JP2002509888A

JP2002509888A - 腫瘍および他の過増殖性疾患の治療におけるビタミンｄおよびその類似体

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Publication number: JP2002509888A
Application number: JP2000540833A
Authority: JP
Inventors: ウィリアムディー．へンナー; トーマスエム．ビアー
Original assignee: オレゴンヘルスサイエンシーズユニバーシティー
Priority date: 1998-03-27
Filing date: 1999-03-25
Publication date: 2002-04-02
Also published as: US6521608B1; EP1064000A1; ES2368824T3; EP1064000A4; US20030119795A1; EP2340840A1; CA2326117A1; EP1064000B1; ATE515265T1; WO1999049870A1; EP2340840B1; AU762481C; AU762481B2; AU3202299A

Abstract

(57)【要約】ビタミンDの血液または組織濃度を増加させる、薬剤（ビタミンDまたはその類似体のような）のパルス投与による過増殖性疾患（腫瘍および乾癬を含む）の治療について開示する。薬剤は抗増殖作用を有するために十分量を投与するが、薬剤のパルス投与によって重度の症候性または生命を脅かす高カルシウム血症の発症が予防される。特定の態様において、高カルシウム血症（カルシウムの血清濃度が正常範囲異常として測定）も全く予防される。特定の実施例において、薬剤は週に１回約0.5 mcg/kgを経口投与するカルシトリオールである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野本発明は腫瘍および過増殖性疾患の治療におけるビタミンDおよびその類似体の使用に関する。

【０００２】発明の背景ビタミンDはビタミンD受容体に対して親和性を有するセコステロイドファミリ
ーに関する総称名であり、カルシウムと燐酸の代謝の生理的調節に関与している
。太陽への暴露および食物からの摂取がビタミンDの一般源であるが、このビタミンが欠乏すると、くる病および骨軟化症を引き起こしうる。現代社会では、乳
製品および他の食品の補給によってビタミンD欠乏疾患の発生率は減少し、このビタミンに関する医学研究は、多様な病態におけるその治療的作用に向けられる
ようになった。

【０００３】ビタミンD₃はヒト皮膚において7-デヒドロコレステロールと紫外線から合成さ
れる。ビタミンD₃またはその類似体であるビタミンD₂は、食物、例えば栄養強化
乳製品から摂取することができる。ビタミンD₂およびD₃は、肝臓で最初のヒドロ
キシル化を受けて25-ヒドロキシルビタミンDとなり、次に腎臓において1α,25- ジヒドロキシコレカルシフェロール（1,25-ジヒドロキシビタミンDまたはカルシ
トリオールとしても知られる）となり、これがビタミンDの主な生物活性型である。この活性型ビタミンの生体での産生は厳密に生理的に調節されている。

【０００４】ビタミンDはゲノム経路および非ゲノム経路の双方によってそのカルシウム調節活性を発揮する。非ゲノム経路はまだあまり特徴が調べられていないが、ゲノ
ム反応は核ビタミンD受容体（VDR）との結合によって媒介される。VDRは、リガンド活性化転写因子であり、これは標的遺伝子のプロモーター／エンハンサー領
域内に含まれるビタミンD₃反応エレメントに結合する。ビタミンDは腸のカルシウム吸収を刺激することによってカルシウムレベルを正常範囲に維持する。腸吸
収がカルシウム恒常性を維持することができない場合、ビタミンDは単球細胞を刺激して成熟破骨細胞とし、これが骨からカルシウムを動員する。

【０００５】ビタミンDの非カルシウム関連生物活性に関する認識は1979年に、スタンプ（S
tumpf）が、放射活性ビタミンDがカルシウム代謝に関連する多くの組織に局在す
ることを発見したことに始まった（Science 206：1188〜1190、1979）。1981年に、アベ（Abe）らは、マウス骨髄白血病細胞がVDRを有すること、そしてそれら
はビタミンDに暴露されると最終分化に至ることを報告した（PNAS USA 78：4990
〜4994、1981）。それ以来、VDRは前立腺癌、乳癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、子宮内膜癌、膀胱癌、子宮頚癌、卵巣癌、扁平細胞癌、腎細胞癌、骨髄およびリン
パ性白血病、髄質甲状腺癌、黒色種、多発性骨髄腫、網膜芽細胞腫、ならびに軟
組織および骨の肉腫に存在することが記述されている。

【０００６】 1,25ジヒドロキシビタミンDまたはその類似体を用いたインビトロアッセイ法は、前立腺の腺癌（Molec. and Cell Endocrinology 126：83〜90、1997；Proc.
Amer. Assoc. Cancer Res. 38：456、1997；J. Ster. Biochem. and Molec. Bi
ol. 58：277〜288、1996；Endocrinology 137：1554〜1561、1996；Endocrinolo
gy 136：20〜26、1995；Cancer Research 54：805〜810、1994；Endocrinology
132：1952〜1960、1993；およびAnticancer Research 14：1077〜1081、1994）、乳癌（Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 38：456、1997；Biochemical Pharma
cology 44：693〜702、1992）、結腸癌（Biochemical and Biophysical Researc
h Communications 179：57〜62、1991；Archives of Pharmacology 347：105〜1
10、1993）、膵臓癌（British Journal of Cancer 73：1341〜1346、1996）、お
よび子宮内膜癌（Journal of Obsterics and Gynaecology Research 22：529〜5
39、1996）、肺癌（Anticancer Research 16：2953〜2659、1996）、骨髄性白血
病（PNAS USA 78：4990〜4994、1981）、黒色腫（Endocrinology 108：1083〜10
86、1981）ならびに軟組織（Annals of Surgical Oncology 3：144〜149、1996 ）および骨（Journal of the Japanese Orthopaedic Association 69：181〜190
、1995）の肉腫を含む多くの悪性腫に由来する細胞株において抗増殖作用を示し
た。

【０００７】動物における研究は、前立腺癌（Urology 46：365〜369、1994）、乳癌（J. N
CI 89：212〜218、1997；Lancet 1：188〜191、1989）、扁平細胞癌（Molecular
and Cellular Differentiation 3：31〜50、1995）、骨髄性白血病（Blood 74 ：82〜93、1989およびPNAS USA 80：201〜204、1983）および網膜芽細胞腫（Arc
hives of Ophthalmology 106：541〜543、1988；Archives of Ophthalmology 10
6：536〜540、1988）におけるビタミンDまたはその類似体の抗増殖活性を示した
。ビタミンDの抗増殖作用の作用機序は依然として不明であるが、ビタミンDはTG
F-β1およびTGF-β2の合成を増加させ、上皮細胞増殖因子受容体の発現を減少さ
せ、網膜芽細胞腫蛋白質の脱燐酸化を引き起こし、おそらくサイクリン依存的キ
ナーゼ阻害剤p21（warf1）およびp27（kip1）の誘導によってG1期での細胞周期停止を誘導し、ならびにインスリン様増殖因子結合蛋白質の産生を誘導すること
が提唱されている。

【０００８】特許文献には、ビタミンD化合物によって腫瘍を治療する試みが多く記述されている。米国特許第4,391,802号は1α-ヒドロキシビタミンD誘導体による白血病
様疾患の治療を開示した。コレステロールまたはエルゴステロール側鎖より長さ
が長い17側鎖を有する1α-ヒドロキシ誘導体を用いることは、米国特許第4,717,
721号に開示された。さらなるビタミンD類似体が米国特許第4,851,401号（シクロペンタノ-ビタミンD類似体）、米国特許第4,866,048号、米国特許第5,415,846
号（アルキニル、アルケニル、およびアルカニル側鎖を有するビタミンD₃類似体
）、米国特許第5,120,722号（トリヒドロキシカルシフェロール）、米国特許第5
,547,947号（フルオロ-コレカルシフェロール化合物）米国特許第5,446,035号（
メチル置換ビタミンD）、米国特許第5,411,949号（23-オキサ誘導体）、米国特許第5,237,110号（19-ノル-ビタミンD化合物）、米国特許第4,857,518号（ヒドロキシル化24-ホモ-ビタミンD）に記述されている。さらなるビタミンD類似体は
米国特許第4,804,502号、第5,374,629号、第5,403,940号、第5,446,034号、およ
び第5,447,924号に示されている。

