JP2002508396A - 濾過によるウイルス的に安全な因子ｖｉｉｉ溶液の調製方法 - Google Patents

濾過によるウイルス的に安全な因子ｖｉｉｉ溶液の調製方法

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Abstract

(57)【要約】 本発明はウイルス上安全で、高分子ｖＷＦを実質的に含まない因子ＶＩＩＩ溶液を濾過により調製する方法であって、高純度のまたは極めて高純度の因子ＶＩＩＩを含有する、または高分子ＶＩＩＩ−ｖＷＦ因子複合体を実質的に含まない溶液を調製し、要すれば高分子ＶＩＩＩ−ｖＷＦ因子複合体を化学的に分解する工程ａ）を任意に行って高分子ｖＷＦと会合した因子ＶＩＩＩを実質的に含まない溶液を得、１５ｎｍといった小さな多孔性を有する親水性フィルターでこの高分子ｖＷＦと会合した因子ＶＩＩＩを実質的に含まない溶液を濾過するという方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、ウイルス上安全であって、高分子因子ＶＩＩＩ−フォンビルブラン
ト因子（ｖＷＦ）複合体を含むまたは実質的に含まない高純度もしくは超高純度
因子ＶＩＩＩ溶液からｖＷＦを実質的に含まない因子ＶＩＩＩ溶液を濾過調製す
る方法に関する。
【０００２】 因子ＶＩＩＩは、血中における因子ＶＩＩＩの欠陥または不在により引き起こ
される先天性疾患である血友病Ａ患者の治療に長年使用されてきた血中のタンパ
ク質成分である。長い間、これらの患者の治療には因子ＶＩＩＩ豊富な血漿濃縮
物が使用されてきた。
【０００３】 最もよく使用されていたのは濃縮物は寒冷沈降物および寒冷沈降から得られた
精製濃縮物であった。通常、寒冷沈降物とは、低温血漿分画技術により冷凍のヒ
ト血漿から得られる沈降物をいう。冷凍血漿を約−５℃〜−１５℃の温度で軟化
し、次いで攪拌しながら３℃を超えない温度まで徐々に再加熱する。このような
条件下では、冷凍血漿は部分的に融解して液相と固相が得られ、次ぎに固相を遠
心分離により回収すると寒冷沈降物が得られ、その後これを精製して十分純粋な
因子ＶＩＩＩ沈降物としなければならない。この寒冷沈降画分は実質的にフィブ
リノーゲン、フィブロネクチン、因子ＶＩＩＩおよびフォンビルブラント因子（
ｖＷＦ）からなる。
【０００４】 この寒冷沈降画分において、因子ＶＩＩＩは一般にｖＷＦと会合しており、ｖ
ＷＦは複合化により因子ＶＩＩＩを安定にする。
【０００５】 長い間、この精製工程は実質的に特にフィブリノーゲンおよびフィブロネクチ
ンといった所望でないタンパクを因子ＶＩＩＩからから分離することに向けられ
てきた。
【０００６】 しかしながら、血漿から因子ＶＩＩＩの調製に関する本質的な問題の１つは元
々その血液に含まれるウイルスを満足のいく収率で不活性化／除去する必要性で
あることが知られている。
【０００７】 これらのウイルス粒子を網羅的リストを確立することは難しいが、特に種々の
肝炎ウイルス、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎およびＧ型肝炎、または種々の型
のエイズウイルス（ＨＩＶ）が記載され得る。
【０００８】 こうして加熱乾燥、低温殺菌または溶媒／界面活性剤処理など多くのウイルス
不活性化技術が開発された。これら一連の技術はエンベロープウイルスに関して
は比較的効果的であるが、裸のウイルス、特にＢ１９パルボウイルスまたはＡ型
肝炎ウイルスなどの小型のウイルスの不活性化もしくは除去は未だ主要な問題の
１つである。
【０００９】 より最近の技術では、小孔径膜のウイルス保持能を利用する。この技術はＢ１
９パルボウイルスまたはＡ型肝炎ウイルスなどの小型のウイルスに関しては事実
上著しい効果を示し、低分子タンパク質に適用することができる。しかしながら
、９００ｋＤよりも小さい使用排除限界は、高分子タンパク質または収量に大き
な損失のない因子ＶＩＩＩのようなタンパク質複合体の濾過を考慮することはで
きない。
【００１０】 従って、例えば、特許公報ＷＯ９６／００２３７には、少なくとも１種の高分
子を含有する溶液におけるタンパク質の濾過性を向上させる方法が記載されてお
り、この方法は全塩含量が関連する塩０．２Ｍから飽和まで変化する溶液を用い
ることにある。このような高塩含量の効果は濾過収率を高めることである。好ま
しくはこの濾過工程は注目される高分子の比活性がすでに極めて高い段階で用い
られ、そうすれば非常に微細な構造を有するフィルターを用いて、非常に小さな
ウイルスを除去することができる。
【００１１】 しかしながら、この公報は、因子ＶＩＩＩ、特に通常ｖＷＦと会合して、この
