JP2002525055A - ヒト細胞間結合ｐｄｚタンパク質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、新規のヒト細胞間結合PDZタンパク質（CJPDZ）と、CJPDZを同定しコードするポリヌクレオチドとを提供する。また、本発明は、発現ベクター及び宿主細胞、抗体、アゴニスト、アンタゴニストを提供する。更に、本発明は、CJPDZの発現に関連する疾患の診断または治療方法、予防方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 技術分野 本発明は、細胞間結合PDZタンパク質の核酸配列及びアミノ酸配列、並びに癌
及び神経障害、発達障害の診断及び治療、予防におけるこれらの配列の使用に関
する。

【０００２】 発明の背景 細胞は、細胞外シグナルを受け取って処理することにより、その環境と連絡し
、応答している。これらのシグナルは、特定の原形質膜の受容体に結合し、それ
を活性化する成長因子、ホルモン、サイトカイン、及びペプチドの形態をとる。
活性化された受容体は、遺伝子の発現、タンパク質の分泌、細胞周期の進行、及
び細胞の分化に影響を及ぼす様々な細胞応答を最終的にもたらす細胞内シグナル
伝達経路を生起させる。シグナル伝達における初めの事象には、細胞内シグナル
伝達タンパク質が、活性化原形質膜受容体のサイトゾルの領域に近接しているこ
とが必要である。これらの細胞内膜関連シグナル伝達タンパク質は、活性化され
た受容体をその下流の二次メッセンジャー系に結び付け、かつ、複合体、多タン
パク質シグナル伝達経路の調節・調整において重要な役割を果たす。近年、PDZ
ドメインと呼ばれる保存タンパク質ドメインが、様々な膜関連シグナル伝達タン
パク質において同定された。このドメインは、受容体及びイオンチャネルクラス
ター形成や、多タンパク質シグナル伝達複合体の、原形質膜のサイトゾル側の特
定化機能領域へのターゲティングに関与する（PDZドメインを含むタンパク質に
ついて概観するためには、Pointing, C.P.ら (1997) Bioassays 19:469-479を参
照されたい）。

【０００３】 PDZドメインは、そのドメインが初めて発見された3種のタンパク質の名をとっ
て命名されている。これらのタンパク質には、PSD-95（postsynaptic density 9
5）、Dlg（Drosophila lethal(1)discs large-1）、及びZO-1（zonula occluden
s-1）がある。これらのタンパク質はそれぞれ、神経のシナプス伝達、腫瘍抑制
、及び細胞間結合形成において重要な役割を果たす。これらのタンパク質の発見
により、60種以上の他のPDZを含むタンパク質が多種多様な前核生物や真核生物
において同定された。PDZドメインの大部分は、真核生物のMAGUK（膜関連グアニ
ル酸キナーゼ）タンパク質ファミリーにおいて見出された。そのタンパク質ファ
ミリーのメンバーは、受容体及びチャネルの細胞内ドメインに結合する。しかし
、PDZドメインは、タンパク質チロシンホスファターゼ、セリン／スレオニンキ
ナーゼ、Gタンパク質補助因子、及びシントロフィンやニューロン酸化窒素シン
ターゼ（nNOS）のようなシナプス関連タンパク質等の多種多様な膜局在タンパク
質においても見出される。通常は、所定のタンパク質内に約1個乃至3個のPDZド
メインが見出されるが、１個のタンパク質から最大で9個のPDZドメインが同定さ
れたことがある。

【０００４】 Ｘ線結晶学的分析によって、PDZが、通常は、6個のβ鎖と2個のαヘリックス
を形成する約80乃至100個のアミノ酸を含むコンパクトな球状構造であることが
わかった。PDZドメインは、ポリペプチド鎖を導入し、折り畳まれたポリペプチ
ドのコンパクト化や安定性を促進するグリシン残基を多く含む傾向を有する。詳
述すると、グリシン−アスパラギン酸（GD）ジペプチド及びその6残基後にある
アスパラギン酸残基は、ほぼ全てのPDZドメインにおいて高度に保存され、ドメ
イン構造にとって重要である。PDZドメインは、バリン、セリン又はスレオニン
を含む3アミノ酸のペプチドに結合する。PDZドメインに結合するリガンドの大部
分は、このモチーフを含むが、リガンドによってはこのモチーフを欠いているも
の、或いはそのなかに保存的代替部分をもつものもある。

【０００５】 MAGUKタンパク質ファミリーのメンバーは、神経伝達物質受容体及びチャネル
のクラスタ形成において重要や役割を果たし、かつこのクラスタ形成はニューロ
ンの機能に必要不可欠である（Ponting, 前出）。神経伝達物質の存在下では、P
SD-95、PSD-93、SAP-97（シナプス関連タンパク質97）、SAP-102、及びchapsyn
110のPDZドメインは、Shaker型カリウムチャネル及びN-メチル-D-アスパラギン
酸（NMDA）神経伝達物質受容体のサイトゾル側のC末端に結合し、それらをクラ
スター形成させる。加えて、PSD-95のPDZドメインとnNOSのPDZドメインとの相互
作用により、後者がNMDA受容体の近傍に固着される。

【０００６】 線虫Caenorhabditis elegansでは、PDZを含むタンパク質であるLIN-7が、産卵
口を形成する細胞の特異化のため発達中に必要となる（Simske, J.S.ら (1996)
Cell 85:195-204）。これらの前駆体死亡は、性的に未成熟の線虫において上皮
を形成する。拡散性上皮細胞成長因子（EGF）様シグナルは、上皮の近傍におい
て分泌される。そのシグナルに十分近接した位置にある細胞は、EGF様受容体チ
ロシンキナーゼ／Ras媒介シグナル伝達経路を活性化することによって応答する
。応答している細胞は、次に分化して産卵口を形成する子孫細胞を生成させる。
EGF様受容体（EGFR）は、上皮細胞間結合部に局在し、かつこの局在化は、シグ
ナル伝達及び産卵口形成に必要不可欠である。LIN-7遺伝子は、EGFRの局在化に
必要であり、かつ199番目から280番目のアミノ酸にPDZドメインを含む297個のア
ミノ酸からなるタンパク質（配列番号：３）をコードする。

【０００７】 PDZを含むタンパク質は、細胞シグナル伝達の障害に関連する疾患に関係があ
ると考えられる（Pointing, 前出）。上述のように、PDZドメインは、発達にお
いて重要な役割を担っていることが分かっており、実際、PDZを含むタンパク質
であるLIMキナーゼ1をコードする遺伝子が、複合発達障害のウイリアムス症候群
の患者で欠損している。PDZを含むタンパク質は、発癌にも関与している。例え
ば、Drosophila Dlgにおける変異によって上皮細胞の腫瘍性のトランスフォーメ
ーションが生じ、またN末端切断型のPDZを含むタンパク質、Tiam 1は、ヌードマ
ウスにおける高い腫瘍形成能を有する。加えて、マウスにおいて、ニューロンの
受容体及びチャネルのクラスタ形成を阻害する変異によって出生時致死が生ずる
が、このことは、ニューロンのMAGUKタンパク質のクラスタ形成機能の重要性を
示唆している。

【０００８】 新規の細胞間結合PDZタンパク質及びそをコードするポリヌクレオチドの発見
により、癌及び神経障害、発達障害の診断及び治療、予防に有用な新規の組成物
を提供することで当分野のニーズに答えることができる。

【０００９】 発明の要約 本発明は、新規のヒト細胞間結合PDZタンパク質（CJPDZ）及びCJPDZをコード
するポリヌクレオチドの発見、並びに癌及び神経障害の診断、治療、及び予防に
おけるそれらの組成物の使用に関する。

【００１０】 本発明は、SEQ ID NO:1またはその断片のアミノ酸配列を含む実質的に精製さ
れたポリペプチドを提供する。

【００１１】 更に本発明は、SEQ ID NO:1またはその断片のアミノ酸配列と少なくとも９０
％以上のアミノ酸配列同一性を有する実質的に精製された変異体を提供する。本
発明はまた、SEQ ID NO:1またはその断片のアミノ酸配を含むポリペプチドをコ
ードする単離され実質的に精製されたポリヌクレオチドを提供する。本発明はま
た、SEQ ID NO:1またはその断片のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードす
るポリヌクレオチドと９０％以上のポリヌクレオチド配列同一性を有する単離さ
れ精製されたポリヌクレオチド変異配列を提供する。

【００１２】 更に、本発明は、SEQ ID NO:1またはその断片のアミノ酸配列を含むポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドと厳密な条件の下でハイブリダイズする単離
され精製されたポリヌクレオチドを提供する。また本発明は、SEQ ID NO:1また
はその断片のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと
相補的な配列を含む単離され精製されたポリヌクレオチドを提供する。

【００１３】 本発明はまた、SEQ ID NO:2またはその断片のポリヌクレオチド配列を含む単
離され精製されたポリヌクレオチドと、SEQ ID NO:2またはその断片のポリヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチドと９０％以上のポリヌクレオチド配列同一
性を有する単離され精製されたポリヌクレオチド変異配列を提供する。更に本発
明は、SEQ ID NO:2またはその断片のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオ
チドと相補的な配列を有する単離され精製されたポリヌクレオチドを提供する。

【００１４】 本発明はまた、核酸を含むサンプルのポリヌクレオチドを検出する方法であっ
て、（ａ）ポリヌクレオチド配列の相補体を、サンプルの少なくとも１つのポリ
ヌクレオチドとハイブリダイズして、ハイブリダイゼーション複合体を形成する
過程と、（ｂ）そのハイブリダイゼーション複合体を検出する過程とを含み、そ
のハイブリダイゼーション複合体の存在とサンプルにおけるポリヌクレオチドの
存在とが相関性を有する、検出方法を提供する。本発明の一実施態様では、ハイ
ブリダイゼーションの前にポリヌクレオチドを増幅する過程を含む。

【００１５】 本発明は更に、SEQ ID NO:1またはその断片のアミノ酸配列を含むポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチドの少なくとも１つの断片を含む発現ベクターを
提供する。別の実施態様では、この発現ベクターは宿主細胞内に含まれる。

【００１６】 本発明はまた、ポリペプチドを製造する方法であって、（ａ）ポリペプチドの
発現に好適な条件の下、ポリヌクレオチドの少なくとも１つの断片を有する発現
ベクターを含む宿主細胞を培養する過程と、（ｂ）その宿主細胞の培地からその
ポリペプチドを回収する過程とを含む製造方法を提供する。

【００１７】 本発明はまた、SEQ ID NO:1またはその断片のアミノ酸配列を有する実質的に
精製されたポリペプチドを含む医薬品組成物を好適な医薬用担体と共に提供する
。

【００１８】 更に本発明は、SEQ ID NO:1またはその断片の配列を含むポリペプチドと結合
する精製された抗体、並びにそのポリペプチドの精製されたアゴニスト及びアン
タゴニストを提供する。

【００１９】 本発明はまた、CJPDZの発現または活性の低下に関連した疾患の治療または予
防が必要な患者に、SEQ ID NO:1またはその断片のアミノ酸配列を有する実質的
に精製されたポリペプチドを含む医薬品組成物を好適な医薬用担体と共に効果的
な量投与することを含む、CJPDZの発現または活性の低下に関連した疾患の治療
または予防方法を提供する。

【００２０】 本発明はまた、CJPDZの発現または活性の増大に関連した疾患の治療または予
防が必要な患者に、SEQ ID NO:1またはその断片のアミノ酸配列を有するポリペ
プチドのアンタゴニストを効果的な量投与することを含む、CJPDZの発現または
活性の増大に関連した疾患の治療または予防方法を提供する。

【００２１】 本発明の記載について 本発明のタンパク質及び核酸配列、方法について説明する前に、本発明は、こ
こに開示した特定の装置及び材料、方法に限定されず、その実施形態を変更でき
ることを理解されたい。また、ここで用いられる用語は、特定の実施例のみを説
明する目的で用いられたものであり、後述の請求の範囲によってのみ限定され、
本発明の範囲を限定することを意図したものではないということも理解されたい
。

【００２２】 本明細書及び請求の範囲において単数形を表す「或る」、「その（この等）」
は、文脈で明確に示していない場合は複数形を含むことに注意されたい。従って
、例えば「或る宿主細胞」は複数の宿主細胞を含み、その「抗体」は複数の抗体
は含まれ、当業者には周知の等価物なども含まれる。

【００２３】 本明細書で用いた全ての科学技術用語は、別の方法で定義されていない限り、
本発明の属する技術分野の一般的な技術者が普通に解釈する意味と同じである。
本明細書で記述したものと類似、或いは同等の全ての装置及び材料、方法は本発
明の実施及びテストに使用できるが、好適な装置及び材料、方法をここに記す。
本明細書に記載の全ての文献は、本発明に関連して使用する可能性のある文献に
記載された細胞系、プロトコル、試薬、ベクターを記述し開示するために引用し
た。従来の発明を引用したからと言って、本発明の新規性が損なわれると解釈さ
れるものではない。

【００２４】 定義 「CJPDZ」は、天然、合成、半合成或いは組換え体など全ての種（特にウシ、
ヒツジ、ブタ、マウス、ウマ及び好ましくは人類を含む哺乳動物）から得られる
実質的に精製されたCJPDZのアミノ酸配列を指す。

【００２５】 用語「アゴニスト」は、CJPDZと結合したとき、CJPDZの効果を増大する、或い
はその持続時間を延長する分子を指す。このアゴニストには、CJPDZに結合して
その効果を変調するタンパク質、核酸、糖質、任意の他の分子を含み得る。

【００２６】 「アレル変異配列」は、CJPDZをコードする遺伝子の別の形を指す。アレル変
異配列は、核酸配列における少なくとも１つの変異によって生じ、変異mRNA若し
くは変異ポリペプチドになり、これらの構造や機能は変わる場合もあれば変わら
ない場合もある。天然或いは組換え体のすべての遺伝子には、アレル形が存在し
ないもの、１つ或いは多数存在するものがある。一般にアレル変異配列を生じる
変異は、ヌクレオチドの自然な欠失、付加、或いは置換による。これらの各変異
は、単独或いは他の変異と同時に起こり、所定の配列内で一回或いはそれ以上生
じる。

【００２７】 CJPDZをコードする「変異」核酸配列は、様々なヌクレオチドの欠失、挿入、
或いは置換が起こっても、CJPDZと同じポヌクレオチド或いはCJPDZの機能特性の
少なくとも１つを備えるポリペプチドである。この定義には、CJPDZをコードす
るポリヌクレオチド配列の正常の染色体の遺伝子座ではない位置でアレル変異配
列と不適当或いは予期せずハイブリダイゼーション、及びCJPDZをコードするポ
リヌクレオチドの特定のオリゴヌクレオチドプローブを用いて、容易に検出可能
な或いは検出困難な多形性を含む。コードされたタンパク質も変異され得り、サ
イレント変化を生じCJPDZと機能的に等価となるアミノ酸残基の欠失、挿入、或
いは置換を含み得る。意図的なアミノ酸置換は、生物学的或いは免疫学的にCJPD
Zの活性が保持される範囲で、残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性、及
び／または両親媒性についての類似性に基づいて成され得る。たとえば、負の電
荷をもつアミノ酸は、アスパラギン酸及びグルタミン酸を含み得り、正の電荷を
もつアミノ酸は、リジン及びアルギニンを含み得り、そして近い親水性値をもち
非電荷極性頭基を有するアミノ酸は、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシ
ン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、フェニルアラ
ニン及びチロシンを含みうる。

【００２８】 用語「アミノ酸」及び「アミノ酸配列」は、オリゴペプチド、ペプチド、ポリ
ペプチド、タンパク質配列、それらの任意の断片、天然の分子または合成された
分子を指す。CJPDZの断片である「断片」及び「免疫原性断片」、「抗原性断片
」は、好ましくはアミノ酸約５〜約１５個の長さであり、最も好ましくはアミノ
酸１４個の長さであり、CJPDZのある生物学的活性または免疫学的活性を保持す
る。ここでは、「アミノ酸配列は自然発生タンパク質分子のアミノ酸配列である
が、アミノ酸配列及び類似の用語は、列記したタンパク質分子に関連する完全で
元のままのアミノ酸配列に限定されるわけではない。

【００２９】 「増幅」は、核酸配列の追加的な複製を生成することに関連する。増幅は、一
般にはこの技術分野では周知のポリメラーゼ連鎖反応（PCR）技術を用いて行わ
れる。

【００３０】 「アンタゴニスト」は、CJPDZと結合したとき、CJPDZの生物学的または免疫学
的活性の効果の程度を低下させたり、その持続時間を短縮する分子を指す。アン
タゴニストは、タンパク質、核酸、糖質、抗体またはCJPDZの効果を減少させる
の他の分子である。

【００３１】 用語「抗体」は、抗原決定基と結合可能なFab及びＦ(ab')₂及びそれらの断片
などの、無傷の分子及びＦｖ断片を指す。CJPDZポリペプチドと結合する抗体は
、抗体を免疫する目的の小さなペプチドを含む無傷の分子またはその断片を用い
て調整可能である。動物（例えば、マウス、ラット、若しくはウサギ）を免疫化
するのに使用されるポリペプチド或いはオリゴペプチドは、RNAの翻訳から引き
出されたり、化学的に合成され得り、必要に応じて担体プロテインと結合するこ
とも可能である。ペプチドと化学的に結合した一般に用いられる担体は、ウシ血
清アルブミン、チログロビン、及びキーホールリンペットヘモニアン（KLH）を
含む。次ぎに、この結合したペプチドを用いて動物を免疫化する。

【００３２】 用語「抗原決定基」は、特定の抗体と接触する分子のフラグメント（即ちエピ
トープ）を指す。タンパク質或いはタンパク質の断片が、宿主動物を免疫化する
のに用いられるとき、このタンパク質の種々の領域は、抗原決定基（タンパク質
上の所定の領域或いは三次元構造体）に特異的に結合する抗体の産生を誘発し得
る。抗原決定基は、抗体と結合するために無傷の抗原（即ち、免疫応答を引き出
すために用いられる免疫原）と競合し得る。

【００３３】 用語「アンチセンス」は、特定の核酸配列のセンス鎖と相補的な核酸配列を含
む全ての組成物を指す。アンチセンス分子は、合成や転写を含む任意の方法で作
り出すことができる。相補的ヌクレオチドは、一度細胞に導入されると、細胞に
よって作られた天然の配列と結合して二重鎖を形成し、転写や翻訳を阻害する。
「マイナス（−）」という表現はアンチセンス鎖、「プラス（＋）」という表現
はセンス鎖を指す。