【０００９】癌を有するヒトにおけるビタミンDの抗増殖作用を調べるために幾つかの試みが行われてきた。ケフラー（Koeffler）ら（Cancer Treatment Reports 69：139
9〜1407、1985）は、1,25-ジヒドロキシビタミンD 2 mcgを、骨髄異形成症候群の患者18人に８週間以上にわたって毎日投与した。患者18人中８人には末梢血球
数に軽度で一過性の改善が認められたが12週の試験終了時には有意な改善を示し
た患者はなく、患者４人は症候性の高カルシウム血症を発症した。ボウア（Bowe
r）（Lancet 337：701〜702、1991）は、ビタミンD類似体である局所カルシポト
リオールによって局所進行または皮下転移性乳癌患者19人を治療した。６週間の
治療を終了した患者14人中３人が処置病変の二方向直径の50％減少を示し、別の
患者１人が軽度の反応を示したが、高カルシウム血症が治療の合併症であった。
パルミエリ-セビア（Palmieri-Sevier）ら（Am. J. Medical Sciences 306：309
〜312、1993）は、ビタミンD療法によって誘発され、維持されたと思われる副甲
状腺癌の長期寛解例を報告した。ラスチン（Rustin）ら（Brit. J. Can. 74：14
79〜1481、1996）は卵巣癌患者におけるカルシトリオールの持続的投与による臨
床試験を実施したが、またも高カルシウム血症が認められた。

【００１０】ホルモン不応性前立腺癌における経口1,25-ジヒドロキシビタミンD（カルシト
リオール）のフェーズII臨床試験は、オズボーン（Osborn）ら（Urol. Oncol. 1
：195〜198、1995）によって報告された。患者14人にカルシトリオールの１日経
口用量0.5〜1.5 mcgを投与したが、有意な反応は示されず、ほとんどの患者に臨
床的な悪化が報告された。患者13人は、ビタミンDおよびその類似体による治療の最も一般的な副作用である高カルシウム血症を発症した。ビタミンDの高カルシウム作用のために治療的な抗新生物血清濃度まで達しないであろうという懸念
から、癌を有するヒトにこのビタミンを用いる試験は行われてこなかった。本発
明の目的は、腫瘍および他の過増殖性疾患の治療にこのクラスの薬剤を使用でき
るようにする一方で、そのような高カルシウム血症を予防するビタミンD薬剤（カルシトリオールのような）による治療法を提供することである。

【００１１】発明の概要ビタミンDおよびその類似体は本発明に従って、ビタミンD薬剤による治療に反
応性である、上記のタイプの腫瘍のような新生物疾患を治療するために投与する
ことができる。本方法はまた、乾癬、角質化または角化症障害、または座瘡もし
くは脂漏性皮膚炎のような皮脂腺障害のような過増殖性の皮膚疾患を治療するた
めに用いることができる。本方法は、高カルシウム血症、特に症候性高カルシウ
ム血症、例えば３期または４期高カルシウム血症を誘発することなく、治療効果
を得るために十分量のビタミンD薬剤の治療的有効なパルス用量を被験者に投与することを含む。本治療は、腫瘍および過増殖性疾患の治療にしばしば非常に有
効であるが、そのカルシウム血症の副作用のためにこれまで用いられていなかっ
た、非常にカルシウム血症性の薬剤（カルシウム血症指数が0.5またはそれ以上である薬剤のような）を使用できるようにするために特に有効である。本発明の
投与レジメによって、生命に危険がある高カルシウム血症の危険な副作用を誘発
することなく、しかし驚くべきことに、持続的な治療特異的抗腫瘍または全般的
抗増殖作用を示しながら、初めてこれらの薬剤の治療的に有効な抗増殖（および
特に抗新生物）量を投与することができる。

【００１２】開示された第一の態様において、ビタミンD薬剤は、ビタミンD受容体を発現し
、ビタミンD薬剤による治療に反応する新生物を有する被験者に投与する。そのような治療に反応する特定のタイプの腫瘍には、前立腺、乳房、結腸、膵臓、お
よび子宮内膜の腺癌と共に、肺の小細胞癌および非小細胞癌（扁平、腺癌および
大細胞タイプを含む）、頭頚部扁平細胞癌、膀胱の移行上皮癌、卵巣および子宮
頚癌（例えば、扁平細胞癌）、腎細胞癌、骨髄およびリンパ性白血病、リンパ腫
、髄質甲状腺癌、黒色腫、多発性骨髄腫、網膜芽細胞腫、ならびに軟組織および
骨の肉腫が含まれる。特定の態様において、新生物は乳房または前立腺の腺癌で
ある。

【００１３】さらに他の特定の態様において、ビタミンD薬剤は、薬剤の抗増殖用量を投与する被験者において高カルシウム血症（特に症候性、または生命に危険がある高
カルシウム血症）を誘発する薬剤である。本方法は、カルシポトリオール（カル
シウム血症指数約0.05〜0.01）、11α-フルオロメチル-1α,25-(OH)₂-D₃（カルシウム血症指数約0.1）、およびカルシウム血症指数が0.5以上である薬剤、例え
ば１（カルシトリオールのカルシウム血症指数）より大きい、または１に等しい
薬剤と同程度にカルシウム血症性である薬剤に特に適用されると考えられる。本
方法が特に有用である薬剤は、半減期が約１日を超えない薬剤、例えば治療的有
効量を投与した場合に、約６時間を超えない薬剤である。これらの半減期は、完
全な破骨細胞の活性化が起こらないように十分な投与間隔をあけて、そのあいだ
に血液レベルが非カルシウム血症レベルに回復できるように十分に短い。特定の
態様において、カルシウムの血液レベルは次の投与までのあいだに正常に回復す
る。ビタミンD薬剤は、症候性の高カルシウム血症を引き起こすことなく、腫瘍の分化または退縮を誘導するために十分な期間、ビタミンDの血清レベルを超生理的量に上昇させる量を、腫瘍を有する被験者に投与する。

【００１４】例えば、ビタミンD類似体がカルシトリオールである場合、高パルス用量を３日に１回を超えずに、例えば週に１回投与することができる。カルシトリオール
は癌を治療するために過去において用いられていたが、そのようなレジメの用量
は0.5〜1.5 mcg/日を長期間であり、これは症候性高カルシウム血症を引き起こした。本発明の幾つかの態様に従って、カルシトリオールは少なくとも0.12 mcg
/kg/日（8.4 mcgを体重70 kgのヒトに）の用量を５または６日毎に１回を超えず
に、例えば週に１回経口投与する。本発明のパルス用量レジメを用いてさらに高
い用量のカルシトリオール、例えば少なくとも約0.48 mcg/kg/日、例えば１日に
1 mg/kg以上、例えば１日に2〜3 mg/kgを週に１回を超えない用量で経口的にカルシトリオールを投与することが可能である。カルシトリオールまたは他のビタ
ミンD薬剤の用量が増加するにつれて、症候性の高カルシウム血症を防止するために投与間隔をあけることができる（例えば７〜10日）。意外にも、ビタミンD の血液レベルのパルス様の増加は、長期間（例えば10日間）の抗腫瘍または抗増
殖作用を示すために十分であり、その結果高カルシウム血症のリスクが低下した
状態で、本発明の投与レジメに従うことができるようになった。

【００１５】本発明には、薬学的投与剤形にカルシトリオール少なくとも５マイクログラム
（mcg）、例えば５〜100 mcgを含むビタミンD薬剤を含む薬学的組成物も含まれる。投与剤形は、経口、静脈内、筋肉内、局所、皮下、経皮、舌下、鼻腔内、腫
瘍内または他の調製物の形であってもよいが、開示された特定の態様において、
薬学的投与剤形は錠剤またはカプセル剤のような経口投与剤形である。

