JP2002504815A

JP2002504815A - 新規類のカチオニック核酸トランスフェクション剤

Info

Publication number: JP2002504815A
Application number: JP50172299A
Authority: JP
Inventors: ベソド，ミシエル; シエルマン，ダニエル; エルスコビシ，ジヤン
Original assignee: ローヌ−プーラン・ロレ・エス・アー
Priority date: 1997-06-06
Filing date: 1998-06-03
Publication date: 2002-02-12
Also published as: HUP0004577A3; EP0986568B1; CA2292837A1; KR20010013312A; PL337177A1; ZA984845B; WO1998055490A1; CN1259134A; DE69804302T2; AU737579B2; ATE214708T1; FR2764304A1; DE69804302D1; NO995858D0; HUP0004577A1; BR9809953A; EP0986568A1; DK0986568T3; NO314147B1; NO995858L

Abstract

(57)【要約】本発明はカチオニック親水領域に結合した少なくとも１個の親油領域を含み、前記カチオニック親水領域がアミノ基により置換された少なくとも１個の５又は６員複素環から構成されることを特徴とする新規類のカチオニック核酸トランスフェクション剤に関する。

Description

【発明の詳細な説明】新規類のカチオニック核酸トランスフェクション剤本発明は新規類のカチオニックトランスフェクション剤、該トランスフェクション剤を含む医薬組成物、核酸のｉｎｖｉｖｏ、ｅｘｖｉｖｏ及び／又はｉｎｖｉｔｒｏトランスフェクションのためのその適用並びにその製造方法に関する。バイオテクノロジーの発展に伴い、今や核酸を細胞に導入することが可能である。これらの導入の効率は多数の遺伝病に関与する核酸の発現障害及び／又は異常発現の改善に必要であると思われる。しかし、核酸導入の意義は遺伝子治療に止まらない。核酸導入は遺伝子発現の調節の研究、遺伝子クローニング又は核酸を用いる他の任意ｉｎｖｉｔｒｏ操作や、組換えタンパク質の製造にも有用であると思われる。また、例えばトランスジェニック動物の創製、ワクチンの製造、分子標識試験には核酸のｉｎｖｉｖｏ細胞導入が有用であると思われる。また、骨髄移植、免疫療法又は後で再投与するために生物から抽出した細胞に遺伝子を導入する他の方法等のアプローチでは核酸を細胞にｅｘｖｉｖｏ導入することができる。今日、この種の遺伝情報の細胞内送達方法として数種の方法が提案されている。特に、化学的又は生化学的ベクターが利用されている。これらの合成ベクターはトランスフェクトするＤＮＡと複合体を形成する機能と、その細胞固定を助長し、細胞質膜及び場合により２つの核膜の通過を助長する機能との２つの主機能をもつ。開発されている合成ベクターのうちでは、ポリリジン及びＤＥＡＥ−デキストラン型カチオニックポリマー又はリポフェクタントが最も有利である。リポフェクタント型のカチオニックトランスフェクション剤、より具体的にはカチオニック脂質の利用に基づく技術の開発に伴い、このトランスフェクション方法では著しい進歩が遂げられた。例えば、正電荷をもつカチオニック脂質であるＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）は、負電荷をもつＤＮＡとリポソーム又は小ベジクル形態で自然に相互作用し、細胞膜と融合することが可能な脂質−ＤＮＡ複合体を形成し、こうしてＤＮＡの細胞内送達を可能にすることが判明した。ＤＯＴＭＡ以来、「スペーサー」と呼ばれるアームを介して親油基をアミノ基に結合したこの構造モデルで他のカチオニック脂質も開発された。そのうちでは、親油基として脂肪酸又はコレステロール誘導体を含み、更に、場合によりアミノ基として第４級アンモニウム基を含むものを特に挙げることができる。この種のカチオニック脂質の例としては、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＢＴ又はＣｈＯＴＢを特に挙げることができる。この他、ＤＯＳＣやＣｈＯＳＣのように、第４級アンモニウム基の代わりにコリン基を含む化合物もある。別の分類のリポフェクタントとしてリポポリアミンも報告されている。一般に、リポポリアミンとは「スペーサー」を介して親油領域と結合したポリアミンにより構成される少なくとも１個の親水領域を含む両親媒性分子である。正電荷をもつポリアミノ領域は負電荷をもつ核酸と可逆的に結合することができる。この相互作用は核酸を著しく圧縮する。親油領域は脂質膜から形成される複合体を覆うことにより、このイオン相互作用を外部媒質に対して非感受性にする。この種の化合物でカチオニック基は２個の第１級アンモニウム基と２個の第２級アンモニウム基との４個のアンモニウム基を含むＬ−５−カルボキシスペルミン基により表すことができる。特にＤＯＧＳとＤＰＰＥＳが挙げられる。これらのリポポリアミンは一次内分泌細胞のトランスフェクションに特に有効である。この種の化合物の例としては、例えば特許出願ＷＯ９６／１７８２３及びＷＯ９７／１８１８５に記載されているリポポリアミンを特に挙げることができる。しかし、これらの合成ベクターの効率は特に電荷密度とトランスフェクション分子の剛性の点で改善の余地がある。実際に、これらの生成物の活性はその電荷に依存することが一般に認められている。しかし、脂肪鎖上の電荷の増加は毒性の出現の原因となる。従って、脂肪鎖の電荷密度を安定化させるならば毒性因子の出現を防止できると思われる。更に、トランスフェクション効率は脂肪鎖以外の領域の電荷密度を高めることより増加すると思われる。他方、圧縮は全トランスフェクションに必要な前提条件であるが、核酸導入に使用する分子が柔軟であると、この核酸とトランスフェクション剤の間の非常に緊密な相互作用の障害となり、核酸分子の最適圧縮が得られなくなる。トランスフェクション剤分子の剛性を高めると、核酸とより有効な相互作用を確保することができ、トランスフェクションを改善できると思われる。従って、低毒性又は無毒性でありながら高いトランスフェクション能をもつトランスフェクション剤が得られるならば特に有利であろう。本発明が解決しようとする課題はこの点にある。実際に、本発明は詳細には上記特性を導入剤に与える独自のカチオニック親水領域をもつ新規類のトランスフェクション剤を提供することを目的とする。より詳細には、本発明は親油領域に結合した少なくとも１個のカチオニック親水領域を含むトランスフェクション剤に関し、前記カチオニック親水領域はアミノ基により置換された少なくとも１個の５又は６員複素環から構成される。正電荷をもつ親水領域は負電荷をもつ核酸と可逆的に結合し、核酸を著しく圧縮することができる。更に、カチオニック部分の独自の構造は分子に高い剛性を与える。本発明の核酸導入剤の合成中間体であるカチオニック親水領域は特に一般式（Ｉ）：［式中、 −ｙは０又は１の整数であり、各ｙは相互に独立しており、 −Ｘは酸素、窒素、硫黄又はセレン原子を表し、 −Ｚ基は相互に独立して・水素原子、・ＯＲ基（式中、Ｒは水素原子、メチル基、又は（ＣＨ₂）_n−ＮＲ₁Ｒ₂基を表し、前記式中、ｎは１〜６から選択される整数であり、Ｒ₁及びＲ₂は相互に独立して水素原子又は（ＣＨ₂）_q−ＮＨ₂基を表し、前記式中、ｑは１〜６であり、各ｑは相互に独立している）、・（ＣＨ₂）_m−ＮＲ₁Ｒ₂基（式中、ｍは０〜６から選択される整数であり、Ｒ₁ 及びＲ₂は上記と同義である）、又は・カチオニック親水領域を親油領域に結合することが可能な「スペーサー」基を表し、但しＺ置換基の少なくとも１個はアミノ基をもつ］により表される。本発明の導入剤は一般式（Ｉ）のカチオニック親水領域を少なくとも１個含む。本発明の変形例によると、導入剤はＺ基の１個のレベルで相互に結合した２個以上のカチオニック親水領域を含む。本発明の好ましい実施態様によると、Ｚ置換基の１個がＯＲを表し、Ｒが（ＣＨ₂）_n−ＮＲ₁Ｒ₂基を表すとき、ｎは２、３又は４から選択することが好ましい。本発明の有利な変形例によると、トランスフェクション剤はＸが酸素原子を表す一般式（Ｉ）のカチオニック親水領域を含む。このとき、カチオニック親水部分はピラノース又はフラノース形のグリコシドから構成される。ピラノース形が特に有利であるので実施例に記載したが、これに限定するものではない。本発明の第２の有利な変形例によると、トランスフェクション剤は６員環アミノグリコシド（環上に存在するｙは１である）から構成される一般式（Ｉ）のカチオニック親水領域を含み、Ｘは酸素原子であり、Ｚ置換基の少なくとも１個はアミノ基を含む。Ｚ置換基の少なくとも２個がアミノ基を含むと更に好ましい。