JP2002513937A - ガンの診断および評価の方法 - Google Patents
ガンの診断および評価の方法Info
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- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
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- Y10S977/902—Specified use of nanostructure
- Y10S977/904—Specified use of nanostructure for medical, immunological, body treatment, or diagnosis
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Abstract
(57)【要約】
前立腺ガン、卵巣ガン、または乳ガンのようなガン、ならびに白血病を診断するための方法が、提供される。このような方法は、結合因子（例えば、抗体、またはＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンに特異的に結合する、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列、またはＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンをコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチド）を使用し得る。ガンの進行をモニターするため、およびガンの転移の可能性を評価するための方法もまた、提供される。
Description
【０００１】 （技術分野） 本発明は、一般的には、ガンの診断のための方法に関し、そしてより詳細には
、乳ガン、卵巣ガン、および前立腺ガンのようなガン、ならびに白血病の転移の
可能性を診断および決定するための、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの
発現を検出する化合物の使用に関する。
、乳ガン、卵巣ガン、および前立腺ガンのようなガン、ならびに白血病の転移の
可能性を診断および決定するための、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの
発現を検出する化合物の使用に関する。
【０００２】 （発明の背景） ガンは、全世界にわたって有意な健康上の問題である。ガンの検出および治療
においては進歩しているが、現在は利用できる予防または処置のためのワクチン
または他の普遍的に良好な方法はない。例えば、女性においては、乳ガンおよび
卵巣ガンは、米国および他の国において一般的である。特に、乳ガンは、女性に
おけるガンに関連する第２の死亡原因のままである。米国においては、毎年１８
０，０００を超える女性が罹患している。北アメリカにおいては、女性について
の乳ガンの生存率は、現在８人に１人である。現在の疾患の管理は、初期の診断
（慣用的な乳房スクリーニング手順による）および積極的な処置（これは、外科
手術、放射線治療、化学療法、およびホルモン療法のような種々の処置の１つ以
上を含み得る）の組み合わせによる。特定の乳ガンの処置の経過は、しばしば、
種々の徴候のパラメーター（特異的な腫瘍マーカーの分析を含む）に基づいて選
択される。例えば、Ｐｏｒｔｅｒ−ＪｏｒｄａｎおよびＬｉｐｐｍａｎ、Ｂｒｅ
ａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ ８：７３−１００、１９９４を参照のこと。しかし、ガ
ンの転移の可能性を評価することは困難なままであり、そして乳ガンの患者にお
いて観察される高い死亡率は、疾患の診断および管理において改良が必要とされ
ていることを示す。
においては進歩しているが、現在は利用できる予防または処置のためのワクチン
または他の普遍的に良好な方法はない。例えば、女性においては、乳ガンおよび
卵巣ガンは、米国および他の国において一般的である。特に、乳ガンは、女性に
おけるガンに関連する第２の死亡原因のままである。米国においては、毎年１８
０，０００を超える女性が罹患している。北アメリカにおいては、女性について
の乳ガンの生存率は、現在８人に１人である。現在の疾患の管理は、初期の診断
（慣用的な乳房スクリーニング手順による）および積極的な処置（これは、外科
手術、放射線治療、化学療法、およびホルモン療法のような種々の処置の１つ以
上を含み得る）の組み合わせによる。特定の乳ガンの処置の経過は、しばしば、
種々の徴候のパラメーター（特異的な腫瘍マーカーの分析を含む）に基づいて選
択される。例えば、Ｐｏｒｔｅｒ−ＪｏｒｄａｎおよびＬｉｐｐｍａｎ、Ｂｒｅ
ａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ ８：７３−１００、１９９４を参照のこと。しかし、ガ
ンの転移の可能性を評価することは困難なままであり、そして乳ガンの患者にお
いて観察される高い死亡率は、疾患の診断および管理において改良が必要とされ
ていることを示す。
【０００３】 前立腺ガンは、男性におけるガンの最も一般的な形態であり、５０歳以上の男
性において３０％の発病率が推定される。ヒトの前立腺ガンは、骨に転移する傾
向を有する。処置は、一般的には、外科手術および／または放射線治療に基づく
が、これらの方法は、症例の有意な割合においては無効であり、そしてこの一般
的な疾患は、現在、米国においては男性におけるガンの死亡の第２の原因となっ
ている。疾患の処置を改良するために、初期の診断が重要であるが、前立腺ガン
は、正確に検出することが依然として困難である。２つの前立腺特異的タンパク
質である、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）および前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡ
Ｐ）が診断のために使用されているが、このようなタンパク質を使用する技術は
、必ずしも完璧な診断情報を提供をするわけではない。例えば、ＰＳＡの測定値
は、前立腺ガンの転移のレベルは示さない。
性において３０％の発病率が推定される。ヒトの前立腺ガンは、骨に転移する傾
向を有する。処置は、一般的には、外科手術および／または放射線治療に基づく
が、これらの方法は、症例の有意な割合においては無効であり、そしてこの一般
的な疾患は、現在、米国においては男性におけるガンの死亡の第２の原因となっ
ている。疾患の処置を改良するために、初期の診断が重要であるが、前立腺ガン
は、正確に検出することが依然として困難である。２つの前立腺特異的タンパク
質である、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）および前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡ
Ｐ）が診断のために使用されているが、このようなタンパク質を使用する技術は
、必ずしも完璧な診断情報を提供をするわけではない。例えば、ＰＳＡの測定値
は、前立腺ガンの転移のレベルは示さない。
【０００４】 前立腺および他のガンのさらなるマーカーが、発見されつづけているが、これ
らのガンの転移の可能性を評価するための確実な方法は、現在は存在しない。ガ
ンの処置、および生存性を改良するためには、より正確な診断を可能にする技術
が、必要とされている。本発明は、これらの要件を満たし、そして他の関連する
利点をさらに提供する。
らのガンの転移の可能性を評価するための確実な方法は、現在は存在しない。ガ
ンの処置、および生存性を改良するためには、より正確な診断を可能にする技術
が、必要とされている。本発明は、これらの要件を満たし、そして他の関連する
利点をさらに提供する。
【０００５】 （発明の要旨） 簡潔に記載すると、本発明は、乳ガン、卵巣ガン、および前立腺ガンのような
ガン、ならびに白血病を診断するための、組成物および方法を提供する。本明細
書中で提供される特定の方法は、結合因子（例えば、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ
−カドヘリンを特異的に認識する抗体およびそのフラグメント）を使用する。他
の方法は、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするポリヌクレオチ
ドにハイブリダイズし得る１つ以上のポリヌクレオチドを使用する。
ガン、ならびに白血病を診断するための、組成物および方法を提供する。本明細
書中で提供される特定の方法は、結合因子（例えば、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ
−カドヘリンを特異的に認識する抗体およびそのフラグメント）を使用する。他
の方法は、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするポリヌクレオチ
ドにハイブリダイズし得る１つ以上のポリヌクレオチドを使用する。
【０００６】 特定の局面においては、本発明は、患者におけるガンの存在または非存在を決
定するための方法を提供する。この方法は、以下の工程を包含する：（ａ）患者
から得た生物学的サンプルを、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンに特異的
に結合する結合因子と接触させる工程；ならびに（ｂ）予め決定されたカットオ
フ値と比較して、結合因子に対して結合するポリペプチドの量をサンプル中で検
出する工程、およびそれから患者におけるガンの存在または非存在を決定する工
程。
定するための方法を提供する。この方法は、以下の工程を包含する：（ａ）患者
から得た生物学的サンプルを、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンに特異的
に結合する結合因子と接触させる工程；ならびに（ｂ）予め決定されたカットオ
フ値と比較して、結合因子に対して結合するポリペプチドの量をサンプル中で検
出する工程、およびそれから患者におけるガンの存在または非存在を決定する工
程。
【０００７】 さらなる局面においては、患者におけるガンの進行をモニターするための方法
が、提供される。この方法は、以下の工程を包含する：（ａ）第１の時点で患者
から得た生物学的サンプルを、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンに特異的
に結合する結合因子と接触させる工程；（ｂ）結合因子に結合するポリペプチド
の量をサンプル中で検出する工程；（ｃ）続く時点で患者から得た生物学的サン
プルを使用して、工程（ａ）および（ｂ）を繰り返す工程；ならびに（ｄ）工程
（ｃ）において検出されたポリペプチドの量を工程（ｂ）において検出された量
に対して比較する工程、およびそれから患者におけるガンの進行をモニターする
工程。
が、提供される。この方法は、以下の工程を包含する：（ａ）第１の時点で患者
から得た生物学的サンプルを、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンに特異的
に結合する結合因子と接触させる工程；（ｂ）結合因子に結合するポリペプチド
の量をサンプル中で検出する工程；（ｃ）続く時点で患者から得た生物学的サン
プルを使用して、工程（ａ）および（ｂ）を繰り返す工程；ならびに（ｄ）工程
（ｃ）において検出されたポリペプチドの量を工程（ｂ）において検出された量
に対して比較する工程、およびそれから患者におけるガンの進行をモニターする
工程。
【０００８】 他の局面においては、患者におけるガンの転移の可能性を評価するための方法
が提供される。この方法は、以下の工程を包含する：（ａ）ガンを罹患している
患者から得た生物学的サンプルを、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンに特
異的に結合する結合因子と接触させる工程；ならびに（ｂ）予め決定されたカッ
トオフ値と比較して、結合因子に対して結合するポリペプチドの量をサンプル中
で検出する工程、およびそれから患者におけるガンの転移の可能性を評価する工
程。
が提供される。この方法は、以下の工程を包含する：（ａ）ガンを罹患している
患者から得た生物学的サンプルを、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンに特
異的に結合する結合因子と接触させる工程；ならびに（ｂ）予め決定されたカッ
トオフ値と比較して、結合因子に対して結合するポリペプチドの量をサンプル中
で検出する工程、およびそれから患者におけるガンの転移の可能性を評価する工
程。
【０００９】 患者におけるガンの存在または非存在を決定するためのキットもまた、提供さ
れる。このようなキットは、以下を含み得る：（ａ）ＯＢ−カドヘリンまたはＮ
−カドヘリンのＣＡＲ配列に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメ
ント、および（ｂ）検出試薬。
れる。このようなキットは、以下を含み得る：（ａ）ＯＢ−カドヘリンまたはＮ
−カドヘリンのＣＡＲ配列に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメ
ント、および（ｂ）検出試薬。
【００１０】 本発明はさらに、患者における転移性のガンの存在または非存在を決定するた
めの方法を提供する。この方法は、以下の工程を包含する：（ａ）患者から得た
生物学的サンプルを、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするポリ
ヌクレオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドと接触させる工程；なら
びに（ｂ）予め決定されたカットオフ値と比較して、オリゴヌクレオチドに対し
てハイブリダイズするポリヌクレオチドのレベルをサンプル中で検出する工程、
およびそれから患者における転移性のガンの存在または非存在を決定する工程。
特定の実施態様においては、ｍＲＮＡの量が、例えば、ＯＢ−カドヘリンもしく
はＮ−カドヘリン、またはそのようなポリヌクレオチドの相補物をコードするポ
リヌクレオチドにハイブリダイズする、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドプ
ライマーを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応によって検出される。他の実施態様
においては、ｍＲＮＡの量が、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリン、また
はそのようなポリヌクレオチドの相補物をコードするポリヌクレオチドにハイブ
リダイズする、オリゴヌクレオチドプローブを使用するハイブリダイゼーション
技術を使用して、検出される。好ましい実施態様においては、少なくとも１つの
オリゴヌクレオチドプライマーは、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンを
コードするＤＮＡ分子の少なくとも約１０個の連続するヌクレオチドを含む。
めの方法を提供する。この方法は、以下の工程を包含する：（ａ）患者から得た
生物学的サンプルを、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするポリ
ヌクレオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドと接触させる工程；なら
びに（ｂ）予め決定されたカットオフ値と比較して、オリゴヌクレオチドに対し
てハイブリダイズするポリヌクレオチドのレベルをサンプル中で検出する工程、
およびそれから患者における転移性のガンの存在または非存在を決定する工程。
特定の実施態様においては、ｍＲＮＡの量が、例えば、ＯＢ−カドヘリンもしく
はＮ−カドヘリン、またはそのようなポリヌクレオチドの相補物をコードするポ
リヌクレオチドにハイブリダイズする、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドプ
ライマーを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応によって検出される。他の実施態様
においては、ｍＲＮＡの量が、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリン、また
はそのようなポリヌクレオチドの相補物をコードするポリヌクレオチドにハイブ
リダイズする、オリゴヌクレオチドプローブを使用するハイブリダイゼーション
技術を使用して、検出される。好ましい実施態様においては、少なくとも１つの
オリゴヌクレオチドプライマーは、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンを
コードするＤＮＡ分子の少なくとも約１０個の連続するヌクレオチドを含む。
【００１１】 関連する局面においては、患者におけるガンの進行をモニターするための方法
が、提供される。この方法は、以下の工程を包含する：（ａ）患者から得た生物
学的サンプルを、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするポリヌク
レオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドと接触させる工程；（ｂ）オ
リゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドの量をサンプル中で検
出する工程；（ｃ）続く時点で患者から得た生物学的サンプルを使用して、工程
（ａ）および（ｂ）を繰り返す工程；ならびに（ｄ）工程（ｃ）において検出さ
れたポリヌクレオチドの量を工程（ｂ）において検出された量と比較する工程、
およびそれから患者におけるガンの進行をモニターする工程。
が、提供される。この方法は、以下の工程を包含する：（ａ）患者から得た生物
学的サンプルを、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするポリヌク
レオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドと接触させる工程；（ｂ）オ
リゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドの量をサンプル中で検
出する工程；（ｃ）続く時点で患者から得た生物学的サンプルを使用して、工程
（ａ）および（ｂ）を繰り返す工程；ならびに（ｄ）工程（ｃ）において検出さ
れたポリヌクレオチドの量を工程（ｂ）において検出された量と比較する工程、
およびそれから患者におけるガンの進行をモニターする工程。
【００１２】 他の局面においては、患者におけるガンの転移の可能性を評価するための方法
が提供される。この方法は、以下の工程を包含する：（ａ）患者から得た生物学
的サンプルを、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするポリヌクレ
オチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドと接触させる工程；ならびに（
ｂ）予め決定されたカットオフ値と比較して、オリゴヌクレオチドに対してハイ
ブリダイズするポリヌクレオチドの量をサンプル中で検出する工程、およびそれ
から患者におけるガンの転移の可能性を評価する工程。
が提供される。この方法は、以下の工程を包含する：（ａ）患者から得た生物学
的サンプルを、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするポリヌクレ
オチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドと接触させる工程；ならびに（
ｂ）予め決定されたカットオフ値と比較して、オリゴヌクレオチドに対してハイ
ブリダイズするポリヌクレオチドの量をサンプル中で検出する工程、およびそれ
から患者におけるガンの転移の可能性を評価する工程。
【００１３】 関連する局面においては、上記のオリゴヌクレオチドプローブまたはプライマ
ーを含有する診断キットが、提供される。
ーを含有する診断キットが、提供される。
【００１４】 本発明のこれらのおよび他の局面は、以下の詳細な説明および添付の図面を参
照して、明らかとなる。本明細書中で開示される全ての参考文献は、それぞれが
個々に引用されるように、それらの全体が本明細書中で参考として援用される。
照して、明らかとなる。本明細書中で開示される全ての参考文献は、それぞれが
個々に引用されるように、それらの全体が本明細書中で参考として援用される。
【００１５】 （発明の詳細な説明） 上記のように、本発明は、患者におけるガンを検出および評価するための方法
を提供する。本明細書中で提供される方法は、一部、ＯＢ−カドヘリンおよびＮ
−カドヘリンが転移性のガン腫細胞によって発現されるが、高度に分化したあま
り侵襲性ではないガン腫によっては発現されないという発見に、基づく。従って
、転移性のガンは、ＯＢ−カドヘリンおよび／またはＮ−カドヘリンの発現を評
価する方法を使用して、検出およびモニターされ得る。本明細書中で提供される
特定の方法は、結合因子（例えば、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの細
胞外ドメインまたはその一部を特異的に認識する抗体およびそのフラグメント）
を使用する。他の方法は、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンをコードす
るポリヌクレオチド、またはこのようなポリヌクレオチドの相補物である配列に
ハイブリダイズする、１つ以上のポリヌクレオチドを使用する。一般的には、本
明細書中で提供される方法においては、患者から得られた生物学的サンプルは、
代表的には、サンプル中の、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンのレベル
、またはＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンをコードするポリヌクレオチ
ドのレベルの決定を可能にするような、結合因子またはポリヌクレオチドと接触
させられる。この決定は、転移性のガンの存在または非存在の指標であり、そし
てガンの転移の可能性を評価するため、およびガンの進行をモニターするために
使用され得る。
を提供する。本明細書中で提供される方法は、一部、ＯＢ−カドヘリンおよびＮ
−カドヘリンが転移性のガン腫細胞によって発現されるが、高度に分化したあま
り侵襲性ではないガン腫によっては発現されないという発見に、基づく。従って
、転移性のガンは、ＯＢ−カドヘリンおよび／またはＮ−カドヘリンの発現を評
価する方法を使用して、検出およびモニターされ得る。本明細書中で提供される
特定の方法は、結合因子（例えば、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの細
胞外ドメインまたはその一部を特異的に認識する抗体およびそのフラグメント）
を使用する。他の方法は、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンをコードす
るポリヌクレオチド、またはこのようなポリヌクレオチドの相補物である配列に
ハイブリダイズする、１つ以上のポリヌクレオチドを使用する。一般的には、本
明細書中で提供される方法においては、患者から得られた生物学的サンプルは、
代表的には、サンプル中の、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンのレベル
、またはＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンをコードするポリヌクレオチ
ドのレベルの決定を可能にするような、結合因子またはポリヌクレオチドと接触
させられる。この決定は、転移性のガンの存在または非存在の指標であり、そし
てガンの転移の可能性を評価するため、およびガンの進行をモニターするために
使用され得る。
【００１６】 （ＯＢ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリン） 本明細書中で使用される場合は、用語「ＯＢ―カドヘリン」および「Ｎ−カド
ヘリン」は、ヒトまたはヒト以外の個体によって発現され、そして既知のＯＢ−
カドヘリンまたはＮ−カドヘリンに対して実質的に相同である、細胞接着分子を
いう（ＯＢ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリンは例えば、Ｍｕｎｒｏら、Ｃｅｌ
ｌ Ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｎｄ Ｉｎｖａｓｉｏｎ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅ
ｔａｓｔａｓｉｓ，Ｐ．Ｂｒｏｄｔ編、１７−３４頁、ＲＧ Ｌａｎｄｅｓ Ｃ
ｏ．，Ａｕｓｔｉｎ ＴＸ、１９９６中で議論されている；ＯＢ−カドヘリンは
また、Ｇｅｔｓｉｏｓら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｄｙｎａｍｉｃｓ ２
１１：２３８−２４７，１９９８；Ｓｉｍｏｎｎｅａｕら、Ｃｅｌｌ Ａｄｈｅ
ｓｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ３：１１５−１３０、１９９
５；Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６
９：１２０９２−１２０９８、１９９４によって記載されている）。特定のＯＢ
−カドヘリン分子は、図２に提供される配列を含み、そして特定のＮ−カドヘリ
ン分子は、図３に提供される配列を含む。しかし、本発明はまた、他の生物に由
来するＯＢ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリンの配列の使用をも意図する。この
ようなＯＢ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリンの配列は一般的には、本明細書中
で提供されるアッセイを使用して、本明細書中で提供される配列に対する配列類
似性に基づいて、そしてＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリン活性の存在に基
づいて同定され得る。
ヘリン」は、ヒトまたはヒト以外の個体によって発現され、そして既知のＯＢ−
カドヘリンまたはＮ−カドヘリンに対して実質的に相同である、細胞接着分子を
いう（ＯＢ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリンは例えば、Ｍｕｎｒｏら、Ｃｅｌ
ｌ Ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｎｄ Ｉｎｖａｓｉｏｎ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅ
ｔａｓｔａｓｉｓ，Ｐ．Ｂｒｏｄｔ編、１７−３４頁、ＲＧ Ｌａｎｄｅｓ Ｃ
ｏ．，Ａｕｓｔｉｎ ＴＸ、１９９６中で議論されている；ＯＢ−カドヘリンは
また、Ｇｅｔｓｉｏｓら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｄｙｎａｍｉｃｓ ２
１１：２３８−２４７，１９９８；Ｓｉｍｏｎｎｅａｕら、Ｃｅｌｌ Ａｄｈｅ
ｓｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ３：１１５−１３０、１９９
５；Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６
９：１２０９２−１２０９８、１９９４によって記載されている）。特定のＯＢ
−カドヘリン分子は、図２に提供される配列を含み、そして特定のＮ−カドヘリ
ン分子は、図３に提供される配列を含む。しかし、本発明はまた、他の生物に由
来するＯＢ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリンの配列の使用をも意図する。この
ようなＯＢ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリンの配列は一般的には、本明細書中
で提供されるアッセイを使用して、本明細書中で提供される配列に対する配列類
似性に基づいて、そしてＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリン活性の存在に基
づいて同定され得る。
【００１７】 本明細書中で記載される結合因子を生成および試験するためには、ＯＢ−カド
ヘリンまたはＮ−カドヘリンの一部を含むポリペプチドが使用され得る。このよ
うなポリペプチドはまた、それらが細胞接着認識配列（ＣＡＲ配列）を含む場合
には、それ自体が結合因子として使用され得る。好ましい部分は、細胞性ドメイ
ンおよびその一部（例えば、ＣＡＲ配列を含有する部分）である。ＯＢ−カドヘ
リンまたはＮ−カドヘリンの細胞外ドメインは、一般的には、本明細書中で提供
される細胞外ドメイン配列に対する相同性に基づいて、そして周知の技術（例え
ば、親水性配列、抗体によって認識される領域、トリプシンおよび／またはグリ
コシル化モチーフＡｓｎ−Ｘ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒを有する潜在的なグリコシル化部
位によって切断される領域の１つ以上の存在）を使用して同定され得る。ポリペ
プチドは、完全な細胞外ドメインまたはその一部を含み得、そしてＯＢ−カドヘ
リンもしくはＮ−カドヘリン配列の全体から構成され得るか、またはさらなるペ
プチドおよび／もしくは非ペプチド領域をさらに含み得る。さらなるペプチド領
域は、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンに由来し得、そして／または異
種であり得る。このようなペプチドは、直鎖状であり得るか、または、骨格対骨
格、側鎖対骨格、もしくは側鎖対側鎖であり得る分子内結合を介して環化された
環状のペプチドであり得る。
ヘリンまたはＮ−カドヘリンの一部を含むポリペプチドが使用され得る。このよ
うなポリペプチドはまた、それらが細胞接着認識配列（ＣＡＲ配列）を含む場合
には、それ自体が結合因子として使用され得る。好ましい部分は、細胞性ドメイ
ンおよびその一部（例えば、ＣＡＲ配列を含有する部分）である。ＯＢ−カドヘ
リンまたはＮ−カドヘリンの細胞外ドメインは、一般的には、本明細書中で提供
される細胞外ドメイン配列に対する相同性に基づいて、そして周知の技術（例え
ば、親水性配列、抗体によって認識される領域、トリプシンおよび／またはグリ
コシル化モチーフＡｓｎ−Ｘ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒを有する潜在的なグリコシル化部
位によって切断される領域の１つ以上の存在）を使用して同定され得る。ポリペ
プチドは、完全な細胞外ドメインまたはその一部を含み得、そしてＯＢ−カドヘ
リンもしくはＮ−カドヘリン配列の全体から構成され得るか、またはさらなるペ
プチドおよび／もしくは非ペプチド領域をさらに含み得る。さらなるペプチド領
域は、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンに由来し得、そして／または異
種であり得る。このようなペプチドは、直鎖状であり得るか、または、骨格対骨
格、側鎖対骨格、もしくは側鎖対側鎖であり得る分子内結合を介して環化された
環状のペプチドであり得る。
【００１８】 ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリン配列を含有するポリペプチドは、化学
合成および組換えＤＮＡ方法を含む、当該分野で周知の方法によって合成され得
る。約５０残基の長さまでのペプチドについては、液相もしくは固相ペプチド合
成技術を使用する化学合成が実施され得る。ここでは、ペプチドの連結は、１つ