【００１６】本発明の前述およびその他の目的、特徴および利点は、以下のいくつかの好ま
しい態様の詳細な説明から、より明らかになると思われる。

【００１７】幾つかの態様の詳細な説明定義以下の定義は本明細書において用いられる用語を理解する上で有用であると思
われる。

【００１８】「ビタミンD薬剤」という用語は、ビタミンDの血液もしくは組織レベルを上昇
させる、またはビタミンD受容体に対する親和性を有する、例えば相対的競合指数（RCI）が0.05またはそれ以上、より詳しくは５またはそれ以上、例えば５〜2
50で受容体に結合する薬剤である。RCIはカルシトリオールのRCIを100とする指数である。本用語はまた、ビタミンD₂（エルゴカルシフェロール）およびビタミ
ンD₃（コレカルシフェロール）のような抗リチティック（antirhichitic）活性を有するセコステロイドのファミリー、エルゴステロール（7-デヒドロ-22-デヒ
ドロ-24-メチル-コレステロール）および7デヒドロコレステロール、25-ヒドロキシビタミンD₃、3-ヒドロキシル化ジヒドロタキステロール₂、1α-ヒドロキシル化アルファカルシドール（1α-ヒドロキシビタミンD₃）、およびカルシトリオ
ール（1α,25-ジヒドロキシビタミンD₃）と共に、添付の別紙１に記載した多くの天然および合成ビタミンD類似体を含む（ブイロン（Bouillon）ら、Endocrine
Reviews 16：200〜257、1995）。

【００１９】ビタミンD薬剤はまた、ロカルトロール(Rocaltrol)（登録商標）（ロシュラボ
ラトリーズ）、カルシジェックス(Calcijex)（登録商標）注射用カルシトリオー
ル、EB 1089（25a, 26a, 27a-トリホモ-22,24-ジエン-1αa,25-(OH)₂-D₃）、KH
1060（20-エピ-22-オキサ24a, 26a, 27a-トリホモ-1α,25-(OH)₂-D₃）、MC 1288
およびMC903（カルシポトリオール）を含む、レオファーマシューティカル社の治験薬、1,25-(OH)₂-16-エン-D₃、1,25-(OH)₂-16-エン-23-イン-D₃、および25-(
OH)₂-16-エン-23-イン-D₃を含むロシュ・ファーマシューティカルの薬剤、中外製薬22-オキサカルシトリオール（22-オキサ-1α,25-(OH)₂-D₃、イリノイ大学の
1α-(OH）D₅、ならびにZK 161422およびZK 157202を含むシェリングAG医化学研究所の薬剤のような、現在臨床的に用いられているビタミンD製剤および類似体を含む。別紙３は、これらの化合物のいくつかの化学構造、投与経路および投与
に関するさらなる情報を提供する。ビタミンD類似体はまた、乾癬の治療に用いられるカルシポトリエン（Calcipotriene）（Dovonex）およびタカルシトール（
Tacalcitol）のような局所ビタミンD製剤を含む。

【００２０】「ビタミンD受容体」または（VDR）は、遺伝子およびその産物の特徴付けがす
でになされており、アミノ酸427個を含み、分子量は約47,000であることが判明している強力な転写因子、またはその変種である。ヒトVDRの完全長のcDNAはベイカー（Baker）ら（PNAS USA 85：3294〜3298、1988）に開示されている。

【００２１】「ビタミンD受容体を発現する（または含む）腫瘍細胞」は、ビタミンD受容体
を含むことが示されている腫瘍、その後受容体を含むことが示された腫瘍（免疫
組織化学または他の技術を用いて）、カルシトリオールもしくはその類似体また
は他のビタミンD薬剤による治療に反応して臨床改善を示す腫瘍タイプ（乳癌のような）、および低いビタミンDレベルと高い癌の発生率とのあいだに関連を示す疫学的データが存在する腫瘍（前立腺、乳房、および結腸直腸の腺癌）である
。ビタミンD受容体の存在は、パイク（Pike）（Ann. Rev. Nut. 11：189〜216、
1991）に開示の技術のような、当技術分野で既知の如何なる手段によっても決定
することができる。

【００２２】「ビタミンDの上昇（または超生理的）レベル」は、約0.15 nm（65 pg/ml）以
上の1,25-ジヒドロキシビタミンD血漿濃度、または濃度を測定した研究所におい
て正常以上の他のビタミンD濃度、例えばヒトでは25-ヒドロキシビタミンDの約1
0 ng/ml以上の総ヒト血漿濃度を意味する（この値および他の全ての正常値は濃度測定に用いる技術によって変化しうる）。

【００２３】「高カルシウム血症」とは、濃度を測定した研究所において正常以上のカルシ
ウム血漿濃度、例えばヒトでは約10.5 mg/dL以上を意味する（この値および他の
全ての正常値は濃度測定に用いる技術によって変化しうる）。高カルシウム血症
は別紙IIに記載のように、０〜４の等級に分類することができる。

【００２４】「症候性高カルシウム血症」とは、高カルシウム血症の徴候または症状の１つ
またはそれ以上に関連した、検査によって証明された高カルシウム血症を意味す
る。高カルシウム血症の初期症状には、虚脱、頭痛、嗜眠、悪心、嘔吐、口の渇
き、便秘、筋肉痛、骨痛、または金属味が含まれる。後期症状には、多渇症、多
尿症、体重減少、膵臓炎、羞明、そう痒症、腎機能不全、アミノトランスフェラ
ーゼ上昇、高血圧症、心不整脈、精神病、昏迷、または昏睡が含まれる。燐酸カ
ルシウム産物（カルシウムと燐酸の濃度を乗じる）が70を超える場合、異所石灰
化が報告されている。「重度の症候性高カルシウム血症」とは、等級３〜４の高
カルシウム血症を意味する。

【００２５】「腫瘍」とは、新生物であり、固形および非固形腫瘍（血液悪性疾患のような
）の双方を含む。「過増殖性疾患」とは、細胞の異常な増殖を特徴とする障害で
あり、一般的に乾癬のような皮膚障害と共に、全ての臓器系の良性および悪性腫
瘍が含まれる。「分化」とは、それによって細胞が生物機能を発揮するように、
より特殊化されるようになるプロセスであり、分化は悪性形質転換を受けた細胞
によって完全または部分的に失われる性質である。

【００２６】「治療的有効量」とは、感受性がある被験者において疾患の進行を予防する、
もしくは疾患の退縮を引き起こすために十分である、または発熱、疼痛、食欲減
退、または悪性腫瘍に関連した悪液質のような、疾患によって引き起こされた症
状を緩和することができる用量である。

【００２７】ビタミンD薬剤の「パルス」投与とは、薬剤の薬学的半減期、体内からの排泄速度、およびそのカルシウム血症指数が与えられれば、治療的利益を得るために
十分な期間、しかし、高カルシウム血症を防止するために十分な投与間隔で、超
生理的濃度までビタミンDの血液または組織レベルを増加させるために十分量の薬剤を投与することを意味する。

【００２８】薬剤の「カルシウム血症指数」とは、カルシウム血症反応を生じる薬剤の相対
的能力の測定値、例えば、ブイロン（Bouillon）ら（Endocrine Reviews 16：20
0〜257、1995）が測定して報告した値である。カルシウム血症指数１は、カルシ
トリオールの相対的カルシウム血症活性に対応する。カルシウム血症指数約0.01
は、カルシポトリオールのカルシウム血症活性に対応する。カルシウム血症指数
0.5は、カルシトリオールのカルシウム血症活性の約半分を有する薬剤に対応すると考えられる。薬剤のカルシウム血症指数は実施すべきアッセイ法、例えばヒ
ュルビッツ（Hurwitz）ら（J. Nutr. 91：319〜323、1967）およびヤマダ（Yama
da）ら（Molecular Cellular and Clinical Endocrinology（ベルリン）、767〜
774頁、1988）に報告されているように、腸のカルシウム吸収（ICA）の刺激また
は骨カルシウム動員活性（BCM）を測定するか否か、に応じて変化しうる。したがって、相対的カルシウム血症活性は、最もよく特徴付けがなされているビタミ
ンD薬剤の一つであるカルシトリオールのカルシウム血症活性に関連して表記することが最善である。

