JP2002516354A - 穀類ベータグルカン組成物および方法 - Google Patents
穀類ベータグルカン組成物および方法Info
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- C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
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Abstract
(57)【要約】
水性コロイドの自然なゲル形成性を抑制し、自由に流動する液体のままでいる穀類ベータグルカン配合物を処方する簡単で効率よい方法が開示される。この方法は、温度とともにｐＨが変わる両性イオン塩からなる生物学的緩衝系を使用する。得られるベータグルカン配合物は直接使用することができるが、将来の使用のため保存することもできる。
Description
【０００１】 発明の背景 技術分野 本発明は、一般的にベータグルカンに関する。より詳細には、本発明は、穀類
源から液体ベータグルカン配合物を製造するための方法および組成物に関する。
源から液体ベータグルカン配合物を製造するための方法および組成物に関する。
【０００２】 発明の背景 ガムは、疎水性または親水性の高分子量物質であり、適当な溶媒中でゲルまた
は非常に粘性のある懸濁液または溶液を低乾燥物質含量で生成する。食品、医薬
品および工業製品に通常使用されるガムには、デンプン、セルロース誘導体、グ
アーガム、ローカストビーンガム、ペクチン、アルギン、カラゲーナン、キサン
タン、ベータグルカンおよびアラビアゴムがある。Ｗｈｉｓｔｌｅｒ Ｒ．Ｌ．
（１９９３）Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｇｕｍｓ；Ｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅｓ
ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ Ｅｄｓ．Ｗｈｉｓｔｌｅｒ
Ｒ．Ｌ． ａｎｄ ＢｅＭｉｌｌｅｒ Ｊ．Ｎ．（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ）ｐ．２を参照されたい。
は非常に粘性のある懸濁液または溶液を低乾燥物質含量で生成する。食品、医薬
品および工業製品に通常使用されるガムには、デンプン、セルロース誘導体、グ
アーガム、ローカストビーンガム、ペクチン、アルギン、カラゲーナン、キサン
タン、ベータグルカンおよびアラビアゴムがある。Ｗｈｉｓｔｌｅｒ Ｒ．Ｌ．
（１９９３）Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｇｕｍｓ；Ｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅｓ
ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ Ｅｄｓ．Ｗｈｉｓｔｌｅｒ
Ｒ．Ｌ． ａｎｄ ＢｅＭｉｌｌｅｒ Ｊ．Ｎ．（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ）ｐ．２を参照されたい。
【０００３】 固体状態のほとんどのガムは、無秩序にまとまった多糖類鎖からなる。この構
造の無秩序な性質により、分子間相互作用ポテンシャルは部分的にしか満たされ
ず、例えば水素結合ポテンシャルは飽和していない。多くの不飽和水素結合は迅
速な水和が可能であり、そうでなければ多糖類分子の分子内および分子間結合に
関与しない水素結合位置に水分子を結合する。多糖類が水中に入れられると、水
分子が急速に非晶領域に浸透し、利用可能なポリマー部位に結合し、他の多糖類
間結合を得ようと競争し、最終的に他の多糖類間結合をごくわずかな数に減少さ
せる。多糖類鎖のセグメントは完全に溶媒和し運動作用により動いていき、より
多くの多糖類間結合を分裂させ、それらの多糖類結合は直ちに溶媒和する。ポリ
マー分子の溶解におけるこの中間段階は、一時的なゲル段階を表しており、全多
糖類の溶解における普遍的な段階を描写している。冷水に完全には可溶性でない
炭水化物では、迅速に撹拌しながら加熱することにより溶解が完了し、単分散し
たヒドロゲル溶液が生じる。再アニーリングを防ぐ手段を講じない限り、冷却と
ともにヒドロゲルはゲルを生じる。
造の無秩序な性質により、分子間相互作用ポテンシャルは部分的にしか満たされ
ず、例えば水素結合ポテンシャルは飽和していない。多くの不飽和水素結合は迅
速な水和が可能であり、そうでなければ多糖類分子の分子内および分子間結合に
関与しない水素結合位置に水分子を結合する。多糖類が水中に入れられると、水
分子が急速に非晶領域に浸透し、利用可能なポリマー部位に結合し、他の多糖類
間結合を得ようと競争し、最終的に他の多糖類間結合をごくわずかな数に減少さ
せる。多糖類鎖のセグメントは完全に溶媒和し運動作用により動いていき、より
多くの多糖類間結合を分裂させ、それらの多糖類結合は直ちに溶媒和する。ポリ
マー分子の溶解におけるこの中間段階は、一時的なゲル段階を表しており、全多
糖類の溶解における普遍的な段階を描写している。冷水に完全には可溶性でない
炭水化物では、迅速に撹拌しながら加熱することにより溶解が完了し、単分散し
たヒドロゲル溶液が生じる。再アニーリングを防ぐ手段を講じない限り、冷却と
ともにヒドロゲルはゲルを生じる。
【０００４】 溶解状態の直鎖ガム分子がコロイドになるとき、それらはいくつかの鎖単位に
わたって会合を形成する。鎖の結合部分で、分子結合例えば水素結合が生じ、相
互作用が溶液全体に拡がるにつれ大規模な３次元ネットワークが形成され液体は
ゲルになる。いったん形成されると、分子が互いの上を滑るにつれ、または共に
動くことにより、結合部分の延長が起こる。これは、ネットワーク構造の全体的
な収縮および分子間の溶媒に満たされた空間の減少をもたらす。したがって、溶
媒はゲルから排除され、シネレシスまたは滲出が生じる。コロイド溶液またはゲ
ルを冷却または冷凍すると、この効果は加速される。
わたって会合を形成する。鎖の結合部分で、分子結合例えば水素結合が生じ、相
互作用が溶液全体に拡がるにつれ大規模な３次元ネットワークが形成され液体は
ゲルになる。いったん形成されると、分子が互いの上を滑るにつれ、または共に
動くことにより、結合部分の延長が起こる。これは、ネットワーク構造の全体的
な収縮および分子間の溶媒に満たされた空間の減少をもたらす。したがって、溶
媒はゲルから排除され、シネレシスまたは滲出が生じる。コロイド溶液またはゲ
ルを冷却または冷凍すると、この効果は加速される。
【０００５】 工業的なガムは、溶液安定性の問題から粉末として販売されている。溶解性を
生みだし、向上させ、ゲル溶液を安定化するために、ガムを化学的に修飾するこ
とができる。例えば、メチル、エチル、カルボキシメチル、ヒドロキシエチル、
ヒドロキシプロピル、リン酸、硫酸および類似の基を添加すると、溶解性が向上
し、高粘度の安定溶液がつくられる。ベータグルカンは粘性ガムに分類されてお
り、Ｗｏｏｄ，Ｐ．Ｊ．（１９９３） Ｏａｔ Ｂｒａｎ Ｅｄ．Ｐ．Ｊ．Ｗｏ
ｏｄ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）を参照されたい。グルカンは
、酵母、細菌、菌類および穀類の細胞壁に存在する構造多糖類である。例えば、
（１−３）、（１−４）および（１−３）（１−４）混合ベータＤグルカンが、
とりわけ大麦およびオート麦などの穀類の内乳細胞壁に存在する。
生みだし、向上させ、ゲル溶液を安定化するために、ガムを化学的に修飾するこ
とができる。例えば、メチル、エチル、カルボキシメチル、ヒドロキシエチル、
ヒドロキシプロピル、リン酸、硫酸および類似の基を添加すると、溶解性が向上
し、高粘度の安定溶液がつくられる。ベータグルカンは粘性ガムに分類されてお
り、Ｗｏｏｄ，Ｐ．Ｊ．（１９９３） Ｏａｔ Ｂｒａｎ Ｅｄ．Ｐ．Ｊ．Ｗｏ
ｏｄ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）を参照されたい。グルカンは
、酵母、細菌、菌類および穀類の細胞壁に存在する構造多糖類である。例えば、
（１−３）、（１−４）および（１−３）（１−４）混合ベータＤグルカンが、
とりわけ大麦およびオート麦などの穀類の内乳細胞壁に存在する。
【０００６】 ベータグルカンは粘度に影響を及ぼし、したがってこれらの源から誘導された
製品の有効性にも影響する。例えば、ベータグルカンは消化に影響し、糖調節を
助け、血清コレステロールを低下させるようである。穀類ベータグルカンは有用
な栄養剤であり、ショ糖の代わりに充填剤としても使用されてきた。ベータグル
カンは潜在的な免疫系刺激剤であるとも記載されてきており、傷の治癒を促進す
る。Ｙｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．（１９９７）２
７：３２９３３７；Ｅｓｔｒａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．（１９９７）４１：９９１−９９８；Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａ
ｌ．，（１９９７）ＵＳ ５，６７６，９６７を参照されたい。ベータグルカン
ゲルは、組織接合用の生体適合性粒子を懸濁するのにも使用されてきた。Ｌａｗ
ｉｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）ＵＳ ５，４５１，４０６を参照されたい。
化粧品産業は、ベータグルカンの粘度、剪断強度および水分向上性によりベータ
グルカンの使用を支持している。
製品の有効性にも影響する。例えば、ベータグルカンは消化に影響し、糖調節を
助け、血清コレステロールを低下させるようである。穀類ベータグルカンは有用
な栄養剤であり、ショ糖の代わりに充填剤としても使用されてきた。ベータグル
カンは潜在的な免疫系刺激剤であるとも記載されてきており、傷の治癒を促進す
る。Ｙｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．（１９９７）２
７：３２９３３７；Ｅｓｔｒａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．（１９９７）４１：９９１−９９８；Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａ
ｌ．，（１９９７）ＵＳ ５，６７６，９６７を参照されたい。ベータグルカン
ゲルは、組織接合用の生体適合性粒子を懸濁するのにも使用されてきた。Ｌａｗ
ｉｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）ＵＳ ５，４５１，４０６を参照されたい。
化粧品産業は、ベータグルカンの粘度、剪断強度および水分向上性によりベータ
グルカンの使用を支持している。
【０００７】 ベータグルカンの溶解性はその源により異なる。例えば、穀類ベータグルカン
は通常水性溶媒に可溶であるが、酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅ
ｖｉｓｉａｅ）ベータグルカンは水性溶媒に不溶である。可溶性のグルカンが望
ましい。酵母ベータグルカンはリン酸基の添加により可溶化されてきており、Ｗ
ｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２：
１３９−１５６（１９９１）を参照されたい。Ｊａｍｅｓらの米国特許第５，６
