JP2002513153A - デキストラン被覆された表面 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、担体上のデキストラン被覆された表面に関するものである。本発明の課題は、デキストラン層を中間相を用いて担体上に固定することである。前記課題は、デキストランと担体表面との結合を光結合剤によって行うことによって解決される。
Description
【０００１】 本発明は、Ｏ’Ｓｈａｎｎｅｓｓｙ，Ｄ．Ｊ．；Ｂｒｉｇｈａｍ−Ｂｕｒｋｅ
，Ｍ．；Ｐｅｃｋ，Ｋ．；Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０５（１９９２）１３
２〜１３６から公知である、デキストラン被覆された表面に関するものである。
，Ｍ．；Ｐｅｃｋ，Ｋ．；Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０５（１９９２）１３
２〜１３６から公知である、デキストラン被覆された表面に関するものである。
【０００２】 Ｓ．Ｌｏｅｆａｓ、Ｂ．Ｊｏｈｎｓｓｏｎ；Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ
．Ｃｏｍｍｕｎ．（１９９０）１５２６〜１５２８から、デキストランが、１，
ω−ヒドロキシアルキルチオールの自己集合単層により金表面に結合させること
ができることは公知である。
．Ｃｏｍｍｕｎ．（１９９０）１５２６〜１５２８から、デキストランが、１，
ω−ヒドロキシアルキルチオールの自己集合単層により金表面に結合させること
ができることは公知である。
【０００３】 しかしながら、若干のセンサー、例えば表面音響波（ＳＡＷ）センサーは、導
電性の中間層を許容しないので、金は、中間層として使用することができないで
いる。
電性の中間層を許容しないので、金は、中間層として使用することができないで
いる。
【０００４】 かかるセンサーは、例えばドイツ連邦共和国特許出願公開第４３１９２１５号
Ａ１から公知である。
Ａ１から公知である。
【０００５】 本発明の課題は、デキストラン層を単体層上に固着させる層を提供することで
ある。
ある。
【０００６】 前記課題は、請求項１の特徴部によって解決される。
【０００７】 従属請求項には、本発明の有利な態様が記載されている。
【０００８】 本発明による層には、以下の利点がある： 極端に可撓性のデキストラン法は、ＳＡＷセンサー及び他の多くのセンサーに
使用することができる。
使用することができる。
【０００９】 ほぼ全てのタンパク質を、標準化された方法（カルボジイミド−化学）を用い
てデキストランに固定することができる。
てデキストランに固定することができる。
【００１０】 デキストランの代わりに、それぞれ変性されたデキストラン種、例えばカルボ
キシデキストラン、ビオチニル化したデキストラン（ｂｉｏｔｙｎｉｌｉｅｒｔ
ｅｓ Ｄｅｘｔｒａｎ）を使用することもできる。１つ又はそれ以上の反応性基
がデキストランに結合している官能化されたデキストランのそれぞれ別の種類を
、同様に使用することができる。
キシデキストラン、ビオチニル化したデキストラン（ｂｉｏｔｙｎｉｌｉｅｒｔ
ｅｓ Ｄｅｘｔｒａｎ）を使用することもできる。１つ又はそれ以上の反応性基
がデキストランに結合している官能化されたデキストランのそれぞれ別の種類を
、同様に使用することができる。
【００１１】 従来使用されているバイオセンサーシステムは、デキストラン被覆されたＳＡ
Ｗバイオセンサーの導入の際には、センサー化学に関連して適合する必要はない
。
Ｗバイオセンサーの導入の際には、センサー化学に関連して適合する必要はない
。
【００１２】 更に、前記の方法は、任意の別のシステムに対して簡単に応用可能である。１
つのタンパク質（ＢＳＡ）のみを変更しなければならないが、本来固定されなけ
ればならない物質自体は変更されてはならない。
つのタンパク質（ＢＳＡ）のみを変更しなければならないが、本来固定されなけ
ればならない物質自体は変更されてはならない。