本発明の別の変形例によると、カチオニック親水領域は式（Ｉ）中、２個のｙが１であり、Ｘが酸素原子であり、Ｚ基の２個が水素原子を表し、他の２個のＺ基が窒素含有基、好ましくはアミノ基であり、最後のＺ基がＯＲ基（Ｒは上記と同義である）を表すアミノグリコシドから構成される。ＯＲ基は、本発明のトランスフェクション剤のカチオニック親水領域を構成する複素環上の２位に配置することが好ましい。本発明の別の有利な実施態様によると、カチオニック親水領域は一般式（Ｉ）中、環土に存在するｙが１であり、Ｘが酸素原子であり、Ｚ基の少なくとも２個が（ＣＨ₂）_q−ＮＨ₂基（式中、ｑは上記と同義である）に対応し、Ｚ基の少なくとも１個がＯＲ基（式中、Ｒは上記と同義である）を表すアミノグリコシドから構成される。本発明の導入剤の合成に有用な中間体である一般式（Ｉ）のカチオニック親水領域の例として以下の化合物を特に挙げることができる。一般に、本発明の意味でのトランスフェクション剤は親油領域に結合した少なくとも１個の上記のようなカチオニック親水領域を含む。本発明の意味での親油領域を構成する分子は当業者に公知の親油分子から選択される。親油領域は場合によりハロゲン化した１個以上の飽和又は不飽和の直鎖又は分枝脂肪鎖から構成すると有利である。親油領域はステロイド誘導体から選択しても有利である。本発明の好ましい変形例によると、親油部分は炭素原子数１０〜２２、より好ましくは炭素原子数１２〜２２の１個以上の脂肪鎖から構成される。例えば、炭素原子数１４、１６、１７、１８又は１９の脂肪鎖、特に（ＣＨ₂）₁₃ＣＨ₃、（ＣＨ₂）₁₅ＣＨ₃、（ＣＨ₂）₁₆ＣＨ₃、（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃及び（ＣＨ₂）₁₈ＣＨ₃を挙げることができる。本発明の導入剤の親油部分は例えばコレステロール、コレスタノール、３α，５−シクロ−５α−コレスタン−６β−オール、コリン酸、ギ酸コレステリル、ギ酸コレスタニル、ギ酸３α，５−シクロ− ５α−コレスタン−６β−イル、コレステリルアミン、６−（１，５−ジメチルヘキシル）−３ａ，５ａ−ジメチルヘキサデカヒドロシクロペンタ［ａ］シクロプロパ［２，３］シクロペンタ［１，２−ｆ］ナフタレン−１０−イルアミン又はコレスタニルアミン等のステロイド誘導体から選択しても有利である。好ましい実施態様によると、カチオニック親水領域は「スペーサー」と呼ばれる中間分子により親油領域に結合している。本発明の意味で「スペーサー」基とは当業者に公知の通り、カチオニック親水部分と親油領域の間にアミド、カルバミン酸、エステル、エーテル又は芳香族環を介する結合を得ることが可能な加水分解性官能基を含む任意酸又はアミノ置換基を意味する。親水部分と親油部分の結合は本発明の導入剤の合成に有用な式（Ｉ）のカチオニック親水中間体上に存在するＺ基の１個のレベルで行うことが好ましい。親水領域と親油領域の結合は「スペーサー」基を介して（環上に存在するｙが０であるか１であるかにより）一般式（Ｉ）のカチオニック親水部分の環上の２位又は５もしくは６位で行うと有利である。「スペーサー」領域は脂肪族又は芳香族鎖を含むことが好ましい。更に、「スペーサー」はアミド基、カルバミン酸基、エステル基、エーテル基又は芳香族環から選択される１種以上の基を含むと有利である。好ましい「スペーサー」は特に式−Ｏ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_x−ＣＯＯＨ、−Ｏ−（ＣＨ₂）_x−ＣＯＯＨ、−Ｏ− ＣＯ−（ＣＨ₂）_x−ＮＨ₂、−Ｏ−（ＣＨ₂）_x−ＮＨ₂、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_x−ＮＨ₂（式中、ｘは１〜６から選択される整数を表す）のスペーサーである。本発明のトランスフェクション剤の例として、下式化合物（１６）、（１７）、（８ａ）及び（８ｂ）を特に挙げることができる。本発明は上記のような新規類の核酸トランスフェクション剤の製造方法にも関する。より詳細には、本発明は「スペーサー」を介して脂質領域が結合したモノ又はポリ置換複素環から上記トランスフェクション剤を製造する方法に関する。一般式（Ｉ）のカチオニック親水領域は環上のアミノ基の相対位置とその数に応じて種々の方法で製造することができる。Ｚ置換基の少なくとも１個が親油部分との結合を可能にする「スペーサー」であり、Ｚ基の少なくとも１個がＯＲ基（式中、Ｒは（ＣＨ₂）_n−ＮＲ₁Ｒ₂基を表す）を表す一般式（Ｉ）のカチオニック親水領域を得ようとする場合には、Ｏ− （ＣＨ₂）_n−ＮＲ₁Ｒ₂置換基の全てがヒドロキシ基である対応する誘導体から出発する。第１段階では、ヒドロキシ官能基をもつ前記誘導体を当業者に公知の慣用方法によりＯ−アルキル化する。特に、クラウンエーテルの存在下に１０〜６０℃の温度で慣用アルキル化溶剤中で塩基性媒体中アルキル化剤を使用して操作する。特にアルキル化剤としてはアルキルアミン、エステルのハロゲン化誘導体（例えばハロゲノ酢酸アルキル）、又はアルコールのハロゲン化誘導体を使用する。ブロモ酢酸アルキルを使用すると好ましい。アルキル基はｎに割り当てる値に応じて選択する。例えば、ｎ＝２にするためには、ブロモ酢酸エチルを使用すると好ましい。使用する溶剤は例えばジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等の慣用Ｏ− アルキル化溶剤である。ＴＨＦを使用すると有利である。反応は例えば水酸化カリウム又は水素化ナトリウム等の塩基の存在下に実施する。第２段階では、得られた誘導体のカルボキシ官能基を当業者に公知の慣用方法によりアルコール還元する。特に、適合可能な慣用溶剤中で還元剤を作用させることにより操作する。還元剤としては、例えばボランジメチルスルフィド（ＢＭＳ）、水素化アルミニウムリチウム又はホウ水素化ナトリウムを挙げることができる。適合可能な溶剤は例えばエーテル又はアルコールである。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を使用すると好ましい。第３段階では、得られたヒドロキシ官能基を当業者に公知の慣用方法によりアジ化する。特に、反応に適合可能な溶剤中でトリフェニルホスフィンとジエチルアゾジカルボキシレートの存在下にヒドラゾ酸を作用させることにより操作する。使用可能な溶剤は例えばテトラヒドロフラン、ベンゼン、トルエン、クロロホルム、ジクロロメタン等の慣用アジ化溶剤であり、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）が好ましい。最後に、アジド官能基を当業者に公知の慣用方法によりアミノ官能基に変換する。特に、例えば炭素担持パラジウムの存在下に酸性媒体中で水素化したり、シュタウディンガー反応を実施したり、還元剤（例えば水素化アルミニウムリチウム、ホウ水素化ナトリウム、塩化第１錫等）を作用させて酸性媒体中で還元することにより操作する。こうしてＺ置換基の少なくとも１個が親油部分との結合を可能にする「スペーサー」であり、Ｚ置換基の少なくとも１個がＯＲ基（式中、Ｒは−（ＣＨ₂）_n− ＮＲ₁Ｒ₂基を表す）である一般式（Ｉ）のカチオニック親水性化合物が得られる。次に、当業者に公知の慣用方法、特にペプチド結合（ＢｏｄａｎｓｋｉＭ．，ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｓｏｆＰｅｐｔｉｄｅｓＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅ−Ｖｅｒｌａｇ編）により親油部分との結合を行う。結合は「スペーサー」を表すＺ基のレベルで行う。Ｚの１個が「スペーサー」基である場合には、場合により予め保護しておく。カチオニック親水部分により担持されるアミノ基も同様にペプチド結合の前に保護しておくことが好ましい。保護と保護基の脱離は慣用方法により実施される。保護はその使用と脱離が分子の残余を変化させないような任意の適合可能な基により実施することができる。特に、Ｔ．Ｗ．ＧＲＥＥＮＥ，ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｅｓ，Ａ．Ｗｉｌｅｙ−ＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ（１９８１）又はＭｃＯＭＩＥ，ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ（１９７３）に記載されている方法に従って操作する。例えば、保護基はトリメチルシリル、ベンズヒドリル、テトラヒドロピラニル、ホルミル、アセチル、クロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチル、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、トリクロロエトキシカルボニル等の基から選択することができる。別の合成経路により第２系列のカチオニック親水性化合物を得ることもできる。