２２，９３９号は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅから可
溶性ベータグルカンを抽出する方法を記載している。記載されている方法は酸加
水分解、塩基加水分解ならびに遠心分離および限外濾過の大規模な使用を伴う複
雑なものである。可溶化された酵母ベータグルカンの安定性についての詳細は提
供されていない。
は通常水性溶媒に可溶であるが、酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅ
ｖｉｓｉａｅ）ベータグルカンは水性溶媒に不溶である。可溶性のグルカンが望
ましい。酵母ベータグルカンはリン酸基の添加により可溶化されてきており、Ｗ
ｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２：
１３９−１５６（１９９１）を参照されたい。Ｊａｍｅｓらの米国特許第５，６
２２，９３９号は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅから可
溶性ベータグルカンを抽出する方法を記載している。記載されている方法は酸加
水分解、塩基加水分解ならびに遠心分離および限外濾過の大規模な使用を伴う複
雑なものである。可溶化された酵母ベータグルカンの安定性についての詳細は提
供されていない。
【０００８】 生物学的緩衝液はその両性イオン性により特徴づけられる。グッドの緩衝液（
Ｇｏｏｄ，Ｎ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ５：４６７（１９
６６）；Ｇｏｏｄ Ｎ．Ｅ．ａｎｄ Ｉｚａｗａ Ｓ．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏ
ｌ．２４：Ｐａｒｔ Ｂ ５３（１９７２）；Ｆｅｒｇｕｓｏｎ Ｗ．Ｊ．ａｎ
ｄ Ｇｏｏｄ Ｎ．Ｅ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０４：３００（１９８
０）を参照されたい）は、ｐＫａが６．０から８．０の間であるように、溶液の
イオン組成による塩効果が最小であるように、カチオンとの相互作用が最小であ
るように設計されている。ガム溶液の安定化に関連したこれらの緩衝液の重要な
特徴は、温度によるｐＨの変動を確実にする温度係数（ｐＫａ／Ｃ）である。こ
の特徴を利用して、２０〜９６℃の温度範囲における配合中の不安定効果、詳細
には水素結合極性の反転および零極性、中性段階の通過ならびに溶液が極限凝固
点に近づく際の安定化効果の両方を作り出すことができる。
Ｇｏｏｄ，Ｎ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ５：４６７（１９
６６）；Ｇｏｏｄ Ｎ．Ｅ．ａｎｄ Ｉｚａｗａ Ｓ．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏ
ｌ．２４：Ｐａｒｔ Ｂ ５３（１９７２）；Ｆｅｒｇｕｓｏｎ Ｗ．Ｊ．ａｎ
ｄ Ｇｏｏｄ Ｎ．Ｅ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０４：３００（１９８
０）を参照されたい）は、ｐＫａが６．０から８．０の間であるように、溶液の
イオン組成による塩効果が最小であるように、カチオンとの相互作用が最小であ
るように設計されている。ガム溶液の安定化に関連したこれらの緩衝液の重要な
特徴は、温度によるｐＨの変動を確実にする温度係数（ｐＫａ／Ｃ）である。こ
の特徴を利用して、２０〜９６℃の温度範囲における配合中の不安定効果、詳細
には水素結合極性の反転および零極性、中性段階の通過ならびに溶液が極限凝固
点に近づく際の安定化効果の両方を作り出すことができる。
【０００９】 発明の開示 本発明は、ベータグルカンの安定な溶液を処方および製造する簡単で効率的な
方法を提供する。本発明は、精製プロセスの間生物学的両性イオン緩衝液を利用
し、冷却時のベータグルカンのゲル化および／または沈殿を抑制するものである
。したがって、本発明はベータグルカンの収量を増加させるとともに、より粗な
穀類配合物をベータグルカンの精製用の出発物質として使用できるようにする。
方法を提供する。本発明は、精製プロセスの間生物学的両性イオン緩衝液を利用
し、冷却時のベータグルカンのゲル化および／または沈殿を抑制するものである
。したがって、本発明はベータグルカンの収量を増加させるとともに、より粗な
穀類配合物をベータグルカンの精製用の出発物質として使用できるようにする。
【００１０】 したがって、ある実施態様において、本発明はベータグルカン溶液のゲル化を
抑制する方法を対象とする。この方法は、ベータグルカン溶液が約１０℃以下の
温度に冷却されたときベータグルカン溶液のゲル化を抑制するに十分な条件下で
、ベータグルカン含有配合物を生物学的両性イオン緩衝液と混合し、ベータグル
カン溶液を生成する工程を含む。
抑制する方法を対象とする。この方法は、ベータグルカン溶液が約１０℃以下の
温度に冷却されたときベータグルカン溶液のゲル化を抑制するに十分な条件下で
、ベータグルカン含有配合物を生物学的両性イオン緩衝液と混合し、ベータグル
カン溶液を生成する工程を含む。
【００１１】 他の実施態様において、本発明はベータグルカン溶液が約１０℃以下の温度に
冷却されたとき、オート麦ベータグルカン溶液のゲル化を抑制する方法を対象と
する。この方法は、オート麦ベータグルカン配合物をＨＥＰＥＳ緩衝液と混合す
る工程を含む。ＨＥＰＥＳ緩衝液は、保存剤および約２．５ｍＭから約５ｍＭの
濃度のＨＥＰＥＳ緩衝剤を含み、約７．２のｐＨを有する。
冷却されたとき、オート麦ベータグルカン溶液のゲル化を抑制する方法を対象と
する。この方法は、オート麦ベータグルカン配合物をＨＥＰＥＳ緩衝液と混合す
る工程を含む。ＨＥＰＥＳ緩衝液は、保存剤および約２．５ｍＭから約５ｍＭの
濃度のＨＥＰＥＳ緩衝剤を含み、約７．２のｐＨを有する。
【００１２】 さらに他の実施態様において、本発明は、ベータグルカン含有穀類配合物から
ベータグルカンを精製する方法を対象とする。この方法は、 （ａ）ベータグルカンを分散するに十分な条件下で、前記配合物を生物学的両性
イオン緩衝液と混合し、ベータグルカン溶液を形成する工程；および （ｂ）前記ベータグルカン溶液を加熱し、分散した親水コロイド溶液を製造する
工程を含む。
ベータグルカンを精製する方法を対象とする。この方法は、 （ａ）ベータグルカンを分散するに十分な条件下で、前記配合物を生物学的両性
イオン緩衝液と混合し、ベータグルカン溶液を形成する工程；および （ｂ）前記ベータグルカン溶液を加熱し、分散した親水コロイド溶液を製造する
工程を含む。
【００１３】 好ましい実施態様において、前記方法は、分散した親水コロイド溶液を濾過し
、浄化されたベータグルカン溶液を提供する工程をさらに含む。 さらに他の実施態様において、本発明は、オート麦ベータグルカン配合物から
オート麦ベータグルカンを精製する方法を対象とする。この方法は、 （ａ）前記配合物を、保存剤および約２．５ｍＭから約５ｍＭの濃度のＨＥＰＥ
Ｓ緩衝剤を含み、約７．２のｐＨを有するＨＥＰＥＳ緩衝液と混合し、ベータグ
ルカン溶液を形成する工程； （ｂ）前記ベータグルカン溶液を約５４℃から約１００℃の温度に加熱し、分散
した親水コロイド溶液を製造する工程；および （ｃ）前記の分散した親水コロイド溶液を濾過して、浄化されたベータグルカン
溶液を提供する工程を含む。
、浄化されたベータグルカン溶液を提供する工程をさらに含む。 さらに他の実施態様において、本発明は、オート麦ベータグルカン配合物から
オート麦ベータグルカンを精製する方法を対象とする。この方法は、 （ａ）前記配合物を、保存剤および約２．５ｍＭから約５ｍＭの濃度のＨＥＰＥ
Ｓ緩衝剤を含み、約７．２のｐＨを有するＨＥＰＥＳ緩衝液と混合し、ベータグ
ルカン溶液を形成する工程； （ｂ）前記ベータグルカン溶液を約５４℃から約１００℃の温度に加熱し、分散
した親水コロイド溶液を製造する工程；および （ｃ）前記の分散した親水コロイド溶液を濾過して、浄化されたベータグルカン
溶液を提供する工程を含む。
【００１４】 好ましい実施態様において、前記ベータグルカン溶液は、約６０℃から約６５
℃の温度に加熱される。 他の実施態様において、本発明は、ベータグルカン含有穀類配合物からベータ
グルカンを精製する方法を対象とする。この方法は、 （ａ）穀類配合物中のベータグルカンを水和して、ベータグルカン溶液を製造す
る工程； （ｂ）前記ベータグルカン溶液を加熱し、ベータグルカン溶液中のベータグルカ
ンを溶解して、分散したベータグルカン溶液を提供する工程； （ｃ）分散したベータグルカン溶液を濾過して、浄化されたベータグルカン溶液
を提供する工程；および （ｄ）生物学的両性イオン緩衝液を浄化されたベータグルカン溶液に加え、安定
化ベータグルカン溶液を提供する工程を含む。
℃の温度に加熱される。 他の実施態様において、本発明は、ベータグルカン含有穀類配合物からベータ
グルカンを精製する方法を対象とする。この方法は、 （ａ）穀類配合物中のベータグルカンを水和して、ベータグルカン溶液を製造す
る工程； （ｂ）前記ベータグルカン溶液を加熱し、ベータグルカン溶液中のベータグルカ
ンを溶解して、分散したベータグルカン溶液を提供する工程； （ｃ）分散したベータグルカン溶液を濾過して、浄化されたベータグルカン溶液
を提供する工程；および （ｄ）生物学的両性イオン緩衝液を浄化されたベータグルカン溶液に加え、安定
化ベータグルカン溶液を提供する工程を含む。
【００１５】 さらに他の実施態様において、本発明は、オート麦ベータグルカン配合物から
オート麦ベータグルカンを精製する方法を対象とする。この方法は、 （ａ）オート麦ベータグルカン配合物中のベータグルカンを水和してベータグル
カン溶液を製造する工程； （ｂ）前記ベータグルカン溶液を約７５℃から約８５℃の温度に加熱して、ベー
タグルカン溶液中のベータグルカンを溶解し、分散したベータグルカン溶液を提
供する工程； （ｃ）分散したベータグルカン溶液を濾過して、浄化されたベータグルカン溶液
を提供する工程；および （ｄ）保存剤および約２．５ｍＭから約５ｍＭの濃度のＨＥＰＥＳ緩衝剤を含み
、約７．２のｐＨを有するＨＥＰＥＳ緩衝液を浄化されたベータグルカン溶液に
加え、安定化ベータグルカン溶液を提供する工程を含む。
オート麦ベータグルカンを精製する方法を対象とする。この方法は、 （ａ）オート麦ベータグルカン配合物中のベータグルカンを水和してベータグル
カン溶液を製造する工程； （ｂ）前記ベータグルカン溶液を約７５℃から約８５℃の温度に加熱して、ベー
タグルカン溶液中のベータグルカンを溶解し、分散したベータグルカン溶液を提
供する工程； （ｃ）分散したベータグルカン溶液を濾過して、浄化されたベータグルカン溶液
を提供する工程；および （ｄ）保存剤および約２．５ｍＭから約５ｍＭの濃度のＨＥＰＥＳ緩衝剤を含み
、約７．２のｐＨを有するＨＥＰＥＳ緩衝液を浄化されたベータグルカン溶液に
加え、安定化ベータグルカン溶液を提供する工程を含む。
【００１６】 他の実施態様において、本発明は、ベータグルカン溶液からのベータグルカン
の沈殿を抑制する方法を対象とする。この方法は、ベータグルカン溶液が約１０
℃以下の温度に冷却されるときベータグルカン溶液からのベータグルカンの沈殿
を抑制するに十分な条件下で、ベータグルカン含有配合物を生物学的両性イオン
緩衝液と混合しベータグルカン溶液を生成する工程を含む。
の沈殿を抑制する方法を対象とする。この方法は、ベータグルカン溶液が約１０
℃以下の温度に冷却されるときベータグルカン溶液からのベータグルカンの沈殿
を抑制するに十分な条件下で、ベータグルカン含有配合物を生物学的両性イオン