のアミノ酸のα−アミノ基の、他のアミノ酸のα−カルボキシ基との、水分子の
脱離を伴う直接的な縮合を通じて生じる。直接的な縮合によるペプチド結合の合
成は、上記で明確に記載されるように、第１のアミノ酸のアミノ基の反応性特徴
と第２のアミノ酸のカルボキシル基の反応性特徴の抑制を必要とする。マスクさ
れている置換基は、不安定なペプチド分子の崩壊を誘導することはなく、それら
の容易な除去を可能にしなければならない。
合成および組換えＤＮＡ方法を含む、当該分野で周知の方法によって合成され得
る。約５０残基の長さまでのペプチドについては、液相もしくは固相ペプチド合
成技術を使用する化学合成が実施され得る。ここでは、ペプチドの連結は、１つ
のアミノ酸のα−アミノ基の、他のアミノ酸のα−カルボキシ基との、水分子の
脱離を伴う直接的な縮合を通じて生じる。直接的な縮合によるペプチド結合の合
成は、上記で明確に記載されるように、第１のアミノ酸のアミノ基の反応性特徴
と第２のアミノ酸のカルボキシル基の反応性特徴の抑制を必要とする。マスクさ
れている置換基は、不安定なペプチド分子の崩壊を誘導することはなく、それら
の容易な除去を可能にしなければならない。
【００１９】 液相合成においては、広範な種々のカップリング方法および保護基が使用され
得る（ＧｒｏｓｓおよびＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ
：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ」第１巻〜第４巻（
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９７９）；ＢｏｄａｎｓｋｙおよびＢｏｄａ
ｎｓｋｙ、「Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ」第２版（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、１９９４）を参照のこと）
。さらに、中間体の精製および直線的なスケールアップが可能である。液相合成
が、主鎖および側鎖保護基の縮合、ならびに活性化方法を必要とすることは、当
業者には明らかである。さらに、注意深いセグメントの選択が、セグメントの縮
合の間のラセミ化を最少にするためには必要である。溶解度の考慮もまた、１つ
の要素である。
得る（ＧｒｏｓｓおよびＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ
：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ」第１巻〜第４巻（
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９７９）；ＢｏｄａｎｓｋｙおよびＢｏｄａ
ｎｓｋｙ、「Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ」第２版（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、１９９４）を参照のこと）
。さらに、中間体の精製および直線的なスケールアップが可能である。液相合成
が、主鎖および側鎖保護基の縮合、ならびに活性化方法を必要とすることは、当
業者には明らかである。さらに、注意深いセグメントの選択が、セグメントの縮
合の間のラセミ化を最少にするためには必要である。溶解度の考慮もまた、１つ
の要素である。
【００２０】 固相ペプチド合成は、有機合成の間の支持のために、不溶性のポリマーを使用
する。ポリマーによって支持されたペプチド鎖は、中間の工程での面倒な精製の
代わりに、簡単な洗浄および濾過工程の使用を可能にする。固相ペプチド合成は
、一般的には、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：
２１４９、１９６３の方法に従って行われ得る。この方法は、保護されたアミノ
酸を使用して樹脂支持体上に直鎖状のペプチド鎖を組み立てる工程を包含する。
固相ペプチド合成は、代表的には、ＢｏｃまたはＦｍｏｃストラテジーのいずれ
かを利用する。Ｂｏｃストラテジーは、１％の架橋されたポリスチレン樹脂を使
用する。α−アミノ官能基についての標準的な保護基は、ｔｅｒｔ−ブチルオキ
シカルボニル（Ｂｏｃ）基である。この基は、例えば、２５％のトリフルオロ酢
酸（ＴＦＡ）のような強酸のうすい溶液を用いて除去され得る。次のＢｏｃ−ア
ミノ酸は、代表的には、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を使用して
アミノアシル樹脂に対してカップリングされる。組立ての完了後、ペプチド−樹
脂は、無水ＨＦで処理されて、ベンジルエステル結合を除去され、そして遊離の
ペプチドが放出される。側鎖官能基は、通常は、ベンジルに由来するブロッキン
グ基による合成の間にブロックされ、これもまたＨＦによって切断される。次い
で、遊離のペプチドは、適切な溶媒を用いて樹脂から抽出され、精製され、そし
て特徴付けられる。新しく合成されたペプチドは、例えば、ゲル濾過、ＨＰＬＣ
、分配クロマトグラフィー、および／またはイオン交換クロマトグラフィーによ
って精製され得、そして例えば、質量スペクトル分析またはアミノ酸配列分析に
よって特徴付けられ得る。Ｂｏｃストラテジーにおいては、Ｃ末端がアミド化さ
れたペプチドは、ベンズヒドリルアミンまたはメチルベンズヒドリルアミン樹脂
を使用して得ることができ、これらは、ＨＦでの切断の際に直接ペプチドアミド
を生じる。
する。ポリマーによって支持されたペプチド鎖は、中間の工程での面倒な精製の
代わりに、簡単な洗浄および濾過工程の使用を可能にする。固相ペプチド合成は
、一般的には、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：
２１４９、１９６３の方法に従って行われ得る。この方法は、保護されたアミノ
酸を使用して樹脂支持体上に直鎖状のペプチド鎖を組み立てる工程を包含する。
固相ペプチド合成は、代表的には、ＢｏｃまたはＦｍｏｃストラテジーのいずれ
かを利用する。Ｂｏｃストラテジーは、１％の架橋されたポリスチレン樹脂を使
用する。α−アミノ官能基についての標準的な保護基は、ｔｅｒｔ−ブチルオキ
シカルボニル（Ｂｏｃ）基である。この基は、例えば、２５％のトリフルオロ酢
酸（ＴＦＡ）のような強酸のうすい溶液を用いて除去され得る。次のＢｏｃ−ア
ミノ酸は、代表的には、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を使用して
アミノアシル樹脂に対してカップリングされる。組立ての完了後、ペプチド−樹
脂は、無水ＨＦで処理されて、ベンジルエステル結合を除去され、そして遊離の
ペプチドが放出される。側鎖官能基は、通常は、ベンジルに由来するブロッキン
グ基による合成の間にブロックされ、これもまたＨＦによって切断される。次い
で、遊離のペプチドは、適切な溶媒を用いて樹脂から抽出され、精製され、そし
て特徴付けられる。新しく合成されたペプチドは、例えば、ゲル濾過、ＨＰＬＣ
、分配クロマトグラフィー、および／またはイオン交換クロマトグラフィーによ
って精製され得、そして例えば、質量スペクトル分析またはアミノ酸配列分析に
よって特徴付けられ得る。Ｂｏｃストラテジーにおいては、Ｃ末端がアミド化さ
れたペプチドは、ベンズヒドリルアミンまたはメチルベンズヒドリルアミン樹脂
を使用して得ることができ、これらは、ＨＦでの切断の際に直接ペプチドアミド
を生じる。
【００２１】 上記で議論される手順においては、側鎖ブロッキング基およびペプチド−樹脂
結合の選択性は、酸溶解性切断の速度の差異に依存する。オルトガノールシステ
ムが導入されており、ここで、側鎖ブロッキング基およびペプチド樹脂結合は、
合成の各工程でα−保護基を除去するために使用される試薬に対して完全に安定
である。これらの最も一般的な方法は、９−フルオレニルメチルオキシカルボニ
ル（Ｆｍｏｃ）アプローチを含む。この方法においては、側鎖保護基およびペプ
チド−樹脂結合は、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ基を切断するために使用される第二アミン
に対して完全に安定である。側鎖の保護およびペプチド−樹脂結合は、穏やかな
酸溶解によって切断される。塩基との繰り返される接触によって、Ｆｍｏｃ化学
については適切ではないＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ樹脂が作製され、そして樹脂に連
結したｐ−アルコキシベンジルエステルが、一般的には使用される。脱保護およ
び切断は、一般的には、ＴＦＡを使用して達成される。
結合の選択性は、酸溶解性切断の速度の差異に依存する。オルトガノールシステ
ムが導入されており、ここで、側鎖ブロッキング基およびペプチド樹脂結合は、
合成の各工程でα−保護基を除去するために使用される試薬に対して完全に安定
である。これらの最も一般的な方法は、９−フルオレニルメチルオキシカルボニ
ル（Ｆｍｏｃ）アプローチを含む。この方法においては、側鎖保護基およびペプ
チド−樹脂結合は、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ基を切断するために使用される第二アミン
に対して完全に安定である。側鎖の保護およびペプチド−樹脂結合は、穏やかな
酸溶解によって切断される。塩基との繰り返される接触によって、Ｆｍｏｃ化学
については適切ではないＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ樹脂が作製され、そして樹脂に連
結したｐ−アルコキシベンジルエステルが、一般的には使用される。脱保護およ
び切断は、一般的には、ＴＦＡを使用して達成される。
【００２２】 当業者は、固相合成においては、脱保護およびカップリング反応は、完全に進
行しなければならず、そして側鎖ブロッキング基は、合成全体を通じて安定でな
ければならないことを、認識している。さらに、固相合成は、一般的には、ペプ
チドが小さいスケールで作製される場合に、もっとも適切である。
行しなければならず、そして側鎖ブロッキング基は、合成全体を通じて安定でな
ければならないことを、認識している。さらに、固相合成は、一般的には、ペプ
チドが小さいスケールで作製される場合に、もっとも適切である。
【００２３】 所望される場合は、Ｎ末端のアセチル化は、樹脂からの切断の前に、無水酢酸
と最終的なペプチドとを反応させることによって達成され得る。Ｃ−アミド化は
、Ｂｏｃ技術を使用するメチルベンズヒドリルアミン樹脂のような適切な樹脂を
使用して、達成される。Ｎ−アセチル化および／またはＣ−アミド化を用いるか
または用いない、直鎖状のペプチドの合成後、所望される場合は、当該分野で周
知の任意の種々の技術によって、環化が達成され得る。
と最終的なペプチドとを反応させることによって達成され得る。Ｃ−アミド化は
、Ｂｏｃ技術を使用するメチルベンズヒドリルアミン樹脂のような適切な樹脂を
使用して、達成される。Ｎ−アセチル化および／またはＣ−アミド化を用いるか
または用いない、直鎖状のペプチドの合成後、所望される場合は、当該分野で周
知の任意の種々の技術によって、環化が達成され得る。
【００２４】 より長いポリペプチドについては、組換え方法が合成には好ましい。このよう
な方法においては、ポリペプチドの全体または一部が、生存している細胞中で、
特定の宿主細胞について適切である、当業者に公知の任意の種々の発現ベクター
を使用して、合成され得る。適切な宿主細胞として、細菌、酵母細胞、哺乳動物
細胞、昆虫細胞、植物細胞、藻類細胞、および他の動物細胞（例えば、ハイブリ
ドーマ、ＣＨＯ、骨髄腫）が挙げられ得る。この様式で発現されるＤＮＡ配列は
、既知のｃＤＮＡもしくはゲノム配列に基づいて調製され得るか、または既知の
古典的ではないカドヘリンの配列に基づいて設計されたプローブを用いて適切な
ライブラリーをスクリーニングすることによって単離された配列から調製され得
る。このようなスクリーニングは、一般的には、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９（およびその中で引用されている参
考文献）に記載されているように、行われ得る。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ
）もまた、内因性の接着分子の全体または一部をコードする核酸分子を単離する
ために、当該分野で周知の方法においてオリゴヌクレオチドプライマーを用いて
、使用され得る。所望されるポリペプチドをコードする核酸分子を作製するため
に、内因性のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリン配列が、周知の技術を使用
して改変され得る。あるいは、所望される核酸配列の一部が、周知の技術を使用
して合成され得、次いでポリペプチドをコードする配列を形成するように互いに
連結され得る。
な方法においては、ポリペプチドの全体または一部が、生存している細胞中で、
特定の宿主細胞について適切である、当業者に公知の任意の種々の発現ベクター
を使用して、合成され得る。適切な宿主細胞として、細菌、酵母細胞、哺乳動物
細胞、昆虫細胞、植物細胞、藻類細胞、および他の動物細胞（例えば、ハイブリ
ドーマ、ＣＨＯ、骨髄腫）が挙げられ得る。この様式で発現されるＤＮＡ配列は
、既知のｃＤＮＡもしくはゲノム配列に基づいて調製され得るか、または既知の
古典的ではないカドヘリンの配列に基づいて設計されたプローブを用いて適切な
ライブラリーをスクリーニングすることによって単離された配列から調製され得
る。このようなスクリーニングは、一般的には、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９（およびその中で引用されている参
考文献）に記載されているように、行われ得る。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ
）もまた、内因性の接着分子の全体または一部をコードする核酸分子を単離する
ために、当該分野で周知の方法においてオリゴヌクレオチドプライマーを用いて
、使用され得る。所望されるポリペプチドをコードする核酸分子を作製するため
に、内因性のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリン配列が、周知の技術を使用
して改変され得る。あるいは、所望される核酸配列の一部が、周知の技術を使用
して合成され得、次いでポリペプチドをコードする配列を形成するように互いに
連結され得る。
【００２５】 タンパク質およびペプチドは、任意の種々のアッセイを使用して、ＯＢ−カド
ヘリンまたはＮ−カドヘリン活性について評価され得る。ＯＢ−カドヘリンまた
はＮ−カドヘリン活性についての最初のスクリーニングは、当業者に公知の任意
の結合アッセイを使用して、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンに対して結
合する能力を評価することによって、行われ得る。例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ装置が、Ｊｏｎｓｓｏｎら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
１１：５２０−２７、１９９１に議論されているように使用され得る。分子と
のペプチドの相互作用を測定する技術の特定の例が、Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２、２２３４９−２２３５４、１９９７において見出
され得る。あるいは、実時間（ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ）ＢＩＡ（Ｂｉｏｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ）は、生体分子の相互作
用をモニターするために、光学的な表現形である表面プラスモン共鳴を使用する
。この検出は、生体特異的な界面での高分子の質量濃度中の変化に依存する。こ
れは、次いで、Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒチップの表面に対する試験分子またはペプチ
ド（リガンドと呼ばれる）の固定、続くリガンドへの相互作用している分子（分
析物と呼ばれる）の結合に依存する。チップへの結合は、共鳴の任意のユニット
（ＲＵ）において実時間で測定される。
ヘリンまたはＮ−カドヘリン活性について評価され得る。ＯＢ−カドヘリンまた
はＮ−カドヘリン活性についての最初のスクリーニングは、当業者に公知の任意
の結合アッセイを使用して、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンに対して結
合する能力を評価することによって、行われ得る。例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ装置が、Ｊｏｎｓｓｏｎら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
１１：５２０−２７、１９９１に議論されているように使用され得る。分子と
のペプチドの相互作用を測定する技術の特定の例が、Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２、２２３４９−２２３５４、１９９７において見出
され得る。あるいは、実時間（ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ）ＢＩＡ（Ｂｉｏｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ）は、生体分子の相互作
用をモニターするために、光学的な表現形である表面プラスモン共鳴を使用する
。この検出は、生体特異的な界面での高分子の質量濃度中の変化に依存する。こ
れは、次いで、Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒチップの表面に対する試験分子またはペプチ
ド（リガンドと呼ばれる）の固定、続くリガンドへの相互作用している分子（分
析物と呼ばれる）の結合に依存する。チップへの結合は、共鳴の任意のユニット
（ＲＵ）において実時間で測定される。
【００２６】 例示の目的で、表面プラスモン共鳴実験が、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｘ（登録商標）
Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｌｔｄ．，ＢＩＡｃｏｒｅ、Ｕｐｐ
ｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して行われ得る。ＣＭ５センサーチップの平行
フロー細胞は、アミンカップリング法を使用して、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（
ｐＨ４．０）中のストレプトアビジン（２００μｇ／ｍｌ）を用いて、製造業者
のプロトコールに従って誘導体化され得る。リガンドのおよそ２１００〜２６０
０の共鳴ユニット（ＲＵ）が、固定化され得、これは、約２．１〜２．６ｎｇ／
ｍｍ2の濃度に対応する。次いで、チップは、ビオチンに誘導体化したＯＢ−カ
ドヘリンまたはＮ−カドヘリンでコーティングされ得る。任意の非特異的に結合
したタンパク質は、除去される。
Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｌｔｄ．，ＢＩＡｃｏｒｅ、Ｕｐｐ
ｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して行われ得る。ＣＭ５センサーチップの平行
フロー細胞は、アミンカップリング法を使用して、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（
ｐＨ４．０）中のストレプトアビジン（２００μｇ／ｍｌ）を用いて、製造業者
のプロトコールに従って誘導体化され得る。リガンドのおよそ２１００〜２６０
０の共鳴ユニット（ＲＵ）が、固定化され得、これは、約２．１〜２．６ｎｇ／
ｍｍ2の濃度に対応する。次いで、チップは、ビオチンに誘導体化したＯＢ−カ
ドヘリンまたはＮ−カドヘリンでコーティングされ得る。任意の非特異的に結合
したタンパク質は、除去される。
【００２７】 結合を決定するために、試験分析物（例えば、ペプチドまたはタンパク質）が
、ランニングバッファー（ｒｕｎｎｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ）に配置され得、そし
て試験フロー細胞およびコントロールフロー細胞上を同時に通過させられ得る。
自由な緩衝液の流れの一定期間後、表面に結合したままである任意の分析物が、
例えば、０．１％のＳＤＳのパルスによって除去され得、これによってベースラ
インのシグナルバックグラウンドが得られる。誘導されたセンサーチップに対す
る特異的な結合は、コントロールのフロー細胞の応答から試験フロー細胞の応答
を引き算することによって、システムによって自動的に決定され得る。一般的に
は、ＯＢ−カドヘリンは、ＯＢ−カドヘリンの細胞外ドメインに対して、このよ
うなアッセイにおいて検出可能なレベルで結合する（そしてＮカドヘリンはＮ−
カドヘリンの細胞外ドメインに対して結合する）。
、ランニングバッファー（ｒｕｎｎｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ）に配置され得、そし
て試験フロー細胞およびコントロールフロー細胞上を同時に通過させられ得る。
自由な緩衝液の流れの一定期間後、表面に結合したままである任意の分析物が、
例えば、０．１％のＳＤＳのパルスによって除去され得、これによってベースラ
インのシグナルバックグラウンドが得られる。誘導されたセンサーチップに対す
る特異的な結合は、コントロールのフロー細胞の応答から試験フロー細胞の応答
を引き算することによって、システムによって自動的に決定され得る。一般的に
は、ＯＢ−カドヘリンは、ＯＢ−カドヘリンの細胞外ドメインに対して、このよ
うなアッセイにおいて検出可能なレベルで結合する（そしてＮカドヘリンはＮ−
カドヘリンの細胞外ドメインに対して結合する）。
【００２８】 ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリン活性は、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−
カドヘリンによって媒介される応答に対する影響を測定するように設計された任
意の種々のインビトロアッセイを使用して評価され得る。細胞の接着を調節する
能力は、一般的には、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンを発現する細胞間
の接着に対する影響をアッセイすることによって、インビトロで評価され得る。
一般的には、ポリペプチドは、ポリペプチドとの試験細胞の接触が細胞の接着の
識別できる崩壊を生じる場合には、細胞の接着のインヒビターである。このよう
なアッセイは、免疫細胞化学的プロトコールのような標準的な技術を使用して、
検出可能なレベルでＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンを発現する、任意の
型の細胞を使用して行われ得る（例えば、ＢｌａｓｃｈｕｋおよびＦａｒｏｏｋ
ｈｉ，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１３６：５６４−５６７、１９８９）。例えば、この
ような細胞は、可溶性のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの非存在下で細
胞の接着を可能にする、標準的な条件下に配置され得る。ＯＢ−カドヘリンまた
はＮ−カドヘリンの存在下（例えば、１ｍｇ／ｍＬ）では、細胞の接着の崩壊は
、互いおよび基盤（ｓｕｂｓｔｒａｔｕｍ）から細胞の後退（ｒｅｔｒａｃｔｉ
ｏｎ）を観察することによって、２４時間以内に視覚的に決定され得る。
カドヘリンによって媒介される応答に対する影響を測定するように設計された任
意の種々のインビトロアッセイを使用して評価され得る。細胞の接着を調節する
能力は、一般的には、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンを発現する細胞間
の接着に対する影響をアッセイすることによって、インビトロで評価され得る。
一般的には、ポリペプチドは、ポリペプチドとの試験細胞の接触が細胞の接着の
識別できる崩壊を生じる場合には、細胞の接着のインヒビターである。このよう
なアッセイは、免疫細胞化学的プロトコールのような標準的な技術を使用して、
検出可能なレベルでＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンを発現する、任意の
型の細胞を使用して行われ得る（例えば、ＢｌａｓｃｈｕｋおよびＦａｒｏｏｋ
ｈｉ，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１３６：５６４−５６７、１９８９）。例えば、この
ような細胞は、可溶性のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの非存在下で細
胞の接着を可能にする、標準的な条件下に配置され得る。ＯＢ−カドヘリンまた
はＮ−カドヘリンの存在下（例えば、１ｍｇ／ｍＬ）では、細胞の接着の崩壊は
、互いおよび基盤（ｓｕｂｓｔｒａｔｕｍ）から細胞の後退（ｒｅｔｒａｃｔｉ
ｏｎ）を観察することによって、２４時間以内に視覚的に決定され得る。
【００２９】 ＯＢ−カドヘリンを発現する細胞として、間質細胞、骨芽細胞、および転移性
のガン細胞が挙げられる。Ｎ−カドヘリンを発現する細胞として、神経細胞、内
皮細胞、および種々のガン細胞の型が挙げられる。あるいは、ＯＢ−カドヘリン
またはＮ−カドヘリンを天然には発現しない細胞が、このようなアッセイにおい
て使用され得る。このような細胞は、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンを
コードするポリヌクレオチド（例えば、ｃＤＮＡ）を用いて安定にトランスフェ
クトされ得、その結果、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンが細胞の表面上
に発現される。ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの発現は、ＯＢ−カドヘ
リンまたはＮ−カドヘリンに対して指向された抗体を使用する免疫細胞化学的技
術と組み合わせて、トランスフェクトされた細胞の接着を評価することによって
確認され得る。トランスフェクション後に、光学顕微鏡によって判断した場合に
凝集する、安定にトランスフェクトされた細胞は、十分なレベルのＯＢ−カドヘ
リンまたはＮ−カドヘリンを発現する。このようなアッセイにおける使用に好ま
しい細胞として、Ｌ細胞が挙げられる。これは、検出可能には接着せず、そして
いずれのカドヘリンをも発現しない（Ｎａｇａｆｕｃｈｉら、Ｎａｔｕｒｅ ３
２９：３４１−３４３、１９８７）。ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンを
コードするｃＤＮＡでのＬ細胞のトランスフェクション後、凝集が観察される（
Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１２０９２−９８、１９
９４を参照のこと）。このような凝集を検出可能に阻害するペプチドは、本明細
書中で記載されるような結合因子を作製または特徴付けるために使用され得る。
のガン細胞が挙げられる。Ｎ−カドヘリンを発現する細胞として、神経細胞、内
皮細胞、および種々のガン細胞の型が挙げられる。あるいは、ＯＢ−カドヘリン
またはＮ−カドヘリンを天然には発現しない細胞が、このようなアッセイにおい
て使用され得る。このような細胞は、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンを
コードするポリヌクレオチド（例えば、ｃＤＮＡ）を用いて安定にトランスフェ
クトされ得、その結果、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンが細胞の表面上
に発現される。ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの発現は、ＯＢ−カドヘ
リンまたはＮ−カドヘリンに対して指向された抗体を使用する免疫細胞化学的技
術と組み合わせて、トランスフェクトされた細胞の接着を評価することによって
確認され得る。トランスフェクション後に、光学顕微鏡によって判断した場合に
凝集する、安定にトランスフェクトされた細胞は、十分なレベルのＯＢ−カドヘ
リンまたはＮ−カドヘリンを発現する。このようなアッセイにおける使用に好ま
しい細胞として、Ｌ細胞が挙げられる。これは、検出可能には接着せず、そして
いずれのカドヘリンをも発現しない（Ｎａｇａｆｕｃｈｉら、Ｎａｔｕｒｅ ３
２９：３４１−３４３、１９８７）。ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンを
コードするｃＤＮＡでのＬ細胞のトランスフェクション後、凝集が観察される（
Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１２０９２−９８、１９
９４を参照のこと）。このような凝集を検出可能に阻害するペプチドは、本明細
書中で記載されるような結合因子を作製または特徴付けるために使用され得る。
【００３０】 例示の目的で、ＯＢ−カドヘリンによって媒介される機能を阻害する能力を評
価するためのアッセイは、ＭＤＡ−２３１ヒト乳ガン細胞を使用し得る。代表的
な手順に従うと、細胞は、５％のＦＣＳを含むＤＭＥＭを含有する３５ｍｍの組
織培養フラスコあたり、１０〜２０，０００細胞でプレートされ得、そして定期
的に継代培養される（Ｓｏｍｍｅｒｓら、Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｎ
２：３６５−７２、１９９１）。細胞は回収され得、そして１ｍｍのカバーガ
ラスを有する３５ｍｍの組織培養フラスコ中に再プレートされ得、そして５０〜
６５％のコンフルエントにまでインキュベートされ得る（２４〜３６時間）。こ
の時点で、カバーガラスは２４ウェルプレートに移され得、新しいＤＭＥＭで１
回洗浄され得、そして試験化合物（例えば、タンパク質またはペプチド）に対し
て、例えば１ｍｇ／ｍＬの濃度で２４時間暴露され得る。次いで、新しい試験化
合物が添加され得、そして細胞はさらに２４時間放置され得る。細胞は、２％の
パラホルムアルデヒドで３０分間固定され得、次いで、ＰＢＳで３回洗浄され得
る。カバーガラスが取り付けられ得、そして 位相差顕微鏡法によって観察され
得る。
価するためのアッセイは、ＭＤＡ−２３１ヒト乳ガン細胞を使用し得る。代表的
な手順に従うと、細胞は、５％のＦＣＳを含むＤＭＥＭを含有する３５ｍｍの組
織培養フラスコあたり、１０〜２０，０００細胞でプレートされ得、そして定期
的に継代培養される（Ｓｏｍｍｅｒｓら、Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｎ
２：３６５−７２、１９９１）。細胞は回収され得、そして１ｍｍのカバーガ
ラスを有する３５ｍｍの組織培養フラスコ中に再プレートされ得、そして５０〜
６５％のコンフルエントにまでインキュベートされ得る（２４〜３６時間）。こ
の時点で、カバーガラスは２４ウェルプレートに移され得、新しいＤＭＥＭで１
回洗浄され得、そして試験化合物（例えば、タンパク質またはペプチド）に対し
て、例えば１ｍｇ／ｍＬの濃度で２４時間暴露され得る。次いで、新しい試験化
合物が添加され得、そして細胞はさらに２４時間放置され得る。細胞は、２％の
パラホルムアルデヒドで３０分間固定され得、次いで、ＰＢＳで３回洗浄され得
る。カバーガラスが取り付けられ得、そして 位相差顕微鏡法によって観察され
得る。
【００３１】 ＯＢ−カドヘリンまたは細胞接着認識配列を含有するその一部の非存在下にお