【００３４】 用語「生物学的活性」は、自然発生分子の構造的、調節的、或いは生化学的機
能を有するタンパク質を指す。同様に、「免疫学的に活性」とは、天然或いは組
換え体のCJPDZ、合成のCJPDZまたはそれらの任意のオリゴペプチドが、適当な動
物或いは細胞の特定の免疫応答を誘発して特定の抗体と結合する能力のことであ
る。

【００３５】 用語「相補的」及び「相補性」は、許容の塩と許容の温度条件の下で、塩基対
の形成によってポリヌクレオチドが自然に結合することを指す。例えば、配列「
Ａ−Ｇ−Ｔ」と相補的な配列「Ｔ−Ｃ−Ａ」と結合する。２つの一本鎖分子間の
相補性は、幾つかの核酸が結合するのみの部分的な場合、或いは一本鎖間に完全
な相補性が存在して完全な相補性となる場合があり得る。核酸鎖間の相補性の程
度は、核酸鎖間のハイブリダイゼーションの効率及び強度に大きな影響を与える
。このことは、核酸鎖間の結合に左右される増幅反応、並びにペプチド核酸（PN
A）分子の設計若しくは使用において特に重要である。

【００３６】 「所定のポリヌクレオチド配列を含む組成物」または「所定のアミノ酸配列を
含む組成物」は広い意味で、所定のヌクレオチド配列或いはアミノ酸配列を含む
任意の組成物を指す。この組成物は、乾燥した製剤或いは水溶液、無菌組成物を
含み得る。CJPDZ若しくはCJPDZの断片をコードするポリヌクレオチド配列を含む
組成物は、ハイブリダイゼーションプローブとして使用され得る。このプローブ
は、凍結乾燥状態で保存可能であり、糖質などの安定化剤と結合可能である。ハ
イブリダイゼーションにおいて、プローブは、塩（例えば、NaCl）及び界面活性
剤（例えば、SDS）、その他の物質（例えば、デンハート液、乾燥ミルク、サケ
精子DNAなど）を含む水溶液に展開され得る。

【００３７】 「コンセンサス配列」は、不要な塩基を分離するために再配列された核酸配列
であって、XL-PCR^TM（Perkin Elmer, Norwalk, CT）を用いて５'及び／または３
'の方向に延長されて再配列された核酸配列、或いはGELVIEW 断片構築システム
（GCG, Madison, WI）などのフラグメントの構築のためのコンピュータプログラ
ムを用いて２つ以上のインサイトクローン社の重複配列から構築された核酸配列
を指す。延長及び構築の両方によってコンセンサス配列に構築されるものもある
。

【００３８】 用語「ポリヌクレオチドの発現と相関性を有する」は、ノーザン分析によるCJ
PDZをコードする核酸配列と同じ或いは関連する核酸の検出が、サンプル内のCJP
DZをコードする核酸の存在を示すことから、CJPDZをコードするポリヌクレオチ
ドからの転写物の発現と相関性を有すること指す。

【００３９】 「欠失」は、１個以上のアミノ酸残基若しくは核酸残基が欠如するアミノ酸配
列若しくは核酸配列の変化を指す。

【００４０】 本明細用語「誘導体」とは、ポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列の
化学修飾のことである。ポリヌクレオチド配列の化学修飾には、例えば、アルキ
ル基、アシル基、或いはアミノ基による水素の置換がある。誘導体ポリヌクレオ
チドは、自然分子（未修飾の分子）の生物学的或いは免疫学的機能を少なくとも
１つ保持するポリペプチドをコードする。誘導体ポリペプチドとは、もとのポリ
ペプチドの生物学的機能、或いは免疫学的機能を少なくとも１つ保持する、グリ
コシル化、ポリエチレングリコール化、或いは任意の同様のプロセスによって修
飾されたものである。

【００４１】 「類似性」とは、相補性の程度を表す用語である。これには、部分的類似性と
完全な類似性とがあり得る。この「同一性」は「類似性」とも言える。同一の配
列が標的の核酸とハイブリダイゼーションするのを少なくとも部分的に阻止する
部分的に相補的な配列は、「実質的に同様」と呼ばれる。完全に相補的な配列と
標的の配列とのハイブリダイゼーションの抑制は、厳密性を低下させた条件の下
ハイブリダイゼーションアッセイ（サザンブロッティング或いはノーザンブロッ
ティング法、溶液ハイブリダイゼーション等）を用いて検査される。実質的に同
様の配列或いはハイブリダイゼーションプローブは、厳密性を低下させた条件の
下、完全に相補的な配列と標的の配列との結合に対して競合して抑制する。これ
は、厳密性を低下させた条件では、２つの配列の互いへの結合が特異的（即ち、
選択的）に相互作用しなけらばならず、厳密性を低下させた条件の下では非特異
的な結合が許容されるということではない。部分的な相補性ともいえない（例え
ば、３０％未満の類似性或いは同一性）第２の標的配列を用いて、非特異的結合
が存在しないことの検査が可能である。非特異的結合が存在しない場合は、実質
的に類似配列或いはプローブが第２の非相補的標的配列とハイブリダイゼーショ
ンしない。

【００４２】 句「百分率同一性」又は「％同一性」とは、２つ以上のアミノ酸配列或いは核
酸配列の比較で見つかった配列類似性の百分率のことである。この百分率同一性
は、例えば、MEGALIGNプログラム(DNASTAR)など電子装置を用いて決定可能であ
る。このMEGALIGNプログラムは、様々な方法、例えば、クラスター方法に従って
、２つ以上の配列間のアライメントを作り出すことが可能である(例えば、Higgi
ns, D.G.及びP.M. Sharp (1988) Gene73:237-244.を参照)。クラスターアルゴリ
ズムが、全ての組の間の距離を測って、配列を各クラスターに分類する。これら
のクラスターは、組によって整列され、次ぎにグループに分けられる。２つのア
ミノ酸の配列間の百分率類似性、例えば配列Ａと配列Ｂの百分率類似性は、配列
Ａと配列Ｂの一致する残基の合計数を、配列Ａの長さから配列Ａのギャップ残基
数と配列Ｂのギャップ残基数とを差し引いたもので除し、それに１００を掛ける
ことによって得られる。２つのアミノ酸配列間の低い類似性或いは非類似性のギ
ャップは、百分率類似性の決定には含まれない。核酸配列間の百分率同一性はま
た、クラスター法或いはJotun Hein法などの当分野で周知の別の方法によってカ
ウント或いは計算することも可能である(例えば、Hein. J. (1990) Methods Enz
ymol. 183:626-645.を参照)。配列間の同一性はまた、例えば、ハイブリダイゼ
ーションの条件を変えるなどの当分野で周知の別の方法によって決定することも
可能である。

【００４３】 「ヒト人工染色体（HAC）」は、６kb〜１０MbのサイズのDNA配列を含み得り、
安定した分裂染色体の分離及び維持に必要な全ての要素を含む直鎖状の微小染色
体である（Harrington, J.J.等 (1997) Nat Genet. 15:345-355を参照）。

【００４４】 用語「ヒト化抗体」とは、もとの結合能力を保持しつつよりヒトの抗体に似せ
るために、非抗原結合領域のアミノ酸配列が変異された抗体分子である。

【００４５】 「ハイブリダイゼーション」とは、核酸の一本鎖が相補的な一本鎖と塩基対を
形成して結合する全てのプロセスである。

【００４６】 用語「ハイブリダイゼーション複合体」とは、相補的な塩基対間の水素結合の
形成によって、２つの核酸配列間に形成された複合体のことである。ハイブリダ
イゼーション複合体は溶液中（例えば、Ｃ_０ｔまたはＲ_０ｔ分析）で形成される
か、或いは溶液中の１つの核酸配列と固体の支持物（例えば、紙、膜、フィルタ
ー、チップ、ピン、或いはスライドガラス、または細胞及びその核酸を固定する
任意の適当な基板）に固定されたもう一つの核酸配列との間で形成され得る。

【００４７】 用語「挿入」或いは「付加」は、自然発生の分子の配列に対して、１個以上の
アミノ酸残基或いはヌクレオチドがそれぞれ追加されるアミノ酸配列或いは核酸
配列の変化を指す。

【００４８】 「免疫応答」とは、炎症性疾患及び外傷、免疫異常、感染症、遺伝病などと関
係する症状のことである。これらの症状は、細胞系及び全身防衛系に影響を及ぼ
すサイトカイン及びケモカイン、別の情報伝達分子などの様々な因子の発現によ
って特徴づけられ得る。

【００４９】 本明細書において「マイクロアレイ」とは、基板上に配列された様々なポリヌ
クレオチドのアレイのことである。

【００５０】 本明細書のマイクロアレイの記述における「エレメント」或いは「アレイエレ
メント」とは、基板の表面に配列されたハイブリダイゼーション可能なポリヌク
レオチドのことである。

【００５１】 用語「変調」とは、CJPDZの活性の変化のことである。変調の例として、CJPDZ
のタンパク質活性の特性、或いは結合特性、またはその他の生物学的特性、機能
的特性或いは免疫学的特性の変化がある。

【００５２】 句「核酸」或いは「核酸配列」とは、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポ
リヌクレオチド、或いはそれらの断片を指す。また、一本鎖若しくは二本鎖のセ
ンス鎖或いはアンチセンス鎖であるゲノム若しくは合成起源のDNA或いはRNAと、
またペプチド核酸（PNA）や任意のDNA様物質、RNA様物質も指す。本明細書にお
いて「断片（またはフラグメント）」とは、（例えば、同じゲノム内の任意の別
の配列とは異なる）SEQ ID NO:2を特別に同定する独特のポリヌクレオチド配列
の領域を含む核酸配列のことである。例えば、SEQ ID NO:2は、ハイブリダイゼ
ーション及び増幅技術に有用であり、更に、関連ポリヌクレオチド配列からSEQ
ID NO:2を区別する類似性の検査にも有用である。SEQ ID NO:2の断片は、少なく
ともヌクレオチド１５〜２０個の長さである。この断片に対応するSEQ ID NO:2
の正確な長さ及びSEQ ID NO:2の領域は、断片の使用目的に基づいた当分野で一
般的な技術の１つを用いて日常業務的に決定できる。また、断片は翻訳された場
合、完全長のポリペプチドの抗原性などのいくつかの機能的特徴或いはＡＴＰ結
合部位などの構造的ドメイン特徴を維持したポリペプチドを形成し得る。

【００５３】 用語「機能的に関係した」または「機能的に結合した」とは、機能的に関係す
る核酸配列のことである。コードされたポリペプチドの転写をプロモーターが制
御する場合、そのプロモーターはコードする配列と機能的に関係する或いは機能
的に結合する。機能的に関係した或いは機能的に結合した核酸配列は近接して同
じ読み枠内に存在し得るが、リプレッサー遺伝子などのある種の遺伝子要素は、
ポリペプチドをコードする配列とは近接して結合していないが、ポリペプチドの
発現を調節するオペレーター配列とは結合したままである。

【００５４】 用語「オリゴヌクレオチド」とは、PCR増幅、ハイブリダイゼーション、或い
はマイクロアレイに使用可能な核酸配列のことであり、その長さは少なくとも６
ヌクレオチドから６０ヌクレオチドである。好ましくは約１５から３０ヌクレオ
チドであり、さらに好ましいくは約２０から２５のヌクレオチドである。本明細
書において、オリゴヌクレオチドは、当技術分野では同一と定義される「アンプ
リマー」及び「プライマー」、「オリゴマー」と実質的に同じである。

【００５５】 「ペプチド核酸」（PNA）とは、末端がリジンで終わるアミノ酸残基のペプチ
ドバックボーンに結合した、約５ヌクレオチド以上の長さのオリゴヌクレオチド
を含むアンチセンス分子又は抗遺伝子剤のことである。この末端のリジンにより
、この組成物が溶解性を有する。PNAは、相補的な一本鎖DNAやRNAに優先的に結
合して転写物の伸長を止め、ポリエチレングリコール化して細胞において寿命を
延ばし得る。（例えば、Nielsen, P.E.他(1993) Anticancer Drug Des. 8:53-63
を参照）。

【００５６】 用語「サンプル」とは、その最も広い意味で用いられている。CJPDZをコード
する核酸若しくはその断片、CJPDZ自体を含むと推測される生物学的サンプルに
は、体液と、細胞からの抽出物や細胞から単離された染色体や細胞内小器官、膜
と、細胞と、溶液中又は固体の支持物に固定されたゲノムDNA，RNA，cDNAと、組
織又は組織プリント等も含まれ得る。

【００５７】 用語「特異的結合」または「特異的に結合する」とは、タンパク質或いはペプ
チドとアゴニスト或いは抗体、アンタゴニストとの間の相互作用のことである。
この相互作用は、結合する分子によって認識される、例えば、抗原決定基つまり
エピトープなどのタンパク質の特定の構造の存在によって左右される。例えば、
抗体がエピトープ「Ａ」に対して特異的である場合、結合していない標識した「
Ａ」及びその抗体を含む反応において、エピトープＡを含むポリペプチドが存在
するか或いは結合していない無標識の「Ａ」が存在すると、抗体と結合する標識
Ａの量が減少する。

【００５８】 用語「厳密な（stringent）条件」とは、ポリヌクレオチドと請求項に記載さ
れたポリヌクレオチドとのハイブリダイゼーションが可能な条件である。厳密な
条件は、塩濃度及び有機溶剤（例えば、ホルムアミド）の濃度、温度、及び当分
野で周知の別の条件によって決められる。詳細には、塩の濃度を下げたり、ホル
ムアミドの濃度を上げたり、またハイブリダイゼーションの温度を上げることで
厳密性を高めることができる。

【００５９】 用語「実質的に精製された」とは、自然の環境から取り除かれてから、単離或
いは分離された核酸配列或いはアミノ酸配列であって、自然に結合している構成
要素が少なくとも約６０％以上除去されたものであり、好ましくは約７５％以上
の除去、最も好ましいのは約９０％以上除去されたものである。

【００６０】 「置換」とは、一つ以上のアミノ酸またはヌクレオチドをそれぞれ別のアミノ
酸またはヌクレオチドに置き換えることである。

【００６１】 「基板」とは、膜、フィルター、チップ、スライド、ウエハ、ファイバー、磁
気或いは非磁気のビード、ゲル、管、プレート、ポリマー、微細粒子、毛管を含
む好適な固体或いは半固体の支持物のことである。基板は、ポリヌクレオチドや
ポリペプチドが結合する壁及び溝、ピン、チャネル、孔などの様々な表面形態を
有する。

【００６２】 「形質転換」とは、外来DNAが入り込み受容体細胞を変化させるプロセスのこ
とである。形質転換は、当分野で周知の種々の方法により、自然或いは人工の条
件の下で起こり得り、原核宿主細胞若しくは真核宿主細胞の中に外来核酸配列を
挿入する任意の周知の方法によって行うことができる。この形質転換の方法は、
形質転換される宿主細胞のタイプによって選択される。この方法には、ウイルス
感染、電気穿孔法（エレクトロポレーション）、リポフェクション、及び微粒子
照射が含まれるが、限定されるものではない。「形質転換された」細胞には、導
入されたDNAが自律的に複製するプラスミドとして或いは宿主染色体の一部とし
て複製可能である安定的に形質転換された細胞が含まれる。さらに、限られた時
間に一時的に導入DNA若しくは導入RNAを発現する細胞も含まれる。

【００６３】 「変異体」とは、一つ以上のアミノ酸が変異したアミノ酸配列である。この変
異体には、例えばロイシンとイソロシンとの置換のような、置換されたアミノ酸
が類似の構造或いは類似の化学特性を有する「保存的」変異が含まれる。稀では
あるが、変異体には、グリシンをトリプトファンで置換する「非保存的」変異も
含まれる。また、類似の小さな変異には、アミノ酸の欠失、挿入、或いはその両
方が含まれる。当分野で周知の例えばＬＡＳＥＲＧＥＮＥ^ＴＭソフトウエアを用
いて、生物学的或いは免疫学的活性を損なうことなく、どのアミノ酸残基を置換
、挿入、或いは欠失させるかを決めることができるであろう。

【００６４】 ポリヌクレオチド配列の文脈の中で用いられる用語「変異配列」とは、CJPDZ
に関連したポリヌクレオチド配列を含み得る。この定義は、例えば、「アレル」
、「スプライス」、「種」、「多形性」変異配列についてもあてはまる。スプラ
イ変異配列は基準分子と極めて同一性が高い可能性があるが、mRNAプロセシング
中のエキソンの交互のスプライシングによってポリヌクレオチドの数が多くなっ
たり、少なくなったりする。対応するポリペプチドは、機能ドメインが加わった
り、ドメインが減ったりし得る。種変異配列は、種によって異なるポリヌクレオ
チド配列である。できたポリペプチドは、互いに高いアミノ酸同一性を有する。
多形性変異配列は、所定の種と種の間の特定の遺伝子のポリヌクレオチド配列に
おける変異である。多形性変異配列はまた、ポリヌクレオチド配列の１つの塩基
が異なる「１つのヌクレオチド多形性」（SNP）も含み得る。SNPの存在は、例え
ば、或る集団、病態、病態の特徴を表し得る。

【００６５】 発明 本発明は、新規のヒト細胞間結合PDZタンパク質（CJPDZ）及びCJPDZをコード
するポリヌクレオチドの発見、並びに癌及び神経障害の診断、治療、及び予防に
おけるそれらの組成物の使用に関する。

【００６６】 本発明のCJPDZをコードする核酸は、核酸配列及び／またはアミノ酸配列のア
ラインメント用のコンピュータ検索によって、臍帯単核細胞cDNAライブラリ（UC
MCL5T01）からのインサイトクローン19743371H1において同定された。コンセン
サス配列であるSEQ ID NO:2は、以下の核酸配列の重複及び／または伸長によっ
て導き出された。インサイトクローン1974337H1 (UCMCL5T01)、4921529H1 (TEST
NOTI11)、3606614H1 (LUNGNOT30)、1211072H1 (BRSTNOT02)及びNCBIのヌクレオ
チドID番号 g2063575、g2064159。