ように高分子複合体を形成している血漿起源の因子ＶＩＩＩなど分子量の極めて
高い分子を含有する溶液の濾過を何ら意図するものではない。この公報は、平均
分子量約１７０ｋＤで、ｖＷＦを全く含まない欠損型の組換え因子ＶＩＩＩの例
を挙げている。例は総てその平均分子量が約５５ｋＤである因子ＩＸに関するも
のであり、この文書は記載の方法が特にこのサイズの分子に適したものであり、
フィルターの排除限界が大きくなるほど濾過される分子のサイズはわずかながら
大きくならなければならないことを強調するものである。このように、因子ＩＸ
に関して、使用したフィルターは７０ｋＤの排除限界を有する。
【００１２】 従って、先に示したように、その起源により因子ＶＩＩＩはそれを有意な大き
さにする複合化形態とすることができ、この大きさは分子量については２０，０
００ｋＤに、粒子サイズについては数十ナノメーターに達し得る（＞分子の主軸
では１０６ｎｍ、Eppel et al., Langmuir 1993, 9, 2281-88, American Chemic
al Society）。現在のところ、この種の分子を満足に濾過し、例えば約１８〜２
０ｎｍの大きさのＢ１９パルボウイルスのような小型のウイルスを同時に除去す
るのに利用できる手段はない。
【００１３】 発明者らは今般、驚くことに、高分子因子ＶＩＩＩ−ｖＷＦ複合体を含むまた
は実質的に含まない高純度または超高純度因子ＶＩＩＩ含有溶液から、濾過によ
り、ウイルス上安全で、高分子ｖＷＦを実質的に含まない因子ＶＩＩＩ溶液が得
られることを見出した。
【００１４】 このため本発明の主題は、ウイルス上安全であって、高分子ｖＷＦを実質的に
含まない因子ＶＩＩＩを濾過により調製する方法であって、 高分子因子ＶＩＩＩ−ｖＷＦ複合体を含むまたは実質的に含まない、高純度ま
たは超高純度因子ＶＩＩＩ含有溶液を調製し、 必要であれば、高分子因子ＶＩＩＩ−ｖＷＦ複合体の解離および高分子ｖＷＦ
が会合した因子ＶＩＩＩを実質的に含まない溶液の作製を可能とする工程ａ）を
任意に行い、 １５ｎｍの多孔性を有する親水性フィルターを通して、高分子ｖＷＦが会合し
た因子ＶＩＩＩを実質的に含まない溶液を濾過する工程ｂ）を行う ことを特徴とする方法である。
【００１５】 ＦＶＩＩＩ溶液の濾過による調製法により有利には、高分子ｖＷＦ、特に１５
より大きいかまたは同等の重合度を有するｖＷＦを実質的に含まない溶液の作製
が可能となり、すなわちここでｖＷＦは質的、量的双方において制御される。本
発明の方法はまた、高分子タンパク質複合体の量を減らすので濾過収率を著しく
高めることができ、満足のいく純度を有し、なおかつ同時に１５ｎｍ以上の大き
さのヒト病原性ウイルスの除去を確実とする溶液を得ることができる。
【００１６】 高分子因子ＶＩＩＩ−ｖＷＦ複合体の解離を可能とする工程ａ）は、因子ＶＩ
ＩＩ開始溶液の起源および調製方法、すなわちその開始溶液中に高分子ｖＷＦが
会合した因子ＶＩＩＩが存在しているか存在していないかという条件によって必
要であったり必要でなかったりする。
【００１７】 ＦＶＩＩＩ−ｖＦＷ複合体の解離は、解離を可能とするに十分な量で存在する
少なくとも１種のカオトロピックイオンによって得られる。
【００１８】 それらは好ましくは０．２Ｍから塩飽和までの塩水の形態で因子ＶＩＩＩ溶液
に導入される２価イオンであろう。
【００１９】 限定されるものではないが例としては、ＣａＣｌ２またはＭｇＣｌ２が挙げら
れる。好ましくはＣａＣｌ２溶液が使用されよう。この溶液の濃度は好ましくは
約０．３５Ｍであろう。
【００２０】 濾過に対する特殊な条件の他、解離に用いられる条件は、それに続く濾過収率
に影響を及ぼすことが認められてる。これら一連の条件を規定するパラメーター
は解離工程中では塩の特性とそれらの濃度であり、濾過工程中では圧力と温度で
ある。
【００２１】 驚くことに濾過収率は、濾過工程中の経膜圧をフィルター供給者により奨励さ
れている奨励限界以下の極めて低い値まで低下させた場合に著しく向上する。
【００２２】 また温度も濾過収量に少なからず影響を及ぼし、この温度の効果は低すぎても
、あるいは高すぎてもｖＷＦの多量体型の数を引き上げることはできない。有利
には約３５±５℃の温度が選択される。
【００２３】 市販のまたは開発中で利用可能なウイルスフィルターのうち、例えばＡｓａｈ
ｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙから市販されているＰｌａｎｏｖａ（登
録商標）１５Ｎ膜が挙げられる。
【００２４】 この場合、このフィルターは０．３バールより低い圧力で、有利には０．２バ
