知の方法を用いて操作可能である。ラン
ダムな断片化によるDNA混合や、遺伝子断片及び合成オリゴヌクレオチドのPCR再
構成を用いて、ヌクレオチド配列を操作できる。例えば、オリゴヌクレオチド媒
介の部位特異的変異誘発により、新しい制限部位を生成する突然変異の挿入、グ
リコシル化パターンの変更、コドン選好の変化、スプライシングバリアントの生
成等が可能である。

【００７８】本発明の別の実施例では、当業者に周知の化学的手法を用いて、HPAP-1をコー
ドする配列の全体、或いはその一部を合成することができる（例えば、Caruther
s.M.H.ら(1980)Nucl.Acids Res.Symp.Ser.215-223；Horn,T.ら(1980)Nucl.Acids
Res.Symp.Ser.225-232参照）。或いは、化学的手法を用いて、HPAP-1そのもの
又はその断片を合成することができる。例えば、種々の固相技術を用いてペプチ
ド合成を行うことができる（例えば、Roberge, J.Y.ら(1995) Science 269:202-
204参照）。また、ABI 431Aペプチドシンセサイザ（Perkin Elmer Corp.）を用
いて合成の自動化を行なうことができる。更に、HPAP-1のアミノ酸配列もしくは
その任意の部分を、直接の合成において改変することにより、並びに／又は他の
タンパク質もしくはその任意の部分に由来する配列と結合させることにより、変
異体ポリペプチドを生成可能である。

【００７９】そのペプチドは、分離用の高速液体クロマトグラフィにより実質的に精製する
ことができる（例えば、Chiez, R.M.およびRegnier. F.Z. (1990) Methods Enzy
mol. 182:392-421参照）。合成されたペプチドの組成は、アミノ酸解析或いは配
列決定法により確認することができる（Creighton,T.(1983) Proteins. Structu
res avd Molecular Properties,WH Freeman and Co.,New York,NY）。

【００８０】生物学的に活性なHPAP-1を発現させるために、HPAP-1をコードするヌクレオチ
ド配列またはその誘導体を、適切な発現ベクター（即ち、適切な宿主に挿入され
たコーディング配列の転写および翻訳に必要なエレメントを含むベクター）に挿
入する。これらのエレメントには、ベクター及びHPAP-1をコードするポリヌクレ
オチド配列におけるエンハンサー、構成型及び発現誘導型のプロモーター、5’
及び3’の非翻訳領域等の調節配列が含まれる。このようなエレメントの長さ及
び特異性は変化し得る。特定の開始シグナルを利用して、HPAP-1をコードする配
列のより効果的な翻訳を行なうことが可能である。このようなシグナルには、AT
G開始コドンや例えばコザック配列等の隣接する配列が含まれる。HPAP-1をコー
ドする配列、その開始コドン、及び上流の調節配列が、適切な発現ベクターに挿
入された場合は、付加的な転写調節シグナルや翻訳調節シグナルは不用となり得
る。しかしながら、コーディング配列或いはその断片のみが挿入された場合は、
読み枠の中のATG開始コドンを含む外来性の翻訳調節シグナルが発現ベクターよ
って与えられなければならない。外来性の翻訳エレメント及び開始コドンは、天
然及び合成の種々のものからなり得る。用いられる特定の宿主細胞株に適当なエ
ンハンサーを含むことにより、発現の効率を高めることが可能である（例えば、
Scharf, D. ら (1994) Results Probl. Cell Differ. 20:125-162.を参照）。

【００８１】 HPAP-1をコードする配列および適切な転写や翻訳の調節領域を含む発現ベクタ
ーを作製するために、当業者に周知の方法が用いられる。これらの方法には、in
vitro組換えDNA技術、合成技術、及びin vivo遺伝的組換え技術が含まれる（例
えば、Sambrook, J.ら(1989)Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold S
pring Harbor Press, Plainview, NY, ch.4,8,及び16-17；Ausubel,(前出)参照
）。

【００８２】 HPAP-1をコードする配列を包含し、発現するために、種々の発現ベクター／宿
主系が利用できる。これらには、以下に限定しないが、組換え型のバクテリオフ
ァージ、プラスミド或いはコスミドDNA発現ベクターで形質転換した細菌のよう
な微生物や、酵母菌発現ベクターで形質転換した酵母菌や、ウイルス発現ベクタ
ー（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系や、ウイルスの発現ベク
ター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス（CaMV）またはタバコモザイクウ
イルス（TMV））或いは細菌（例えば、TiまたはpBR322プラスミド）で形質転換
した植物細胞系や、或いは動物細胞系が含まれる。本発明は、利用される宿主細
胞によって限定されるものではない。

【００８３】細菌系では、多数のクローニングベクター及び発現ベクターを、HPAP-1をコー
ドするポリヌクレオチド配列の使用の目的に応じて選択できる。例えば、HPAP-1
をコードするポリヌクレオチド配列の日常的なクローニング、サブクローニング
、及び増殖は、BLUESCRIPTプラスミド（Stratagene, La San Jolla CA）又はpSp
ort1 plasmid （Life Technologies）等の多機能性E.coliベクターを用いて実施
することが可能である。ベクターの多数のクローニング部位へのHPAP-1をコード
する配列のライゲーションによりlacZ遺伝子が破壊され、組換え分子を含む形質
転換された細菌の同定のための比色スクリーニング法が可能となる。更に、これ
らのベクターは、クローニングされた配列のin vitroでの転写、ジデオキシーク
エンシング、ヘルパーファージによる1本鎖の救出、入れ子状態の欠失の生成に
有用である（例えば、Van Heeke. G.及びS.M. Schuster (1989) J. Biol. Chem.
264:5503-5509を参照）。例えば、抗体産生の目的等に多量のHPAP-1が必要な場
合、ハイレベルなHPAP-1の発現をもたらすベクターが用いられ得る。例えば、強
力な誘発性のT5又はT7バクテリオファージプロモーターを含むベクターが用いら
れ得る。

【００８４】 HPAP-1の生成に酵母の発現系を利用できる。酵母菌Saccharomyces cerevisiae
又はPichia pastorisにおいて、α因子、アルコールオキシダーゼ、及びPGHなど
の構成型又は誘導型のプロモーターを含む多種のベクターを使用可能である。更
に、このようなベクターは、発現したタンパク質の分泌若しくは細胞内保持の何
れかを導き、安定した増殖のために宿主ゲノムの中に外来性の配列を組込みを可
能とする（例えば、Ausubel, 前出; 及びScorer, C.A.ら(1994) Bio/Technology
12:181-184を参照）。

【００８５】植物系もHPAP-1の発現に使用できる。HPAP-1をコードする配列の転写は、ウイ
ルス性のプロモータ（例えば、CaMVの35S及び19Sプロモーター単独、又はTMV由
来のオメガリーダー配列との組合わせ）で促進され得る（Takamatsu, N.ら(1987
) EMBO J. 6:307-311）。これらの作製物は、直接のDNA形質転換または病原体媒
介の形質移入によって、植物細胞中に導入可能である。（例えば、The McGraw H
ill Yearbook of Science and Technology (1992) McGraw Hill, New York NY,
pp. 191-196を参照）。

【００８６】哺乳類の細胞においては、多数のウイルスベースの発現系を利用することがで
きる。発現ベクターとしてアデノウイルスが用いられる場合、HPAP-1をコードす
る配列が、後発のプロモータ及び三連のリーダー配列からなるアデノウイルス転
写／翻訳複合体の中に結合され得る。ウイルスのゲノムの非必須E1又はE3領域に
おける挿入により、宿主細胞においてHPAP-1を発現する感染性のウイルスが得ら
れる（例えば、Logan, J.及びShenk, T.(1984)Proc. Natl. Acad. Sci. 81:3655
-3659を参照）。さらに、ラウス肉腫ウイルス（RSV）エンハンサーのような転写
エンハンサーを、哺乳類の宿主細胞内の発現を増大させるために用いることがで
きる。また、タンパク質の高レベルの発現のために、SV40またはEBVをベースと
したベクターを用いることができる。

【００８７】また、ヒト人工染色体（HAC）を用いることにより、プラスミドに含まれ発現
され得るものに比べてより大きなDNAの断片を供給することもできる。治療を目
的とし、6kb〜10MbのHACを構築して従来のデリバリー方法（リポソーム、ポリカ
チオンのアミノポリマー、又は小胞）を介して供給することができる（例えば、
Harrington, J.J.ら(1997) Nat Genet. 15:345-355を参照）。

【００８８】哺乳類系の組換え型タンパク質の産生を長期間にわたり確保するためには、細
胞株におけるHPAP-1の安定した発現が好ましい。例えば、発現ベクターを用いて
HPAP-1をコードする配列を細胞株に形質転換することが可能であり、その発現ベ
クターには、ウイルス起源の複製及び／若しくは内在性の発現エレメント並びに
同一或いは個別のベクターの上の選択マーカー遺伝子が含まれる。ベクターの導
入の後、選択培地に切り替える前に濃縮培地内で細胞を1〜2日間増殖させる。選
択可能なマーカーの目的は、選択的な媒介物に対して耐性を与えることであり、
またその存在によって導入された配列をうまく発現する細胞の増殖および回収が
可能とすることである。安定的に形質転換された細胞の耐性クローンは、その細
胞の型に適した組織培養技術を用いて増殖することができる。

【００８９】形質転換された細胞株を回収するために任意の数の選択系を用いることができ
る。これらには、以下に限定しないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ
及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子が含まれ、それぞれは、
tk⁻及びapr⁻細胞において用いられる（例えば、Wigler,M.ら(1977)Cell 11:22
3-32；Lowy,I.ら(1980)Cell 22:817-23参照）。また代謝拮抗剤、抗生剤或いは
除草剤への耐性を選択の基礎として用いることが可能で、例えばdhfrはメトトレ
キセートに対する耐性を与え、neoはアミノグリコシドネオマイシン及びG-418に
対する耐性を与え、als或いはpatはクロルスルフロン(chlorsulfuron)、ホスフ
ィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ(phosphinotricin acetyltransferase
)に対する耐性を与える（例えば、Wigler, M.ら(1980) Proc. Natl. Acad. Sci.
77:3567-70；Colberre-Garapin, F. ら(1981) J. Mol. Biol. 150:1-14；及びM
cGraw Hill Yearbook, 前出を参照）。さらに選択可能な遺伝子として、例えば
、代謝産物に対する細胞の必要性を変更するtrpB及びhisDが文献に記載されてい
る（例えば、Hartman, S.C.及びR.C. Mulligan(1988) Proc. Natl. Acad. Sci.
85:8047-8051参照）。例えば、アントシアニン、緑色蛍光タンパク質（GFP;CLON
TECH）、β-グルクロニダーゼ及びその基質GUS、ルシフェラーゼ及びその基質ル
シフェリン等の可視マーカーを利用できる。これらのマーカーは形質転換体を同
定するだけでなく、特定のベクター系による一過性の或いは安定的なタンパク質
発現の量を定量するために広く用いられる（例えば、Rhodes, C.A.ら(1995)Meth
ods Mol. Biol.55:121-131参照）。

【００９０】マーカー遺伝子発現の存在／非存在によって目的の遺伝子の存在も示唆される
が、その遺伝子の存在及び発現の確認を必要とすることもある。例えばHPAP-1を
コードする配列がマーカー遺伝子配列内に挿入された場合、HPAP-1をコードする
配列を含む形質転換された細胞は、マーカー遺伝子の機能が存在しないことによ
り同定できる。或いは、単一のプロモータの制御下において、HPAP-1をコードす
る配列とマーカー遺伝子を直列に配置することができる。選択または誘導に応じ
た標識遺伝子の発現は、通常直列に配置された配列の発現も同様に示す。

【００９１】一般に、当業者に周知の様々な方法により、HPAP-1をコードする核酸配列を含
みHPAP-1を発現する宿主細胞を同定できる。このような方法には、以下に限定し
ないが、DNA−DNA或いはDNA−RNAハイブリダイゼーション、PCR増幅、並びに核
酸とタンパク質配列を検出及び／若しくは定量するための技術に基づく膜、溶液
、若しくはチップを含むタンパク質バイオアッセイ又はイムノアッセイが含まれ
る。

