JP2002255834A - バクテリアル・トランスロケーション抑制剤及びバクテリアル・トランスロケーション抑制方法 - Google Patents
バクテリアル・トランスロケーション抑制剤及びバクテリアル・トランスロケーション抑制方法Info
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- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/742—Spore-forming bacteria, e.g. Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, clostridium or Lactobacillus sporogenes
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Abstract
(57)【要約】
【課題】簡便且つ効果的にバクテリアルトランスロケー
ション（ＢＴＬ）を抑制する薬剤、及び簡便且つ効果的
なＢＴＬ抑制方法を提供する。 【解決手段】バチルス・ズブチリスの生菌体を有効成分
として含むＢＴＬ抑制剤及び前記ＢＴＬ抑制剤を経口投
与するＢＴＬ抑制方法。
ション（ＢＴＬ）を抑制する薬剤、及び簡便且つ効果的
なＢＴＬ抑制方法を提供する。 【解決手段】バチルス・ズブチリスの生菌体を有効成分
として含むＢＴＬ抑制剤及び前記ＢＴＬ抑制剤を経口投
与するＢＴＬ抑制方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、細菌の腸管バリア
を越えた侵襲を抑制するバクテリアル・トランスロケー
ションを抑制剤及びバクテリアル・トランスロケーショ
ン抑制方法に関する。
を越えた侵襲を抑制するバクテリアル・トランスロケー
ションを抑制剤及びバクテリアル・トランスロケーショ
ン抑制方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ヒトを含む動物に接触する微生物の殆ど
は、動物の腸管内に存在する微生物である。その菌数
は、例えばヒトの場合、腸管内容物１ｇあたり、小腸下
部で１０５〜１０７、大腸で１０９〜１０１１に達し、
菌種も、おおまかに１００種におよぶといわれている。
これらの菌のうちの有害菌が、生体内に侵襲して増殖し
た場合、いわゆる日和見感染や、多臓器不全・敗血症な
どの重篤な疾病が惹起される。
は、動物の腸管内に存在する微生物である。その菌数
は、例えばヒトの場合、腸管内容物１ｇあたり、小腸下
部で１０５〜１０７、大腸で１０９〜１０１１に達し、
菌種も、おおまかに１００種におよぶといわれている。
これらの菌のうちの有害菌が、生体内に侵襲して増殖し
た場合、いわゆる日和見感染や、多臓器不全・敗血症な
どの重篤な疾病が惹起される。
【０００３】これらの疾病を抑制する方法の一つとし
て、これらの有害菌が腸粘膜を透過して腹腔・臓器など
へ侵襲することを抑制することが考えられる。
て、これらの有害菌が腸粘膜を透過して腹腔・臓器など
へ侵襲することを抑制することが考えられる。
【０００４】かかる侵襲の抑制を達成する機構は、腸管
バリアと呼ばれる。腸管バリアは、腸管免疫機構と解剖
学的機構とを含む。
バリアと呼ばれる。腸管バリアは、腸管免疫機構と解剖
学的機構とを含む。
【０００５】腸管免疫機構とは、消化管付属リンパ装置
・分泌型ＩｇＡ・貧食系細胞などが関与する、腸管周辺
に特有の免疫機構である。また腸管バリアの解剖学的機
構とは、粘膜の粘液層や上皮細胞などによる、細菌が腸
粘膜を透過することを物理的に抑制する機構をいう。
・分泌型ＩｇＡ・貧食系細胞などが関与する、腸管周辺
に特有の免疫機構である。また腸管バリアの解剖学的機
構とは、粘膜の粘液層や上皮細胞などによる、細菌が腸
粘膜を透過することを物理的に抑制する機構をいう。
【０００６】具体的には例えば、細胞表層には、細胞膜
の一部として構成される、蛋白、糖脂質、グリコサミノ
グリカン類等の糖質複合体が存在する。これは糖衣若し
くはグリコカリックスと呼ばれる。これらが発達するこ
とにより、細菌の接触と攻撃を物理的に防ぎ、粘膜細胞
の腸管バリアの能力を向上させ、上皮細胞の壊死・脱落
の頻度を低下させ生体への負担を低下させる。
の一部として構成される、蛋白、糖脂質、グリコサミノ
グリカン類等の糖質複合体が存在する。これは糖衣若し
くはグリコカリックスと呼ばれる。これらが発達するこ
とにより、細菌の接触と攻撃を物理的に防ぎ、粘膜細胞
の腸管バリアの能力を向上させ、上皮細胞の壊死・脱落
の頻度を低下させ生体への負担を低下させる。
【０００７】細菌が腸管バリアを越えて生体内に侵襲す
ることを、バクテリアル・トランスロケーション（ＢＴ
Ｌ）と呼ぶ。ＢＴＬの経路には、リンパ系と血管の２つ
の経路が考えられる。しかし、多くの動物実験、臨床研
究からリンパ系がおもな経路と考えられている。粘膜障
害が軽度な、細菌の異常増殖により発生したＢＴＬの場
合は細菌がリンパ路に入るが、出血性ショック等の大き
な侵襲を伴なうＢＴＬの場合は細菌が直接血中に入る経
路も加わると考えられる。リンパ行性ＢＴＬにおいて細
菌の侵襲が腸間膜リンパ節までのみである場合、それだ
けでは重篤な病態を示すことはない。しかし、腸間膜リ