いては、ＭＤＡ−２３１細胞は上皮様の形態を示し、そして基盤に対して十分に
接着する。このようなペプチドまたはタンパク質で処理されたＭＤＡ−２３１細
胞は、丸い形状をとると想定し得、そして１ｍｇ／ｍＬのＯＢ−カドヘリンでの
４８時間以内の処理中に基盤に対してゆるく接着する。
いては、ＭＤＡ−２３１細胞は上皮様の形態を示し、そして基盤に対して十分に
接着する。このようなペプチドまたはタンパク質で処理されたＭＤＡ−２３１細
胞は、丸い形状をとると想定し得、そして１ｍｇ／ｍＬのＯＢ−カドヘリンでの
４８時間以内の処理中に基盤に対してゆるく接着する。
【００３２】 あるいは、タンパク質またはペプチドが、皮膚浸透性を増強する能力について
評価され得る。この能力は、例えば、接着上皮および／または内皮細胞の層（例
えば、ヒトの皮膚）の浸透性に対する影響を決定することによって評価され得る
。このような皮膚は、天然の供給源に由来し得るか、または合成であり得る。こ
のようなアッセイにおける使用のためのヒトの腹部の皮膚は、一般的には、死亡
の２４時間以内に検死によってヒトから採取され得る。簡潔には、試験化合物（
例えば、５００μｇ／ｍｌ）およびマーカー（例えば、蛍光マーカーＯｒｅｇｏ
ｎ Ｇｒｅｅｎ（登録商標）およびＲｈｏｄａｍｉｎｅ Ｇｒｅｅｎ（登録商標
）Ｄｅｘｔｒａｎ）が、滅菌の緩衝液（例えば、リン酸緩衝液、ｐＨ７．２）中
に溶解され得、そして皮膚を通じて浸透し、かつレセプターの液体（例えば、リ
ン酸緩衝液）中へ浸透するマーカーの能力が、Ｆｒａｎｚ Ｃｅｌｌ装置（Ｆｒ
ａｎｚ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．７：５８−６８，１９７８；
Ｆｒａｎｚ、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．６４：１９０−１９５，１
９７５）を使用して測定され得る。皮膚を通じるマーカーの浸透は、例えば、実
験の開始後６時間、１２時間、２４時間、３６時間、および４８時間で評価され
得る。一般的には、ＯＢ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、または細胞接着認識配
列を含有するその一部は、５００μｇ／ｍＬのペプチドの存在下で６〜４８時間
後に、レセプター区画中のマーカーの量を統計学的に有意にな増大を生じるはず
である。
評価され得る。この能力は、例えば、接着上皮および／または内皮細胞の層（例
えば、ヒトの皮膚）の浸透性に対する影響を決定することによって評価され得る
。このような皮膚は、天然の供給源に由来し得るか、または合成であり得る。こ
のようなアッセイにおける使用のためのヒトの腹部の皮膚は、一般的には、死亡
の２４時間以内に検死によってヒトから採取され得る。簡潔には、試験化合物（
例えば、５００μｇ／ｍｌ）およびマーカー（例えば、蛍光マーカーＯｒｅｇｏ
ｎ Ｇｒｅｅｎ（登録商標）およびＲｈｏｄａｍｉｎｅ Ｇｒｅｅｎ（登録商標
）Ｄｅｘｔｒａｎ）が、滅菌の緩衝液（例えば、リン酸緩衝液、ｐＨ７．２）中
に溶解され得、そして皮膚を通じて浸透し、かつレセプターの液体（例えば、リ
ン酸緩衝液）中へ浸透するマーカーの能力が、Ｆｒａｎｚ Ｃｅｌｌ装置（Ｆｒ
ａｎｚ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．７：５８−６８，１９７８；
Ｆｒａｎｚ、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．６４：１９０−１９５，１
９７５）を使用して測定され得る。皮膚を通じるマーカーの浸透は、例えば、実
験の開始後６時間、１２時間、２４時間、３６時間、および４８時間で評価され
得る。一般的には、ＯＢ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、または細胞接着認識配
列を含有するその一部は、５００μｇ／ｍＬのペプチドの存在下で６〜４８時間
後に、レセプター区画中のマーカーの量を統計学的に有意にな増大を生じるはず
である。
【００３３】 なお別のアッセイは、脈管形成を阻害する能力を評価する。脈管形成に対する
影響は、一般的には、血管形成に対する影響を評価することによって決定され得
る。このような決定は、一般的には、例えば、雛鳥（ｃｈｉｃｋ）の絨毛尿膜ア
ッセイ（Ｉｒｕｅｌａ−Ａｒｉｓｐｅら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ
ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ ６：３２７−３４３、１９９５）を使用して行われ
得る。簡潔には、ペプチドまたはタンパク質は、１つ以上の濃縮物（例えば、約
１から１００μｇ／メッシュの範囲）でｖｉｔｒｏｇｅｎからなるメッシュ中に
包埋され得る。次いで、メッシュ（単数または複数）は、雛鳥の絨毛尿膜に適用
され得る。２４時間後、影響は、コンピューターによって補助される形態分析を
使用して決定され得る。ＯＢ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリンまたはＣＡＲ配列を
含有するその一部は、３３μｇ／メッシュの濃度で少なくとも２５％の脈管形成
を阻害するはずである。
影響は、一般的には、血管形成に対する影響を評価することによって決定され得
る。このような決定は、一般的には、例えば、雛鳥（ｃｈｉｃｋ）の絨毛尿膜ア
ッセイ（Ｉｒｕｅｌａ−Ａｒｉｓｐｅら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ
ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ ６：３２７−３４３、１９９５）を使用して行われ
得る。簡潔には、ペプチドまたはタンパク質は、１つ以上の濃縮物（例えば、約
１から１００μｇ／メッシュの範囲）でｖｉｔｒｏｇｅｎからなるメッシュ中に
包埋され得る。次いで、メッシュ（単数または複数）は、雛鳥の絨毛尿膜に適用
され得る。２４時間後、影響は、コンピューターによって補助される形態分析を
使用して決定され得る。ＯＢ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリンまたはＣＡＲ配列を
含有するその一部は、３３μｇ／メッシュの濃度で少なくとも２５％の脈管形成
を阻害するはずである。
【００３４】 Ｎ−カドヘリンについては、神経突起の成長アッセイが使用され得る。代表的
な神経突起の成長アッセイにおいては、ニューロンは、Ｎ−カドヘリンを発現す
る細胞（例えば、３Ｔ３）の単層上で培養され得る。（適切な条件下、および十
分な時間での）このような細胞上でのニューロンの増殖は、Ｎ−カドヘリンを発
現しない細胞上で培養されたニューロンよりも長い神経突起にまで延長させる。
例えば、ニューロンは、本質的には以下によって記載されるように、Ｎ−カドヘ
リンをコードするｃＤＮＡでトランスフェクトされた３Ｔ３細胞の単層上で培養
され得る：ＤｏｈｅｒｔｙおよびＷａｌｓｈ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｎｅｕｒｏｂｉ
ｏｌ．４：４９−５５，１９９４；Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｎｅｕｒｏｎ １３：
５８３−５９４，１９９４；Ｈａｌｌら、Ｃｅｌｌ Ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｎｄ
Ｃｏｍｍｕｎ．３：４４１−４５０，１９９６；ＤｏｈｅｒｔｙおよびＷａｌ
ｓｈ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．８：９９−１１１，１９９４；な
らびにＳａｆｅｌｌら、Ｎｅｕｒｏｎ １８：２３１−２４２，１９９７。簡潔
には、コントロール３Ｔ３繊維芽細胞の単層、およびＮ−カドヘリンを発現する
３Ｔ３繊維芽細胞が、８−チャンバーウェルの組織培養スライドの個々のウェル
中での８０，０００個の細胞の一晩の培養によって確立され得る。３つのマウス
の脳から分娩後に単離された３０００個の小脳のニューロンは、コントロール培
地（ＳＡＴＯ／２％ＦＣＳ）、または種々の濃度の調節因子もしくはコントロー
ルペプチドを補充した培地中の種々の単層上で、１８時間培養され得る。次いで
、培養物は固定され得、そしてニューロンおよびそれらの神経突起に特異的に結
合するＧＡＰ４３について染色され得る。各ＧＡＰ４３陽性のニューロン上の最
も長い神経突起の長さは、コンピューターによって補助される形態測定によって
測定され得る。Ｎ−カドヘリンまたは細胞接着認識配列を含有するその一部（例
えば、５００μｇ／ｍｌ）は、このようなポリペプチドの非存在下での長さと比
較して、少なくとも５０％の平均の神経突起の長さの減少を生じるはずである。
な神経突起の成長アッセイにおいては、ニューロンは、Ｎ−カドヘリンを発現す
る細胞（例えば、３Ｔ３）の単層上で培養され得る。（適切な条件下、および十
分な時間での）このような細胞上でのニューロンの増殖は、Ｎ−カドヘリンを発
現しない細胞上で培養されたニューロンよりも長い神経突起にまで延長させる。
例えば、ニューロンは、本質的には以下によって記載されるように、Ｎ−カドヘ
リンをコードするｃＤＮＡでトランスフェクトされた３Ｔ３細胞の単層上で培養
され得る：ＤｏｈｅｒｔｙおよびＷａｌｓｈ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｎｅｕｒｏｂｉ
ｏｌ．４：４９−５５，１９９４；Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｎｅｕｒｏｎ １３：
５８３−５９４，１９９４；Ｈａｌｌら、Ｃｅｌｌ Ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｎｄ
Ｃｏｍｍｕｎ．３：４４１−４５０，１９９６；ＤｏｈｅｒｔｙおよびＷａｌ
ｓｈ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．８：９９−１１１，１９９４；な
らびにＳａｆｅｌｌら、Ｎｅｕｒｏｎ １８：２３１−２４２，１９９７。簡潔
には、コントロール３Ｔ３繊維芽細胞の単層、およびＮ−カドヘリンを発現する
３Ｔ３繊維芽細胞が、８−チャンバーウェルの組織培養スライドの個々のウェル
中での８０，０００個の細胞の一晩の培養によって確立され得る。３つのマウス
の脳から分娩後に単離された３０００個の小脳のニューロンは、コントロール培
地（ＳＡＴＯ／２％ＦＣＳ）、または種々の濃度の調節因子もしくはコントロー
ルペプチドを補充した培地中の種々の単層上で、１８時間培養され得る。次いで
、培養物は固定され得、そしてニューロンおよびそれらの神経突起に特異的に結
合するＧＡＰ４３について染色され得る。各ＧＡＰ４３陽性のニューロン上の最
も長い神経突起の長さは、コンピューターによって補助される形態測定によって
測定され得る。Ｎ−カドヘリンまたは細胞接着認識配列を含有するその一部（例
えば、５００μｇ／ｍｌ）は、このようなポリペプチドの非存在下での長さと比
較して、少なくとも５０％の平均の神経突起の長さの減少を生じるはずである。
【００３５】 （結合因子） 用語「結合因子」は、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列
、またはＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンに特異的に結合する抗体（も
しくはその抗原結合フラグメント）を含有するポリペプチドのような物質をいう
。特定の好ましい結合因子は、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの細胞外
ドメインに結合する。本明細書中で使用される場合は、物質は、それがＯＢ−カ
ドヘリンもしくはＮ−カドヘリンと検出可能なレベルで反応し、そして無関係の
配列もしくは異なるカドヘリンの配列を含有するペプチドとは検出可能には反応
しない場合に、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリン配列に対して「特異的
に結合する」といわれる。このような結合特性は、一般的には、ＥＬＩＳＡを使
用して評価され得、これは、当業者によって容易に行われ得、そして例えば、Ｎ
ｅｗｔｏｎら、Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｄｙｎａｍｉｃｓ １９７：１−１３，１９９
３によって記載されている。それぞれの結合因子は、上記の基準を満たすはずで
ある；しかし、当業者は、結合因子が、感受性を改良するために組み合わせて使
用され得ることを認識する。結合因子を調製および評価することにおける使用の
ためのＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリン配列を含有するペプチドは、本明
細書中で記載されるように生成され得る。
、またはＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンに特異的に結合する抗体（も
しくはその抗原結合フラグメント）を含有するポリペプチドのような物質をいう
。特定の好ましい結合因子は、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの細胞外
ドメインに結合する。本明細書中で使用される場合は、物質は、それがＯＢ−カ
ドヘリンもしくはＮ−カドヘリンと検出可能なレベルで反応し、そして無関係の
配列もしくは異なるカドヘリンの配列を含有するペプチドとは検出可能には反応
しない場合に、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリン配列に対して「特異的
に結合する」といわれる。このような結合特性は、一般的には、ＥＬＩＳＡを使
用して評価され得、これは、当業者によって容易に行われ得、そして例えば、Ｎ
ｅｗｔｏｎら、Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｄｙｎａｍｉｃｓ １９７：１−１３，１９９
３によって記載されている。それぞれの結合因子は、上記の基準を満たすはずで
ある；しかし、当業者は、結合因子が、感受性を改良するために組み合わせて使
用され得ることを認識する。結合因子を調製および評価することにおける使用の
ためのＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリン配列を含有するペプチドは、本明
細書中で記載されるように生成され得る。
【００３６】 上記の要件を満たす任意の化合物は、結合因子であり得る。例えば、結合因子
は、ペプチド成分を有するかもしくは有さないリボソーム、ＲＮＡ分子、または
ポリペプチドであり得る。特定の好ましい実施態様においては、結合因子は、Ｏ
Ｂ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列を含有するポリペプチド、
そのペプチド改変体、またはこのようなＣＡＲ配列の非ペプチド模倣物である。
本明細書中で使用される場合は、「ＯＢ−カドヘリンのＣＡＲ配列」は、ＯＢ−
カドヘリンによって媒介される機能を調節し得る、ＯＢ−カドヘリンのペプチド
部分である。同様に、「Ｎ−カドヘリンのＣＡＲ配列」は、Ｎ−カドヘリンによ
って媒介される機能を調節し得る、Ｎ−カドヘリンのペプチド部分である。ＣＡ
Ｒ配列は、任意の長さであり得るが、一般的には、少なくとも３個のアミノ酸残
基、好ましくは、４〜１６個のアミノ酸残基、そしてより好ましくは、５〜９個
のアミノ酸残基を含む。Ｎ−カドヘリンのＣＡＲ配列は、一般的には、さらなる
隣接する配列を伴って、またはそれを伴わずに、ペプチドＨｉｓ−Ａｌａ−Ｖａ
ｌ（ＨＡＶ）を含む。これは、図３に提供される細胞外ドメイン配列から誘導さ
れ得る。特定のＯＢ−カドヘリンのＣＡＲ配列は、ＯＢ−カドヘリン中の以下の
コンセンサス配列中に存在する少なくとも３個の連続するアミノ酸を有する： Ａａａ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ／Ｓｅｒ−Ｉｌｅ／Ｖａｌ−Ａｓｐ／Ｇｌｕ−Ｂａａ
−Ｃａａ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ−Ｇｌｙ（配列番号１０） ここで、Ａａａ、Ｂａａ、およびＣａａは、独立して選択されたアミノ酸残基で
ある；Ｖａｌ／Ｓｅｒは、バリンまたはセリンであるアミノ酸である；Ｉｌｅ／
Ｖａｌは、イソロイシンまたはバリンであるアミノ酸である；Ａｓｐ／Ｇｌｕは
、アスパラギンまたはグルタミン酸であるアミノ酸である；そしてＳｅｒ／Ｔｈ
ｅは、セリンまたはスレオニンであるアミノ酸である。代表的なＯＢ−カドヘリ
ンのＣＡＲ配列として、以下が挙げられる：
は、ペプチド成分を有するかもしくは有さないリボソーム、ＲＮＡ分子、または
ポリペプチドであり得る。特定の好ましい実施態様においては、結合因子は、Ｏ
Ｂ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列を含有するポリペプチド、
そのペプチド改変体、またはこのようなＣＡＲ配列の非ペプチド模倣物である。
本明細書中で使用される場合は、「ＯＢ−カドヘリンのＣＡＲ配列」は、ＯＢ−
カドヘリンによって媒介される機能を調節し得る、ＯＢ−カドヘリンのペプチド
部分である。同様に、「Ｎ−カドヘリンのＣＡＲ配列」は、Ｎ−カドヘリンによ
って媒介される機能を調節し得る、Ｎ−カドヘリンのペプチド部分である。ＣＡ
Ｒ配列は、任意の長さであり得るが、一般的には、少なくとも３個のアミノ酸残
基、好ましくは、４〜１６個のアミノ酸残基、そしてより好ましくは、５〜９個
のアミノ酸残基を含む。Ｎ−カドヘリンのＣＡＲ配列は、一般的には、さらなる
隣接する配列を伴って、またはそれを伴わずに、ペプチドＨｉｓ−Ａｌａ−Ｖａ
ｌ（ＨＡＶ）を含む。これは、図３に提供される細胞外ドメイン配列から誘導さ
れ得る。特定のＯＢ−カドヘリンのＣＡＲ配列は、ＯＢ−カドヘリン中の以下の
コンセンサス配列中に存在する少なくとも３個の連続するアミノ酸を有する： Ａａａ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ／Ｓｅｒ−Ｉｌｅ／Ｖａｌ−Ａｓｐ／Ｇｌｕ−Ｂａａ
−Ｃａａ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ−Ｇｌｙ（配列番号１０） ここで、Ａａａ、Ｂａａ、およびＣａａは、独立して選択されたアミノ酸残基で
ある；Ｖａｌ／Ｓｅｒは、バリンまたはセリンであるアミノ酸である；Ｉｌｅ／
Ｖａｌは、イソロイシンまたはバリンであるアミノ酸である；Ａｓｐ／Ｇｌｕは
、アスパラギンまたはグルタミン酸であるアミノ酸である；そしてＳｅｒ／Ｔｈ
ｅは、セリンまたはスレオニンであるアミノ酸である。代表的なＯＢ−カドヘリ
ンのＣＡＲ配列として、以下が挙げられる：
【００３７】
【数１】 このような配列を有する直鎖状のペプチドは、ペプチドＮ−Ａｃ−ＩＦＶＩＤＤ
ＫＳＧ−ＮＨ2（配列番号９）、Ｎ−Ａｃ−ＦＦＶＩＥＥＹＴＧ−ＮＨ2（配列番
号５３）、およびＮ−Ａｃ−ＹＦＳＶＥＡＱＴＧ−ＮＨ2（配列番号５４）にお
けるように、Ｎ−および／またはＣ−末端で改変される。
ＫＳＧ−ＮＨ2（配列番号９）、Ｎ−Ａｃ−ＦＦＶＩＥＥＹＴＧ−ＮＨ2（配列番
号５３）、およびＮ−Ａｃ−ＹＦＳＶＥＡＱＴＧ−ＮＨ2（配列番号５４）にお
けるように、Ｎ−および／またはＣ−末端で改変される。
【００３８】 特定の配列がＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列であること
を確認するために、ＯＢ−カドヘリンによって媒介される機能を調節する配列の
能力が、決定され得る。全長のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンによって
阻害される機能（例えば、細胞の接着）については、ＣＡＲ配列は、全長のＯＢ
−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンと比較して実質的には減少されていない活性
でその機能を阻害するはずである（すなわち、ＣＡＲ配列は、ＯＢ−カドヘリン
またはＮ−カドヘリンを発現する細胞と接触させられた場合に、少なくともおよ
び可溶性のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの機能を阻害する）。
を確認するために、ＯＢ−カドヘリンによって媒介される機能を調節する配列の
能力が、決定され得る。全長のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンによって
阻害される機能（例えば、細胞の接着）については、ＣＡＲ配列は、全長のＯＢ
−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンと比較して実質的には減少されていない活性
でその機能を阻害するはずである（すなわち、ＣＡＲ配列は、ＯＢ−カドヘリン
またはＮ−カドヘリンを発現する細胞と接触させられた場合に、少なくともおよ
び可溶性のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの機能を阻害する）。
【００３９】 本発明はさらに、他の器官に由来するＯＢ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリン
のＣＡＲ配列の使用を意図する。このようなＣＡＲ配列は、本明細書中で提供さ
れる配列に対する類似性に基づいて同定され得る。そしてＯＢ−カドヘリンまた
はＮ−カドヘリンによって媒介される機能を調節する能力が、本明細書中に記載
のように確認され得る。
のＣＡＲ配列の使用を意図する。このようなＣＡＲ配列は、本明細書中で提供さ
れる配列に対する類似性に基づいて同定され得る。そしてＯＢ−カドヘリンまた
はＮ−カドヘリンによって媒介される機能を調節する能力が、本明細書中に記載
のように確認され得る。
【００４０】 上記のように、本明細書中で記載される結合因子は、ＯＢ−カドヘリンまたは
Ｎ−カドヘリンのＣＡＲ配列のアナログまたは模倣物を含み得る。アナログは、
一般的には、ネイティブのＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列
に対して少なくとも５０％の同一性を保持しており、そして本明細書中で記載さ
れるようなＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンによって媒介される機能を調
節する。このようなアナログは、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンのＣＡ
Ｒ配列の、好ましくは、少なくとも３個の連続する残基、そしてより好ましくは
、少なくとも５個の連続する残基を含む。アナログは、任意の種々のアミノ酸置
換、付加、欠失、および／または修飾（例えば、側鎖の修飾）を含み得る。好ま
しいアミノ酸置換は保存的である。「保存的置換」は、アミノ酸が類似の特性を
有する別のアミノ酸と置換される置換である。その結果、ペプチド化学の当業者
は、ポリペプチドの二次構造およびヒドロパシーの性質が実質的に変更されない
ことを予想する。アミノ酸置換は、一般的には、残基の極性、電荷、可溶性、疎
水性、親水性、および／または両親媒性の性質における類似性に基づいて行われ
得る。例えば、負に荷電したアミノ酸として、アスパラギン酸およびグルタミン
酸が挙げられる；正に荷電したアミノ酸として、リジンおよびアルギニンが挙げ
られる；そして類似の親水性の値を有する荷電していない極性の頭部の基を有す
るアミノ酸として、ロイシン、イソロイシン、およびバリン；グリシンおよびア
ラニン；アスパラギンおよびグルタミン；ならびにセリン、スレオニン、フェニ
ルアラニン、およびチロシンが挙げられる。保存的な変化を示し得る他のグルー
プのアミノ酸として、以下が挙げられる：（１）ａｌａ、ｐｒｏ、ｇｌｙ、ｇｌ
ｕ、ａｓｐ、ｇｌｎ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；（２）ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｙｒ
、ｔｈｒ；（３）ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｐｈｅ；（４）ｌ
ｙｓ、ａｒｇ、ｈｉｓ；および（５）ｐｈｅ、ｔｙｒ、ｔｒｐ、ｈｉｓ。ＯＢ−
カドヘリンまたはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列アナログの重要な決定上の特徴は
、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンよって媒介される機能を調節する能力
である。これは、本明細書中で提供される代表的なアッセイを使用して評価され
得る。
Ｎ−カドヘリンのＣＡＲ配列のアナログまたは模倣物を含み得る。アナログは、
一般的には、ネイティブのＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列
に対して少なくとも５０％の同一性を保持しており、そして本明細書中で記載さ
れるようなＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンによって媒介される機能を調
節する。このようなアナログは、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンのＣＡ
Ｒ配列の、好ましくは、少なくとも３個の連続する残基、そしてより好ましくは
、少なくとも５個の連続する残基を含む。アナログは、任意の種々のアミノ酸置
換、付加、欠失、および／または修飾（例えば、側鎖の修飾）を含み得る。好ま
しいアミノ酸置換は保存的である。「保存的置換」は、アミノ酸が類似の特性を
有する別のアミノ酸と置換される置換である。その結果、ペプチド化学の当業者
は、ポリペプチドの二次構造およびヒドロパシーの性質が実質的に変更されない
ことを予想する。アミノ酸置換は、一般的には、残基の極性、電荷、可溶性、疎
水性、親水性、および／または両親媒性の性質における類似性に基づいて行われ
得る。例えば、負に荷電したアミノ酸として、アスパラギン酸およびグルタミン
酸が挙げられる；正に荷電したアミノ酸として、リジンおよびアルギニンが挙げ
られる；そして類似の親水性の値を有する荷電していない極性の頭部の基を有す
るアミノ酸として、ロイシン、イソロイシン、およびバリン；グリシンおよびア
ラニン；アスパラギンおよびグルタミン；ならびにセリン、スレオニン、フェニ
ルアラニン、およびチロシンが挙げられる。保存的な変化を示し得る他のグルー
プのアミノ酸として、以下が挙げられる：（１）ａｌａ、ｐｒｏ、ｇｌｙ、ｇｌ
ｕ、ａｓｐ、ｇｌｎ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；（２）ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｙｒ
、ｔｈｒ；（３）ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｐｈｅ；（４）ｌ
ｙｓ、ａｒｇ、ｈｉｓ；および（５）ｐｈｅ、ｔｙｒ、ｔｒｐ、ｈｉｓ。ＯＢ−
カドヘリンまたはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列アナログの重要な決定上の特徴は
、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンよって媒介される機能を調節する能力
である。これは、本明細書中で提供される代表的なアッセイを使用して評価され
得る。
【００４１】 模倣物は、非ペプチジル化合物である。これは、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−
カドヘリンのＣＡＲ配列に対して立体構造的に類似している。その結果、これは
、本明細書中で記載されるようなＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンによっ
て媒介される機能を調節する。このような模倣物は、ペプチドの三次元構造を評
価する技術に基づいて設計され得る。例えば、核磁気共鳴スペクトル法（Ｎｕｃ
ｌｅａｒ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ
、ＮＭＲ）およびコンピューターによる技術が、ＣＡＲ配列の立体構造を決定す
るために使用され得る。ＮＭＲは、ペプチジル化合物および非ペプチジル化合物
の両方の構造の分析のために広範に使用される。Ｎｕｃｌｅａｒ Ｏｖｅｒｈａ
ｕｓｅｒ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｓ（ＮＯＥ’ｓ）、カップリング定数および
化学的なシフトは、化合物の立体構造に依存する。ＮＯＥデータは、空間内のプ
ロトン間のプロトン間距離を提供し、そしてＣＡＲ配列についての最も低いエネ
ルギー立体構造を計算するために使用され得る。この情報は、次いで、好ましい
立体構造の模倣物を設計するために使用され得る。溶液中の直鎖状のペプチドは
、多くの立体構造中に存在する。立体構造的な制限技術を使用することによって
、活性な立体構造でペプチドを固定することが可能である。立体構造的な制限は
、ｉ）自由な結合の回転を立体的に制限する、メチルのようなアルキル基の導入
、ｉｉ）末端および双生（ｇｅｍｉｎａｌ）置換基の相対的な位置を固定する不
飽和の導入；ならびに／またはｉｉｉ）側鎖の相対的な位置を固定する環化によ
って達成され得る。模倣物は、１つ以上のアミド結合が、同配体、置換基、また
は−ＣＨ2ＮＨ−、−ＣＳＮＨ−、ＣＨ2Ｓ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ2ＣＨ2−
、−ＣＯＮＭｅ−などのような同じ大きさもしくは容積を有する基によって置き
かえられるように、合成され得る。これらの骨格のアミド結合はまた、環構造（
例えば、ラクタム）の一部であり得る。模倣物は、ＣＡＲ配列の１つ以上の側鎖
の機能性が、同じ大きさもしくは容積を必ずしも有さないが、類似の生物学的応
答を生じる類似の化学的および／または物理的特性を有する基によって置きかえ
られるように、設計され得る。他の模倣物は、ＣＡＲ配列の三次元構造に基づい
て、低分子ライブラリーから容易に同定され得る、低分子模倣物であり得る。以
下に記載される実施態様においては、アナログまたは模倣物は、ＯＢ−カドヘリ
ンまたはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列について置換され得ることが理解されるべ
きである。
カドヘリンのＣＡＲ配列に対して立体構造的に類似している。その結果、これは
、本明細書中で記載されるようなＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンによっ
て媒介される機能を調節する。このような模倣物は、ペプチドの三次元構造を評
価する技術に基づいて設計され得る。例えば、核磁気共鳴スペクトル法（Ｎｕｃ
ｌｅａｒ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ
、ＮＭＲ）およびコンピューターによる技術が、ＣＡＲ配列の立体構造を決定す
るために使用され得る。ＮＭＲは、ペプチジル化合物および非ペプチジル化合物
の両方の構造の分析のために広範に使用される。Ｎｕｃｌｅａｒ Ｏｖｅｒｈａ
ｕｓｅｒ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｓ（ＮＯＥ’ｓ）、カップリング定数および
化学的なシフトは、化合物の立体構造に依存する。ＮＯＥデータは、空間内のプ
ロトン間のプロトン間距離を提供し、そしてＣＡＲ配列についての最も低いエネ
ルギー立体構造を計算するために使用され得る。この情報は、次いで、好ましい
立体構造の模倣物を設計するために使用され得る。溶液中の直鎖状のペプチドは
、多くの立体構造中に存在する。立体構造的な制限技術を使用することによって