ールより低い圧力で使用することが好ましい。
【００２５】 種々の濾過技術が使用できる。最も一般的な技術としては接線濾過または正面
濾過法があり、同種のフィルターを用いて使用できる。
【００２６】 精製された因子ＶＩＩＩ開始溶液は、例えば血漿の寒冷沈降画分などの血漿画
分から種々の方法で、あるいは組換え経路により調製できる。当業者に公知のあ
らゆる調製条件が使用できる。限定されるものではないがある様式として、本発
明の方法を実施するために使用できる因子ＶＩＩＩ予備精製溶液の作製を可能と
する下記精製法が記載され得る：
【００２７】 例えば特許ＥＰ−Ｂ−３５９ ５９３、ＥＰ ０ ３４３ ２７５、ＵＳ ４ ７４３ ６８０、ＷＯ ９７／１７３７０およびＥＰ ０ １７３ ２４２に
記載の変法の１つによるイオン交換クロマトグラフィー。
【００２８】 例えば特許出願公報ＷＯ ９７／３９０３３またはＥＰ ０ ２８６ ３２３
に、または文書Zimmerman and Fulcher, Thrombosis Res., Suppl. VII, p 58,
1987; Berntorp and Nilson, Thrombosis Res., Supp. VII, p 60, 1987に記載 の変法の１つによるイムノアフィニティークロマトグラフィー。
【００２９】 P.J. Fay (P.J. Fay et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA Vol. 79 p 7200-720
4, 1982)により記載されたような解離または非解離媒質中でのゲル濾過クロマト
グラフィー。
【００３０】 特許出願公報ＷＯ ９３／２２３３７に記載されたような固定化ヘパリン上で
のアフィニティークロマトグラフィー。
【００３１】 典型的には血漿の寒冷沈降画分などの血漿画分からのイオン交換クロマトグラ
フィーによる精製は、エンベロープウイルスの不活性化を可能とするウイルス不
活性化工程を含んでなる。種々のクロマトグラフィー系が使用でき、その吸着条
件、次いでの因子ＶＩＩＩ濃縮画分の溶出はその方法の結果としての収率に影響
を及ぼし得る。マトリックスおよびイオン交換物質の特性は様々であり得る。例
えばＴｏｓｏ Ｈａａｓ Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ−ＤＥＡＥ ６５０ Ｍゲルのよ
うな弱いイオン交換クロマトグラフィー系、または例えばＱ−Ｓｅｐｈａｒｏｓ
ｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗゲル（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）のような
強いイオン交換クロマトグラフィーが例えば使用できる。開始溶液をイオン交換
精製により調製する場合、高分子ｖＷＦが会合した因子ＶＩＩＩが相当量含まれ
、工程ａ）が必要である。
【００３２】 工程ａ）における解離は溶出と同時に、あるいはもう１つの態様によれば溶出
後に行うことができる。カオトロピック塩の存在下で行われる溶出の効果は、Ｎ
ａＣｌなどの塩の存在下で行われる溶出に比べ溶出収率が高まることにあるが、
同時に必要条件下でそれに続く濾過工程を行うのに必要な解離を確実にする。
【００３３】 好ましい具体例によれば、イオン交換クロマトグラフィーによる精製の終了時
に得られる因子ＶＩＩＩ濃縮溶液は次いで工程ａ）の解離条件下、すなわちカオ
トロピックイオンの存在下で溶出される。
【００３４】 因子ＶＩＩＩ開始溶液の予備精製もまたヘパリン沈降法により得られる。この
場合、血漿のヘパリン寒冷沈降画分は、ヘパリンの存在下で、約１４℃〜約１９
℃の温度まで冷却、遠心しながら、例えば水酸化アルミニウムゲルに吸着させる
。沈降上清に対して行われる第１のウイルス不活性化工程は、有利には欧州特許
公報ＥＰ−Ａ−０３４３２７５に記載されたような溶媒／界面活性剤処理により
行うことができる。次いでイオンに交換クロマトグラフィーの前に沈降上清のｐ
Ｈおよび浸透圧を調節する。
【００３５】 もう１つの具体例によれば、因子ＶＩＩＩ開始溶液はイムノアフィニティーに
より得られる。この場合、この開始溶液は高分子ｖＷＦが会合した因子ＶＩＩＩ
を実質的に含まないものであり得る。従って高分子因子ＶＩＩＩ−ｖＷＦ複合体
の解離を可能とする工程ａ）の使用は任意である。
【００３６】 最後に、組換え因子ＶＩＩＩの溶液から始めることも意図でき、これにはさら
なるウイルス不活性化工程が必要となる可能性がある。工程ａ）を使用する必要
はないであろう。