緩衝液と混合しベータグルカン溶液を生成する工程を含む。
【００１７】 前記の方法のそれぞれにおける生物学的両性イオン緩衝液は、Ｎ−［２−ヒド
ロキシエチルピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］（ＨＥＰＥＳ）、３
−［Ｎ−モルホリノ］プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキ
シメチル］メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス［２
−ヒドロキシエチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、［カルバモイ
ルメチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’
−ビス［２−エタンスルホン酸］（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ−［２−アセトアミド］−
２−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）および３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル
）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）からなる群から
選択される生物学的緩衝剤を含むのが好ましい。さらに、緩衝液は保存剤を含ん
でもよい。 本発明のこれらの実施態様および他の実施態様は、本明細書の開示を考慮すれ
ば、当業者には容易に思い付くであろう。
ロキシエチルピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］（ＨＥＰＥＳ）、３
−［Ｎ−モルホリノ］プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキ
シメチル］メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス［２
−ヒドロキシエチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、［カルバモイ
ルメチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’
−ビス［２−エタンスルホン酸］（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ−［２−アセトアミド］−
２−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）および３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル
）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）からなる群から
選択される生物学的緩衝剤を含むのが好ましい。さらに、緩衝液は保存剤を含ん
でもよい。 本発明のこれらの実施態様および他の実施態様は、本明細書の開示を考慮すれ
ば、当業者には容易に思い付くであろう。
【００１８】 発明の詳細な説明 本発明の実施は、特に断りがない限り、当業界の技術範囲内にある化学、穀類
化学および生化学の従来の方法を利用する。そのような技術は文献に完全に説明
されている。例えば、Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｇｕｍｓ：Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａ
ｒｉｄｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，Ｅｄｓ，Ｗｈｉｓ
ｔｌｅｒ Ｒ．Ｌ． ａｎｄ ＢｅＭｉｌｌｅｒ Ｊ．Ｎ．（Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ），Ｏａｔｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ ｅｄ，Ｗｅｂｓｔｅｒ，Ｆ．Ｈ．（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉ
ｏｎ ｏｆ Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｓ，Ｓｔ Ｐａｕｌ，ＭＮ）および
Ｂｅｙｎｏｎ Ｒ．Ｊ．ａｎｄ Ｅａｓｔｅｒｂｙ，Ｊ．Ｓ．Ｔｈｅ Ｂａｓｉ
ｃｓ：Ｂｕｆｆｅｒｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓを参照されたい。 本明細書および付随する特許請求の範囲において、単数形“ａ”，“ａｎ”お
よび“ｔｈｅ”は、その内容が明らかに異なる場合を除き複数形を含む。したが
って、ベータグルカンという用語は、２種以上のベータグルカンを含むこともあ
る。
化学および生化学の従来の方法を利用する。そのような技術は文献に完全に説明
されている。例えば、Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｇｕｍｓ：Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａ
ｒｉｄｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，Ｅｄｓ，Ｗｈｉｓ
ｔｌｅｒ Ｒ．Ｌ． ａｎｄ ＢｅＭｉｌｌｅｒ Ｊ．Ｎ．（Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ），Ｏａｔｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ ｅｄ，Ｗｅｂｓｔｅｒ，Ｆ．Ｈ．（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉ
ｏｎ ｏｆ Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｓ，Ｓｔ Ｐａｕｌ，ＭＮ）および
Ｂｅｙｎｏｎ Ｒ．Ｊ．ａｎｄ Ｅａｓｔｅｒｂｙ，Ｊ．Ｓ．Ｔｈｅ Ｂａｓｉ
ｃｓ：Ｂｕｆｆｅｒｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓを参照されたい。 本明細書および付随する特許請求の範囲において、単数形“ａ”，“ａｎ”お
よび“ｔｈｅ”は、その内容が明らかに異なる場合を除き複数形を含む。したが
って、ベータグルカンという用語は、２種以上のベータグルカンを含むこともあ
る。
【００１９】 定義 本明細書を記載するにあたり、以下の用語を用いるが、それらを以下に示すと
おり定義する。 「穀類」とは、限定はされないが大麦、オーツ麦、小麦、ライ麦、モロコシ、
キビおよびコーンの栽培品種など数種の穀類のいずれをも意味する。 「ベータグルカン」とは、β（１−３）結合グルコピラノシル骨格またはβ（
１−４）結合グルコピラノシル骨格または混合β（１−３）（１−４）結合グル
コピラノシル骨格を有するグルカンを意味する。 「穀類ベータグルカン」または「穀類ベータグルカン抽出物」とは、穀類源か
ら誘導された、ベータグルカンおよびベータグルカン抽出物をそれぞれ意味する
。
おり定義する。 「穀類」とは、限定はされないが大麦、オーツ麦、小麦、ライ麦、モロコシ、
キビおよびコーンの栽培品種など数種の穀類のいずれをも意味する。 「ベータグルカン」とは、β（１−３）結合グルコピラノシル骨格またはβ（
１−４）結合グルコピラノシル骨格または混合β（１−３）（１−４）結合グル
コピラノシル骨格を有するグルカンを意味する。 「穀類ベータグルカン」または「穀類ベータグルカン抽出物」とは、穀類源か
ら誘導された、ベータグルカンおよびベータグルカン抽出物をそれぞれ意味する
。
【００２０】 「生物学的緩衝剤」とは、両性イオン性を持つ緩衝液を意味する。そのような
緩衝液は、温度によるｐＨの変動を確実にし配合中の不安定効果、詳細には水素
結合極性の反転および零極性、中性段階の通過を作り出す温度係数（ｐＫａ／Ｃ
）を提供する。さらに、これらの緩衝液は、溶液が極限凝固点に近づく際の安定
化効果を作りだす。そのような緩衝剤には、Ｎ−［２−ヒドロキシエチルピペラ
ジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］（ＨＥＰＥＳ）、３−［Ｎ−モルホリノ
］プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチル−
２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロキシエチル
］−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、［カルバモイルメチル］−２−ア
ミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス［２−エタン
スルホン酸］（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ−［２−アセトアミド］−２−イミノ二酢酸（
ＡＤＡ）および３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒ
ドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）；２−［Ｎ−モルホリノ］エタンス
ルホン酸（ＭＥＳ）；３−［Ｎ−モルホリノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホ
ン酸（ＭＯＰＳＯ）；３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−
２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）；［２−ヒドロキシエチル］
ピペラジン−Ｎ’−［２−ヒドロキシプロパンスルホン酸］（ＨＥＰＰＳＯ）；
緩衝液は、温度によるｐＨの変動を確実にし配合中の不安定効果、詳細には水素
結合極性の反転および零極性、中性段階の通過を作り出す温度係数（ｐＫａ／Ｃ
）を提供する。さらに、これらの緩衝液は、溶液が極限凝固点に近づく際の安定
化効果を作りだす。そのような緩衝剤には、Ｎ−［２−ヒドロキシエチルピペラ
ジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］（ＨＥＰＥＳ）、３−［Ｎ−モルホリノ
］プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチル−
２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロキシエチル
］−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、［カルバモイルメチル］−２−ア
ミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス［２−エタン
スルホン酸］（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ−［２−アセトアミド］−２−イミノ二酢酸（
ＡＤＡ）および３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒ
ドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）；２−［Ｎ−モルホリノ］エタンス