、活性な立体構造でペプチドを固定することが可能である。立体構造的な制限は
、ｉ）自由な結合の回転を立体的に制限する、メチルのようなアルキル基の導入
、ｉｉ）末端および双生（ｇｅｍｉｎａｌ）置換基の相対的な位置を固定する不
飽和の導入；ならびに／またはｉｉｉ）側鎖の相対的な位置を固定する環化によ
って達成され得る。模倣物は、１つ以上のアミド結合が、同配体、置換基、また
は−ＣＨ2ＮＨ−、−ＣＳＮＨ−、ＣＨ2Ｓ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ2ＣＨ2−
、−ＣＯＮＭｅ−などのような同じ大きさもしくは容積を有する基によって置き
かえられるように、合成され得る。これらの骨格のアミド結合はまた、環構造（
例えば、ラクタム）の一部であり得る。模倣物は、ＣＡＲ配列の１つ以上の側鎖
の機能性が、同じ大きさもしくは容積を必ずしも有さないが、類似の生物学的応
答を生じる類似の化学的および／または物理的特性を有する基によって置きかえ
られるように、設計され得る。他の模倣物は、ＣＡＲ配列の三次元構造に基づい
て、低分子ライブラリーから容易に同定され得る、低分子模倣物であり得る。以
下に記載される実施態様においては、アナログまたは模倣物は、ＯＢ−カドヘリ
ンまたはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列について置換され得ることが理解されるべ
きである。
【００４２】 結合因子またはそのペプチド部分は、直鎖状または環状のペプチドであり得る
。用語「環状のペプチド」は、本明細書中で使用される場合は、（１）２つの隣
接していない残基間の分子内共有結合、および（２）少なくとも１つのＯＢ−カ
ドヘリンもしくはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列、またはそのアナログを含む、ペ
プチドまたはその塩をいう。分子内結合は、骨格対骨格、側鎖対骨格、または側
鎖対側鎖の結合であり得る（すなわち、直鎖状のペプチドの末端の官能基、およ
び／または末端もしくは内部の残基の側鎖の官能基が連結されて環化を達成し得
る）。好ましい分子内結合として、ジズルフィド、アミド、およびチオエーテル
結合が挙げられるが、これらに限定されない。
。用語「環状のペプチド」は、本明細書中で使用される場合は、（１）２つの隣
接していない残基間の分子内共有結合、および（２）少なくとも１つのＯＢ−カ
ドヘリンもしくはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列、またはそのアナログを含む、ペ
プチドまたはその塩をいう。分子内結合は、骨格対骨格、側鎖対骨格、または側
鎖対側鎖の結合であり得る（すなわち、直鎖状のペプチドの末端の官能基、およ
び／または末端もしくは内部の残基の側鎖の官能基が連結されて環化を達成し得
る）。好ましい分子内結合として、ジズルフィド、アミド、およびチオエーテル
結合が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４３】 環状のペプチド環の大きさは、一般的には、５個から約１５個までの残基の範
囲であり、好ましくは、５個から１０個までの残基の範囲である。さらなる残基
（単数または複数）が、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列の
Ｎ−末端側および／またはＣ−末端側に存在し得る。そしてアミノ酸置換および
／または他の改変を伴ってまたはそれを伴わずに、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−
カドヘリンのＣＡＲ配列に隣接する配列から誘導され得る。あるいは、ＣＡＲ配
列（単数または複数）の片側または両側に存在するさらなる残基は、内因性の配
列に対して無関係であり得る（例えば、環化、精製、もしくは他の操作を容易に
する残基、ならびに／あるいは標的化または他の機能を有する残基）。
囲であり、好ましくは、５個から１０個までの残基の範囲である。さらなる残基
（単数または複数）が、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列の
Ｎ−末端側および／またはＣ−末端側に存在し得る。そしてアミノ酸置換および
／または他の改変を伴ってまたはそれを伴わずに、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−
カドヘリンのＣＡＲ配列に隣接する配列から誘導され得る。あるいは、ＣＡＲ配
列（単数または複数）の片側または両側に存在するさらなる残基は、内因性の配
列に対して無関係であり得る（例えば、環化、精製、もしくは他の操作を容易に
する残基、ならびに／あるいは標的化または他の機能を有する残基）。
【００４４】 特定の実施態様においては、結合因子は、以下の化学式を有する環状のペプチ
ドを含み得る：
ドを含み得る：
【００４５】
【化１】 この化学式においては、Ｗは、ＥＥＹ、ＤＤＫ、およびＥＡＱ（ＯＢ−カドヘ
リンについて）またはＨＡＶ（Ｎ−カドヘリンについて）からなる群より選択さ
れる、三連のペプチドである；Ｘ1およびＸ2は、必要に応じて存在し、そして存
在するならば、アミノ酸残基およびその組み合わせからなる群より独立して選択
される。ここで、残基は、ペプチド結合によって連結されている。そしてここで
、Ｘ1およびＸ2は、Ｘ1およびＸ2の範囲に含まれる残基の和が１個から１２個に
なるように、独立して、０から１０個の残基の範囲である。Ｙ1およびＹ2は、独
立して、アミノ酸残基からなる群より選択され、そしてここで、Ｙ1およびＹ2の
残基間で共有結合が形成される；そして、Ｚ1およびＺ2は、必要に応じて存在し
、そして存在するならば、アミノ酸残基およびその組み合わせからなる群より、
残基がペプチド結合によって連結されるように独立して選択される。
リンについて）またはＨＡＶ（Ｎ−カドヘリンについて）からなる群より選択さ
れる、三連のペプチドである；Ｘ1およびＸ2は、必要に応じて存在し、そして存
在するならば、アミノ酸残基およびその組み合わせからなる群より独立して選択
される。ここで、残基は、ペプチド結合によって連結されている。そしてここで
、Ｘ1およびＸ2は、Ｘ1およびＸ2の範囲に含まれる残基の和が１個から１２個に
なるように、独立して、０から１０個の残基の範囲である。Ｙ1およびＹ2は、独
立して、アミノ酸残基からなる群より選択され、そしてここで、Ｙ1およびＹ2の
残基間で共有結合が形成される；そして、Ｚ1およびＺ2は、必要に応じて存在し
、そして存在するならば、アミノ酸残基およびその組み合わせからなる群より、
残基がペプチド結合によって連結されるように独立して選択される。
【００４６】 例えば、ＯＢ−カドヘリンのＣＡＲ配列を含有する代表的な環状のペプチドと
して、以下が挙げられる：
して、以下が挙げられる：
【００４７】
【数２】 本発明の状況においては、下線をつけた配列は、本明細書中に記載されるような
任意の適切な方法を使用して環化される。
任意の適切な方法を使用して環化される。
【００４８】 Ｎ−カドヘリンのＣＡＲ配列を含有する代表的な環状のペプチドとして、以下
が挙げられる：
が挙げられる：
【００４９】
【数３】 特定の他の好ましい実施態様においては、結合因子は、抗体またはその抗原結
合フラグメントである。このような抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナ
ルであり得る。さらに、抗体は、単鎖、キメラ、ＣＤＲ−移植されたもの、また
はヒト化されたものであり得る。
合フラグメントである。このような抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナ
ルであり得る。さらに、抗体は、単鎖、キメラ、ＣＤＲ−移植されたもの、また
はヒト化されたものであり得る。
【００５０】 ポリクローナルおよびモノクローナル抗体は、従来技術を使用して、ＯＢ−カ
ドヘリンまたはＮ−カドヘリンの配列に対して惹起され得る。例えば、Ｈａｒｌ
ｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａ
ｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１
９８８を参照のこと。１つのこのような技術においては、配列を含む免疫原が、
最初に、任意の広範な種々の哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツ
ジ、またはヤギ）に注射される。小さい免疫原（すなわち、約２０アミノ酸未満
）は、キャリアタンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン、またはキーホールリ
ンペットヘモシアニン）に連結されるべきである。１回以上の注射後、動物は、
定期的に採血される。次いで、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの配列に
対して特異的なポリクローナル抗体が、このような抗血清から、例えば、適切な
固体支持体にカップリングさせられた、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリ
ン配列、またはその抗原性部分を使用する、アフィニティークロマトグラフィー
によって、精製され得る。
ドヘリンまたはＮ−カドヘリンの配列に対して惹起され得る。例えば、Ｈａｒｌ
ｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａ
ｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１
９８８を参照のこと。１つのこのような技術においては、配列を含む免疫原が、
最初に、任意の広範な種々の哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツ
ジ、またはヤギ）に注射される。小さい免疫原（すなわち、約２０アミノ酸未満
）は、キャリアタンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン、またはキーホールリ
ンペットヘモシアニン）に連結されるべきである。１回以上の注射後、動物は、
定期的に採血される。次いで、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの配列に
対して特異的なポリクローナル抗体が、このような抗血清から、例えば、適切な
固体支持体にカップリングさせられた、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリ
ン配列、またはその抗原性部分を使用する、アフィニティークロマトグラフィー
によって、精製され得る。
【００５１】 ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの配列に対して特異的なモノクローナ
ル抗体は、例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．６：５１１−５１９、１９７６の技術、およびそれに対する改良を使
用して、調製され得る。簡潔には、これらの方法は、上記のように免疫化された
動物から得られた脾臓細胞に由来する所望の特異性を有する抗体を産生し得る、
固定化された細胞株の調製を包含する。脾臓細胞は、例えば、骨髄腫細胞融合パ
ートナー（好ましくは、免疫化された動物と同系のもの）との融合によって固定
化される。単一のコロニーが選択され、そしてそれらの培養上清が、ＯＢ−カド
ヘリンもしくはＮ−カドヘリン配列、またはそれらの抗原性部分に対する結合活
性について試験される。高い反応性および特異性を有するハイブリドーマが、好
ましい。
ル抗体は、例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．６：５１１−５１９、１９７６の技術、およびそれに対する改良を使
用して、調製され得る。簡潔には、これらの方法は、上記のように免疫化された
動物から得られた脾臓細胞に由来する所望の特異性を有する抗体を産生し得る、
固定化された細胞株の調製を包含する。脾臓細胞は、例えば、骨髄腫細胞融合パ
ートナー（好ましくは、免疫化された動物と同系のもの）との融合によって固定
化される。単一のコロニーが選択され、そしてそれらの培養上清が、ＯＢ−カド
ヘリンもしくはＮ−カドヘリン配列、またはそれらの抗原性部分に対する結合活
性について試験される。高い反応性および特異性を有するハイブリドーマが、好
ましい。
【００５２】 モノクローナル抗体は、収率を増大させるための、当該分野で公知の種々の技
術の使用を伴ってまたは伴わずに、増殖しつつあるハイブリドーマのコロニーの
上清から単離され得る。混入物は、クロマトグラフィー、ゲル濾過、沈殿、およ
び抽出のような従来技術によって、抗体から除去され得る。所望の活性を有する
抗体は、一般的には、組織の切片、細胞、または他のサンプルの免疫蛍光分析を
使用して同定され得る。ここで、標的カドヘリンは局在化させられる。
術の使用を伴ってまたは伴わずに、増殖しつつあるハイブリドーマのコロニーの
上清から単離され得る。混入物は、クロマトグラフィー、ゲル濾過、沈殿、およ
び抽出のような従来技術によって、抗体から除去され得る。所望の活性を有する
抗体は、一般的には、組織の切片、細胞、または他のサンプルの免疫蛍光分析を
使用して同定され得る。ここで、標的カドヘリンは局在化させられる。
【００５３】 特定の実施態様においては、抗体の抗原結合フラグメントの使用が、好ましく
あり得る。このようなフラグメントとして、Ｆａｂフラグメントが挙げられ、こ
れは、標準的な技術を使用して調製され得る。簡潔には、イムノグロブリンが、
プロテインＡ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ）ビーズカラム上でのアフィニティークロマ
トグラフィーによってウサギの血清から精製され得（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎ
ｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、１９８８；特に３０
９頁を参照のこと）、そしてＦａｂおよびＦｃフラグメントを生じるようにパパ
インによって消化され得る。ＦａｂおよびＦｃフラグメントは、プロテイン Ａ
ビーズカラム上でのアフィニティークロマトグラフィーによって分離され得る（
ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、１９８８、６２８−２９頁）。
あり得る。このようなフラグメントとして、Ｆａｂフラグメントが挙げられ、こ
れは、標準的な技術を使用して調製され得る。簡潔には、イムノグロブリンが、
プロテインＡ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ）ビーズカラム上でのアフィニティークロマ
トグラフィーによってウサギの血清から精製され得（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎ
ｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、１９８８；特に３０
９頁を参照のこと）、そしてＦａｂおよびＦｃフラグメントを生じるようにパパ
インによって消化され得る。ＦａｂおよびＦｃフラグメントは、プロテイン Ａ
ビーズカラム上でのアフィニティークロマトグラフィーによって分離され得る（
ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、１９８８、６２８−２９頁）。
【００５４】 （ＯＢ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリンポリヌクレオチド） ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンをコードするポリヌクレオチド（ま
たはその一部もしくは他の変異体）、あるいは、このようなポリヌクレオチドに
対する相補物が、本明細書中に提供される特定の方法において使用され得る。ポ
リヌクレオチドは、一本鎖（コードもしくはアンチセンス）または二本鎖であり
得、そしてＤＮＡ（ｃＤＮＡもしくは合成）またはＲＮＡ分子であり得る。さら
なるコード配列または非コード配列が、本発明のポリヌクレオチド中に存在し得
るが、必ずしもその必要はない。そしてポリヌクレオチドは、他の分子および／
または支持物質に連結させられ得るが、必ずしもその必要はない。本明細書中で
提供される方法における使用のためのオリゴヌクレオチドは、特定のアッセイに
ついて適切な任意の長さであり得る。
たはその一部もしくは他の変異体）、あるいは、このようなポリヌクレオチドに
対する相補物が、本明細書中に提供される特定の方法において使用され得る。ポ
リヌクレオチドは、一本鎖（コードもしくはアンチセンス）または二本鎖であり
得、そしてＤＮＡ（ｃＤＮＡもしくは合成）またはＲＮＡ分子であり得る。さら
なるコード配列または非コード配列が、本発明のポリヌクレオチド中に存在し得
るが、必ずしもその必要はない。そしてポリヌクレオチドは、他の分子および／
または支持物質に連結させられ得るが、必ずしもその必要はない。本明細書中で
提供される方法における使用のためのオリゴヌクレオチドは、特定のアッセイに
ついて適切な任意の長さであり得る。
【００５５】 ポリヌクレオチドは、ネイティブの配列（すなわち、ＯＢ−カドヘリン、Ｎ−
カドヘリン、もしくはそれらの一部をコードする内因性の配列）を含み得るか、
またはこのような配列の改変体を含み得る。ポリヌクレオチド改変体は、好まし
くは、少なくとも約７０％の同一性、より好ましくは、少なくとも約８０％の同
一性、そして最も好ましくは少なくとも約９０％の同一性を、ネイティブのＯＢ
−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、またはその一部をコードするポリヌクレオチド
配列に対して示す。特定の改変体は、ネイティブの遺伝子もしくはその一部、ま
たはその相補物に対して実質的に相同である。このようなポリヌクレオチド改変
体は、ネイティブのＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリン（またはその相補
配列）をコードする天然に存在するＤＮＡ配列に対して、中程度にストリンジェ
ントな条件下でハイブリダイズし得る。適切な中程度にストリンジェントな条件
は、５×ＳＳＣ，０．５％のＳＤＳ、１．０ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶
液中での予備洗浄；５０℃〜６５℃、５×ＳＳＣでの一晩のハイブリダイゼーシ
ョン；続く６５℃で２０分間の、０．１％のＳＤＳを含有する、それぞれ２×、
０．５×、および０．２×ＳＳＣでの２回の洗浄を含む。
カドヘリン、もしくはそれらの一部をコードする内因性の配列）を含み得るか、
またはこのような配列の改変体を含み得る。ポリヌクレオチド改変体は、好まし
くは、少なくとも約７０％の同一性、より好ましくは、少なくとも約８０％の同
一性、そして最も好ましくは少なくとも約９０％の同一性を、ネイティブのＯＢ
−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、またはその一部をコードするポリヌクレオチド
配列に対して示す。特定の改変体は、ネイティブの遺伝子もしくはその一部、ま
たはその相補物に対して実質的に相同である。このようなポリヌクレオチド改変
体は、ネイティブのＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリン（またはその相補
配列）をコードする天然に存在するＤＮＡ配列に対して、中程度にストリンジェ
ントな条件下でハイブリダイズし得る。適切な中程度にストリンジェントな条件
は、５×ＳＳＣ，０．５％のＳＤＳ、１．０ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶
液中での予備洗浄；５０℃〜６５℃、５×ＳＳＣでの一晩のハイブリダイゼーシ
ョン；続く６５℃で２０分間の、０．１％のＳＤＳを含有する、それぞれ２×、
０．５×、および０．２×ＳＳＣでの２回の洗浄を含む。
【００５６】 ポリヌクレオチドは、任意の種々の技術を使用して調製され得る。例えば、ポ
リヌクレオチドは、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンを発現する細胞から
調製されたｃＤＮＡからのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を通じて増幅され得
る。このアプローチについては、配列特異的プライマーが、本明細書中で提供さ
れる配列に基づいて設計され得、そして購入され得るかまたは合成され得る。他
のポリヌクレオチドは、当該分野で公知の任意の方法（化学合成（例えば、固相
ホスホルアミダイト化学合成による）を含む）によって直接合成され得る。ポリ
ヌクレオチド配列中での改変はまた、標準的な変異誘発技術（例えば、オリゴヌ
クレオチドによって指向される部位特異的変異誘発）を使用して導入され得る。
ＲＮＡ分子は、ＤＮＡが適切なＲＮＡポリメラーゼプロモータを有するベクター
（例えば、Ｔ７またはＳＰ６）中に取り込まれている場合は、ＯＢ−カドヘリン
もしくはＮ−カドヘリン、またはその一部をコードするＤＮＡ配列のインビトロ
またはインビボでの転写によって生成され得る。
リヌクレオチドは、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンを発現する細胞から
調製されたｃＤＮＡからのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を通じて増幅され得
る。このアプローチについては、配列特異的プライマーが、本明細書中で提供さ
れる配列に基づいて設計され得、そして購入され得るかまたは合成され得る。他
のポリヌクレオチドは、当該分野で公知の任意の方法（化学合成（例えば、固相
ホスホルアミダイト化学合成による）を含む）によって直接合成され得る。ポリ
ヌクレオチド配列中での改変はまた、標準的な変異誘発技術（例えば、オリゴヌ
クレオチドによって指向される部位特異的変異誘発）を使用して導入され得る。
ＲＮＡ分子は、ＤＮＡが適切なＲＮＡポリメラーゼプロモータを有するベクター
（例えば、Ｔ７またはＳＰ６）中に取り込まれている場合は、ＯＢ−カドヘリン
もしくはＮ−カドヘリン、またはその一部をコードするＤＮＡ配列のインビトロ
またはインビボでの転写によって生成され得る。
【００５７】 コード配列または相補配列の特に好ましい部分は、遺伝子発現を検出するため
のプローブまたはプライマーとして設計される部分である。プローブは、種々の
レポーター基（例えば、放射性核種および酵素）によって標識され得る。そして
好ましくは、少なくとも１０ヌクレオチドの長さ、より好ましくは、少なくとも
２０ヌクレオチドの長さ、そしてなおより好ましくは少なくとも３０ヌクレオチ
ドの長さである。プライマーは、好ましくは、２２〜３０ヌクレオチドの長さで
ある。
のプローブまたはプライマーとして設計される部分である。プローブは、種々の
レポーター基（例えば、放射性核種および酵素）によって標識され得る。そして
好ましくは、少なくとも１０ヌクレオチドの長さ、より好ましくは、少なくとも
２０ヌクレオチドの長さ、そしてなおより好ましくは少なくとも３０ヌクレオチ
ドの長さである。プライマーは、好ましくは、２２〜３０ヌクレオチドの長さで
ある。
【００５８】 任意のポリヌクレオチドが、インビボでの安定性を増大させるためにさらに改
変され得る。可能な改変として、５’および／または３’末端での隣接する配列
の付加；骨格におけるホスホジエステル結合よりもむしろ、ホスホロチオエート
または２’Ｏ−メチルの使用；ならびに／あるいは、イノシン、エオシン（ｑｕ
ｅｏｓｉｎｅ）、およびワイブトシンのような伝統的ではない塩基の封入、なら
びにアデニン、シチジン、グアニン、チミン、およびウリジンのアセチル−、メ
チル−、チオ−、および他の改変された形態を含むことが挙げられるが、これら
に限定されない。
変され得る。可能な改変として、５’および／または３’末端での隣接する配列
の付加；骨格におけるホスホジエステル結合よりもむしろ、ホスホロチオエート
または２’Ｏ−メチルの使用；ならびに／あるいは、イノシン、エオシン（ｑｕ
ｅｏｓｉｎｅ）、およびワイブトシンのような伝統的ではない塩基の封入、なら
びにアデニン、シチジン、グアニン、チミン、およびウリジンのアセチル−、メ
チル−、チオ−、および他の改変された形態を含むことが挙げられるが、これら
に限定されない。
【００５９】 本明細書中で記載されるヌクレオチド配列は、確立された組換えＤＮＡ技術を
使用して種々の他のヌクレオチド配列に対して連結され得る。例えば、ポリヌク
レオチドは、任意の種々のクローニングベクター（プラスミド、ファージミド、
λファージ誘導体、およびコスミドを含む）中にクローン化され得る。特定の目
的のベクターとして、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター、お
よび配列決定ベクターが挙げられる。一般的には、ベクターは、少なくとも１つ
の生物体中で機能的である複製の起点、便利な制限エンドヌクレアーゼ部位、お
よび１つ以上の選択マーカーを含む。他のエレメントは所望される用途に依存し
、そしてこれらは当業者に明らかである。
使用して種々の他のヌクレオチド配列に対して連結され得る。例えば、ポリヌク
レオチドは、任意の種々のクローニングベクター（プラスミド、ファージミド、
λファージ誘導体、およびコスミドを含む）中にクローン化され得る。特定の目
的のベクターとして、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター、お
よび配列決定ベクターが挙げられる。一般的には、ベクターは、少なくとも１つ
の生物体中で機能的である複製の起点、便利な制限エンドヌクレアーゼ部位、お
よび１つ以上の選択マーカーを含む。他のエレメントは所望される用途に依存し
、そしてこれらは当業者に明らかである。
【００６０】 （ガンを診断するための方法） 結合因子（例えば、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンのＣＡＲ配列、お
よびＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの配列に対して惹起された抗体）、
ならびにポリヌクレオチドプローブおよびプライマーが、種々の診断およびアッ
セイの目的のために使用され得る。一般的には、このような結合因子およびポリ
ヌクレオチドは、患者における転移性のガンを検出するため、ガンの進行をモニ
ターするため、またはガンの転移の可能性を評価するために、使用され得る。本
発明の状況においては、ＯＢ−カドヘリンおよび／またはＮ−カドヘリンが、高
度に侵襲性のガン細胞によって発現されることが見出されている。このような細
胞は、一般的には、検出可能なレベルではＥ−カドヘリンを発現しない。対照的
に、高度に文化した侵襲性の乏しいガン腫はＥ−カドヘリンを発現するが、ＯＢ
−カドヘリンおよび／またはＮ−カドヘリンは発現しない。従って、転移性のガ
ンは、患者から得られた生物学的サンプル中に存在するＯＢ−カドヘリンもしく
はＮ−カドヘリン（または、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンをコード
するＲＮＡ）の上昇したレベルに基づいて、患者において検出され得る。ガンの
転移の可能性に関するさらなる情報は、同じサンプルまたは類似のサンプル中の
Ｅ−カドヘリンの発現を評価することによってもまた得ることができる。
よびＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの配列に対して惹起された抗体）、
ならびにポリヌクレオチドプローブおよびプライマーが、種々の診断およびアッ
セイの目的のために使用され得る。一般的には、このような結合因子およびポリ
ヌクレオチドは、患者における転移性のガンを検出するため、ガンの進行をモニ
ターするため、またはガンの転移の可能性を評価するために、使用され得る。本
発明の状況においては、ＯＢ−カドヘリンおよび／またはＮ−カドヘリンが、高
度に侵襲性のガン細胞によって発現されることが見出されている。このような細
胞は、一般的には、検出可能なレベルではＥ−カドヘリンを発現しない。対照的
に、高度に文化した侵襲性の乏しいガン腫はＥ−カドヘリンを発現するが、ＯＢ
−カドヘリンおよび／またはＮ−カドヘリンは発現しない。従って、転移性のガ
ンは、患者から得られた生物学的サンプル中に存在するＯＢ−カドヘリンもしく
はＮ−カドヘリン（または、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリンをコード
するＲＮＡ）の上昇したレベルに基づいて、患者において検出され得る。ガンの
転移の可能性に関するさらなる情報は、同じサンプルまたは類似のサンプル中の
Ｅ−カドヘリンの発現を評価することによってもまた得ることができる。
【００６１】 このようなアッセイにおける使用のための生物学的サンプルとして、血液、血
清、尿、腫瘍、または正常な組織生検、リンパ節、腹膜の液体、脳脊髄の液体、
および前立腺分泌物、ならびに他の組織、ホモジネート、およびその抽出物が挙
げられる。ポリヌクレオチドプローブまたはプライマーを使用するアッセイにつ
いては、生物学的サンプルは、任意の上記のサンプルに由来する全ＲＮＡ，ｍＲ
ＮＡ，またはｃＤＮＡ調製物であり得る。このような生物学的サンプルは、任意
の標準的な技術を使用して調製され得る。サンプルは、既知のガンを有するまた
は有さない患者から得ることができる（標準的な臨床試験を使用して決定される
ように）。
清、尿、腫瘍、または正常な組織生検、リンパ節、腹膜の液体、脳脊髄の液体、
および前立腺分泌物、ならびに他の組織、ホモジネート、およびその抽出物が挙
げられる。ポリヌクレオチドプローブまたはプライマーを使用するアッセイにつ
いては、生物学的サンプルは、任意の上記のサンプルに由来する全ＲＮＡ，ｍＲ
ＮＡ，またはｃＤＮＡ調製物であり得る。このような生物学的サンプルは、任意
の標準的な技術を使用して調製され得る。サンプルは、既知のガンを有するまた
は有さない患者から得ることができる（標準的な臨床試験を使用して決定される
ように）。
【００６２】 サンプル中の標的分子を検出するために結合因子を使用するための、当業者に
公知の種々のアッセイ形式が存在する。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照のこと。
一般的には、患者におけるガンの存在または非存在は、（ａ）患者から得られた
生物学的サンプルを結合因子と接触させること；（ｂ）結合因子に結合するポリ
ペプチドのレベルをサンプル中で検出すること；および（ｃ）予め決定されたカ
ットオフ値とポリペプチドのレベルとを比較することによって、決定され得る。
公知の種々のアッセイ形式が存在する。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照のこと。
一般的には、患者におけるガンの存在または非存在は、（ａ）患者から得られた
生物学的サンプルを結合因子と接触させること；（ｂ）結合因子に結合するポリ
ペプチドのレベルをサンプル中で検出すること；および（ｃ）予め決定されたカ
ットオフ値とポリペプチドのレベルとを比較することによって、決定され得る。
【００６３】 例えば、アッセイは、ウェスタンブロット形式で行われ得る。ここで、生物学
的サンプルに由来するタンパク質調製物は、ゲル電気泳動に提示され、適切な膜
に移され、そして抗体結合因子と反応させられる。抗体は、標識され得るか、ま
たは膜上の抗体の存在が、以下に記載するような適切な検出試薬を使用して検出
され得る。同様のアッセイが、ＣＡＲ配列を含有するペプチド結合因子を使用し
て行われ得る。このような結合因子は、一般的には、以下に記載されているよう
に標識される。
的サンプルに由来するタンパク質調製物は、ゲル電気泳動に提示され、適切な膜
に移され、そして抗体結合因子と反応させられる。抗体は、標識され得るか、ま