【００３７】 因子ＶＩＩＩ開始溶液は少なくとも５０ＩＵ／ｍｇと同等、好ましくは少なく
とも１００ＩＵ／ｍｇと同等の比活性を有することが好ましく、溶液の濾過性は
因子ＶＩＩＩの比活性にともない高まる。
【００３８】 示されたような比活性は因子ＶＩＩＩを安定化させるために所望によるアルブ
ミンの添加の前に示すことが意図される。
【００３９】 さらに詳しくは、因子ＶＩＩＩ濃度：Ｃが約２〜約１００Ｕ／ｍｌ、好ましく
は約１０〜約５０Ｕ／ｍｌである開始溶液が使用される。
【００４０】 因子ＶＩＩＩ開始溶液のタンパク質含量は有利には約０．０５〜約０．５ｍｇ
／ｍｌ、好ましくは約０．１〜約０．５ｍｇ／ｍｌであろう。
【００４１】 このタンパク質含量はブラッドフォードタンパク質アッセイ法により求められ
る（アッセイキットはＰｉｅｒｃｅ社により市販）。
【００４２】 一度濾過が行われてしまうと、濾過された因子ＶＩＩＩおよびフォンビルブラ
ント因子は、例えば透析により解離剤を除去した後に複合体の形態に再会合し、
商業上の使用のために処方された因子ＶＩＩＩ溶液は所望による凍結乾燥後工程
の後に回収される。
【００４３】 本発明の主題はまた、ウイルス上安全で、高分ｖＷＦを実質的に含まず、かつ
、本発明の方法によって得ることができる因子ＶＩＩＩ溶液にある。
【００４４】 最後に、本発明は医薬製剤としての、さらに詳しくは血友病Ａの治療のための、
本発明に従って得られた溶液に関する。
【００４５】 以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、これらは本発明の範囲
を限定することなく本発明を説明するものである。
【００４６】 実施例１：血漿の寒冷沈降画分からの因子ＶＩＩＩ溶液の濾過調製 因子ＶＩＩＩ開始溶液の調製は、特許ＦＲ２ ６３２ ３０９の教示に従って
行われ、その内容は引用することにより本明細書の一部とされる。
【００４７】 血漿１１３．５ｌに相当する寒冷沈降物８３５ｇを室温で３０分間攪拌しなが
らヘパリン処理をした水溶液（３ＩＵ／ｍｌ）に再溶解させる。因子ＶＩＩＩお
よびタンパク質豊富な溶液４２１７ｍｌを、水酸化アルミニウムゲル９０ｇへの
吸着ならびに酸沈降（ｐＨ６．５０）および温度を１５〜１９℃まで低下させる
ことにより清澄化する。フィブリノーゲンおよびフィブロネクチン豊富な沈降物
を遠心分離すると、ポリソルベート８０およびリン酸トリ−ｎ−ブチル（それぞ
れ適量１％および０．３％溶液）の添加によりｐＨ７．１で少なくとも６時間、
エンベロープウイルスが不活性化される清澄な中純度の因子ＶＩＩＩ溶液が得ら
れる。
【００４８】 エンベロープウイルスについては、ウイルスが不活性化された因子ＶＩＩＩ溶
液５１７２ｍｌを、緩衝塩溶液で予め平衡化した弱い陰イオン交換クロマトグラ
フィーゲル（ＴｏｓｏＨａａｓ Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ−ＤＥＡＥ ６５０Ｍ）５
６０ｍｌに吸着させる。吸着させて２時間後、このゲルを浸透圧３９０ｍｏｓｍ
／ｋｇであり、ｐＨ７．００に緩衝させた塩溶液で洗浄する。ゲルに吸着しない
画分にはフィブリノーゲンが豊富である。次いで浸透圧を４５２ｍｏｓｍ／ｋｇ
まで上昇させることにより、フォンビルブランド因子が豊富な画分からゲルを溶
出させる。さらにｐＨを６．０に変更し、イオン強度を高めることにより、濃縮
され、因子ＶＩＩＩに関して極めて高純度である画分が溶出する。次いで溶出し
た画分を濃度０．３５Ｍおよび浸透圧１３００±１００ｍｏｓｍ／ｋｇにＣａＣ
ｌ２で調節する。この画分は高含量のカルシウムの作用により、解離形態にある
因子ＶＩＩＩとフォンビルブランド因子の混合物からなる。
【００４９】 ＋４℃で安定している溶液１２６０ｍｌをただちに＋３５℃まで再加熱し、１
５ｎｍの多孔性限界と０．１２ｍ２の表面積を有するＢＭＮ Ｐｌａｎｏｖａ（
登録商標）１５Ｎフィルターを用いる濾過によりウイルス除去工程を行う。濾過
中、流量は膜内外の圧力が常に０．２バールより低くなるように保つ。因子ＶＩ
ＩＩの濾過後、さらに浸透圧１３００ｍｏｓｍ／ｋｇの緩衝溶液２１０ｍｌを膜
を通して濾過し、病原性ウイルスを含まない因子ＶＩＩＩ溶液１４７０ｍｌを回
収する。緩衝液によりフィルターの浸透圧およびｐＨを平衡にすることができ、
この緩衝液は因子ＶＩＩＩを濾過した後のフィルターの洗浄に使用される。得ら
れた因子ＶＩＩＩ溶液には重合度の非常高い（≧１５）のフォンビルブランド因
子は少ないが、透析後に因子ＶＩＩＩを再合成するに十分な重合度≧５および≧
１０のフォンビルブランド因子を含んでいる。
【００５０】 結果： 表１は本発明の方法の種々の工程において、得られた因子ＶＩＩＩ量ならびに