ルホン酸（ＭＥＳ）；３−［Ｎ−モルホリノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホ
ン酸（ＭＯＰＳＯ）；３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−
２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）；［２−ヒドロキシエチル］
ピペラジン−Ｎ’−［２−ヒドロキシプロパンスルホン酸］（ＨＥＰＰＳＯ）；
【００２１】 ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス［２−ヒドロキシプロパンスルホン酸］（ＰＯＰＳ
Ｏ）；［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［３−プロパンスルホン酸
］（ＥＰＰＳ）；トリエタノールアミン（ＴＥＡ）；Ｎ−トリス［ヒドロキシメ
チル］メチルグリシン（ＴＲＩＣＩＮＥ）；Ｎ，Ｎ−ｂｉｓ［２−ヒドロキシエ
チル］グリシン（ＢＩＣＩＮＥ）；Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチル−３
−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）；３−［（１，１−ジメチル−２−ヒ
ドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）
；２−［Ｎ−シクロヘキシルアミノ］エタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）；３−［シ
クロヘキシルアミノ］−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ
）；２−アミノ２−メチル−１−プロパノール（ＡＭＰ）；および３−［シクロ
ヘキシルアミノ］−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）があるがこれらに限定
されない。好ましくは、前記緩衝剤はＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ、ＴＥＳ、ＢＥＳ、
ＡＣＥＳ、ＰＩＰＥＳ、ＡＤＡまたはＤＩＰＳＯであり、ＨＥＰＥＳが好ましい
。上記の緩衝剤は、例えばＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から市販され
ている。
Ｏ）；［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［３−プロパンスルホン酸
］（ＥＰＰＳ）；トリエタノールアミン（ＴＥＡ）；Ｎ−トリス［ヒドロキシメ
チル］メチルグリシン（ＴＲＩＣＩＮＥ）；Ｎ，Ｎ−ｂｉｓ［２−ヒドロキシエ
チル］グリシン（ＢＩＣＩＮＥ）；Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチル−３
−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）；３−［（１，１−ジメチル−２−ヒ
ドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）
；２−［Ｎ−シクロヘキシルアミノ］エタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）；３−［シ
クロヘキシルアミノ］−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ
）；２−アミノ２−メチル−１−プロパノール（ＡＭＰ）；および３−［シクロ
ヘキシルアミノ］−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）があるがこれらに限定
されない。好ましくは、前記緩衝剤はＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ、ＴＥＳ、ＢＥＳ、
ＡＣＥＳ、ＰＩＰＥＳ、ＡＤＡまたはＤＩＰＳＯであり、ＨＥＰＥＳが好ましい
。上記の緩衝剤は、例えばＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から市販され
ている。
【００２２】 「グッドの緩衝液」とは、Ｎ．Ｅ．Ｇｏｏｄ（Ｇｏｏｄ，Ｎ．Ｅ．，ｅｔ ａ
ｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５：４６７（１９６６）；Ｇｏｏｄ Ｎ．Ｅ
．ａｎｄ Ｉｚａｗａ， Ｓ．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４：Ｐａｒｔ Ｂ
５３（１９７２）；Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，Ｗ．Ｊ．ａｎｄ Ｇｏｏｄ，Ｎ．Ｅ．
，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０４：３００（１９８０））により定義された
、ＭＥＳ；ＰＩＰＥＳ；ＢＥＳ；ＭＯＰＳ；ＴＥＳ；ＨＥＰＥＳ；ＥＰＰＳ；Ｔ
ＲＩＣＩＮＥ；ＢＩＣＩＮＥ；ＣＡＰＳ；ＴＡＰＳを含む緩衝液を意味する。
ｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５：４６７（１９６６）；Ｇｏｏｄ Ｎ．Ｅ
．ａｎｄ Ｉｚａｗａ， Ｓ．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４：Ｐａｒｔ Ｂ
５３（１９７２）；Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，Ｗ．Ｊ．ａｎｄ Ｇｏｏｄ，Ｎ．Ｅ．
，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０４：３００（１９８０））により定義された
、ＭＥＳ；ＰＩＰＥＳ；ＢＥＳ；ＭＯＰＳ；ＴＥＳ；ＨＥＰＥＳ；ＥＰＰＳ；Ｔ
ＲＩＣＩＮＥ；ＢＩＣＩＮＥ；ＣＡＰＳ；ＴＡＰＳを含む緩衝液を意味する。
【００２３】 「ゲル化」とは、ヒドロゾル（分散し可溶化した粘性の水性配合物）中に存在
する粒子などのモノマー粒子が連続相と結びつきポリマー性の親水ゲル（弾性物
質または無限の粘度および基本的に無限の重量平均分子量）を形成する当業界に
認められたプロセスを意味する。したがって、本発明の目的には、ゲル化とは、
分散相が連続相と結びつき粘性のゼリー状生成物を作り出す、コロイド形成プロ
セスである。
する粒子などのモノマー粒子が連続相と結びつきポリマー性の親水ゲル（弾性物
質または無限の粘度および基本的に無限の重量平均分子量）を形成する当業界に
認められたプロセスを意味する。したがって、本発明の目的には、ゲル化とは、
分散相が連続相と結びつき粘性のゼリー状生成物を作り出す、コロイド形成プロ
セスである。
【００２４】 「ゲル化の抑制」とは、本明細書に記載された生物学的両性イオン緩衝液によ
り処理されていない対照溶液が示すゲル化と比較して、本発明により処理された
溶液中のゲル形成の低下を意味する。例えば、本発明により処理された溶液は、
実施例に示すとおり認識可能な程度のゲル化、沈殿および製品品質の劣化を起こ
さずに、数回の冷凍／解凍サイクル、好ましくは少なくとも２〜５回の冷凍／解
凍サイクルを耐えるのが典型的である。「ゲル化の抑制」という用語は、ゲル化
が１００％阻止されることを要求しない。
り処理されていない対照溶液が示すゲル化と比較して、本発明により処理された
溶液中のゲル形成の低下を意味する。例えば、本発明により処理された溶液は、
実施例に示すとおり認識可能な程度のゲル化、沈殿および製品品質の劣化を起こ
さずに、数回の冷凍／解凍サイクル、好ましくは少なくとも２〜５回の冷凍／解
凍サイクルを耐えるのが典型的である。「ゲル化の抑制」という用語は、ゲル化
が１００％阻止されることを要求しない。
【００２５】 「安定化ベータグルカン溶液」とは、本明細書に記載された生物学的両性イオ
ン緩衝液により処理されていない対照溶液より少ないゲル化を示す、本発明によ
り処理されたベータグルカン溶液を意味する。上記で説明したとおり、そのよう
な溶液は、認識できるほどのゲル化、沈殿および製品品質の低下なしに、少なく
とも２〜５回の冷凍／解凍サイクルを耐えるのが典型的である。 「分散された親水コロイド溶液」とは、水性溶液中に分布している溶媒和した
ベータグルカン粒子を含む水性コロイド配合物である。
ン緩衝液により処理されていない対照溶液より少ないゲル化を示す、本発明によ
り処理されたベータグルカン溶液を意味する。上記で説明したとおり、そのよう
な溶液は、認識できるほどのゲル化、沈殿および製品品質の低下なしに、少なく
とも２〜５回の冷凍／解凍サイクルを耐えるのが典型的である。 「分散された親水コロイド溶液」とは、水性溶液中に分布している溶媒和した
ベータグルカン粒子を含む水性コロイド配合物である。
【００２６】 「浄化されたベータグルカン溶液」とは、１００ＦＴＵ（Ｆｏｒｍａｚｉｎｅ
Ｔｕｒｂｉｄｉｔｙ Ｕｎｉｔ；ホルマジン濁度単位）未満の濁度、好ましく
は５０ＦＴＵ未満、より好ましくは２５ＦＴＵ未満、さらにより好ましくは１２
ＦＴＵ未満、最も好ましくは５ＦＴＵの濁度を有するベータグルカン溶液を意味
する。濁度およびその測定に関する議論には、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｉ
ｅｌｄ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｗａｔ
ｅｒ−Ｑｕａｌｉｔｙ Ｄａｔａ Ｂｏｏｋ ９，Ｓｅｃｔｉｏｎ Ａ６．７
ＵＳ Ｇｅｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｕｒｖｅｙ（１９９８）を参照されたい。
Ｔｕｒｂｉｄｉｔｙ Ｕｎｉｔ；ホルマジン濁度単位）未満の濁度、好ましく
は５０ＦＴＵ未満、より好ましくは２５ＦＴＵ未満、さらにより好ましくは１２
ＦＴＵ未満、最も好ましくは５ＦＴＵの濁度を有するベータグルカン溶液を意味
する。濁度およびその測定に関する議論には、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｉ
ｅｌｄ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｗａｔ
ｅｒ−Ｑｕａｌｉｔｙ Ｄａｔａ Ｂｏｏｋ ９，Ｓｅｃｔｉｏｎ Ａ６．７
ＵＳ Ｇｅｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｕｒｖｅｙ（１９９８）を参照されたい。
【００２７】 一般的な方法 本発明の中心には、ベータグルカンの安定な溶液を製造する、簡単かつ効率的
な方法の発見がある。溶液は、未処理のものと比較すると１０℃以下の温度に冷
却されたとき、低減されたゲル化を示す。本方法は、精製中の溶液からのベータ
グルカンの沈殿を低減させ、より粗な出発物質を使用可能とする。例えば、本明
細書に記載の方法は、高い粘度を示す高分子量ベータグルカンの使用を可能とす
る。
な方法の発見がある。溶液は、未処理のものと比較すると１０℃以下の温度に冷
却されたとき、低減されたゲル化を示す。本方法は、精製中の溶液からのベータ
グルカンの沈殿を低減させ、より粗な出発物質を使用可能とする。例えば、本明
細書に記載の方法は、高い粘度を示す高分子量ベータグルカンの使用を可能とす
る。
【００２８】 本発明の方法は、本明細書に示されるとおり安定性を増しゲルの生成を抑制す
る生物学的緩衝液を使用する。溶液を浄化して、化粧品および薬剤配合物に使用