たは膜上の抗体の存在が、以下に記載するような適切な検出試薬を使用して検出
され得る。同様のアッセイが、ＣＡＲ配列を含有するペプチド結合因子を使用し
て行われ得る。このような結合因子は、一般的には、以下に記載されているよう
に標識される。
【００６４】 好ましい実施態様においては、アッセイは、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カ
ドヘリン、またはそのタンパク質溶解性のフラグメントに結合するように、固体
支持体上に固定された結合因子の使用、およびサンプルの残りからのその除去を
含む。次いで、結合したカドヘリンは、レポーター基を含み、そして結合因子／
ポリペプチド複合体に特異的に結合する、第２の検出試薬または他の検出試薬を
使用して検出され得る。このような検出試薬は、例えば、ＯＢ−カドヘリンまた
はＮ−カドヘリンに特異的に結合する結合因子を含み得る。あるいは、競合アッ
セイが利用され得る。ここで、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリン、また
はその一部は、レポーター基で標識され、そしてサンプルとの結合因子のインキ
ュベーション後に固定化された結合因子に対して結合することを可能にさせられ
る。サンプルの成分が結合因子に対する標識されたＯＢ−カドヘリンまたはＮ−
カドヘリンの結合をどの程度まで阻害するかは、固定化された結合因子とのサン
プルの反応性の指標であり、そして結果として、サンプル中のＯＢ−カドヘリン
またはＮ−カドヘリンのレベルの指標である。
ドヘリン、またはそのタンパク質溶解性のフラグメントに結合するように、固体
支持体上に固定された結合因子の使用、およびサンプルの残りからのその除去を
含む。次いで、結合したカドヘリンは、レポーター基を含み、そして結合因子／
ポリペプチド複合体に特異的に結合する、第２の検出試薬または他の検出試薬を
使用して検出され得る。このような検出試薬は、例えば、ＯＢ−カドヘリンまた
はＮ−カドヘリンに特異的に結合する結合因子を含み得る。あるいは、競合アッ
セイが利用され得る。ここで、ＯＢ−カドヘリンもしくはＮ−カドヘリン、また
はその一部は、レポーター基で標識され、そしてサンプルとの結合因子のインキ
ュベーション後に固定化された結合因子に対して結合することを可能にさせられ
る。サンプルの成分が結合因子に対する標識されたＯＢ−カドヘリンまたはＮ−
カドヘリンの結合をどの程度まで阻害するかは、固定化された結合因子とのサン
プルの反応性の指標であり、そして結果として、サンプル中のＯＢ−カドヘリン
またはＮ−カドヘリンのレベルの指標である。
【００６５】 固体支持体は、当業者に公知の任意の物質であり得る。この物質に対して結合
因子が付着させられ得る。この物質は、例えば、マイクロタイタープレート中の
試験ウェル、ニトロセルロースフィルター、または別の適切な膜である。あるい
は、支持体は、ビーズまたはディスク（例えば、ガラス、ファイバーガラス、ラ
テックス、またはプラスチック（例えば，ポリスチレンもしくはポリビニルクロ
ライド））であり得る。結合因子（例えば、抗体またはペプチド）は、当業者に
公知の種々の技術を使用して固体支持体上に固定され得る。これは、特許および
科学的な学術文献に十分に記載されている。
因子が付着させられ得る。この物質は、例えば、マイクロタイタープレート中の
試験ウェル、ニトロセルロースフィルター、または別の適切な膜である。あるい
は、支持体は、ビーズまたはディスク（例えば、ガラス、ファイバーガラス、ラ
テックス、またはプラスチック（例えば，ポリスチレンもしくはポリビニルクロ
ライド））であり得る。結合因子（例えば、抗体またはペプチド）は、当業者に
公知の種々の技術を使用して固体支持体上に固定され得る。これは、特許および
科学的な学術文献に十分に記載されている。
【００６６】 特定の実施態様においては、サンプル中のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘ
リンの検出のためのアッセイは、２−抗体サンドイッチアッセイである。このア
ッセイは、固体支持体（一般的には、マイクロプレートのウェル）上に固定され
ている抗体と、生物学的サンプルとを最初に接触させることによって、行われ得
る。その結果、サンプル中のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンは、固定化
された抗体に対して結合することを可能にさせられる（室温にて３０分間のイン
キュベーションが、一般的に十分である）。結合しなかったサンプルは、次いで
、固定化されたカドヘリン−抗体複合体から除去され、そしてカドヘリンの異な
る部位に対して結合し得る、二次抗体（酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダ
ーゼ）のようなレポーター基を含有する）、基質、補因子、インヒビター、色素
、放射性核種、発光基、蛍光基、またはビオチン）が添加される。レポーター基
に対する抗体の結合体化は、当業者に公知の標準的な方法を使用して達成され得
る。次いで、固体支持体に結合したままである二次抗体の量が、特異的なレポー
ター基について適切である方法を使用して決定される。
リンの検出のためのアッセイは、２−抗体サンドイッチアッセイである。このア
ッセイは、固体支持体（一般的には、マイクロプレートのウェル）上に固定され
ている抗体と、生物学的サンプルとを最初に接触させることによって、行われ得
る。その結果、サンプル中のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンは、固定化
された抗体に対して結合することを可能にさせられる（室温にて３０分間のイン
キュベーションが、一般的に十分である）。結合しなかったサンプルは、次いで
、固定化されたカドヘリン−抗体複合体から除去され、そしてカドヘリンの異な
る部位に対して結合し得る、二次抗体（酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダ
ーゼ）のようなレポーター基を含有する）、基質、補因子、インヒビター、色素
、放射性核種、発光基、蛍光基、またはビオチン）が添加される。レポーター基
に対する抗体の結合体化は、当業者に公知の標準的な方法を使用して達成され得
る。次いで、固体支持体に結合したままである二次抗体の量が、特異的なレポー
ター基について適切である方法を使用して決定される。
【００６７】 より詳細には、一旦、抗体が上記のような支持体上に固定されると、支持体上
の残存しているタンパク質結合部位は、代表的にはブロックされる。任意の適切
なブロッキング試薬は、当業者に公知であり、例えば、ウシ血清アルブミンまた
はＴｗｅｅｎ ２０（登録商標）（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓ
ｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）である。固定化された抗体は、次いで、サンプルととも
にインキュベートされ、そしてサンプル中のポリペプチドが、抗体に対する結合
を可能にさせられる。サンプルは、適切な希釈剤（例えば、リン酸緩衝化生理食
塩水（ＰＢＳ））を用いてインキュベーションの前に希釈され得る。一般的には
、適切な接触時間（すなわち、インキュベーション時間）は、転移性のガンを有
する個体から得られたサンプル中のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの存
在を検出するために十分な期間である。好ましくは、接触時間は、一定のレベル
の結合を達成する（すなわち、少なくとも９５％は、結合したポリペプチドと結
合していないポリペプチドとの間での平衡が達成される）ために十分である。当
業者は、平衡を達成するために必要な時間が、一定の期間にわたって生じる結合
のレベルをアッセイすることによって容易に決定され得ることを、認識する。室
温においては、約３０分のインキュベーション時間が、一般的には十分である。
の残存しているタンパク質結合部位は、代表的にはブロックされる。任意の適切
なブロッキング試薬は、当業者に公知であり、例えば、ウシ血清アルブミンまた
はＴｗｅｅｎ ２０（登録商標）（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓ
ｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）である。固定化された抗体は、次いで、サンプルととも
にインキュベートされ、そしてサンプル中のポリペプチドが、抗体に対する結合
を可能にさせられる。サンプルは、適切な希釈剤（例えば、リン酸緩衝化生理食
塩水（ＰＢＳ））を用いてインキュベーションの前に希釈され得る。一般的には
、適切な接触時間（すなわち、インキュベーション時間）は、転移性のガンを有
する個体から得られたサンプル中のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの存
在を検出するために十分な期間である。好ましくは、接触時間は、一定のレベル
の結合を達成する（すなわち、少なくとも９５％は、結合したポリペプチドと結
合していないポリペプチドとの間での平衡が達成される）ために十分である。当
業者は、平衡を達成するために必要な時間が、一定の期間にわたって生じる結合
のレベルをアッセイすることによって容易に決定され得ることを、認識する。室
温においては、約３０分のインキュベーション時間が、一般的には十分である。
【００６８】 次いで、結合していないサンプルは、適切な緩衝液（例えば、０．１％のＴｗ
ｅｅｎ ２０（登録商標）を含有するＰＢＳ）を用いて固体支持体を洗浄するこ
とによって除去され得る。次いで、検出試薬が、結合したポリペプチドを検出す
るために十分な時間の量について、固定化された抗体−ポリペプチド複合体とと
もにインキュベートされる。適切な時間の量は、一般的には、経時的に生じる結
合のレベルをアッセイすることによって決定され得る。次いで、結合していない
検出試薬が除去され、そして結合した検出試薬が、レポーター基を使用して検出
される。レポーター基を検出するために使用される方法は、レポーター基の性質
に依存する。放射活性基については、シンチレーションカウンティングまたはオ
ートラジオグラフィー法が、一般的には適切である。分光学的方法は、色素、発
光基、および蛍光基を検出するために使用され得る。ビオチンは、異なるレポー
ター基（一般的には、放射活性基、または蛍光基、または酵素）にカップリング
させられたアビジンを使用して検出され得る。酵素レポーター基は、一般的には
、基質（一般的には、特定の時間にわたる）の添加、続く反応産物の分光学的ま
たは他の分析によって、検出され得る。標準および標準添加物は、周知の技術を
使用して、サンプル中のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンのレベルを決定
するために使用され得る。
ｅｅｎ ２０（登録商標）を含有するＰＢＳ）を用いて固体支持体を洗浄するこ
とによって除去され得る。次いで、検出試薬が、結合したポリペプチドを検出す
るために十分な時間の量について、固定化された抗体−ポリペプチド複合体とと
もにインキュベートされる。適切な時間の量は、一般的には、経時的に生じる結
合のレベルをアッセイすることによって決定され得る。次いで、結合していない
検出試薬が除去され、そして結合した検出試薬が、レポーター基を使用して検出
される。レポーター基を検出するために使用される方法は、レポーター基の性質
に依存する。放射活性基については、シンチレーションカウンティングまたはオ
ートラジオグラフィー法が、一般的には適切である。分光学的方法は、色素、発
光基、および蛍光基を検出するために使用され得る。ビオチンは、異なるレポー
ター基（一般的には、放射活性基、または蛍光基、または酵素）にカップリング
させられたアビジンを使用して検出され得る。酵素レポーター基は、一般的には
、基質（一般的には、特定の時間にわたる）の添加、続く反応産物の分光学的ま
たは他の分析によって、検出され得る。標準および標準添加物は、周知の技術を
使用して、サンプル中のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンのレベルを決定
するために使用され得る。
【００６９】 転移性のガンの存在または非存在を決定するために、固体支持体に結合したま
まであるレポーター基から検出されたシグナルは、一般的には、予め決定された
カットオフ値に対応するシグナルと比較される。１つの好ましい実施態様におい
ては、転移性のガンの検出のためのカットオフ値は、固定化された抗体が検出可
能なガンを有さない患者に由来するサンプルとともにインキュベートされた場合
に得られる平均のシグナルの平均である。一般的には、シグナル（これは、予め
決定されたカットオフ値よりも統計学的に大きい（好ましくは２倍よりも大きい
））を生じるサンプルが、転移性のガンについて陽性であると考えられる。明確
なガンは、腫瘍の位置に基づいて、そして／または他の臨床的に受け入れられて
いる診断技術を使用して決定され得る。
まであるレポーター基から検出されたシグナルは、一般的には、予め決定された
カットオフ値に対応するシグナルと比較される。１つの好ましい実施態様におい
ては、転移性のガンの検出のためのカットオフ値は、固定化された抗体が検出可
能なガンを有さない患者に由来するサンプルとともにインキュベートされた場合
に得られる平均のシグナルの平均である。一般的には、シグナル（これは、予め
決定されたカットオフ値よりも統計学的に大きい（好ましくは２倍よりも大きい
））を生じるサンプルが、転移性のガンについて陽性であると考えられる。明確
なガンは、腫瘍の位置に基づいて、そして／または他の臨床的に受け入れられて
いる診断技術を使用して決定され得る。
【００７０】 本発明の抗原または結合因子を用いる使用のために適切な多数の他のアッセイ
プロトコールが存在することが、明らかである。例えば、フローサイトメトリー
技術が、Ｓｅｌｉｎｅら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０６：１３
２０−１３２４、１９９６によって記載されているように、適用され得る。上記
の記載は、例示的にのみ意図される。
プロトコールが存在することが、明らかである。例えば、フローサイトメトリー
技術が、Ｓｅｌｉｎｅら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０６：１３
２０−１３２４、１９９６によって記載されているように、適用され得る。上記
の記載は、例示的にのみ意図される。
【００７１】 別の実施態様においては、結合因子は、ガンの進行をモニターするために使用
され得る。この実施態様においては、転移性のガンの診断について上記に記載さ
れるようなアッセイが経時的に行われ得、そして反応性のポリペプチド（単数ま
たは複数）のレベルにおける変化が評価され得る。一般的には、ガンは、結合因
子によって検出されるポリペプチドのレベルが経時的に増大する患者においては
、進行している。対称的に、ガンは、反応性のポリペプチドレベルが一定のまま
であるか、または経時的に減少するかのいずれかである場合には、進行していな
い。
され得る。この実施態様においては、転移性のガンの診断について上記に記載さ
れるようなアッセイが経時的に行われ得、そして反応性のポリペプチド（単数ま
たは複数）のレベルにおける変化が評価され得る。一般的には、ガンは、結合因
子によって検出されるポリペプチドのレベルが経時的に増大する患者においては
、進行している。対称的に、ガンは、反応性のポリペプチドレベルが一定のまま
であるか、または経時的に減少するかのいずれかである場合には、進行していな
い。
【００７２】 特定のインビボの診断アッセイは、腫瘍上で直接行われ得る。１つのこのよう
なアッセイは、腫瘍細胞を結合因子と接触させる工程を包含する。結合した結合
因子は、次いで、レポーター基を介して直接または間接的に検出され得る。この
ような結合因子は、組織学的な適用においてもまた使用され得る。ＯＢ−カドヘ
リンの免疫細胞化学的染色に適切なサンプルが、任意の種々の技術によって調製
され得る。例えば、凍結またはパラフィンで包埋された組織切片が、Ｂｙｅｒｓ
ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３４：６３０−６３９、１９９４およびＣ
ｙｒら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３０：３５３−３６３、１９９２によ
ってそれぞれ記載されているように、調製され得、そしてガラススライド上に配
置され得る。あるいは、末梢血液または腹水液のような供給源から得られた細胞
は、ＢｌａｓｃｈｕｋおよびＦａｒｏｏｋｈｉ，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１３６：５
６４−５６７、１９８９によって記載されるように、ガラススライド上に固定さ
れ得る。次いで、サンプルは、標準的な技術を使用して、抗−ＯＢカドヘリン抗
体、またはＣＡＲ配列を含有する標識されたペプチドを使用してプローブされ得
る。
なアッセイは、腫瘍細胞を結合因子と接触させる工程を包含する。結合した結合
因子は、次いで、レポーター基を介して直接または間接的に検出され得る。この
ような結合因子は、組織学的な適用においてもまた使用され得る。ＯＢ−カドヘ
リンの免疫細胞化学的染色に適切なサンプルが、任意の種々の技術によって調製
され得る。例えば、凍結またはパラフィンで包埋された組織切片が、Ｂｙｅｒｓ
ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３４：６３０−６３９、１９９４およびＣ
ｙｒら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３０：３５３−３６３、１９９２によ
ってそれぞれ記載されているように、調製され得、そしてガラススライド上に配
置され得る。あるいは、末梢血液または腹水液のような供給源から得られた細胞
は、ＢｌａｓｃｈｕｋおよびＦａｒｏｏｋｈｉ，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１３６：５
６４−５６７、１９８９によって記載されるように、ガラススライド上に固定さ
れ得る。次いで、サンプルは、標準的な技術を使用して、抗−ＯＢカドヘリン抗
体、またはＣＡＲ配列を含有する標識されたペプチドを使用してプローブされ得
る。
【００７３】 上記のように、転移性のガンもまた（またはあるいは）、生物学的サンプル中
のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするｍＲＮＡのレベルに基づ
いて検出され得る。例えば、少なくとも２つのオリゴヌクレオチドプライマーが
、生物学的サンプルに由来するＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンのｃＤＮ
Ａの一部を増幅するためのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に基づくアッセイに
おいて使用され得る。ここで、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドプライマー
は、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするポリヌクレオチドに対
して特異的である（すなわち、ハイブリダイズする）。次いで、増幅されたｃＤ
ＮＡは、当該分野で周知の技術（例えば、ゲル電気泳動）を使用して分離され、
そして検出される。同様に、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードす
るポリヌクレオチドに特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブ
が、生物学的サンプル中の抗原をコードするポリヌクレオチドの存在を検出する
ためのハイブリダイゼーションアッセイにおいて使用され得る。
のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするｍＲＮＡのレベルに基づ
いて検出され得る。例えば、少なくとも２つのオリゴヌクレオチドプライマーが
、生物学的サンプルに由来するＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンのｃＤＮ
Ａの一部を増幅するためのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に基づくアッセイに
おいて使用され得る。ここで、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドプライマー
は、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするポリヌクレオチドに対
して特異的である（すなわち、ハイブリダイズする）。次いで、増幅されたｃＤ
ＮＡは、当該分野で周知の技術（例えば、ゲル電気泳動）を使用して分離され、
そして検出される。同様に、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードす
るポリヌクレオチドに特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブ
が、生物学的サンプル中の抗原をコードするポリヌクレオチドの存在を検出する
ためのハイブリダイゼーションアッセイにおいて使用され得る。
【００７４】 アッセイ条件下でのハイブリダイゼーションを可能にするために、オリゴヌク
レオチドプライマーおよびプローブは、少なくとも約６０％、好ましくは少なく
とも約７５％、そしてより好ましくは少なくとも約９０％の同一性を、少なくと
も１０ヌクレオチド、そして好ましくは少なくとも２０ヌクレオチドの長さであ
るＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするポリヌクレオチドの一部
に対して有するオリゴヌクレオチド配列を含むべきである。本明細書中で記載さ
れる診断方法において有用に使用され得るオリゴヌクレオチドプライマーおよび
／またはプローブは、好ましくは、少なくとも１０〜４０ヌクレオチドの長さで
ある。好ましい実施態様においては、オリゴヌクレオチドプライマーは、ＯＢ−
カドヘリンをコードするＤＮＡ分子の、少なくとも１０個の連続するヌクレオチ
ド、より好ましくは、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。ＰＣＲ
に基づくアッセイおよびハイブリダイゼーションアッセイの両方についての技術
は、当該分野で周知である。
レオチドプライマーおよびプローブは、少なくとも約６０％、好ましくは少なく
とも約７５％、そしてより好ましくは少なくとも約９０％の同一性を、少なくと
も１０ヌクレオチド、そして好ましくは少なくとも２０ヌクレオチドの長さであ
るＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするポリヌクレオチドの一部
に対して有するオリゴヌクレオチド配列を含むべきである。本明細書中で記載さ
れる診断方法において有用に使用され得るオリゴヌクレオチドプライマーおよび
／またはプローブは、好ましくは、少なくとも１０〜４０ヌクレオチドの長さで
ある。好ましい実施態様においては、オリゴヌクレオチドプライマーは、ＯＢ−
カドヘリンをコードするＤＮＡ分子の、少なくとも１０個の連続するヌクレオチ
ド、より好ましくは、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。ＰＣＲ
に基づくアッセイおよびハイブリダイゼーションアッセイの両方についての技術
は、当該分野で周知である。
【００７５】 １つの好ましいアッセイは、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ
）を使用する。ここで、ＰＣＲは、逆転写と組み合わせて適用される。代表的に
は、ＲＮＡは、標準的な技術（例えば、ＣｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉおよびＳａｃｃ
ｈｉ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ １６２：１５６−１５９、１９８７によって
記載されているようなグアニジンイソチオシアネート抽出）を使用してサンプル
組織から抽出され、そしてｃＤＮＡ分子を産生するように逆転写される。このｃ
ＤＮＡは、次いで、続くポリメラーゼ連鎖反応のための鋳型として使用される。
ｃＤＮＡは、プライマーのセットに対してハイブリダイズされる。プライマーの
少なくとも１つは、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの配列に対して特異
的に設計される。ＯＢ−カドヘリンプライマーのセットの例として、以下が挙げ
られるが、これらに限定されない：正方向５’−ＡＣＣＡＧＡＴＧＴＣＴＧＴＡ
ＴＣＡＧＡ−３’（配列番号３１５）および逆方向５’−ＧＴＣＴＣＣＴＧＧＴ
ＣＡＴＣＡＴＣＴＧＣＡ−３’（配列番号３１６：ＭｕｎｒｏおよびＢｌａｓｃ
ｈｕｋ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．５５：８２２−８２７、１９９６）；または
正方向５’−ＧＣＣＡＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＴＴＡＡＧＧ−３’（配列番号３１
７）および逆方向５’−ＡＴＣＡＡＡＣＣＴＧＡＧＴＡＴＣＡＧＴＡ−３’（配
列番号３１８；Ｇｏｏｍｅｒら、Ｃａｌｃｉｆ．Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｔ．６２：
５３２−５３７、１９９８）。一旦、プライマーおよび鋳型がアニーリングする
と、ＤＮＡポリメラーゼは、プライマーから伸張させるために使用され、従って
、鋳型のコピーが合成される。ＤＮＡ鎖は、次いで、変成させられ、そしてプロ
セスが、エチジウムブロマイド染色およびアガロースゲル電気泳動によっての可
視化を可能にするに十分なＤＮＡが生成されるまで、複数回繰り返される。
）を使用する。ここで、ＰＣＲは、逆転写と組み合わせて適用される。代表的に
は、ＲＮＡは、標準的な技術（例えば、ＣｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉおよびＳａｃｃ
ｈｉ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ １６２：１５６−１５９、１９８７によって
記載されているようなグアニジンイソチオシアネート抽出）を使用してサンプル
組織から抽出され、そしてｃＤＮＡ分子を産生するように逆転写される。このｃ
ＤＮＡは、次いで、続くポリメラーゼ連鎖反応のための鋳型として使用される。
ｃＤＮＡは、プライマーのセットに対してハイブリダイズされる。プライマーの
少なくとも１つは、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンの配列に対して特異
的に設計される。ＯＢ−カドヘリンプライマーのセットの例として、以下が挙げ
られるが、これらに限定されない：正方向５’−ＡＣＣＡＧＡＴＧＴＣＴＧＴＡ
ＴＣＡＧＡ−３’（配列番号３１５）および逆方向５’−ＧＴＣＴＣＣＴＧＧＴ
ＣＡＴＣＡＴＣＴＧＣＡ−３’（配列番号３１６：ＭｕｎｒｏおよびＢｌａｓｃ
ｈｕｋ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．５５：８２２−８２７、１９９６）；または
正方向５’−ＧＣＣＡＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＴＴＡＡＧＧ−３’（配列番号３１
７）および逆方向５’−ＡＴＣＡＡＡＣＣＴＧＡＧＴＡＴＣＡＧＴＡ−３’（配
列番号３１８；Ｇｏｏｍｅｒら、Ｃａｌｃｉｆ．Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｔ．６２：
５３２−５３７、１９９８）。一旦、プライマーおよび鋳型がアニーリングする
と、ＤＮＡポリメラーゼは、プライマーから伸張させるために使用され、従って
、鋳型のコピーが合成される。ＤＮＡ鎖は、次いで、変成させられ、そしてプロ
セスが、エチジウムブロマイド染色およびアガロースゲル電気泳動によっての可
視化を可能にするに十分なＤＮＡが生成されるまで、複数回繰り返される。
【００７６】 増幅は、試験患者および転移性のガンを罹患していない個体から採取された生
物学的サンプルから得られたサンプルに対して行われ得る。増幅反応は、２倍の
倍率（ｔｗｏ ｏｒｄｅｒ ｏｆ ｍａｇｎｉｔｕｄｅ）で進むｃＤＮＡのいく
つかの希釈物に対して行われ得る。非ガン性のサンプルの同じ希釈物と比較した
場合に、試験患者サンプルのいくつかの希釈物中での発現における統計学的に有
意な（好ましくは、少なくとも２倍）の増大は、代表的には、転移性のガンの存
在について陽性と考えられる。ポリヌクレオチドプローブもまた、腫瘍に対して
直接行われたインビボでの診断アッセイにおいて使用され得る。
物学的サンプルから得られたサンプルに対して行われ得る。増幅反応は、２倍の
倍率（ｔｗｏ ｏｒｄｅｒ ｏｆ ｍａｇｎｉｔｕｄｅ）で進むｃＤＮＡのいく
つかの希釈物に対して行われ得る。非ガン性のサンプルの同じ希釈物と比較した
場合に、試験患者サンプルのいくつかの希釈物中での発現における統計学的に有
意な（好ましくは、少なくとも２倍）の増大は、代表的には、転移性のガンの存
在について陽性と考えられる。ポリヌクレオチドプローブもまた、腫瘍に対して
直接行われたインビボでの診断アッセイにおいて使用され得る。
【００７７】 （診断キット） 本発明はさらに、任意の上記の診断方法における使用のためのキットを提供す
る。このようなキットは、代表的には、診断アッセイを行うために必要な２つ以
上の成分を含む。成分は、化合物、試薬、容器、および／または等価物であり得
る。例えば、キット中の１つの容器は、本明細書中に記載されるような結合因子
を含み得る。上記のような支持物質に対して付着させられたこのような結合因子
が、提供され得る。１つ以上のさらなる容器は、このアッセイにおいて使用され
る試薬または緩衝液のようなエレメントを封入し得る。このようなキットはまた
、またはあるいは、上記のような検出試薬を含み得、これは、結合の直接的また
は間接的な検出のために適切な、レポーター基を含む。
る。このようなキットは、代表的には、診断アッセイを行うために必要な２つ以
上の成分を含む。成分は、化合物、試薬、容器、および／または等価物であり得
る。例えば、キット中の１つの容器は、本明細書中に記載されるような結合因子
を含み得る。上記のような支持物質に対して付着させられたこのような結合因子
が、提供され得る。１つ以上のさらなる容器は、このアッセイにおいて使用され
る試薬または緩衝液のようなエレメントを封入し得る。このようなキットはまた
、またはあるいは、上記のような検出試薬を含み得、これは、結合の直接的また
は間接的な検出のために適切な、レポーター基を含む。
【００７８】 あるいは、キットは、生物学的サンプル中のＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カド
ヘリンをコードするｍＲＮＡのレベルを検出するように設計され得る。このよう
なキットは、一般的には、上記のような、少なくとも１つのオリゴヌクレオチド
プローブまたはプライマー（これは、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンを
コードするポリヌクレオチドにハイブリダイズする）を含む。このようなオリゴ
ヌクレオチドは、例えば、ＰＣＲまたはハイブリダイゼーションアッセイにおい
て使用され得る。このようなキット中に存在し得るさらなる成分として、ＯＢ−
カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするポリヌクレオチドの検出を容易に
するための、第２のオリゴヌクレオチドおよび／もしくは診断試薬、または容器