【００２９】ビタミンD薬剤 1,25-ジヒドロキシビタミンDの正常な血清レベルは0.05〜0.16 nMの範囲であるが、癌の阻害に必要な治療的薬剤レベルはよくわかっていない。スコウロンス
キ（Skowronski）ら（Endocrinology 136：20〜26、1995）は、1,25-ジヒドロキ
シビタミンD濃度が0.1 MでインビトロでLNCaPヒト前立腺癌細胞の測定可能な増殖阻害を示すこと、そして濃度1.0 nMで50％増殖阻害を示すことを明らかにした
。ピール（Peehl）ら（Cancer Research 54：805〜810、1994）は、ヒト前立腺癌細胞を初代培養において、1,25-ジヒドロキシビタミンD濃度0.25〜1.0 nMと共
にインキュベートして、0.25〜1.0 nMのレベルで半最大増殖阻害を示すことを明
らかにした。癌の治療におけるビタミンDのこれまでの臨床試験は、治療効果を得るためには高レベルの薬剤が長期間必要であるという仮定に基づいて進行して
いた。しかし本発明者らは、意外にも1,25-ジヒドロキシビタミンDの間欠的超生
理的レベル（例えば、0.25 nMより大きい、またはこれに等しい）が、哺乳動物において癌の増殖または他の過増殖性疾患を阻害するために十分であることを示
した。この驚くべき知見によって現在では、治療によって誘発された医原性高カ
ルシウム血症に罹患する実質的なリスクなしに、ビタミンD療法の治療的利益を得ることができる。

【００３０】カルシトリオールは1,25-ジヒドロキシビタミンDの短時間作用型製剤であり、
したがって1,25-ジヒドロキシビタミンDの高い血清レベルを短時間得ることをね
らいとした間欠的治療の機会を提供する。このレジメは驚くべき抗腫瘍活性を有
し、高カルシウム血症のような毒性を最小限にする。カルシトリオールは主に、
通常の用量が0.25〜1.0 mcg/日である補充療法として慢性的に投与された場合に
研究されている。最高血清濃度には２時間で達し、血清半減期は３〜６時間であ
る。カルシウムの腸吸収は投与後２時間で増加し始める。高カルシウム血症作用
は10時間で最高に達して３〜５日持続する。

【００３１】本発明の一つの態様において、有意な高カルシウム血症（例えば症候性の等級
３または４の高カルシウム血症）を引き起こさずに抗増殖作用を有するパルス用
量に関して、1,25-ジヒドロキシビタミンDの血清レベルを治療的有効なレベルに
上昇させるために、カルシトリオールの十分な用量を投与する。カルシトリオー
ルに関して、そのような用量の例は、血清レベル少なくとも約0.5 nM、例えば約
0.9 nMまたはそれ以上（例えば、１〜25 nM例えば、５〜10 nM）を少なくとも２
時間（例えば２〜５時間）、好ましくは６時間以内に生じるであろう。特定の態
様において、カルシトリオールのパルス用量は症候性の高カルシウム血症が起こ
る用量を超えない、またはより好ましくは検査上の高カルシウム血症が起こるパ
ルス用量である。

【００３２】カルシトリオールの補充療法での用量より高い用量の短期効果に関する情報は
、薬剤の作用の予測に役立てるために利用できる。パパポールス（Papapoulus）
ら（Clinical Science 62：427〜429、1982）は、健康なボランティアにカルシトリオール２mcgを１回経口投与して、1,25-ジヒドロキシビタミンDの最高血清濃度0.235および0.351 nMを得た。メイソン（Mason）ら（BMJ 1980：449〜450）
は、健康ボランティアにカルシトリオール４mcgを１回経口投与して、血清カルシウムの上昇が認められない1,25-ジヒドロキシビタミンDの最高血清濃度0.42 n
Mを得た。ブリックマン（Brickman）ら（Am. J. Med. 57：28〜33、1974）は、2
.7 mcg/日までのカルシトリオール用量を７〜15日間健常ボランティアに投与した。カルシウム吸収および排泄は増加したが、血清カルシウムの有意な上昇は認
められなかった。アダムス（Adams）ら（Kidney Int. 21：90〜97、1982）は、カルシトリオール３mcg/日までの用量を６〜12日間健常ボランティアに投与して
、1,25-ジヒドロキシビタミンDの安定な血清濃度0.184〜0.235 nMを得た。低カルシウム食を与えた患者のいずれにおいても血清カルシウムの上昇は認められな
かった。ギューセンス（Geusens）ら（Calcified Tissue Int. 49：168〜173、1
991）は、骨粗鬆症または変形性関節炎の閉経後女性27人にカルシトリオール４m
cg/日を４日間投与した。患者は尿中カルシウム排泄の増加を示したが、尿中ヒドロキシプロリン排泄の増加は示さなかった。患者27人中４人は血清中カルシウ
ムが10.8であったが、臨床的に有意な高カルシウム血症は認められなかった。

【００３３】 1,25-ジヒドロキシビタミンDの抗増殖レベルは、特に短期間の1,25-ジヒドロキシビタミンD療法の際の高カルシウム血症が、破骨細胞の活性化（急速に骨からのカルシウムを動員することができる）ではなくてむしろ腸のカルシウム吸収
の増加（より遅いカルシウム上昇）によって媒介される場合、最小の副作用で短
期間に得ることができる。腸からのカルシウム吸収を最小限にする低カルシウム
食と、カルシウム排泄を最大限にする適度の水和と共に薬剤を投与すると、より
高い1,25-ジヒドロキシビタミンDレベルを得ることができる。間欠投与した場合
のカルシトリオールの最大耐容量は定義されていないが、0.48 mcg/kgもの高用量が高カルシウム血症を起こすことなく耐容されている。

【００３４】治療的抗増殖レベルを達するために十分なビタミンD薬剤のより高用量はまた、パミドロネートのような二燐酸塩破骨細胞阻害剤と共に薬剤を投与することに
よって得てもよい。セルビー（Selby）ら（Endocrinology 108：1083〜1086、19
81）は、ビタミンDとパミドロネートによって高カルシウム血症を治療する例を提供した。骨化石症の患者において破骨細胞が阻害されている場合に、1,25-ジヒドロキシビタミンDの高い血清レベルを得る可能性は、カルシトリオールの32
mcg/日もの高用量を３ヶ月間投与する場合に可能であり（キイ（Key）ら、NEJM
310：409〜415、1984）、この場合1,25-ジヒドロキシビタミンDの安定な血清レベルは高カルシウム血症を起こすことなく2.32 nMでピークに達した。

【００３５】以下の実施例は、本発明の方法全般と共にその使用法を説明するために特定の
例の経過を説明する。これらの実施例は、他のビタミンD薬剤を評価し、ビタミンD反応性過増殖性疾患を有する被験者において、症候性の医原性高カルシウム血症を誘発することなく、ビタミンD薬剤の治療的有効量を決定するための一般的な枠組みも提供する。

【００３６】実施例１全般的治療計画既知のビタミンD受容体陽性腫瘍を有する患者（前立腺、乳房、肺、結腸、もしくは膵臓の腺癌、膀胱の移行上皮癌、または黒色腫）に、処方された低カルシ
ウム食を治療前に摂らせて、腸の吸収を最小限にしてより高用量のビタミンDを用いることができるようにする。この低カルシウム食は治療期間中継続してもよ
く、ビタミンD薬剤の最後の投与を終えてから１週間摂らせてもよい。食事は理想的には、全ての乳製品と共に、骨ごと缶詰になっているイワシおよび他の魚、
豆類、青物野菜、およびカルシウム強化食品または飲料を制限することによって
、１日のカルシウム摂取量を400〜500 mgに制限する。次に、適度の口腔内水和が得られるように、治療の12時間前に開始して、１、２および３日間続けて、通
常の摂取量以上の液体を４〜６杯飲むように被験者に要請した。マグネシウム含
有制酸剤、経口カルシウム補助剤、コレスチラミン、コレスチポール、および他
の胆汁樹脂結合物質もまた治療のあいだ控えてもよい。

【００３７】行ってもよいベースライン臨床検査には、カルシウム、燐酸、および1,25-ジヒドロキシビタミンDの血清濃度が含まれる。最初の用量レベルでは、例えば、カルシトリオール（または用量を決定すべきその他のビタミンD薬剤）0.06 mcg/
kg経口投与を４回に分けて、全体で0.06 mcg/kg用量を服用するまでその一つを４時間のあいだ毎時間服用する。または、より高用量の製剤を１回服用してもよ
い。用量は切り上げてほぼ0.5 mcgにしてもよい。被験者は投与後少なくとも２〜３日間、高カルシウム血症の症状について毎日モニターする。