【００１３】 光固定化のために使用されるＴ−ＢＳＡは、同時に、保護被覆された表面上の
非特異性結合箇所のブロックにも用いられる。
非特異性結合箇所のブロックにも用いられる。
【００１４】 ＳＡＷセンサー配列を用いて、種々の生物成分を同時に検出し、ひいては物質
の全ての種類のスクリーニングを実施することが可能であるが、これは、購入可
能なバイオセンサーシステム（例えばＢＩＡｃｏｒｅ又はＩａｓｙｓ）の場合に
は、高価な光学的方法論に基づき不可能であるか困難になって（費用を集中させ
て）のみ可能である。
の全ての種類のスクリーニングを実施することが可能であるが、これは、購入可
能なバイオセンサーシステム（例えばＢＩＡｃｏｒｅ又はＩａｓｙｓ）の場合に
は、高価な光学的方法論に基づき不可能であるか困難になって（費用を集中させ
て）のみ可能である。
【００１５】 光固定化は、チオールによるデキストランの結合に比して、極めて簡単で、迅
速かつ良好に再現可能な方法である。
速かつ良好に再現可能な方法である。
【００１６】 本発明は、以下に実施例に基づき、図面を用いて詳細に説明される。
【００１７】 この場合、図１は、略図的層構造を示し、図２〜４は、被覆されたＳＡＷセン
サーを用いる若干の例示的測定結果を示している。
サーを用いる若干の例示的測定結果を示している。
【００１８】 実施例： 保護被覆： 市販により入手可能なＳＡＷ部材を、バイオセンサーにおける質量感応性変換
器として使用するためには、ＳＡＷ表面を、タンパク質からなる生物感応性層で
被覆しなければならないが、これが、後にプローブ中で相応する分析分子を検出
するのである。
器として使用するためには、ＳＡＷ表面を、タンパク質からなる生物感応性層で
被覆しなければならないが、これが、後にプローブ中で相応する分析分子を検出
するのである。
【００１９】 この反応は、水性媒体中で行われる。
【００２０】 しかしながら、前記の水中媒体中での使用並びに必要とされる固定化手続は、
部材上に存在する構造及びアルミニウムからなる結合線が、その都度の化学的条
件に耐えられないので、これらの保護を必要としている。
部材上に存在する構造及びアルミニウムからなる結合線が、その都度の化学的条
件に耐えられないので、これらの保護を必要としている。
【００２１】 ドイツ連邦共和国特許第１９６１８８２号からは、既に相対的に良好な保護作
用を有する、スピンコーティングによるポリイミドを用いる完全部材の薄い被覆
は公知である。
用を有する、スピンコーティングによるポリイミドを用いる完全部材の薄い被覆
は公知である。
【００２２】 しかしながら、酸性媒体もしくはアルカリ性媒体中での部材の運転後には、構
造体が著しく腐食されていることがある。
造体が著しく腐食されていることがある。
【００２３】 改善された保護作用は、パリレンの薄膜を用いる被覆によって得ることができ
る。
る。
【００２４】 パリレンは、エチレン架橋を介して１，４−位において結合したフェニレン基
を有する熱可塑性ポリマーのグループ名である。パリレンは、その融点を下回っ
ていると溶剤安定性であり、卓越した誘電性の性質を有しており、優れたバリア
プラスチックである。これらは、主として中間層として、半導体の不動態化及び
プリント基板の無孔被覆のために使用されている。
を有する熱可塑性ポリマーのグループ名である。パリレンは、その融点を下回っ
ていると溶剤安定性であり、卓越した誘電性の性質を有しており、優れたバリア
プラスチックである。これらは、主として中間層として、半導体の不動態化及び
プリント基板の無孔被覆のために使用されている。
【００２５】 これらは、気相から適当な物質への濃縮の際に重合してポリ（ｐ−キシリレン
）からなる薄膜になる中間的に形成する１，４−キノジメタンを経てパラシクロ
ファンにするためのｐ−キシロールの脱水二量化によって製造される。
）からなる薄膜になる中間的に形成する１，４−キノジメタンを経てパラシクロ
ファンにするためのｐ−キシロールの脱水二量化によって製造される。
【００２６】 ポリ（ｐ−キシリレン）とともに、就中、相応するｐ−キシロール−誘導体か
ら入手されるパリレン、ポリ（２−クロル−ｐ−キシリレン）及びポリジクロル