が挙げられる。
ヘリンをコードするｍＲＮＡのレベルを検出するように設計され得る。このよう
なキットは、一般的には、上記のような、少なくとも１つのオリゴヌクレオチド
プローブまたはプライマー（これは、ＯＢ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンを
コードするポリヌクレオチドにハイブリダイズする）を含む。このようなオリゴ
ヌクレオチドは、例えば、ＰＣＲまたはハイブリダイゼーションアッセイにおい
て使用され得る。このようなキット中に存在し得るさらなる成分として、ＯＢ−
カドヘリンまたはＮ−カドヘリンをコードするポリヌクレオチドの検出を容易に
するための、第２のオリゴヌクレオチドおよび／もしくは診断試薬、または容器
が挙げられる。
【００７９】 以下の実施例は、例示の目的によって提供され、限定の目的によって提供され
るわけではない。
るわけではない。
【００８０】 （実施例） （実施例１） （ヒトの乳ガン細胞の接着の崩壊） この実施例は、ヒトの乳房の上皮細胞の接着を崩壊させるための、ＯＢ−カド
ヘリン細胞接着認識配列を含有する代表的な直鎖状のペプチドの能力を例示する
。
ヘリン細胞接着認識配列を含有する代表的な直鎖状のペプチドの能力を例示する
。
【００８１】 ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト転移性乳ガン細胞（Ｌｏｍｂａｒｄｉ Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｒｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）を、これら
の実験において使用した。これらは、カドヘリン−１１（ＯＢ−カドヘリンとし
てもまた公知）を発現するが、Ｎ−カドヘリンまたはＥ−カドヘリンは発現しな
い。細胞をガラススライド上に配置し（約５０，０００個の細胞）、そして５％
の血清を含有するＤＭＥＭ中で２４時間培養した。ペプチド（Ｎ−Ａｃ−ＩＦＶ
ＩＤＤＫＳＧ−ＮＨ2（配列番号９）およびＨ−ＩＦＶＩＤＤＫＳＧ−ＯＨ（配
列番号３））を、滅菌水（１０ｍｇ／ｍｌ）中に溶解させ、そしてペプチドスト
ック溶液のそれぞれ１００μｌを、５％の血清を含有する１ｍｌのＤＭＥＭに添
加した。コントロール細胞は、培地に対して添加した１００μｌの水を含んだ。
細胞を、位相差顕微鏡によってモニターした。２４時間後に、細胞をホルムアル
デヒドで固定した。２４時間後には、ペプチドＨ−ＩＦＶＩＤＤＫＳＧ−ＯＨ（
配列番号３）および水のいずれもが、細胞の形態に対して影響を与えなかった（
図４Ａ）。水またはＨ−ＩＦＶＩＤＤＫＳＧ−ＯＨ（配列番号３）のいずれかで
処理した細胞は平らなままであり、そして基盤に対して十分に付着していたまま
であった。対照的に、Ｎ−Ａｃ−ＩＦＶＩＤＤＫＳＧ−ＮＨ2（配列番号９）で
処理した細胞は、互いに丸い形状をとり、そして基盤に対して十分には付着して
いなかった（図４Ａおよび４Ｂ；矢印は丸い細胞を示す）。これらの結果は、ペ
プチドＮ−Ａｃ−ＩＦＶＩＤＤＫＳＧ−ＮＨ2（配列番号９）が細胞の接着を妨
害することを実証する。このペプチドのアミノ酸配列は、ＯＢ−カドヘリンの第
１の細胞外ドメイン中に見られるものと同一である。これらの結果は、これらの
転移性の乳ガン細胞がＯＢ−カドヘリンを発現することを示す。
ｒ Ｒｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）を、これら
の実験において使用した。これらは、カドヘリン−１１（ＯＢ−カドヘリンとし
てもまた公知）を発現するが、Ｎ−カドヘリンまたはＥ−カドヘリンは発現しな
い。細胞をガラススライド上に配置し（約５０，０００個の細胞）、そして５％
の血清を含有するＤＭＥＭ中で２４時間培養した。ペプチド（Ｎ−Ａｃ−ＩＦＶ
ＩＤＤＫＳＧ−ＮＨ2（配列番号９）およびＨ−ＩＦＶＩＤＤＫＳＧ−ＯＨ（配
列番号３））を、滅菌水（１０ｍｇ／ｍｌ）中に溶解させ、そしてペプチドスト
ック溶液のそれぞれ１００μｌを、５％の血清を含有する１ｍｌのＤＭＥＭに添
加した。コントロール細胞は、培地に対して添加した１００μｌの水を含んだ。
細胞を、位相差顕微鏡によってモニターした。２４時間後に、細胞をホルムアル
デヒドで固定した。２４時間後には、ペプチドＨ−ＩＦＶＩＤＤＫＳＧ−ＯＨ（
配列番号３）および水のいずれもが、細胞の形態に対して影響を与えなかった（
図４Ａ）。水またはＨ−ＩＦＶＩＤＤＫＳＧ−ＯＨ（配列番号３）のいずれかで
処理した細胞は平らなままであり、そして基盤に対して十分に付着していたまま
であった。対照的に、Ｎ−Ａｃ−ＩＦＶＩＤＤＫＳＧ−ＮＨ2（配列番号９）で
処理した細胞は、互いに丸い形状をとり、そして基盤に対して十分には付着して
いなかった（図４Ａおよび４Ｂ；矢印は丸い細胞を示す）。これらの結果は、ペ
プチドＮ−Ａｃ−ＩＦＶＩＤＤＫＳＧ−ＮＨ2（配列番号９）が細胞の接着を妨
害することを実証する。このペプチドのアミノ酸配列は、ＯＢ−カドヘリンの第
１の細胞外ドメイン中に見られるものと同一である。これらの結果は、これらの
転移性の乳ガン細胞がＯＢ−カドヘリンを発現することを示す。
【００８２】 （実施例２） （転移性の卵巣腫瘍細胞中のＯＢ−カドヘリンの検出） この実施例は、卵巣のガン腫細胞中でのＯＢ−カドヘリンの発現と転移との間
の関係を例示する。
の関係を例示する。
【００８３】 ＲＴ−ＰＣＲアプローチを、２つの卵巣ガン細胞株：ＳＫＯＶ３（転移性の細
胞株）およびＯＶＣＡＲ３（非侵襲性の細胞株）中のＯＢ−カドヘリンのｍＲＮ
Ａ転写物の存在をアッセイするために使用した。ｃＤＮＡを、１μｇの総ＲＮＡ
から、Ｍ−ＭＬＶ−逆転写酵素（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ、Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，
ＯＮ）によって、プライマーとしてランダムなヘキサマーを使用して合成した。
ＰＣＲを、第１鎖の反応の内容物、およびＯＢ−カドヘリン特異的プライマー、
およびＴａｑポリメラーゼ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｌａｖ
ａｌ，Ｑｕｅ．，Ｃａｎａｄａ）を使用して行った。使用したＯＢ−カドヘリン
特異的プライマーは以下のとおりである： 正方向５’−ＡＣＣＡＧＡＴＧＴＣＴＧＴＡＴＣＡＧＡ−３’（配列番号３１
５）；および 逆方向５’−ＧＴＣＴＣＣＴＧＧＴＣＡＴＣＡＴＣＴＧＣＡ−３’（配列番号
３１６） （ＭｕｎｒｏおよびＢｌａｓｃｈｕｋ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．５５：８２２
−８２７、１９９６）。使用したＲＮＡの品質を確認するために、ＰＣＲをまた
、ハウスキーピング遺伝子、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ
（ＨＰＲＴ）についてのプライマーを使用して行った。使用したＨＰＲＴ特異的
プライマーは、以下のとおりであった： 正方向５’−ＣＣＴＧＣＴＧＧＡＴＴＡＣＡＴＴＡＡＡＧＣＡＣＴＧ−３’（
配列番号３１９）；および 逆方向５’−ＧＴＣＡＡＧＧＧＣＡＴＡＴＣＣＡＡＣＡＡＣＡＡＡＣ−３’（
配列番号３２０） （Ｍｅｌｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：２
１４７−２１５１，１９８４）。サイクルプログラムは、以下のとおりであった
：９５℃で３０秒間の変性；５８〜６０℃で４５秒間のアニーリング；７２℃で
１分間の重合；３０サイクルを繰り返す。全てのＰＣＲ反応を、ＰＣＲ試薬の混
入についてのコントロールとしてｃＤＮＡを含まない反応物と並行して行った。
生成物を、エチジウムブロマイドで染色したアガロースゲル電気泳動によって同
定した（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９
８９）。
胞株）およびＯＶＣＡＲ３（非侵襲性の細胞株）中のＯＢ−カドヘリンのｍＲＮ
Ａ転写物の存在をアッセイするために使用した。ｃＤＮＡを、１μｇの総ＲＮＡ
から、Ｍ−ＭＬＶ−逆転写酵素（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ、Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，
ＯＮ）によって、プライマーとしてランダムなヘキサマーを使用して合成した。
ＰＣＲを、第１鎖の反応の内容物、およびＯＢ−カドヘリン特異的プライマー、
およびＴａｑポリメラーゼ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｌａｖ
ａｌ，Ｑｕｅ．，Ｃａｎａｄａ）を使用して行った。使用したＯＢ−カドヘリン
特異的プライマーは以下のとおりである： 正方向５’−ＡＣＣＡＧＡＴＧＴＣＴＧＴＡＴＣＡＧＡ−３’（配列番号３１
５）；および 逆方向５’−ＧＴＣＴＣＣＴＧＧＴＣＡＴＣＡＴＣＴＧＣＡ−３’（配列番号
３１６） （ＭｕｎｒｏおよびＢｌａｓｃｈｕｋ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．５５：８２２
−８２７、１９９６）。使用したＲＮＡの品質を確認するために、ＰＣＲをまた
、ハウスキーピング遺伝子、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ
（ＨＰＲＴ）についてのプライマーを使用して行った。使用したＨＰＲＴ特異的
プライマーは、以下のとおりであった： 正方向５’−ＣＣＴＧＣＴＧＧＡＴＴＡＣＡＴＴＡＡＡＧＣＡＣＴＧ−３’（
配列番号３１９）；および 逆方向５’−ＧＴＣＡＡＧＧＧＣＡＴＡＴＣＣＡＡＣＡＡＣＡＡＡＣ−３’（
配列番号３２０） （Ｍｅｌｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：２
１４７−２１５１，１９８４）。サイクルプログラムは、以下のとおりであった
：９５℃で３０秒間の変性；５８〜６０℃で４５秒間のアニーリング；７２℃で
１分間の重合；３０サイクルを繰り返す。全てのＰＣＲ反応を、ＰＣＲ試薬の混
入についてのコントロールとしてｃＤＮＡを含まない反応物と並行して行った。
生成物を、エチジウムブロマイドで染色したアガロースゲル電気泳動によって同
定した（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９
８９）。
【００８４】 結果を、図５に示す。これは、ＳＫＯＶ３（レーン１）およびＯＶＣＡＲ３（
レーン２）によるＲＴ−ＰＣＲ産物を示す。使用したプライマーは、示すように
、ＯＢ−カドヘリン（ＯＢ−ｃａｄ）およびヒポキサンチンホスホリボシルトラ
ンスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）に特異的であり、それぞれ、７４５ｂｐおよび３５
２ｂｐのＰＣＲ産物が予想される。生成物をエチジウムブロマイドで染色し、そ
してアガロースゲル電気泳動によって分離し、そして全ての予想される大きさが
存在した。結果は、ＯＢ−カドヘリンが転移性の卵巣ガン細胞によって発現され
、そして非侵襲性の卵巣ガン細胞によっては発現されないことを示す。
レーン２）によるＲＴ−ＰＣＲ産物を示す。使用したプライマーは、示すように
、ＯＢ−カドヘリン（ＯＢ−ｃａｄ）およびヒポキサンチンホスホリボシルトラ
ンスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）に特異的であり、それぞれ、７４５ｂｐおよび３５
２ｂｐのＰＣＲ産物が予想される。生成物をエチジウムブロマイドで染色し、そ
してアガロースゲル電気泳動によって分離し、そして全ての予想される大きさが
存在した。結果は、ＯＢ−カドヘリンが転移性の卵巣ガン細胞によって発現され
、そして非侵襲性の卵巣ガン細胞によっては発現されないことを示す。
【００８５】 （実施例３） （白血病の細胞中のＯＢ−カドヘリンの検出） この実施例は、白血病患者のリンパ球中のＯＢ−カドヘリンの発現を例示する
。
。
【００８６】 実施例２に記載したＲＴ−ＰＣＲアプローチを、Ｂ細胞の慢性リンパ球性白血
病（Ｂ−ＣＬＬ）を患う患者から抽出したリンパ球中のＯＢ−カドヘリンのｍＲ
ＮＡ転写物の存在をアッセイするために使用した。ＲＴ−ＰＣＲ産物（図６に示
す）を、ヒトのＢ−ＣＬＬ患者（レーン１）およびマウスの肝臓（レーン２）の
リンパ球から生成した。使用したプライマーは、ＯＢ−カドヘリン（ＯＢ−ｃａ
ｄ、上段のパネル）およびヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（
ＨＰＲＴ、下段のパネル）に対して特異的であり、それぞれ、７４５ｂｐおよび
３５２ｂｐのＰＣＲ産物が予想される。生成物をエチジウムブロマイドで染色し
、そしてアガロースゲル電気泳動によって分離し、そして全ての予想される大き
さが存在した。結果は、白血病患者のリンパ球がＯＢ−カドヘリンを発現するこ
とを示す。
病（Ｂ−ＣＬＬ）を患う患者から抽出したリンパ球中のＯＢ−カドヘリンのｍＲ
ＮＡ転写物の存在をアッセイするために使用した。ＲＴ−ＰＣＲ産物（図６に示
す）を、ヒトのＢ−ＣＬＬ患者（レーン１）およびマウスの肝臓（レーン２）の
リンパ球から生成した。使用したプライマーは、ＯＢ−カドヘリン（ＯＢ−ｃａ
ｄ、上段のパネル）およびヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（
ＨＰＲＴ、下段のパネル）に対して特異的であり、それぞれ、７４５ｂｐおよび
３５２ｂｐのＰＣＲ産物が予想される。生成物をエチジウムブロマイドで染色し
、そしてアガロースゲル電気泳動によって分離し、そして全ての予想される大き
さが存在した。結果は、白血病患者のリンパ球がＯＢ−カドヘリンを発現するこ
とを示す。
【００８７】 （実施例４） （転移性のガン腫細胞中のＮ−カドヘリンの発現） この実施例は、卵巣のガン腫細胞株中の、Ｎ−カドヘリンと転移の可能性との
間の相関関係を例示する。
間の相関関係を例示する。
【００８８】 Ｅ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリンの発現を、上記のようなＲＴ−ＰＣＲア
プローチを使用して、一連の卵巣のガン腫細胞株において評価した。使用したＥ
−カドヘリン特異的プライマーは以下のとおりであった： 正方向５’−ＣＣＴＴＣＣＣＣＣＡＡＣＡＣＧＴＣＣＣＣＣＣ−３’（配列番
号３２１）；および 逆方向５’−ＴＣＴＣＣＡＣＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＡＴＣ−３’（配列番号３
２２） （ＭｕｎｒｏおよびＢｌａｓｃｈｕｋ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．５５：８２２
−８２７、１９９６）。使用したＮ−カドヘリン特異的プライマーは以下のとお
りであった： 正方向５’−ＣＡＡＧＡＧＣＴＴＧＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＧ−３’（配列番号
３２３）；および 逆方向５’−ＣＡＴＴＴＧＧＡＴＣＡＴＣＣＧＣＡＴＣ−３’（配列番号３２
４） （ＭｕｎｒｏおよびＢｌａｓｃｈｕｋ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．５５：８２２
−８２７、１９９６）。
プローチを使用して、一連の卵巣のガン腫細胞株において評価した。使用したＥ
−カドヘリン特異的プライマーは以下のとおりであった： 正方向５’−ＣＣＴＴＣＣＣＣＣＡＡＣＡＣＧＴＣＣＣＣＣＣ−３’（配列番
号３２１）；および 逆方向５’−ＴＣＴＣＣＡＣＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＡＴＣ−３’（配列番号３
２２） （ＭｕｎｒｏおよびＢｌａｓｃｈｕｋ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．５５：８２２
−８２７、１９９６）。使用したＮ−カドヘリン特異的プライマーは以下のとお
りであった： 正方向５’−ＣＡＡＧＡＧＣＴＴＧＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＧ−３’（配列番号
３２３）；および 逆方向５’−ＣＡＴＴＴＧＧＡＴＣＡＴＣＣＧＣＡＴＣ−３’（配列番号３２
４） （ＭｕｎｒｏおよびＢｌａｓｃｈｕｋ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．５５：８２２
−８２７、１９９６）。
【００８９】 試験した細胞株は、ＯＶＣＡＲ−３（Ｈａｍｉｌｔｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓｅａｒｃｈ ４３：５３７９−８９、１９８３）；ＳＷ６２６（Ｒｉｐａｍ
ｏｎｔｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐ
ｙ ２４：１３−１８、１９８７）；ＣａＯＶ３、ＳＫＯＶ３、およびＨＥＹ（
Ｂｕｉｃｋら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４５：３６６８−７６、１９
８５）を含んだ。これらの細胞（ＨＥＹを除く）はまた、アメリカンタイプカル
チャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌ
ｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ））から入手可能である。
ｅｓｅａｒｃｈ ４３：５３７９−８９、１９８３）；ＳＷ６２６（Ｒｉｐａｍ
ｏｎｔｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐ
ｙ ２４：１３−１８、１９８７）；ＣａＯＶ３、ＳＫＯＶ３、およびＨＥＹ（
Ｂｕｉｃｋら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４５：３６６８−７６、１９
８５）を含んだ。これらの細胞（ＨＥＹを除く）はまた、アメリカンタイプカル
チャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌ
ｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ））から入手可能である。
【００９０】 これらの分析の結果を、以下の表Ｉに示す。ここでは、検出可能なＰＣＲ産物
を「＋」で示し、そして検出できないＰＣＲ産物を「−」で示す。
を「＋」で示し、そして検出できないＰＣＲ産物を「−」で示す。
【００９１】
【表１】 （実施例５） （乳房の腫瘍および転移性の細胞におけるＯＢ−カドヘリンの検出） この実施例は、原発性の乳房の腫瘍細胞および骨に転移した乳ガン細胞上での
ＯＢ−カドヘリンの発現を例示する。
ＯＢ−カドヘリンの発現を例示する。
【００９２】 パラフィンの切片（５マイクロンの厚さ）の原発性の腫瘍または骨の転移（Ｌ
ｏｍｂａｒｄｉ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ
Ｃｏｒｅ）を、以下のように脱蝋し、そして再度水和した：キシレン−１５分
ごとに３回交換；無水エタノール−５分ごとに２回交換；９５％エタノール−５
分ごとに２回交換；７０％エタノール−５分ごとに２回交換；脱イオン水中で３
回の素早いリンス。スライドを、電子レンジが可能なホルダーに配置し、そして
１Ｌの０．０１Ｍのクエン酸緩衝液を含有するｐｙｒｅｘ ｌｏａｆ皿中に浸し
た。皿をプラスチックのラップでゆるくカバーし、そしてＴＡＰＰＡＮ ＳＰＥ
ＥＤｗａｖｅ １０００電子レンジ中に配置し、そして最も高い設定で１５分間
電子レンジにかけた。電子レンジにかけた後、スライドを緩衝液中で室温まで冷
却した。
ｏｍｂａｒｄｉ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ
Ｃｏｒｅ）を、以下のように脱蝋し、そして再度水和した：キシレン−１５分
ごとに３回交換；無水エタノール−５分ごとに２回交換；９５％エタノール−５
分ごとに２回交換；７０％エタノール−５分ごとに２回交換；脱イオン水中で３
回の素早いリンス。スライドを、電子レンジが可能なホルダーに配置し、そして
１Ｌの０．０１Ｍのクエン酸緩衝液を含有するｐｙｒｅｘ ｌｏａｆ皿中に浸し
た。皿をプラスチックのラップでゆるくカバーし、そしてＴＡＰＰＡＮ ＳＰＥ
ＥＤｗａｖｅ １０００電子レンジ中に配置し、そして最も高い設定で１５分間
電子レンジにかけた。電子レンジにかけた後、スライドを緩衝液中で室温まで冷
却した。
【００９３】 次いで、スライドを、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）のディッシュ上に配
置し、そしてそれぞれ２分間、２回リンスした。外因性のペルオキシダーゼを、
４０秒間、各切片に対してメタノール中の３０％のペルオキシドの溶液を配置す
ることによって、次いで、ＰＢＳ中でリンスすることによってブロックした。次
いで、スライドを、１５０ｍｍの皿中に配置し、そして１０％のヤギの血清（ブ
ロッキング溶液）を、各切片に適用した。湿らせたキムワイプを、スライドの周
りに配置し、そしてディッシュをカバーし、そして３７℃にて１５分間インキュ
ベートした。切片をブロックしながら、アフィニティー精製したウサギの抗−Ｏ
Ｂ−カドヘリン抗体（Ｚｙｍｅｄ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，
ＣＡ）を、１０μｇ／ｍｌの濃度になるようにＰＢＳ中で調製した。リンスを行
わずに、切片に由来する過剰のヤギの血清をブロッティングだけ行い、一次抗体
溶液を、各切片に適用し（１００マイクロメートル／切片）、ディッシュをカバ
ーし、そしてプラスチックラップ中に包み、そして４℃にて１６時間配置した。
置し、そしてそれぞれ２分間、２回リンスした。外因性のペルオキシダーゼを、
４０秒間、各切片に対してメタノール中の３０％のペルオキシドの溶液を配置す
ることによって、次いで、ＰＢＳ中でリンスすることによってブロックした。次
いで、スライドを、１５０ｍｍの皿中に配置し、そして１０％のヤギの血清（ブ
ロッキング溶液）を、各切片に適用した。湿らせたキムワイプを、スライドの周
りに配置し、そしてディッシュをカバーし、そして３７℃にて１５分間インキュ
ベートした。切片をブロックしながら、アフィニティー精製したウサギの抗−Ｏ
Ｂ−カドヘリン抗体（Ｚｙｍｅｄ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，
ＣＡ）を、１０μｇ／ｍｌの濃度になるようにＰＢＳ中で調製した。リンスを行
わずに、切片に由来する過剰のヤギの血清をブロッティングだけ行い、一次抗体
溶液を、各切片に適用し（１００マイクロメートル／切片）、ディッシュをカバ
ーし、そしてプラスチックラップ中に包み、そして４℃にて１６時間配置した。
【００９４】 切片を室温にし、次いで、さらなる時間、３７℃にて放置した。ついで、スラ
イドを２分間、それぞれの回についてＰＢＳを用いて３回リンスした。ビオチン
化したヤギ抗−ウサギ二次抗体（Ｚｙｍｅｄ）を各切片に適用し、そしてスライ
ドを３７℃にて１０分間インキュベートした。スライドを上記のように再度ＰＢ
Ｓでリンスした。ストレプトアビジンペルオキシダーゼ（Ｚｙｍｅｄ）を各切片
に適用し、そしてスライドを１０分間３７℃にてインキュベートした。スライド
を、上記のように再度ＰＢＳでリンスした。
イドを２分間、それぞれの回についてＰＢＳを用いて３回リンスした。ビオチン
化したヤギ抗−ウサギ二次抗体（Ｚｙｍｅｄ）を各切片に適用し、そしてスライ
ドを３７℃にて１０分間インキュベートした。スライドを上記のように再度ＰＢ
Ｓでリンスした。ストレプトアビジンペルオキシダーゼ（Ｚｙｍｅｄ）を各切片
に適用し、そしてスライドを１０分間３７℃にてインキュベートした。スライド
を、上記のように再度ＰＢＳでリンスした。
【００９５】 最後のＰＢＳでのリンス中に、ＡＥＣ Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ溶液を、Ｚｙｍｅ
ｄの説明書に従って調製し、そして１００μｌを各切片に適用した。切片を１０
分間室温に放置して、色の反応を起こさせた。次いで、スライドを脱イオン水中
に浸して反応を停止させた。最後に、切片を、各切片上に数滴のＭａｙｅｒｓ
Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ（Ｚｙｍｅｄ）を１分間置くことによって、対比染色し
た。次いで、スライドを水道水でリンスし、続いてＰＢＳでリンスした。次いで
、スライドを脱イオン水に戻し、そしてＧＶＡマウント（Ｚｙｍｅｄ）を使用し
て固定した。
ｄの説明書に従って調製し、そして１００μｌを各切片に適用した。切片を１０
分間室温に放置して、色の反応を起こさせた。次いで、スライドを脱イオン水中
に浸して反応を停止させた。最後に、切片を、各切片上に数滴のＭａｙｅｒｓ
Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ（Ｚｙｍｅｄ）を１分間置くことによって、対比染色し
た。次いで、スライドを水道水でリンスし、続いてＰＢＳでリンスした。次いで
、スライドを脱イオン水に戻し、そしてＧＶＡマウント（Ｚｙｍｅｄ）を使用し
て固定した。
【００９６】 原発性の腫瘍および転移性のの沈着物についての結果を、図１１および図１２
に示す。図１１は、原発性の乳房の腫瘍を示す。陽性の染色を、腫瘍の一群の端
の全ての細胞上で観察した。ＯＢ−カドヘリンは全ての細胞の表面で発現される
（すなわち、発現は、細胞対細胞の接触部位に限定されない）。図１２は、大腿
骨中の転移性の沈着物を示す。この沈着物は、図１１中に示す原発性の腫瘍から
生じた。ＯＢ−カドヘリン染色は、ほとんどの腫瘍の一群において細胞と細胞と
の境界に関連する。
に示す。図１１は、原発性の乳房の腫瘍を示す。陽性の染色を、腫瘍の一群の端
の全ての細胞上で観察した。ＯＢ−カドヘリンは全ての細胞の表面で発現される
（すなわち、発現は、細胞対細胞の接触部位に限定されない）。図１２は、大腿
骨中の転移性の沈着物を示す。この沈着物は、図１１中に示す原発性の腫瘍から
生じた。ＯＢ−カドヘリン染色は、ほとんどの腫瘍の一群において細胞と細胞と
の境界に関連する。
【００９７】 これらの結果は、乳房の腫瘍および転移性の細胞がＯＢ−カドヘリンを発現す
ること、および転移性の細胞が全ての細胞の表面上でＯＢ−カドヘリンを発現す
ることを示す。さらに、これらの結果は、ＯＢ−カドヘリンの発現についてのア
ッセイに基づく乳ガンおよび転移性のガンの検出を確認する。
ること、および転移性の細胞が全ての細胞の表面上でＯＢ−カドヘリンを発現す
ることを示す。さらに、これらの結果は、ＯＢ−カドヘリンの発現についてのア
ッセイに基づく乳ガンおよび転移性のガンの検出を確認する。
【００９８】 上記から、本発明の特定の実施態様が、例示の目的のために本明細書中に記載
されているが、種々の改変が、本発明の精神および範囲から逸脱することなく行
われ得ることが、明らかである。従って、本発明は、添付の特許請求の範囲によ
る場合を除いて、限定されない。
されているが、種々の改変が、本発明の精神および範囲から逸脱することなく行
われ得ることが、明らかである。従って、本発明は、添付の特許請求の範囲によ
る場合を除いて、限定されない。
【図１】 図１Ａは、古典的なＣＡＤの構造を示す図である。５個の細胞外ドメインが、
ＥＣ１−ＥＣ５で示され、血漿膜（ＰＭ）を横切る疎水性ドメインが、ＴＭで示
され、そして２つの細胞質性ドメインが、ＣＰ１およびＣＰ２で示される。カル
シウム結合モチーフは、ＤＸＮＤＮ（配列番号１）、ＤＸＤおよびＬＤＲＥ（配
列番号２）で示される。ＣＡＲ配列であるＨＡＶは、ＥＣ１中に示される。細胞
質性のタンパク質であるβ−カテニン（β）、α−カテニン（α）、およびα−
アクチニン（ＡＣＴ）（これらは、ＣＡＤと微小繊維（ＭＦ）との間の相互作用
を媒介する）もまた、示される。図１Ｂは、ＯＢ−カドヘリンとして公知の非定
型のＣＡＤの構造を示す図である。ＣＡＲ配列であるＩＦＶＩＤＤＫＳＧ（配列
番号３）が、ＥＣ１中に示される。
ＥＣ１−ＥＣ５で示され、血漿膜（ＰＭ）を横切る疎水性ドメインが、ＴＭで示
され、そして２つの細胞質性ドメインが、ＣＰ１およびＣＰ２で示される。カル
シウム結合モチーフは、ＤＸＮＤＮ（配列番号１）、ＤＸＤおよびＬＤＲＥ（配
列番号２）で示される。ＣＡＲ配列であるＨＡＶは、ＥＣ１中に示される。細胞
質性のタンパク質であるβ−カテニン（β）、α−カテニン（α）、およびα−
アクチニン（ＡＣＴ）（これらは、ＣＡＤと微小繊維（ＭＦ）との間の相互作用
を媒介する）もまた、示される。図１Ｂは、ＯＢ−カドヘリンとして公知の非定
型のＣＡＤの構造を示す図である。ＣＡＲ配列であるＩＦＶＩＤＤＫＳＧ（配列
番号３）が、ＥＣ１中に示される。
【図２】 図２は、代表的な哺乳動物のＯＢ−カドヘリンＥＣ１ドメインのアミノ酸配列
を提供する：ヒトのＯＢ−カドヘリン（配列番号４）およびマウスのＯＢ−カド
ヘリン（配列番号５）。
を提供する：ヒトのＯＢ−カドヘリン（配列番号４）およびマウスのＯＢ−カド
ヘリン（配列番号５）。
【図３】 図３は、哺乳動物の古典的なカドヘリンＥＣ１ドメインのアミノ酸配列を提供
する：ヒトのＮ−カドヘリン（配列番号６）、マウスのＮ−カドヘリン（配列番
号７）、およびウシのＮ−カドヘリン（配列番号８）。
する：ヒトのＮ−カドヘリン（配列番号６）、マウスのＮ−カドヘリン（配列番
号７）、およびウシのＮ−カドヘリン（配列番号８）。
【図４】 図４Ａ−４Ｃは、代表的な直鎖状のＯＢ−カドヘリンペプチドの存在下（図４
Ｂおよび４Ｃ）および非存在下（図４Ａ）での、ヒトの乳ガン細胞の培養を示す
写真である。図４Ａは、１００μｌの水／１ｍｌの培養培地に対する暴露の２４
時間後の細胞を示す（倍率２００×）。図４Ｂおよび４Ｃは、１ｍＬの培養培地
あたり１０ｍｇ／ｍＬのＮ−Ａｃ−ＩＦＶＩＤＤＫＳＧ−ＮＨ2（配列番号９）
を含有する１００μＬの溶液に対する暴露の２４時間後の細胞を示す（それぞれ
、倍率２００×および１００×）。矢印は、丸くなった細胞を示す。
Ｂおよび４Ｃ）および非存在下（図４Ａ）での、ヒトの乳ガン細胞の培養を示す
写真である。図４Ａは、１００μｌの水／１ｍｌの培養培地に対する暴露の２４
時間後の細胞を示す（倍率２００×）。図４Ｂおよび４Ｃは、１ｍＬの培養培地
あたり１０ｍｇ／ｍＬのＮ−Ａｃ−ＩＦＶＩＤＤＫＳＧ−ＮＨ2（配列番号９）
を含有する１００μＬの溶液に対する暴露の２４時間後の細胞を示す（それぞれ
、倍率２００×および１００×）。矢印は、丸くなった細胞を示す。
【図５】 図５は、転移性のヒトの卵巣ガン細胞中のＯＢ−カドヘリンの存在を検出する
ための、ＰＣＲ分析の結果を示す写真である。しかし、十分に分化したヒトの卵
巣ガン細胞中にはＯＢ−カドヘリンは存在しない。２つの細胞株に由来するＲＴ
−ＰＣＲ産物を示す：レーン１にはＳＫＯＶ３、そしてレーン２にはＯＶＣＡＲ
３．使用したプライマーは、示すように、ＯＢカドヘリン（ＯＢ−ｃａｄ）およ
びヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）に特異的であ
った。それぞれ、７４５ｂｐおよび３５２ｂｐのＰＣＲ産物が予想される。産物
をエチジウムブロマイドで染色し、そしてアガロースゲル電気泳動によって解析
した。レーンＭは、１ｋｂのラダー（ｌａｄｄｅｒ）を示す（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲ
Ｌ）。
ための、ＰＣＲ分析の結果を示す写真である。しかし、十分に分化したヒトの卵
巣ガン細胞中にはＯＢ−カドヘリンは存在しない。２つの細胞株に由来するＲＴ
−ＰＣＲ産物を示す：レーン１にはＳＫＯＶ３、そしてレーン２にはＯＶＣＡＲ
３．使用したプライマーは、示すように、ＯＢカドヘリン（ＯＢ−ｃａｄ）およ
びヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）に特異的であ
った。それぞれ、７４５ｂｐおよび３５２ｂｐのＰＣＲ産物が予想される。産物
をエチジウムブロマイドで染色し、そしてアガロースゲル電気泳動によって解析