するための透明な溶液を提供することもできる。
る生物学的緩衝液を使用する。溶液を浄化して、化粧品および薬剤配合物に使用
するための透明な溶液を提供することもできる。
【００２９】 本発明の方法を用いて、０．０１〜４％ベータグルカン：溶媒（ｗ／ｗ）、よ
り一般的には０．０１〜２％、さらにより一般的には０．１〜１．５％ベータグ
ルカン：溶媒（ｗ／ｗ）の範囲のベータグルカン溶液が処方でき、好ましくは０
．５〜１％ベータグルカン：溶媒（ｗ／ｗ）溶液を処方することが可能である。
したがって、本明細書に記載された方法は、並外れた安定性および長期にわたる
貯蔵寿命を持つ純粋なベータグルカンの溶液の配合物を提供できる。
り一般的には０．０１〜２％、さらにより一般的には０．１〜１．５％ベータグ
ルカン：溶媒（ｗ／ｗ）の範囲のベータグルカン溶液が処方でき、好ましくは０
．５〜１％ベータグルカン：溶媒（ｗ／ｗ）溶液を処方することが可能である。
したがって、本明細書に記載された方法は、並外れた安定性および長期にわたる
貯蔵寿命を持つ純粋なベータグルカンの溶液の配合物を提供できる。
【００３０】 いくつかの公知の穀類源のいずれから誘導されるベータグルカンも本発明のプ
ロセスで使用することができる。そのような穀類は、例えば大麦、オーツ麦、小
麦、ライ麦、モロコシ、キビおよびコーンの栽培品種などであるがこれらに限定
されず、大麦およびオート麦がその高いベータグルカン含量のため好ましい。 ベータグルカンは、例えばＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌ
ｏｕｉｓ，ＭＯ）およびＮｕｒｔｕｒｅ（ＭＴ）などの商業的な供給業者から粉
末形態で入手可能である。Ｃａｎａｍｉｎｏ Ｉｎｃ．（Ｓａｓｋａｔｏｏｎ，
ＳＫ）はオート麦ベータグルカンを供給する。純度が８５％を超え塩分量が低い
ベータグルカンパウダーを本発明に使用することが好ましい。タンパク質を除去
する方法は当業者に公知であり、例えばゲル濾過または酸加水分解である。塩分
を除去する方法も公知であり、例えばエタノール沈殿またはエタノール洗浄がベ
ータグルカン調製にしばしば利用されている。
ロセスで使用することができる。そのような穀類は、例えば大麦、オーツ麦、小
麦、ライ麦、モロコシ、キビおよびコーンの栽培品種などであるがこれらに限定
されず、大麦およびオート麦がその高いベータグルカン含量のため好ましい。 ベータグルカンは、例えばＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌ
ｏｕｉｓ，ＭＯ）およびＮｕｒｔｕｒｅ（ＭＴ）などの商業的な供給業者から粉
末形態で入手可能である。Ｃａｎａｍｉｎｏ Ｉｎｃ．（Ｓａｓｋａｔｏｏｎ，
ＳＫ）はオート麦ベータグルカンを供給する。純度が８５％を超え塩分量が低い
ベータグルカンパウダーを本発明に使用することが好ましい。タンパク質を除去
する方法は当業者に公知であり、例えばゲル濾過または酸加水分解である。塩分
を除去する方法も公知であり、例えばエタノール沈殿またはエタノール洗浄がベ
ータグルカン調製にしばしば利用されている。
【００３１】 本発明の目的には、ベータグルカンはさらなる精製に先立ち生物学的緩衝液に
直接分散されてもよいし、浄化され濃縮されたベータグルカン溶液が製造された
後など精製プロセス中のさらに下流で生物学的緩衝液に加えてもよい。例えば、
プロセスの初期の段階で生物学的緩衝液を提供すると、精製プロセス中のゲル化
および沈殿の問題なしにベータグルカンを分散するためにより低い温度が利用で
き、精製された製品の安定性が増す。または、生物学的緩衝液をプロセスの後の
方で用いて、最終製品の安定性を向上させることもできる。
直接分散されてもよいし、浄化され濃縮されたベータグルカン溶液が製造された
後など精製プロセス中のさらに下流で生物学的緩衝液に加えてもよい。例えば、
プロセスの初期の段階で生物学的緩衝液を提供すると、精製プロセス中のゲル化
および沈殿の問題なしにベータグルカンを分散するためにより低い温度が利用で
き、精製された製品の安定性が増す。または、生物学的緩衝液をプロセスの後の
方で用いて、最終製品の安定性を向上させることもできる。
【００３２】 一般的に、緩衝液濃度は約０．１ｍＭから約２０ｍＭの範囲であり、より一般
的には０．１ｍＭから約１０ｍＭ、好ましくは約０．５ｍＭから約５ｍＭ、より
好ましくは約１．０ｍＭから約５ｍＭ、最も好ましくは約２．５ｍＭである。緩
衝液のｐＨは、２０℃で中性からわずかにアルカリ性のｐＨとなるように選択さ
れ、通常約ｐＨ６．５から約ｐＨ８．５の範囲であり、好ましくは約ｐＨ７から
約ｐＨ８、さらにより好ましくは約ｐＨ７．０から約ｐＨ７．５、最も好ましく
はｐＨ７．２である。生物学的緩衝液は、保存剤などの補助成分を含んでもよい
。
的には０．１ｍＭから約１０ｍＭ、好ましくは約０．５ｍＭから約５ｍＭ、より
好ましくは約１．０ｍＭから約５ｍＭ、最も好ましくは約２．５ｍＭである。緩
衝液のｐＨは、２０℃で中性からわずかにアルカリ性のｐＨとなるように選択さ
れ、通常約ｐＨ６．５から約ｐＨ８．５の範囲であり、好ましくは約ｐＨ７から
約ｐＨ８、さらにより好ましくは約ｐＨ７．０から約ｐＨ７．５、最も好ましく
はｐＨ７．２である。生物学的緩衝液は、保存剤などの補助成分を含んでもよい
。
【００３３】 例えば、ある実施態様において、ベータグルカンは、室温で直接生物学的緩衝
液中に分散および水和される。１０〜２５℃において１〜２４時間の、より一般
的には４〜１６時間の膨潤時間により、ベータグルカンが完全に水和することが
見出された。または、生物学的緩衝液がより後の段階で提供される場合、ベータ
グルカンは、脱イオン水などの適当な水溶液中で分散および水和される。当業界
に公知の技術を用いて安定した終点まで粘度を観察することにより、完全な水和
が保証される。
液中に分散および水和される。１０〜２５℃において１〜２４時間の、より一般
的には４〜１６時間の膨潤時間により、ベータグルカンが完全に水和することが
見出された。または、生物学的緩衝液がより後の段階で提供される場合、ベータ
グルカンは、脱イオン水などの適当な水溶液中で分散および水和される。当業界
に公知の技術を用いて安定した終点まで粘度を観察することにより、完全な水和
が保証される。
【００３４】 膨潤に続き、分散および水和したベータグルカンを加熱して、分子間結合を分
断することにより個々の炭水化物分子を解離させる。約５４℃から約１００℃に
、好ましくは約６０℃から約９０℃に、好ましくは約６５℃から約８５℃に、最
も好ましくは約７５℃から約８５℃への加熱により、グルカン分子が解離する。
加熱時間は約０．５から約１２時間、好ましくは約０．５から約６時間、最も好
ましくは約１時間から約２時間である。
断することにより個々の炭水化物分子を解離させる。約５４℃から約１００℃に
、好ましくは約６０℃から約９０℃に、好ましくは約６５℃から約８５℃に、最
も好ましくは約７５℃から約８５℃への加熱により、グルカン分子が解離する。
加熱時間は約０．５から約１２時間、好ましくは約０．５から約６時間、最も好
ましくは約１時間から約２時間である。
【００３５】 加熱の後、分散していないベータグルカンの大きな塊を除去することによりベ
ータグルカン溶液を浄化することが好ましい。これは濾過により行われる。透明
な製品にするためには、直径１０ミクロンを超える大きさの粒子を、好ましくは
直径４ミクロンを超える大きさの粒子を、最も好ましくは直径１ミクロンを超え
る大きさの粒子を除去することが好ましい。微粒子除去は、濾過助剤を塗布した
Ｃｅｌｉｔｅなどのフィルターを通す浄化により達成することができる。
ータグルカン溶液を浄化することが好ましい。これは濾過により行われる。透明
な製品にするためには、直径１０ミクロンを超える大きさの粒子を、好ましくは
直径４ミクロンを超える大きさの粒子を、最も好ましくは直径１ミクロンを超え
る大きさの粒子を除去することが好ましい。微粒子除去は、濾過助剤を塗布した
Ｃｅｌｉｔｅなどのフィルターを通す浄化により達成することができる。
【００３６】 濾過材を選択するにあたり、分散したグルカン溶液中に塩を導入しないよう注
意しなければならない。このため、高純度水によるフィルターの予備洗浄が必要
であるが、より好ましくは最高品質の濾過材の使用が必要である。ベータグルカ
ン溶液の清澄性は、濁度を評価することにより決定される。この点について、読
みが１００ＦＴＵ（Ｆｏｒｍａｚｉｎｅ Ｔｕｒｂｉｄｉｔｙ Ｕｎｉｔ）未満
、好ましくは５０ＦＴＵ未満、より好ましくは２５ＦＴＵ、さらにより好ましく
は１２ＦＴＵ未満、最も好ましくは５ＦＴＵが得られるまで、濾過溶離剤の濁度
を観測することが好ましい。濁度およびその測定に関する議論には、例えば、Ｎ
ａｔｉｏｎａｌ Ｆｉｅｌｄ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｏｌｌｅｃｔ
ｉｏｎ ｏｆ Ｗａｔｅｒ−Ｑｕａｌｉｔｙ Ｄａｔａ Ｂｏｏｋ ９，Ｓｅｃ
ｔｉｏｎ Ａ６．７ ＵＳ Ｇｅｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｕｒｖｅｙ（１９９８）
を参照されたい。
意しなければならない。このため、高純度水によるフィルターの予備洗浄が必要
であるが、より好ましくは最高品質の濾過材の使用が必要である。ベータグルカ
ン溶液の清澄性は、濁度を評価することにより決定される。この点について、読
みが１００ＦＴＵ（Ｆｏｒｍａｚｉｎｅ Ｔｕｒｂｉｄｉｔｙ Ｕｎｉｔ）未満
、好ましくは５０ＦＴＵ未満、より好ましくは２５ＦＴＵ、さらにより好ましく
は１２ＦＴＵ未満、最も好ましくは５ＦＴＵが得られるまで、濾過溶離剤の濁度
を観測することが好ましい。濁度およびその測定に関する議論には、例えば、Ｎ
ａｔｉｏｎａｌ Ｆｉｅｌｄ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｏｌｌｅｃｔ
ｉｏｎ ｏｆ Ｗａｔｅｒ−Ｑｕａｌｉｔｙ Ｄａｔａ Ｂｏｏｋ ９，Ｓｅｃ
ｔｉｏｎ Ａ６．７ ＵＳ Ｇｅｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｕｒｖｅｙ（１９９８）
を参照されたい。
【００３７】 浄化に続いて、上述のように約０．０１〜４％ベータグルカン：溶媒（ｗ／ｗ
）の範囲のベータグルカン溶液を得るために、透析および／またはダイアフィル
トレーションまたは限外濾過などの当業界に公知ないくつかの方法のいずれかを
用いてベータグルカン溶液を濃縮することができる。例えば、約１００，０００
ダルトンの分子量遮断値を持つフィルターを用いて濾過すると、所望の純度の最
終生成物を提供できる。
）の範囲のベータグルカン溶液を得るために、透析および／またはダイアフィル
トレーションまたは限外濾過などの当業界に公知ないくつかの方法のいずれかを
用いてベータグルカン溶液を濃縮することができる。例えば、約１００，０００
ダルトンの分子量遮断値を持つフィルターを用いて濾過すると、所望の純度の最
終生成物を提供できる。
【００３８】 最終抽出物のベータグルカン含量は、当業者に公知のいくつかの方法を用いて
決定できる。例えば、ベータグルカン含量は、熱量測定法および／またはサイズ
排除クロマトグラフィーおよびＨＰＬＣなどの標準的な分析技術により測定する
ことができる。Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍ．（１９７７
）５４：５２４；Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍ．（１９９
１）６８：３１−３９；およびＷｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅ
ｍ．（１９９１）６８：５３０−５３６を参照されたい。ＭｃＣｌｅａｒｙおよ
びＧｌｅｎｎｉｅ−Ｈｏｌｍｅｓ Ｊ．Ｉｎｓｔ．Ｂｒｅｗ．（１９８５）９１
：２８５の技術を利用したＭｅｇａｚｉｍｅ（Ｉｒｅｌａｎｄ）などの市販のキ
ットを利用して酵素的に分析することもできる。
決定できる。例えば、ベータグルカン含量は、熱量測定法および／またはサイズ
排除クロマトグラフィーおよびＨＰＬＣなどの標準的な分析技術により測定する
ことができる。Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍ．（１９７７
）５４：５２４；Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍ．（１９９
１）６８：３１−３９；およびＷｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅ
ｍ．（１９９１）６８：５３０−５３６を参照されたい。ＭｃＣｌｅａｒｙおよ
びＧｌｅｎｎｉｅ−Ｈｏｌｍｅｓ Ｊ．Ｉｎｓｔ．Ｂｒｅｗ．（１９８５）９１
：２８５の技術を利用したＭｅｇａｚｉｍｅ（Ｉｒｅｌａｎｄ）などの市販のキ
ットを利用して酵素的に分析することもできる。
【００３９】 Ｃ実験 本発明を実施するための具体的な実施態様の実施例を以下に示す。これらの実
施例は説明の目的で提供されたもので、いかなる方法でも本発明の範囲を限定す
るものではない。
施例は説明の目的で提供されたもので、いかなる方法でも本発明の範囲を限定す
るものではない。
【００４０】 使用する数値（例えば量、温度など）について精度を確保するように努力をし
たが、ある程度の実験誤差および逸脱はむろん見込まれるべきである。 ガムを分散する方法は当業界に公知であり、Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｇｕｍｓ
；Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖ
ｅｓ Ｅｄｓ．Ｗｈｉｓｔｌｅｒ， Ｒ．Ｌ． ａｎｄ ＢｅＭｉｌｌｅｒ Ｊ
．Ｎ．（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ ｐ．１８を
参照されたい。ゲルの分散および水和用の専用機器も、例えばＨｅｎｋｅｌ Ｃ
ｏｒｐ．およびＱｕａｄｒｏ Ｉｎｃ．から市販されている。
たが、ある程度の実験誤差および逸脱はむろん見込まれるべきである。 ガムを分散する方法は当業界に公知であり、Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｇｕｍｓ
；Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖ
ｅｓ Ｅｄｓ．Ｗｈｉｓｔｌｅｒ， Ｒ．Ｌ． ａｎｄ ＢｅＭｉｌｌｅｒ Ｊ
．Ｎ．（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ ｐ．１８を
参照されたい。ゲルの分散および水和用の専用機器も、例えばＨｅｎｋｅｌ Ｃ
ｏｒｐ．およびＱｕａｄｒｏ Ｉｎｃ．から市販されている。
【００４１】 粘度は、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ ＳｙｎｃｒｏＬｅｃｔｒｉｃまたはＨａａｋ
ｅ Ｒｏｔｏｖｉｓｃｏなどの回転剪断粘度計により測定される。機器を使用す
る方法は当業者に公知である。慣行的には、２０℃の一定温度で４段階のディス
ク回転速度で測定される。 ＨＥＰＥＳ緩衝剤（酸およびカリウム塩）は、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手した。１００倍濃縮ストック緩衝液を、Ｄ
ｒ．Ｒ．Ｊ．Ｂｅｙｎｏｎ ＵＭＩＳＴ，Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ，ＵＫにより規
定された処方にしたがい調製した。Ｂｅｙｎｏｎ ＲＪ ａｎｄ Ｅａｓｔｅｒ
ｂｙ ＪＳ，Ｔｈｅ Ｂａｓｉｃｓ：Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓを参照
されたい。
ｅ Ｒｏｔｏｖｉｓｃｏなどの回転剪断粘度計により測定される。機器を使用す
る方法は当業者に公知である。慣行的には、２０℃の一定温度で４段階のディス
ク回転速度で測定される。 ＨＥＰＥＳ緩衝剤（酸およびカリウム塩）は、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手した。１００倍濃縮ストック緩衝液を、Ｄ
ｒ．Ｒ．Ｊ．Ｂｅｙｎｏｎ ＵＭＩＳＴ，Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ，ＵＫにより規
定された処方にしたがい調製した。Ｂｅｙｎｏｎ ＲＪ ａｎｄ Ｅａｓｔｅｒ
ｂｙ ＪＳ，Ｔｈｅ Ｂａｓｉｃｓ：Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓを参照
されたい。
【００４２】 ＫｉｌｌａｔｏｌTM溶液からなる保存剤系を、Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ
Ｌａｂｓ（ＮＪ）から購入した。濾過材Ｃｅｌｉｔｅ Ｈｙｆｌｏ Ｓｕｐｅｒ
−Ｃｅｌおよび酸洗浄済みＳｕｐｅｒ−Ｃｅｌは、Ｗｏｒｌｄ Ｍｉｎｅｒａｌ
ｓ（ＣＡ）から購入した。専用フィルターおよび濾過材は、Ｈｉｌｌｉａｒｄ
Ｓｔａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ （ＮＣ）から入手した。 コロイド溶液の安定性を評価するための冷凍／解凍システムを開発した。コロ
イド溶液またはゲルの２５ｍｌサンプルを−１８℃の冷凍庫に入れ、固体状に凍
るまで冷凍庫中に放置した。次にサンプルを室温（＋１８℃）に温めた。室温に
達した後、ゲル化および／またはシネリシスがないかどうかサンプルを観察した
。ゲル化／シネリシスを生じるサイクルの回数を記録した。１０ｍＭリン酸緩衝
液中に調製した１％ベータグルカンサンプルを陽性対照として使用した。このサ
ンプルは、冷凍解凍の１サイクルでゲル化した。Ｃａｎａｍｉｎｏ Ｉｎｃ．か
ら入手した市販サンプルＯｓｔａｒｏ Ｇｌｕｃａｎ １Ａ（水中に調製された
オート麦ベータグルカン）は、最大３サイクルでゲル化した。
Ｌａｂｓ（ＮＪ）から購入した。濾過材Ｃｅｌｉｔｅ Ｈｙｆｌｏ Ｓｕｐｅｒ
−Ｃｅｌおよび酸洗浄済みＳｕｐｅｒ−Ｃｅｌは、Ｗｏｒｌｄ Ｍｉｎｅｒａｌ
ｓ（ＣＡ）から購入した。専用フィルターおよび濾過材は、Ｈｉｌｌｉａｒｄ
Ｓｔａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ （ＮＣ）から入手した。 コロイド溶液の安定性を評価するための冷凍／解凍システムを開発した。コロ
イド溶液またはゲルの２５ｍｌサンプルを−１８℃の冷凍庫に入れ、固体状に凍
るまで冷凍庫中に放置した。次にサンプルを室温（＋１８℃）に温めた。室温に
達した後、ゲル化および／またはシネリシスがないかどうかサンプルを観察した
。ゲル化／シネリシスを生じるサイクルの回数を記録した。１０ｍＭリン酸緩衝
液中に調製した１％ベータグルカンサンプルを陽性対照として使用した。このサ
ンプルは、冷凍解凍の１サイクルでゲル化した。Ｃａｎａｍｉｎｏ Ｉｎｃ．か
ら入手した市販サンプルＯｓｔａｒｏ Ｇｌｕｃａｎ １Ａ（水中に調製された
オート麦ベータグルカン）は、最大３サイクルでゲル化した。
【００４３】 実施例１ 安定化１％ベータグルカン溶液の実験室での調製 純度が８５％を超えるオート麦ベータグルカンパウダーをＣａｎａｍｉｎｏ
Ｉｎｃ．（Ｓａｓｋａｔｏｏｎ，ＳＫ，Ｃａｎａｄａ）から入手した。ベータグ
ルカンを４５０ミクロンのふるいを用いてふるいにかけ、ふるいを通過したもの
のみを溶液調製に用いた。最終濃度１％を得るベータグルカンの量を、純度およ
びパウダー中の水分含量を考慮して計算した。ｐＨ６の２．５ｍＭＨＥＰＥＳの
緩衝液の必要量をビーカーに入れ、オーバーヘッドミキサーにより渦をつくった
。２．５％ＫｉｌｌａｔｏｌTMおよび０．４％ソルビン酸カリウムの保存剤系を
加えると、溶液のｐＨが７．２になった。ベータグルカンパウダーをゆっくりと
緩衝液にふるい入れ、２時間撹拌した。渦を調整することなく、溶液を１時間５
５〜６０℃に加熱した。１％ベータグルカン溶液を放冷した。溶液は外観上透明
でｐＨは７．２であった。ｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸緩衝液中の１％ベータグ
ルカンの対照を用いて、試料を冷凍／解凍試験にかけた。その結果は、対照ベー
タグルカン溶液は１回の冷凍／解凍サイクルの後でゲル化した。安定化ベータグ
ルカン溶液は、製品の品質低下なしに５サイクルを耐えた。
Ｉｎｃ．（Ｓａｓｋａｔｏｏｎ，ＳＫ，Ｃａｎａｄａ）から入手した。ベータグ
ルカンを４５０ミクロンのふるいを用いてふるいにかけ、ふるいを通過したもの
のみを溶液調製に用いた。最終濃度１％を得るベータグルカンの量を、純度およ
びパウダー中の水分含量を考慮して計算した。ｐＨ６の２．５ｍＭＨＥＰＥＳの
緩衝液の必要量をビーカーに入れ、オーバーヘッドミキサーにより渦をつくった
。２．５％ＫｉｌｌａｔｏｌTMおよび０．４％ソルビン酸カリウムの保存剤系を
加えると、溶液のｐＨが７．２になった。ベータグルカンパウダーをゆっくりと
緩衝液にふるい入れ、２時間撹拌した。渦を調整することなく、溶液を１時間５
５〜６０℃に加熱した。１％ベータグルカン溶液を放冷した。溶液は外観上透明
でｐＨは７．２であった。ｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸緩衝液中の１％ベータグ
ルカンの対照を用いて、試料を冷凍／解凍試験にかけた。その結果は、対照ベー
タグルカン溶液は１回の冷凍／解凍サイクルの後でゲル化した。安定化ベータグ
ルカン溶液は、製品の品質低下なしに５サイクルを耐えた。
【００４４】 実施例２ 目視で透明な安定化１％ベータグルカン溶液の実験室での調製 加熱工程の終了後に溶液を濾過した点を除いて、実施例１で記載のとおり調製
を行った。 濾過は、標準的な実験室真空濾過装置により行った。最終製品の純度を確保す
るため濾床を用意した。Ｃｅｌｉｔｅ Ｈｉｆｌｏ Ｓｕｐｅｒ−Ｃｅｌからな
るフィルターを蒸留水で予備洗浄した。温かいベータグルカン溶液を、濾床を２
回通して濾過した。得られた溶液の濁度は、１１ＦＴＵ未満であった。溶液は外
観上透明であり、ｐＨは７．２であった。ｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸緩衝液中
の１％ベータグルカンの対照を用いて、試料を冷凍／解凍試験にかけた。その結
果は、対照ベータグルカン溶液は１回の冷凍／解凍サイクルの後でゲル化した。
安定化ベータグルカン溶液は、製品の品質低下なしに５サイクルを耐えた。
を行った。 濾過は、標準的な実験室真空濾過装置により行った。最終製品の純度を確保す
るため濾床を用意した。Ｃｅｌｉｔｅ Ｈｉｆｌｏ Ｓｕｐｅｒ−Ｃｅｌからな
るフィルターを蒸留水で予備洗浄した。温かいベータグルカン溶液を、濾床を２
回通して濾過した。得られた溶液の濁度は、１１ＦＴＵ未満であった。溶液は外
観上透明であり、ｐＨは７．２であった。ｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸緩衝液中
の１％ベータグルカンの対照を用いて、試料を冷凍／解凍試験にかけた。その結
果は、対照ベータグルカン溶液は１回の冷凍／解凍サイクルの後でゲル化した。