−ｐ−キシリレン）も、被覆に適している。
ら入手されるパリレン、ポリ（２−クロル−ｐ−キシリレン）及びポリジクロル
−ｐ−キシリレン）も、被覆に適している。
【００２７】 パリレン被覆された部材は、ポリイミド被覆された部材とは異なり、一連の利
点を有している。
点を有している。
【００２８】 施与されたポリマー層による付加的な抑制は僅かであり、その値は、パリレン
及びポリイミドの場合でほぼ同じである。保護被覆された部材は、−２．５〜−
３．０ｄＢの抑制（−１０゜相通過の際）を示している。
及びポリイミドの場合でほぼ同じである。保護被覆された部材は、−２．５〜−
３．０ｄＢの抑制（−１０゜相通過の際）を示している。
【００２９】 パリレン被覆の再現可能性は、ポリイミドを用いるＳＡＷ部材の被覆よりも、
明らかに良好である。
明らかに良好である。
【００３０】 パリレンフィルムは、ポリイミドフィルムとは異なり、極端に平滑であるが、
これは、ＳＡＷ部材の使用の際に、表面音響波の伝播が表面の不規則性によって
妨げられ、従って付加的に抑制損失及び低減された感応性につながるのでｋうぃ
あめて重要である。
これは、ＳＡＷ部材の使用の際に、表面音響波の伝播が表面の不規則性によって
妨げられ、従って付加的に抑制損失及び低減された感応性につながるのでｋうぃ
あめて重要である。
【００３１】 保護被覆は、ＳＡＷ部材を、水溶液、酸、塩基及び攻撃的な試薬による腐食攻
撃から保護せねばならない。
撃から保護せねばならない。
【００３２】 ポリイミド被覆された部材の場合、既に、数分後に、アルミニウムに対する酸
の腐食攻撃が推測されるガス発生が、就中、結合線と結合パッドとの接触部位に
おいて観察された。約１５〜３０分後に、結合線の完全な破壊及びインターデジ
タル構造への明らかに見分けのつく攻撃が行われた。
の腐食攻撃が推測されるガス発生が、就中、結合線と結合パッドとの接触部位に
おいて観察された。約１５〜３０分後に、結合線の完全な破壊及びインターデジ
タル構造への明らかに見分けのつく攻撃が行われた。
【００３３】 これとは異なり、パリレン被覆された部材の場合には、酸中での数時間の作用
時間後、それどころかセンサーの加熱後であっても、攻撃が観察されなかった。
従って、パリレンフィルムは、腐食攻撃からの部材の卓越した保護を示している
。
時間後、それどころかセンサーの加熱後であっても、攻撃が観察されなかった。
従って、パリレンフィルムは、腐食攻撃からの部材の卓越した保護を示している
。
【００３４】 デキストランの光固定化： 光活性Ｔ−ＢＳＡを用いる補助固定化によるデキストラン被覆されたＳＡＷセ
ンサー表面における生物分子の固定化の際の略図的層構造は、図１中に示されて
いる。この場合、デキストランは、Ｔ−ＢＳＡを用いる光補助固定化により、保
護被覆されたセンサー表面に共有結合している。
ンサー表面における生物分子の固定化の際の略図的層構造は、図１中に示されて
いる。この場合、デキストランは、Ｔ−ＢＳＡを用いる光補助固定化により、保
護被覆されたセンサー表面に共有結合している。
【００３５】 この共有結合の他面、以下の工程を実施する： 保護被覆されたセンサー上へ、Ｔ−ＢＳＡとデキストランとからなる混合物を
施与する、 室温で６０分間の保温、 真空中（１０-3ミリバール）で２時間の乾燥、 Ｈｇ灯を用いる４５分間の露光。
施与する、 室温で６０分間の保温、 真空中（１０-3ミリバール）で２時間の乾燥、 Ｈｇ灯を用いる４５分間の露光。
【００３６】 Ｔ−ＢＳＡは、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を、ジアジリン誘導体と、３−ト
リフルオロメチル−３−（ｍ−イソチオシアノフェニル）−ジアジリン（ＴＲＩ
ＭＩＤ）と反応させ、これとともに、リシン側鎖のアミノ基に、光活性ＴＲＩＭ
ＩＤを導入することによって製造される（Ｍ．Ｄｏｌｄｅｒ、Ｈ．Ｍｉｃｈｅｌ
、Ｈ．Ｓｉｇｒｉｓｔ；Ｊ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．９（１９９０）４０７〜４１