比活性（ＳＡ）、タンパク質含量および該工程からの収率を示している。
【００５１】
【表１】
【００５２】 実施例２：本条件は、血漿１３３０ｌに相当する寒冷沈降物１０，０００ｇを
使用することを除き、実施例１のものと同一である。エンベロープウイルスにお
いてウイルスが不活性化される因子ＶＩＩＩ溶液１３，７００ｍｌを濾過する。
因子ＶＩＩＩの濾過後、浸透圧１３００ｍｏｓｍ／ｋｇの緩衝液２ｌを濾過し、
病原性ウイルスを含まない因子ＶＩＩＩ溶液１５，７００ｍｌを回収する。用い
られる濾過膜は、１．０ｍ２の表面積を有するＢＭＮ Ｐｌａｎｏｖａ（登録商
標）１５Ｎ膜である。
【００５３】 下記の表２は、血漿１３３０ｌ当量の１．０ｍ２の表面積を有するＢＭＮ Ｐ
ｌａｎｏｖａ（登録商標）１５Ｎ膜による濾過に関する、濾過方法の種々の工程
において得られた因子ＶＩＩＩ量ならびに比活性および該工程からの収率を示し
ている。
【００５４】
【表２】
【００５５】 実施例３：血漿の寒冷沈降物から得られ、ヘパリン沈降により予備精製された
画分からの因子ＶＩＩＩ溶液の濾過調製 因子ＶＩＩＩ開始溶液の調製は、米国特許４，７４３，６８０の教示に従って
行われ、その内容は引用することにより本明細書の一部とされる。
【００５６】 血漿９２．２ｌに相当する寒冷沈降物６７８ｇを室温で３０分間攪拌しながら
ヘパリン処理した水溶液（３ＩＵ／ｍｌ）に再溶解させる。因子ＶＩＩＩおよび
タンパク質豊富な溶液３４２４ｍｌを実施例１のように清澄化する。
【００５７】 実施例１と同一条件下でエンベロープウイルスに関してウイルスが不活性化さ
れた因子ＶＩＩＩ溶液４２００ｍｌを、ｐＨ６．５０で酸性化した後、緩衝液で
予め平衡化した強い陰イオン交換クロマトグラフィーゲル（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｑ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ）３００ｍｌ
に吸着させる。吸着させて２時間３０分後、そのゲルを浸透圧４５０ｍｏｓｍ／
ｋｇを有し、ｐＨ６．５０に緩衝させた塩水で洗浄する。ゲルに吸着しない画分
にはフィブリノーゲンが豊富である。次いで浸透圧を５８１ｍｏｓｍ／ｋｇまで
上昇させることにより、フォンビルブランド因子が多く含まれる画分からゲルを
溶出する。さらにｐＨを６．０に変更し、イオン強度を高めることにより、濃縮
されて、因子ＶＩＩＩが極めて高純度である画分を溶出する。次いで溶出した画
分を濃度０．３５Ｍおよび浸透度１３００±１００ｍｏｓｍ／ｋｇにＣａＣｌ２ で調節する。この画分は高含量のカルシウムの作用により、解離形態にある因子
ＶＩＩＩとフォンビルブランド因子の混合物からなる。
【００５８】 ＋４℃で安定している溶液１２８０ｍｌをただちに＋３５℃まで再加熱し、１
５ｎｍの多孔性限界と０．１２ｍ２の表面積を有するＰｌａｎｏｖａ １５Ｎ膜
を通す実施例１と同様の濾過によりウイルス除去工程を行う。さらに浸透圧１３
００ｍｏｓｍ／ｋｇの緩衝溶液１８０ｍｌ容量を濾過し、病原性ウイルスを含ま
ない因子ＶＩＩＩ溶液１４６０ｍｌを回収する。この因子ＶＩＩＩ溶液には極め
て高い重合度（≧１５）のフォンビルブランド因子は少ないが、透析後に因子Ｖ
ＩＩＩを再合成するに十分な重合度≧５および≧１０のフォンビルブランド因子
を含んでいる。
【００５９】 結果： 下記の表３は、濾過方法の種々の工程における、得られた因子ＶＩＩＩ量、タ
ンパク質総量ならびに比活性（ＳＡ）および該工程からの収率を示している。
【００６０】
【表３】
【００６１】 実施例４：解離に用いられる塩の性質および濃度の作用としての因子ＶＩＩＩ
溶液のＰｌａｎｏｖａ（登録商標）１５Ｎ膜による濾過性の変化 結果： 下記の表４は、これらの種々のパラメーターの関数としての濾過収率の変化を
示しており、この方法の他の操作条件は実施例１で定義されるものに帰する。
【００６２】
【表４】
【００６３】 解離剤の使用により、因子ＶＩＩＩの濾過性を有意に高めることができる。濾
過後、透析によりこれらの薬剤を除去することで、因子ＶＩＩＩ−フォンビルブ
ランド因子複合体の再会合が誘導される。得られた生成物を解析することでフォ
ンビルブランド因子が因子ＶＩＩＩと良好に結合することができることが明らか
となる。
【００６４】 実施例５：温度および圧力パラメーターの関数としての因子ＶＩＩＩ溶液のＰ
ｌａｎｏｖａ（登録商標）１５Ｎ膜を通す濾過性の変化 下記の表５は、圧力および温度を変えて得られた濾過収率を示している。なお
、解離に用いられた塩およびその濃度は変更していない。与えられた圧力では、