【００６７】 一実施例では、本発明は、図１Ａ及び図１Ｂ、図１Ｃに示されているSEQ ID N
O:1のアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。CJPDZは、アミノ酸２３３個
分の長さであり、S52及びT89、S181、T189、T205における５個の潜在プロテイン
キナーゼCリン酸化部位を有する。CJPDZは、C. elegans LIN-7（GI 1685067; SE
Q ID NO:3）と化学的及び構造的類似性を有する。図２に示されているように、C
JPDZとLIN-7との全体の同一性は５３％であり、CJPDZのL25からR204までの領域
とLIN-7のL117からR295までの領域との同一性は６９％である。この領域内にお
いて、CJPDZは、LIN-7のPDZドメインと８２％の配列同一性を有するR107からT18
9までの推定PDZドメインを含む。殆ど全てのPDZドメインに存在するGDジペプチ
ド及びアスパラギン残基が、CJPDZのG152及びD153、N159に保存されている。更
に、CJPDZの推定PDZドメインは、１１のグリシン残基を含み、殆ど全てのPDZド
メインの高グリシンの性質に一致する。SEQ ID NO:2のヌクレオチドの約４３２
から約４６１までの断片は、SEQ ID NO:2の同定、並びにSEQ ID NO:2と関連配列
とを区別するハイブリダイゼーションまたは増幅技術に有用である。ノーザン分
析によって、臍帯血由来の単核細胞、精巣、胎児の肺及び脳組織においてこの配
列が発現することが認められた。

【００６８】 また本発明は、CJPDZの変異体を含む。好適なCJPDZの変異体は、CJPDZアミノ
酸配列と少なくとも約８０％、より好適には少なくとも約９０％、もっとも好適
には少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を有し、CJPDZの機能的若しくは
構造的特性の少なくとも一つを有する。

【００６９】 本発明はまた、CJPDZをコードするポリヌクレオチド包含する。特定の実施例
では、本発明は、CJPDZをコードするSEQ ID NO: 2の配列を有するポリヌクレオ
チド配列を含む。

【００７０】 更に本発明は、CJPDZをコードするポリヌクレオチド配列の変異配列を含む。
特に、そのようなポリヌクレオチド変異配列は、CJPDZをコードするポリヌクレ
オチド配列と少なくとも約７０％、より好適には少なくとも約８５％、最も好適
には少なくとも約９５％のポリヌクレオチド配列同一性を有する。本発明の特定
の実施態様では、SEQ ID NO: 2と少なくとも約７０％、より好適には少なくとも
約８５％、もっとも好適なものは約９５％のポリヌクレオチド配列同一性を有す
るSEQ ID NO: 2の変異配列を包む。上記の任意のポリヌクレオチド変異配列は、
CJPDZの機能的若しくは構造的特徴の少なくとも一つを有するアミノ酸配列をコ
ードし得る。

【００７１】 遺伝暗号の縮重により作り出され得るCJPDZをコードする種々のポリヌクレオ
チド配列には、既知の自然発生する任意の遺伝子のポリヌクレオチド配列と最小
の類似性しか有しないものも含まれることを、当業者は理解するであろう。した
がって本発明には、可能なコドン選択に基づいた組み合わせの選択によって作り
出され得る可能なポリヌクレオチド配列の変異の全てが含まれ得る。これらの組
み合わせは、自然発生のCJPDZのポリヌクレオチド配列に適用される標準的なト
リプレット遺伝暗号を基に作られ、全ての変異が明確に開示されていると考慮す
る。

【００７２】 CJPDZをコードするヌクレオチド配列及びその変異配列は、好適に選択された
厳密な条件の下で、自然発生のCJPDZのヌクレオチドとハイブリダイズ可能なこ
とが望ましいが、非自然発生のコドンを含めるなどの実質的に異なったコドンの
使用を有するCJPDZ又はその誘導体をコードするヌクレオチド配列を作り出すこ
とは有益となり得る。特定のコドンが宿主によって利用される頻度に基づいてコ
ドンを選択して、ペプチドの発現が特定の真核細胞又は原核宿主に発生する割合
を高めることが可能である。コードされたアミノ酸配列を変えないで、CJPDZ及
びその誘導体をコードするヌクレオチド配列を実質的に変更する別の理由は、自
然発生の配列から作られる転写物より例えば長い半減期など好ましい特性を備え
るRNA転写物を作ることにある。

【００７３】 本発明はまた、CJPDZ及びその誘導体をコードするDNA配列又はそれらの断片を
完全に合成化学によって作り出すことも含む。作製後にこの合成配列を、当分野
で良く知られた試薬を用いて、種々の入手可能な発現ベクター及び細胞系の何れ
の中にも挿入可能である。更に、合成化学を用いて、CJPDZまたはその任意の断
片をコードする配列の中に突然変異を導入することも可能である。

【００７４】 更に本発明には、種々の厳密性条件の下で、請求項に記載されたポリヌクレオ
チド配列とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチド配列が含まれる。詳しくは、
記載のSEQ ID NO:2またはその断片とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチド配
列が含まれる。(例えば、Wahl, G.M.及びS.L. Berger (1987) Methods Enzymol.
152:399-407; 及び Kimmel. A.R. (1987) Methods Enzymol. 152:507-511.を参
照)。例えば、厳密な塩濃度は、通常は約７５０ｍＭ未満の塩化ナトリウムと約
７５ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウムであり、好ましくは約５００ｍＭ未満の塩
化ナトリウムと約５０ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウムであり、最も好ましくは
約２５０ｍＭ未満の塩化ナトリウムと約２５ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウムで
ある。例えば、ホルムアミドなどの有機溶剤を使用しないと、厳密性の低いハイ
ブリダイゼーションになり、約３５％以上のホルムアミド、更に好ましくは５０
％以上のホルムアミドを使用すると、厳密性の高いハイブリダイゼーションにな
る。温度の厳密条件は、通常は約３０℃以上であり、より好ましくは約３７℃以
上であり、最も好ましくは約４２℃以上である。その他の変更できるパラメータ
ーには、ハイブリダイゼーション時間、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）などの
薬品の濃度、キャリアDNAの含有の有無があり、当分野の技術者には周知である
。必要な様々な条件を組み合わせることで、厳密性の程度を変えることができる
。好適な実施例では、ハイブリダイゼーションは、温度が３０℃で、７５０ｍＭ
の塩化ナトリウムと７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のSDSで行う。より
好適な実施例では、温度が３７℃で、５００ｍＭの塩化ナトリウムと５０ｍＭの
クエン酸三ナトリウム、１％のSDS、３５％のホルムアミド、１００μｇ／ｍｌ
の変性サケ精子DNA（ｓｓDNA）で行う。最も好適な実施例では、温度が４２℃で
、２５０ｍＭの塩化ナトリウムと２５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のSDS
、５０％のホルムアミド、２００μｇ／ｍｌのｓｓDNAで行う。これらの条件の
有用な変更は、当分野の技術者には明らかである。

【００７５】 ハイブリダイゼーションの後の洗浄過程にも、様々な厳密性の程度がある。洗
浄の厳密な条件は、塩濃度と温度によって決められる。上記したように、塩濃度
を下げること或いは温度を上げることで洗浄の厳密性を高めることができる。例
えば、洗浄過程での塩濃度の厳密な条件は、好ましくは約３０ｍＭ未満の塩化ナ
トリウムと約３ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウムであり、更に好ましくは約１５
ｍＭ未満の塩化ナトリウムと約１．５ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウムである。
洗浄過程の温度の厳密な条件は、通常は約２５℃以上であり、好ましくは約４２
℃以上であり、更に好ましくは約６８℃以上である。好適な実施例では、洗浄過
程は、温度が２５℃で、３０ｍＭの塩化ナトリウムと３ｍＭのクエン酸三ナトリ
ウム、０．１％SDSで行われる。より好適な実施例では、洗浄過程は、温度が４
２℃で、１５ｍＭの塩化ナトリウムと１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、０．
１％SDSで行われる。最も好適な実施例では、洗浄過程は、温度が６８℃で、１
５ｍＭの塩化ナトリウムと１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、０．１％SDSで
行われる。更なるこれらの条件の変更は、当分野の技術者には明らかである。

【００７６】 当分野で周知のＤＮＡのシークエンシング方法を用いて、本発明の何れの実施
例も実行可能である。この方法には、例えばＤＮＡポリメラーゼIのクレノウ断
片、SEQUENASE（US Biochemical, Cleveland OH）、Taqポリメラーゼ（Perkin E
lmer）、熱安定性T7ポリメラーゼ（Amersham, Pharmacia Biotech Piscataway N
J）、或いはELONGASE増幅システム(Life Technologies, Gaithersburg MD)にみ
られるような校正エキソヌクレアーゼとポリメラーゼとの組み合わせなどの酵素
が用いられる。好ましくは、Robbins Hydra マイクロディスペンサー(Robbins S
cientific, Sunnyvale CA) 及び Hamilton MICROLAB2200（Hamilton, Reno, NV
）、Peltier Thermal Cycler200（PTC200；MJ Research, Watertown MA）、ABI
CATALYST 800 (Perkin-Elmer) を用いて自動化する。次に、ABI 373または377 D
NAシークエンシングシステム(Perkin-Elmer)、MEGABACE 1000 DNAシークエンシ
ングシステム(Molecular Dynamics. Sunnyvale CA)、当分野で周知の方法を用い
てシークエンシングを行う。得られた配列を当分野で周知の様々なアルゴリズム
を用いて分析する(例えば、Ausubel, F.M. (1997) Short Protocols in Molecul ar Biology , John Wiley & Sons, New York NY, unit 7.7; Meyers, R.A. (1995
) Molecular Biology and Biotechnology, Wiley VCH, New York NY, pp. 856-8
53.を参照)。

【００７７】 部分的なヌクレオチド配列を利用し、当分野で周知のPCR法をベースにした種
々の方法を用いてCJPDZをコードする核酸配列を伸長し、プロモーターや調節要
素などの上流にある配列を検出する。例えば制限部位PCR法を利用する１つの方
法では、一般的なプライマー及びネスト化プライマーを用いてクローニングベク
ター内のゲノムDNAから未知の配列を増幅する。（例えば、Sarkar, G. (1993) P
CR Methods Applic 2:318-322を参照）。逆PCR法を用いる別法では、広範な方向
に伸長して環状化した鋳型から未知の配列を増幅するプライマーを用いる。この
鋳型は、既知のゲノム遺伝子座及びその周辺の配列を含む制限断片に由来する。
（例えば、Triglia, T.等（1988）Nucleic Acids Res. 16:8186を参照）。キャ
プチャPCR法を用いる第３の方法は、ヒト及び酵母菌人工染色体DNAの既知の配列
に隣接するDNA断片のPCR増幅を含む。（例えば、Lagerstrom, M.他（1991）PCR
Methods Applic 1:111-119を参照）。この方法では、多数の制限酵素による消化
及びライゲ−ションを用いて、PCRを行う前に未知の配列の領域の中に組換え二
本鎖配列を挿入することが可能である。また、当分野で周知の別の方法を用いて
未知の配列を得ることも可能である。(例えば、Parker, J.D. 他 (1991)Nucleic
Acids Res. 19:3055-3060を参照)。更に、PCR、ネスト化プライマー、PROMTERF
INDERライブラリを用いれば、ゲノムDNA内の歩行が可能である（Clontech, Palo
Alto CA）。この方法ではライブラリをスクリーニングする必要がなく、イント
ロン／エキソン接合部を探すのに有用である。全てのPCR法をベースにした方法
では、プライマーは、市販のOLIGO 4.06 Primer Analysis software（National
Biosciences社, Plymouth MN）或いは別の好適なプログラムなどを用いて、長さ
が２２〜３０ヌクレオチド、ＧＣ含有率が５０％以上、約６８℃〜７２℃の温度
で鋳型に対してアニールするよう設計される。

【００７８】 完全長cDNAのスクリーニングのときは、大きなcDNAを含むようにサイズが選択
されたライブラリを用いるのが好ましい。更に、オリゴd（T）ライブラリが完全
な長さのcDNAを産生できない場合は、遺伝子の５'領域を有する配列を含むもの
が多いランダムに初回抗原刺激を受けたライブラリが有用である。ゲノムライブ
ラリは、５'非転写調節領域への配列の伸長に有用であろう。

【００７９】 市販のキャピラリー電気泳動システムを用いて、シークエンシングまたはPCR
産物のヌクレオチド配列のサイズの分析、または確認が可能である。詳しくは、
キャピラリーシークエンシングには、電気泳動による分離のための流動性ポリマ
ー、及び４つの異なったヌクレオチドに特異的なレーザーで活性化される蛍光色
素、放出された波長の検出に利用するCCDカメラを使用することが可能である。
出力／光強度は、適切なソフトウェア（例えば、GENOTYPER 及び SEQUENCE NAVI
GATOR, Perkin-Elmerを参照）を用いて電気信号に変換され、サンプルのローデ
ィングからコンピュータ分析までのプロセス及び電子データ表示がコンピュータ
制御可能である。キャピラリー電気泳動法は、特定のサンプルに少量しか存在し
ない場合もあるDNAの小片のシークエンシングに特に適している。

【００８０】 本発明の別の実施例では、CJPDZをコードするポリヌクレオチド配列またはそ
の断片を組換えDNA分子に用いて、適切な宿主細胞内にCJPDZ、その断片または機
能的等価物を発現させることが可能である。遺伝暗号固有の宿重により、実質的
に同じ或いは機能的に等価のアミノ酸配列をコードする別のDNA配列が作られ得
り、これらの配列をCJPDZのクローン化及び発現に利用可能である。

【００８１】 種々の目的でCJPDZをコードする配列を変えるために、当分野で一般的に知ら
れている方法を用いて、本発明のヌクレオチド配列を組換えることができる。こ
の目的には、遺伝子産物のクローン化、プロセシング及び／または発現の調節が
含まれるが、これらに限定されるものではない。ランダムな断片によるDNAの混
合や遺伝子断片と合成オリゴヌクレオチドのPCR再組み立てを用いて、ヌクレオ
チド配列の組換えが可能である。例えば、オリゴヌクレオチドの仲介による定方
向突然変異誘発を利用して、新しい制限部位を生成する突然変異の導入、グリコ
シル化パターンの変更、コドン優先の変更、スプライスバリアントの生成等が可
能である。

【００８２】 別の実施例によれば、CJPDZをコードする配列は、当分野で周知の化学的方法
を用いて、全体或いは一部が合成可能である（例えば、Caruthers. M.H.等（198
0）Nucleic. Acids Res. Symp. Ser 7:215-223; 及びHorn, T.他（1980）Nuclei
c. Acids Res. Symp. Ser.225-232を参照）。別法として、化学的方法を用いてC
JPDZ自体またはその断片を合成することが可能である。例えば、ペプチド合成は
種々の固相技術を用いて実行可能である（例えば、Roberge, J.Y.等(1995) Scie
nce 269:202-204を参照）。また、合成の自動化は例えばABI 431Aペプチドシン
セサイザ（Perkin Elmer）を用いて達成し得る。更にCJPDZのアミノ酸配列また
は任意のその一部は、直接的な合成の際の変更、及び／または化学的方法を用い
た他のタンパク質または任意のその一部からの配列との組み合わせにより、変異
体ポリペプチドを作ることが可能である。

【００８３】 このペプチドは、分離用高速液体クロマトグラフィー(例えば、Chiez, R.M.
及び F.Z. Regnier (1990)Methods Enzymol. 182:392-421を参照)を用いて実質
的に精製可能である。合成されたペプチドの組成は、アミノ酸分析或いはシーク
エンシングにより確認することができる(例えば、Creighton. T. (1983) Protei ns, Structures and Molecular Properties , WH Freeman, New York, NYを参照)
。

【００８４】 生物学的に活性なCJPDZを発現させるために、CJPDZをコードするヌクレオチド
配列またはその誘導体を好適な発現ベクターに挿入する。この発現ベクターは、
好適な宿主に挿入されたコーディング配列の転写及び翻訳の調節に必要な要素を
含む。これらの要素には、ベクター及びCJPDZをコードするポリヌクレオチド配
列におけるエンハンサー、構成型及び発現誘導型のプロモーター、５'及び３'の
非翻訳領域などの調節配列が含まれる。このような要素は、その長さ及び特異性
が様々である。特定の開始シグナルによって、CJPDZをコードする配列のより効
果的な翻訳を達成することが可能である。このようなシグナルには、ＡＴＧ開始
コドン及びコザック配列などの近傍の配列が含まれる。CJPDZをコードする配列
及びその開始コドン、上流の調節配列が好適な発現ベクターに挿入された場合は
、更なる転写調節シグナルや翻訳調節シグナルは必要なくなるであろう。しかし
ながら、コーディング配列或いはその断片のみが挿入された場合は、インフレー
ムのＡＴＧ開始コドンを含む外来性の翻訳調節シグナルが発現ベクターに含まれ
なければならない。外来性の翻訳要素及び開始コドンは、自然及び合成の様々な
ものから得ることが可能である。用いられる特定の宿主細胞系に好適なエンハン
サーを含めることで発現の効率を高めることが可能である。(例えば、Scharf, D
. 他 (1994) Results Probl. Cell Differ. 201−18-162.を参照)。

【００８５】 当業者に周知の方法を用いて、CJPDZをコードする配列、好適な転写及び翻訳
調節要素を含む発現ベクターを作製することが可能である。これらの方法には、 in vitro 組換えDNA技術、合成技術、及びin vivo遺伝子組換え技術が含まれる。
(例えば、 Sambrook, J. 他. (1989) Molecular Cloning. A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Press, Plainview NY, 4章及び8章, 及び１6-17章; 及び
Ausubel, F.M. 他. (1995) Current Protocols in Molecular Biology, John W
iley & Sons, New York NY, ch. 9章及び13章、16章を参照)。

【００８６】 種々の発現ベクター／宿主系を利用して、CJPDZをコードする配列の保持及び
発現が可能である。これらには、限定するものではないが、組換えバクテリオフ
ァージ、プラスミド、またはコスミドDNA発現ベクターで形質転換された細菌な
どの微生物や、酵母菌発現ベクターで形質転換された酵母菌や、ウイルス発現ベ
クター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系や、ウイルス発現ベ
クター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、CaMV；タバコモザイクウイル
ス、ＴＭＶ）または細菌発現ベクター（例えば、TiまたはpBR３２２プラスミド
）で形質転換された植物細胞系や、動物細胞系などが含まれる。本発明は使用さ
れる宿主細胞によって限定されるものではない。

【００８７】 細菌系では、多数のクローニングベクター及び発現ベクターが、CJPDZをコー
ドするポリヌクレオチド配列の使用目的に応じて選択可能である。例えば、CJPD
Zをコードするポリヌクレオチド配列の日常的なクローニング、サブクローニン
グ、増殖には、PBLUESCRIPT(Stratagene, La Jolla CA)またはpSPORT１プラスミ
ド(GIBCO BRL)などの多機能の大腸菌ベクターを用いることができる。ベクター
の多数のクローニング部位にCJPDZをコードする配列をライゲーションするとlac
Ｚ遺伝子が破壊され、組換え分子を含む形質転換された細菌の同定のための比色
スクリーニング法が可能となる。更に、これらのベクターを用いて、クローニン
グされた配列のin vitroでの転写、ジデオキシンスクリーニング、ヘルパーファ
ージによる一本鎖の救出、入れ子状態の欠失を作り出すことが可能である。(例
えば、Van Heeke, G.及びS.M. Schuster (1989) J. Biol. Chem. 264:5503-5509
.を参照)。例えば、抗体の産生のためなどに多量のCJPDZが必要な場合は、CJPDZ
の発現をハイレベルで誘導するベクターが使用できる。例えば、強力に発現を誘
発するT5またはT7バクテリオファージプロモーターを含むベクターを使用できる
。