した。レーンＭは、１ｋｂのラダー（ｌａｄｄｅｒ）を示す（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲ
Ｌ）。
【図６】 図６は、白血球細胞中のＯＢカドヘリンの存在を検出するＰＣＲ分析の結果を
示す写真である。ＲＴ−ＰＣＲ産物を、ヒトのＢ−ＣＬＬ患者（レーン１）およ
びマウスの肝臓（レーン２）のリンパ球から作製した。使用したプライマーは、
ＯＢカドヘリン（ＯＢ−ｃａｄ、上段のパネル）およびヒポキサンチンホスホリ
ボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ、下段のパネル）に特異的であった。それ
ぞれ、７４５ｂｐおよび３５２ｂｐのＰＣＲ産物が予想される。生成物をエチジ
ウムブロマイドで染色し、そしてアガロースゲル電気泳動によって解析した。レ
ーンＭは、１ｋｂのラダーを示す（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）。
示す写真である。ＲＴ−ＰＣＲ産物を、ヒトのＢ−ＣＬＬ患者（レーン１）およ
びマウスの肝臓（レーン２）のリンパ球から作製した。使用したプライマーは、
ＯＢカドヘリン（ＯＢ−ｃａｄ、上段のパネル）およびヒポキサンチンホスホリ
ボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ、下段のパネル）に特異的であった。それ
ぞれ、７４５ｂｐおよび３５２ｂｐのＰＣＲ産物が予想される。生成物をエチジ
ウムブロマイドで染色し、そしてアガロースゲル電気泳動によって解析した。レ
ーンＭは、１ｋｂのラダーを示す（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）。
【図７】 図７は、原発性乳房腫瘍細胞上のＯＢ−カドヘリンの存在を検出するための、
アフィニティー精製したウサギ抗−ＯＢ−カドヘリン抗体を用いる免疫染色の結
果を示す写真である。
アフィニティー精製したウサギ抗−ＯＢ−カドヘリン抗体を用いる免疫染色の結
果を示す写真である。
【図８】 図８は、大腿骨中の乳ガンの転移性沈着物におけるＯＢ−カドヘリンの存在を
検出するための、アフィニティー精製したウサギ抗−ＯＢ−カドヘリン抗体を用
いる免疫染色の結果を示す写真である。
検出するための、アフィニティー精製したウサギ抗−ＯＢ−カドヘリン抗体を用
いる免疫染色の結果を示す写真である。
【手続補正書】
【提出日】平成１３年１１月２０日（２００１．１１．２０）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９８
【補正方法】変更
【補正内容】
【００９８】 上記から、本発明の特定の実施態様が、例示の目的のために本明細書中に記載
されているが、種々の改変が、本発明の精神および範囲から逸脱することなく行
われ得ることが、明らかである。従って、本発明は、添付の特許請求の範囲によ
る場合を除いて、限定されない。
されているが、種々の改変が、本発明の精神および範囲から逸脱することなく行
われ得ることが、明らかである。従って、本発明は、添付の特許請求の範囲によ
る場合を除いて、限定されない。
【配列表】SEQUENCE LISTING <110> Adherex Technologies Inc. Blaschuk, Orest W. Gour, Barbara J. Byers, Stephen <120> METHODS FOR DIAGNOSING AND EVALUATING CANCER <130> T8465022WO <140> PCT/CA99/00362 <141> 1999-05-05 <160> 324 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Unknown <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Where Xaa is any amino acid <220> <223> Description of Unknown Organism: Calcium Binding Motif in Extracellular domains of Classical Cadherins <400> 1 Asp Xaa Asn Asp Asn 1 5 <210> 2 <211> 4 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> Description of Unknown Organism: Calcium Binding Motif in Extracellular domains of Classical Cadherins <400> 2 Leu Asp Arg Glu 1 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 3 Ile Phe Val Ile Asp Asp Lys Ser Gly 1 5 <210> 4 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Gly Trp Val Trp Asn Gln Phe Phe Val Ile Glu Glu Tyr Thr Gly Pro 1 5 10 15 Asp Pro Val Leu Val Gly Arg Leu His Ser Asp Ile Asp Ser Gly Asp 20 25 30 Gly Asn Ile Lys Tyr Ile Leu Ser Gly Glu Gly Ala Gly Thr Ile Phe 35 40 45 Val Ile Asp Asp Lys Ser Gly Asn Ile His Ala Thr Lys Thr Leu Asp 50 55 60 Arg Glu Glu Arg Ala Gln Tyr Thr Leu Met Ala Gln Ala Val Asp Arg 65 70 75 80 Asp Thr Asn Arg Pro Leu Glu Pro Pro Ser Glu Phe Ile Val Lys Val 85 90 95 Gln Asp Ile Asn Asp Asn Pro Pro Glu Phe 100 105 <210> 5 <211> 106 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Gly Trp Val Trp Asn Gln Phe Phe Val Ile Glu Glu Tyr Thr Gly Pro 1 5 10 15 Asp Pro Val Leu Val Gly Arg Leu His Ser Asp Ile Asp Ser Gly Asp 20 25 30 Gly Asn Ile Lys Tyr Ile Leu Ser Gly Glu Gly Ala Gly Thr Ile Phe 35 40 45 Val Ile Asp Asp Lys Ser Gly Asn Ile His Ala Thr Lys Thr Leu Asp 50 55 60 Arg Glu Glu Arg Ala Gln Tyr Thr Leu Met Ala Gln Ala Val Asp Arg 65 70 75 80 Asp Thr Asn Arg Pro Leu Glu Pro Pro Ser Glu Phe Ile Val Lys Val 85 90 95 Gln Asp Ile Asn Asp Asn Pro Pro Glu Phe 100 105 <210> 6 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Asp Trp Val Ile Pro Pro Ile Asn Leu Pro Glu Asn Ser Arg Gly Pro 1 5 10 15 Phe Pro Gln Glu Leu Val Arg Ile Arg Ser Asp Arg Asp Lys Asn Leu 20 25 30 Ser Leu Arg Tyr Ser Val Thr Gly Pro Gly Ala Asp Gln Pro Pro Thr 35 40 45 Gly Ile Phe Ile Leu Asn Pro Ile Ser Gly Gln Leu Ser Val Thr Lys 50 55 60 Pro Leu Asp Arg Glu Gln Ile Ala Arg Phe His Leu Arg Ala His Ala 65 70 75 80 Val Asp Ile Asn Gly Asn Gln Val Glu Asn Pro Ile Asp Ile Val Ile 85 90 95 Asn Val Ile Asp Met Asn Asp Asn Arg Pro Glu Phe 100 105 <210> 7 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Asp Trp Val Ile Pro Pro Ile Asn Leu Pro Glu Asn Ser Arg Gly Pro 1 5 10 15 Phe Pro Gln Glu Leu Val Arg Ile Arg Ser Asp Arg Asp Lys Asn Leu 20 25 30 Ser Leu Arg Tyr Ser Val Thr Gly Pro Gly Ala Asp Gln Pro Pro Thr 35 40 45 Gly Ile Phe Ile Ile Asn Pro Ile Ser Gly Gln Leu Ser Val Thr Lys 50 55 60 Pro Leu Asp Arg Glu Leu Ile Ala Arg Phe His Leu Arg Ala His Ala 65 70 75 80 Val Asp Ile Asn Gly Asn Gln Val Glu Asn Pro Ile Asp Ile Val Ile 85 90 95 Asn Val Ile Asp Met Asn Asp Asn Arg Pro Glu Phe 100 105 <210> 8 <211> 108 <212> PRT <213> Bos taurus <400> 8 Asp Trp Val Ile Pro Pro Ile Asn Leu Pro Glu Asn Ser Arg Gly Pro 1 5 10 15 Phe Pro Gln Glu Leu Val Arg Ile Arg Ser Asp Arg Asp Lys Asn Leu 20 25 30 Ser Leu Arg Tyr Ser Val Thr Gly Pro Gly Ala Asp Gln Pro Pro Thr 35 40 45 Gly Ile Phe Ile Ile Asn Pro Ile Ser Gly Gln Leu Ser Val Thr Lys 50 55 60 Pro Leu Asp Arg Glu Leu Ile Ala Arg Phe His Leu Arg Ala His Ala 65 70 75 80 Val Asp Ile Asn Gly Asn Gln Val Glu Asn Pro Ile Asp Ile Val Ile 85 90 95 Asn Val Ile Asp Met Asn Asp Asn Arg Pro Glu Phe 100 105 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> ACETYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> AMIDATION <400> 9 Ile Phe Val Ile Asp Asp Lys Ser Gly 1 5 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> Description of Unknown Organism: Consensus Cell Adhesion Recognition Sequence in an OB-Cadherin <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Where Xaa is and independently selected amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Where Xaa is either Valine of Serine <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> Where Xaa is either Isoleucine or Valine <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Where Xaa is either Aspartate or Glutamate <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Where Xaa is an Independently selected amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Where Xaa is an independently selected amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Where Xaa is either Serine or Threonine <400> 10 Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly 1 5 <210> 11 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 11 Ile Asp Asp Lys 1 <210> 12 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 12 Asp Asp Lys Ser 1 <210> 13 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 13 Val Ile Asp Asp Lys 1 5 <210> 14 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 14 Ile Asp Asp Lys Ser 1 5 <210> 15 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 15 Val Ile Asp Asp Lys Ser 1 5 <210> 16 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 16 Asp Asp Lys Ser Gly 1 5 <210> 17 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 17 Ile Asp Asp Lys Ser Gly 1 5 <210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 18 Val Ile Asp Asp Lys Ser Gly 1 5 <210> 19 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 19 Phe Val Ile Asp Asp Lys 1 5 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 20 Phe Val Ile Asp Asp Lys Ser 1 5 <210> 21 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 21 Phe Val Ile Asp Asp Lys Ser Gly 1 5 <210> 22 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 22 Ile Phe Val Ile Asp Asp Lys 1 5 <210> 23 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 23 Ile Phe Val Ile Asp Asp Lys 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of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 29 Val Ile Glu Glu Tyr Thr 1 5 <210> 30 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 30 Glu Glu Tyr Thr Gly 1 5 <210> 31 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 31 Ile Glu Glu Tyr Thr Gly 1 5 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 32 Val Ile Glu Glu Tyr Thr Gly 1 5 <210> 33 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 33 Phe Val Ile Glu Glu Tyr 1 5 <210> 34 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human 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Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 45 Val Glu Ala Gln Thr Gly 1 5 <210> 46 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 46 Ser Val Glu Ala Gln Thr Gly 1 5 <210> 47 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 47 Phe Ser Val Glu Ala Gln 1 5 <210> 48 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 48 Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr 1 5 <210> 49 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on Human OB-Cadherin <400> 49 Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr Gly 1 5 <210> 50 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis based on 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Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 101 Val Ile Asp Asp Lys Ser Gly 1 5 <210> 102 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 102 Asp Asp Lys Ser Gly 1 5 <210> 103 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 103 Ile Asp Asp Lys Ser Gly 1 5 <210> 104 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 104 Ile Phe Val Ile Asp Asp Lys 1 5 <210> 105 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human 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based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 126 Cys Ile Glu Glu Tyr Thr Cys 1 5 <210> 127 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 127 Cys Val Ile Glu Glu Tyr Thr Cys 1 5 <210> 128 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 128 Cys Glu Glu Tyr Thr Gly Cys 1 5 <210> 129 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 129 Cys Ile Glu Glu Tyr Thr Gly Cys 1 5 <210> 130 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic 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Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 147 Lys Phe Val Ile Glu Glu Tyr Thr Asp 1 5 <210> 148 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 148 Lys Phe Val Ile Glu Glu Tyr Thr Gly Asp 1 5 10 <210> 149 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 149 Lys Phe Phe Val Ile Glu Glu Tyr Asp 1 5 <210> 150 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 150 Lys Phe Phe Val Ile Glu Glu Tyr Thr Asp 1 5 10 <210> 151 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: 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Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 172 Asp Val Ile Glu Glu Tyr Thr Lys 1 5 <210> 173 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 173 Asp Glu Glu Tyr Thr Gly Lys 1 5 <210> 174 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 174 Asp Ile Glu Glu Tyr Thr Gly Lys 1 5 <210> 175 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 175 Asp Val Ile Glu Glu Tyr Thr Gly Lys 1 5 <210> 176 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis 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Cyclic Peptide <400> 184 Lys Glu Glu Tyr Thr Glu 1 5 <210> 185 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 185 Lys Val Ile Glu Glu Tyr Glu 1 5 <210> 186 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 186 Lys Ile Glu Glu Tyr Thr Glu 1 5 <210> 187 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 187 Lys Val Ile Glu Glu Tyr Thr Glu 1 5 <210> 188 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 188 Lys Glu Glu Tyr Thr Gly Glu 1 5 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Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 214 Cys Ser Val Glu Ala Gln Thr Cys 1 5 <210> 215 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 215 Cys Glu Ala Gln Thr Gly Cys 1 5 <210> 216 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 216 Cys Val Glu Ala Gln Thr Gly Cys 1 5 <210> 217 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 217 Cys Ser Val Glu Ala Gln Thr Gly Cys 1 5 <210> 218 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 218 Cys Phe Ser Val Glu Ala Gln Cys 1 5 <210> 219 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 219 Cys Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr Cys 1 5 <210> 220 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 220 Cys Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr Gly Cys 1 5 10 <210> 221 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 221 Cys Tyr Phe Ser Val Glu Ala Gln Cys 1 5 <210> 222 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and 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<211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 260 Asp Glu Ala Gln Thr Gly Lys 1 5 <210> 261 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 261 Asp Val Glu Ala Gln Thr Gly Lys 1 5 <210> 262 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 262 Asp Ser Val Glu Ala Gln Thr Gly Lys 1 5 <210> 263 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 263 Asp Phe Ser Val Glu Ala Gln Lys 1 5 <210> 264 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 264 Asp Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr Lys 1 5 <210> 265 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 265 Asp Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr Gly Lys 1 5 10 <210> 266 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 266 Asp Tyr Phe Ser Val Glu Ala Gln Lys 1 5 <210> 267 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 267 Asp Tyr Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr Lys 1 5 10 <210> 268 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 268 Asp Tyr Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr Gly Lys 1 5 10 <210> 269 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 269 Lys Glu Ala Gln Glu 1 5 <210> 270 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 270 Lys Val Glu Ala Gln Glu 1 5 <210> 271 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 271 Lys Glu Ala Gln Thr Glu 1 5 <210> 272 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 272 Lys Ser Val Glu Ala Gln Glu 1 5 <210> 273 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 273 Lys Val Glu Ala Gln Thr Glu 1 5 <210> 274 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 274 Lys Ser Val Glu Ala Gln Thr Glu 1 5 <210> 275 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 275 Lys Glu Ala Gln Thr Gly Glu 1 5 <210> 276 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 276 Lys Val Glu Ala Gln Thr Gly Glu 1 5 <210> 277 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 277 Lys Ser Val Glu Ala Gln Thr Gly Glu 1 5 <210> 278 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 278 Lys Phe Ser Val Glu Ala Gln Glu 1 5 <210> 279 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 279 Lys Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr Glu 1 5 <210> 280 