この第２の実施態様は糖質骨格構造を変換する点が第１の実施態様と異なる。実際に、使用する出発物質は一般式（ＩＩ）：（式中、Ｚ’置換基はアセトキシ基である）のグリカールである。使用するグリカールは市販されており、市販糖質から当業者に公知の任意方法により得ることもでき、特に対応するアセトブロモ糖と亜鉛／銅対の反応により得られる。第１段階では、前記アセチル化グリカールを当業者に公知の慣用方法によりアルキル化する。特に、ルイス酸の存在下でアミノアルコール、アルキルオキシカルボニルアルコール、カルボキシアルコール又は親油領域との結合を可能にする基をもつ他の任意アルコールの作用によりフェリエ反応を実施する。適合可能な溶剤（例えばエチルエーテル等のエーテル）中で三フッ化ホウ素の存在下に反応を実施すると好ましい。第２段階では、得られた不飽和グリコシドを当業者に公知の慣用方法により還元する。特に、例えば炭素担持パラジウムの存在下に酸性媒体中で水素化することにより酸性媒体中で還元する。次に、第３段階では、環上に存在するアセトキシ官能基を当業者に公知の任意方法によりヒドロキシ官能基に変換する。特に、アルコラート（例えばナトリウムメタノアート）でエステル交換することにより操作する。第４段階では、環上に存在するヒドロキシ官能基を当業者に公知の任意方法によりアジド官能基に変換する。特に、反応に適合可能な溶剤中でトリフェニルホスフィンとジエチルアゾジカルボキシレートの存在下にヒドラゾ酸を作用させることにより操作する。使用可能な溶剤は慣用アジ化溶剤であり、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）が好ましい。こうして一般式（ＩＩＩ）：（式中、Ｚ”は水素原子又はアジド基であり、Ｚ”の少なくとも１個は水素以外のものである）のカチオニック親水領域が得られる。親油部分は当業者に公知の方法、特にペプチド結合（ＢｏｄａｎｓｋｉＭ．，ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｓｏｆＰｅｐｔｉｄｅｓＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅ−Ｖｅｒｌａｇ編）又は縮合によりアミノ基−ＮＲ₁Ｒ₂に結合することができる。第１段階ではアミノ、エステル又は親油領域との結合を可能にする他の任意官能基を含むアルコールを使用するが、このようなアルコールは予め保護しておくことが好ましい。親油領域と結合する前に行う保護と保護基の脱離は慣用方法により実施する。保護はその使用と脱離が分子の残余を変化させないような任意の適合可能な基により実施することができる。特に、Ｔ．Ｗ．ＧＲＥＥＮＥ，ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｅｓ，Ａ．Ｗｉｌｅｙ−ＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ（１９８１）又はＭｃＯＭＩＥ，ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ（１９７３）に記載されている方法に従って操作する。例えば、保護基はトリメチルシリル、ベンズヒドリル、テトラヒドロピラニル、ホルミル、アセチル、クロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチル、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、トリクロロエトキシカルボニル、フタルイミド等の基から選択することができる。最後に、最終段階で、分子の残余を変化させないような当業者に公知の慣用方法により、５又は６員環に担持されたアジド官能基をアミノ官能基に変換する。水の存在下でトリフェニルホスフィンの作用により操作することが好ましい。本発明の核酸導入剤を生成する当業者に公知の他の任意方法も本発明の範囲に含まれる。非限定的な例として、本明細書の「実施例」の項に詳細に記載するように、本発明の第１の実施態様では式（８ａ）及び（８ｂ）の導入剤が得られ、第２の実施態様では式（１６）及び（１７）の導入剤が得られる。カチオニック親水領域のこの第２の合成経路の利点は、主に合成に必要な段階数が少なく、得られるアミン合成体に融通性があるという点である。例えば同一カチオニック主鎖を種々の疎水性置換基と縮合することができる。本発明の別の目的は、上記のような核酸導入剤と核酸を含む組成物に関する。組成物は核酸１μｇ当たり０．１〜５０ナノモルの割合のベクターを含むことが好ましい。この割合は、核酸１μｇ当たりベクター２〜２０ナノモルが有利であり、より好ましくは核酸１μｇ当たりベクター４〜1２ナノモルである特に、導入剤と核酸は核酸１μｇ当たりベクター８〜１２ナノモルの割合で存在する。本発明の意味で「核酸」とはデオキシリボ核酸とリボ核酸を意味する。核酸は天然配列でも合成配列でもよく、特にゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、ハイブリッド配列、又は修飾もしくは非修飾合成もしくは半合成オリゴヌクレオチド配列が挙げられる。これらの核酸はヒト、動物、植物、細菌、ウイルス等の起源とすることができる。これらの核酸は当業者に公知の任意方法により得られ、特にバンクスクリーニング、化学合成、又はバンクスクリーニングにより得られた配列の化学もしくは酵素修飾を含む混合法により得られる。核酸は化学修飾してもよい。特にデオキシリボ核酸については、１本鎖でも２本鎖でもよいし、短いオリゴヌクレオチドでもより長い配列でもよい。特に、核酸はプラスミド、ベクター、エピソーム、発現カセット等から構成すると有利である。これらのデオキシリボ核酸は標的細胞で機能的又は非機能的な複製起点と、１個以上のマーカー遺伝子と、転写又は複製の調節配列と、着目治療遺伝子と、修飾又は非修飾アンチセンス配列と、他の細胞成分との結合領域等を含むことができる。核酸は標的細胞で活性な１種以上のプロモーターと転写ターミネーターの制御下におかれた１種以上の着目治療遺伝子から構成される発現カセットを含むことが好ましい。本発明の意味で着目治療遺伝子とは特に治療効果をもつタンパク性物質をコードする任意遺伝子を意味する。このようにコードされるタンパク性物質は特にタンパク質又はペプチドであり得る。このタンパク性物質は標的細胞に対して同種の外来又は内因物質、即ち標的細胞が疾病をもたないときに標的細胞で正常に発現される物質とすることができる。この場合には、タンパク質が発現されると、例えば細胞で不十分な発現や修飾により不活性又は活性が弱まっているタンパク質の発現を補ったり、このようなタンパク質を過剰に発現することができる。着目治療遺伝子は安定性を増したり活性を変えた細胞タンパク質の突然変異体をコードするものでもよい。タンパク性物質は標的細胞に対して異種でもよい。この場合には、発現されるタンパク質は例えば細胞に欠損している活性を補充又は付加して疾病に対抗できるようにしたり、免疫応答を刺激したりすることができる。本発明の意味での治療物質としては、酵素、血液誘導体、ホルモン、リンホカイン（インターロイキン、インターフェロン、ＴＮＦ等（ＦＲ９２／０３１２０））、増殖因子、神経伝達物質又はその前駆物質もしくは合成酵素、栄養因子（ＢＤＮＦ、ＣＮＴＦ、ＮＧＦ、ＩＧＦ、ＧＭＦ、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦ、ＮＴ３、ＮＴ５、ＨＡＲＰ／プレイオトロフィン等）、アポリポタンパク質（ＡｐｏＡＩ、ＡｐｏＡＩＶ、ＡｐｏＥ等、ＦＲ９３／０５１２５）、ジストロフィン又はミニジストロフィン（ＦＲ９１／１１９４７）、膵臓線維症に関連するタンパク質ＣＦＴＲ、腫瘍抑制遺伝子（ｐ５３、Ｒｂ、Ｒａｐ１Ａ、ＤＣＣ、ｋ−ｒｅｖ等、ＦＲ９３／０４７４５）、凝血に関与する因子（ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ因子）をコードする遺伝子、ＤＮＡの修復に関与する遺伝子、自殺遺伝子（チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ）、ヘモグロビン又は他の輸送タンパク質の遺伝子、代謝酵素、同化酵素等を特に挙げることができる。着目治療核酸は更に、標的細胞で発現されると遺伝子発現又は細胞ｍＲＮＡ転写を調節することが可能なアンチセンス遺伝子又は配列でもよい。このような配列は、例えば特許ＥＰ１４０３０８に記載の技術に従って、標的細胞で細胞ｍＲＮＡの相補的ＲＮＡに転写し、こうしてそのタンパク質翻訳を阻止することができる。治療遺伝子は更に、標的ＲＮＡを選択的に破壊することが可能なリボソームをコードする配列も含む（ＥＰ３２１２０１）。上述のように、核酸は更にヒト又は動物で免疫応答を発生することが可能な抗原ペプチドをコードする１種以上の遺伝子を含むものでもよい。この特定実施態様によると、本発明は特に微生物、ウイルス又は癌に対してヒト又は動物に適用するワクチンの製造又は免疫治療を実現することができる。