【００３８】患者には、高カルシウム血症の有無および高カルシウム血症の生理的結果をモ
ニターするために多様な臨床検査を行ってもよい。そのような検査は０時間、24
時間、48時間でのカルシウム、またはクレアチニン、総ビリルビン、ALT、アルカリフォスファターゼ、および全血球計算のベースラインレベルを含んでもよい
。他の可能性がある臨床検査は、０時間、６時間、24時間、48時間での燐酸塩、
1,25-ジヒドロキシビタミンDレベル、および２日目でのカルシウムとヒドロキシ
プロリンの24時間尿回収を含んでもよい。被験者は、疾患が進行するまでまたは
４週間までのいずれか早いほうの期間、ビタミンDのパルス用量を週に１回毎週投与して、登録から２ヶ月間追跡調査する。等級３の毒性が認められた場合は、
治療を中止する。

【００３９】初回用量は文献に報告されている安全用量から選択してもよく、その後、ゴー
ドン＆ウィルソン（Gordon and Willson）（Statistic in Medicine 11：2063〜
2075、1992）が記述したスキームのような多段階増加スキームを行ってもよい。
患者の募集（accrual）はI期、II期、およびIII期で行う。各期は用量を増加する前に患者１、３または６人の募集を必要とする。I期では、各用量レベルに患者１人をあてる。I期では最初の等級３の毒性が認められるまで募集を持続する。等級３の毒性が認められた場合、さらに患者２人を同じ用量レベルで募集して
II期でも募集を継続する。I期において等級４または５の毒性が認められれば、用量を１レベル減少させる。

【００４０】等級３の毒性が認められなければII期において募集を継続する。１つまたは２
つの等級３または４毒性が認められた場合、同じ用量レベルについてさらに患者
３人を募集してIII期において募集を継続する。等級５の毒性１例または等級３または４毒性３例をII期において認めた場合用量を１レベル減少させる。III期では患者６人をそれぞれの用量レベルに登録する。等級３の毒性を１例のみ認め
た場合、用量を増加させて、募集をII期に戻す。等級３またはそれ以上の毒性が
２つまたはそれ以上起こる場合、これ以上用量を増加させない。MTD（最大耐容量）は、被験者の１／３またはそれ以下が等級３の毒性を示した用量として定義
する。カルシトリオールに関して、初回用量は0.06 mcg/kg経口投与を４時間であった。それぞれの連続レベルでは、最初の等級３毒性を認めるまで用量を倍加
する。その後それぞれの用量増加は、改変フィボナッキ（Fibonacci）スキーム（ディルマン＆コジオール（Dilman and Koziol）、Molecular Biotherapy 4：1
17〜121、1992）に従って、先のレベルの1.33倍とする。

【００４１】カルシトリオールに関して、パルス用量をそれぞれの被験者に毎週投与して、
被験者を、虚弱、頭痛、嗜眠、悪心、嘔吐、口の渇き、便秘、筋肉痛、骨痛、金
属味のような高カルシウム血症の初期徴候および症状の有無についてモニターし
た。患者はまた、多渇症、多尿症、体重減少、膵臓炎、羞明、そう痒症、腎機能
不全、アミノトランスフェラーゼ上昇、高血圧症、心不整脈、精神病、昏迷、昏
睡、および異所石灰化のような、より重篤な症状発現に関してもモニターした。
高カルシウム血症の毒性を示した患者には適当な治療を開始して、血清カルシウ
ムが正常に回復するまでカルシトリオールを中止した。

【００４２】以下の表Iは、耐容されるパルス用量を決定するために、それぞれの薬剤について従うことができるプロトコールを示す。治療用量を決定するためのプロトコ
ールは実施例２に記載する。

【表１】耐容量を決定するためのプロトコールの例

【００４３】実施例２治療的有効量の決定 PSA、CA15-3およびその他のような腫瘍マーカーを用いて腫瘍の進行または退縮を評価することができるが、ビタミンDを投与すると、癌細胞の増殖を阻害しながら腫瘍マーカー産生が増加することが示されているため、そのようなアッセ
イ法の結果は時に解釈が難しい。この作用はおそらく、ビタミンDの分化誘導特性による。

【００４４】治療反応を決定するためのもう一つの手段、例えば腫瘍病変の直接放射線測定
もまた用いることができる。測定可能な病変は、外診、X線、またはスキャンによって明確な境界部を有する、二次元的に測定可能な腫瘍と見なしてもよい。少
なくとも１つの直径が好ましくは0.5 cm以上である。骨病変は含まれない。

【００４５】評価可能な疾患には、単方向に測定可能な病変、境界部が明確でない腫瘍塊、
拍動性の結節疾患、双方の直径が0.5 cm未満の病変、および骨疾患が含まれる。
評価不能疾患には、胸水、腹水を示す疾患、または間接的な証拠（例えば評価可
能でない範疇に入る検査値）のみによって示される疾患が含まれる。客観的状態
を臨床試験の登録時と７週目に記録する（１週目はビタミンD薬剤の最初の用量を投与する週である）。臓器に多くの測定可能な病変があってそれぞれの評価時
に測定できない場合、患者の試験参加前に特定数（病変３個のように）を選択し
て追跡調査する。

【００４６】完全な反応（CR）は、測定可能および評価可能な疾患の全ての完全な消失で、
新たな病変を認めないことである。被験者が胸水、腹水または外科的再分類によ
って評価可能な疾患（例えば、精巣および性腺外生殖細胞癌）を有する場合、疾
患は細胞学的に陰性でなければならない。マーカーまたは関与の間接的証拠を有
する患者は異常値を正常化しなければならない。測定可能、評価可能、ならびに
評価不可能な病変および部位は全て評価しなければならない。部分反応（PR）は
、測定可能な全ての病変の垂直方向直径の□50％減少を有する測定可能病変少な
くとも１つを有する被験者、評価可能な疾患の進行を認めない被験者、そして新
たな病変を認めない被験者に認められる。測定可能および評価可能な病変および
部位は全て評価しなければならない。肺癌では、評価可能であるが測定不可能な
腫瘍塊の推定面積の50％以上の減少が異なる観察者によって一致し、胸水を含ま
ない場合である。安定化は完全反応、部分反応または進行として定量できない反
応である。

【００４７】実施例３乳癌の治療この実施例において、骨格の多数の部位に転移した乳癌の42歳女性にカルシト
リオール（ロカルトトール、ロシュ）11 mcg用量を、22錠（各錠剤0.5 mcg）を１、２、３および４時間にほぼ等量に分割することによって投与した。患者にこ
の同じ療法を１、８、15および22日目に行い、その後56日目まで試験として観察
したところ、治療はよく耐容された。患者はNCI毒性等級尺度（別紙２）で等級I
Iまたはそれ以上の毒性を示さなかった。認められた被験者の利益には、疼痛の減少および必要とする鎮痛薬の減少が含まれた。目的とする利益には、血清中腫
瘍マーカーCA15-3の、445（治療前）から、365（27日目）、365（48日目）、および320（70日目）への進行性の減少が含まれた。骨の関与がわかっている領域での放射線評価によって、骨盤および右股関節での多数の病変の進行性硬化が示
され、これは療法に対する陽性反応としての骨の治癒を示している。新規病変ま
たは病的骨折は64日まで認めなかった。

【００４８】実施例４黒色腫の治療この実施例において、右顎に転移性悪性黒色腫を有する72歳男性にカルシトリ
オール（ロカルトロール、ロシュ）37 mcg用量を、錠剤74個を１、２、３および
４時間に４つのほぼ等量に分割することによって投与した。患者にこの同じ療法
を１、８、15および22日目に行い、少なくとも56日まで観察した。カルシトリオ
ールの最後の投与（１週間目）の２時間後に得られた血漿試料中のカルシトリオ
ールのレベルは、エンドクライン・サイエンス・インクの市販のアッセイ法を用
いて測定した。レベルは1826 pg/mlであり、これに対して正常対照者のカルシト
リオールの範囲は21〜65 pg/mlであった。この毎週のスケジュールによってカル
シトリオールの著しく上昇したレベルが得られたにもかかわらず、この患者は如
何なる主観的または客観的毒性も示さなかった。血清カルシウムレベルおよび血
液中の他の化学および血液学的パラメータはなおも正常値であった。