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 280 Lys Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr Gly Glu 1 5 10 <210> 281 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 281 Lys Tyr Phe Ser Val Glu Ala Gln Glu 1 5 <210> 282 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 282 Lys Tyr Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr Glu 1 5 10 <210> 283 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 283 Lys Tyr Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr Gly Glu 1 5 10 <210> 284 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 284 Ser Val Glu Ala Gln 1 5 <210> 285 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 285 Val Glu Ala Gln Thr 1 5 <210> 286 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 286 Ser Val Glu Ala Gln Thr 1 5 <210> 287 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 287 Glu Ala Gln Thr Gly 1 5 <210> 288 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 288 Val Glu Ala Gln Thr Gly 1 5 <210> 289 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 289 Ser Val Glu Ala Gln Thr Gly 1 5 <210> 290 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 290 Phe Ser Val Glu Ala Gln 1 5 <210> 291 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 291 Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr 1 5 <210> 292 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 292 Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr Gly 1 5 <210> 293 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 293 Tyr Phe Ser Val Glu Ala Gln 1 5 <210> 294 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 294 Tyr Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr 1 5 <210> 295 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human OB-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 295 Tyr Phe Ser Val Glu Ala Gln Thr Gly 1 5 <210> 296 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 296 Cys His Ala Val Cys 1 5 <210> 297 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 297 Cys His Ala Val Asp Cys 1 5 <210> 298 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 298 Cys Ala His Ala Val Cys 1 5 <210> 299 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 299 Cys Ala His Ala Val Asp Cys 1 5 <210> 300 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 300 Cys Ala His Ala Val Asp Ile Cys 1 5 <210> 301 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 301 Cys Arg Ala His Ala Val Asp Cys 1 5 <210> 302 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 302 Cys Leu Arg Ala His Ala Val Cys 1 5 <210> 303 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 303 Cys Leu Arg Ala His Ala Val Asp Cys 1 5 <210> 304 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 304 Cys Ser His Ala Val Cys 1 5 <210> 305 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 305 Cys His Ala Val Ser Cys 1 5 <210> 306 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 306 Cys Ser His Ala Val Ser Cys 1 5 <210> 307 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 307 Cys Ser His Ala Val Ser Ser Cys 1 5 <210> 308 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 308 Cys His Ala Val Ser Ser Cys 1 5 <210> 309 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 309 Lys His Ala Val Asp 1 5 <210> 310 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 310 Asp His Ala Val Lys 1 5 <210> 311 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 311 Lys His Ala Val Glu 1 5 <210> 312 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 312 Ala His Ala Val Asp Ile 1 5 <210> 313 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 313 Ser His Ala Val Asp Ser Ser 1 5 <210> 314 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Product of Synthesis and Cyclization based on Human N-Cadherin <220> <223> Cyclic Peptide <400> 314 Lys Ser His Ala Val Ser Ser Asp 1 5 <210> 315 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: OB-Cadherin forward primer <400> 315 accagatgtc tgtatcaga 19 <210> 316 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: OB-Cadherin reverse primer <400> 316 gtctcctggt catcatctgc a 21 <210> 317 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: OB-Cadherin forward primer <400> 317 gccagacaca gttcttaagg 20 <210> 318 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: OB-Cadherin reverse primer <400> 318 atcaacctga gtatcagta 19 <210> 319 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Hypoxanthine phosphoribosyltransferase (HPRT)-specific forward primer <400> 319 cctgctggat tacattaaag cactg 25 <210> 320 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Hypoxanthine phosphoribosyltransferase (HPRT)-specific reverse primer <400> 320 gtcaagggca tatccaacaa caaac 25 <210> 321 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: E-Cadherin forward primer <400> 321 ccttccccca acacgtcccc cc 22 <210> 322 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: E-Cadherin reverse primer <400> 322 tctccacctc cttcttcatc 20 <210> 323 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: N-Cadherin forward primer <400> 323 caagagcttg tcacaatcag g 21 <210> 324 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: N-Cadherin reverse primer <400> 324 catttggatc atccgcatc 19
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｇ０１Ｎ 33/68 Ｇ０１Ｎ 33/68 // Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (31)優先権主張番号 ０９／２３４，３９５ (32)優先日 平成11年１月20日(1999．1．20) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ (72)発明者 ゴール， バーバラ ジェイ． カナダ国 ケイ０ジー １ジェイ０ オン タリオ， ケンプビル， ルーラル ロー ド ナンバー４， ドネリー ドライブ 2890 (72)発明者 バイエルズ， スティーブン アメリカ合衆国 コロンビア区 20011， ワシントン， ウェブスター ストリー ト エヌ．ダブリュー． 1723 Ｆターム(参考） 2G045 AA26 AA40 BB20 BB24 CA25 CA26 CB01 CB02 CB03 CB17 CB21 CB30 DA12 DA13 DA14 DA36 DA80 FB02 FB03 FB04 FB05 FB07 FB15 JA02 JA20 4B024 AA12 BA80 CA04 HA14 HA15 4B063 QA01 QA19 QQ03 QQ08 QQ43 QQ52 QQ58 QR08 QR33 QR56 QS25 QS34 QX02 QX07 4B064 AG26 AG27 CA10 CA20 CC24 DA14 4H045 AA11 AA30 CA41 EA51 FA72
Claims (76)
- 【請求項１】 患者におけるガンの存在または非存在を決定するための方法
であって、以下の工程： （ａ）患者から得た生物学的サンプルとＯＢ−カドヘリンに特異的に結合する
結合因子とを接触させる工程；ならびに （ｂ）予め決定したカットオフ値と比較して、該結合因子に結合するポリペプ
チドの量を該サンプル中で検出する工程、およびそれから該患者におけるガンの
存在または非存在を決定する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項２】 前記結合因子がモノクローナル抗体である、請求項１に記載
の方法。 - 【請求項３】 前記結合因子がポリクローナル抗体である、請求項１に記載
の方法。 - 【請求項４】 前記結合因子が、ＯＢ−カドヘリンのＣＡＲ配列、またはそ
のアナログもしくは模倣物を含む、請求項１に記載の方法。 - 【請求項５】 前記ガンが、白血病、前立腺ガン、乳ガン、および卵巣ガン
からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。 - 【請求項６】 前記結合因子が、ＯＢ−カドヘリンの細胞外ドメインに特異
的に結合する、請求項１に記載の方法。 - 【請求項７】 前記生物学的サンプルが、血液、血清、尿、腫瘍の生検、腹
水液、脳骨髄液、前立腺の切片、および上記のサンプルの画分からなる群より選
択される、請求項１に記載の方法。 - 【請求項８】 患者におけるガンの進行をモニターするための方法であって
、以下の工程： （ａ）第１の時点でガン患者から得た生物学的サンプルとＯＢ−カドヘリンに
特異的に結合する結合因子とを接触させる工程； （ｂ）該結合因子に結合するポリペプチドの量を該サンプル中で検出する工程
； （ｃ）続く時点で該患者から得た生物学的サンプルを使用して、工程（ａ）お
よび工程（ｂ）を繰り返す工程；ならびに （ｄ）工程（ｂ）において検出した量に対して工程（ｃ）において検出したポ
リペプチドの量を比較する工程、およびそれから該患者における該ガンの進行を
モニターする工程、 を包含する、方法。 - 【請求項９】 前記結合因子がモノクローナル抗体である、請求項８に記載
の方法。 - 【請求項１０】 前記結合因子がポリクローナル抗体である、請求項８に記
載の方法。 - 【請求項１１】 前記結合因子が、ＯＢ−カドヘリンのＣＡＲ配列、または
そのアナログもしくは模倣物を含む、請求項８に記載の方法。 - 【請求項１２】 前記ガンが、白血病、前立腺ガン、乳ガン、および卵巣ガ
ンからなる群より選択される、請求項８に記載の方法。 - 【請求項１３】 前記結合因子が、ＯＢ−カドヘリンの細胞外ドメインに特
異的に結合する、請求項８に記載の方法。 - 【請求項１４】 前記生物学的サンプルが、血液、血清、尿、腫瘍の生検、
腹水液、前立腺の切片、および上記のサンプルの画分からなる群より選択される
、請求項８に記載の方法。 - 【請求項１５】 患者におけるガンの転移の可能性を評価するための方法で
あって、以下の工程： （ａ）ガンを罹患しているガン患者から得た生物学的サンプルとＯＢ−カドヘ
リンに特異的に結合する結合因子とを接触させる工程；ならびに （ｂ）予め決定したカットオフ値と比較して、該結合因子に結合するポリペプ
チドの量を該サンプル中で検出する工程、およびそれから該患者における該ガン
の転移の可能性を評価する工程 を包含する、方法。 - 【請求項１６】 前記結合因子がモノクローナル抗体である、請求項１５に
記載の方法。 - 【請求項１７】 前記結合因子がポリクローナル抗体である、請求項１５に
記載の方法。 - 【請求項１８】 前記結合因子が、ＯＢ−カドヘリンのＣＡＲ配列、または
そのアナログもしくは模倣物を含む、請求項１５に記載の方法。 - 【請求項１９】 前記ガンが、白血病、前立腺ガン、乳ガン、および卵巣ガ
ンからなる群より選択される、請求項１５に記載の方法。 - 【請求項２０】 前記結合因子が、ＯＢ−カドヘリンの細胞外ドメインに特
異的に結合する、請求項１５に記載の方法。 - 【請求項２１】 前記生物学的サンプルが、血液、血清、尿、腫瘍の生検、
腹水液、前立腺の切片、および上記のサンプルの画分からなる群より選択される
、請求項１５に記載の方法。 - 【請求項２２】 以下を包含する、診断用キット： （ａ）ＯＢ−カドヘリンのＣＡＲ配列に特異的に結合する１つ以上のモノクロ
ーナル抗体；および （ｂ）検出試薬。 - 【請求項２３】 前記モノクローナル抗体が、固体支持体上に固定される、
請求項２２に記載のキット。 - 【請求項２４】 前記固体支持体が、ニトロセルロース、ラテックス、また
はプラスチック物質を含む、請求項２３に記載のキット。 - 【請求項２５】 前記検出試薬が、レポーター基を含む、請求項２２に記載
のキット。 - 【請求項２６】 前記レポーター基が、放射性同位元素、蛍光基、発光基、
酵素、ビオチン、および色素粒子からなる群より選択される、請求項２５に記載
のキット。 - 【請求項２７】 患者における転移性のガンの存在または非存在を決定する
ための方法であって、以下の工程： （ａ）患者から得た生物学的サンプルとＯＢ−カドヘリンをコードするポリヌ
クレオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドとを接触させる工程；なら
びに （ｂ）予め決定したカットオフ値と比較して、該オリゴヌクレオチドにハイブ
リダイズするポリヌクレオチドの量を該サンプル中で検出する工程、およびそれ
から該患者における転移性のガンの存在または非存在を決定する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項２８】 前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレ
オチドの量が、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して決定される、請求項２７に記載
の方法。 - 【請求項２９】 前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレ
オチドの量が、ハイブリダイゼーションアッセイを使用して決定される、請求項
２７に記載の方法。 - 【請求項３０】 前記ガンが、白血病、前立腺ガン、乳ガン、および卵巣ガ
ンからなる群より選択される、請求項２７に記載の方法。 - 【請求項３１】 前記生物学的サンプルが、ＲＮＡまたはｃＤＮＡ調製物で
ある、請求項２７に記載の方法。 - 【請求項３２】 患者におけるガンの進行をモニターするための方法であっ
て、以下の工程： （ａ）ガン患者から得た生物学的サンプルとＯＢ−カドヘリンをコードするポ
リヌクレオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドとを接触させる工程； （ｂ）該オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドの量を該
サンプル中で検出する工程； （ｃ）続く時点で該患者から得た生物学的サンプルを使用して、工程（ａ）お
よび工程（ｂ）を繰り返す工程；ならびに （ｄ）工程（ｃ）において検出したポリヌクレオチドの量を工程（ｂ）におい
て検出した量と比較する工程、およびそれから該患者におけるガンの進行をモニ
ターする工程、 を包含する、方法。 - 【請求項３３】 前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレ
オチドの量が、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して決定される、請求項３２に記載
の方法。 - 【請求項３４】 前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレ
オチドの量が、ハイブリダイゼーションアッセイを使用して決定される、請求項
３２に記載の方法。 - 【請求項３５】 前記ガンが、白血病、前立腺ガン、乳ガン、および卵巣ガ
ンからなる群より選択される、請求項３２に記載の方法。 - 【請求項３６】 前記生物学的サンプルが、ＲＮＡまたはｃＤＮＡ調製物で
ある、請求項３２に記載の方法。 - 【請求項３７】 患者におけるガンの転移の可能性を評価するための方法で
あって、以下の工程： （ａ）ガン患者から得た生物学的サンプルとＯＢ−カドヘリンをコードするポ
リヌクレオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドとを接触させる工程；
ならびに （ｂ）予め決定されたカットオフ値と比較して、該オリゴヌクレオチドにハイ
ブリダイズするポリヌクレオチドの量を該サンプル中で検出する工程、およびそ
れから該患者における該ガンの転移の可能性を評価する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項３８】 前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレ
オチドの量が、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して決定される、請求項３７に記載
の方法。 - 【請求項３９】 前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレ
オチドの量が、ハイブリダイゼーションアッセイを使用して決定される、請求項
３７に記載の方法。 - 【請求項４０】 前記ガンが、白血病、前立腺ガン、乳ガン、および卵巣ガ
ンからなる群より選択される、請求項３７に記載の方法。 - 【請求項４１】 前記生物学的サンプルが、ＲＮＡまたはｃＤＮＡ調製物で
ある、請求項３７に記載の方法。 - 【請求項４２】 以下を含有する、診断用キット： （ａ）ＯＢ−カドヘリンをコードするポリヌクレオチドに対して、またはその
ようなポリヌクレオチドの相補物に対してハイブリダイズするオリゴヌクレオチ
ド；および （ｂ）ポリメラーゼ連鎖反応またはハイブリダイゼーションアッセイにおける
使用のための診断試薬。 - 【請求項４３】 以下を含有する、診断用キット： （ａ）ＯＢ−カドヘリンをコードするポリヌクレオチドに対して、またはその
ようなポリヌクレオチドの相補物に対してハイブリダイズするオリゴヌクレオチ
ド；および （ｂ）１０〜４０ヌクレオチドの長さの第２のオリゴヌクレオチド。 - 【請求項４４】 患者におけるガンの存在または非存在を決定するための方
法であって、以下の工程： （ａ）患者から得た生物学的サンプルとＮ−カドヘリンに特異的に結合する結
合因子とを接触させる工程；ならびに （ｂ）予め決定したカットオフ値と比較して、該結合因子に結合するポリペプ
チドの量をサンプル中で検出する工程、およびそれから該患者におけるガンの存
在または非存在を決定する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項４５】 前記結合因子がモノクローナル抗体である、請求項４４に
記載の方法。 - 【請求項４６】 前記結合因子が、Ｎ−カドヘリンのＣＡＲ配列、またはそ
のアナログもしくは模倣物を含む、請求項４４に記載の方法。 - 【請求項４７】 前記ガンが、白血病、前立腺ガン、乳ガン、および卵巣ガ
ンからなる群より選択される、請求項４４に記載の方法。 - 【請求項４８】 前記結合因子が、Ｎ−カドヘリンの細胞外ドメインに特異
的に結合する、請求項４４に記載の方法。 - 【請求項４９】 前記生物学的サンプルが、血液、血清、尿、腫瘍の生検、
腹水液、脳骨髄液、前立腺の切片、および上記のサンプルの画分からなる群より
選択される、請求項４４に記載の方法。 - 【請求項５０】 患者におけるガンの進行をモニターするための方法であっ
て、以下の工程： （ａ）第１の時点でガン患者から得た生物学的サンプルとＮ−カドヘリンに特
異的に結合する結合因子とを接触させる工程； （ｂ）該結合因子に結合するポリペプチドの量を該サンプル中で検出する工程
； （ｃ）続く時点で該患者から得た生物学的サンプルを使用して、工程（ａ）お
よび工程（ｂ）を繰り返す工程；ならびに （ｄ）工程（ｃ）において検出したポリペプチドの量を工程（ｂ）において検
出した量に対して比較する工程、およびそれから該患者における該ガンの進行を
モニターする工程、 を包含する、方法。 - 【請求項５１】 前記結合因子がモノクローナル抗体である、請求項５０に
記載の方法。 - 【請求項５２】 前記結合因子が、Ｎ−カドヘリンのＣＡＲ配列、またはそ
のアナログもしくは模倣物を含む、請求項５０に記載の方法。 - 【請求項５３】 前記ガンが、白血病、前立腺ガン、乳ガン、および卵巣ガ
ンからなる群より選択される、請求項５０に記載の方法。 - 【請求項５４】 前記結合因子が、Ｎ−カドヘリンの細胞外ドメインに特異
的に結合する、請求項５０に記載の方法。 - 【請求項５５】 前記生物学的サンプルが、血液、血清、尿、腫瘍の生検、
腹水液、前立腺の切片、および上記のサンプルの画分からなる群より選択される
、請求項５０に記載の方法。 - 【請求項５６】 患者におけるガンの転移の可能性を評価するための方法で
あって、以下の工程： （ａ）ガンを罹患しているガン患者から得た生物学的サンプルとＮ−カドヘリ
ンに特異的に結合する結合因子とを接触させる工程；ならびに （ｂ）予め決定したカットオフ値と比較して、該結合因子に結合するポリペプ
チドの量を該サンプル中で検出する工程、およびそれから該患者における該ガン
の転移の可能性を評価する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項５７】 前記結合因子がモノクローナル抗体である、請求項５６に
記載の方法。 - 【請求項５８】 前記結合因子が、Ｎ−カドヘリンのＣＡＲ配列、またはそ
のアナログもしくは模倣物を含む、請求項５６に記載の方法。 - 【請求項５９】 前記ガンが、白血病、前立腺ガン、乳ガン、および卵巣ガ
ンからなる群より選択される、請求項５６に記載の方法。 - 【請求項６０】 前記結合因子が、Ｎ−カドヘリンの細胞外ドメインに特異
的に結合する、請求項５６に記載の方法。 - 【請求項６１】 前記生物学的サンプルが、血液、血清、尿、腫瘍の生検、腹水液、前立腺の切
片、および上記のサンプルの画分からなる群より選択される、請求項５６に記載
の方法。 - 【請求項６２】 患者における転移性のガンの存在または非存在を決定する
ための方法であって、以下の工程： （ａ）患者から得た生物学的サンプルとＮ−カドヘリンをコードするポリヌク
レオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドとを接触させる工程；ならび
に （ｂ）予め決定したカットオフ値と比較して、該オリゴヌクレオチドにハイブ
リダイズするポリヌクレオチドの量を該サンプル中で検出する工程、およびそれ
から該患者における転移性のガンの存在または非存在を決定する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項６３】 前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレ
オチドの量が、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して決定される、請求項６２に記載
の方法。 - 【請求項６４】 前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレ
オチドの量が、ハイブリダイゼーションアッセイを使用して決定される、請求項
６２に記載の方法。 - 【請求項６５】 前記ガンが、白血病、前立腺ガン、乳ガン、および卵巣ガンからなる群より選
択される、請求項６２に記載の方法。 - 【請求項６６】 前記生物学的サンプルが、ＲＮＡまたはｃＤＮＡ調製物で
ある、請求項６２に記載の方法。 - 【請求項６７】 患者におけるガンの進行をモニターするための方法であっ
て、以下の工程： （ａ）ガン患者から得た生物学的サンプルとＮ−カドヘリンをコードするポリ
ヌクレオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドとを接触させる工程； （ｂ）該オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドの量を該
サンプル中で検出する工程； （ｃ）続く時点で該患者から得た生物学的サンプルを使用して、工程（ａ）お
よび工程（ｂ）を繰り返す工程；ならびに （ｄ）工程（ｃ）において検出したポリヌクレオチドの量を工程（ｂ）におい
て検出した量と比較する工程、およびそれから該患者におけるガンの進行をモニ
ターする工程、 を包含する、方法。 - 【請求項６８】 前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレ
オチドの量が、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して決定される、請求項６７に記載
の方法。 - 【請求項６９】 前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレ
オチドの量が、ハイブリダイゼーションアッセイを使用して決定される、請求項
６７に記載の方法。 - 【請求項７０】 前記ガンが、白血病、前立腺ガン、乳ガン、および卵巣ガンからなる群より選
択される、請求項６７に記載の方法。 - 【請求項７１】 前記生物学的サンプルが、ＲＮＡまたはｃＤＮＡ調製物で
ある、請求項６７に記載の方法。 - 【請求項７２】 患者におけるガンの転移の可能性を評価するための方法で
あって、以下の工程： （ａ）ガン患者から得た生物学的サンプルとＮ−カドヘリンをコードするポリ
ヌクレオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドとを接触させる工程；な
らびに （ｂ）予め決定されたカットオフ値と比較して、該オリゴヌクレオチドにハイ
ブリダイズするポリヌクレオチドの量を該サンプル中で検出する工程、およびそ
れから該患者における該ガンの転移の可能性を評価する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項７３】 前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレ
オチドの量が、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して決定される、請求項７２に記載
の方法。 - 【請求項７４】 前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレ
オチドの量が、ハイブリダイゼーションアッセイを使用して決定される、請求項
７２に記載の方法。 - 【請求項７５】 前記ガンが、白血病、前立腺ガン、乳ガン、および卵巣ガ
ンからなる群より選択される、請求項７２に記載の方法。 - 【請求項７６】 前記生物学的サンプルが、ＲＮＡまたはｃＤＮＡ調製物で
ある、請求項７２に記載の方法。
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