特に、エプスタイン・バールウイルス、ＨＩＶウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＥＰ１８５５７３）、偽狂犬病ウイルス、「シンシチウム形成ウイルス」、他のウイルスの特異的抗原ペプチド又は腫瘍特異的抗原ペプチド（ＥＰ２５９２１２）を挙げることができる。核酸は更に所望細胞又は臓器で着目治療遺伝子及び／又は抗原ペプチドをコードする遺伝子の発現を可能にする配列も含むことが好ましい。このような配列としては、これらの配列が感染細胞で機能できるときに該当遺伝子の発現に天然に関与する配列が挙げられる。異なる起源の配列でもよい（他のタンパク質の発現に関与する配列でもよいし、あるいは合成配列でもよい）。特に、真核又はウイルス遺伝子のプロモーター配列が挙げられる。例えば、感染させたい細胞のゲノムに由来するプロモーター配列が挙げられる。また、ウイルスのゲノムに由来するプロモーター配列でもよい。この点では、例えばＥＩＡ、ＭＬＰ、ＣＭＶ、ＲＳＶ等の遺伝子のプロモーターを挙げることができる。更に、活性化配列や調節配列等を付加してこれらの発現配列を修飾してもよい。誘導又は抑制プロモーターでもよい。更に、核酸は合成治療物質を標的細胞の分泌経路に誘導するシグナル配列も特に着目治療遺伝子の上流に含んでいてもよい。このシグナル配列は治療物質の天然シグナル配列でもよいし、他の任意の機能的シグナル配列又は人工シグナル配列でもよい。核酸は更に、合成治療物質を細胞の特定区画に誘導するシグナル配列も含んでいてもよい。本発明の組成物は更に、導入剤／核酸複合体に結合してトランスフェクション能を改善することが可能なアジュバントを含んでいてもよい。従って、別の実施態様では、本発明は核酸と、上記のような導入剤と、核脂質複合体に結合してトランスフェクション能を改善することが可能な１種以上のアジュバントを含む組成物に関する。この点で、本発明の組成物はアジュバントとして１種以上の中性脂質を含むことができる。このような組成物は、特に導入剤／核酸比が小さいときに特に有利である。本願出願人は実際に、中性脂質を加えると核脂質粒子の形成を改善し、細胞膜を不安定にして粒子の細胞侵入を助長できることを立証した。より好ましくは、本発明の範囲内で使用する中性脂質は２個の脂肪鎖をもつ脂質である。生理的条件下で両性イオン性又はイオン電荷をもたない天然又は合成脂質を使用すると特に有利である。特に、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、オレオイルパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン及びその１〜３倍Ｎ−メチル化誘導体、ホスファチジルグリセロール、ジアシルグリセロール、グリコシルジアシルグリセロール、セレブロシド（例えば特にガラクトセレブロシド）、スフィンゴ脂質（例えば特にスフィンゴミエリン）又はアシアロガングリオシド（例えば特にアシアロＧＭ１及びＧＭ２）から選択することができる。これらの種々の脂質は当業者に周知の慣用技術により合成するか又は臓器（例えば脳）もしく胎児から抽出することにより得られる。特に、天然脂質の抽出は有機溶剤を用いて実施することができる（Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ参照）。ごく最近になって本願出願人は前記核酸の凝縮レベルに直接又は非直接的に作用する化合物をアジュバントとして使用しても特に有利であることを立証した（ＷＯ９６／２５５０８）。本発明の組成物にこのような化合物を加えると、トランスフェクション活性を損なわずにトランスフェクション剤の量を低減できるので、毒物学的面で有益である。核酸の凝縮レベルに作用する化合物とは、核酸を直接又は非直接的に圧縮する化合物として定義される。より詳細には、この化合物はトランスフェクトしようとする核酸のレベルに直接作用するか、又はこの核酸の凝縮に直接関与する付加化合物のレベルに作用することができる。核酸のレベルに直接作用するものが好ましい。例えば、予備圧縮剤は任意ポリカチオン、例えばポリリジンを使用できる。好ましい実施態様によると、核酸の凝縮レベルに作用するこの物質は全体又は一部がプロタミン、ヒストン又はヌクレオリン及び／又はそれらの誘導体の１種から誘導される。このような物質は全体又は一部をペプチドモチーフ（ＫＴＰＫＫＡＫＫＰ）及び／又は（ＡＴＰＡＫＫＡＡ）から構成してもよく、モチーフ数は２〜１０である。本発明による化合物の構造において、これらのモチーフは連続又は不連続に反復することができる。従って、これらのモチーフは（例えば１個以上のアミノ酸による）生化学的結合又は化学的結合により分離することができる。特に有利な実施態様では、本発明の組成物は更に核酸導入を誘導することが可能なターゲティングエレメントを含む。このターゲティングエレメントは所望の所定細胞型又は所定組織（腫瘍細胞、肝細胞、造血細胞等）へのＤＮＡ導入を誘導することが可能な細胞外ターゲティングエレメントとすることができる。所定の優先細胞区画（ミトコンドリア、核等）への核酸導入を誘導することが可能な細胞内ターゲティングエレメントでもよい。ターゲティングエレメントは上述のように本発明の核酸導入剤又は核酸に結合することができる。本発明の範囲で利用可能なターゲティングエレメントとしては、糖、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、脂質、神経伝達物質、ホルモン、ビタミン又はその誘導体を挙げることができる。糖、ペプチド又はタンパク質（例えば抗体又は抗体フラグメント、細胞レセプターのリガンド又はそのフラグメント、レセプター又はレセプターのフラグメント等）が好ましい。特に、増殖因子レセプターのリガンド、サイトカインレセプターのリガンド、細胞レクチン型レセプターのリガンド又は接着タンパク質レセプター（例えばインテグリン）に対して親和性をもつＲＧＤ配列をもつリガンドが挙げられる。トランスフェリン、ＨＤＬ及びＬＤＬのレセプターや、葉酸の輸送体も挙げることができる。ターゲティングエレメントはアシアログリコプロテイン又はシアリド（例えばシアリドルイスＸ）のレセプター等のレクチンをターゲティングすることが可能な糖や、抗体のＦａｂフラグメントや、１本鎖抗体（ＳｃＦｖ）でもよい。より最近では、特定細胞に対する選択性の点で特に有利であり、これらの細胞のレベルでインターナリゼーションを有効に助長することが可能な天然又は合成リガンドペプチドも記載されている（Ｂａｒｙら，ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，２，１９９６，２９９−３０５）。ターゲティングエレメントと核脂質複合体の結合は、当業者に公知の任意方法により実施することができ、例えば疎水性部分又は本発明の導入剤の核酸と相互作用する部分又は本発明の導入剤もしくは核酸と相互作用する基と結合することにより実施することができる。該当相互作用は好ましい態様によるとイオン性又は共有性である。別の変形例によると、本発明の組成物は更に場合により核脂質複合体の粒子の寸法を安定化させるために十分な量の少なくとも１種の非イオン界面活性剤を添加してもよい。非イオン界面活性剤を添加すると、凝集の形成を防ぎ、組成物を特にｉｎｖｉｖｏ投与に適合できる。このような界面活性剤を添加した本発明の組成物は無害という面で有利である。このような組成物は核脂質複合体の組成物の総電荷が減るため、他のタンパク質と競合する危険が減るという意味で付加的利点もある。界面活性剤は少なくとも１個の疎水性セグメントと、少なくとも１個の親水性セグメントから構成すると有利である。疎水性セグメントは脂肪鎖、疎水性ポリオキシアルキレン、アルキリデンのポリエステル、ベンジルポリエーテル主鎖をもつポリエチレングリコール及びコレステロールから選択され、親水性セグメントは親水性ポリオキシアルキレン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン又はサッカリドから選択すると有利である。このような非イオン界面活性剤は出願ＰＣＴ／ＦＲ９８／００２２２に記載されている。本発明は核酸（より一般にはポリアニオン）を細胞に導入するための上記導入剤の使用にも関する。これらのトランスフェクション剤は細胞毒性をもたないか又は非常に低くしながらトランスフェクション効率を増加するので、このような使用は特に有利である。例えば遺伝子調節研究、疾病動物モデルの創製又は治療にｉｎｖｉｖｏ使用するには、本発明の組成物は局所、皮膚、経口、直腸、膣、非経口、鼻腔内、静脈内、筋肉内、皮下、眼内、経皮、気管内、腹腔内等の経路で投与するように調剤することができる。好ましくは、本発明の組成物は特に所望臓器のレベルに直接注射するための注射用製剤又は局所投与（皮膚及び／又は粘膜）用として医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する。