安定化ベータグルカン溶液は、製品の品質低下なしに５サイクルを耐えた。
【００４５】 実施例３ 透明な０．５％安定化ベータグルカン溶液の製造工場での製造 製造工程系統図が図２に示されている。純度８５％を超えるオート麦ベータグ
ルカンパウダーを、Ｃａｎａｍｉｎｏ Ｉｎｃ．（Ｓａｓｋａｔｏｏｎ，ＳＫ，
Ｃａｎａｄａ）から入手した。ベータグルカンを４５０ミクロンのふるいに通し
、ふるいを通ったもののみを溶液調製に用いた。最終濃度０．５％のベータグル
カン溶液２００リットルを製造するためのベータグルカンの量は、純度およびパ
ウダー中の水分量を考慮して計算した。ｐＨ８．０の２．５ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝
液の必要量を、側面に取り付けたオーバーヘッドスターラーを備えた混合タンク
に入れた。渦をつくり、２．５％ＫｉｌｌａｔｏｌTMおよび０．４％ソルビン酸
カリウムの保存剤系を加えると、溶液のｐＨが７．２になった。 連続して設置されたパウダー分散ユニットおよび冷浸機（きつく嵌まる冷浸機
ヘッドにより装着されている）を用いてベータグルカンパウダーを加えた。溶液
を４時間混合および水和した。渦を調整せずに、溶液を６０〜６５℃に１時間加
熱した。
ルカンパウダーを、Ｃａｎａｍｉｎｏ Ｉｎｃ．（Ｓａｓｋａｔｏｏｎ，ＳＫ，
Ｃａｎａｄａ）から入手した。ベータグルカンを４５０ミクロンのふるいに通し
、ふるいを通ったもののみを溶液調製に用いた。最終濃度０．５％のベータグル
カン溶液２００リットルを製造するためのベータグルカンの量は、純度およびパ
ウダー中の水分量を考慮して計算した。ｐＨ８．０の２．５ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝
液の必要量を、側面に取り付けたオーバーヘッドスターラーを備えた混合タンク
に入れた。渦をつくり、２．５％ＫｉｌｌａｔｏｌTMおよび０．４％ソルビン酸
カリウムの保存剤系を加えると、溶液のｐＨが７．２になった。 連続して設置されたパウダー分散ユニットおよび冷浸機（きつく嵌まる冷浸機
ヘッドにより装着されている）を用いてベータグルカンパウダーを加えた。溶液
を４時間混合および水和した。渦を調整せずに、溶液を６０〜６５℃に１時間加
熱した。
【００４６】 Ｗｏｒｌｄ Ｍｉｎｅｒａｌｓ Ｉｎｃ．が提供する指示に従いＣｅｌｉｔｅ
Ｈｉｆｌｏ Ｓｕｐｅｒ−Ｃｅｌのプレコートと共に板枠式圧濾機を準備した
。５ＦＴＵ未満の濁度が得られるまで、濾過床を工場プロセス水で洗浄した。次
いで、濾過床を、さらに床体積の２倍の逆浸透精製水で洗浄した。 ベータグルカンパウダーの初期重量と等しい重さのＣｅｌｉｔｅからなる製薬
グレードのＣｅｌｉｔｅ Ｈｉｆｌｏの「供給」を混合容器内のベータグルカン
溶液に加え、１０分間混合することにより分散させた。次いで、この溶液をポン
プにより濾過床に通し、５ＦＴＵ未満の濁度が得られるまで循環させた。 試料を冷凍解凍サイクルにかけた。その結果は、ｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸
緩衝液に調製された対照ベータグルカン溶液は１回の冷凍／解凍サイクルの後で
ゲル化した。安定化ベータグルカン溶液は、製品の品質低下なしに５サイクルを
耐えた。
Ｈｉｆｌｏ Ｓｕｐｅｒ−Ｃｅｌのプレコートと共に板枠式圧濾機を準備した
。５ＦＴＵ未満の濁度が得られるまで、濾過床を工場プロセス水で洗浄した。次
いで、濾過床を、さらに床体積の２倍の逆浸透精製水で洗浄した。 ベータグルカンパウダーの初期重量と等しい重さのＣｅｌｉｔｅからなる製薬
グレードのＣｅｌｉｔｅ Ｈｉｆｌｏの「供給」を混合容器内のベータグルカン
溶液に加え、１０分間混合することにより分散させた。次いで、この溶液をポン
プにより濾過床に通し、５ＦＴＵ未満の濁度が得られるまで循環させた。 試料を冷凍解凍サイクルにかけた。その結果は、ｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸
緩衝液に調製された対照ベータグルカン溶液は１回の冷凍／解凍サイクルの後で
ゲル化した。安定化ベータグルカン溶液は、製品の品質低下なしに５サイクルを
耐えた。
【００４７】 実施例４ 高粘度安定化１％ベータグルカン溶液の製造工場での製造 製造工程系統図が図３に示されている。分子量が１，０００，０００を超える
オート麦ベータグルカンパウダー（純度６８％）を０．８５ｍｍふるい（ＵＳ＃
２０ｓｉｅｖｅ）を通してふるいにかけ、ふるいを通ったもののみを溶液調製に
用いた。最終濃度１．０％のベータグルカン溶液６０リットルを製造するための
ベータグルカンの量を、純度およびパウダーの水分量から計算した。 全ての機器は、食品医薬品局の要求基準および米国連邦規則集にしたがい標準
的な化学薬品を用いて使用前に消毒した。 ０．２％ベータグルカン使用液（３００リットル）を製造するために必要な量
の脱イオン水を、中央に取り付けたオーバーヘッドミキサーおよび加熱設備を備
えた混合タンクに入れた。
オート麦ベータグルカンパウダー（純度６８％）を０．８５ｍｍふるい（ＵＳ＃
２０ｓｉｅｖｅ）を通してふるいにかけ、ふるいを通ったもののみを溶液調製に
用いた。最終濃度１．０％のベータグルカン溶液６０リットルを製造するための
ベータグルカンの量を、純度およびパウダーの水分量から計算した。 全ての機器は、食品医薬品局の要求基準および米国連邦規則集にしたがい標準
的な化学薬品を用いて使用前に消毒した。 ０．２％ベータグルカン使用液（３００リットル）を製造するために必要な量
の脱イオン水を、中央に取り付けたオーバーヘッドミキサーおよび加熱設備を備
えた混合タンクに入れた。
【００４８】 ベータグルカンを、Ｑｕａｄｒｏ“ＺＣ”Ｐｏｗｄｅｒ Ｄｉｓｐｅｒｓｉｏ
ｎ Ｕｎｉｔのパウダーホルダーに加え、脱イオン水に分散した。グルカンを完
全に水和させるタンク混合を、室温で（約２０℃）１時間継続した。混合速度は
、渦を形成しない最大値に調整した。配合物のｐＨを測定すると７．４であった
。完全に水和した後、混合物の温度を約８５℃に上げ１時間維持した。渦を作ら
ない最大値で混合を継続した。１時間後、ベータグルカンは完全に溶解した。 連続して設置された６ミクロンおよび０．５ミクロンのフィルターを用いて板
枠式圧濾機（Ｈｉｌｌｉａｒｄ Ｓｔａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ
）を用意し、約７５℃に予備加熱した。ベータグルカン溶液を圧濾機に通し、８
５℃に保たれた準備タンクに流した。
ｎ Ｕｎｉｔのパウダーホルダーに加え、脱イオン水に分散した。グルカンを完
全に水和させるタンク混合を、室温で（約２０℃）１時間継続した。混合速度は
、渦を形成しない最大値に調整した。配合物のｐＨを測定すると７．４であった
。完全に水和した後、混合物の温度を約８５℃に上げ１時間維持した。渦を作ら
ない最大値で混合を継続した。１時間後、ベータグルカンは完全に溶解した。 連続して設置された６ミクロンおよび０．５ミクロンのフィルターを用いて板
枠式圧濾機（Ｈｉｌｌｉａｒｄ Ｓｔａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ
）を用意し、約７５℃に予備加熱した。ベータグルカン溶液を圧濾機に通し、８
５℃に保たれた準備タンクに流した。
【００４９】 板枠式圧濾機は、Ｓｔａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ ０．４ミクロンＧｌｉｓｔｅｎ
−ｎ−ｇｌｏフィルターを備えていた。フィルターを２５リットルの工場プロセ
ス水で洗浄し、次いで５ＦＴＵ未満の濁度が得られユニットの温度が約７５℃に
達するまで熱脱イオン水をフィルター系に再循環させることにより平衡させた。
ベータグルカン溶液を最低圧力でポンプにより圧濾機に通した。このようにして
、１０ＦＴＵ未満の濁度が得られた。
−ｎ−ｇｌｏフィルターを備えていた。フィルターを２５リットルの工場プロセ
ス水で洗浄し、次いで５ＦＴＵ未満の濁度が得られユニットの温度が約７５℃に
達するまで熱脱イオン水をフィルター系に再循環させることにより平衡させた。
ベータグルカン溶液を最低圧力でポンプにより圧濾機に通した。このようにして
、１０ＦＴＵ未満の濁度が得られた。
【００５０】 ダイアフィルトレーションを利用して、ベータグルカンを１％ｗ／ｗ溶液に濃
縮した。Ｄｅ Ｄａｎｓｋｅ Ｓｕｋｋｅｒｆａｂｒｉｋｋｅｒ ｕｌｔｒａｆ
ｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍは、約１００，０００の分子量遮断値を持つ
ポリスルホンメンブランを備えていた。６５℃で操作し、ベータグルカン溶液を
１．１％に濃縮した。 処方を終了するため、２５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液ｐＨ７．２をグルカン溶液
に加え、ｐＨ７．２で最終ＨＥＰＥＳ濃度を２．５ｍＭとした。次に、２．５％
Ｋｉｌｌａｔｏｌおよび０．４％ソルビン酸カリウムの保存剤系を加えた。品質
管理試料を採取して、微生物学的分析、濁度測定、pH確認を行った。追加の試料
を採取して冷凍解凍サイクルにかけた。配合物は５回の冷凍解凍サイクルの間安
定性を示した。
縮した。Ｄｅ Ｄａｎｓｋｅ Ｓｕｋｋｅｒｆａｂｒｉｋｋｅｒ ｕｌｔｒａｆ
ｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍは、約１００，０００の分子量遮断値を持つ
ポリスルホンメンブランを備えていた。６５℃で操作し、ベータグルカン溶液を
１．１％に濃縮した。 処方を終了するため、２５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液ｐＨ７．２をグルカン溶液
に加え、ｐＨ７．２で最終ＨＥＰＥＳ濃度を２．５ｍＭとした。次に、２．５％
Ｋｉｌｌａｔｏｌおよび０．４％ソルビン酸カリウムの保存剤系を加えた。品質
管理試料を採取して、微生物学的分析、濁度測定、pH確認を行った。追加の試料
を採取して冷凍解凍サイクルにかけた。配合物は５回の冷凍解凍サイクルの間安
定性を示した。
【００５１】 上記の手順により、高粘度ベータグルカン出発材料を利用して１％溶液を作る
ことができ、救済および濾過工程に希薄溶液を利用している。この方法を用いて
、最終濃度を４％グルカンまで上げることができる。またこの方法により、低パ
ーセンテージベータグルカン溶液をフィードストックとして使用できるが、ダイ
アフィルトレーションにより緩衝交換および濃縮が可能であると同時に、分子量
が１００，０００ダルトンを超える混在タンパク質を除去できるからである。 このように、ベータグルカンを製造する新規な方法が開示される。本発明の好
ましい実施態様を詳細に記載してきたが、請求項により定義される本発明の精神
と範囲を逸脱せずに明白な変形が可能であることを理解されたい。
ことができ、救済および濾過工程に希薄溶液を利用している。この方法を用いて
、最終濃度を４％グルカンまで上げることができる。またこの方法により、低パ
ーセンテージベータグルカン溶液をフィードストックとして使用できるが、ダイ
アフィルトレーションにより緩衝交換および濃縮が可能であると同時に、分子量
が１００，０００ダルトンを超える混在タンパク質を除去できるからである。 このように、ベータグルカンを製造する新規な方法が開示される。本発明の好
ましい実施態様を詳細に記載してきたが、請求項により定義される本発明の精神
と範囲を逸脱せずに明白な変形が可能であることを理解されたい。
【図１】 ベータグルカンの処理を示すフローチャートである。