【００８８】 CJPDZの発現に酵母の発現系の使用が可能である。α因子やアルコールオキシ
ダーゼやＰＧＨプロモーターなどの構成型或いは誘導型のプロモーターを含む多
種のベクターが、酵母菌サッカロミセス−セレビジエまたはPichia pastorisに
使用可能である。更に、このようなベクターは、発現したタンパク質の分泌か細
胞内への保持のどちらかを誘導し、安定した増殖のために宿主ゲノムの中に外来
配列を組み込む。(例えば、上記のAusubel.; 及びBitter, G.A. 他 (1987) Meth
ods Enzymol.153:51-794: Scorer. C. A. 他 (1994) Bio/Technology 121−181-
184.を参照) 植物系もCJPDZの発現に使用可能である。CJPDZをコードする配列の転写は、例
えば、CaMV由来の35S及び19Sプロモーターなどのウイルスプロモーターが単独で
、或いはTMV（Takamatsu, N.等（1987）EMBO J 6:307-311）由来のオメガリーダ
ー配列と組み合わせて促進される。これらの作製物は、直接のDNA形質転換或い
は病原体を介したトランスフェクションによって、植物細胞の中に導入可能であ
る。（例えば、The McGraw Hill Yearbook of Science and Technology（1992）
McGraw Hill NY, pp.191-196を参照）。

【００８９】 哺乳動物細胞では、多種のウイルスベースの発現系が利用され得る。アデノウ
イルスが発現ベクターとして用いられる場合、後発プロモーター及び３連リーダ
ー配列からなるアデノウイルス転写物／翻訳複合体にCJPDZをコードする配列を
結合し得る。ウイルスのゲノムの非必須のＥ１またはＥ３領域への挿入により、
感染した宿主細胞にCJPDZを発現する生ウイルスを得ることが可能である（Logan
, J.及びShenk, T.（1984）Proc. Natl. Acad. Sci. 81:3655-3659を参照）。さ
らに、ラウス肉腫ウイルス（RSV）エンハンサーなどの転写エンハンサーを用い
て、哺乳動物宿主細胞における発現を増大させることが可能である。タンパク質
を高レベルで発現させるために、SV40またはEBVを基にしたベクターを用いるこ
とが可能である。

【００９０】 ヒト人工染色体（HAC）を用いて、プラスミドで発現しそれに含まれているも
のより大きなDNAの断片を供給可能である。治療のために約６kb〜１０MbのHACs
を作製し、従来の輸送方法（リポソーム、ポリカチオンアミノポリマー、または
ベシクル）で供給する。(例えば、Harrington. J.J. 他 (1997) Nat Genet.15:3
45-355.を参照)。

【００９１】 哺乳動物系の組換えタンパク質の長期にわたる産生のためには、株化細胞にお
けるCJPDZの安定した発現が望ましい。例えば、発現ベクターを用いて、CJPDZを
コードする配列を株化細胞に形質転換することが可能である。このような発現ベ
クターは、ウイルス起源の複製及び／または内在性の発現要素や、同じ或いは別
のベクターの上の選択マーカー遺伝子を含む。ベクターの導入の後、細胞を選択
培地に移す前に、強化培地で約１〜２日の間増殖させる。選択マーカーの目的は
選択的な媒介物に対する抵抗性を与えるとともに、その存在により導入された配
列をうまく発現する細胞の増殖及び回収が可能となる。安定的に形質転換された
細胞の耐性クローンは、その細胞型に好適な組織培養技術を用いて増殖可能であ
る。

【００９２】 任意の数の選択系を用いて、形質転換された細胞系を回収することが可能であ
る。選択系には、以下のものに限定はしないが、単純ヘルペスウイルスチミジン
キナーゼ遺伝子及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子が含まれ
、それぞれtk⁻又はapr⁻細胞において使用される。(例えば、Wigler, M. 他 (1
977) Cell 11:223-232; 及びLowy, I. 他(1980) Cell 22:817-823を参照)。また
代謝拮抗物質、抗生物質或いは除草剤への耐性を選択のベースとして用いること
ができる。例えばdhfrはメトトレキセートに対する耐性を与え、neoはアミノグ
リコシッドネオマイシン及びG-418に対する耐性を与え、als或いはpatはクロル
スルフロン（cCJPDZsulfuron）、ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラー
ゼ（phosphinotricin acetyltransferase）に対する耐性を与える(例えば、Wigl
er, M. 他. (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. 77:3567-3570; Colbere-Garapin,
F. 他(1981) J. Mol. Biol. 150:1-14を参照)。さらに選択に利用できる遺伝子
、例えば、代謝のために細胞が必要なものを変えるtrpB及びhisDが文献に記載さ
れている（例えば、Hartman, S.C.及びR.C. Mulligan（1988）Proc. Natl. Acad
. Sci. 85:8047-51を参照）。アニトシアニン、緑色蛍光タンパク質（GFP；Clon
tech）、βグルクロニダーゼ及びその基質GUS，ルシフェラーゼ及びその基質ル
シフェリンなどの可視マーカーが用いられる。緑色蛍光タンパク質（GFP）(Clon
tech, Palo Alto, CA)も使用できる。これらのマーカーを用いて、トランスフォ
ーマントを特定するだけでなく、特定のベクター系に起因する一過性或いは安定
したタンパク質発現を定量することが可能である（例えば、Rhodes, C.A.他（19
95）Methods Mol. Biol. 55:121−791を参照）。

【００９３】 マーカー遺伝子の発現の存在／不在によって目的の遺伝子の存在が示されても
、その遺伝子の存在及び発現の確認が必要な場合もある。例えば、CJPDZをコー
ドする配列がマーカー遺伝子配列の中に挿入された場合、CJPDZをコードする配
列を含む形質転換された細胞は、マーカー遺伝子機能の欠落により特定可能であ
る。または、１つのプロモーターの制御下でマーカー遺伝子がCJPDZをコードす
る配列と一列に配置することも可能である。誘導または選択に応答したマーカー
遺伝子の発現は、通常タンデム遺伝子の発現も示す。

【００９４】 一般に、CJPDZをコードする核酸配列を含み、CJPDZを発現する宿主細胞は、当
業者に周知の種々の方法を用いて特定することが可能である。これらの方法には
、DNA−DNA或いはDNA−RNAハイブリダイゼーションや、PCR法、核酸或いはタン
パク質の検出及び／または数量化のための膜系、溶液ベース、或いはチップベー
スの技術を含むタンパク質生物学的試験法または免疫学的アッセイが含まれるが
、これらに限定されるものではない。

【００９５】 特異的なポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のどちらかを用いるCJ
PDZの発現の検出及び計測のための免疫学的な方法は、当分野で周知である。こ
のような技法には、酵素に結合したイムノソルベントアッセイ（ELISA）、ラジ
オイムノアッセイ（RIA）、蛍光標示式細胞分取器（FACS）などがある。CJPDZ上
の２つの非干渉エピトープに反応するモノクローナル抗体を用いた、２部位のモ
ノクローナルベースイムノアッセイ（two-site, monoclonal-based immunoassay
）が好ましいが、競合の結合アッセイも用いることもできる。これらのアッセイ
及びその他のアッセイは、当分野では十分に知られている。(例えば、 Hampton.
R. 他.(1990) Serological Methods, a Laboratory Manual. APS Press. St Pa
ul. MN, Sect. IV; Coligan, J. E. 他Current Protocols in Immunology, Gree
ne Pub. Associates and Wiley-Interscience, New York. NY; 及びPound, J.D.
(1990) Immunochemical Protocols, Humans Press, Totowa NJ)。

【００９６】 種々の標識方法及び結合方法が当業者には周知であり、様々な核酸アッセイお
よびアミノ酸アッセイに用いられ得る。CJPDZをコードするポリヌクレオチドに
関連する配列を検出するための、標識されたハイブリダイゼーションプローブ或
いはPCRプローブを生成する方法には、オリゴ標識化、ニックトランスレーショ
ン、末端標識化、または標識されたヌクレオチドを用いるPCR増幅が含まれる。
別法として、CJPDZをコードする配列、またはその任意の断片をmRNAプローブを
生成するためのベクターにクローニングすることも可能である。当分野では周知
であり市販されているこのようなベクターを、T7，T3，またはSP6などの好適なR
NAポリメラーゼ及び標識されたヌクレオチドの追加によって、in vitroでのRNA
プローブの合成に用いることができる。これらの方法は、例えば、Amersham Pha
rmacia Biotech及びPromega（Madison WI）、U.S. Biochemical Corp（Clevelan
d OH）が市販する種々のキットを用いて行うことができる。容易な検出のために
用い得る好適なレポーター分子或いは標識には、基質、コファクター、インヒビ
ター、磁気粒子、及び放射性核種、酵素、蛍光剤、化学発光剤、色素産生剤など
が含まれる。

【００９７】 CJPDZをコードするヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞は、細胞培地
でのこのタンパク質の発現及び回収に好適な条件の下で培養される。形質転換さ
れた細胞から産生されたタンパク質が分泌されるか細胞内に留まるかは、使用さ
れるその配列及び／またはそのベクターによる。CJPDZをコードするポリヌクレ
オチドを含む発現ベクターは、原核細胞膜及び真核細胞膜を透過するCJPDZの分
泌を誘導するシグナル配列を含むように設計できることは、当業者には理解され
よう。

【００９８】 更に、挿入した配列の発現調節能力または発現したタンパク質を所望の形にプ
ロセシングする能力によって宿主細胞株が選択される。このようなポリペプチド
の修飾には、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化（
lipidation）、及びアシル化が含まれるが、これらに限定されるものではない。
タンパク質の「prepro」形を切断する翻訳後のプロセシングを利用して、標的タ
ンパク質、折りたたみ及び／または活性を特定することが可能である。翻訳後の
活性のための特定の細胞装置及び特徴のある機構をもつ種種の宿主細胞（例えば
、CHO、HeLa、MDCK、MEK293、WI38）がAmerican Type Culture Collection（ATC
C; Bethesda, MD）より入手可能であり、外来のタンパク質の正しい修飾及びプ
ロセシングを確実にするために選択される。

【００９９】 本発明の別の実施例では、CJPDZをコードする自然或いは変更された、または
組換えの核酸配列を上記した任意の宿主系の融合タンパク質の翻訳となる異種配
列に結合させる。例えば、市販の抗体によって認識できる異種部分を含むキメラ
CJPDZタンパク質が、CJPDZの活性のインヒビターに対するペプチドライブラリの
スクリーニングを促進し得る。また、異種タンパク質部分及び異種ペプチド部分
が、市販の親和性基質を用いて融合タンパク質の精製を促進し得る。このような
部分には、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（GST）、マルトース結合タンパ
ク質（MBP）、チオレドキシン（Trx）、カルモジュリン結合ペプチド（CBP）、6
−His、FLAG、c−mc、赤血球凝集素（HA）が含まれるが、これらに限定されるも
のではない。GST及びMBP、Trx、CBP、6−Hisによって、固定されたグルタチオン
、マルトース、フェニルアルシン酸化物（phenylarsine oxide）、カルモジュリ
ン、金属キレート樹脂のそれぞれで同族の融合タンパク質の精製が可能となる。
FLAG、c−mc、及び赤血球凝集素（HA）によって、これらのエピトープ標識を特
異的に認識する市販のモノクロナール抗体及びポリクロナール抗体を用いた融合
タンパク質の免疫親和性の精製ができる。また、CJPDZをコードする配列と異種
タンパク質配列との間にあるタンパク質分解切断部位を融合タンパク質が含むよ
うに遺伝子操作すると、CJPDZが精製の後に異種部分から切断され得る。融合タ
ンパク質の発現と精製の方法は、Ausubel. (1995、前出 ch 10).に記載されてい
る。市販されている様々なキットを用いて、融合タンパク質の発現及び精製を促
進できる。

【０１００】 本発明の別の実施例では、TNTウサギ網状赤血球可溶化液またはコムギ胚芽抽
出系(Promega)を用いてin vitroで放射能標識したCJPDZの合成が可能である。こ
れらの系は、T7またはT3、SP6プロモーターと機能的に結合したタンパク質をコ
ードする配列の転写と翻訳をつなげる。翻訳は、好ましくは^３５Ｓメチオニンで
ある放射能標識されたアミノ酸前駆体の存在の下で起こる。

【０１０１】 CJPDZの断片は、組換え生成物だけでなく固相技術を用いて直接的なペプチド
合成によって作製され得る(例えば、前出のCreighton, pp. 55-60.を参照)。タ
ンパク質の合成は、手動或いは自動で行われ得る。自動合成は、例えば431Aペプ
チドシンセサイザ（Perkin Elmer）を用いて行うことが可能である。CJPDZの種
々の断片は別々に合成して、次ぎに結合させて完全長分子を生成する。

【０１０２】 治療 CJPDZのある領域とLIN-7 PDZドメイン含有タンパク質のある領域との間に、例
えば、配列及びモチーフの文脈における化学的及び構造的類似性が存在する。従
って、CJPDZは、癌及び神経障害、発達障害などのPDZ機能に関連した疾患に関係
する思われる。CJPDZの発現または活性の増大に関連するするこのような疾患の
治療においては、CJPDZの発現または活性を低下させることが望ましい。また、C
JPDZの発現または活性の低下に関連するこのような疾患の治療においては、CJPD
Zの発現または活性を増大させることが望ましい。

【０１０３】 従って、一実施例において、CJPDZの発現または活性の低下に関連した疾患の
治療または予防のために、患者にCJPDZまたはその断片や誘導体を投与すること
が可能である。限定するものではないが、このような疾患の例には、癌が含まれ
、その中には腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、奇形癌などがあ
り、詳しくは副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、頚部、胆嚢、神経節、消化管、
心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺、唾液腺、
皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮の癌が含まれ、また、神経障害も含
まれ、その中には、癲癇、虚血性脳血管障害、脳卒中、大脳新生物、アルツハイ
マー病、ピック病、ハンチントン病、痴呆、パーキソン病及びその他の錐体外路
障害、筋萎縮性側策硬化及びその他の運動ニューロン障害、進行性神経性筋萎縮
症、色素性網膜炎、遺伝性運動失調、多発性硬化症及び他の脱髄疾患、細菌性及
びウイルス性髄膜炎、脳膿瘍、硬膜下蓄膿症、硬膜外膿瘍、化膿性頭蓋内血栓性
静脈炎、脊髄炎及び神経根炎、ウイルス性中枢神経系疾患と、クールー及びクロ
イツフェルト‐ヤコブ病、ゲルストマン症候群、Gerstmann-Straussler-Scheink
er症候群を含むプリオン病（prion disease）と、致死性家族性不眠症、神経系
性栄養病及び代謝病、神経線維腫症、結節硬化症、小脳網膜血管芽腫（cerebell
oretinal hemangioblastomatosis）、脳３叉神経血管症候群、中枢神経系性精神
薄弱及び他の発生障害、脳性麻痺、神経骨格異常症（neuroskeletal disorder）
、自律神経系障害、脳神経障害、脊髄病、筋ジストロフィー及び他の神経筋障害
、末梢神経疾患、皮膚筋炎及び多発性筋炎と、遺伝性、代謝性、内分泌性、及び
中毒性ミオパシーと、重症筋無力症、周期性四肢麻痺と、気分性及び不安性精神
障害、及び妄想性精神病と、静座不能、健忘症、緊張病、糖尿病性ニューロパシ
ー、錐体外路性終末欠陥症候群、ジストニー、分裂病性精神障害、帯状疱疹後神
経痛、及びトゥーレット病が含まれ、また、発達障害も含まれ、その中には尿細
管性アシドーシス、貧血、クッシング症候群、軟骨形成不全性小人症、デュシェ
ンヌ‐ベッカー型筋ジストロフィ、癲癇、性腺形成異常、WAGR症候群（ウィルム
ス腫瘍、無虹彩症、尿生殖器異常、精神薄弱）、スミス‐マジェニス症候群(Smi
th- Magenis syndrome)、脊髄形成異常症候群、遺伝性粘膜上皮異形成、遺伝性
角皮症、シャルコー‐マリー‐ツース病及び神経線維腫症などの遺伝性神経病、
甲状腺機能低下症、水頭症、舞踏病(Syndenham's chorea)及び脳性小児麻痺など
の発作障害、脊髄二分裂、ウィリアムズ症候群、無脳症、頭蓋脊椎披裂、先天性
緑内障、白内障、感覚神経性聴力損失、また、例えば脳や副腎、腎臓、骨格また
は生殖系などの患者の任意の組織及び器官、系を含む細胞増殖及び分化、胚形成
形、態形成に関連する任意の疾患とが含まれる。

【０１０４】 別の実施例では、限定するものではないが上に列記した疾患を含むCJPDZの発
現または活性の低下に関連した疾患の治療または予防のために、CJPDZまたはそ
の断片や誘導体を発現し得るベクターを患者に投与することも可能である。

【０１０５】 更に別の実施例では、限定するものではないが上に列記した疾患を含むCJPDZ
の発現または活性の低下に関連した疾患の治療または予防のために、実質的に精
製されたCJPDZを含む医薬品組成物を好適な医薬用担体と共に患者に投与するこ
とも可能である。

【０１０６】 更に別の実施例では、限定するものではないが上に列記した疾患を含むCJPDZ
の発現または活性の低下に関連した疾患の治療または予防のために、CJPDZの活
性を調節するアゴニストを患者に投与することも可能である。

【０１０７】 更なる実施例では、CJPDZの発現または活性の増大に関連した疾患の治療また
は予防のために、患者にCJPDZのアンタゴニストを投与することが可能である。
このような疾患の例には、限定するものではないが上記した癌及び神経障害、発
達障害疾患が含まれる。一実施態様では、CJPDZと特異的に結合する抗体が直接
アンタゴニストとして、或いはCJPDZを発現する細胞または組織に薬剤を運ぶタ
ーゲッティング或いは運搬機構として間接的に用いられ得る。

【０１０８】 別の実施例では、限定するものではないが上に列記した疾患を含むCJPDZの発
現または活性の増大に関連した疾患の治療または予防のために、CJPDZをコード
するポリヌクレオチドの相補体を発現するベクターを患者に投与することも可能
である。