このようなキャリヤーとしては、特に等張滅菌溶液又は場合に応じて滅菌水もしくは生理的血清を加えると注射可能な溶質を構成することが可能な乾燥組成物、特に凍結乾燥組成物が挙げられる。注射に使用する核酸の用量及び投与回数は種々のパラメーター、特に使用する投与方法、該当疾病、発現させようとする遺伝子、又は所望の治療期間に応じて適応できる。特に投与方法については、組織（例えば腫瘍レベル）又は循環経路への直接注射や、培養細胞処理後の注射又は移植によるｉｎｖｉｖｏ再接種が挙げられる。本発明の範囲に該当する組織は例えば筋肉、皮膚、脳、肺、肝臓、脾臓、骨髄、胸腺、心臓、リンパ、血液、骨、軟骨、膵臓、腎臓、膀胱、胃、腸、精巣、卵巣、直腸、神経系、眼、腺、結合組織等である。本発明は更に、（１）核酸を上記導入剤と接触させて核脂質複合体を形成する段階と、（２）（１）で形成された複合体と細胞を接触させる段階を含む核酸の細胞導入法にも関する。細胞と複合体の接触は、細胞をこの核脂質複合体と共にインキュベートする（ｉｎｖｉｔｒｏ又はｅｘｖｉｖｏ使用）か、複合体を生物に注入する（ｉｎｖｉｖｏ使用）ことにより実施することができる。インキュベーションは例えば細胞１０⁶個当たり核酸０.０１〜１０００μｇの存在下に実施すると好ましい。ｉｎｖｉｖｏ投与では、例えば０．０１〜１０ｍｇの核酸用量を使用することができる。本発明の組成物が更に上述のような１種以上のアジュバントを含む場合には、アジュバントを本発明の脂質又は核酸に予め混合しておく。従って、本発明は核酸導入、特に疾病治療に特に有利な方法を提供するものであり、前記疾病を改善することが可能なタンパク質をコードするか又はこのような核酸に転写可能であり、上記条件下で一般式（Ｉ）の化合物に結合した核酸をｉｎｖｉｖｏ、ｅｘｖｉｖｏ又はｉｎｖｉｔｒｏ投与することを特徴とする。より詳細には、この方法はタンパク性又は核酸物質の欠損に起因する疾病に適用することができ、投与する核酸は前記タンパク性物質をコードするか、核酸物質に転写されるか、又は前記核酸物質を構成する。本発明は、細胞トランスフェクションのための本発明の核酸導入剤の全使用に及ぶ。本発明の核酸導入剤は特に初代細胞又は樹立系に核酸を導入するために使用することができる。このような細胞としては、分化又は多能性（前駆物質）形態の繊維芽細胞、筋細胞、神経細胞（ニューロン、星状細胞、グリア細胞）、肝細胞、造血系細胞（リンパ球、ＣＤ３４、樹状細胞等）、上皮細胞等が挙げられる。上記構成に加え、本発明は以下の実施例及び図面に明示される他の特徴及び利点も含むが、以下の実施例及び図面は例示に過ぎず、本発明を制限するものではない。図面の説明図１／５：化合物（１）〜（５）の合成スキーム。図２／５：化合物（５）〜（８ａ）及び（８ｂ）の合成スキーム。図３／５：化合物（９）〜（１６）の合成スキーム。図４／５：血清不在下でＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼ活性を測定することにより得られた化合物（８ａ）及び（８ｂ）のｉｎｖｉｔｒｏトランスフェクション効率の測定結果。測定はベクターナノモル／μｇＤＮＡの比を変えて実施し、棒グラフにより示す。各組成物でタンパク質定量も実施し、同一グラフに実線の曲線で示す。図５／５：血清不在下でＮＩＨ３Ｔ３細胞におけるルシフェラーゼ活性を測定することにより得られた化合物（８ａ）及び（８ｂ）のｉｎｖｉｔｒｏトランスフェクション効率の測定結果。測定はベクターナノモル／μｇＤＮＡの比を変えて実施し、棒グラフにより示す。材料と方法 −ＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィー）精製はＷａｔｅｒｓＬＣ４０００装置を使用し、水中アセトニトリル勾配を溶離剤としてＶｙｄａｃＣ４カラムで実施した。 −蛍光測定は夫々２６０ｎｍ及び５９０ｎｍの励起波長と発光波長を使用することにより、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬＳ５０Ｂで実施した。励起と発光のスリット幅は５ｎｍに調節する。最終濃度５μｇ／ｍｌの臭化エチジウムを添加後に蛍光値を記録する。 −核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルはＢｒｕｋｅｒＭＳＬ３００装置で重水素化クロロホルム中、陽子３００．１３ＭＨｚ、炭素７５．４７ＭＨｚで記録した。実施例実施例１：メチルベンジルオキシ−６−ガラクトピラノースから導入剤８（ａ）の合成各反応段階を図１／５及び２／５に略示する。ａ）メチルベンジルオキシ−６−トリ−Ｏ−（カルボキシ−２’−エチル）−２，３，４−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（２）の合成メチルベンジルオキシ−６−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（１）２８．４ｇ（０．１ｍｏｌ）をＴＨＦ４００ｍｌに溶かし、０℃で撹拌下におく。微粉状水酸化カリウム３２ｇ（５．７当量）、クラウンエーテル１８−Ｃｒ−６０．５ｇ（２％）及びブロモ酢酸エチル３２．５ｍｌ（１．５当量）を加える。２時間後に蒸発乾涸し、再び水に溶かし、得られた溶液を２Ｎ塩酸で中和する。こうしてジクロロメタンで抽出すると、生成物（２）３２ｇ（収率７０％）が得られる。 ¹³ ＣＮＭＲ：δ，１７２，９４；１３６．８７；１２７．９３；１２７．４１；９８．８９；９７．２２；７８．７４；７６．１７；７２．９７；６９．５２；６７．９３；６５．３９；５４．７５。ｂ）メチルベンジルオキシ−６−トリ−Ｏ−（ヒドロキシ−２’−エチル）−２，３，４−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（３）の合成上記三酸（２）３０ｇ（０．０６５ｍｏｌ）をＴＨＦ４００ｍｌに溶かし、０ ℃で窒素下におく。撹拌下にボランジメチルスルフィド４０ｍｌを滴下する。周囲温度で更に２時間撹拌した後、過剰のメタノールを慎重に加える。次に溶液を蒸発乾涸し、得られた固体を再びメタノールに数倍に溶かす。こうして酢酸エチルを溶離剤としてシリカカラムで精製すると、最終生成物（３）２４．５ｇ（収率９０％）が得られる。ｃ）メチルベンジルオキシ−６−トリ−Ｏ−（アジド−２’−エチル）−２，３，４−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（４）の合成前段階で得られたトリオール（３）２０ｇ（０．０４８ｍｏｌ）をＴＨＦ５００ｍｌに溶かす。トリフェニルホスフィン４０ｇ（３．２当量）、トルエン中１．１Ｍヒドラゾ酸溶液１６０ｍｌ（３．７当量）、次いでジエチルアゾジカルボキシレート２４．２ｍｌ（３．２当量）を加える。１時間後に溶液を蒸発させ、ヘプタン／酢酸エチル（６：４）混合物を溶離剤としてシリカゲルカラムで精製する。こうして生成物（４）１７．６ｇ（収率９０％）が得られる。 ¹³ ＣＮＭＲ：δ，１２８．４７；１２７．８０；９８．２３；７９．０５；７６．２７；７３．５５；７１．９２；７０．１５；６９．９５；６８．７７；６８．１４；５５．３７；５１．４１；５１．１１；５０．８７。ｄ）トリス塩酸メチルトリ−Ｏ−（アミノ−２’−エチル）−２，３，４−β− Ｄ−ガラクトピラノシド（５）の合成トリアジド（４）１５ｇ（０．０３ｍｏｌ）をエタノール２００ｍｌに溶かす。１２Ｎ塩酸７．５ｍｌを加えた後、炭素担持パラジウムの存在下に３時間水素処理する。濾過後、溶剤を蒸発させ、得られた残渣（５）（１２．６ｇ，収率９５％）を次段階で直接使用する。ｅ）メチルトリ−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバミド−２’−エチル）−２，３，４−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（６）の合成塩酸塩（５）１２ｇ（０．０２８ｍｏｌ）をジオキサン１００ｍｌと１Ｎ水酸化ナトリウム８５ｍｌの混合物に溶かす。ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート１８．７ｇ（３．３当量）を加え、周囲温度で２時間撹拌する。反応混合物を蒸発させた後、ジクロロメタン（３×５０ｍｌ）で抽出する。有機相を合わせた後、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させる。こうして酢酸エチルを溶離剤としてシリカゲルカラムで精製すると、残渣（６）１５．５６ｇ（収率９０％）が得られる。ｆ）メチルジオクタデシルアミドスクシニル−６−トリ−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバミド−２’−エチル）−２，３，４−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（７ａ）の合成上記生成物（６）１０ｇ（０．０１６ｍｏｌ）をジクロロメタン３００ｍｌに溶かす。