【００９２】特異的なポリクローナル抗体若しくはモノクローナル抗体のいずれかを用いる
HPAP-1の発現を検出・測定するための免疫学的手法は、当業者に周知のものであ
る。そのような技術の例には、酵素結合免疫検定法（ELISA）、ラジオイムノア
ッセイ（RIAs）及び蛍光細胞分析分離（FACS）が含まれる。HPAP-1上において2
つの非干渉エピトープに対して反応するモノクローナル抗体を利用する二部位の
モノクローナルベースのイムノアッセイ（two-site, monoclonal-based immunoa
ssay）が好ましいが、競合的結合実験も用いられうる。これらアッセイおよび他
のアッセイは、当業者によって開示されている（例えば、Hampton, R.ら(1990); Serological Methods, a Laboratory Manual , APS Press,St Paul,MN Section I
V；Coligan, J. E.ら(1997) Current Protocols in Immunology, Greene Pub. A
ssociates and Wiley-lnterscience, New York, NY; 及びMaddox, DE.ら(1983)J
. Exp. Med. 158:1211-1216を参照）。

【００９３】多様なラベル及び結合技術が当業者には周知であり、そして種々の核酸及びア
ミノ酸のアッセイにおいて用いることができる。HPAP-1をコードするポリヌクレ
オチドに関係する配列を検出するための、標識されたハイブリダイゼーションプ
ローブやPCRプローブを作製するための手段には、オリゴ標識(oligolabeling)、
ニックトランスレーション法、末端標識(end-labeling)、或いは標識ヌクレオチ
ドを用いるPCR増幅などが含まれる。或いは、HPAP-1をコードする配列、又はそ
の任意の断片を、mRNAプローブの作製のためのベクターにクローン化できる。そ
のようなベクターは当業者に周知で、また市販されており、これを用いて、例え
ばT7、T3或いはSP6のような適切なRNAポリメラーゼ及び標識したヌクレオチドを
加えることによってin vitroでRNAプローブを合成することができる。これらの
方法は、種々の市販のキット（Amersham Pharmacia Biotech, Promega (Madison
WI), 及びUS Biochemical (Cleveland OH) 提供）を用いて実施することができ
る。検出を容易にするために用いる適切なレポーター分子、即ち標識には、放射
性核種、酵素、蛍光剤、化学発光剤或いは色素生産剤や、基質、コファクター、
インヒビター、磁性粒子等が含まれる。

【００９４】細胞培養からのタンパク質の回収および発現に適した条件下において、HPAP-1
をコードするヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞を培養することができ
る。形質転換された細胞により産生されるタンパク質は、用いられる配列及び／
またはベクターに応じて分泌されるか、又は細胞内に保持され得る。当業者に理
解されるように、HPAP-1をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターは、
原核生物か真核生物の細胞膜を通してHPAP-1分泌を指向するシグナル配列を含む
ように設計することができる。

【００９５】更に、宿主細胞株は、挿入した配列の発現の調節能力または発現したタンパク
質を所望の形にプロセシングする能力によって選択される。このようなポリペプ
チドの修飾には、以下に限定するものではないが、アセチル化、カルボキシル化
、グリコシル化、リン酸化、脂質化(lipidation)、及びアシル化が含まれる。タ
ンパク質の「prepro」形を切断する翻訳後プロセシングを用いて、タンパク質の
標的、折り畳み及び／又は活性を特定することができる。翻訳後の活性のための
特定の特徴的な機構及び細胞装置を有する種々の宿主細胞（例えば、CHO、HeLa
、MDCK、MEK293、WI38）は、American Type Culture Collection（ATCC, Bethe
sda, MD）より入手可能であり、外来性のタンパク質の正しい修飾及びプロセシ
ングを確実にするために選択され得る。

【００９６】本発明の別の実施例では、HPAP-1をコードする天然の核酸、改変された核酸、
又は組換えの核酸配列を、前述の任意の宿主系の融合タンパク質の翻訳となる異
種配列に結合させ得る。例えば、市販の抗体によって識別できる異種部分を含む
キメラHPAP-1タンパク質が、HPAP-1の活性のインヒビターに対するペプチドライ
ブラリのスクリーニングを促進し得る。また、市販の親和性の基質を用いて、異
種タンパク質及びペプチド部分が、融合タンパク質の精製を促進し得る。このよ
うな部分には、以下に限定されるものではないが、グルタチオンSトランスフェ
ラーゼ（GST）、マルトース結合タンパク質（MBP）、チオレドキシン（Trx）、
カルモジュリン結合ペプチド（CBP）、6-His、FLAG、c-myc、赤血球凝集素（HA
）が含まれる。GST、MBP、Trx、CBP、及び6-Hisによって、固定されたグルタチ
オン、マルトース、フェニルアルシン酸化物、カルモジュリン、及び金属キレー
ト樹脂の各々で同族の融合タンパク質の精製が可能となる。FLAG、c-mc、及び赤
血球凝集素（HA）によって、これらのエピトープ標識を特異的に識別する市販の
モノクロナール抗体及びポリクロナール抗体を用いて、融合タンパク質の免疫親
和性の精製が可能である。また、HPAP-1をコードする配列と異種タンパク質配列
との間に位置するタンパク質切断部位を融合タンパク質が含むように、融合タン
パク質が操作されて、精製の後にHPAP-1が異種部分から切断され得る。融合タン
パク質の発現及び精製方法については、Ausubel（1995, 前出, ch 10）が記述し
ている。また、融合タンパク質の発現及び精製の促進のために、種々の市販のキ
ットを用いることができる。

【００９７】本発明の更に別の実施例では、TNTウサギ網状赤血球可溶化液またはコムギ胚
芽抽出系（Promega）を用いてin vitroで放射能標識したHPAP-1の合成を行なう
ことができる。これらの系は、T7、T3、又はSP6プロモーターと操作可能に結合
したタンパク質をコードする配列の転写と翻訳を結びつける。転写は放射能標識
されたアミノ酸前駆体（好ましくは³⁵S-メチオニン）の存在の下で起こる。

【００９８】組換え体の生成だけでなく、固相技術を用いた直接のペプチド合成によって、
HPAP-1の断片を作り出すことができる（例えば、Creighton, 前出 pp.55-60を参
照）。タンパク質合成は手作業または自動で行なうことができる。自動化された
合成は、例えば、ABI 431Aペプチドシンセサイザ（Perkin-Elmer）を用いて行う
ことができる。HPAP-1の種々の断片を個別に合成して、次に結合させて完全長分
子を作り出すことも可能である。

【００９９】治療例えば、HPAP-1とヒトプレセニリンI-463（GI 1244638）の間には、配列及び
モチーフに関連する化学的及び構造的類似性が存在する。更に、HPAP-1は、癌お
よび不死化した細胞株、炎症および免疫反応、並びに神経および生殖の組織にお
いて発現する。従って、HPAP-1は癌、免疫不全症、神経疾患、及び生殖障害にお
いて所定の役割を果たしていると考えられる。

【０１００】従って、一実施例において、HPAP-1の発現または活性の低下に関連した疾患の
治療及び予防のために、そのような患者にHPAP-1又はその断片もしくは誘導体を
投与することが可能である。このような疾患の例には、以下に限定しないが、ak
athesia、アルツハイマー病、健忘症、筋萎縮性側索硬化症、双極性障害、緊張
病、大脳腫瘍、痴呆、うつ病、糖尿病性神経障害、ダウン症候群、遅発性ジスキ
ネジア、筋緊張異常、てんかん、ハンチントン舞踏病、末梢神経疾患、多発性硬
化症、神経線維腫症、パーキンソン病、妄想性精神病、帯状疱疹後の神経痛、精
神分裂病、及びツレット病等の神経疾患が含まれる。

【０１０１】別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含むHPAP-1の発現および
活性の低下に関連する疾患の治療または予防のために、HPAP-1又はその断片もし
くは誘導体を発現可能なベクターを被験者に投与してもよい。

【０１０２】また別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含むHPAP-1の発現お
よび活性の低下に関連する疾患の治療または予防のために、適切な医薬用担体と
共に実質的に精製されたHPAP-1を含む医薬品組成物を被験者に投与してもよい。

【０１０３】更に別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含むHPAP-1の発現お
よび活性の低下に関連する疾患の治療または予防のために、HPAP-1の活性を調節
するアゴニストを被験者に投与してもよい。

【０１０４】別の実施例においては、HPAP-1の発現および活性の増大に関連する疾患の治療
または予防のために、HPAP-1のアンタゴニストを被験者に投与してもよい。その
ような疾患には、限定はしないが、腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、
肉腫、奇形癌腫や、特に、副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、頚、胆嚢、神経節
、消化管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺
、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮の癌等の癌、並びに、後
天性免疫不全症候群（AIDS）、アジソン病、成人呼吸窮迫症候群、アレルギー、
強直性脊椎炎、アミロイド症、貧血、喘息、アテローム性動脈硬化症、自己免疫
性溶血性貧血、自己免疫性甲状腺炎、気管支炎、胆嚢炎、接触性皮膚炎、クロー
ン病、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、肺気腫、リンパ球毒素性一時性リ
ンパ球減少症、胎児赤芽球症、結節性紅斑、萎縮性胃炎、糸球体腎炎、グッドパ
スチャー症候群、痛風、グレーブス病、橋本甲状腺炎、過好酸球増加症、過敏性
腸症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋若しくは心臓周囲の炎症、骨関節
炎、骨粗鬆症、膵炎、多発性筋炎、乾癬、ライター症候群、関節リウマチ、強皮
症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、血小板減少
性血栓性紫斑病、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、ウェルナー症候群や、癌、血液透
析、及び体外循環の合併症や、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、原生動物、及び
寄生虫様の感染症や、心的外傷等の免疫不全症、並びに、プロラクチン産生異常
や、卵管異常、排卵異常、及び子宮内膜症を含む不妊症や、発情周期の混乱、月
経周期の混乱、多嚢胞性卵巣症候群、卵巣過刺激症候群、子宮内膜や卵巣の腫瘍
、子宮筋腫、自己免疫異常、異所的妊娠、及び奇形発生や、乳房の癌、乳房線維
嚢胞病、及び溢乳や、精子形成の混乱、異常性精子生理、精巣の癌、前立腺の癌
、良性の前立腺肥大症、前立腺炎、ペイロニー病(Peyronie's disease)、男性の
乳房および女性化乳房の癌等の生殖障害が含まれる。一実施態様では、HPAP-1と
特異的に結合する抗体をアンタゴニストとして直接用いるか、或いはHPAP-1を発
現する細胞や組織に薬剤をもたらす送達機構またはターゲティングとして間接的
に用いることができる。

【０１０５】別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含むHPAP-1の発現および
活性の増大に関連する疾患の治療または予防のために、HPAP-1をコードするポリ
ヌクレオチドの相補配列を発現するベクターを被験者に投与してもよい。

【０１０６】他の実施例においては、本発明のタンパク質、アンタゴニスト、抗体、アゴニ
スト、相補的配列またはベクターの何れかを、他の適切な治療薬と組合せて投与
することもできる。当業者は従来の製薬の原理に基づいて併用療法で使用するた
めの適切な薬剤を選択することができるであろう。治療薬を組み合わせることに
より、上述の種々の反応の治療又は予防に効果を与えるように相乗剤的に機能し
得る。この方法を用いることにより、より少ない各薬剤の投与量で治療効果を上
げることができ、従って副作用の可能性を低下させることができる。

【０１０７】 HPAP-1のアンタゴニストは、当業者に周知の方法を用いて製造することができ
る。詳細には、精製されたHPAP-1を用いて抗体を作り出したり、或いはHPAP-1に
特異的に結合するものを同定するために、薬剤のライブラリーをスクリーニング
することができる。HPAP-1の抗体は、当業者によく知られた方法を用いて産生す
ることができる。このような抗体には、以下に限定されないが、ポリクローナル
抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、Fabフラグメント、及びFab
発現ライブラリーにより作られたフラグメントが含まれる。中和抗体（即ち、二
量体形成を阻害するもの）は治療の用途に特に好適である。