５及びＳｉｇｒｉｓｔ，Ｈ．；Ｍｕｅｈｌｅｍａｎｎ，Ｍ．；Ｄｏｌｄｅｒ，Ｍ
．；Ｊ．Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．ａｎｄ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．、Ｂ７（１９９０
）２７７〜２８７）。こうして、ＢＳＡ１分子当たり、７個までのＴＲＩＭＩＤ
基が導入できる。次に、Ｔ−ＢＳＡに３４８ｎｍの波長の光を照射すると、ジア
ジリン環は、窒素を分離し、三重項炭素を発生する。この三重項炭素は、極めて
反応性であり、多数の化学結合に挿入される。
リフルオロメチル−３−（ｍ−イソチオシアノフェニル）−ジアジリン（ＴＲＩ
ＭＩＤ）と反応させ、これとともに、リシン側鎖のアミノ基に、光活性ＴＲＩＭ
ＩＤを導入することによって製造される（Ｍ．Ｄｏｌｄｅｒ、Ｈ．Ｍｉｃｈｅｌ
、Ｈ．Ｓｉｇｒｉｓｔ；Ｊ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．９（１９９０）４０７〜４１
５及びＳｉｇｒｉｓｔ，Ｈ．；Ｍｕｅｈｌｅｍａｎｎ，Ｍ．；Ｄｏｌｄｅｒ，Ｍ
．；Ｊ．Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．ａｎｄ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．、Ｂ７（１９９０
）２７７〜２８７）。こうして、ＢＳＡ１分子当たり、７個までのＴＲＩＭＩＤ
基が導入できる。次に、Ｔ−ＢＳＡに３４８ｎｍの波長の光を照射すると、ジア
ジリン環は、窒素を分離し、三重項炭素を発生する。この三重項炭素は、極めて
反応性であり、多数の化学結合に挿入される。
【００３７】 補助固定化の際に、Ｔ−ＢＳＡは、光架橋剤として用いられる、即ち、Ｔ−Ｂ
ＳＡは、デキストランと一緒に保護被覆されたＳＡＷ部材の上に施与される。上
記のように、ＢＳＡ１分子当たり７個までのＴＲＩＭＩＤ単位が存在しているの
で、照射の際に形成された三重項炭素は、保護層並びにデキストランとの結合を
生じることができる。従って、デキストランは、表面に共有結合させられる。
ＳＡは、デキストランと一緒に保護被覆されたＳＡＷ部材の上に施与される。上
記のように、ＢＳＡ１分子当たり７個までのＴＲＩＭＩＤ単位が存在しているの
で、照射の際に形成された三重項炭素は、保護層並びにデキストランとの結合を
生じることができる。従って、デキストランは、表面に共有結合させられる。
【００３８】 Ｔ−ＢＳＡを介するデキストランの補助固定化は、種々の利点を示している。
【００３９】 一つには、この場合、極めて簡単かつ迅速な手段であるということである。Ｔ
−ＢＳＡは、溶解したデキストランと混合させられ、保護被覆された部材の上に
施与される。次に、２時間にわたって、水を真空中で除去し、これにより、後に
露光の際に形成されたカルベンは、実際にはポリマー及びデキストランと反応し
、周囲の水とは反応しない。水をできるだけ定量的に除去した後に、４５分間Ｈ
ｇ灯で照射する。これにより、この後、最大４時間後にも、デキストランは、表
面に共有結合していた。
−ＢＳＡは、溶解したデキストランと混合させられ、保護被覆された部材の上に
施与される。次に、２時間にわたって、水を真空中で除去し、これにより、後に
露光の際に形成されたカルベンは、実際にはポリマー及びデキストランと反応し
、周囲の水とは反応しない。水をできるだけ定量的に除去した後に、４５分間Ｈ
ｇ灯で照射する。これにより、この後、最大４時間後にも、デキストランは、表
面に共有結合していた。
【００４０】 デキストランにおけるタンパク質の固定化及び免疫反応の観察： バイオセンサーを得るために、所望の受容生物分子をデキストランにより固定
させなければならない。ほぼ任意の生物分子の簡単かつ迅速な結合は、以下の手
段を用いて可能である（Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．；Ｌｏｅｆａｓ，Ｓ．；Ｌｉｎ