ジオクタデシルアミドコハク酸１４．６ｇ（１．５当量）、ジメチルアミノピリジン１．９５ｇ（１当量）及びジシクロヘキシルカルボジイミド６．５ｇ（２当量）を順次加える。ジオクタデシルアミドコハク酸はジオクタデシルアミンと無水コハク酸の反応により得られる。一晩後、蓚酸のメタノール溶液１０ｍｌ（１．７ｇ）を慎重に加え、１時間撹拌する（一酸化炭素の発生）。溶液を濾過し、蒸発乾涸し、得られた生成物をヘプタン／酢酸エチル（７：３）溶液で溶離しながらシリカゲルカラムで精製する。こうして生成物（７ａ）１２．８ｇ（収率６５％）が得られる。ｇ）トリストリフルオロ酢酸メチルジオクタデシルアミドスクシニル−６−トリ −Ｏ−（アミノ−２’−エチル）−２，３，４−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（８ａ）の合成生成物（７ａ）１０ｇ（０．００８ｍｏｌ）を９０％トリフルオロ酢酸２０ｍｌに溶かす。３０分後に溶液を蒸発させ、トルエン３×２０ｍｌにとる。得られた残渣（８ａ）をＨＰＬＣ（ＲＰ４；水／アセトニトリル；０→１００％；２０分）により精製する。こうして生成物（８ａ）９．７ｇ（収率９５％）が得られる。ＭＨ⁺ ＝１３０４。実施例２：メチルベンジルオキシ−６−ガラクトピラノースから導入剤８（ｂ）の合成各反応段階を図１／５及び２／５に略示する。前半の合成段階は実施例１に記載した合成段階ａ）〜ｅ）と同一である。その後、以下のように続ける。ｆ）メチルジオクタデシルアミドフタリル−６−トリ−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバミド−２’−エチル）−２，３，４−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（７ｂ）の合成本生成物はジオクタデシルアミドコハク酸の代わりにジオクタデシルアミドフタル酸を使用することにより、生成物（７ａ）と同様に得られる。ｇ）トリストリフルオロ酢酸メチルジオクタデシルアミドフタリル−６−トリ− Ｏ−（アミノ−２’−エチル）−２，３，４−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（８ｂ）の合成化合物（８ｂ）は前段階で得られた生成物（７ｂ）から生成物（８ａ）と同様に得られる。ＭＨ⁺ ＝１３１７。実施例３：トリアセチルグリカールから導入剤（１６）の合成ａ）フタルイミドプロピル−ジ−Ｏ−アセチル−４，６−ビスデオキシ−２，３ −β−Ｄ−エリスロヘキセノ−２−ピラノシド（１０）の合成各反応段階を図３／５に示す。トリアセチル−Ｄ−グルカール（９）１３．１７ｇ（０．０４８ｍｏｌ）をジクロロメタン２５０ｍｌに溶かす。フタルイミドプロパノール１１ｇ（１．１当量）と三フッ化ホウ素エーテラート１．５６ｍｌ（０．２６当量）を加える。周囲温度で１時間後に混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和し、デカントし、乾燥し、溶液を蒸発させる。こうしてヘプタン／酢酸エチル（５：５）溶液を溶離剤としてシリカゲルカラムでクロマトグラフィー精製すると、生成物（１０）１６ｇ（収率８０％）が得られる。ｂ）フタルイミドプロピル−ジ−Ｏ−アセチル−４，６−ビスデオキシ−２，３ −β−Ｄ−グルコピラノシド（１１）の合成グリコシド（１０）１６ｇ（０．０３８ｍｏｌ）をエタノール２００ｍｌに溶かす。炭素担持１０％パラジウム０．１６ｇを加え、２時間水素処理する。濾過後に溶液を蒸発させる。こうして生成物（１１）１５．７８ｇ（収率９９％）が得られる。ｃ）フタルイミドプロピルビスデオキシ−２，３−β−Ｄ−グルコピラノシド（１２）の合成上記生成物（１１）１５ｇ（０．０３６ｍｏｌ）をメタノール２５０ｍｌに溶かした後、１Ｎナトリウムメチラート３．５ｍｌ（０．１当量）を加える。２時間後にアンバーライト樹脂ＩＲ１２０で中和する。濾過及び蒸発後に生成物（１２）１１．５ｇ（収率９６％）が得られる。ｄ）フタルイミドプロピルジアジド−４，６−テトラデオキシ−２，３，４，６ −β−Ｄ−グルコピラノシド（１３）の合成脱アセチル化物（１２）１１ｇ（０．０３３ｍｏｌ）をＴＨＦ２５０ｍｌに溶かす。トリフェニルホスフィン２１．５ｇ（２．５当量）とトルエン中１．１Ｍヒドラゾ酸１１０．５ｍｌ（３．７当量）を撹拌下に順次加える。混合物の温度が３０℃を越えないような速度でジエチルアゾジカルボキシレート１２．８８ｍｌ（２．５当量）を加える。１時間後に溶液を蒸発乾涸し、得られた生成物をヘプタン／酢酸エチル（８：２）混合物で溶離しながらシリカゲルカラムで精製する。こうして生成物（１３）７．２ｇ（収率５７％）が得られる。ｅ）アミノプロピルジアジド−４，６−テトラデオキシ−２，３，４，６−β− Ｄ−グルコピラノシド（１４）の合成生成物（１３）７ｇ（０．０１８ｍｏｌ）をエタノール５００ｍｌに溶かした後、ヒドラジン水和物２．６ｍｌを加え、４０℃で２時間撹拌する。蒸発後に再びジクロロメタンに溶かし、形成されたフタリルヒドラジドを結晶化させる。溶液を濾過及び蒸発させる。こうして生成物（１４）４．１７ｇ（収率９０％）が得られる。ｆ）（コレステリル−Ｏ−ホルムアミドプロピル）ジアジド−４，６−テトラデオキシ−２，３，４，６−β−Ｄ−グルコピラノシド（１５）の合成クロロギ酸コレステリル６．３４ｇ（０．９当量）と生成物（１４）４ｇ（０．０１６ｍｏｌ）をエチルエーテル２００ｍｌに溶かす。すぐに沈殿が形成されるので、１Ｎ水酸化ナトリウム５０ｍｌを加える。数分後に溶液は再び透明になる。更に３０分間撹拌した後、デカントし、水２×５０ｍｌで洗浄し、溶液を蒸発乾涸する。こうしてヘプタン／酢酸エチル（６：４）溶液を溶離剤としてカラム精製すると、生成物（１５）９．４ｇ（収率９０％）が得られる。ｇ）（コレステリル−Ｏ−ホルムアミドプロピル）ジアミノ−４，６−テトラデオキシ−２，３，４，６−β−Ｄ−グルコピラノシド（１６）の合成ジアジド（１５）９ｇ（０．０１３ｍｏｌ）を８０％ＴＨＦ１５０ｍｌに溶かした後、トリフェニルホスフイン１４．２ｇ（４当量）を加え、５０℃に１時間加熱する。冷却後、アニオン樹脂カラムＩＲＣ−５０ＣＯＯＨに加え、８０％ＴＨＦで洗浄する。次に、ＴＨＦ／水／酢酸（６４：１６：１０）混合物により生成物を酢酸形態で溶離する。こうして生成物（１６）８．９ｇ（収率９０％）が得られる。 ¹³ ＣＮＭＲ：δ，１７６．５５；１５６．６５；１３９．８４；１３２．０２；１２８．４６；１２５．４６；１２２．４４；９７．１１；７４．２８；５６．６６；５６．１２；５０．０２；４３．７０；４２．３０；３９．５１；３８．５７；３６．９８；３６．５５；３６．１６；３５．７６；３１．８７；３０．３０；２９．８９；２８．１８；２３．８２；２２．７８；２２．５３；２１．０３；１９．３１；１８．７０；１１．８４。実施例４：化合物（１７）の合成ａ）酢酸ベンジル−（５−Ｏ−アセチル−６−アセトキシメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）の合成トリアセチルＤ−グルカール２．８ｇ（０．０１ｍｏｌ）とベンジルグリコラート１．６ｍｌ（１．１当量）をクロロホルム８０ｍｌに溶かす。氷浴で冷却し、三フッ化ホウ素エーテラート０．６５１ｍｌ（０．５当量）を加える。４５分後に飽和重炭酸ナトリウム水溶液で中和し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過及び濃縮する。ヘプタン／酢酸エチル（６：４）混合物を溶離剤としてシリカゲルカラムでクロマトグラフィー精製する。収率は９６％である。ｂ）（５−Ｏ−アセチル−６−アセトキシメチルテトラヒドロピラン−２−イルオキシ）酢酸の合成上記生成物３．５ｇ（０．００９３ｍｏｌ）を炭素担持１０％パラジウム０．３５ｇの存在下に大気圧及び周囲温度で１０時間水素化する。セライトで濾過し、濃縮し、酢酸エチルを溶離剤としてシリカゲルカラムでクロマトグラフィー精製する。収率は９０％である。ｃ）Ｎ，Ｎ−ジオクタデシル−（５−Ｏ−アセチル−６−アセトキシメチルテトラヒドロピラン−２−イルオキシ）アセトアミドの合成上記生成物０．６７５ｇ（０．００１７ｍｏｌ）をクロロホルム８．６ｍｌに溶かす。ジイソプロピルエチルアミン０．９ｍｌ、ジオクタデシルアミン０．８９９ｇ（１当量）及びジシクロヘキシルカルボジイミド０．４２６ｇ（１．２当量）を加える。周囲温度で一晩後に濃縮し、生成物をヘプタンで抽出する。ヘプタン／酢酸エチル（８：２）混合物を溶離剤としてシリカゲルカラムでクロマトグラフィー精製する。収率は７０％である。ｄ）Ｎ，Ｎ−ジオクタデシル−（５−ヒドロキシ−６−ヒドロキシメチルテトラヒドロピラン−２−イルオキシ）アセトアミドの合成上記生成物１．５７ｇ（０．００１９８ｍｏｌ）をメタノール１０ｍｌに溶かす。ナトリウムメチラート０．１９７ｍｌ（０．２当量；２Ｍメタノール）を加える。周囲温度で２時間後に中和し、濃縮する。ヘプタン／酢酸エチル（８：２）混合物を溶離剤としてシリカゲルカラムでクロマトグラフィー精製する。