【０１０８】抗体を産生するために、HPAP-1か、免疫学的特性を有するその任意の断片或い
はそのオリゴペプチドを注射することによって、ヤギ、ウサギ、ラット、マウス
、ヒト等を含む種々の宿主を免疫化することができる。ラット及びマウスは、モ
ノクロナール抗体生成を含むダウンストリーム適用のための宿主として好ましい
。宿主の種に応じて、免疫学的反応を増強するために種々のアジュバントを用い
ることができる。そのようなアジュバントには、以下に限定しないが、フロイン
トのアジュバント、アルミニウムの水酸化物ようなミネラルゲル、リゾレシチン
のような界面活性剤、プルロニックポリオール(pluronic polyols)、ポリアニオ
ン、ペプチド、オイルエマルジョン、KLH及びジニトロフェノールが含まれる。
ヒトで使用するアジュバントの中では、BCG（カルメット‐ゲラン杆菌）及びCor
ynebacterium parvumが特に好ましい。抗体の生成および分析の方法が、Harlow,
E.及びLane, D.ら（1988; Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Ha
rbor Laboratory, Cold Spring Harbor NY）によって開示されている。

【０１０９】 HPAP-1の抗体を誘発するために用いられるオリゴペプチド、ペプチド、または
その断片は、好ましくは少なくとも5個のアミノ酸、より好ましくは少なくとも1
4個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を有する。またこれらのオリゴペプチド、
ペプチド、または断片は、天然のタンパク質のアミノ酸配列の一部と同一で、小
形の自然発生の分子の全アミノ酸配列を含んでいることが好ましい。HPAP-1アミ
ノ酸の短い伸展部が、KLHのような別のタンパク質の伸展部と融合し、キメラ分
子の抗体が産生され得る。

【０１１０】 HPAP-1のモノクローナル抗体は、培養における持続的な細胞株によって抗体分
子を産生させる任意の技術を用いて調製できる。このような技術には、以下に限
定しないが、ハイブリドーマ技術、ヒトB細胞ハイブリドーマ技術、及びEBV-ハ
イブリドーマ技術が含まれる（例えば、Kohler, G.ら(1975) Nature 256:495-49
7；Kozbor, D. ら(1985) Immunol. Methods 81 :31-42；Cote, R.J. ら(1983) P
roc. Natl. Acad. Sci. 80:2026-2030；Cole, S.P. ら(1984) Mol. Cell Biol.
62:109-120を参照）。

【０１１１】さらに、適切な抗原特異性および生物活性を備えた分子を得るために、ヒト抗
体遺伝子へのマウス抗体遺伝子のスプライシングする技術のような「キメラ抗体
」の産生のために開発された技術を用いることができる（例えば、Morrison,S.L
.ら(1984)Proc. Natl. Acad. Sci. 81:6851-6855;Neuberger, M.S. ら(1984)Nat
ure 312:604-608;Takeda, S. ら(1985)Nature 314:452-454参照）。或いは、当
業者に周知の方法を用いて単鎖の抗体の生成のための技術を適用して、HPAP-1に
特異的な単鎖抗体を産生することができる。関連する特異性を有するがイディオ
タイプ組成が異なる抗体は、ランダムな組み合わせの免疫グロブリンライブラリ
ーからの鎖混合(chain shuffling)によって産生することができる（例えば、Bur
ton D.R.(1991) Proc. Natl. Acad. Sci. 88:10134-10137参照）。

【０１１２】抗体は、免疫グロブリンライブラリーまたは高度に特異的な結合試薬のパネル
をスクリーニングすることにより、或いはリンパ球集団でのin vivoの産生を誘
導することにより産生することができる（例えば、Orlandi,R.ら(1989), Proc.
Natl. Acad. Sci. 86:3833-3837；Winter, G.ら(1991) Nature 349:293-299参照
）。

【０１１３】またHPAP-1に対する特異的な結合部位を含む抗体フラグメントも作り出すこと
ができる。例えばこのような断片には、以下に限定はしないが、抗体分子のペプ
シン消化により生成することができるF(ab')₂フラグメントや、F(ab')₂フラグメ
ントのジスルフィド架橋を減らすことにより生成することができるFabフラグメ
ントが含まれる。或いは、所望の特異性を備えたモノクローナルFabフラグメン
トを迅速かつ容易に同定可能なように、Fab発現ライブラリーを構成し得る（例
えば、Huse,W.D.ら(1989) Science 246:1275-1281参照）。

【０１１４】種々のイムノアッセイを、所望の特異性および最小の交差反応性を有する抗体
を同定するためのスクリーニングに用いることができる。確立された特異性を有
するモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体の何れかを用いる競合的結合
アッセイ或いは免疫放射線測定法の多数のプロトコルが、当技術分野で周知であ
る。このようなイムノアッセイには、一般にHPAP-1とその特異的な抗体との間の
複合体の形成の測定が含まれる。2つの非干渉HPAP-1エピトープに対して反応す
るモノクローナル抗体を用いる2部位のモノクローナル抗体ベースのイムノアッ
セイ（two sites monoclonal based immunoassay）が好適であるが、競合的結合
アッセイも用いられ得る（Pound, 前出）。

【０１１５】ラジオイムノアッセイ技術と共にScatchard分析等の種々の方法を用いて、HPA
P-1抗体の親和性を評価する。親和性を結合定数Kaで表すが、このKaは、平衡状
態におけるOP抗体複合体のモル濃度を遊離抗体と遊離抗原のモル濃度で割ったも
のとして定義される。多数のHPAP-1エピトープに対して親和性が不均一なポリク
ロナール抗体試薬に対して測定されたKaは、HPAP-1抗体の平均親和性または結合
活性を表す。特定のHPAP-1エピトープに単一特異的なモノクロナール抗体試薬に
対して測定されたKaは、親和性の真の測定値を表す。Kaの値が10⁹〜10¹²L/molの
高い親和性の抗体試薬は、HPAP-1抗体複合体が厳密な操作に耐えなければならな
いイムノアッセイに用いるのが好ましい。Kaの値が10⁶〜10⁷L/molの低い親和性
の抗体試薬は、最終的にHPAP-1が活性化状態で抗体から解離する必要がある免疫
精製(immunopurification)及び類似の処理に用いるのが好ましい。（Catty, D.
(1988) Antibodies, Volume I: A Practical Approach. IRL Press, Washington
, DC; Liddell, J. E.及びCryer, A. (1991) A Practical Guide to Monocional
Antibodies, John Wiley & Sons, New York NY）。

【０１１６】ポリクロナール抗体試薬のタイター及び結合活性を更に評価して、ある一定の
ダウンストリーム適用に対するこのような試薬の品質及び適合性を判定する。例
えば、少なくとも1〜2mg/mlの特異的な抗体、好ましくは5〜10mg/mlの特異的な
抗体を含むポリクロナール抗体試薬は、HPAP-1抗体複合体の沈殿を必要とする方
法に使用することが好ましい。種々の適用における抗体の特異性、タイター、及
び結合活性に対する処理、並びに抗体の品質や使用法の指針は一般に入手可能で
ある（例えば、Catty, 前出、及びColiganら, 前出を参照）。

【０１１７】本発明の別の実施例では、HPAP-1をコードするポリヌクレオチド、またはその
任意の断片や相補配列を、治療を目的として用いることができる。一態様では、
mRNAの転写を阻害することが望ましい状況において、HPAP-1をコードするポリヌ
クレオチドに対する相補配列を用いることができる。詳細には、HPAP-1をコード
するポリヌクレオチドに相補的な配列で細胞を形質転換することができる。従っ
て、HPAP-1の活性を調節する、或いは遺伝子の機能を調節するために、相補的な
分子または断片を用いることができる。現在このような技術は周知であり、セン
ス又はアンチセンスオリゴヌクレオチド、或いはより大きな断片を、HPAP-1をコ
ードする配列のコード領域や調節領域に従って様々な位置から設計可能である。

【０１１８】レトロウイルス、アデノウイルス、ヘルペスまたはワクシニアウイルスに由来
する、或いは種々の細菌性プラスミドに由来する発現ベクターは、標的の器官、
組織、即ち細胞群へのヌクレオチド配列の送達のために用いられ得る。当業者に
周知の方法を用いて、HPAP-1をコードするポリヌクレオチドに相補的な核酸配列
を発現するためのベクターを産生することができる（例えば、Sambrook, 前出;
及びAusubel, 前出を参照）。

【０１１９】 HPAP-1をコードするポリヌクレオチドまたはその断片を高レベルで発現する発
現ベクターで細胞または組織を形質転換させることによって、HPAP-1をコードす
る遺伝子を作り出すことができる。このような作製物は、翻訳不能なセンス配列
或いはアンチセンス配列を細胞に導入するために用いることができる。DNAへ組
み込みが存在しない場合でも、このようなベクターは、それらが内在性のヌクレ
アーゼにより無能となるまで、RNA分子を転写し続け得る。一過性の発現は、非
複製ベクターでも1ヶ月以上、適切な複製エレメントがベクター系の一部である
場合にはさらに長い期間持続し得る。

【０１２０】前述のように、HPAP-1をコードする遺伝子の制御、5’、又は調節領域に対す
る相補配列、つまりアンチセンス分子（DNA、RNAまたはPNA）を設計することに
よって、遺伝子発現を変更することができる。転写開始点（例えば、開始部位か
ら+10〜-10の位置）に由来するオリゴヌクレオチドが好ましい。同様に、三重ら
せん体の塩基対形成方法論を用いて、阻害を達成することができる。ポリメラー
ゼ、転写制御因子、或いは調節分子の結合のために二重らせんが十分にほどける
能力を阻害するので、三重らせん対合は有用である（例えば、Gee, J.E.ら(1994
)In: Huber, B.E.及びB.I. Carr, Molecular and Immunologic Approaches, Fut
ura Publishing Co.,Mt.Kisco,NY,pp.163-177参照）。転写物のリボソームへの
結合を阻止することによりmRNAの転写を阻害するために、相補的配列、即ちアン
チセンス分子を設計し得る。

【０１２１】リボザイム、つまり酵素RNA分子を用いてRNAの特異的切断を触媒することがで
きる。リボザイム作用機構は、相補的標的RNAへのリボザイム分子の配列の特異
的ハイブリダイゼーションに関与し、その後のヌクレオチド鎖切断が行なわれる
。例えば、操作されたハンマーヘッドモチーフリボザイム分子は、HPAP-1をコー
ドする配列のヌクレオチド鎖切断を特異的かつ効果的に触媒し得る。

【０１２２】任意の潜在的なRNA標的物内の特異的なリボザイム切断部位は、最初、後続す
る配列GUA、GUU並びにGUCを含むリボザイム切断部位に対する標的分子を走査す
ることによって同定される。一度同定されると、切断部位を含む標的遺伝子の領
域に対応する15〜20個のリボヌクレオチドの間の短いRNA配列は、そのオリゴヌ
クレオチドを動作不能(inoperable)とする2次の構造的特徴について評価するこ
とができる。また候補の標的の適合性は、リボヌクレアーゼ保護アッセイ(ribon
uclease protection assay)を用い、相補的なオリゴヌクレオチドとのハイブリ
ダイゼーションに対する接触性(accessibility)の検査により評価することがで
きる。

【０１２３】本発明の相補的リボ核酸分子及びリボザイムは、核酸分子を合成するのための
当技術分野で周知の方法により作り出すことができる。これらには、固相ホスホ
ラミダイト化学合成のようなオリゴヌクレオチドの化学的合成のための技術が含
まれる。或いは、RNA分子は、HPAP-1をコードするDNA配列のin vitro及びin viv
oの転写により作り出すことができる。このようなDNA配列は、T7或いはSP6のよ
うな適切なRNAポリメラーゼプロモーターを伴う多様なベクターに取り込むこと
ができる。或いは、構成的または誘導的に相補的なRNAを合成するこれらのcDNA
作製物は、株化細胞、細胞または組織内に導入することができる。

【０１２４】細胞内の安定性を高め、また半減期を長くするために、RNA分子は修飾するこ
とができる。可能な修飾としては、以下に限定しないが、その分子の5′末端及
び／又は3’末端でのフランキング配列の付加や、分子のバックボーン内におけ
るホスホジエステラーゼ結合ではなくホスホロチオネート或いは2′O-メチルを
使用を含む。この概念はPNA生成において固有のものであり、内在性エンドヌク
レアーゼにより容易に認識されないアデニン、シチジン、グアニン、チミン、及
びウリジンの、アセチル−、メチル−、チオ−、及び類似の修飾形態だけでなく
、イノシン、クエオシン(queosine)、及びワイブトシン(wybutosine)のような従
来よりあまり用いられない塩基を含めることにより、これら全ての分子に拡張可
能である。