温度を低下させると濾過収率の有意な低下が見られる。
【００６５】 また図１では、経膜圧を非常に低い値まで低下させることで収率がかなり改善
できることが明らかに示されている。
【００６６】
【表５】
【００６７】 実施例６：実施例１の濾過条件下における濾過系のウイルス保持力の試験 大きさが２５〜３０ｎｍのファージΦｘ１７４をウイルスモデルとして用いる
。膜およびその操作条件は実施例１および２に記載されたものである。
【００６８】 結果： 下記表６の結果では、満足できるウイルス保持力が示されている。
【００６９】
【表６】
【００７０】 実施例７：本発明の方法による、因子ＶＩＩＩ溶液中のｖＷＦ含量への影響 実施例１に記載される因子ＶＩＩＩ溶液において、本発明の方法が用いられた
前後でｖＷＦ含量およびｖＷＦ多量体プロフィールを比較した。
【００７１】 得られた結果は下記表７に示されている。
【００７２】
【表７】
【００７３】 このように、実際に本発明の方法を用いることで、高分子ｖＷＦを実質的に含
まない、特に重合度≧１５の多量体を実質的に含まない因子ＶＩＩＩ溶液が得ら
れる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 本系にかけられる圧力の関数としての、Ｐｌａｎｏｖａ（登録商標）１５Ｎ膜
による因子ＶＩＩＩの濾過性の変化を示す曲線である。バールで表される圧力は
ｘ軸に示され、％で表される濾過収率（濾液のＩＵ／ｍｌで表されるＦＶＩＩＩ
Ｃ活性と開始生成物のそれとの間の比率）はｙ軸に示されている。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１２年１月３１日（２０００．１．３１）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 1/34 Ａ６１Ｋ 37/465 (72)発明者 ミシェル、ノグル フランス国バンブ、リュ、ジョルジュ、ク レマンソー、22 (72)発明者 ピエール、ポルト フランス国サン‐ジェルマン‐レ‐コルベ ーユ、リュ、デ、ジュネ、21 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA03 AA06 CA36 DB01 DC10 MA16 NA01 NA06 ZA532 4C087 AA01 AA02 AA04 AA05 BB35 CA16 DA26 MA16 NA01 NA06 ZA53 4H045 AA20 AA30 CA42 DA66 EA24 GA23

Claims (22)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ウイルス上安全であって、高分子ｖＷＦを実質的に含まない因子ＶＩＩＩを濾
    過により調製する方法であって、 高分子因子ＶＩＩＩ−ｖＷＦ複合体を含むまたは実質的に含まない、高純度ま
    たは超高純度因子ＶＩＩＩ含有溶液を調製し、 必要であれば、高分子因子ＶＩＩＩ−ｖＷＦ複合体の解離および高分子ｖＷＦ
    会合因子ＶＩＩＩを実質的に含まない溶液の作製を可能とする工程ａ）を任意に
    行い、 １５ｎｍの多孔性を有する親水性フィルターを通して、高分子ｖＷＦ会合因子
    ＶＩＩＩを実質的に含まない溶液を濾過する工程ｂ）を行う ことを特徴とする方法。
  2. 【請求項２】 解離工程が解離を可能とするに十分な量のカオトロピックイオンによって行わ
    れる、請求項１記載の方法。
  3. 【請求項３】 カオトロピックイオンが２価イオンである、請求項２記載の方法。
  4. 【請求項４】 ２価イオンがＣａ２＋である、請求項３記載の方法。
  5. 【請求項５】 ２価イオンが０．２Ｍから塩飽和までの塩水の形態で加えられる、請求項２〜
    ４のいずれか１項に記載の方法。
  6. 【請求項６】 溶液がＣａＣｌ２溶液である、請求項５記載の方法。
  7. 【請求項７】 Ｃａ２＋イオンが０．３５Ｍから飽和までのＣａＣｌ２溶液の形態で加えられ
    る、請求項５または６のいずれかに記載の方法。
  8. 【請求項８】 工程ｂ）が供給者により奨励されている奨励限界よりも低い圧力で行われる、
    請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
  9. 【請求項９】 フィルターが０．３バールより低い圧力、好ましくは０．２バールより低い圧
    力で用いられるＰｌａｎｏｖａ（登録商標）１５Ｎ膜である、請求項８記載の方
    法。
  10. 【請求項１０】 工程ｂ）が約３５±５℃の温度で行われる、請求項１〜９のいずれか１項に記