ｄｑｕｉｓｔ，Ｇ．；Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８（１９９１）２６８〜
２７７）。
させなければならない。ほぼ任意の生物分子の簡単かつ迅速な結合は、以下の手
段を用いて可能である（Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．；Ｌｏｅｆａｓ，Ｓ．；Ｌｉｎ
ｄｑｕｉｓｔ，Ｇ．；Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８（１９９１）２６８〜
２７７）。
【００４１】 １）光固定化によって保護被覆された表面において結合させられたカルボキシ
メチル化したデキストランを、１工程活性化において、Ｎ−（３−ジメチルアミ
ノプロピル）−Ｎ′−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスク
シンイミド（ＮＨＳ）によってＮＨＳ−エステルに変換する。ＮＨＳ−エステル
は、極めて活性が強く、センサー表面上で約１５分の半減期を有している。次に
生物分子を添加すると、これは、そのアミノ基を介して、Ｎ−ヒドロキシスクシ
ンイミドの分離下にデキストランに結合する。１工程活性化の際に、デキストラ
ンのカルボキシ基の約３０〜４０％は、ＮＨＳ−エステルに変換し、従って、生
物分子の結合後に、一般に、なおも多数の活性ＮＨＳ−エステル基がデキストラ
ンに存在している。しかし、例えば固定された抗体の場合には、免疫反応の際に
、抗原が、抗体によって結合され、ＮＨＳ−エステルを介して共有結合されては
ならないので、過剰のＮＨＳ−エステルは、失活させねばならない。これは、１
Ｍのエタノールアミンを用いて行われる。この場合、ＮＨＳ−エステルは、２−
ヒドロキシ−エタンアミド誘導体に変換されるので、最終的には完成バイオセン
サーが得られるのである。
メチル化したデキストランを、１工程活性化において、Ｎ−（３−ジメチルアミ
ノプロピル）−Ｎ′−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスク
シンイミド（ＮＨＳ）によってＮＨＳ−エステルに変換する。ＮＨＳ−エステル
は、極めて活性が強く、センサー表面上で約１５分の半減期を有している。次に
生物分子を添加すると、これは、そのアミノ基を介して、Ｎ−ヒドロキシスクシ
ンイミドの分離下にデキストランに結合する。１工程活性化の際に、デキストラ
ンのカルボキシ基の約３０〜４０％は、ＮＨＳ−エステルに変換し、従って、生
物分子の結合後に、一般に、なおも多数の活性ＮＨＳ−エステル基がデキストラ
ンに存在している。しかし、例えば固定された抗体の場合には、免疫反応の際に
、抗原が、抗体によって結合され、ＮＨＳ−エステルを介して共有結合されては
ならないので、過剰のＮＨＳ−エステルは、失活させねばならない。これは、１
Ｍのエタノールアミンを用いて行われる。この場合、ＮＨＳ−エステルは、２−
ヒドロキシ−エタンアミド誘導体に変換されるので、最終的には完成バイオセン
サーが得られるのである。
【００４２】 ２）図２は、例えばセンサー応答を用いる固定化を示している。
【００４３】 このセンサーを、まず、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ−緩衝液（ｐＨ７．５）ですす
ぎ洗いして、基準線を引く。１工程活性化は、１００ｍＭのＮＨＳと４００ｍＭ
のＥＤＣとからの新たに準備した混合物を用いて行われる。この表液は、１４．
４ｍＳ／ｃｍの導電性を有しているが、これは、ＨＥＰＥＳ−緩衝液の５５０μ
Ｓ／ｃｍとは異なり、明らかに導電性の向上を表している。次に、このセンサー
を、約１１０ｋＨｚの周波数増大を用いて反応させる。引き続き、ＨＥＰＥＳ−
緩衝液で再度すすぎ洗いし、次に固定化すべき生物分子の溶液で試験する。生物
分子、この場合、ウレアーゼに対する単クローン抗体は、１０ｍＭのアセテート
緩衝液中にｐＨ５．０で存在している。周波数減少が認められるが、これは、生
物分子の固定化によるセンサー表面上での質量増大に帰すべきものである。セン