【０１２５】細胞或いは組織内にベクターを導入するための多くの方法が利用可能で、同様
にin vivo、in vitro、及びex vivoでの使用にも適している。ex vivoでの治療
法のに対し、ベクターを患者から採取された幹細胞に導入し、自己移植して同じ
患者に戻すためにクローンとして増殖させることができる。トランスフェクショ
ンによるデリバリー、或いはリポソーム注入またはポリカチオンアミノポリマー
によるデリバリーは、当技術分野でよく知られた方法を用いて実施することがで
きる（例えば、Goldman, C.K.ら(1997) Nature Biotechnology 15:462-466参照
）。

【０１２６】前述の治療法は何れも、例えばイヌ、ネコ、雌ウシ、ウマ、ウサギ、サル、及
び最も好ましくはヒトのような哺乳類を含む治療が必要な任意の対象に適用する
ことができる。

【０１２７】本発明の更なる実施例では、前述の任意の治療効果のために、医薬成分を薬剤
上受け入れられる担体とともに投与する。このような医薬成分は、HPAP-1、HPAP
-1の抗体、HPAP-1の模倣体、アゴニスト、アンタゴニスト、又はインヒビターか
らなるものでありうる。この成分は、単体或いは例えば安定化する配合ような1
以上の他の薬剤とともに、任意の無菌の生体適合性の医薬用担体に投与され、そ
の担体には、以下に限定しないが、生理食塩水、バッファー食塩水、ブドウ糖或
いは水が含まれる。このような組成物は、単体或いは他の薬剤、ドラッグやホル
モンと結合した形で患者に投与されうる。

【０１２８】本発明で用いられる医薬品組成物の投与経路には、以下に限定されないが、経
口投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、髄内投与、くも膜下腔内投与、
脳室内投与、経皮投与、皮下投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、経腸投与、局所的
投与、舌下投与、或いは直腸投与が含まれ得る。

【０１２９】有効成分に加えて、これらの医薬成分は、有効成分を医薬上使用できる製剤に
するための処理を容易にする医薬品添加物及び補助剤を含む、適切な医薬上認め
られる担体を含みうる。更に、製剤或いは投与に関する技術の詳細は、Remingto
ns Pharmaceutical Sciences（Maack Publishing Co., Easton, PA）の最新版に
記載されている。

【０１３０】経口投与のための医薬品組成物は、当技術分野でよく知られる医薬上認められ
る担体を用いて、経口投与に適当な投与量に配合される。このような担体により
、医薬品組成物を患者に摂取させるための錠剤、丸剤、糖衣丸、カプセル剤、液
体剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液等に調剤できる。

【０１３１】経口投与用の医薬製剤は、有効成分と固形の賦形剤とを配合して、（所望によ
り、粉砕した後に）得られた顆粒の混合物を処理して錠剤或いは糖衣剤コア(dra
gee core)を作ることによって得られる。必要ならば、適切な添加物が加えるこ
とができる。適切な賦形剤には、ラクトース、スクロース、マンニトール或いは
ソルビトールを含む砂糖のような糖質またはタンパク質賦形剤や、トウモロコシ
、コムギ、コメ、ジャガイモ等からのデンプンや、メチルセルロース、ヒドロキ
シプロピルメチルセルロース或いはカルボキシルメチルセルロースナトリウムの
ようなセルロースや、アラビアゴム或いはトラガカントゴムのようなゴムや、並
びにゼラチン或いはコラーゲンのようなタンパク質が含まれる。必要ならば、架
橋したポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸、又はアルギン酸ナトリウムの
ようなその塩のような崩壊剤または可溶化剤を加えてもよい。

【０１３２】糖衣丸コアは、濃縮糖液のような適切な剤皮と共に用いられるが、それらには
アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポルゲル剤(carbopol ge
l)、ポリエチレングリコール及び／又はチタンの二酸化物、ラッカー溶液及び適
切な有機溶剤或いは溶剤の混合物等が含まれる。錠剤の識別のため、或いは有効
成分の量（即ち投与量）を特徴づけるために、染料或いは色素を錠剤或いは糖衣
錠皮に加えることができる。

【０１３３】経口投与できる製剤には、ゼラチンからなるプッシュフィット(push-fit)カプ
セル、ゼラチンからなる軟性のシールされたカプセル及びグリセロール或いはソ
ルビトールのような錠皮が含まれる。プッシュフィットカプセルは、ラクトース
或いはデンプンのような賦形剤または結合剤、タルク或いはステアリン酸マグネ
シウムのような潤滑剤、及び所望により安定剤と混合された有効成分を含みうる
。軟性カプセルにおいて、有効成分は、安定剤とともに或いは安定剤なしに、脂
肪性の油、液体、または液状ポリエチレングリコールのような適切な液体に溶解
或いは懸濁される。

【０１３４】非経口投与に適した医薬製剤は、水溶液中で、好適にはハンク溶液、リンゲル
溶液或いは生理緩衝食塩水のような生理学的に適合するバッファーの中で配合す
ることができる。水性の注射懸濁液は、カルボキシルメチルセルロースナトリウ
ム、ソルビトールまたはデキストランのような懸濁液の粘性を高める物質を含み
うる。更に、有効成分の懸濁液は、適切な油性注入懸濁液として調製してもよい
。適切な親油性の溶媒或いは賦形剤には、胡麻油のような脂肪性の油や、オレイ
ン酸エチル、トリグリセリド或いはリポソームのような合成脂肪酸エステルが含
まれる。また非脂質ポリカチオンアミノポリマーが、送達のために用いられる。
所望により、懸濁液は化合物の溶解度を増加させて濃縮度の高い溶液の調製を可
能にする適切な安定剤または薬剤を含んでもよい。

【０１３５】局所または経鼻投与用には、浸透する特定の障壁に対して適切な浸透剤が調合
に用いられる。このような浸透剤は、当技術分野において周知のものである。

【０１３６】本発明の医薬組成物は周知の方法、例えば通常の混合処理、溶解処理、顆粒化
処理、糖衣形成処理、湿式粉砕処理(levigating)、乳化処理、カプセル化処理、
エントラップ処理(entrapping)或いは凍結乾燥処理により製造される。この医薬組成物は塩類として提供されることもあり、以下に限定しないが、塩
酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸等を含む多くの酸とともに
形成することができる。塩は水性或いはプロトニック溶剤において、対応する遊
離塩基形態よりも溶解性が高くなる傾向がある。別のケースでは、好適な製剤と
しては、使用前に緩衝剤配合したpH4.5〜5.5の範囲にある1mM〜50mMのヒスチジ
ン、0.1%〜2%のショ糖、2%〜7%のマンニトールの何れか、或いは全てを含む凍結
乾燥粉末でもよい。

【０１３７】医薬組成物は調製された後に適切な容器内に入れられて、指示された状態の治
療のためにラベル付けできる。HPAP-1の投与の場合では、このようなラベルには
、投与量、投与頻度、投与方法が表示される。

【０１３８】本発明において使用するのに適する医薬品組成物は、所望の目的を達成するた
めに有効成分を効果的な量だけ含む成分を含んでいる。有効量の決定は、当業者
の能力の範囲内で十分行うことができる。

【０１３９】任意の化合物の場合、治療に有効な量は、最初は例えばマウス、ウサギ、イヌ
、ブタのような動物モデルまたは腫瘍性細胞の何れかの細胞培養のアッセイにお
いて見積もることができる。また、適切な濃度範囲および投与経路を決定するた
めに動物モデルを用いることができる。次にこのような情報を利用して、ヒトに
おける投与量や投与経路を決定することができる。

【０１４０】治療的に有効な量とは、例えば、症状や状態を回復させるHPAP-1またはその断
片、HPAP-1の抗体、HPAP-1のアゴニスト、HPAP-1のアンタゴニスト、又はHPAP-1
のインヒビターの有効成分の量を指す。治療的な効力および毒性は、細胞培養或
いは実験動物における標準的な製薬方法により、例えばED₅₀(母集団の50%におけ
る治療的な有効投与量)またはLD₅₀(母集団の50%の致死投与量)統計量を計算する
ことによって決定することができる。毒性に対する治療効果の用量比が治療指数
であり、ED₅₀/ LD₅₀の比として表すことができる。医薬品組成物は大きな治療指
数を示すことが好ましい。細胞培養のアッセイ及び動物研究から得られたデータ
は、ヒトの使用のための投与量の範囲をまとめるのに用いることができる。その
ような成分の投与量は、毒性が少ないか或いは全く毒性がなく、ED₅₀を含む循環
する濃度の範囲内にあることが好ましい。使用する剤形、患者の感受性並びに投
与経路に応じて、投与量はこの範囲内で変化する。

【０１４１】正確な用量は、治療が必要な被験者に関連する要因を考慮して医師が決定する
。投与及び投薬量は、十分なレベルの有効成分を与える、即ち所定の効果を維持
するために調節される。考慮すべき要因としては、疾病状態の重症度、全般的な
被験者の健康、年齢、体重、性別や、食餌、投与の時間及び頻度や、併用する薬
剤、反応感受性、および治療への反応が含まれる。長時間作用性の医薬品組成物
は、半減期及び特定の製剤のクリアランス率に応じて3〜4日毎に、1週間毎に、或
いは2週間に1度投与してもよい。

【０１４２】通常の投与量は0.1〜100,000μgの範囲であり、最大約1gの総投与量まで、投
与経路に応じて変化する。特定の投与量或いは送達の方法のガイダンスは文献に
おいて提供され、通常当技術分野の医師に利用可能である。当業者は、ヌクレオ
チドに対しては、タンパク質やインヒビター用の製剤とは異なる製剤を採用する
ことができる。同様に、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの送達は、特定の
細胞、状態、位置等に対して特異的でありうる。

【０１４３】診断別の実施例においては、HPAP-1に特異的に結合する抗体を、HPAP-1の発現によ
って特徴づけられる状態や疾病の診断や、HPAP-1又はHPAP-1のアゴニスト、アン
タゴニスト、インヒビターで治療を受けている患者のモニタリングのためのアッ
セイに用いることができる。診断目的に対して有用な抗体は、前述の治療のため
のものと同様の方法で作製することができる。HPAP-1の診断のアッセイには、ヒ
トの体液、細胞或いは組織の抽出物においてHPAP-1を検出するために抗体および
標識を用いる方法が含まれる。抗体は修飾しても、修飾なしでも用いることがで
き、また共有結合或いは非共有結合かのいずれかによりリポーター分子と結合さ
せて標識することができる。当業者に周知の多様なリポーター分子が用いられ、
そのうちの幾つかについては前述の通りである。

【０１４４】 ELISA、RIA及びFACSを含む、HPAP-1を測定するための種々のプロトコルが当技
術分野では周知であり、またこれによりHPAP-1発現の変化や異常性のレベルを診
断するための基礎が得られる。HPAP-1の発現の正常値、即ち標準値は、複合体形
成に適した条件下で、哺乳類、好ましくはヒトの正常な被験者から得られる体液
或いは細胞抽出物とHPAP-1の抗体を結合させることによって確立できる。標準の
複合体形成量は、種々の方法、好ましくは測光手段を用いて定量化できる。被験
者の生検組織からの対照サンプル及び患部サンプルにおいて発現されたHPAP-1の
量を、標準値と比較する。標準値と被験者の値との偏差によって疾病診断のため
のパラメータを確立する。

【０１４５】本発明の別の実施例において、HPAP-1をコードするポリヌクレオチドを、診断
の目的で用いることができる。用いられるポリヌクレオチドには、オリゴヌクレ
オチド配列、相補的RNA及びDNA分子、及びPNAが含まれる。このポリヌクレオチ
ドは、HPAP-1の発現が疾病と関連するであろう生検組織における遺伝子発現の検
出や定量のために用いられる。診断アッセイは、HPAP-1が存在、非存在、過剰発
現の何れの状態かを識別したり、治療の処置の際にHPAP-1レベルの調節をモニタ
リングするために用いることができる。