【００４９】実施例５臨床試験結果の要約患者適格基準は、標準的な治療に不応性である組織学的に確認された悪性疾患；年
齢≧18歳；余命＞２ヶ月；ECOG成績≦２以下；ヘマトクリット≧30以上；血清ク
レアチニン≦1.2 mg/dL；血清カルシウム≦10.5 mg/dL；血清燐酸塩≦4.2 mg/dL
；ALT≦60 IU/L；総血清ビリルビン＜２ mg/dLが含まれた。除外基準には、妊娠
、高カルシウム血症の既往、腎石、心不全または３ヶ月以内の心筋梗塞を含む有
意な心疾患、既知の心駆出分画率が30％未満、現在のジゴキシン療法、７日以内
のサイアザイド系利尿薬療法、４週間以内の二燐酸塩治療、２週間以内の全身ス
テロイド療法、および全てのマグネシウム含有制酸剤を停止することができない
こと、胆汁樹脂結合薬、または試験期間中のカルシウム補助剤が含まれた。

【００５０】治療ベースライン評価には、完全な既往および外診、全血球計算、血清クレアチニ
ン、血清カルシウム、血清燐酸塩、総ビリルビンALT、アルカリフォスファターゼ、アルブミン、妊娠可能女性では血清β-hCG、カルシウム測定用24時間尿採取
および腫瘍の測定が含まれた。

【００５１】患者にはまた、４週間の治療のあいだに低カルシウム食をとり、実施例１に記
述したように目標が500 mg/日未満となるように要請した。カルシトリオール（ロカルトロール（登録商標）、ロシュ・ファーマシューティカルズ）を週に１回
、４週間投与した。毎週の投与は４時間のあいだに毎時間４分割用量を４回投与
することによって行った。開始用量は0.06 μg/kgであった。

【００５２】モニタリング全血球計算、血清クレアチニン、総血清ビリルビン、ALT、アルカリフォスファターゼ、を毎週モニターした。血清カルシウムおよび燐酸塩は治療日（１日目
）、ならびに２および３日目にチェックした。24時間の尿中カルシウム排泄を２
日目に測定した。1,25-ジヒドロキシビタミンDレベルは¹²⁵I-ラジオイムノアッセイ法（インクスター、スティルウォーター、ミネソタ州）および仔ウシ胸腺1,
25-ジヒドロキシビタミンD受容体を用いた放射受容体アッセイ法（エンドクライ
ン・サイエンシズ、カラバサスヒル、カリフォルニア州）によって測定した。ピ
ークレベルは全ての丸剤を摂取した２時間後に測定された。谷のレベルは約48時
間後に測定された。

【００５３】食事のコンプライアンスは、カルシウムに富む食品に関する７日間食事アンケ
ートによってモニターした。毎日のカルシウム摂取量はアンケートによって特定
されたカルシウムに富む食品のカルシウム含有量を、基本食の推定カルシウム含
有量に加えることによって推定した。基本食のカルシウム含有量はカルシウム１
mg/8 Kcalであると計算された。カロリー摂取量は、フードプロセッサー7.0ソフトウェア（ESHAリサーチ、サーレム、オレゴン州）を用いて推定した。

【００５４】４週間の治療期間終了後、患者をさらに４週間モニターした。血清カルシウム
を５週目および７週目にチェックして７週目に腫瘍を測定した。毒性は全てNCI の一般毒性基準に従って等級付けを行った。反応はWHOガイドラインに従って評価した。

【００５５】統計学的検討計画した用量増加は、ゴードン＆ウィルソン（Gordon and Willson、1992）に
よって記述された多段階増加スキームに従って実施した。最大耐容量（MTD）は患者の１／３またはそれ以下が等級３の毒性を示した用量として定義した（64）
。反応または安定な疾患の証拠を示し、等級３以上の毒性を示さなかった患者は
、カルシトリオールの同じ用量または次に高い用量のいずれかを投与するように
再登録することが認められた。統計分析は、スタットビュー5.0ウィンドウズソフトウェア（SASインスチチュート、カリー、ノースカロライナ州）を用いて実施した。

【００５６】結果異なる患者15人が治療20サイクルに登録した（表２）。患者２人は疾患が進行
したために４週間のレジメを終了する前に試験を中止した。治療の毒性または食
事の不耐容のために試験を中止した患者はなかった。患者５人は第二の治療サイ
クルを受けるために再登録した。

【表２】試験に登録した個々の患者

【００５７】死亡は認められなかった。毒性のために試験を中止した患者はなく、等級３ま
たはそれ以上の毒性は認められなかった。認められた毒性を全て表３に記載する
。

【表３】それぞれの治療コースにおいて発生した毒性（N＝20） ¹ 本発明者らの研究所では全て正常範囲内（3.4〜10.0 k/mm³）であるが、3.0 〜3.9 k/mm³の等級１毒性に入る。² 全員が試験参加前に等級１異常を示していた。

【００５８】 1,25-ジヒドロキシビタミンDの血清レベルの正常範囲は0.05〜0.16 nM（20〜6
5 pg/ml）である。用量を0.48 μg/kg用量まで増加させると、ピークレベルのほ
ぼ直線的な増加が認められた（表４、図１）。この用量以上では、ピークレベル
のさらなる上昇は認められなかった。1,25-ジヒドロキシビタミンDの谷の血清濃
度は、48時間までに正常またはほぼ正常に回復した（図１）。カルシトリオール
の薬物動態に関する限定された試験から、1,25-ジヒドロキシビタミンDが予想さ
れたように６時間後に減衰することが示された（図２）。

【表４】用量毎の平均ピークおよび48時間1,25-ジヒドロキシビタミンDレベル

【００５９】平均血清カルシウム（正常範囲8.5〜10.5 mg/dL）は、治療前の9.55（SD 0.57
）mg/dLから24時間後の9.76（SD 0.63）mg/dLおよび48時間での9.88（SD 0.68）
mg/dLに増加した（２元繰り返し測定分散分析によってp＝0.0002）。正常範囲以
上のカルシウムレベルは全て、介入を行うことなく２日以内に正常に回復した。
平均血清燐酸塩（正常範囲2.2〜4.2 mg/dL）は、治療前の3.43（SD 0.56）mg/dL
から24時間後の3.98（SD 0.57）mg/dLに増加して、48時間では3.86（SD 0.53）m
g/dLに減少した（二元繰り返し測定分散分析によってp＜0.0001）。平均24時間尿中カルシウム排泄（正常範囲100〜300 mg）は、治療前の130（SD 62）mgで範囲44〜292 mgから、それぞれの治療週の２日目に測定した、263（SD 125）mgで範囲59〜594（一元繰り返し測定分散分析によってp＜0.0001）に増加した。ボン
フェローニ／ダン検定によって治療期間中の尿中カルシウム排泄には統計学的有
意差は認められなかった。

【００６０】測定可能な病変を有する患者８人中５人が安定な疾患を有した。その中で、肺
の腺癌患者、膵臓の腺癌患者、および肝細胞癌患者に治療２サイクルを行ったが
、患者は試験中の全16週間にわたって安定なままであった。肝細胞癌患者は血清
AFPレベルが関連して70％減少した。測定可能な疾患を有する残りの患者３人は進行性疾患の証拠を示した。

【００６１】測定可能な疾患を有しない患者７人中４人が進行の証拠を示さなかった。その
中には実施例３で記述した乳癌患者も含まれた。治療２サイクルを投与した前立
腺癌患者は、登録前にPSAが急速に上昇していたにもかかわらず、薬剤投与期間である16週間全体について安定したPSAを示した。測定可能な疾患を有しない残りの患者３人は、腫瘍マーカーまたは進行性疾患の臨床徴候のいずれかを示した
。