サー挙動には、平衡の緩徐な調節が認められるが、これは、約４５〜５０分後に
達成される。その上更に、再度ＨＥＰＥＳ−緩衝液ですすぎ洗いし、引き続き、
過剰のＮＨＳ−エステル基をエタノールアミンで失活させる。バイオセンサーの
調製のための最終工程として、非特異性部位をブロックするために、ＢＳＡ４ｍ
ｇ／ｍｌで試験する。
ぎ洗いして、基準線を引く。１工程活性化は、１００ｍＭのＮＨＳと４００ｍＭ
のＥＤＣとからの新たに準備した混合物を用いて行われる。この表液は、１４．
４ｍＳ／ｃｍの導電性を有しているが、これは、ＨＥＰＥＳ−緩衝液の５５０μ
Ｓ／ｃｍとは異なり、明らかに導電性の向上を表している。次に、このセンサー
を、約１１０ｋＨｚの周波数増大を用いて反応させる。引き続き、ＨＥＰＥＳ−
緩衝液で再度すすぎ洗いし、次に固定化すべき生物分子の溶液で試験する。生物
分子、この場合、ウレアーゼに対する単クローン抗体は、１０ｍＭのアセテート
緩衝液中にｐＨ５．０で存在している。周波数減少が認められるが、これは、生
物分子の固定化によるセンサー表面上での質量増大に帰すべきものである。セン
サー挙動には、平衡の緩徐な調節が認められるが、これは、約４５〜５０分後に
達成される。その上更に、再度ＨＥＰＥＳ−緩衝液ですすぎ洗いし、引き続き、
過剰のＮＨＳ−エステル基をエタノールアミンで失活させる。バイオセンサーの
調製のための最終工程として、非特異性部位をブロックするために、ＢＳＡ４ｍ
ｇ／ｍｌで試験する。
【００４４】 ３）図３は、免疫反応の観察を示している。
【００４５】 準備したセンサーに、免疫反応の観察のための第一試験を実施した。このため
に、ウレアーゼに対する単クローン抗体で被覆したセンサーを、まず、１０ｍＭ
のＨＥＰＥＳ−緩衝液（ｐＨ７．５）ですすぎ洗いし、基準線を引いた。引き続
き、周波数減少を認めたが、これは、約９０分後に終了した。ＨＥＰＥＳ−緩衝
液を用いる後洗浄後に、約６５ｋＨｚの周波数変化が得られたが、これは、固定
化された抗体と抗原、ウレアーゼとの間の免疫反応に帰すべきものである。
に、ウレアーゼに対する単クローン抗体で被覆したセンサーを、まず、１０ｍＭ
のＨＥＰＥＳ−緩衝液（ｐＨ７．５）ですすぎ洗いし、基準線を引いた。引き続
き、周波数減少を認めたが、これは、約９０分後に終了した。ＨＥＰＥＳ−緩衝
液を用いる後洗浄後に、約６５ｋＨｚの周波数変化が得られたが、これは、固定
化された抗体と抗原、ウレアーゼとの間の免疫反応に帰すべきものである。
【００４６】 図４は、非特異性抗原を用いる若干の対照試験を示している。
【００４７】 更に複数の対照実験を実施した。このために、等しく処理したセンサーを、非
特異性抗原を用いて試験し、センサー応答を観察した。Ｌ−トリプトファンを有
するウレアーゼに対する固定化された単クローン抗体を用いる前記センサーの試
験の際には、周波数変化は観察されない。分析物を用いる試験もしくは緩衝液を
用いる再洗浄の際の迅速だが可逆的な周波数変化は、両方の溶液のことなる導電
性に帰すべきものである。グルコースオキシダーゼ（ＧＯＤ）もしくはＢＳＡを
用いる試験の際には、それぞれ、約８ｋＨｚの周波数変化が得られる。デキスト
ランマトリクスに固定化された抗体を有していないセンサーは、ウレアーゼを用
いる試験の際に、約１５ｋＨｚの周波数変化したが、これは、ウレアーゼの非特
異性反応に帰すべきものである。しかし、これら全ての周波数変化は、ウレアー
ゼと、６５ｋＨｚまで測定したウレアーゼに対する抗体との間の特異性免疫反応
の周波数変化よりも明らかに小さい。
特異性抗原を用いて試験し、センサー応答を観察した。Ｌ−トリプトファンを有
するウレアーゼに対する固定化された単クローン抗体を用いる前記センサーの試
験の際には、周波数変化は観察されない。分析物を用いる試験もしくは緩衝液を
用いる再洗浄の際の迅速だが可逆的な周波数変化は、両方の溶液のことなる導電
性に帰すべきものである。グルコースオキシダーゼ（ＧＯＤ）もしくはＢＳＡを
用いる試験の際には、それぞれ、約８ｋＨｚの周波数変化が得られる。デキスト