【０１４６】一態様では、HPAP-1または密接に関連分子をコードする、ゲノム配列を含むポ
リヌクレオチド配列を検出可能なPCRプローブとのハイブリダイゼーションを用
いて、HPAP-1をコードする核酸配列を同定することができる。そのプローブの特
異性、つまりそのプローブが非常に高度に特異的な領域（例えば、5’調節領域
）に由来するか、或いはより特異性の度合いの低い領域（例えば、保存されたモ
チーフ）の何れに由来するかによって、またハイブリダイゼーション或いは増幅
の（最大の、高い、中程度の、或いは低い）厳密性によって、そのプローブがHP
AP-1をコードする自然発生の配列のみを同定するか、或いはアレルや関連する配
列も同定するかが決定される。

【０１４７】プローブは関連する配列を検出するためにも用いることができ、また好ましく
はHPAP-1をコードする任意の配列に対して少なくとも50%の配列同一性を有する
べきである。本発明のハイブリダイゼーションプローブは、DNA若しくはRNAか、
またSEQ ID NO:2の配列に由来するものか、或いはHPAP-1遺伝子のイントロン、
エンハンサー、及びプロモータを含むゲノムの配列に由来するものでもよい。

【０１４８】 HPAP-1をコードするDNAのための特異的なハイブリダイゼーションプローブを
作製するための手段には、mRNAプローブを作り出すためにHPAP-1又はHPAP-1誘導
体をコードするポリヌクレオチド配列をベクターにクローンニングする方法があ
る。このようなベクターは当業者に周知で、また市販されており、適切なRNAポ
リメラーゼや適切な標識されたヌクレオチドを付加することにより、in vitroで
RNAプローブを合成するために用いることができる。ハイブリダイゼーションプ
ローブは種々のリポータグループにより標識され、例えば、その標識は、³²Pや³ ⁵ Sのような放射性核種によるものや、アビジン／ビオチン結合系を介してプロー
ブに結合するアルカリホスファターゼのような酵素による標識等である。

【０１４９】 HPAP-1をコードするポリヌクレオチド配列を、HPAP-1の発現に関連する疾患の
診断のために用いることができる。そのような疾患としては、以下に限定はしな
いが、akathesia、アルツハイマー病、健忘症、筋萎縮性側索硬化症、双極性障
害、緊張病、大脳腫瘍、痴呆、うつ病、糖尿病性神経障害、ダウン症候群、遅発
性ジスキネジア、筋緊張異常、てんかん、ハンチントン舞踏病、末梢神経疾患、
多発性硬化症、神経線維腫症、パーキンソン病、妄想性精神病、帯状疱疹後の神
経痛、精神分裂病、及びツレット病等の神経疾患、並びに、腺癌、白血病、リン
パ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、奇形癌腫や、特に、副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、
乳房、頚、胆嚢、神経節、消化管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、
副甲状腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮
の癌等の癌、並びに、後天性免疫不全症候群（AIDS）、アジソン病、成人呼吸窮
迫症候群、アレルギー、強直性脊椎炎、アミロイド症、貧血、喘息、アテローム
性動脈硬化症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性甲状腺炎、気管支炎、胆嚢炎
、接触性皮膚炎、クローン病、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、肺気腫、
リンパ球毒素性一時性リンパ球減少症、胎児赤芽球症、結節性紅斑、萎縮性胃炎
、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、痛風、グレーブス病、橋本甲状腺炎、
過好酸球増加症、過敏性腸症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋若しくは
心臓周囲の炎症、骨関節炎、骨粗鬆症、膵炎、多発性筋炎、乾癬、ライター症候
群、関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、全
身性硬化症、血小板減少性血栓性紫斑病、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、ウェルナ
ー症候群や、癌、血液透析、及び体外循環の合併症や、ウイルス、細菌、真菌、
寄生虫、原生動物、及び寄生虫様の感染症や、心的外傷等の免疫不全症、並びに
、プロラクチン産生異常や、卵管異常、排卵異常、及び子宮内膜症を含む不妊症
や、発情周期の混乱、月経周期の混乱、多嚢胞性卵巣症候群、卵巣過刺激症候群
、子宮内膜や卵巣の腫瘍、子宮筋腫、自己免疫異常、異所的妊娠、及び奇形発生
や、乳房の癌、乳房線維嚢胞病、及び溢乳や、精子形成の混乱、異常性精子生理
、精巣の癌、前立腺の癌、良性の前立腺肥大症、前立腺炎、ペイロニー病(Peyro
nie's disease)、男性の乳房および女性化乳房の癌等の生殖障害が含まれる。HP
AP-1をコードするポリヌクレオチド配列を、患者の生検組織や体液を利用するサ
ザンブロット法またはノーザン分析、ドットブロット法或いは他の膜をベースと
した技術や、PCR技術や、ディップスティック試験法(dipstick)、ピン、マルチ
フォーマットELISA様アッセイまたはマイクロアレイにおいて用いて、HPAP-1発
現の変化を検出することができる。このような定性的または定量的試験法は当業
者に周知のものである。

【０１５０】特定の態様では、特に上述のような関連疾患の存在を検出するアッセイにおい
て、HPAP-1をコードするヌクレオチド配列は有用であり得る。HPAP-1をコードす
るヌクレオチド配列を標準的な方法で標識し、またハイブリダイゼーション複合
体の形成に適した条件下で、患者からの体液や組織サンプルに加えることができ
る。適当なインキュベーション期間の後、そのサンプルを洗浄し、シグナルを定
量して標準値と比較する。患者のサンプルにおけるシグナルの量が、対照サンプ
ルに比べて有意に変化している場合、サンプルのなかのHPAP-1をコードするヌク
レオチド配列のレベルの変化は、関連する疾患の存在を示している。また、この
ようなアッセイを用いて、動物実験、臨床試験、または個々の患者の治療のモニ
タリングにおける特定の治療学的な処置法の有効性を評価することもできる。

【０１５１】 HPAP-1の発現に関連する疾病の診断のための基礎を提供するために、正常な、
即ち標準の発現のプロフィールを確立する。これは、ハイブリダイゼーション或
いは増幅に適した条件下で、動物またはヒト何れかの正常な被験者から採取され
た体液或いは細胞抽出物をHPAP-1をコードする配列又はその断片と結合させるこ
とにより達成される。標準のハイブリダイゼーションは、正常な被験者から得ら
れる値と、既知の量の実質的に精製されたポリヌクレオチドを用いる実験から得
られる値とを比較することにより定量することができる。このように正常なサン
プルから得られた標準値は、疾病の徴候がある患者のサンプルから得られる値と
比較することができる。標準値からの偏差を用いて疾病の存在を証明する。

【０１５２】一旦疾患の存在が確認されて治療プロトコルが開始されると、ハイブリダイゼ
ーションアッセイが定期的に繰り返され、患者の発現のレベルが正常な患者で観
察されるレベルに近づき始めたか否かを評価できる。連続的なアッセイから得ら
れる結果を用いて、数日から数ヶ月にわたる治療の効果を示すことができる。

【０１５３】癌に関しては、個体からの生検組織における比較的多量の若しくは異常に少量
の転写物（不十分に発現もしくは過剰に発現されたもの）の存在が、疾病の発生
の素因を示し、つまり実際の臨床的症状が現れる前に疾病を検出するための手段
となり得る。このタイプのより決定的な診断により、健康の専門家が予防的処置
を講じたり、より早期に積極的な治療を行なうことが可能となり、故に癌の発生
や更なる進行を予防することができる。

【０１５４】 HPAP-1をコードする配列から設計されたオリゴヌクレオチドの更なる診断のた
めの使用法には、PCR法の利用が含まれる。これらのオリゴマーは化学的に合成
されるか、酵素を用いて作製されるか、或いはin vitroで作製されてもよい。オ
リゴマーは、好ましくはHPAP-1をコードするポリヌクレオチドの断片、またはHP
AP-1をコードするポリヌクレオチドと相補的なポリヌクレオチドの断片を含み、
特定の遺伝子或いは状態を同定するための最適化された条件の下で用いられる。
また密接に関連するDNAまたはRNA配列の検出及び／又は定量のために、オリゴマ
ーは緩やかな厳密性の条件で用いることができる。

【０１５５】またHPAP-1発現を定量するために用いられる方法には、放射標識或いはビオチ
ン化したヌクレオチドの利用、対照核酸の同時増幅(coamplification)の利用、
及び標準の検量線で補間する実験結果の利用が含まれる（例えば、Melby, P.C.
ら(1993) J. Immunol. Methods, 159:235-244；Duplaa, C. ら(1993) Anal. Bio
chem. 229-236参照）。多数のサンプルの定量の速度は、目的のオリゴマーが種
々の希釈溶液中に存在し、分光光度法または比色定量応答により迅速に定量する
ELISA形式のアッセイを実施することによって加速することができる。

【０１５６】別の実施例においては、ここに開示した任意のポリヌクレオチド配列に由来す
るオリゴヌクレオチド又はより長い断片を、マイクロアレイにおける標的として
用いることができる。マイクロアレイを用いて、同時に多くの遺伝子の発現レベ
ルをモニタし、また遺伝子の変異配列、変異及び多形性を同定することができる
。この情報は、遺伝子機能の決定、疾病の遺伝的基礎の理解、疾病の診断、並び
に治療薬の開発およびその活性のモニタリングにおいて有用である。

【０１５７】マイクロアレイが準備され、それを用いて当業者に周知の方法で分析してもよ
い（例えば、Brennan, T.M.ら(1995) U.S. Patent NO. 5,474,796; Schena, M.
ら(1996) Proc. Natl. Acad. Sci. 93:10614-10619; Baldeschweilerら(1995) P
CT application WO95/251116; Shalom D.ら (1995) PCT application WO95/355
05: Heller. R.A. ら(1997) Proc. Natl. Acad. Sci. 94:2150-2155; 並びにHel
ler. M.J.ら(1997) U.S. Patent No.5,605,662を参照）。

【０１５８】本発明の別の実施例においては、HPAP-1をコードする核酸配列を用いて、自然
発生のゲノム配列をマッピングするのに有用なハイブリダイゼーションプローブ
を作り出すことができる。この配列は、特定の染色体、染色体の特定の部分、又
は人工染色体作製物にマッピングすることができ、その人工染色体作製物には、
例えば、ヒト人工染色体（HACs）、酵母菌人工染色体（YACs）、細菌人工染色体
（BACs）、細菌性P1作製物又は1本鎖染色体cDNAライブラリーがある（例えば、H
arrington. J.J.ら(1997) Nat Genet. 15:345-355; Price, C.M. (1993) Blood
Rev. 7:I27-134; 並びにTrask. B.J. (1991) Trends Genet. 7:149-154を参照）
。

【０１５９】蛍光性in situハイブリダイゼーション（FISH）は、他の物理的な染色体マッ
ピング技術や遺伝地図データと関連し得る（例えば、Heinz-Ulrichら(1995)in M
eyers, 前出, pp.965-968を参照）。遺伝地図データの例は、種々の科学誌、ま
たはOnline Mendelian Inheritance in Man（OMIM）に見られる。物理的な染色
体地図上のHPAP-1をコードする配列の位置および特定の疾病、もしくは特定の疾
病の素因との関連性が、疾患に関係するDNAの領域の範囲を定めるのに役立つ。
本発明のヌクレオチド配列を用いて、正常者とキャリア、また発症した個体との
間の遺伝子配列の違いを検出することができる。

【０１６０】遺伝地図を拡大するために、染色体作製物のin situハイブリダイゼーション
及び確立された染色体マーカーを用いる連鎖解析のような物理的マッピング技術
を用いることができる。多くの場合、特定のヒト染色体の数やアームが未知であ
っても、マウスのような別の哺乳類の染色体上の遺伝子配置によって関連するマ
ーカーが明らかになる。物理的マッピングによって、新たな配列を染色体のアー
ム、或いはその一部へ割当てることができる。これにより、位置クローニングま
たは別の遺伝子発見技術を用いて、疾病遺伝子を検索する研究者に価値ある情報
を提供できる。ひとたび疾患或いは症候群が、特定のゲノム領域（例えば、11q2
2-23に対する毛細血管拡張性運動失調）への遺伝連鎖による不完全な位置ぎめ
がなされると、その領域にマッピングされる任意の配列は、さらなる研究のため
の関連する遺伝子または調節遺伝子を表し得る（例えば、Gatti, R.A.ら（1988
）Nature 336:577-580参照）。また、本発明のヌクレオチド配列を用いて、正常
者の染色体の位置と、キャリア、又は発症した個体の、転座、逆位等によって生
じた染色体の位置との違いを検出することもできる。