収率は９２％である。ｅ）Ｎ，Ｎ−ジオクタデシル−（５−アジド−６−アジドメチルテトラヒドロピラン−２−イルオキシ）アセトアミド（１７）の合成上記生成物０．６ｇ（０．０００８７ｍｏｌ）をＴＨＦ１５ｍｌに溶かす。トリフェニルホスフィン０．４８ｇ（２．１当量）、次いでＤＥＡＤ０．２８８ｍｌ（２．１当量）を加える。発熱反応が終了したらトルエン中１．３８Ｍヒドラゾ酸溶液１．５８８ｍｌ（２．５当量）を加える。反応が終了したら濃縮し、ヘプタンにとり、濾過し、濃縮する。次に、ヘプタン／酢酸エチル（８：２）混合物を溶離剤としてシリカゲルカラムでクロマトグラフィー精製する。収率は７２％である。 ¹³ ＣＮＭＲ：δ，１７３．２１；１７２．０７；１６２．２２；１６１．７７；１１８．３４；１１４．４９；１１０．６５；１０８．３４；９６．８８；６５．１８；６４．５０；４８．２７；４６．５４；４０．６９；３５．８６；３１．７８；３０．９４；２８．６３；２７．５６；２６．９２；２２．５４；２１．８４；１３．９４。実施例５：本発明のトランスフェクション剤８（ａ）及び８（ｂ）とＤＮＡの結合本実施例は本発明のトランスフェクション剤とＤＮＡの結合の性質と複合体の形成について実証する。本発明のトランスフェクション剤を１０ｍＭまで水に溶かした。こうして得られた溶液は透明であり、カチオニック脂質のミセル形態の系に対応する。トランスフェクション剤６ｎｍｏｌ／μｇＤＮＡの割合でトランスフェクション剤／ＤＮＡ複合体を調製した。トランスフェクション剤８（ｂ）をＤＮＡと結合すると、寸法９２ｎｍ±２７ｎｍの複合体が得られ、水中７％及び３００ｍＭ塩化ナトリウムＮａＣｌ中６０％の蛍光を示す。本発明のトランスフェクション剤８（ａ）をＤＮＡと結合すると、寸法約９８ｎｍ±２０ｎｍの複合体を形成することができ、水中６％及び３００ｍＭ塩化ナトリウムＮａＣｌ中５５％の蛍光を示す。これらの結果から明らかなように、本発明のトランスフェクション剤はＤＮＡと結合し、細胞膜の通過に特に適した寸法である平均直径約１００ｎｍの粒子を形成することができる。この結合は媒質のイオン強度を増加しても比較的安定している。実際に、３００ｍＭで５０％を上回るＤＮＡが本発明のトランスフェクション剤と結合している。実施例６：本発明のトランスフェクション剤８（ａ）及び８（ｂ）のｉｎｖｉｔｒｏＤＮＡトランスフェクションＤＮＡ１μｇ当たりのベクターの用量を種々に変化させてトランスフェクション効率をｉｎｖｉｔｒｏ評価した。これらの実験に使用した遺伝子材料はプラスミドｐｃＤＮＡ３［Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ］から抽出したヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）のプロモーターを含むＭｌｕＩ−ＨｉｎｄＩＩＩフラグメントの挿入によりプラスミドｐＧＬ２−基本ベクター［Ｐｒｏｍｅｇａ］から誘導される「ルシフェラーゼ」レポーター遺伝子を含むプラスミド構築物ｐＣＭＶ−Ｌｕｃである。生理的血清（０．１５Ｍ塩化ナトリウムＮａＣｌ）で４０μｇ／ｍｌに希釈した核酸溶液も使用した。本発明に記載する生成物を８０μＭ〜８００μＭの濃度で水に溶かし、ＤＮＡ溶液と等容量混合する。サイトフェクション溶液を現場調製できるように、最終塩濃度を７５ｍＭとする。トランスフェクションについては、細胞を適当な条件下に２４穴マイクロプレートで培養し（２ｃｍ²／ウェル）、指数増殖期で５０〜７０％コンフルエントに達したらトランスフェクトする。血清タンパク質を含まない培地２×５００μｌで細胞を洗浄し、無血清培地で再び増殖させる。サイトフェクション混合物５０μｌ（即ちＤＮＡ１μｇ／ウェル）を細胞に加える（ウェル３個／ベクター−ＤＮＡ条件）。トランスフェクションから２時間後に適量の血清を増殖培地に補充する。トランスフェクションから４８時間後に、Ｐｒｏｍｅｇａキット（ＬｕｃｉｆｅｒａｓｅＡｓｓａｙＳｙｓｔｅｍ）の使用に推奨されている方法に従ってルシフェラーゼの発現を測定することによりトランスフェクション効率を評価する。細胞溶解液中のタンパク質濃度を測定することによりサイトフェクション混合物の毒性を推定する。ＨｅＬａ細胞のトランスフェクションに得られた結果を図４／５、ＮＩＨ３Ｔ３細胞で得られた結果を図５／５に示す。これらの２図と２０ｎｍｏｌ／μｇＤＮＡを上回るベクター／ＤＮＡ比で得られた結果（図示せず）から、トランスフェクションはベクター／ＤＮＡ比がベクター２〜２０ｎｍｏｌ／μｇＤＮＡのときに特に有効であると推察することができる。これらの結果によると、使用した２種の細胞型でトランスフェクション効率はベクター４〜１２ｎｍｏｌ／μｇＤＮＡ、特にベクター８〜１２ｎｍｏｌ／μｇＤＮＡの比で最適である。また、ベクターの用量効果を示すヒストグラムは細胞型に関係なく生成物８（ａ）及び（ｂ）で重なり合うことが認められる。本発明の２種の生成物はＮＩＨ３Ｔ３細胞で試験したベクター用量で非毒性である。実際に、トランスフェクトした細胞試料当たりベクター８ｎｍｏｌを上回る用量で細胞タンパク質の最大低下は２０％に過ぎなかった。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１１年６月４日（１９９９．６．４）【補正内容】請求の範囲１．親油領域に結合した少なくとも１個のカチオニック親水領域を含むトランスフェクション剤であって、前記カチオニック親水領域が一般式：［式中、 −ｙは０又は１の整数であり、各ｙは相互に独立しており、 −Ｘは酸素、窒素、硫黄又はセレン原子を表し、 −Ｚ基は相互に独立して・水素原子、・ＯＲ基（式中、Ｒは水素原子、メチル基、又は（ＣＨ₂）_n−ＮＲ₁Ｒ₂基を表し、前記式中、ｎは１〜６から選択される整数であり、Ｒ₁及びＲ₂は相互に独立して水素原子又は（ＣＨ₂）_q−ＮＨ₂基を表し、前記式中、ｑは１〜６であり、各ｑは相互に独立している）、・（ＣＨ₂）_m−ＮＲ₁Ｒ₂基（式中、ｍは０〜６から選択される整数であり、Ｒ₁ 及びＲ₂は上記と同義である）、又は・カチオニック親水領域を親油領域に結合することが可能な「スペーサー」基を表し、但しＺ置換基の少なくとも１個は「スペーサー」基であり、Ｚ置換基の少なくとも２個はアミノ基をもつ］をもつことを特徴とする前記トランスフェクション剤。２．カチオニック親水領域を定義する一般式において（ＣＨ₂）_n−ＮＲ₁Ｒ₂基のｎが２、３及び４から選択される整数であることを特徴とする請求項１に記載のトランスフェクション剤。３．カチオニック親水領域を定義する一般式がピラノース又はフラノース形のグリコシドであることを特徴とする請求項１に記載のトランスフェクション剤。４．カチオニック親水領域を定義する一般式においてｙが１であり、Ｘが酸素原子であることを特徴とする請求項１に記載のトランスフェクション剤。５．前記親油領域が場合によりハロゲン化された１個以上の飽和又は不飽和の直鎖又は分枝脂肪鎖及び／又はステロイド誘導体から構成されることを特徴とする請求項１に記載のトランスフェクション剤。６．前記脂肪鎖が１０〜２２個の炭素原子、特に１４、１６、１７、１８及び／又は１９個の炭素原子を含むことを特徴とする請求項５に記載のトランスフェクション剤。７．前記脂肪鎖が（ＣＨ₂）₁₃ＣＨ₃、（ＣＨ₂）₁₅ＣＨ₃、（ＣＨ₂）₁₆ＣＨ₃、（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃及び（ＣＨ₂）₁₈ＣＨ₃から選択されることを特徴とする請求項５又は６に記載のトランスフェクション剤。８．ステロイド誘導体がコレステロール、コレスタノール、３α，５−シクロ− ５α−コレスタン−６β−オール、コリン酸、ギ酸コレステリル、ギ酸コレスタニル、ギ酸３α，５−シクロ−５α−コレスタン−６β−イル、コレステリルアミン、６−（１，５−ジメチルヘキシル）−３ａ，５ａ−ジメチルヘキサデカヒドロシクロペンタ［ａ］シクロプロパ［２，３］シクロペンタ［１，２−ｆ］ナフタレン−１０−イルアミン又はコレスタニルアミンから選択されることを特徴とする請求項５に記載のトランスフェクション剤。９．カチオニック親水領域を親油領域に結合することが可能な「スペーサー」基が加水分解性官能基を含む酸又はアミノ基から構成されることを特徴とする請求項１に記載のトランスフェクション剤。１０．「スペーサー」基が脂肪族又は芳香族鎖から構成され、アミド、エステル、エーテル、カルバミン酸又は芳香族環から選択される１個以上の基を含むことを特徴とする請求項９に記載のトランスフェクション剤。１１．「スペーサー」が−Ｏ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_x−ＣＯＯＨ、−Ｏ−（ＣＨ₂）_x −ＣＯＯＨ、−Ｏ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_x−ＮＨ₂、−Ｏ−（ＣＨ₂）_x−ＮＨ₂、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_x−ＮＨ₂（式中、Ｘは１〜６から選択される整数を表す）から選択されることを特徴とする請求項９に記載のトランスフェクション剤。