【０１０９】 別の実施例では、本発明の任意のタンパク質、アンタゴニスト、抗体、アゴニ
スト、相補的な配列、ベクターを別の好適な治療薬と組み合わせて投与すること
もできる。当業者は、従来の医薬原理にしたがって併用療法で用いる好適な治療
薬を選択可能である。治療薬との組み合わせにより、上に列記した種々の疾患の
治療または予防に相乗効果をもたらし得る。この方法を用いて少ない量の各薬剤
で医薬効果をあげることが可能であり、広範囲な副作用の可能性を低減し得る。

【０１１０】 CJPDZのアンタゴニストは、当分野で一般的な方法を用いて製造することが可
能である。詳しくは、精製されたCJPDZを用いて抗体を作ったり、治療薬のライ
ブラリをスクリーニングしてCJPDZと特異的に結合するものを同定が可能である
。CJPDZの抗体も、当分野で一般的な方法を用いて製造することが可能である。
このような抗体には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、
一本鎖、Fabフラグメント、及びFab発現ライブラリによって作られたフラグメン
トが含まれる。但し、これらに限定されるものではない。治療用には、中和抗体
（即ち、二量体の形成を阻害するもの）が特に好ましい。

【０１１１】 抗体の産生のためには、ヤギ、ウサギ、ラット、マウス、ヒト及びその他のも
のを含む種々の宿主が、CJPDZまたは任意の断片、または免疫原性の特性を備え
るそのオリゴペプチドの注入によって免疫化され得る。宿主の種に応じて、種々
のアジュバントを用いて免疫応答を高めることもできる。このようなアジュバン
トにはフロイントアジュバント、水酸化アルミニウムなどのミネラルゲルアジュ
バント、リゾレシチン、プルロニックポリオル、ポリアニオン、ペプチド、油性
乳剤、キーホールリンペットヘモシニアン、及びジニトロフェノールなどの界面
活性剤が含まれるが、これらに限定されるものではない。ヒトに用いられるアジ
ュバントの中では、BCG（bacilli Calmette-Guerin）及びCorynebacterium parv um が特に好ましい。

【０１１２】 CJPDZに対する抗体を誘発するために用いられるオリゴペプチド、ペプチド、
または断片は、約５以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列が望ましく、更に望ま
しいのは約１０以上のアミノ酸からなるものである。これらのオリゴペプチド或
いはペプチド、またはそれらの断片は、天然のタンパク質のアミノ酸配列の一部
と同一であることが望ましく、小さな自然発生の分子のアミノ酸配列全体も含む
。CJPDZアミノ酸の短い伸展部は、KLHなどの別のタンパク質の配列と融合し、キ
メラ分子に対する抗体が産生され得る。

【０１１３】 CJPDZに対するモノクローナル抗体は、培地内の連続した細胞株によって、抗
体分子を産生する任意の技術を用いて作製することが可能である。これらの技術
には、ハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術、及びEBV−ハイブ
リドーマ技術が含まれるが、これらに限定されるものではない（例えば、Kohler
, G. 等. (1975) Nature 256:495-497; Kozbor, D. 等. (1985) .J. Immunol. M
ethods 81−8-42; Cote, R.J. 等. (1983) Proc. Natl. Acad. Sci. 80:2026-20
30; Cole, S.P. 等. (1984) Mol. Cell Biol. 62:109-120を参照）。

【０１１４】 更に、「キメラ抗体」の作製のために発達したヒト抗体遺伝子にマウス抗体遺
伝子をスプライシングするなどの技術が、好適な抗原特異性及び生物学的活性を
備える分子を得るために用いられる（例えば、Morrison, S.L.他. (1984) Proc.
Natl. Acad. Sci. 81:6851-6855; Neuberger, M.S.他. (1984) Nature 312:604
-608; Takeda, S.等. (1985) Nature 314:452,454を参照）。別法では、当分野
で周知の方法を用いて、一本鎖抗体の産生のための記載された技術を適用して、
CJPDZ特異性一本鎖抗体を生成する。関連する特異性を備えるが別のイディオタ
イプの組成の抗体は、ランダムな組み合わせの免疫グロブリンライブラリから鎖
混合によって生成することもできる（例えば、Burton D.R. (1991) Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 88:11120-3を参照）。

【０１１５】 抗体は、リンパ球集団の中のin vivo産生を誘発することによって、または免
疫グロブリンライブラリのスクリーニング又は文献に示されているような、高度
に特異的な結合試薬のパネルをスクリーニングすることによって、産生すること
もできる（例えば、Orlandi, R. 他. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. 86: 3833
-3837; Winter, G. 他. (1991) Nature 349:293-299を参照）。

【０１１６】 CJPDZに対する特異的な結合部位を含む抗体も産生することができる。例えば
、このような断片には、抗体分子のペプシン消化によって生成されるF（ab'）に
断片と、F（ab'）に断片のジスルフィド架橋を減じることによって生成されるFa
b断片が含まれるが、これらに限定されるものではない。別法では、Fab発現ライ
ブラリを作製することによって、所望の特異性とモノクローナルFab断片の迅速
且つ容易な同定が可能となる（例えば、Huse, W.D. 等. (1989) Science 254:12
75-1281を参照）。

【０１１７】 種々のイムノアッセイを用いてスクリーニングし、所望の特異性を有する抗体
を同定する。隔離された特異性を有するポリクローナル抗体またはモノクローナ
ル抗体の何れかを用いる競合的な結合、または免疫放射線活性のための数々のプ
ロトコルが、当分野では周知である。通常このようなイムノアッセイには、CJPD
Zとその特異性抗体との間の複合体調整の計測が含まれる。二つの非干渉性CJPDZ
エピトープに対して反応性のモノクローナル抗体を用いる、２部位モノクローナ
ルベースのイムノアッセイが好ましいが、競合的結合アッセイも利用することが
できる(Pound、前出)。

【０１１８】 ラジオイムノアッセイ技術と共にScatchard分析などの様々な方法を用いて、C
JPDZ抗体の親和性を評価する。親和性を結合定数Kaで表すが、このKaは、平衡状
態の下でCJPDZ抗体複合体のモル濃度を遊離抗体と遊離抗原のモル濃度で割った
ものである。多数のCJPDZエピトープに対して親和性が不均一なポリクロナール
抗体試薬の測定値Ｋａは、CJPDZ抗体の平均親和性または結合活性を表す。特定
のCJPDZエピトープに単一特異的なモノクロナール抗体試薬のＫａは、親和性の
真の測定値を表す。Ka値が１０^９〜１０^１２Ｌ／ｍｏｌの高親和性抗体試薬は、
CJPDZ抗体複合体が激しい操作に耐えなければならないイムノアッセイに用いる
のが好ましい。Ka値が１０^６〜１０^７Ｌ／ｍｏｌの低親和性抗体試薬は、CJPDZ
が抗体から最終的に活性化状態で解離する必要がある免疫精製（immunopurifica
tion）及び類似の処理に用いるのが好ましい。(Catty, D. (1988) Antibodies, Volume I: A Practical Approach . IRL Press, Washington, DC; Liddell, J. E
. and Cryer, A. (1991) A Practical Guide to Monoclonal Antibodies, John
Wiley & Sons, New York NY)。

【０１１９】 ポリクロナール抗体試薬の抗体価及び結合活性を更に評価して、あるダウンス
トリーム適用に対するこのような試薬の品質及び適性を調べる。例えば、少なく
とも１〜２ｍｇ／ｍｌの特異的な抗体、好ましくは５〜１０ｍｇ／ｍｌの特異的
な抗体を含むポリクロナール抗体試薬の使用は、CJPDZ抗体複合体を沈殿させな
ければならない処理に適している。様々な適用例における抗体の特異性及び抗体
価、結合活性、抗体の品質や使用法の指針は一般に入手可能である。(例えば、C
atty, 前出, 及びColigan 他、前出を参照)。

【０１２０】 本発明の別の実施例では、CJPDZをコードするポリヌクレオチド、またはその
任意の断片または相補配列が、治療目的で使用することができる。ある実施形態
では、CJPDZをコードするポリヌクレオチドの相補配列がmRNAの転写を阻止する
のに好適である場合、これを使用することができる。特に細胞は、CJPDZをコー
ドするポリヌクレオチドと相補的な配列で形質転換することもできる。したがっ
て、相補的分子または断片は、CJPDZの活性の調節、または遺伝子機能の調節の
ために使用することができる。このような技術は当分野では周知であり、センス
またはアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは大きな断片が、CJPDZをコードす
る配列の制御領域から、またはコード領域に沿ったさまざまな位置から設計可能
である。

【０１２１】 レトロウイルス、アデノウイルス、ヘルペス又はワクシニア、又は様々な細菌
性プラスミド由来の発現ベクターを用いて、ヌクレオチド配列を標的の器官、組
織又は細胞集団に運ぶこともできる。当業者に周知の方法を用いてCJPDZをコー
ドポリヌクレオチドと相補的な核酸配列を発現するベクターを作製することがで
きる(例えば、前出のSambrook 他、及び前出のAusubel 他によるものを参照)。

【０１２２】 CJPDZをコードする遺伝子は、CJPDZをコードするポリヌクレオチド又はその断
片を高いレベルで発現する発現ベクターで、細胞又は組織を形質転換することに
よって止めることができる。このような作製物を用いて翻訳できないセンス又は
アンチセンス配列を細胞の中に導入することができる。DNAの中に組み入れられ
ない場合でも、このようなベクターは内在性のヌクレアーゼによって機能が損な
われるまでmRNA分子を転写し続ける。非複製ベクターでも一過性の発現を一ヶ月
以上に亘って続け、好適な複製要素がベクター系の一部である場合はさらに長く
持続し得る。

【０１２３】 上記した通り、遺伝子の発現は、CJPDZをコードする遺伝子の制御５’または
調節領域に対する相補的な配列またはアンチセンス分子（DNA或いはRNA、PNA）
を設計することによって調節することができる。転写開始部位、即ち開始部位か
ら−１０と＋１０との間の領域に由来するオリゴヌクレオチドが好適である場合
と同様に、「三重らせん」と塩基対合法を用いて阻止することができる。三重ら
せん構造は、二重らせんがポリメラーゼ、転写因子、または調節分子の結合のた
めに十分に広がるのを阻止するため有益である。三重式DNAを用いる最近の治療
の進歩は文献に記載されている（例えば、Gee, J.E. 等. (1994) In: Huber, B.
E. 及び B.I. Carr, Molecular and Immunologic Approaches, Futura Publishi
ng Co., Mt. Kisco, NYを参照）。相補的な配列またはアンチセンス分子もまた
、転写物がリボソームに結合するのを阻止することによってmRNAの翻訳を阻止す
るように設計できる。

【０１２４】 酵素性RNA分子であるリボザイムは、RNAの特異的切断を触媒するために用いる
ことができる。リボザイム作用の機構には、相補的な標的RNAへのリボザイム分
子の配列特異性ハイブリダイゼーションが含まれ、ヌクレオチド鎖切断が続く。
例えば、CJPDZをコードする配列のヌクレオチド鎖切断を、特異的且つ効果的に
触媒する組換え型のハンマーヘッド型リボザイム分子が含まれる。

【０１２５】 任意の潜在的RNA標的の中の特異的なリボザイム切断部位が、後続の配列ＧＵ
Ａ、ＧＵＵ、及びＧＵＣを含むリボザイム切断部位に対して、標的分子をスキャ
ニングすることによって初めに同定される。一度同定されると、切断部位を含む
標的遺伝子の領域に対応する１５個から２０個のリボヌクレオチドの短いRNA配
列を、オリゴヌクレオチドの機能を不全にする二次的な構造の特徴について評価
することが可能である。候補標的の適合性も、リボヌクレアーゼ保護アッセイを
用いて、相補的なオリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションの容易性をテ
ストすることによって評価することが可能である。

【０１２６】 本発明の相補的なリボ核酸分子及びリボザイムは、当分野で周知の方法を用い
て、核酸分子の合成のために作製することができる。これらの方法には、固相ホ
スホラミダイト化合物などのオリゴヌクレオチドを化学的に合成する方法が含ま
れる。別法では、RNA分子がin vitro及びin vivoでCJPDZをコードするDNA配列の
転写によって生成され得る、このようなDNA配列はＴ７またはＳＰ６等の好適なR
NAポリメラーゼプロモータを用いて、種々のベクターの中に組み入れることが可
能である。別法では、相補的なRNAを構成的または誘導的に合成するこれらのcDN
A作製物は、細胞株、細胞、または組織の中に導入することができる。

【０１２７】 RNA分子を修飾することによって、細胞内の安定性を高め、半減期を長くする
ことができる。可能な修飾には、分子の５’及び／または３’端部でのフランキ
ング配列の追加、または分子のバックボーン内でのホスホジエステラーゼ結合よ
りむしろホスホロチオネート又は２’Ｏメチルの使用が含まれる、がこれらに限
定されるものではない。PNAの生成に固有のこの概念は、内在性のエンドヌクレ
アーゼによって容易には認識されないアデニン、シチジン、グアニン、チミン、
及びウリジンのアセチル−、メチル−、チオ−、及び同様の修飾形態だけでなく
、イノシン、キュエオシン（queosine）、及びワイブトシン（wybutosine）など
の従来のものでない塩基を含めることによって、これらの分子の全体に拡大する
ことができる。

【０１２８】 ベクターを細胞又は組織に導入する多数の方法が利用でき、in vivo、in vitr o 、及びex vivoでの使用に等しく適している。ex vivoでの治療の場合、患者か
ら採取された肝細胞の中にベクターを導入して、自家移植で同じ患者に戻すため
にクローニング増殖される。トランスフェクション、リボソーム注入またはポリ
カチオンアミノポリマーによる運搬は、当分野で周知の方法を用いて実行するこ
とができる（例えば、Goldman, C.K. 他. (1997) Nature Biotechnology 15:462
-66:を参照）。

【０１２９】 上記したいかなる治療方法も、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ウサギ、サル
、及び最も好ましいヒトなどの哺乳動物を含む、治療が必要な全ての被験者に適
用できる。

【０１３０】 本発明の別の実施例は、上記した全ての治療効果のために、医学上認められる
担体と共に医薬品或いは無菌組成物の投与に関連する。このような医薬品組成物
は、CJPDZ、CJPDZに対する抗体、擬態、アゴニスト、アンタゴニスト、又はCJPD
Zのインヒビターなどからなる。この組成物は、単体で、或いは安定剤などの１
種類以上の別の薬剤と共に、無菌の生体適合性医薬品担体に投与することができ
る。このような医薬品担体には、生理食塩水、緩衝食塩水、ブドウ糖、及び水な
どが含まれるがこれらに限定されるものではない。この組成物は、単独或いは薬
物又はホルモンなどの別の薬剤と共に投与することができる。

【０１３１】 本発明に用いられる医薬品組成物は、任意の数の経路を用いて投与することも
できる。この経路には、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、クモ膜下腔内
、心室内、経皮性、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸内、異所性、舌下、または直腸が
含まれるがこれらに限定されるものではない。

【０１３２】 活性処方成分に加えて、これらの医薬品組成物には、活性化合物を医薬的に使
用可能な薬剤にするのを容易にする、医薬品添加物及び補助剤を含む好適な薬学
的に認められる担体が含まれ得る。製剤及び投与についての詳しい技術について
は、最新版のRemington's Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing, PA)に
記載されている。

【０１３３】 経口投与用の医薬品組成物が、経口投与に好適な投与量において当分野で周知
の薬学的に許容される担体を用いて、製剤することができる。このような担体に
より、医薬品組成物が患者が摂取するために、錠剤、丸薬、糖衣剤、カプセル、
液体、ゲル状、シロップ剤、泥状物、懸濁液として製剤される。

【０１３４】 経口用に用いられる医薬品は、活性化合物と固体の薬品添加物とを混合し、得
られた顆粒の混合物を処理して、（所望に応じてすりつぶした後）タブレット或
いは糖衣錠コア（dragee cores）にする。好適な医薬品添加物とは、ラクトース
、スクロース、マンニトール、又はソルビトールを含む糖類、トウモロコシ、小
麦、米、ジャガイモ、又はその他の植物からのでんぷん、メチルセルロース、ヒ
ドロキシプロピルメチルセルロース、又はカルボキシメチルセルロースナトリウ
ムなどのセルロース、アラビアゴム及びトラガカントゴムを含むゴム、ゼラチン
及びコラーゲンなどのタンパク質などの炭水化物又はタンパク質賦形剤である。
必要に応じて、例えば、架橋結合したポリビニルピロリドン、かんてん、アルギ
ン酸、またはその塩であるアルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤または可溶化剤が
加えられる。

【０１３５】 糖衣錠コアは、濃縮糖溶剤などの好適なコーティングと共に用いられる。この
ような濃縮糖溶剤には、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボ
ポルゲル（carbopol gel）、ポリエチレングリコール、及び／または二酸化チタ
ン、ラッカー溶剤、及び好適な有機溶媒または混合溶剤などが含まれ得る。染料
または色素が、製品の識別又は活性化合物の量、即ち薬用量を示すため、錠剤ま
たは糖衣錠に加えられる。

【０１３６】 経口用に用いられる医薬品製剤には、ゼラチンから作られたプッシュ−フィッ
ト型のカプセル、グリセロールまたはソルビトールなどのコーティングとゼラチ
ンからなる封入されたカプセルが含まれる。プッシュ−フィット型のカプセルに
は、ラクトース又はスターチなどの賦形剤や結合材、タルク又はステアリン酸マ
グネシウムなどの潤滑剤、所望に応じて安定剤と混合された活性処方成分が含ま
れる。ソフトカプセルでは、活性化合物が、安定剤と共に或いは安定剤なしで、
脂肪油、溶液、またはポリエチレングリコール溶液などの好適な溶液に溶解或い
は懸濁され得る。

【０１３７】 非経口投与用に好適な医薬品剤が、水溶液で製剤されるが、ハンクス液、リン
ガー液、生理緩衝食塩水などの生理学的に適合性のある緩衝剤が好ましい。水性
懸濁注射液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、又はデ
キストランなどの懸濁液の粘性を高める物質を含み得る。更に、活性化合物の懸
濁液は、好適な油性注入懸濁液として製剤され得る。好適な親水性溶液または媒
体には、ごま油などの脂肪油、オレイン酸エチル、トリグリセリド又はリボソー
ムなどの合成脂肪酸が含まれる。非脂質ポリカチオンアミノポリマーが、運搬目
的で使用される。随意選択により、懸濁液は高濃度の溶液が可能となるよう化合
物の溶解性を高める好適な安定剤または薬剤を含み得る。