【０１６１】本発明の別の実施例においては、HPAP-1や、その触媒作用性または免疫原性断
片、又はそれらのオリゴペプチドを、種々の薬剤スクリーニング技術における化
合物のライブラリーのスクリーニングのために用いることができる。そのような
スクリーニングにおいて用いられる断片は、溶液中で遊離しているか、固体支持
体へ付着しているか、細胞表面へ付着しているか、或いは細胞内に位置している
ものであり得る。HPAP-1と試験する薬剤との結合複合体の形成を測定することが
できる。

【０１６２】別の薬物スクリーニング技術によって、目的のタンパク質に対する適切な結合
親和性を有する化合物の高スループットスクリーニングが提供される（例えば、
Geysenら(1984) PCT出願WO84/03564参照）。この方法においては、多くの異なる
小形の試験化合物がプラスチックピン或いは別の表面のような固体基板において
合成される。試験化合物をHPAP-1又はその断片と反応させ、そして洗浄する。次
に、当技術分野で周知の方法で結合HPAP-1を検出する。また、前述の薬剤スクリ
ーニング技術において使用するために、精製されたHPAP-1をプレート上に直接コ
ーティングすることもできる。或いは、非中和性抗体を用いて、ペプチドを捕捉
して固体支持体上に固定することができる。

【０１６３】別の実施例においては、HPAP-1の結合のためにHPAP-1と結合可能な中和抗体が
試験化合物と特異的に競合する競合的薬物スクリーニングアッセイを用いること
ができる。この方法において、抗体を用いて、1以上の抗原決定基をHPAP-1と共
有する任意のペプチドの存在を検出することができる。

【０１６４】さらに別の実施例においては、その新技術が、以下に限らないが、トリプレッ
ト遺伝暗号及び特異的な塩基対相互作用のようなものを含め現在周知のヌクレオ
チド配列の特性に基づくものであれば、HPAP-1をコードするヌクレオチド配列を
、未だ開発されていない分子生物学的技術に用いることができる。

【０１６５】当業者は、更なる説明がなくても前述の説明によって本発明を十分に利用でき
るであろう。従って、以下に記す特定の実施例は、単なる例示であって本発明を
限定するものではない。

【０１６６】先に記載したもの及び以下に記載した全ての特許出願、特許、刊行物、並びに
米国仮出願第09/116,640号については、ここで言及することにより本明細書の一
部とする。

【０１６７】

【実施例】

１ LATRTUT02 cDNAライブラリーの作製 LATRTUT02 cDNAライブラリーは、心房粘液腫の診断の後に輪状成形術を受けた
43歳の白人男性の心臓の左心房から採取された粘液腫から作製された。グアニジ
ニウムイソチオシアネート溶液中で凍結組織をBrinkmann Homogenizer Polytron
PT-3000（Brinkmann Instruments, Westbury, NJ）を用いて均質化および溶解
した。溶解産物は、Beckman L8-70M超遠心機のBeckman SW28ローター（Beckman
Instruments）を用いて、室温において25,000rpmで18時間、5.7MのCsClクッショ
ンで遠心分離した。RNAを酸性フェノール（pH4.7）で抽出し、0.3Mの酢酸ナトリ
ウム及び2.5倍量のエタノールを用いて沈殿させ、RNAseフリーの水に再懸濁させ
、37℃においてDNaseで処理した。RNAを抽出および沈殿を前述のように繰返した
。mRNAをOLIGOTEX kit（QIAGEN, Chatsworth, CA）を用いて単離してcDNAライブ
ラリーの作製に使用した。

【０１６８】 mRNAは、SUPERSCRIPT Plasmid Systemの推奨プロトコル（Life Technologies
）に従って処理した。cDNAをセファロースCL4Bカラム（Amersham Pharmacia Bio
tech）において分別し、400bpを超えるこれらのcDNAをpINCY1と結合させた。続
いてプラスミドをDH5αコンピテント細胞（Life Technologies）に形質転換した
。

【０１６９】２ cDNAクローンの単離プラスミドDNAを細胞から遊離させ、REAL Prep 96 Plasmid キット（QIAGEN）
を用いて精製した。このキットによって、96のウェルブロック中の96個のサンプ
ルが多チャネルの試薬ディスペンサーを用いて同時に精製可能となる。推奨プロ
トコルを用いたが、以下の点を変更した。１）細菌は、25mg/Lのカルベニシリン
及び0.4%のグリセロールと共に1mlの滅菌Terrific Broth（Life Technologies）
において培養した。２）接種の後、培養株を19時間インキュベートし、インキュ
ベーションの終了時に細胞を0.3mlの溶解バッファーで溶解した。３）イソプロ
パノール沈殿の後に、プラスミドDNAペレッを0.1mlの蒸留水中に再懸濁した。プ
ロトコルの最終ステップの終了後に、サンプルを96穴ブロックに移して4℃で保
管した。

【０１７０】３配列決定および分析配列決定のためのcDNAは、Peltier PTC-2000 thermal cyclers（MJ Research,
Inc., Watertown, MA とABI CATALYST 800 （Perkin-Elmer）若しくはMICROLAB
2200（Hamilton Co.）sequencing preparation systemを）とを共に用いて準備
した。cDNAは、ABI PRISM 373若しくは377 配列決定システム（Perkin-Elmer Co
rp.）並びにABIプロトコル、塩基対呼び出しソフトウェア、及びキット（Perkin
-Elmer Corp.）を用いて配列決定した。或いは、Amersham Pharmacia Biotech社
の溶液および色素を用いた。標準的な方法（Ausubel, 前出）を用いて読み枠を
識別した。DNA配列の幾つかを選択して、本実施例の５に記載した方法で伸長し
た。

【０１７１】 cDNA、伸長物、及びショットガン配列決定から得られたポリヌクレオチド配列
は、当業者に周知のアルゴリズムを利用するソフトウェアプログラムを組合せて
用いて構築および分析した。表１には、利用したソフトウェアプログラム、プロ
グラムの説明、引用文献、及び適用可能なパラメーター閾値をまとめた。表１の
第3列に示した引用文献については、ここで言及することにより本明細書の一部
とする。配列は、MACDNASIS PROソフトウェア（Hitachi Software Engineering
）及びLASERGENEソフトウェア（DNASTAR）を用いて分析した。

【０１７２】ポリヌクレオチド配列の確証は、BLAST、動的計画法、及びジヌクレオチド最
近接分析に基づいたプログラム及びアルゴリズムを用いて、ベクター、リンカー
、及びpolyA尾部の配列を取除き、多義性の塩基対をマスクすることによって実
施した。次に、配列をBLAST、FASTA、及びBLIMPSに基づいたプログラムを用いて
GenBankの霊長類、げっ歯類、哺乳類、脊椎動物、及び真核生物のデータベース
やBLOCKSデータベース等の公共のデータベースでから選択した配列に対して問合
わせて注釈を得た。Phred、Phrap、及びConsedに基づいたプログラムを用いて配
列を完全長のポリヌクレオチドに構築し、GeneMark、BLAST、及びFASTAに基づい
たプログラムを用いて読取り枠に対してスクリーニングした。次に完全長のポリ
ヌクレオチド配列を翻訳して対応する完全長のアミノ酸配列を引き出し、続いて
その完全長のポリヌクレオチド配列およびアミノ酸配列をGenBankデータベース
（前述）、SwissProt、BLOCKS、PRINTS、PFAM 、及びPrositeなどのデータベー
スに問い合わせることによって分析した。

【０１７３】４ノーザン分析ノーザン分析は、遺伝子の転写物の存在を検出するために用いられる実験用技
術であり、特定の細胞種或いは組織に由来するRNAが結合している膜と、標識さ
れたヌクレオチド配列とのハイブリダイゼーションを伴う（例えば、Sambrookら
、前出, ch.7；並びにAusubel,前出, ch.4および16参照）。

【０１７４】電子的ノーザンブロットは、類似のコンピュータ技術を用いて生成された。こ
れらの技術をBLASTに適用し、GenBank 若しくはLIFESEQデータベース（Incyte P
hamnaceuticals）のようなヌクレオチドデータベースにおいて同一又は関連する
配列を検索する。コンピュータ検索の感度を変更して、一致の特異性を決定する
。検索の基準は、以下で定義される積スコアである。（配列同一性%×最大BLASTスコア%）／100 積スコアは、2つの配列間の類似性の程度および配列一致の長さの両方を考慮に
入れる。例えば、積スコア40の場合、その一致は1〜2%誤差の確からしさであり
、一方で積スコア70の場合は正確な一致となる。より低いスコアが関連する配列
に結びつくこともあるが、類似の分子は15〜40の積スコアによって識別した。

【０１７５】電子的なノーザン分析には、器官／組織および疾病によるcDNAライブラリーの
分類が更に含まれる。器官／組織の分類には、心血管、皮膚、発生、内分泌、胃
腸、造血／免疫、筋骨格、神経、生殖、及び泌尿器が含まれ、疾患の分類には、
癌、炎症／外傷、胎性、神経性、及び貯留(pooled)が含まれる。各分類に対して
、目的とする配列を発現するライブラリーの数を全ての分類に跨るライブラリー
のトータル数で割る。その結果が、百分率の分布として報告される。

【０１７６】５ HPAP-1をコードするポリヌクレオチドの伸長 SEQ ID NO:2の完全長の核酸配列を、完全長分子の適切な断片の伸長によって
、これらの断片から設計されたオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、生成し
た。一方のプライマーはアンチセンスポリヌクレオチドの伸長を開始するために
合成し、他方のプライマーはセンスポリヌクレオチドの伸長を開始するために合
成した。プライマーを用いることにより、既知の配列を「外側に」伸長すること
を容易にし、対象の領域に対する新たな未知のヌクレオチド配列を含むアンプリ
コンを生成した。初期のプライマーを、OLIGO 4.06 （National Biosciences）
或いは他の適切なプログラムを用いて、約22〜30個のヌクレオチドからなる長さ
であって50%以上のGC含有物を有し、且つ約68〜72℃の温度で標的配列にアニー
リングするようにcDNAから設計した。ヘアピン構造及びプライマー−プライマー
2量体を生ずるようなヌクレオチドの如何なる伸長も回避した。

【０１７７】選択されたヒトcDNAライブラリー（Life Technologies）を用いてその配列を
伸長した。2以上の伸長が必要であるか、もしくは望ましい場合には、さらに別
のプライマーの組を設計して既知領域をさらに伸長させる。

【０１７８】 XL-PCR^TM キット（Perkin Elmer Corp.）の取扱説明書に従って、酵素及び反
応混合物を完全に混合することで高い適合度の増幅が得られた。PCRはPTC-200 t
hermal cycler（MJ Reserch, Inc.）を用いて実施され、以下のパラメータで、4
0pmolの各プライマーおよびキットの他の全ての成分は推奨された濃度で開始し
た。ステップ1 94℃で1分間（初期変性）ステップ2 65℃で1分間ステップ3 68℃で6分間ステップ4 94℃で15秒間ステップ5 65℃で1分間ステップ6 68℃で7分間ステップ7 ステップ4〜6をさらに15サイクル繰返すステップ8 94℃で15秒間ステップ9 65℃で1分間ステップ10 68℃で7分15秒間ステップ11 ステップ8〜10を12サイクル繰返すステップ12 72℃で8分間ステップ13 4℃（保持する）反応混合物の5〜10μlのアリコットを低濃度（約0.6〜0.8%）アガロースミニ
ゲル上で電気泳動法により分析し、どの反応物が配列の伸長に成功したかを判定
した。最も大きな生成物を含むと考えられるバンドをゲルから切出し、QIAQUICK
精製キット（QIAGEN）を用いて精製し、クレノウ酵素を用いてオーバーハングを
切除して、再連結及びクローニングを容易にした。