    載の方法。
  11. 【請求項１１】 開始溶液が血漿画分、特に血漿の寒冷沈降画分、をイオン交換クロマトグラフ
    ィー精製することによって得られる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方
    法。
  12. 【請求項１２】 イオン交換クロマトグラフィーによる精製の終了時に得られる因子ＶＩＩＩ濃
    縮画分が工程ａ）の解離条件下で溶出される、請求項１１記載の方法。
  13. 【請求項１３】 因子ＶＩＩＩ開始溶液が、血漿画分、特に血漿の寒冷沈降画分、をヘパリン沈
    降により予備精製することによって得られる、請求項１〜１０のいずれか１項に
    記載の方法。
  14. 【請求項１４】 因子ＶＩＩＩ開始溶液において、溶媒／界面活性剤処理によりウイルスが部分
    的に不活性化されている、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 【請求項１５】 因子ＶＩＩＩ開始溶液が免疫精製された因子ＶＩＩＩを含んでなる、請求項１
    〜１０のいずれか１項に記載の方法。
  16. 【請求項１６】 因子ＶＩＩＩ開始溶液が組換え因子ＶＩＩＩを含んでなる、請求項１〜１０の
    いずれか１項に記載の方法。
  17. 【請求項１７】 開始溶液中の因子ＶＩＩＩが少なくとも５０ＩＵ／ｍｇと同等、好ましくは少
    なくとも１００ＩＵ／ｍｇと同等の比活性を有する、請求項１〜１６のいずれか
    １項に記載の方法。
  18. 【請求項１８】 因子ＶＩＩＩ開始溶液の因子ＶＩＩＩ濃度Ｃが約２〜約１００Ｕ／ｍｌ、好ま
    しくは約１０〜約５０Ｕ／ｍｌである、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の
    方法。
  19. 【請求項１９】 因子ＶＩＩＩ開始溶液のタンパク質含量が約０．０５〜約０．５ｍｇ／ｍｌ、
    好ましくは約０．１〜約０．５ｍｇ／ｍｌである、請求項１〜１８のいずれか１
    項に記載の方法。
  20. 【請求項２０】 請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法によって得られる、ウイルス上安
    全な因子ＶＩＩＩ溶液。
  21. 【請求項２１】 医薬製剤としての請求項２０記載の溶液。
  22. 【請求項２２】 血友病Ａの治療のための医薬製剤としての請求項２０記載の溶液。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007535487A (ja) * 2003-10-23 2007-12-06 ラボラトワール・フランセ・デュ・フラクシオンマン・エ・デ・ビョテクノロジー 低含量の高次多量体を含むウイルスに関して安全な第ｖｉｉｉ因子
JP2014166989A (ja) * 2007-12-28 2014-09-11 Baxter Internatl Inc タンパク質の逆圧濾過
JP2020531516A (ja) * 2017-08-23 2020-11-05 ツェー・エス・エル・ベーリング・ゲー・エム・ベー・ハー フォン・ウィルブランド因子のウイルスろ過の方法
JP2021513913A (ja) * 2018-02-19 2021-06-03 バイエル・ヘルスケア・エルエルシーＢａｙｅｒ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ ＬＬＣ 修正フィルタ膜及び方法

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU784808B2 (en) * 2001-04-02 2006-06-29 Kedrion Melville Inc. Prion and viral clearance process
DE10211632A1 (de) * 2002-03-15 2003-10-09 Aventis Behring Gmbh Verfahren zur Abtrennung von Viren aus einer Proteinlösung durch Nanofiltration
ES2214967B1 (es) * 2003-03-06 2005-06-16 Probitas Pharma, S.A Procedimiento para la eliminacion de virus en soluciones de fibrinogeno y fibrinogeno obtenido por dicho procedimiento.