ランマトリクスに固定化された抗体を有していないセンサーは、ウレアーゼを用
いる試験の際に、約１５ｋＨｚの周波数変化したが、これは、ウレアーゼの非特
異性反応に帰すべきものである。しかし、これら全ての周波数変化は、ウレアー
ゼと、６５ｋＨｚまで測定したウレアーゼに対する抗体との間の特異性免疫反応
の周波数変化よりも明らかに小さい。
【図１】 図１は、略図的層構造を示す図である。
【図２】 図２は、センサー応答を用いる固定化を示す図である。
【図３】 図３は、免疫反応の観察を示す図である。
【図４】 図４は、非特異性抗原を用いる若干の対照試験を示す図である。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１２年３月２５日（２０００．３．２５）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ミヒャエル ラップ ドイツ連邦共和国 エッペルハイム コン ラート−アデナウアー−リング 26 (72)発明者 ハンス ジークリスト スイス国 ケルネンリート イム ホルツ 91 Ｆターム(参考） 4B063 QA01 QQ23 QQ30 QR43 QR48 QR51 QR66 QR84 QS33 QS39
Claims (10)
- 【請求項１】 担体上のデキストラン被覆された表面において、デキストラ
ンと担体表面との結合を、光結合剤によって行うことを特徴とする、デキストラ
ン被覆された表面。 - 【請求項２】 光結合剤が、３−トリフルオルメチル−３−（ｍ−イソ チオシアノフェニル）−ジアジリン（ＴＲＩＭＩＤ）変性したタンパク質である
、請求項１に記載のデキストラン被覆された表面。 - 【請求項３】 光結合剤が、３−トリフルオロメチル−３−（ｍ−イソチオ
シアノフェニル）−ジアジリン（ＴＲＩＭＩＤ）変性した多糖類である、請求項
１に記載のデキストラン被覆された表面。 - 【請求項４】 多糖類が、アミノデキストランである、請求項３に記載のデ
キストラン被覆された表面。 - 【請求項５】 タンパク質が、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）である、請求項
１から４までのいずれか１項に記載のデキストラン被覆された表面。 - 【請求項６】 担体表面が、ポリマーフィルムで被覆されている、請求項１
から５までのいずれか１項に記載のデキストラン被覆された表面。 - 【請求項７】 ポリマーフィルムが、ポリイミド又はポリ−（ｐ−キシリレ
ン）である、請求項１から６までのいずれか１項に記載のデキストラン被覆され
た表面。 - 【請求項８】 担体表面が、質量感応性センサーの表面である、請求項１か
ら７までのいずれか１項に記載のデキストラン被覆された表面。 - 【請求項９】 質量感応性センサーが、表面音響波（ＳＡＷ）を利用する構
成部材である、請求項１から８までのいずれか１項に記載のデキストラン被覆さ
れた表面。 - 【請求項１０】 担体表面が、光学センサー又は電気化学的センサーの表面
である、請求項１から８までのいずれか１項に記載のデキストラン被覆された表
面。
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| GB0620504D0 (en) * | 2006-10-16 | 2006-11-22 | Queen Mary & Westfield College | Method |
| JP5021408B2 (ja) * | 2007-09-26 | 2012-09-05 | 富士フイルム株式会社 | バイオセンサー |
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| US9253822B2 (en) * | 2013-06-25 | 2016-02-02 | International Business Machines Corporation | Phase change material variable capacitor |