【０１３８】 局部または鼻腔投与のために、特定の障壁に浸透する好適な浸透剤が製剤に用
いられる。このような浸透剤は当業者には周知である。

【０１３９】 本発明の医薬品組成物は、当分野で周知の方法、例えば従来の混合、溶解、顆
粒化、糖衣化、溶離（levigating）、乳化、カプセル化、封入、または凍結乾燥
処理を用いて製造され得る。

【０１４０】 医薬品組成物は塩類として製剤され、限定されないが、塩酸、硫酸、酢酸、乳
酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸等の多くの酸と共に形成可能である。塩分は対
応する遊離塩基系よりも、水溶剤または他のプロトン溶剤に溶けやすい。別の場
合の好ましい薬剤の形態には、１から５０ｍＭヒスチジン、０．１％〜２％スク
ロース、及び２〜７％マンニトールの幾つか或いは全てを含み、ｐＨの範囲が４
．５〜５．５であり、使用前に緩衝剤と結合する凍結乾燥粉末を用いることがで
きる。

【０１４１】 医薬品組成物が調合された後、それらは適当な箱に詰められ、指定した症状の
薬としてラベルが貼られる。CJPDZの投与のため、このようなラベルには、量、
頻度、及び投与の方法が含まれるであろう。

【０１４２】 本発明に用いる好適な医薬品組成物には、目的を達成するため、効果的な量の
活性処方成分を含む組成物が含まれる。当業者は、自分の能力で十分に効果的な
服用量を決めることができる。

【０１４３】 どのような組成物であっても、治療に効果的な薬用量は、初めは、例えば腫瘍
細胞の腫瘍細胞アッセイで、或いは動物モデルのどちらかで推定することができ
る。通常、動物モデルには、マウス、ウサギ、イヌ、又はブタなどが用いられる
。動物モデルはまた、好適な濃縮範囲及び投与の経路を決めるのに用いることが
できる。このような治療をもとに、ヒトへの有益な薬用量及び投与経路を決定す
ることができる。

【０１４４】 医学的に効果的な薬用量は、症状や容態を回復させる、たとえばCJPDZ又はそ
の断片、CJPDZの抗体、CJPDZのアゴニストまたはアンタゴニスト、インヒビター
などの活性処方成分の量に関連する。薬用有効度及び毒性は、たとえば、ED_５０ （服用に対して集団の５０％に医薬的効果がある）またはLD_５０（服用に対して
集団の５０％に致命的である）統計を計算するなど、細胞培養または動物実験に
おける標準的な薬剤手法によって決定することができる。毒性効果と治療効果と
の薬用量比は治療指数であり、LD_５０／ED_５０と示すことができる。高い治療指
数を示す医薬品組成物が望ましい。細胞培養アッセイ及び動物実験から得られた
データが、ヒトへの適用のために、薬用量の範囲を調剤するのに用いられる。こ
のような組成物が含まれる薬用量は、毒性を殆ど或いは全く含まず、ED_５０を含
む血中濃度の範囲であることが望ましい。薬用量は、用いられる投与形態及び患
者の感受性、投与の経路によって、この範囲内で様々である。

【０１４５】 正確な薬用量は、治療が必要な患者に関する要素を考慮して、実務者によって
決められるであろう。薬用量及び投与は、効果的なレベルの活性成分を与えるた
め或いは所望の効果を維持するために調節される。薬用量の要素として考慮され
るものには、疾患の重症度、患者の一般的な健康状態、年齢、体重、及び患者の
性別、投与の時間及び頻度、併用する薬剤、反応感受性、及び治療に対する応答
が含まれる。作用器官が長い医薬品組成物は、三日か四日に一度、一週間に一度
、二週間に一度、特定の製剤の半減期及びクリアランス率によって左右され、投
与され得る。

【０１４６】 通常の薬用量は投与の経路によって異なるが、約０．１〜１００，０００μｇ
までの最大約１グラムまでである。特定の薬用量及び運搬の方法に関するガイダ
ンスは文献に記載されており、一般に当分野の実務者はそれを利用することがで
きる。当業者は、タンパク質またはインヒビターとは異なったヌクレオチドの製
剤を利用するであろう。同様に、ポリヌクレオチド又はポリペプチドの運搬は、
特定の細胞、状態、位置などに対して特異的であろう。

【０１４７】 診断 別の実施例では、CJPDZに特異的に結合する抗体が、CJPDZの発現によって特徴
付けられる疾患の診断、またはCJPDZやCJPDZのアゴニストまたはアンタゴニスト
、インヒビターで治療を受けている患者をモニターするためのアッセイに用いら
れる。診断に有用な抗体は、治療のところで記載した方法と同じ方法で製剤され
る。CJPDZの診断アッセイには、抗体及び標識を用いてヒトの体液或いは細胞や
組織から採取されたものからCJPDZを検出する方法が含まれる。これらの抗体は
、修飾をして或いはしないで使用され、レポーター分子の共有結合性或いは非共
有結合性の接着によって標識化され得る。当分野で周知の種々のレポーター分子
が用いられるが、その内の幾つかは上記した。

【０１４８】 CJPDZを測定するためのELISA，RIA，及びFACSを含む種々のプロトコルは、当
分野では周知であり、変わった或いは異常なレベルのCJPDZの発現を診断する元
となるものを提供する。正常或いは標準的なCJPDZの発現の値は、複合体の形成
に適した条件の下、正常な哺乳動物、好ましくはヒトである被験者から採取した
体液または細胞とCJPDZに対する抗体とを結合させることによって決定する。標
準的な複合体形成の量は種々の方法で定量され得るが、測光法（photometric）
が好ましい。被験者のCJPDZの発現の量、制御及び疾患、生検組織からのサンプ
ルが標準値と比較される。標準値と被験者との間の偏差が、疾患を診断するパラ
メーターとなる。

【０１４９】 別の実施例によれば、CJPDZをコードするポリヌクレオチドを診断のために用
いることもできる。用いられるポリヌクレオチドには、オリゴヌクレオチド配列
、相補的なRNA及びDNA分子、及びPNAが含まれる。ポリヌクレオチドを用いて、
疾患と相関し得るCJPDZを発現する生検組織における遺伝子の発現を検出及び定
量する。この診断アッセイを用いて、CJPDZの不在、存在、及び過度の発現を調
べ、治療中のCJPDZレベルの制御を監視する。

【０１５０】 ある実施形態では、CJPDZまたは近縁の分子をコードする遺伝子配列を含むポ
リヌクレオチド配列を検出可能なPCRプローブを用いたハイブリダイゼーション
によって、CJPDZをコードする核酸配列を同定することが可能である。例えば５'
調節領域である高度に特異的な領域か、例えば保存されたモチーフであるやや特
異性の低い領域から作られているかのプローブの特異性と、ハイブリダイゼーシ
ョン或いは増幅の厳密性（最大、高い、中間、または低い）は、プローブがCJPD
Zをコードする自然界の配列のみを同定するかどうか、或いはアレルや関連配列
コードする自然界の配列のみを同定するかどうかによって決まるであろう。

【０１５１】 プローブはまた、関連する配列の検出に利用され、CJPDZをコードする任意の
配列からのヌクレオチドを５０％以上含むのが望ましい。目的の本発明のハイブ
リダイゼーションプローブには、DNAあるいはRNAが可能であり、SEQ ID NO:2の
配列、或いはCJPDZ遺伝子のプロモーター、エンハンサー、イントロンを含むゲ
ノム配列に由来し得る。

【０１５２】 CJPDZをコードするDNAに対して特異的なハイブリダイゼーションプローブの作
製方法には、CJPDZ及びCJPDZ誘導体をコードするポリヌクレオチド配列をmRNAプ
ローブの作製のためのベクターにクローニングする方法がある。このようなベク
ターは市販されており、当業者には周知であり、好適なRNAポリメラーゼ及び好
適な標識されたヌクレオチドを加えることによって、in vitroでRNAプローブを
合成するために用いられる。ハイブリダイゼーションプローブは、例えば^３２Ｐ
或いは^３５Ｓなどの放射性核種、或いはアビジン／ビオチン（biotin）結合系に
よってプローブに結合されたアルカリホスファターゼなどの酵素標識等の種々の
レポーターの集団によって標識され得る。

【０１５３】 CJPDZをコードするポリヌクレオチド配列を用いて、CJPDZの発現に関連する疾
患を診断することが可能である。限定するものではないが、このような疾患の例
には、癌が含まれ、その中には腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫
、奇形癌などがあり、詳しくは副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、頚部、胆嚢、
神経節、消化管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、
前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮の癌が含まれ、ま
た、神経障害も含まれ、その中には、癲癇、虚血性脳血管障害、脳卒中、大脳新
生物、アルツハイマー病、ピック病、ハンチントン病、痴呆、パーキソン病及び
その他の錐体外路障害、筋萎縮性側策硬化及びその他の運動ニューロン障害、進
行性神経性筋萎縮症、色素性網膜炎、遺伝性運動失調、多発性硬化症及び他の脱
髄疾患、細菌性及びウイルス性髄膜炎、脳膿瘍、硬膜下蓄膿症、硬膜外膿瘍、化
膿性頭蓋内血栓性静脈炎、脊髄炎及び神経根炎、ウイルス性中枢神経系疾患と、
クールー及びクロイツフェルト‐ヤコブ病、ゲルストマン症候群、Gerstmann-St
raussler-Scheinker症候群を含むプリオン病（prion disease）と、致死性家族
性不眠症、神経系性栄養病及び代謝病、神経線維腫症、結節硬化症、小脳網膜血
管芽腫（cerebelloretinal hemangioblastomatosis）、脳３叉神経血管症候群、
中枢神経系性精神薄弱及び他の発生障害、脳性麻痺、神経骨格異常症（neuroske
letal disorder）、自律神経系障害、脳神経障害、脊髄病、筋ジストロフィー及
び他の神経筋障害、末梢神経疾患、皮膚筋炎及び多発性筋炎と、遺伝性、代謝性
、内分泌性、及び中毒性ミオパシーと、重症筋無力症、周期性四肢麻痺と、気分
性及び不安性精神障害、及び妄想性精神病と、静座不能、健忘症、緊張病、糖尿
病性ニューロパシー、錐体外路性終末欠陥症候群、ジストニー、分裂病性精神障
害、帯状疱疹後神経痛、及びトゥーレット病が含まれ、また、発達障害も含まれ
、その中には尿細管性アシドーシス、貧血、クッシング症候群、軟骨形成不全性
小人症、デュシェンヌ‐ベッカー型筋ジストロフィ、癲癇、性腺形成異常、WAGR
症候群（ウィルムス腫瘍、無虹彩症、尿生殖器異常、精神薄弱）、スミス‐マジ
ェニス症候群(Smith- Magenis syndrome)、脊髄形成異常症候群、遺伝性粘膜上
皮異形成、遺伝性角皮症、シャルコー‐マリー‐ツース病及び神経線維腫症など
の遺伝性神経病、甲状腺機能低下症、水頭症、舞踏病(Syndenham's chorea)及び
脳性小児麻痺などの発作障害、脊髄二分裂、ウィリアムズ症候群、無脳症、頭蓋
脊椎披裂、先天性緑内障、白内障、感覚神経性聴力損失、また、例えば脳や副腎
、腎臓、骨格または生殖系などの患者の任意の組織及び器官、系を含む細胞増殖
及び分化、胚形成形、態形成に関連する任意の疾患とが含まれる。CJPDZをコー
ドするポリヌクレオチド配列は、サザーン法やノーザン法、ドットブロット法、
或いはその他の膜系の技術、PCR法、ディップスティック（dipstick）、ピン（p
in）、ＥＬＩＳＡ式アッセイ、及び変異CJPDZの発現を検出するために患者から
採取した体液或いは組織を利用するマイクロアレイに使用することが可能である
。このような質的或いは量的方法は、当分野では周知である。

【０１５４】 特定の形態において、CJPDZをコードするヌクレオチド配列は、関連する疾患
、特に上記した疾患を検出するアッセイにおいて有用であろう。CJPDZをコード
するヌクレオチド配列は、標準的な方法で標識化され、ハイブリダイゼーション
複合体の形成に好適な条件の下、患者から採取した体液或いは組織のサンプルに
加えることができるであろう。好適な培養期間の後、サンプルを洗浄し、シグナ
ルを定量して標準値と比較する。患者のサンプルのシグナルの量が、制御サンプ
ルと較べて著しく変わっている場合は、サンプル内のCJPDZをコードするヌクレ
オチド配列の変異レベルにより、関連する疾患の存在が明らかになる。このよう
なアッセイを用いて、動物実験、臨床試験、或いは個人の患者の治療を監視にお
ける、特定の治療効果を推定することが可能である。

【０１５５】 CJPDZの発現に関連する疾患の診断の基準となるものを提供するために、正常
あるいは標準的な発現の概要が確立される。これは、ハイブリダイゼーション或
いは増幅に好適な条件の下、動物或いはヒトの何れかの正常な被験者から抽出さ
れた体液或いは細胞と、CJPDZをコードする配列或いはその断片とを結合させる
ことにより達成され得る。標準的なハイブリダイゼーションは、正常な被験者か
ら得た値と周知の量の実質的に精製されたポリヌクレオチドが用いられる実験か
らの値とを比較することによって定量可能である。正常なサンプルから得た標準
的な値を、疾患の症状を示す被験者から得た値と比較可能である。標準値と被験
者の値との偏差を用いて疾患の存在を確定する。

【０１５６】 疾患の存在が確定され治療プロトコルが開始されると、ハイブリダイゼーショ
ンアッセイを通常ベースで繰り返して、被験者における発現のレベルが正常な患
者に示される値に近づき始めたかどうかを推定することが可能である。繰り返し
行ったアッセイの結果を、数日から数ヶ月の期間の治療の効果を見るのに用いる
ことができる。

【０１５７】 癌では、個体からの生体組織における異常な量の転写物が、疾患の発生の素因
を示し、また実際に臨床的症状が出る前に疾患を検出する方法を提供することが
可能である。この種のより明確な診断により、医療の専門家が予防方法或いは積
極的な治療法を早くから利用して、癌の発生または進行を防ぐことが可能となる
。

【０１５８】 CJPDZをコードする配列から設計されたオリゴヌクレオチドのさらなる診断へ
の利用には、PCRの利用が含まれ得る。このようなオリゴマーは、化学的な合成
、酵素を用いた生成、或いはin vitroで生成され得る。オリゴマーは、好ましく
はCJPDZをコードするポリヌクレオチドの断片、或いはCJPDZをコードするポリヌ
クレオチドと相補的なポリヌクレオチドの断片を含み、最適な条件の下、特定の
遺伝子や条件を識別するために利用される。また、オリゴマーは、やや低い厳密
性条件の下、近縁のDNA或いはRNA配列の検出及び／または定量のため用いること
が可能である。

【０１５９】 CJPDZの発現を定量するために用いられ得る方法には、ヌクレオチドの放射標
識或いはビオチン標識、調節核酸の相互増幅（coamplification）、及び標準的
な曲線に結果が加えられたものが含まれる（例えば、Melby, P.C.等(1993) J. I
mmunol. Methods, 159:235-44；Duplaa, C.等(1993) Anal. Biochem. 229-236を
参照）。多数のサンプルの定量速度が、目的のオリゴマーが種々の希釈液に含ま
れ、分光光度法或いは非色応答により迅速に定量するELISA型のアッセイを用い
ることによって加速された。

【０１６０】 別の実施例では、本明細書で記載した任意のポリヌクレオチド配列由来のオリ
ゴヌクレオチドまたはそれより長い断片を、マイクロアレイにおける標的として
用いる。マイクロアレイを用いて、同時に極めて多くの遺伝子の発現レベルを監
視し、遺伝子の変異、突然変異及び多形性を識別する。この情報は、遺伝子機能
の決定、疾患の遺伝的根拠の解釈、疾患の診断、及び治療薬剤の活性の監視及び
開発に有用である。

【０１６１】 当分野で周知の方法でマイクロアレイを準備して使用し、分析する。(例えば
、Brennan, T.M. 他 (1995) 米国特許第5,474,796号;Schena, M. 他 (1996) Pro
c. Natl. Acad. Sci. 93:10614-10619; Baldeschweiler 他(1995) PCT出願番号W
O95/251116; Shalon, D.他 (1995) PCT出願番号WO95/35505; Heller, R.A. 他(1
997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:2150-2155; 及び Heller, M.J. 他 (1997
) 米国特許第5,605,662号を参照) 本発明の別の実施例ではまた、CJPDZをコードする核酸配列を用いて、自然発
生のゲノム配列をマッピングするのに有用なハイブリダイゼーションプローブを
生成することが可能である。この配列は、以下のものに対してマッピングされる
。特定の染色体、染色体の特定領域または人工生成の染色体、例えば、ヒト人工
染色体（HAC）、酵母人工染色体（YAC）、細菌人工染色体（BAC）、細菌Ｐ１生
成物或いは単一染色体cDNAライブラリである。（例えば、Harrington, 1.3. 他
(1997) Nat Genet. 15:345-355; Price, C.M. (1993) Blood Rev. 7:127-134,
及びTrask, B.J. (1991) Trends Genet. 7:149-154を参照） in sit蛍光ハイブリダイゼーション（FISH）は、他の物理的染色体マッピング
技術及び遺伝マップデータと相関するであろう（例えば、Heinz-Ulrich, 他によ
る(1995) in Meyers, 前出, pp. 965-968.を参照）。遺伝子マップデータの例は
、種々の科学誌あるいはOnline Mendelian Inheritance in Man（OMIM）のサイ
トで見付けることができる。物理的な染色体マップ上のCJPDZをコードする遺伝
子の位置と特定の疾患との相関性、或いは特定の疾患に対する素因が、このよう
な疾患と関係するDNAの領域を決定するのに役立つ。本発明のヌクレオチド配列
を用いて、正常者と、保有者、及び感染した者との遺伝子配列における違いを検
出することもある。

【０１６２】 染色体標本のin sitハイブリダイゼーション、及び確定した染色体マーカーを
用いた結合分析などの物理的マッピング技術を用いて、遺伝子マップを拡張する
こともできる。マウスなどの別の哺乳動物の染色体上での遺伝子の配置により、
たとえ特定のヒト染色体の数或いはアームが分かっていなくても、関連するマー
カーが明らかになることが多い。新規の配列を、物理的なマッピングによって、
染色体アームに割り付けることもできる。このことは、位置クローニング或いは
別の遺伝子発見技術を用いて遺伝的疾患の研究をしている研究者にとって、価値
ある情報である。疾患或いは症候群の位置が、例えば血管拡張性失調症の11q22-
23などの特定の遺伝子領域に遺伝子結合によって大まかに決定されると、その領
域に対するどの配列マッピングも、さらなる調査のための関連する遺伝子或いは
調節遺伝子を表す（例えば、Gatti, R.A.他による（1988）Nature 336:577-580
を参照）。また、目的の本発明のヌクレオチド配列を用いて、正常者、保有者、
即ち感染者の間の、転位置、反転などによる染色体位置の違いを検出することも
ある。