【図２】 ベータグルカン溶液を製造する商業的な方法を示す工程系統図である。小さい
円と番号は、品質管理ポイントを示す。
円と番号は、品質管理ポイントを示す。
【図３】 ベータグルカン溶液を製造する別な商業的方法を示す工程系統図である。小さ
い円と番号は、品質管理ポイントを示す。
い円と番号は、品質管理ポイントを示す。
【手続補正書】
【提出日】平成１２年１２月１１日（２０００．１２．１１）
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正内容】
【図１】
【図２】
【図３】
Claims (31)
- 【請求項１】 ベータグルカン溶液のゲル化を抑制する方法であって、ベー
タグルカン溶液が約１０℃以下の温度に冷却されたときベータグルカン溶液のゲ
ル化を抑制するに十分な条件下で、ベータグルカン含有配合物を生物学的両性イ
オン緩衝液と混合し、ベータグルカン溶液を生成する工程を含む方法。 - 【請求項２】 前記生物学的両性イオン緩衝液がＮ−［２−ヒドロキシエチ
ルピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］（ＨＥＰＥＳ）、３−［Ｎ−モ
ルホリノ］プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］
メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロキ
シエチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、［カルバモイルメチル］
−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス［２
−エタンスルホン酸］（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ−［２−アセトアミド］−２−イミノ
二酢酸（ＡＤＡ）および３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］
−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）からなる群から選択される
生物学的緩衝剤を含む、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 前記生物学的両性イオン緩衝溶液がＨＥＰＥＳ緩衝剤を含む
、請求項２に記載の方法。 - 【請求項４】 前記ＨＥＰＥＳ緩衝剤が、約２．５ｍＭから約５ｍＭの濃度
で存在する、請求項３に記載の方法。 - 【請求項５】 前記ベータグルカン配合物がオート麦配合物である、請求項
１に記載の方法。 - 【請求項６】 前記生物学的両性イオン緩衝溶液がさらに保存剤を含む、請
求項１に記載の方法。 - 【請求項７】 前記生物学的両性イオン緩衝溶液のｐＨが約７．２である、
請求項６に記載の方法。 - 【請求項８】 ベータグルカン溶液が約１０℃以下の温度に冷却されたとき
、オート麦ベータグルカン溶液のゲル化を抑制する方法であって、オート麦ベー
タグルカン配合物を、保存剤および約２．５ｍＭから約５ｍＭの濃度のＨＥＰＥ
Ｓ緩衝剤を含み約７．２のｐＨを有するＨＥＰＥＳ緩衝液と混合して、ベータグ
ルカン溶液を得る工程を含む方法。 - 【請求項９】 ベータグルカン含有穀類配合物からベータグルカンを精製す
る方法であって、 （ａ）ベータグルカンを分散するに十分な条件下で、前記配合物を生物学的両性
イオン緩衝液と混合し、ベータグルカン溶液を形成する工程；および （ｂ）前記ベータグルカン溶液を加熱し、分散した親水コロイド溶液を製造する
工程を含む方法。 - 【請求項１０】 前記の分散した親水コロイド溶液を濾過して、浄化された
ベータグルカン溶液を提供する工程をさらに含む、請求項９に記載の方法。 - 【請求項１１】 前記生物学的両性イオン緩衝液がＮ−［２−ヒドロキシエ
チルピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］（ＨＥＰＥＳ）、３−［Ｎ−
モルホリノ］プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル
］メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロ
キシエチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、［カルバモイルメチル
］−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス［
２−エタンスルホン酸］（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ−［２−アセトアミド］−２−イミ
ノ二酢酸（ＡＤＡ）および３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ
］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）からなる群から選択され
る生物学的緩衝剤を含む、請求項９に記載の方法。 - 【請求項１２】 前記生物学的両性イオン緩衝溶液がＨＥＰＥＳ緩衝剤を含
む、請求項１１に記載の方法。 - 【請求項１３】 前記ＨＥＰＥＳ緩衝剤が、約２．５ｍＭから約５ｍＭの濃
度で存在する、請求項１２に記載の方法。 - 【請求項１４】 前記穀類配合物がオート麦配合物である、請求項９に記載
の方法。 - 【請求項１５】 前記生物学的両性イオン緩衝溶液がさらに保存剤を含む、
請求項９に記載の方法。 - 【請求項１６】 前記生物学的両性イオン緩衝溶液のｐＨが約７．２である
、請求項１５に記載の方法。 - 【請求項１７】 前記ベータグルカン溶液が約５４℃から約１００℃の温度
に加熱される、請求項１０に記載の方法。 - 【請求項１８】 オート麦ベータグルカン配合物からオート麦ベータグルカ
ンを精製する方法であって、 （ａ）前記配合物を、保存剤および約２．５ｍＭから約５ｍＭの濃度のＨＥＰＥ
Ｓ緩衝剤を含み、約７．２のｐＨを有するＨＥＰＥＳ緩衝液と混合し、ベータグ
ルカン溶液を形成する工程； （ｂ）前記ベータグルカン溶液を約５４℃から約１００℃の温度に加熱し、分散
した親水コロイド溶液を製造する工程；および （ｃ）前記の分散した親水コロイド溶液を濾過して、浄化されたベータグルカン
溶液を提供する工程を含む方法。 - 【請求項１９】 前記ベータグルカン溶液が、約６０℃から約６５℃の温度
に加熱される、請求項１８に記載の方法。 - 【請求項２０】 ベータグルカン含有穀類配合物からベータグルカンを精製
する方法であって、 （ａ）前記穀類配合物中のベータグルカンを水和して、ベータグルカン溶液を製
造する工程； （ｂ）前記ベータグルカン溶液を加熱し、前記ベータグルカン溶液中のベータグ
ルカンを溶解して、分散したベータグルカン溶液を提供する工程； （ｃ）分散したベータグルカン溶液を濾過して、浄化されたベータグルカン溶液
を提供する工程；および （ｄ）生物学的両性イオン緩衝液を前記の浄化されたベータグルカン溶液に加え
、安定化ベータグルカン溶液を提供する工程を含む方法。 - 【請求項２１】 前記生物学的両性イオン緩衝液がＮ−［２−ヒドロキシエ
チルピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］（ＨＥＰＥＳ）、３−［Ｎ−
モルホリノ］プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル
］メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロ
キシエチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、［カルバモイルメチル
］−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス［
２−エタンスルホン酸］（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ−［２−アセトアミド］−２−イミ
ノ二酢酸（ＡＤＡ）および３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ
］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）からなる群から選択され
る生物学的緩衝剤を含む、請求項２０に記載の方法。 - 【請求項２２】 前記生物学的両性イオン緩衝溶液がＨＥＰＥＳ緩衝剤を含
む、請求項２１に記載の方法。 - 【請求項２３】 前記ＨＥＰＥＳ緩衝剤が、約２．５ｍＭから約５ｍＭの濃
度で存在する、請求項２２に記載の方法。 - 【請求項２４】 前記穀類配合物がオート麦配合物である、請求項２０に記
載の方法。 - 【請求項２５】 前記生物学的両性イオン緩衝溶液がさらに保存剤を含む、
請求項２０に記載の方法。 - 【請求項２６】 前記生物学的両性イオン緩衝溶液のｐＨが約７．２である
、請求項２５に記載の方法。 - 【請求項２７】 前記ベータグルカン溶液が約７５℃から約８５℃の温度に
加熱される、請求項１０に記載の方法。 - 【請求項２８】 オート麦ベータグルカン配合物からオート麦ベータグルカ
ンを精製する方法であって、 （ａ）前記オート麦ベータグルカン配合物中のベータグルカンを水和してベータ
グルカン溶液を製造する工程； （ｂ）前記ベータグルカン溶液を約７５℃から約８５℃の温度に加熱して、前記
ベータグルカン溶液中のベータグルカンを溶解し、分散したベータグルカン溶液
を提供する工程； （ｃ）分散したベータグルカン溶液を濾過して、浄化されたベータグルカン溶液
を提供する工程；および （ｄ）保存剤および約２．５ｍＭから約５ｍＭの濃度のＨＥＰＥＳ緩衝剤を含み
、約７．２のｐＨを有するＨＥＰＥＳ緩衝液を浄化されたベータグルカン溶液に
加え、安定化ベータグルカン溶液を提供する工程を含む方法。 - 【請求項２９】 ＨＥＰＥＳ緩衝液を加える前に、浄化されたベータグルカ
ン溶液を濃縮して０．０１から４％ベータグルカン：溶媒（ｗ／ｗ）の範囲の濃
縮溶液を提供する工程をさらに含む、請求項２８に記載の方法。 - 【請求項３０】 ベータグルカン溶液からのベータグルカンの沈殿を抑制す
る方法であって、ベータグルカン溶液が約１０℃以下の温度に冷却されるときベ
ータグルカン溶液からのベータグルカンの沈殿を抑制するに十分な条件下で、ベ
ータグルカン含有配合物を生物学的両性イオン緩衝液と混合しベータグルカン溶
液を生成する工程を含む方法。 - 【請求項３１】 前記生物学的両性イオン緩衝液がＮ−［２−ヒドロキシエ
チルピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］（ＨＥＰＥＳ）、３−［Ｎ−
モルホリノ］プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル
］メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロ
キシエチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、［カルバモイルメチル
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］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）からなる群から選択され
る生物学的緩衝剤を含む、請求項３０に記載の方法。
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