【００６２】カルシトリオール（＜2 mcg/日）による用量制限高カルシウム血症毒性を発症
した患者はなかった。患者にピーク血中カルシトリオールレベルを測定したこと
によって、血液レベル（8.9 nMまで）が培養において癌細胞の増殖阻害すること
がわかっているレベルであることを示している。さらに、薬剤カルシトリオール
は基本的に３日までに血液から完全に消失し、この急速なクリアランスが毎週の
パルススケジュールの安全性プロフィールの増加の説明となる。

【００６３】予期しない結果は、カルシトリオールの用量を0.48 μg/kg以上の用量レベルに増加させても、ピークカルシトリオールレベルがこれ以上増加しないという知
見であった。患者１人においてカルシトリオールレベルのより詳しい測定を行っ
たところ（用量レベル2.0 μg/kg）、吸収は遅れるよりもむしろ高用量では飽和
することが示され、カルシトリオールのいずれのピークも遅れることなく、薬剤
の半減期はより低用量の試験で認められた通常の時間を超えない。カルシトリオ
ールの最大耐容量（MTD）は、この実施例に示したデータによって決定できなかった。

【００６４】要約すると、カルシトリオールの週１回のパルス投与により、進行した悪性疾
患を有する患者に投与することができるカルシトリオールの毎週の総投与量を実
質的に増加させることが可能となる。正常値の上限を超えて約25倍のカルシトリ
オールのピーク血中レベルが最小の毒性で得られた。これらのレベルはカルシト
リオールの抗増殖作用が認められる範囲内に十分入る。カルシトリオールの血中
レベルが0.48 μg/kgを超えて用量を増加させても直線的に増加しないという知見に基づいて、用量レベル0.5 μg/kgは、その腫瘍がこの療法に反応する患者に
おいて治療的有効であるが、許容されない高カルシウム血症が起こらない用量の
例である。

【００６５】実施例６薬学的投与剤形の調製本発明のビタミンD薬剤の薬学的に許容される組成物の調製は、当技術分野で周知の方法を用いて達成することができる。滅菌生理食塩液、血漿等のような一
般的な担体のいずれも本発明のビタミンD薬剤と共に用いることができる。投与経路には経口、頭蓋内、脳室内（icv）、くも膜下（it）、静脈内（iv）、非経口、直腸、局所、眼内、結膜下、鼻腔内、耳内、および経皮が含まれるがこれら
に限定しない。本発明のビタミンD薬剤は、水性生理食塩液媒体のような静脈内注射用の簡便な媒体中で投与してもよい。そのような媒体はまた、例えば浸透圧
を調節するために薬学的に許容される塩、緩衝液、保存剤等のような従来の薬学
的調節材料を含んでもよい。そのような媒体は、ポリソルベート、通常の生理食
塩液、乳酸加リンゲル液、および血漿である。ビタミンDは幾分不溶性であり、したがってビタミンD薬剤を投与するために、ゴマ油または同等の親油性製剤のような可溶化剤を用いてもよい。

【００６６】錠剤またはカプセル剤のような薬剤を含む本発明の態様は、当技術分野で既知
の従来の薬学的に許容される担体、補助剤および対イオンと共に調製することが
できる。態様は好ましくは、錠剤、丸剤、粉剤、液体または懸濁液、および注射
可能および注入可能溶液、例えば単位投与バイアルのような、固体、半固体、お
よび液体投与剤形における単位投与剤形である。カルシトリオールの単位用量に
含まれる有効な用量範囲は、約５ mcg〜約100 mcgまで変化する。カルシトリオールの単位用量は、症候性の高カルシウム血症を誘導することなく、薬剤の高パ
ルス治療的有効量を投与することができるという予期しない知見のために、これ
までに用いられている用量よりかなり高い。

【００６７】実施例７結合親和性の決定ビタミンD薬剤のビタミンD受容体に対する結合親和性は、参照として本明細書
に組み入れられる、ピール（Peehl）ら（Cancer Research 54：805〜810、1994 ）のVDR結合分析およびスキャッチャードプロットのような如何なる許容可能な手段によっても決定することができる。

【００６８】 VDR親和性は、カルシトリオールに対するRCIが100に設定されている相対的競合指数（RCI）を決定するために、放射性標識カルシトリオールによる競合的受容体アッセイ法によってアッセイすることができる。ビタミンD類似体のいくつかのRCIを別紙３に記載する。

【００６９】実施例８腫瘍細胞に及ぼすビタミンD受容体の検出腫瘍細胞上のVDRの有無は、実施例７において参照として本明細書に組み入れられる、ピール（Peehl）らが記述した方法によって検出することができる。免疫組織化学（カイザー（Kaiser）ら、J. Cancer Res. Clin. Onc. 122：356〜35
9、1996）；ウェスタンブロット（クロス（Cross）ら、Anticancer Reseacrh 16
：2333〜2338、1996）リガンド結合アッセイ法およびRNAとのDNAプローブハイブ
リダイゼーション（ノザンブロット）（Endocrinology 132：1952〜1960）；ならびにリボヌクレアーゼ保護アッセイ法によるRNAの検出（シャバハン（Shabaha
ng）ら、Annals of Surg. Onc. 3：144〜149、1996）を含む、他の多様なアッセ
イ法を用いてVDRを検出することができる。

【００７０】本発明の原理を適用してもよい多くの可能性がある態様に関して、説明した態
様は本発明の好ましい例に過ぎず、本発明の範囲を制限するものと解釈してはな
らないことを理解すべきである。むしろ、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲
によって定義される。したがって、本発明者らは、これらの特許請求の範囲およ
び精神の範囲に入る全てを本発明者らの発明として請求する。

【００７１】核VDRの相対的競合指数（RCI）およびビタミンD結合蛋白質（DBP）のRCIに関する表の数値は、100に標準化した1α,25(OH)₂D₃の結果と比較して表示のパラメ
ータに関してデータを作表する；このように、データの値は1α,25(OH)₂D₃値の割合を表す。データ入力のキイは以下の通りである。RCIは、インビトロ条件下で核の1α,25(OH)₂D₃受容体（VDR）（141）または血漿ビタミンD輸送蛋白質（DB
P）（142）との結合に関して[³H]1α,25(OH)₂D₃と競合する類似体の相対的能力を測定する。細胞分化のデータはそれに対して値を1.00に設定する1α,25(OH)₂D ₃ に関連している。カルシウム血症指数データは1α,25(OH)₂D₃の値と比較して1.
00の値を設定する。

【００７２】 SPCは、nVDRの起源となる種を示し、c＝ニワトリの腸、r＝ラット腸、b＝ウシ
胸腺、p＝ブタ腸、m＝MCF-7ヒト乳癌細胞、z＝ラット骨肉腫ROS 17/2.8細胞であ
る。DBPに関してはデータは全てヒト蛋白質から得ている。細胞分化データはヒト形質転換細胞株から得ており、h＝HL-60細胞、u＝U937である。カルシウム血症指数は、「カルシウム血症」反応を生じる類似体の相対能力の測定値であり、
実施されるアッセイ法に応じて異なるように定義される；cまたはi＝ビタミンD 欠乏症のニワトリにおける腸のCa²⁺吸収（ICA）または骨Ca²⁺動員活性（BCM）（
146,553）；b＝骨吸収；cbp＝ビタミンD誘発カルシウム結合蛋白質であるカルビ
ンディン-D28kの誘導；sc＝血清Ca²⁺の上昇＝濃度；oc＝オステオカルシン血清レベルの増加；r＝尿中Ca²⁺排泄の増加。参考文献の番号は括弧内に示し、ボレイロン（Boleillon）ら、1995の参考文献番号を参照のこと。

【００７３】

【図面の簡単な説明】

【図１】カルシトリオールの表示の用量を４時間にわたって投与した被験
者におけるピークと谷の血漿カルシトリオールレベルを示す略図である。ピーク
レベル（白菱形）は、投与６時間後に測定され、谷のレベル（白丸）は投与48時
間後に測定された。