【０１６３】 本発明の別の実施例では、CJPDZ、その触媒作用断片或いは免疫原断片または
そのオリゴペプチドを、種々の任意の薬剤スクリーニング技術における化合物の
ライブラリのスクリーニングに用いることができる。このようなスクリーニング
に用いる断片は、溶液に遊離、固体支持物に固定、細胞の表面上に保持、或いは
細胞内に存在する。CJPDZとテストされる薬剤との複合体を結合することによる
形成は計測されることもある。

【０１６４】 薬剤スクリーニングに用いる別の方法は、目的のタンパク質に対して、好適な
結合親和性を有する化合物のスクリーニング処理能力を高めるために用いられる
（例えば、Geysen,他による(1984) PCT出願番号 WO84/03564を参照）。この方法
では、相当な数の異なる小さな試験用化合物が、プラスチックピン或いは他の基
板の上に合成される。試験用化合物は、CJPDZ、或いはその断片と反応してから
洗浄される。次ぎに、結合されたCJPDZが、当分野で周知の方法で検出される。
精製されたCJPDZはまた、前記した薬剤をスクリーニングする技術に用いられる
プレート上で直接被覆することもできる。別法では、非中和抗体を用いて、ペプ
チドを捕らえ、固体支持物に固定することもできる。

【０１６５】 別の実施例では、CJPDZと結合可能な中和抗体がCJPDZと結合するため試験用化
合物と特に競合する、競合的薬剤スクリーニングアッセイを用いることができる
。この方法では、抗体が、CJPDZと１つ以上の抗原決定因子を共有するどのペプ
チドの存在も検出する。

【０１６６】 別の実施例では、発展途上の分子生物学技術にCJPDZをコードするヌクレオチ
ド配列を用いて、限定はされないが、現在知られているトリプレット暗号及び特
異的な塩基対相互作用などのヌクレオチド配列の特性に依存する新しい技術を提
供することができる。

【０１６７】 当分野の技術者であれば、更なる説明がなくても前述の説明だけで最大限に本
発明を利用できるであろう。したがって、以下に記載する特定の実施例は、例示
目的であって本発明を限定するものではない。

【０１６８】 前出及び以下に記載した全ての特許出願、特許、刊行物、特に米国出願番号09
/151,611を引用することをもって本明細書の一部とする。

【０１６９】

【実施例】

１ cDNAライブラリの作製 UCMCL5T01 cDNAライブラリは、12人の臍帯血から得られた単核細胞から単離し
たRNAを用いて作製した。溜められた溶解物からRNAを単離する前に、その細胞を
IL-5の存在下で12日間かけて培養した。

【０１７０】 細胞を、Brinkmann Homogenizer Polytron PT-3000（Brinkmann Instruments,
Westbury NY）を用いてグアニジニウムイソチオシアネート溶液においてホモジ
ナイズ及び溶解した。溶解物をCsClクッションで遠心分離してRNAを単離した。
そのRNAを酸性フェノールで抽出し、酢酸ナトリウム及びエタノールで沈殿させ
、RNアーゼ無しの水に再懸濁し、DNアーゼで処理した。OLIGOTEX mRNA 精製キッ
ト（QIAGEN, Chatsworth, CA）を用いてポリ（A+）RNAを単離した。

【０１７１】 ポリ（A+）RNAは、SUPERSCRIPT Plasmid System （Life Technologies）にお
ける推奨プロトコルに従ってcDNAの合成及び各cDNAライブラリの作製のために使
用した。cDNAをSEPHAROSE CL4Bカラム（Amersham Pharmacia Biotech）上で分画
し、400bpを超える大きさのcDNAをpINCY（Incyte Pharmaceuticals）に結び付け
た。組換えプラスミドをDH5α^TMコンピテント細胞（Life Technologies）に形質
転換した。

【０１７２】 ２ cDNAクローンの単離 プラスミドDNAはその細胞から放出され、これをREAL Prep 96 Plasmid kit（Q
IAGEN）を用いて精製した。推奨プロトコルを用いたが、以下の点を変更した。
（１）25mg/lのカルベニシリン及び0.4%のグリセロールを含む1mlの滅菌Terrifi
c Broth （Life Technologies）において細菌を培養した。（２）培溶液を19時
間インキュベートした後、この細胞を0.3mlの溶解バッファーに溶解した。（３
）イソプロパノール沈殿を行った後、プラスミドDNAのペレットを0.1mlの蒸留水
に再懸濁した。そのDNAサンプルを4℃で保管した。

【０１７３】 ３ 配列決定および分析 配列決定のためのcDNAは、ABI CATALYST 800（Perkin-Elmer）、又はHYDRA マ
イクロディスペンサー（Robbins Scientific）、又はMICROLAB 2200（Hamilton
Co., Reno, NV）システムとPTC-2000 thermal cyclers（MJ Research）とを組合
せて用いて準備した。cDNAは、ABI PRISM 373若しくは377 配列決定システム（P
erkin-Elmer）並びに標準的なABIプロトコル、塩基対呼び出しソフトウェア、及
びキットを用いて配列決定した。一実施態様においては、MEGABACE 1000 DNA配
列決定システム（Molecular Dynamics）を用いてcDNAの配列決定を実施した。別
の実施態様においては、ABI PRISM BIGDYE Terminator cycle swquencing ready
reaction kit（Perkin-Elmer）を用いてcDNAの増幅および配列決定を行った。
また別の実施態様においては、Amersham Pharmacia Biotech社の溶液および色素
を用いてcDNAの配列決定を実施した。ESTに対する読み枠は、標準的な方法（Aus
ubel, 1997, 前出, unit 7.7のレビュー）を用いて決定した。DNA配列の幾つか
を選択して、本実施例の５に記載した方法で伸長した。

【０１７４】 cDNA、伸長物、及びショットガン配列決定から得られたポリヌクレオチド配列
は、当業者に周知のアルゴリズムを利用するソフトウェアプログラムを組合せて
用いて構築および分析した。表１には、利用したソフトウェアプログラム、説明
、引用文献、及び閾値パラメーターをまとめた。表１の第1列は用いたツール、
プログラム、及びアルゴリズムであり、第2列はそれらの簡単な説明であり、第3
列は引用文献（それらの全てはここで言及することにより本明細書の一部とする
）であり、第4列は2つの配列間の一致の程度の評価に用いた適切なスコア、確率
値、及び他のパラメーターである（確率値が高いほど相同性が高い）。配列は、
MACDNASIS PROソフトウェア（Hitachi Software Engineering, South San Franc
isco CA）及びLASERGENEソフトウェア（DNASTAR）を用いて分析した。

【０１７５】 ポリヌクレオチド配列の確証は、BLAST、動的計画法、及びジヌクレオチド最
近接分析に基づいたプログラム及びアルゴリズムを用いて、ベクター、リンカー
、及びpolyA配列を取除き、多義性の塩基対をマスクすることによって実施した
。次に、配列をBLAST、FASTA、及びBLIMPSに基づいたプログラムを用いてGenBan
kの霊長類、げっ歯類、哺乳類、脊椎動物、及び真核生物のデータベースやBLOCK
Sデータベース等の公共のデータベースでから選択した配列に対して問合わせて
注釈を得た。Phred、Phrap、及びConsedに基づいたプログラムを用いて配列を完
全長のポリヌクレオチドに構築し、GeneMark、BLAST、及びFASTAに基づいたプロ
グラムを用いて読取り枠に対してスクリーニングした。完全長のポリヌクレオチ
ド配列を翻訳して対応する完全長のアミノ酸配列を引き出し、続いてその完全長
のポリヌクレオチド配列をGenBankデータベース（前述）、SwissProt、BLOCKS、
PRINTS及びProsite等のデータベースに問い合わせることによって分析した。HMM
は、遺伝子ファミリーのコンセンサス1次構造を解析する確率的アプローチであ
る（例えば、Eddy, S.R. (1996) Cur. Opin. Str. Biol. 6:361-365を参照）。

【０１７６】 完全長のポリヌクレオチド配列及びアミノ酸配列の構築および分析のための上
述のプログラムは、SEQ ID NO:2からのポリヌクレオチド配列の断片の同定にも
使用した。ハイブリダイゼーション及び増幅に有用な約20から約4000までのヌク
レオチドの断片については、前述の「発明」のセクションで説明した。

【０１７７】 ４ ノーザン分析 ノーザン分析は、遺伝子の転写物の存在を検出するために用いられる実験用技
術であり、特定の細胞種或いは組織に由来するRNAが結合している膜と、標識さ
れたヌクレオチド配列とのハイブリダイゼーションを伴う（例えば、Sambrookら
、前出, ch.7；並びにAusubel, F.M.ら前出, ch.4および16.参照）。

【０１７８】 BLASTを使用する類似のコンピュータ技術を用いて、GenBank或いはLIFESEQ^TM
データベース（Incyte Pharmaceuticals, Palo Alto CA）のようなヌクレオチ
ドデータベース内の同一或いは関連する分子を検索する。この分析は、多くの膜
をベースとしたハイブリダイゼーションに比べてより高速である。さらにコンピ
ュータ検索の感度を変更して、任意の特定の一致が、厳密な一致或いは類似の何
れとして分類されるかを決定することができる。検索の基準は、以下で定義され
る積スコア(product score)である。 （配列同一性%×最大BLASTスコア%）／100 積スコアは、2つの配列間の類似度および配列一致の長さの両方を考慮に入れる
。例えば、積スコア40の場合、その一致は1〜2%誤差の範囲内の正確さであり、積
スコア70の場合は正確な一致となる。類似の分子は通常15〜40間の積スコアを示
す分子を選択することにより同定されるが、それより低いスコアでは関連した分
子として同定される。

【０１７９】 ノーザン分析の結果は、CJPDZをコードする転写物が発生したライブラリの割
合の分布として報告される。分析には、器官／組織並びに疾病によるcDNAライブ
ラリの分類が含まれる。器官／組織のカテゴリーには、心血管、皮膚、発生、内
分泌、胃腸、造血／免疫、筋骨格、神経、生殖、泌尿が含まれる。疾病／障害／
症状のカテゴリーには、癌、炎症／心的外傷、細胞増殖、神経、及び貯留(poole
d)が含まれる。各カテゴリーについて、目的の配列を発現するライブラリを数え
て、カテゴリー全体にわたるライブラリの合計数で割った。各組織に特異的な発
現ならびに疾病、疾患、若しくは症状に特異的な発現の割合を発明の詳細な説明
に示した。

【０１８０】 ５ CJPDZをコードするポリヌクレオチドの伸長 SEQ ID NO:2の完全長の核酸配列は、完全長分子の適切な断片を伸長してこの
断片から設計したオリゴヌクレオチドプライマーを用いて作り出した。一方のプ
ライマーは既知の断片の5'の延長を開始するために合成し、他方のプライマーは
既知の断片の3'の延長を開始するために合成した。開始プライマーは、OLIGO 4.
06ソフトウェア（National Biosciences）或いは他の適切なプログラムを用いて
、約22〜30個のヌクレオチドからなる長さであって50%以上のGC含有物を有し、
且つ約68〜72℃の温度で標的配列にアニーリングするようにcDNAから設計した。
ヘアピン構造及びプライマー−プライマー2量体を生ずるようなヌクレオチドの
如何なる伸長も回避した。

【０１８１】 選択されたヒトcDNAライブラリを用いてこの配列を伸長した。2段階以上の伸
長が必要であるか、又は望ましい場合には、プライマーの付加的或いはネスト化
した組を設計する。

【０１８２】 当業者に周知の方法を利用したPCR法で高い忠実度の増幅を実施した。PCRは、
PTC-200 thermal cycler （MJ Research, Inc.）用いて96ウェルプレートにお
いて行った。反応混合液には、DNA鋳型、200nmolの各プライマーと、Mg²⁺、(NH₄ )₂SO₄、及びβ−メルカプトエタノールを含む反応緩衝液と、Taq DNAポリメラー
ゼ（Amersham Pharmacia Biotech）と、ELONGASE酵素（Life Technologies）と
、Pfu DNAポリメラーゼ（Stratagene）とが含まれる。プライマーの組PCI A及び
PCI Bに対して以下のパラメーターを用いた。 ステップ1 94℃で3分間 ステップ2 94℃で15秒 ステップ3 60℃で1分間 ステップ4 68℃で2分間 ステップ5 ステップ2、3、及び4を20回繰り返す ステップ6 68℃で5分間 ステップ7 4℃で保管 或いは、プライマーの組T7及びSK+に対して以下のパラメーターを用いた。 ステップ1 94℃で3分間 ステップ2 94℃で15秒 ステップ3 57℃で1分間 ステップ4 68℃で2分間 ステップ5 ステップ2、3、及び4を20回繰り返す ステップ6 68℃で5分間 ステップ7 4℃で保管 各ウェルのDNA濃度は、1X TE及び0.5μlの希釈していないPCR生成物に溶解し
た100μlのPICOGREEN定量試薬（0.25% (v/v) PICOGREEN; Molecular Probes, Eu
gene OR）を不透明な蛍光光度計プレート（Coming Costar, Acton MA）の各ウェ
ルに分配し、DNAが試薬と結合可能なようにして測定した。このプレートをFluor
oskan II （Labsystems Oy, Helsinki, Finland）でスキャンして、サンプルの
蛍光を計測し、またDNA濃度を定量化する。反応混合物の5〜10μlの一定分量を1
%のアガロースミニゲル上での電気泳動法によって解析し、何れの反応物が配列
の伸長に成功したかを決定する。

【０１８３】 伸長したヌクレオチドを脱塩および濃縮し、384ウェルプレートに移し、CviJI
コレラウィルスエンドヌクレアーゼ（Molecular Biology Research, Madison WI
）で消化し、pUC 18ベクター（Amersham Pharmacia Biotech）に再連結する前に
音波処理またはせん断を実施した。ショットガン配列決定のために、消化したヌ
クレオチドを低濃度（0.6〜0.8%）のアガロースゲル上に分離し、断片を切除し
、寒天をAgar ACE（Promega）で消化した。伸長したクローンをT4リガーゼ（New
England Biolabs, Beverly MA）を用いてpUC 18ベクター（Amersham Pharmacia
Biotech）に再連結し、Pfu DNAポリメラーゼ（Stratagene）で処理して制限部
位のオーバーハングを満たし、更にコンピテントE.coli細胞に形質移入した。形
質移入した細胞を抗生物質を含む培地で選択し、個々のコロニーを選択してLB/2
X carb培養液の384ウェルプレートに37℃で終夜培養した。

【０１８４】 細胞を溶解し、Taq DNAポリメラーゼ（Amersham Pharmacia Biotech）及びPfu
DNAポリメラーゼ（Stratagene）を用いて以下のパラメーターでDNAをPCR増幅し
た。 ステップ1 94℃で3分間 ステップ2 94℃で１５秒 ステップ3 60℃で1分間 ステップ4 72℃で2分間 ステップ5 ステップ2、3、及び4を29回繰り返す ステップ6 72℃で5分間 ステップ7 4℃で保管 前述のようにPICOGREEN試薬（Molecular Probes）でDNAを定量化した。DNA回収
率の低いサンプルは、上記の条件で再度増幅した。サンプルを20%のジメチルス
ルホキシド(dimethysulphoxide)（1:2, v/v）で希釈し、DYENAMIC energy trans
fer sequencingプライマー並びにDYENAMIC DIRECTキット（Amersham Pharmacia
Biotech）若しくはABI PRISM BIGDYE Terminator cycle sequencing ready reac
tion kit（Perkin-Elmer）を用いて配列決定した。

【０１８５】 同様に、SEQ ID NO:2のヌクレオチド配列を使用し、上記手順、5’伸長用に設
計されたオリゴヌクレオチド、及び適切なゲノムライブラリを用いて5’調節配
列が得られる。

【０１８６】 ６ 個々のハイブリダイゼーションプローブの標識及び使用 SEQ ID NO:2から得られたハイブリダイゼーションプローブを用いて、cDNA、
ゲノムDNA、又はmRNAをスクリーニングする。約20の塩基対からなるオリゴヌク
レオチドの標識について特に記載するが、より大きなヌクレオチド断片にも概ね
同じ手順を用いる。オリゴヌクレオチドを、OLIGO4.06ソフトウェア（National
Biosciences）のような当技術分野のソフトウエアを用いて設計し、50pmolの各
オリゴマー、250μCiの[γ-³²P]アデノシン3リン酸 （Amersham Pharmacia Biot
ech）、及びT4ポリヌクレオチドキナーゼ（DuPont NEN, Boston MA）を結びつけ
ることにより標識する。標識されたオリゴヌクレオチドを、SEPHADEX G-25超微
細分子サイズ排除デキストランビーズカラム（Amersham Pharmacia Biotech）を
用いて実質的に精製する。毎分10⁷カウントの標識されたプローブを含むアリコ
ットを、以下のエンドヌクレアーゼ、Ase I、Bgl II、Eco RI、Pst I、Xba1、又
はPvu II（DuPont NEN）の中の1つで消化されたヒトゲノムDNAの典型的な膜ベー
スのハイブリダイゼーション解析に用いる。

【０１８７】 各消化物からのDNAを、0.7%アガロースゲルに上で分画して、ナイロン膜（NyC
JPDZlus, Schleicher & Schuell, Durham NH）に移す。ハイブリダイゼーション
は40℃で16時間実施する。非特異的シグナルを除去するために、0.1xクエン酸ナ
トリウム食塩水及び0.5%ドデシル硫酸ナトリウムまでの徐々に厳密性を増す条件
下で、ブロットを室温にて連続的に洗浄する。XOMAT-ARフィルム（Eastman Koda
k, Rochester NY）をブロットに対して数時間かけて露光した後にハイブリダイ
ゼーションパターンを視覚的に比較する。

【０１８８】 ７ マイクロアレイ 化学的結合プロシージャ及びインクジェット装置を用いることにより、基板の
表面上でアレイエレメントを合成することができる。（例えば、Baldeschweiler
, 前出 参照）。また、ドットブロット又はスロットブロット法に類似の所定の
アレイを用いて、熱、UV、化学的もしくは機械的結合プロシージャを利用して、
基板の表面にエレメントを配置及び結合させてもよい。標準的なアレイは、手製
で或いは手近な方法及び機械を用いて製作でき、また任意の適切な数のエレメン
トを含む。ハイブリダイゼーション後、ハイブリダイズしていないプローブを取
除き、スキャナーを用いて蛍光のレベル及びパターンを判定する。マイクロアレ
イ上のエレメントとハイブリダイズする各プローブの相補性の度合及び相対的な
存在量は、スキャナーで読取られた画像を解析することにより評価する。