| US11325112B2 (en) * | 2016-04-01 | 2022-05-10 | Research Foundation Of The City University Of New York | Method of forming inorganic nanocages |
| WO2019206682A1 (en) * | 2018-04-24 | 2019-10-31 | CSEM Centre Suisse d'Electronique et de Microtechnique SA - Recherche et Développement | Method of metal plating of polymer-containing substrates |
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| ATE175681T1 (de) * | 1988-10-17 | 1999-01-15 | Hemasure Inc | Verfahren zur kovalenten oberflächen-modifikation hydrophober polymere und erzeugnisse daraus |
| SE462454B (sv) * | 1988-11-10 | 1990-06-25 | Pharmacia Ab | Maetyta foer anvaendning i biosensorer |
| DE59108783D1 (de) * | 1990-04-12 | 1997-08-21 | Hans Dr Sigrist | Verfahren zur lichtinduzierten immobilisierung von biomolekülen an chemisch "inerten" oberflächen |
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| ATE192487T1 (de) * | 1992-02-13 | 2000-05-15 | Surmodics Inc | Immobilisierung eines chemischen spezies in einer vernetzten matrix |
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| EP0886141A1 (en) * | 1997-06-23 | 1998-12-23 | C.S.E.M. Centre Suisse D'electronique Et De Microtechnique Sa | Optical sensor unit and procedure for the ultrasensitive detection of chemical or biochemical analytes |
-
1998
- 1998-04-24 DE DE19818360A patent/DE19818360C2/de not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-04-19 EP EP99920697A patent/EP1073895B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-19 WO PCT/EP1999/002599 patent/WO1999056119A1/de active Application Filing
- 1999-04-19 AT AT99920697T patent/ATE551600T1/de active
- 1999-04-19 JP JP2000546229A patent/JP2002513153A/ja active Pending
-
2000
- 2000-10-23 US US09/694,241 patent/US6974707B1/en not_active Expired - Fee Related
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