【図２】カルシトリオール2.0 μg/kgを投与した被験者における血漿カル
シトリオールレベルの時間経過を示す。

【手続補正書】

【提出日】平成１２年９月２８日（２０００．９．２８）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１１】発明の概要ビタミンDおよびその類似体は本発明に従って、ビタミンD薬剤による治療に反
応性である、上記のタイプの腫瘍のような新生物疾患を治療するために投与する
ことができる。本方法はまた、乾癬、角質化または角化症障害、または座瘡もし
くは脂漏性皮膚炎のような皮脂腺障害のような過増殖性の皮膚疾患を治療するた
めに用いることができる。本方法は、高カルシウム血症、特に症候性高カルシウ
ム血症、例えば３等級または４等級の高カルシウム血症を誘発することなく、治
療効果を得るために十分量のビタミンD薬剤の治療的有効なパルス用量を被験者に投与することを含む。本治療は、腫瘍および過増殖性疾患の治療にしばしば非
常に有効であるが、そのカルシウム血症の副作用のためにこれまで用いられてい
なかった、非常にカルシウム血症性の薬剤（カルシウム血症指数が0.5またはそれ以上である薬剤のような）を使用できるようにするために特に有効である。本
発明の投与レジメによって、生命に危険がある高カルシウム血症の危険な副作用
を誘発することなく、しかし驚くべきことに、持続的な治療特異的抗腫瘍または
全般的抗増殖作用を示しながら、初めてこれらの薬剤の治療的に有効な抗増殖（
および特に抗新生物）量を投与することができる。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１４

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１４】例えば、ビタミンD類似体がカルシトリオールである場合、高パルス用量を３日に１回を超えずに、例えば週に１回投与することができる。カルシトリオール
は癌を治療するために過去において用いられていたが、そのようなレジメの用量
は0.5〜1.5 mcg/日を長期間であり、これは症候性高カルシウム血症を引き起こした。本発明の幾つかの態様に従って、カルシトリオールは少なくとも0.12 mcg
/kg/日（8.4 mcgを体重70 kgのヒトに）の用量を５または６日毎に１回を超えず
に、例えば週に１回経口投与する。本発明のパルス用量レジメを用いてさらに高
い用量のカルシトリオール、例えば少なくとも約0.48 mcg/kg/日、例えば１日に
1 mcg/kg以上、例えば１日に2〜3 mcg/kgを週に１回を超えない用量で経口的にカルシトリオールを投与することが可能である。カルシトリオールまたは他のビ
タミンD薬剤の用量が増加するにつれて、症候性の高カルシウム血症を防止するために投与間隔をあけることができる（例えば７〜10日）。意外にも、ビタミン
Dの血液レベルのパルス様の増加は、長期間（例えば10日間）の抗腫瘍または抗増殖作用を示すために十分であり、その結果高カルシウム血症のリスクが低下し
た状態で、本発明の投与レジメに従うことができるようになった。

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２２

【補正方法】変更

【補正内容】

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４６

【補正方法】変更

【補正内容】

【００４６】完全な反応（CR）は、測定可能および評価可能な疾患の全ての完全な消失で、
新たな病変を認めないことである。被験者が胸水、腹水または外科的再分類によ
って評価可能な疾患（例えば、精巣および性腺外生殖細胞癌）を有する場合、疾
患は細胞学的に陰性でなければならない。マーカーまたは関与の間接的証拠を有
する患者は異常値を正常化しなければならない。測定可能、評価可能、ならびに
評価不可能な病変および部位は全て評価しなければならない。部分反応（PR）は
、測定可能な全ての病変の垂直方向直径の50％減少を有する測定可能病変少なく
とも１つを有する被験者、評価可能な疾患の進行を認めない被験者、そして新た
な病変を認めない被験者に認められる。測定可能および評価可能な病変および部
位は全て評価しなければならない。肺癌では、評価可能であるが測定不可能な腫
瘍塊の推定面積の50％以上の減少が異なる観察者によって一致し、胸水を含まな
い場合である。安定化は完全反応、部分反応または進行として定量できない反応
である。

【手続補正５】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ビアートーマスエム．アメリカ合衆国オレゴン州ポートランドエス．イー． 46スアベニュー 1242 Ｆターム(参考） 4C086 AA01 AA02 DA15 DA16 MA01 MA02 MA04 MA52 ZA81 ZB26 ZB27 ZC23 ZC41

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】抗増殖作用を有するが重度の症候性高カルシウム血症を誘発
しない十分量である、ビタミンD薬剤の治療的に有効なパルス用量を、被験者に投与することを含む、過増殖性疾患がビタミンD薬剤による治療に反応する、被験者における過増殖性疾患を治療する方法。
【請求項２】ビタミンD受容体を発現する新生物を有する被験者にビタミンD薬剤を投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】新生物が前立腺、乳房、結腸、肺、頭頚部、膵臓、子宮内膜
、膀胱、子宮頚部、卵巣の癌、扁平細胞癌、腎細胞癌、骨髄およびリンパ性白血
病、リンパ腫、髄質甲状腺癌、黒色種、多発性骨髄腫、網膜芽細胞腫、ならびに
軟組織および骨の肉腫からなる群より選択される、請求項２記載の方法。
【請求項４】新生物が乳癌または前立腺癌である請求項３記載の方法。
【請求項５】ビタミンD薬剤が、カルシポトリオールより大きい、またはこれに等しいカルシウム血症指数を有する、請求項１記載の方法。
【請求項６】ビタミンD薬剤が1.0より大きいカルシウム血症指数を有する
、請求項１記載の方法。
【請求項７】ビタミンD薬剤の半減期が約１日を超えない、請求項５記載の方法。
【請求項８】ビタミンD薬剤の半減期が約６時間を超えない、請求項７記載の方法。
【請求項９】ビタミンD薬剤が、症候性の高カルシウム血症を引き起こすことなく腫瘍の分化または退縮を引き起こすために十分な期間、ビタミンDの血清濃度を超生理的量に上昇させる量で、腫瘍を有する被験者に投与される、請求
項８記載の方法。
【請求項１０】ビタミンD薬剤がカルシトリオールであって、３日に１回を超えずに治療的に有効なパルス用量で投与される、請求項１記載の方法。
【請求項１１】カルシトリオールが少なくとも0.12 mcg/kg/日の用量で週
に１回を超えずに経口投与される、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】カルシトリオールが少なくとも0.48 mcg/kgまたは約１mcg
/kg/日の用量で週に１回を超えずに経口投与される、請求項１０記載の方法。
【請求項１３】腫瘍がビタミンD受容体を発現し、ビタミンD薬剤による治
療に反応性である、被験者における腫瘍を治療する方法であって、カルシトリオ
ール約0.5 mcg/kgの用量を３日に１回を超えずに被験者に経口投与することを含
む方法。
【請求項１４】ビタミンD薬剤が週に１回を超えずに被験者に投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】毎日投与すれば高カルシウム血症を引き起こす用量のビタ
ミンD薬剤を薬学的投与剤形として含む組成物。
【請求項１６】ビタミンD薬剤が少なくとも５ mcgの量で組成物に含まれるカルシトリオールである、請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】薬学的投与剤形が経口投与剤形の少なくとも100 mcg／単位を含む経口投与剤形である、請求項１６記載の組成物。
【請求項１８】薬学的投与剤形が錠剤またはカプセル剤である、請求項１
６記載の組成物。
【請求項１９】ビタミンD薬剤がカルシトリオールであって、薬学的投与剤形がカルシトリオール少なくとも５ mcgを含む錠剤である、請求項１６記載の
組成物。
【請求項２０】被験者が、食事からのカルシウム吸収を減少させるために
ビタミンD薬剤の投与前に十分な期間、低カルシウム食を処方される、請求項１記載の方法。
【請求項２１】被験者においてビタミンD受容体を発現する腫瘍を治療する方法であって、被験者に高カルシウム血症を誘発することなく腫瘍の増殖を阻
害するために十分な期間、ビタミンDの血中レベルを十分に超生理的レベルに上昇させることを含む方法。
【請求項２２】ビタミンDの血中レベルが、被験者にビタミンD薬剤を投与
することによって上昇する、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】ビタミンD薬剤がカルシトリオールである、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】カルシトリオールが１週間に１回約0.50 mcg/kgの用量で投与される、請求項２３記載の方法。