【０１８９】 完全長cDNA、発現された配列タグ（ESTs）、又はそれらの断片は、マイクロア
レイのエレメントを含み得る。ハイブリダイゼーションに適した断片は、当業者
に周知のLASERGENEソフトウェア（DNASTAR）のようなソフトウェアを用いて選択
可能である。本発明のヌクレオチド配列の1つに対応する完全長cDNA、EST、若し
くはそれらの断片を、又は本発明に関連するcDNAライブラリから無作為に選択さ
れたものを、例えばスライドガラスのような適切な基板に配置する。そのcDNAを
、例えばUV架橋の後に熱的および化学的に処置し、さらに乾燥することによって
、スライドガラスに固定する（例えば、Schena, M.ら (1995) Science 270:467-
470; 並びにShalon, D.ら(1996) Genome Res. 6:639-645参照）。蛍光プローブ
を作製し、基板上のエレメントとのハイブリダイゼーションに用いる。基板は前
述の方法によって解析する。

【０１９０】 ８ 相補的ポリヌクレオチド CJPDZをコードする配列に相補的な配列、或いはその任意の一部を、自然発生C
JPDZの発現を検出し、低下させる、即ち抑制するために用いる。約15〜約30塩基
対を含むオリゴヌクレオチドの使用について記載するが、より小さな、或いはよ
り大きな配列フラグメントの場合でも本質的に同じ方法が用いられる。OLIGO 4.
06ソフトウェア及びCJPDZのコーディング配列を用いて適切なオリゴヌクレオチ
ドを設計する。転写を抑制するために、相補オリゴヌクレオチドを最も独特な5
’配列から設計してコーディング配列へのプロモーターの結合を防止するために
用いる。翻訳を抑制するために、相補的なオリゴヌクレオチドを設計してCJPDZ
をコードする転写物へのリボソームの結合を防ぐ。

【０１９１】 ９ CJPDZの発現 CJPDZの発現及び精製は、細菌またはウイルスに基づく発現系を用いて実施さ
れる。細菌におけるCJPDZの発現の場合、抗菌性の耐性遺伝子とcDNAの転写レベ
ルを高める誘導性のプロモーターとを含む適切なベクターにcDNAをサブクローニ
ングする。このようなプロモーターの例としては、以下に限定しないが、lacオ
ペレーター調節エレメントに関連するT5またはT7バクテリオファージプロモータ
ー及びtrp-lac(tac)ハイブリッドプロモーターが挙げられる。組換えベクターを
、BL21(DE3)などの適切な細菌性の宿主に形質転換する。抗生物質耐性菌が、イ
ソプロピルβ−Dチオガラクトピラノシド（IPTG）での誘発によりCJPDZを発現す
る。真核生物の細胞におけるCJPDZの発現は、昆虫または哺乳動物の細胞株に、
一般にバキュロウイスルスとして知られているAutographica californica核多角
体ウイルス（AcMNPV）を感染させることによって行う。バキュロウイルスの非必
須ポリヘドリン遺伝子を、相同的組換え又は転移プラスミド中間体を含む細菌媒
介の遺伝子転移の何れかによって、CJPDZをコードするcDNAと置換する。ウイル
スの感染力は維持され、強力なポリヘドリンプロモータによって高レベルのcDNA
の転写が行われる。多くの場合、組換え型バキュロウイルスは、Spodoptera frug iperda （Sf9）昆虫細胞の感染に用いられるが、場合によっては、ヒト肝細胞の
感染にも用いられる。後者の感染には、バキュロウイルスに対する更なる遺伝的
変更が必要となる。（例えば、Engelhard. E. K.ら(1994) Proc. Natl. Acad. S
ci. USA 91:3224-3227; Sandig, V.ら(1996) Hum. Gene Ther. 7:1937-1945を参
照）。

【０１９２】 殆どの発現系において、CJPDZは、例えばグルタチオンSトランスフェラーゼ（
GST）、またはFLAG若しくは6-His等のペプチドエピトープ標識で融合タンパク質
として合成され、粗製の細胞溶解物からの組換え型融合タンパク質の親和性ベー
スの精製を迅速に1段階で行うことができる。Schistosoma japonicumからの26キ
ロダルトンの酵素のGSTによって、タンパク質の活性及び抗原性を維持した条件
の下で固定化されたグルタチオにおける融合タンパク質の精製が可能となる（Am
ersham Pharmacia Biotech）。精製の後に、特定の操作部位においてCJPDZからG
ST部分をタンパク分解的に切断可能である。8個のアミノ酸のペプチドであるFLA
Gにより、市販のモノクロナール及びポリクロナール抗FLAG抗体を用いて免疫親
和性の精製が可能となる（Eastman Kodak）。6個の連続したヒスチジン残基のス
トレッチである6-Hisによって、金属キレート樹脂（QIAGEN）における精製が可
能となる。タンパク質の発現及び精製の方法については、Ausubelが（1995年,
前出, ch 10 and 16）論じている。これらの方法によって得られた精製されたCJ
PDZを、以下のアッセイで直接用いることができる。

【０１９３】 １０ CJPDZ活性の実証 CJPDZ活性に対するアッセイでは、膜貫通受容体のPDZ誘発のクラスター形成を
測定する（Ponting, 前出）。培養細胞株には、CJPDZをコードするcDNA並びにEG
F受容体若しくはNMDA受容体の何れかを同時形質移入する。対照細胞株には、上
述の1つのcDNAのみを形質移入する。同時形質移入された細胞株におけるEGF受容
体若しくはNDMA受容体のクラスター形成は、これらの受容体に特異的な抗体と間
接免疫蛍光法及び画像解析システムとを組合せて用いて同定並びに定量化する。
受容体のクラスター形成の量は、CJPDZ活性の量に直接的に比例する。

【０１９４】 １１ 機能的アッセイ CJPDZの機能は、哺乳類細胞培養系における生理学的に高められたレベルでのC
JPDZをコードする配列の発現によってアッセイする。高レベルでcDNAを発現する
強力なプロモーターを含む哺乳類の発現ベクターにcDNAをサブクローニングする
。選り抜きのベクターには、pCMV SPORT（Life Technologie）及びpCR3.1 （Inv
itrogen, Carlsbad, CA）が含まれ、その各々にはサイトメガロウイルスプロモ
ーターが含まれる。5〜10μgの組換えベクターを、リポソーム製剤或いは電気穿
孔法によって、好ましくは内皮若しくは造血由来のヒト細胞株に一過性に形質移
入する。また、標識タンパク質をコードする配列を含む1〜2μgの付加的なプラ
スミドを同時形質移入する。標識タンパク質の発現により、形質移入された細胞
と形質移入されていない細胞とを区別することができ、また組換えベクターから
のcDNAの発現を確実に予測できる。選り抜きの標識タンパク質には、緑色蛍光タ
ンパク質（GFP; Clontech）、CD64、又はCD64-GFP融合タンパク質が含まれる。
自動化されたレーザー光学に基づいた技術であるフローサイトメトリー（FCM）
を用いて、GFP又はCD64-GFPを発現する形質移入された細胞を同定し、また細胞
の特性（例えば、アポトーシスの状態）を評価する。FCMによって、先行する或
いは同時の細胞死の現象を診断する蛍光分子の取込みを検出及び定量化する。こ
れらの現象には、プロピジウムヨウ化物でのDNAの染色によって測定される核DNA
内容物の変化、ブロモデオキシウリジンの取込み量の低下によって測定されるDN
A合成の下方制御、特異的抗体との反応性によって測定される細胞表面および細
胞内のタンパンク質の発現の変化、並びにフルオレセイン結合アネキシンVタン
パク質の細胞表面への結合によって測定される原形質膜組成の変化が含まれる。
フローサイトメトリーの方法については、Ormerod, M. G.の (1994) Flow Cytom etry, Oxford, New York, NYに記載されている。

【０１９５】 遺伝子発現におけるCJPDZの影響は、CJPDZをコードする配列並びにCD64若しく
はCD64-GFPの何れかが形質移入された高度に精製された細胞集合を用いて評価す
ることができる。CD64及びCD64-GFPは、形質転換された細胞表面で発現し、ヒト
免疫グロブリンG（IgG）の保存された領域と結合する。形質転換された細胞を、
ヒトIgG若しくはCD64の抗体の何れかで被覆された磁気ビーズを用いて、形質転
換されていない細胞から分離することができる（DYNAL, Lake Success, NY）。m
RNAは、当業者に周知の方法で細胞から精製することができる。CJPDZ及び目的と
する他の遺伝子をコードするmRNAの発現は、ノーザン分析やマイクロアレイ技術
で解析することが可能である。

【０１９６】 １２ CJPDZ特異的抗体の産生 ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（PAGE）（例えば、Harrington, M.G. (19
90) Methods Enzymol. 182:488-495参照）、或いは他の精製技術を使用して実質
的に精製されたCJPDZを用いて、標準的なプロトコルに従ってウサギを免疫化し
て抗体を生成する。

【０１９７】 或いは、CJPDZのアミノ酸配列をLASERGENE software（DNASTAR）を用いて解析
して免疫原性の高い領域を判定し、対応するオリゴポリペプチドを合成し、これ
を用いて当業者に知られた方法により抗体を産生させる。C-末端付近または親水
性領域内のエピトープのような適切なエピトープの選択方法の詳細については当
業者の文献に記載されている（例えば、Ausubel, 1995, 前出, ch.11参照）。

【０１９８】 通常、15残基の長さのオリゴペプチドを、fmoc法の化学作用を利用するABI 431
A Peptide Synthesizer（Perkin-Elmer）を用いて合成し、MBS（N-maleimidoben
zoyl-N-hydroxysuccinimide ester）を用いた反応によりKLH(Sigma, St.Louis,
MO)に結合させて免疫抗原性を増強させる（例えば、Ausubel前出 参照）。ウサ
ギをフロイント完全アジュバントにおけるオリゴペプチド-KLH複合体で免疫化す
る。その結果生じる抗血清は、例えば、プラスチックにペプチドを結合させ、1%
BSAでブロッキングし、ウサギ抗血清と反応させ、洗浄し、さらに放射性ヨウ素
標識したヤギ抗ウサギIgGと反応させることにより、抗ペプチド活性に対して検
査される。

【０１９９】 １３ 特異的抗体を用いる自然発生CJPDZの精製 CJPDZに特異的な抗体を用いるイムノアフィニティークロマトグラフィにより
、自然発生或いは組換えCJPDZを実質的に精製する。イムノアフィニティーカラ
ムは、CJPDZ抗体を、CNBr-活性化セファロース（Amersham Pharmacia Biotech）
のような活性化されたクロマトグラフィー用樹脂に共有結合させることにより作
製する。結合の後、製造者の取扱説明書に従って樹脂をブロック及び洗浄する。

【０２００】 CJPDZを含む培養液をイムノアフィニティーカラムに通し、CJPDZを優先的に吸
着させる条件下（例えば、界面活性剤の存在下における高イオン強度のバッファ
ー）でそのカラムを洗浄する。抗体／CJPDZ結合を分裂させる条件下（例えば、p
H2〜3のバッファー、又は尿素もしくはチオシアン酸塩イオンのような高濃度の
カオトロープ(chaotrope)）でカラムを溶出させ、CJPDZを回収する。

【０２０１】 １４ CJPDZと相互作用する分子の同定 ¹²⁵I Bolton-Hunter試薬を用いて、CJPDZ或いはその生物学的に活性な断片を
標識する（例えば、Bolton, A.E. 及び W.M. Hunter (1973) Biochem.J.133:529
参照）。マルチウエルプレートのウェル内に予め配置した候補分子を、標識した
CJPDZと共にインキュベートし、洗浄し、標識したCJPDZ複合体を有する任意のウ
ェルをアッセイする。種々のCJPDZ濃度で得られたデータを用いて、CJPDZと候補
分子との会合、親和性、及び数についての値を計算する。

【０２０２】 当業者は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく本明細書に記載した方
法及びシステムの種々の改変を行うことができるであろう。本発明を特定の好適
実施例に関して説明してきたが、請求する発明がそのような特定の実施例に過度
に制限されるべきではないことを理解されたい。実際に、記載した本発明の実施
のための方法の種々の改変は、分子生物学或いは関連する分野の当業者には明ら
かであり、請求の範囲内に含まれることを意図するものである。

【０２０３】 表の簡単な説明 表１は、CJPDZの分析に用いたプログラム及びその説明、引用文献、閾値パラ
メーターを示す。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１Ａ】 CJPDZのアミノ酸配列（SEQ ID NO:1）及び核酸配列（SEQ ID NO:2）を示す。こ
のアラインメントは、MACDNASIS PROソフトウェア（Hitachi Software Engineer
ing. S. San Francisco CA）を用いて作成した。

【図１Ｂ】 CJPDZのアミノ酸配列（SEQ ID NO:1）及び核酸配列（SEQ ID NO:2）を示す。こ
のアラインメントは、MACDNASIS PROソフトウェア（Hitachi Software Engineer
ing. S. San Francisco CA）を用いて作成した。

【図１Ｃ】 CJPDZのアミノ酸配列（SEQ ID NO:1）及び核酸配列（SEQ ID NO:2）を示す。こ
のアラインメントは、MACDNASIS PROソフトウェア（Hitachi Software Engineer
ing. S. San Francisco CA）を用いて作成した。

【図２】 LASERGENEソフトウェア(DNASTER Inc, Madison WI)のマルチシーケンスアライン
メントプログラムを用いて作成した、CJPDZ（1974337: SEQ ID NO:l）の残基２
５から２０４までとC. elegans LIN-7（GI 1685067; SEQ ID NO:3）の残基１１
７から２９５までとの間のアミノ酸配列アラインメントを示す。

【表１】

【表２】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 7/06 Ａ６１Ｐ 17/00 ４Ｈ０４５ 13/12 19/04 17/00 21/00 19/04 21/04 21/00 25/08 21/04 25/14 25/08 25/16 25/14 25/18 25/16 25/28 25/18 27/02 25/28 27/16 27/02 35/00 27/16 35/02 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/705 35/02 16/28 Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/28 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 5/10 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｐ 21/02 5/00 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，Ｇ Ｈ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ， ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，Ｍ Ｗ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ， ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 オウ−ヤング、ジャニス アメリカ合衆国カリフォルニア州94702・ マウンテンビュー・カインズアベニュー 1419 (72)発明者 パターソン、チャンドラ アメリカ合衆国カリフォルニア州94025・ メンロパーク・＃１・シャーウッドウェイ 490 Ｆターム(参考） 4B024 AA11 BA44 BA63 CA04 DA01 DA02 DA05 DA11 EA04 GA11 4B063 QA01 QA13 QA18 QQ02 QQ42 QQ52 QR55 QS34 4B064 AG20 AG27 CA19 CC24 DA01 DA13 4B065 AA01X AA57X AA87X AA93Y AB01 AC14 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA01 AA02 AA06 AA07 AA17 BA44 CA53 DC50 MA52 MA56 MA57 MA59 MA60 MA63 MA65 MA66 ZA022 ZA062 ZA152 ZA162 ZA182 ZA202 ZA332 ZA342 ZA542 ZA552 ZA812 ZA892 ZA942 ZA962 ZB262 ZC062 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 DA50 DA75 EA20 EA50 FA72 FA74

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 SEQ ID NO:1またはその断片のアミノ酸配列を有する実質
   的に精製されたポリペプチド。
2. 【請求項２】 請求項１のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配
   列同一性を有する実質的に精製された変異体。
3. 【請求項３】 請求項１のポリペプチドをコードする単離され精製された
   ポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 請求項３のポリヌクレオチドと少なくとも９０％のポリヌ
   クレオチド配列同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオチド変異配列。
5. 【請求項５】 厳密な条件の下で請求項３のポリヌクレオチドとハイブリ
   ダイズする単離され精製されたポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 請求項３のポリヌクレオチドと相補的な配列を有する単離
   され精製されたポリヌクレオチド。
7. 【請求項７】 ポリヌクレオチドの検出方法であって、 （ａ）請求項６のポリヌクレオチドをサンプル内の少なくとも一つの核酸とハ
   イブリダイズさせて、それによりハイブリダイゼーション複合体を形成する過程
   と、 （ｂ）前記ハイブリダイゼーション複合体を検出する過程であって、前記ハイ
   ブリダイゼーション複合体の存在が、前記サンプル内の前記ポリヌクレオチドの
   存在と相関性を有する、該過程とを含むことを特徴とする検出法。
8. 【請求項８】 前記ハイブリダイゼーションの前に前記ポリヌクレオチド
   の増幅過程をさらに含むことを特徴とする請求項７に記載の検出法。
9. 【請求項９】 SEQ ID NO:2またはその断片のポリヌクレオチド配列を有
   する単離され精製されたポリヌクレオチド。
10. 【請求項１０】 請求項９のポリヌクレオチドと少なくとも９０％のポリ
    ヌクレオチド配列同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオチド変異配列
    。
11. 【請求項１１】 請求項９のポリヌクレオチドと相補的な配列を有する単
    離され精製されたポリヌクレオチド。
12. 【請求項１２】 請求項３のポリヌクレオチドの少なくとも一つの断片を
    含む発現ベクター。
13. 【請求項１３】 請求項１２の発現ベクターを含む宿主細胞。
14. 【請求項１４】 ポリペプチドの製造方法であって、 （ａ）前記ポリペプチドの発現に好適な条件の下で、請求項１３の宿主細胞を
    培養する過程と、 （ｂ）前記宿主細胞の培地から前記ポリペプチドを回収する過程とを含むこと
    を特徴とする製造方法。
15. 【請求項１５】 好適な医療用担体と共に請求項１のポリペプチドを含む
    医薬品組成物。
16. 【請求項１６】 請求項１のポリペプチドと特異的に結合する精製された
    抗体。
17. 【請求項１７】 請求項１のポリペプチドの精製されたアゴニスト。
18. 【請求項１８】 請求項１のポリペプチドの精製されたアンタゴニスト。
19. 【請求項１９】 CJPDZの発現または活性の低下に関連する疾患の治療ま
    たは予防が必要な患者に、請求項１５の医薬品組成物を効果的な量投与する過程
    を含む、CJPDZの発現または活性の低下に関連する疾患を治療または予防する方
    法。
20. 【請求項２０】 CJPDZの発現または活性の増大に関連する疾患の治療ま
    たは予防が必要な患者に、請求項１８のアンタゴニストを効果的な量投与する過
    程を含む、CJPDZの発現または活性の増加に関連する疾患を治療または予防する
    方法。