FR2920429B1 (fr) * 2007-08-30 2012-10-05 Lfb Biotechnologies Procede de purification du facteur viii et du facteur von willebrand
JP5784907B2 (ja) 2007-12-28 2015-09-24 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ 組換え型ｖｗｆ製剤
ES2298096B1 (es) 2008-01-08 2009-01-01 Grifols, S.A. Procedimiento para la obtencion de un concentrado de factor von willebrand o del complejo de factor viii/factor von willebrand y utilizacionde los mismos.
TWI469992B (zh) * 2008-08-28 2015-01-21 Baxter Int 濃縮剪切靈敏生物聚合物的方法
EP2652491B1 (en) 2010-12-15 2017-11-29 Baxalta GmbH Eluate collection using conductivity gradient
US20140154233A1 (en) 2012-12-05 2014-06-05 Csl Limited Method of purifying therapeutic proteins
US10188965B2 (en) 2012-12-05 2019-01-29 Csl Behring Gmbh Hydrophobic charge induction chromatographic depletion of a protein from a solution

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4673733A (en) * 1985-04-11 1987-06-16 Sudhish Chandra Treatment of biological and pharmaceutical products adsorbed on a solid phase with virus and pyrogen inactivating agents
US4758657A (en) † 1985-07-11 1988-07-19 Armour Pharmaceutical Company Method of purifying Factor VIII:C
FR2644064B1 (fr) * 1989-02-17 1994-05-27 Aquitaine Dev Transf Sanguine Procede de fabrication du facteur antihemophilique fviiic ayant une tres haute purete et facteur antihemophilique fviiic ainsi obtenu, ainsi que composition pharmaceutique le contenant
FR2662166A1 (fr) * 1990-05-18 1991-11-22 Fondation Nale Transfusion San Procede de preparation de facteur viii de tres haute purete comprenant une etape rapide d'immunoadsorption.
IT1248723B (it) * 1990-06-12 1995-01-26 Scalvo S P A Processo per la purificazione del fattore viii e fattore viii ottenuto con tale processo
FR2681867B1 (fr) * 1991-09-26 1993-12-31 Pasteur Merieux Serums Vaccins Procede de purification du facteur viii et preparations obtenues.
SE9500724D0 (sv) * 1994-06-23 1995-02-24 Pharmacia Ab Filtrering
DE4435392B4 (de) 1994-10-04 2008-02-07 Immuno Ag Verfahren zur Trennung von vWF in hochmolekularen vWF und niedermolekularen vWF
US5677162A (en) * 1995-05-01 1997-10-14 New York Blood Center, Inc. Method for activating prothrombin to thrombin
EP0860444A1 (en) * 1997-02-24 1998-08-26 Stichting Centraal Laboratorium van de Bloedtransfusiedienst van het Nederlandse Rode Kruis (CLB) Method for removing viruses from a protein solution

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007535487A (ja) * 2003-10-23 2007-12-06 ラボラトワール・フランセ・デュ・フラクシオンマン・エ・デ・ビョテクノロジー 低含量の高次多量体を含むウイルスに関して安全な第ｖｉｉｉ因子
JP4872669B2 (ja) * 2003-10-23 2012-02-08 ラボラトワール・フランセ・デュ・フラクシオンマン・エ・デ・ビョテクノロジー 低含量の高次多量体を含むウイルスに関して安全な第ｖｉｉｉ因子
JP2014166989A (ja) * 2007-12-28 2014-09-11 Baxter Internatl Inc タンパク質の逆圧濾過
JP2020531516A (ja) * 2017-08-23 2020-11-05 ツェー・エス・エル・ベーリング・ゲー・エム・ベー・ハー フォン・ウィルブランド因子のウイルスろ過の方法
JP2021513913A (ja) * 2018-02-19 2021-06-03 バイエル・ヘルスケア・エルエルシーＢａｙｅｒ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ ＬＬＣ 修正フィルタ膜及び方法

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