【０１７９】エタノール沈殿の後、その生成物を13μlの連結緩衝液中に再溶解し、1μlのT
4-DNAリガーゼ（15単位）及び1μlのT4ポリヌクレオチドキナーゼを加えて、そ
の混合物を室温で2〜3時間、或いは16℃で一晩インキュベートした。コンピテン
トE.coli細胞（40μlの適切な培養液中の）を3μlの連結混合物を用いて形質転
換し、80μlのSOC培養液で培養した（例えば、Sambrook、前出,Appendix A, p.2
参照）。37℃で1時間インキュベートした後、E.coli混合物を、カルベニシリン
（2x carb）を含むLuria Bertani (LB)-agar（例えば、Sambrook、前出, Append
ix A, p.1参照）上で平板培養(plated)した。翌日、いくつかのコロニーを各プ
レートから無作為に選択して、適切な市販の滅菌96穴マイクロタイタープレート
の個々のウエル内に置かれた150μlの液体LB/2x carb培地で培養した。その翌日
、終夜培養した各5μlの培養物を非滅菌の96穴プレートに移し、水で1:10に希釈
した後、各サンプルから5μlをPCRアレイに移した。

【０１８０】 PCR増幅の場合、ベクタープライマー、伸長反応のために用いられる1つ或いは
両方の遺伝子特異性プライマー、及び4単位のrTth DNAポリメラーゼを含む18μl
の濃縮PCR反応混合物（3.3x）が各ウエルに加えられた。増幅は、以下の条件で
実施した。ステップ1 94℃で60秒間ステップ2 94℃で20秒間ステップ3 55℃で30秒間ステップ4 72℃で90秒間ステップ5 ステップ2〜4をさらに29サイクル繰返すステップ6 72℃で180秒間ステップ7 4℃（保持する） PCR反応物のアリコットを、分子量マーカーと共にアガロースゲル上で移動さ
せた。PCR生成物の大きさを元の部分的なcDNAと比較し、適切なクローンを選択
し、プラスミドに結合させて配列決定した。

【０１８１】同様に、SEQ ID NO:2のヌクレオチド配列を使用し、上記手順、5’伸長用に設
計されたオリゴヌクレオチド、及び適切なゲノムライブラリを用いて5’調節配
列を得た。

【０１８２】６個々のハイブリダイゼーションプローブの標識化及び使用 SEQ ID NO:2から得られたハイブリダイゼーションプローブを用いて、cDNA、
ゲノムDNA、又はmRNAをスクリーニングする。約20塩基対からなるオリゴヌクレ
オチドの標識について特に記載するが、より大きなヌクレオチド断片にも概ね同
じ手順を用いる。オリゴヌクレオチドを、OLIGO^TM 4.06ソフトウェア（National
Biosciences）のような当技術分野のソフトウエアを用いて設計し、50pmolの各
オリゴマー、250μCiの[γ-³²P]アデノシン3リン酸（Amersham, Pharmacia Bio
tech）、及びT4ポリヌクレオチドキナーゼ（DuPont NEN, Boston MA）を結びつ
けることにより標識する。標識されたオリゴヌクレオチドを、SEPHADEX G-25超
微細分子サイズ排除デキストランビーズカラム（Amersham, Pharmacia Biotech
）を用いて実質的に精製する。毎分10⁷カウントの標識されたプローブを含むア
リコットを、以下のエンドヌクレアーゼ、Ase I、Bgl II、Eco RI、Pst I、Xba1
、又はPvu II（DuPont NEN）の中の1つで消化されたヒトゲノムDNAの典型的な膜
ベースのハイブリダイゼーション解析に用いる。

【０１８３】各消化物からのDNAを、0.7%アガロースゲルに上で分画して、ナイロン膜（NyH
PAP-1lus, Schleicher & Schuell, Durham NH）に移す。ハイブリダイゼーショ
ンは40℃で16時間実施する。非特異的シグナルを除去するために、0.1xクエン酸
ナトリウム食塩水及び0.5%ドデシル硫酸ナトリウムまでの徐々に厳密性を増す条
件下で、ブロットを室温にて連続的に洗浄する。XOMAT AR^TMフィルム（Eastman
Kodak, Rochester, NY）を数時間ブロットに露光した後、ハイブリダイゼーシ
ョンパターンを視覚的に比較する。

【０１８４】７マイクロアレイ化学的結合プロシージャ及びインクジェット装置を用いることにより、基板の
表面上でアレイエレメントを合成することができる。（例えば、Baldeschweiler
, 前出参照）。また、ドットブロット又はスロットブロット法に類似の所定の
アレイを用いて、熱、UV、化学的もしくは機械的結合プロシージャを利用して、
基板の表面にエレメントを配置及び結合させてもよい。標準的なアレイは、手製
で或いは手近な方法及び機械を用いて製作でき、また任意の適切な数のエレメン
トを含む。ハイブリダイゼーション後、ハイブリダイズしていないプローブを取
除き、スキャナーを用いて蛍光のレベル及びパターンを判定する。マイクロアレ
イ上のエレメントとハイブリダイズする各プローブの相補性の度合及び相対的な
存在量は、スキャナーで読取られた画像を解析することにより評価する。

【０１８５】完全長cDNA、発現された配列タグ（ESTs）、又はそれらの断片は、マイクロア
レイのエレメントを含み得る。ハイブリダイゼーションに適した断片は、当業者
に周知のLASERGENEのようなソフトウェアを用いて選択可能である。本発明のヌ
クレオチド配列の1つに対応する完全長cDNA、EST、若しくはそれらの断片を、又
は本発明に関連するcDNAライブラリーから無作為に選択されたものを、例えばス
ライドガラスのような適切な基板に配置する。そのcDNAを、例えばUV架橋の後に
熱的および化学的に処置し、さらに乾燥することによって、スライドガラスに固
定する（例えば、Schena, M.ら (1995) Science 270:467-470; 並びにShalon, D
.ら(1996) Genome Res. 6:639-645参照）。蛍光プローブを作製し、基板上のエ
レメントとのハイブリダイゼーションに用いる。基板は前述の方法によって解析
する。

【０１８６】８相補的ポリヌクレオチド HPAP-1をコードする配列に相補的な配列、或いはその任意の一部を、自然発生
HPAP-1の発現を検出し、低下させる、即ち抑制するために用いる。約15〜約30塩
基対を含むオリゴヌクレオチドの使用について記載するが、より小さな、或いは
より大きな配列フラグメントの場合でも本質的に同じ方法が用いられる。OLIGO^T ^M 4.06ソフトウェア（National Biosciences）及びHPAP-1のコーディング配列を
用いて適切なオリゴヌクレオチドを設計する。転写を抑制するために、相補オリ
ゴヌクレオチドを最も独特な5’配列から設計してコーディング配列へのプロモ
ーターの結合を防止するために用いる。翻訳を抑制するために、相補的なオリゴ
ヌクレオチドを設計してHPAP-1をコードする転写物へのリボソームの結合を防ぐ
。

【０１８７】９ HPAP-1の発現 HPAP-1の発現及び精製は、細菌またはウイルスに基づく発現系を用いて実施さ
れる。細菌におけるHPAP-1の発現の場合、抗菌性の耐性遺伝子とcDNAの転写レベ
ルを高める誘導性のプロモーターとを含む適切なベクターにcDNAをサブクローニ
ングする。このようなプロモーターの例としては、以下に限定しないが、lacオ
ペレーター調節エレメントに関連するT5またはT7バクテリオファージプロモータ
ー及びtrp-lac(tac)ハイブリッドプロモーターが挙げられる。組換えベクターを
、BL21(DE3)などの適切な細菌性の宿主に形質転換する。抗生物質耐性菌が、イ
ソプロピルβ−Ｄチオガラクトピラノシド（IPTG）での誘発によりHPAP-1を発現
する。真核生物の細胞におけるHPAP-1の発現は、昆虫または哺乳動物の細胞株に
、一般にバキュロウイスルスとして知られているAutographica californica核多
角体ウイルス（AcMNPV）を感染させることによって行う。バキュロウイルスの非
必須ポリヘドリン遺伝子を、相同的組換え又は転移プラスミド中間体を含む細菌
媒介の遺伝子転移の何れかによって、HPAP-1をコードするcDNAと置換する。ウイ
ルスの感染力は維持され、強力なポリヘドリンプロモータによって高レベルのcD
NAの転写が行われる。多くの場合、組換え型バキュロウイルスは、Spodoptera fr
ugiperda （Sf9）昆虫細胞の感染に用いられるが、場合によっては、ヒト肝細胞
の感染にも用いられる。後者の感染には、バキュロウイルスに対する更なる遺伝
的変更が必要となる。（例えば、Engelhard. E. K.ら(1994) Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 91:3224-3227; Sandig, V.ら(1996) Hum. Gene Ther. 7:1937-1945.
を参照）。

【０１８８】殆どの発現系において、HPAP-1は、例えばグルタチオンSトランスフェラーゼ
（GST）、またはFLAG若しくは6-His等のペプチドエピトープ標識で融合タンパク
質として合成され、粗製の細胞溶解産物からの組換え型融合タンパク質の親和性
ベースの精製を迅速に1段階で行うことができる。Schistosoma japonicumからの
26キロダルトンの酵素のGSTによって、タンパク質の活性及び抗原性を維持した
条件の下で固定化されたグルタチオにおける融合タンパク質の精製が可能となる
。（Amersham Pharmacia Biotech）。精製の後に、特定の操作部位においてHPAP
-1からGST部分をタンパク分解的に切断可能である。8個のアミノ酸のペプチドで
あるFLAGにより、市販のモノクロナール及びポリクロナール抗FLAG抗体を用いて
免疫親和性の精製が可能となる（Eastman Kodak）。6個の連続したヒスチジン残
基のストレッチである6-Hisによって、金属キレート樹脂（QIAGEN）における精
製が可能となる。タンパク質の発現及び精製の方法については、Ausubelらの文
献（1995, 前出, ch 10 and 16）に記載されている。これらの方法によって得ら
れた精製されたHPAP-1を、以下のアッセイで直接用いることができる。

【０１８９】１０ HPAP-1活性の実証 HPAP-1の活性は、産卵特性の低下を示すsel-12変異体表現型の救済のためのア
ッセイにおけるC.elegans SEL-12タンパク質に代わるヒトプレセニリンタンパク
質の能力によって実証される（Levianら, 前出）。SEL-12又はHPAP-1を含めpLEX
に基づくプラスミド作成物が準備され、産卵活性を著しく低下させるsel-12（ar
131）変異を含むC.elegansに注入される。産卵は2日後に評価され、対照sel-12
（ar131）と、ベクターのみ、pLEX-SEL12、若しくはpLEX-HPAP-1作成物を形質移
入された同種の細胞とが比較される。pLEX-HPAP-1を形質移入した細胞と、対照
細胞若しくはpLEXベクターのみが形質移入された細胞との差異がHPAP-1における
プレセニリン活性の尺度である。

【０１９０】１１機能的アッセイ HPAP-1の機能は、哺乳類細胞培養系における生理学的に高められたレベルでの
HPAP-1をコードする配列の発現によってアッセイする。高レベルでcDNAを発現す
る強力なプロモーターを含む哺乳類の発現ベクターにcDNAをサブクローニングす
る。選り抜きのベクターには、pCMV SPORT（Life Technologies）及びPCR 3.1（
Invitrogen, Carlsbad, CA）が含まれ、その各々にはサイトメガロウイルスプロ
モーターが含まれる。5〜10μgの組換えベクターを、リポソーム製剤或いは電気
穿孔法によって、好ましくは内皮若しくは造血由来のヒト細胞株に一過性に形質
移入する。また、標識タンパク質をコードする配列を含む1〜2μgの付加的なプ
ラスミドを同時形質移入する。標識タンパク質の発現により、形質移入された細
胞と形質移入されていない細胞とを区別することができ、また組換えベクターか
らのcDNAの発現を確実に予測できる。選り抜きの標識タンパク質には、緑色蛍光
タンパク質（GFP Clontech）、CD64、又はCD64-GFP融合タンパク質が含まれる。
自動化されたレーザー光学に基づいた技術であるフローサイトメトリー（FCM）
を用いて、GFP又はCD64-GFPを発現する形質移入された細胞を同定し、またアポ
トーシスの状態等の特性を評価する。FCMによって、先行する或いは同時の細胞
死の現象を診断する蛍光分子の取込みを検出及び定量化する。これらの現象には
、プロピジウムヨウ化物でのDNAの染色によって測定される核DNA内容物の変化、
ブロモデオキシウリジンの取込み量の低下によって測定されるDNA合成の下方制
御、特異的抗体との反応性によって測定される細胞表面および細胞内のタンパン
ク質の発現の変化、並びにフルオレセイン結合アネキシンVタンパク質の細胞表
面への結合によって測定される形質膜組成の変化が含まれる。フローサイトメト
リーの方法については、Ormerod, M. G.の (1994) Flow Cytometry, Oxford, Ne
w York, NYに記載されている。