１２．式：の化合物の１種であることを特徴とする請求項１に記載のトランスフェクション剤。１３．「スペーサー」を介して請求項１に定義した一般式の複素環に親油領域を結合することを特徴とする請求項１から１２のいずれか一項に記載のトランスフェクション剤の製造方法。１４．請求項１から１２のいずれか一項に記載のトランスフェクション剤と少なくとも１種の核酸を含むことを特徴とする組成物。１５．トランスフェクション剤／核酸比がＤＮＡ１μｇ当たりトランスフェクション剤０．１〜５０ナノモルであることを特徴とする請求項２１に記載の組成物。１６．更に１種以上のアジュバントを含むことを特徴とする請求項１４に記載の組成物。１７．１種以上のアジュバントが中性脂質であることを特徴とする請求項１６に記載の組成物。１８．アジュバントが核酸の凝縮レベルに直接又は非直接的に作用する化合物であることを特徴とする請求項１６に記載の組成物。１９．注射用製剤に医薬的に許容可能なキャリヤーを含むことを特徴とする請求項１４から１８のいずれか一項に記載の組成物。２０．皮膚及び／又は粘膜に塗布するのに医薬的に許容可能なキャリヤーを含むことを特徴とする請求項１４から１８のいずれか一項に記載の組成物。２１．（１）請求項１から１９のいずれか一項に記載の導入剤及び場合により１種以上のアジュバントと核酸を接触させて核脂質複合体を形成する段階と、（２）（１）で形成された複合体と細胞を接触させる段階を含むことを特徴とする核酸の細胞導入方法。２２．核酸の細胞導入に使用するための請求項１から１３のいずれか一項に記載のトランスフェクション剤。２３．トランスフェクトしようとする少なくとも１種の核酸を含む医薬を製造するための請求項１から１２のいずれか一項に記載のトランスフェクション剤の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考） // Ｃ０７Ｈ 15/04 Ｃ０７Ｈ 15/18 15/18 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＲ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ

Claims

【特許請求の範囲】１．少なくとも１個のカチオニック親水領域と親油領域を含むトランスフェクション剤であって、前記カチオニック親水領域がアミノ基により置換された少なくとも１個の５又は６員複素環から構成されることを特徴とする前記トランスフェクション剤。２．前記トランスフェクション剤の合成中間体であるカチオニック親水領域が一般式（Ｉ）：［式中、 −ｙは０又は１の整数であり、各ｙは相互に独立しており、 −Ｘは酸素、窒素、硫黄又はセレン原子を表し、 −Ｚ基は相互に独立して・水素原子、・ＯＲ基（式中、Ｒは水素原子、メチル基、又は（ＣＨ₂）_n− ＮＲ₁Ｒ₂基を表し、前記式中、ｎは１〜６から選択される整数であり、Ｒ₁及びＲ₂は相互に独立して水素原子又は（ＣＨ₂）_q−ＮＨ₂基を表し、前記式中、ｑは１〜６であり、各ｑは相互に独立している）、・（ＣＨ₂）_m−ＮＲ₁Ｒ₂基（式中、ｍは０〜６から選択される整数であり、Ｒ₁ 及びＲ₂は土記と同義である）、又は・カチオニック親水領域を親油領域に結合することが可能な「スペーサー」基を表し、但しＺ置換基の少なくとも１個はアミノ基をもつ］をもつことを特徴とする請求項１に記載のトランスフェクション剤。３．一般式（Ｉ）において（ＣＨ₂）_n−ＮＲ₁Ｒ₂基のｎが２、３及び４から選択される整数であることを特徴とする請求項２に記載のトランスフェクション剤。４．カチオニック親水領域がピラノース又はフラノース形のグリコシドから構成されることを特徴とする請求項２に記載のトランスフェクション剤。５．一般式（Ｉ）において環上に存在するｙが１であり、Ｘが酸素原子であることを特徴とする請求項２に記載のトランスフェクション剤。６．更にＺ基の少なくとも１個がアミノ官能基を含むことを特徴とする請求項５に記載のトランスフェクション剤。７．更にＺ基の少なくとも２個がアミノ官能基を含むことを特徴とする請求項５に記載のトランスフェクション剤。８．更にＺ基の２個が水素原子であり、他の２個のＺ基が窒素含有基、特にアミノ基であり、最後のＺ基がＯＲ基（式中、Ｒは請求項２に定義した意味をもつ）を表すことを特徴とする請求項５に記載のトランスフェクション剤。９．前記ＯＲ基が一般式（Ｉ）の複素環上の２位に位置することを特徴とする請求項８に記載のトランスフェクション剤。１０．更に少なくとも２個のＺ基がＯ−（ＣＨ₂）₂−ＮＨ₂基であり、Ｚ基の少なくとも１個がＯＲ基（式中、Ｒは請求項２に定義した意味をもつ）を表すことを特徴とする請求項５に記載のトランスフェクション剤。１１．前記トランスフェクション剤の合成中間体であるカチオニック親水領域が、から選択されることを特徴とする請求項１又は２に記載のトランスフェクション剤。１２．親油領域が場合によりハロゲン化された１個以上の飽和又は不飽和の直鎖又は分枝脂肪鎖及び／又はステロイド誘導体から構成されることを特徴とする請求項１に記載のトランスフェクション剤。１３．前記脂肪鎖が１０〜２２個の炭素原子、特に１４、１６、１７、１８及び／又は１９個の炭素原子を含むことを特徴とする請求項１２に記載のトランスフェクション剤。１４．前記脂肪鎖が（ＣＨ₂）₁₃ＣＨ₃、（ＣＨ₂）₁₅ＣＨ₃、（ＣＨ₂）₁₆ＣＨ₃、（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃及び（ＣＨ₂）₁₈ＣＨ₃から選択されることを特徴とする請求項１２又は１３に記載のトランスフェクション剤。１５．ステロイド誘導体がコレステロール、コレスタノール、３α，５−シクロ −５α−コレスタン−６β−オール、コリン酸、ギ酸コレステリル、ギ酸コレスタニル、ギ酸３α，５−シクロ−５α−コレスタン−６β−イル、コレステリルアミン、６−（１，５−ジメチルヘキシル）−３ａ，５ａ−ジメチルヘキサデカヒドロシクロペンタ［ａ］シクロプロパ［２，３］シクロペンタ［１，２−ｆ］ナフタレン−１０−イルアミン又はコレスタニルアミンから選択されることを特徴とする請求項１２に記載のトランスフェクション剤。１６．親油領域が加水分解性官能基を含む任意酸又はアミノ基から構成される「スペーサー」によりカチオニック親水領域に結合していることを特徴とする請求項１に記載のトランスフェクション剤。１７．「スペーサー」が脂肪族又は芳香族鎖から構成され、アミド、エステル、エーテル、カルバミン酸又は芳香族環から選択される１個以上の基を含むことを特徴とする請求項１６に記載のトランスフェクション剤。１８．「スペーサー」が−Ｏ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_x−ＣＯＯＨ、−Ｏ−（ＣＨ₂）_x −ＣＯＯＨ、−Ｏ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_x−ＮＨ₂、−Ｏ−（ＣＨ₂）_x−ＮＨ₂、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_x−ＮＨ₂（式中、Ｘは１〜６から選択される整数を表す）から選択されることを特徴とする請求項１６に記載のトランスフェクション剤。１９．式：の化合物（１６）、（１７）、（８ａ）又は（８ｂ）の１種であることを特徴とする請求項１に記載のトランスフェクション剤。２０．「スペーサー」を介して一般式（Ｉ）の複素環に親油領域を結合することを特徴とする請求項１から１９のいずれか一項に記載のトランスフェクション剤の製造方法。２１．請求項１から１９のいずれか一項に記載のトランスフェクション剤と少なくとも１種の核酸を含むことを特徴とする組成物。２２．トランスフェクション剤／核酸比がＤＮＡ１μｇ当たりトランスフェクション剤０．１〜５０ナノモルであることを特徴とする請求項２１に記載の組成物。２３．更に１種以上のアジュバントを含むことを特徴とする請求項２１に記載の組成物。２４．１種以上のアジュバントが中性脂質であることを特徴とする請求項２３に記載の組成物。２５．アジュバントが核酸の凝縮レベルに直接又は非直接的に作用する化合物であることを特徴とする請求項２３に記載の組成物。２６．注射用製剤に医薬的に許容可能なキャリヤーを含むことを特徴とする請求項２１から２５のいずれか一項に記載の組成物。２７．皮膚及び／又は粘膜に塗布するのに医薬的に許容可能なキャリヤーを含むことを特徴とする請求項２１から２５のいずれか一項に記載の組成物。２８．核酸を細胞に導入するための請求項１から１９のいずれか一項に記載のトランスフェクション剤の使用。２９．（１）請求項１から１９のいずれか一項に記載の導入剤及び場合により１種以上のアジュバントと核酸を接触させて核脂質複合体を形成する段階と、（２）（１）で形成された複合体と細胞を接触させる段階を含むことを特徴とする核酸の細胞導入方法。