【０１９１】遺伝子発現におけるHPAP-1の影響は、HPAP-1をコードする配列並びにCD64若し
くはCD64-GFPの何れかが形質移入された高度に精製された細胞集合を用いて評価
することができる。CD64及びCD64-GFPは、形質転換された細胞表面で発現し、ヒ
ト免疫グロブリンG（IgG）の保存された領域と結合する。形質転換された細胞を
、ヒトIgG若しくはCD64の抗体の何れかで被覆された磁気ビーズを用いて、形質
転換されていない細胞から分離することができる（DYNAL, Lake Success, NY）
。mRNAは、当業者に周知の方法で細胞から精製することができる。HPAP-1及び目
的とする他の遺伝子をコードするmRNAの発現は、ノーザン分析やマイクロアレイ
技術で解析することが可能である。

【０１９２】１２ HPAP-1特異的抗体の産生ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（PAGE）（例えば、Harrington, M.G. (19
90) Methods Enzymol. 182:488-495参照）、或いは他の精製技術を使用して実質
的に精製されたHPAP-1を用いて、標準的なプロトコルに従ってウサギを免疫化し
て抗体を生成する。

【０１９３】或いは、HPAP-1のアミノ酸配列をLASERGENE software （DNASTAR）を用いて解
析して免疫原性の高い領域を判定し、対応するオリゴポリペプチドを合成し、こ
れを用いて当業者に知られた方法により抗体を産生させる。C-末端付近または親
水性領域内のエピトープのような適切なエピトープの選択方法の詳細については
当業者の文献に記載されている（例えば、Ausubelら前出, ch.11参照）。

【０１９４】通常、15残基の長さのオリゴペプチドを、fmoc法の化学作用を利用するApplied
Biosystems Peptide Synthesizer Model 431Aを用いて合成し、MBS（N-maleimi
dobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester）を用いた反応によりKLH（Sigmaw Aldr
ich, St.Louis, MO）に結合させて免疫抗原性を増強させる（例えば、Ausubel前
出）。ウサギをフロイント完全アジュバントにおけるオリゴペプチド-KLH複合体
で免疫化する。その結果生じる抗血清は、例えば、プラスチックにペプチドを結
合させ、1%BSAでブロッキングし、ウサギ抗血清と反応させ、洗浄し、さらに放
射性ヨウ素標識したヤギ抗ウサギIgGと反応させることにより、抗ペプチド活性
に対して検査される。

【０１９５】１３特異的抗体を用いる自然発生HPAP-1の精製 HPAP-1に特異的な抗体を用いるイムノアフィニティークロマトグラフィにより
、自然発生或いは組換えHPAP-1を実質的に精製する。イムノアフィニティーカラ
ムは、HPAP-1抗体を、CnBr-活性化SEPHAROSE（Amersham Pharmacia Biotech）の
ような活性化されたクロマトグラフィー用樹脂に共有結合させることにより作製
する。結合の後、製造者の取扱説明書に従って樹脂をブロック及び洗浄する。

【０１９６】 HPAP-1を含む培養液をイムノアフィニティーカラムに通し、HPAP-1を優先的に
吸着させる条件下（例えば、界面活性剤の存在下における高イオン強度のバッフ
ァー）でそのカラムを洗浄する。抗体／HPAP-1結合を分裂させる条件下（例えば
、pH2〜3のバッファー、又は尿素もしくはチオシアン酸塩イオンのような高濃度
のカオトロープ(chaotrope)）でカラムを溶出させ、HPAP-1を回収する。

【０１９７】１４ HPAP-1と相互作用する分子の同定 HPAP-1若しくは生物学的に活性なそれらの断片を¹²⁵I Bolton-Hunter試薬で標
識する（例えば、Bolsonら(1973) Biochem. J. 133:529を参照）。マルチウェル
プレートのウェル内に予め配置した候補分子を、標識したHPAP-1と共にインキュ
ベートし、洗浄し、標識したHPAP-1複合体を含む全てのウェルをアッセイする。
種々のHPAP-1濃度で得られたデータを用いて、HPAP-1と候補分子との会合、親和
性、及び数についての値を計算する。

【０１９８】上記の刊行物および特許出願の全ては、ここで言及することにより本明細書の
一部とする。当業者は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく本明細書に
記載した方法及びシステムの種々の改変を行うことができるであろう。本発明を
特定の好適実施例に関して説明してきたが、請求する発明がそのような特定の実
施例に過度に制限されるべきではないことを理解されたい。実際に、記載した本
発明の実施のための方法の種々の改変は、分子生物学或いは関連する分野の当業
者には明らかであり、請求の範囲内に含まれることを意図するものである。

【０１９９】表の簡単な説明表１には、HPAPの分析に用いたプログラム、プログラムの説明、引用文献、パ
ラメーター閾値を示す。

【表１】

【表２】

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１Ａ】 HPAP-1のアミノ酸配列（SEQ ID NO:1）及び核酸配列（SEQ ID NO:2）を示す図
である。アライメントの作成にはMacDNASIS PROソフトウエア（Hitachi Softwar
e Engineering Co. Ltd., San Bruno, CA）を使用した。

【図１Ｂ】 HPAP-1のアミノ酸配列（SEQ ID NO:1）及び核酸配列（SEQ ID NO:2）を示す
図である。アライメントの作成にはMacDNASIS PROソフトウエア（Hitachi Softw
are Engineering Co. Ltd., San Bruno, CA）を使用した。

【図１Ｃ】 HPAP-1のアミノ酸配列（SEQ ID NO:1）及び核酸配列（SEQ ID NO:2）を示す
図である。アライメントの作成にはMacDNASIS PROソフトウエア（Hitachi Softw
are Engineering Co. Ltd., San Bruno, CA）を使用した。

【図２】 MEGALIGNプログラム（DNASTAR Inc, Madison WI）を用いて作成したHPAP-1（p
1353337; SEQ ID NO:1）及びヒトプレセニリンI-463（GI 1244638; SEQ ID NO:3
）の間のアミノ酸配列アライメントを示す図である。SEQ ID NO:3の残基1〜186
に関するHPAP-1のアライメントを示すために、SEQ ID NO:3は切り詰められてい
る。

【図３Ａ】 MEGALIGNプログラムを用いて作成したHPAP-1の核酸配列（n1353337; SEQ ID N
O:2）及びヒトプレセニリンI-463の核酸配列（GI 1244637; SEQ ID NO:4）の間
の核酸配列アライメントを示す図である。SEQ ID NO:4の残基1〜770に関するHPA
P-1のアライメントを示すために、SEQ ID NO:4は切り詰められている。

【図３Ｂ】 MEGALIGNプログラムを用いて作成したHPAP-1の核酸配列（n1353337; SEQ ID N
O:2）及びヒトプレセニリンI-463の核酸配列（GI 1244638; SEQ ID NO:4）の間
の核酸配列アライメントを示す図である。SEQ ID NO:4の残基1〜770に関するHPA
P-1のアライメントを示すために、SEQ ID NO:4は切り詰められている。

【図３Ｃ】 MEGALIGNプログラムを用いて作成したHPAP-1の核酸配列（n1353337; SEQ ID N
O:2）及びヒトプレセニリンI-463の核酸配列（GI 1244638; SEQ ID NO:4）の間
の核酸配列アライメントを示す図である。SEQ ID NO:4の残基1〜770に関するHPA
P-1のアライメントを示すために、SEQ ID NO:4は切り詰められている。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 15/00 Ａ６１Ｐ 25/28 ４Ｃ０８５ 25/00 35/00 ４Ｈ０４５ 25/28 37/02 35/00 43/00 １１１ 37/02 Ｃ０７Ｋ 14/47 43/00 １１１ 16/18 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/18 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 5/10 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡＣ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者コーレイ、ニール・シーアメリカ合衆国カリフォルニア州94040・マウンテンビュー・＃30・デールアベニュー 1240 (72)発明者パターソン、チャンドラアメリカ合衆国カリフォルニア州94040・マウンテンビュー・レランドアベニュー 2189 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 AA19 BA80 CA04 CA07 CA09 CA20 DA02 DA06 EA02 EA04 GA11 HA03 HA13 HA14 4B063 QA01 QQ43 QQ53 QR08 QR32 QR35 QR40 QR42 QR56 QR62 QR84 QS16 QS25 QS34 QX02 4B064 AG01 AG27 CA02 CA10 CA19 CA20 CC01 CC24 CE12 DA01 DA13 4B065 AA26X AA90X AA93Y AA95X AB01 AC14 BA01 BD14 CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA06 AA07 AA13 AA17 BA22 CA53 CA56 CA59 NA14 ZA011 ZA451 ZA591 ZA811 ZA891 ZA941 ZA961 ZA971 ZB071 ZB131 ZB151 ZB261 ZB321 ZB331 ZB351 ZC551 ZC781 4C085 AA13 AA14 BB11 CC04 DD22 DD23 EE01 GG01 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 BA41 CA40 DA75 EA20 EA50 FA71 FA74 GA26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】 SEQ ID NO:1若しくは SEQ ID NO:1の断片からなるアミノ
酸配列を含む実質的に精製されたポリペプチド。
【請求項２】請求項１の配列に対して少なくとも90%以上のアミノ酸配
列の同一性を有する実質的に精製された変異体。
【請求項３】請求項１のポリペプチドをコードする単離され精製された
ポリヌクレオチド。
【請求項４】請求項３のポリヌクレオチドに対して少なくとも90%以上
のポリヌクレオチド配列の同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオチド
の変異配列。
【請求項５】厳密な条件の下で請求項３のポリヌクレオチドとハイブリ
ダイズする単離され精製されたポリヌクレオチド。
【請求項６】請求項３のポリヌクレオチドに対して相補的である単離さ
れ精製されたポリヌクレオチド。
【請求項７】 SEQ ID NO:2若しくは SEQ ID NO:2の断片からなるポリヌ
クレオチド酸配列を含む単離され精製されたポリヌクレオチド。
【請求項８】請求項７のポリヌクレオチドに対して少なくとも90%以上
のポリヌクレオチド配列の同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオチド
変異配列。
【請求項９】請求項７のポリヌクレオチドに対して相補的な配列を有す
る単離され精製されたポリヌクレオチド。
【請求項１０】請求項３のポリヌクレオチドの少なくとも断片を含む発
現ベクター。
【請求項１１】請求項１０の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１２】ポリペプチドの製造方法であって、（ａ）前記ポリペプチドの発現に適した条件の下で、請求項１１の宿主細胞を
培養する過程と、（ｂ）前記宿主細胞の培地から前記ポリペプチドを回収する過程とを含むこと
を特徴とする製造方法。
【請求項１３】適切な医薬用担体と共に請求項１のポリペプチドを含む
医薬品組成物。
【請求項１４】請求項１のポリペプチドに特異的に結合する精製された
抗体。
【請求項１５】請求項１のポリペプチドの精製されたアゴニスト。
【請求項１６】請求項１のポリペプチドの精製されたアンタゴニスト。
【請求項１７】 HPAPの活性もしくは発現の低下に関連する疾患の治療ま
たは予防の方法であって、そのような治療が必要な患者に対して、有効な量の請
求項１３の医薬品組成物を投与する過程を含む方法。
【請求項１８】 HPAPの活性もしくは発現の増大に関連する疾患の治療ま
たは予防の方法であって、そのような治療が必要な患者に対して、有効な量の請
求項１６のアンタゴニストを投与する過程を含む方法。
【請求項１９】サンプルにおけるポリヌクレオチドの検出方法であって
、（ａ）請求項６のポリヌクレオチドを前記生物学的サンプルの少なくとも1つ
の核酸とハイブリダイズさせて、ハイブリダイゼーション複合体を形成する過程
と、（ｂ）前記ハイブリダイゼーション複合体を検出する過程であって、該ハイブ
リダイゼーション複合体の存在が前記サンプルにおけるポリヌクレオチドの存在
と相関性を有するような検出過程とを含むことを特徴とする検出方法。
【請求項２０】ハイブリダイゼーション過程の前に、前記ポリヌクレオ
チドを増幅する過程を更に含むことを特徴とする請求項１９に記載の方法。