ンパ節（以下ＭＬＮと略す。）まで細菌が侵襲した後、
腸間膜リンパ節において細菌を処理しきれなくなった場
合、細菌は血管系や臓器をさらに侵襲し、重篤な疾病が
惹起される。そのため、腸間膜リンパ節へのＢＴＬの抑
制がＢＴＬを原因とした疾病の予防に繋がる。
ることを、バクテリアル・トランスロケーション（ＢＴ
Ｌ）と呼ぶ。ＢＴＬの経路には、リンパ系と血管の２つ
の経路が考えられる。しかし、多くの動物実験、臨床研
究からリンパ系がおもな経路と考えられている。粘膜障
害が軽度な、細菌の異常増殖により発生したＢＴＬの場
合は細菌がリンパ路に入るが、出血性ショック等の大き
な侵襲を伴なうＢＴＬの場合は細菌が直接血中に入る経
路も加わると考えられる。リンパ行性ＢＴＬにおいて細
菌の侵襲が腸間膜リンパ節までのみである場合、それだ
けでは重篤な病態を示すことはない。しかし、腸間膜リ
ンパ節（以下ＭＬＮと略す。）まで細菌が侵襲した後、
腸間膜リンパ節において細菌を処理しきれなくなった場
合、細菌は血管系や臓器をさらに侵襲し、重篤な疾病が
惹起される。そのため、腸間膜リンパ節へのＢＴＬの抑
制がＢＴＬを原因とした疾病の予防に繋がる。
【０００８】畜肉動物にＢＴＬが発生した場合、可食部
の汚染につながって食中毒などの原因となりうるばかり
でなく、正常な育成が阻害され生産性の低下が発生す
る。
の汚染につながって食中毒などの原因となりうるばかり
でなく、正常な育成が阻害され生産性の低下が発生す
る。
【０００９】ＢＴＬが発生したヒト又は動物に対する従
来の治療法としては、抗生物質、ワクチン、インターフ
ェロンなどの投与等が挙げられる。しかし、抗生物質投
与は、耐性菌の出現、副作用などの問題を起こす。ワク
チンは、その効果が個々の感染菌に対する特異的な作用
機構に基づくものであるため、ワクチンの投与によりＢ
ＴＬを抑制するには、すべての感染菌に対するワクチン
を投与する必要がある。インターフェロンは高価である
ため、ヒトに対しては使用しうるが、畜肉動物について
は経済性の観点から使用しがたい。
来の治療法としては、抗生物質、ワクチン、インターフ
ェロンなどの投与等が挙げられる。しかし、抗生物質投
与は、耐性菌の出現、副作用などの問題を起こす。ワク
チンは、その効果が個々の感染菌に対する特異的な作用
機構に基づくものであるため、ワクチンの投与によりＢ
ＴＬを抑制するには、すべての感染菌に対するワクチン
を投与する必要がある。インターフェロンは高価である
ため、ヒトに対しては使用しうるが、畜肉動物について
は経済性の観点から使用しがたい。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、簡便
且つ効果的にＢＴＬを抑制する薬剤、及び簡便且つ効果
的なＢＴＬ抑制方法を提供することにある。
且つ効果的にＢＴＬを抑制する薬剤、及び簡便且つ効果
的なＢＴＬ抑制方法を提供することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、バチル
ス・ズブチリスの生菌体を有効成分として含むＢＴＬ抑
制剤が提供される。
ス・ズブチリスの生菌体を有効成分として含むＢＴＬ抑
制剤が提供される。
【００１２】また、本発明によれば、前記バチルス・ズ
ブチリスがバチルス・ズブチリスＣ−３１０２（生命工
学工業技術研究所寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９６）
であることを特徴とする前記ＢＴＬ抑制剤が提供され
る。
ブチリスがバチルス・ズブチリスＣ−３１０２（生命工
学工業技術研究所寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９６）
であることを特徴とする前記ＢＴＬ抑制剤が提供され
る。
【００１３】さらに、本発明によれば、前記バチルス・
ズブチリスＣ−３１０２が、染色体ＤＮＡを抽出・精製
して配列１および配列２のプライマーを用いてＰＣＲ処
理することにより、約７００ｂｐｓの断片を生成するこ
とを特徴とする前記ＢＴＬ抑制剤が提供される。
ズブチリスＣ−３１０２が、染色体ＤＮＡを抽出・精製
して配列１および配列２のプライマーを用いてＰＣＲ処
理することにより、約７００ｂｐｓの断片を生成するこ
とを特徴とする前記ＢＴＬ抑制剤が提供される。
【００１４】さらに、本発明によれば、前記ＢＴＬ抑制
剤を経口投与するＢＴＬ抑制方法が提供される。
剤を経口投与するＢＴＬ抑制方法が提供される。
【００１５】
【発明の実施の形態】本発明のＢＴＬ抑制剤は、バチル
ス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ）の生菌体を有効成分として含む。
ス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ）の生菌体を有効成分として含む。
【００１６】バチルス・ズブチリスの菌学的性質はバー
ジーズ・マニュアル・オブ・バクテリオロジー Ｖｏ
ｌ．１１（１９８６）等に記載されている。前記生菌体
としては、具体的には例えば以下の特徴を有するものを
用いることができる。 （１）グラム陽性 （２）卵円形の芽胞を形成 （３）桿菌 （４）運動性：あり （５）好気性 （６）カタラーゼ：陽性 （７）５０℃における発育：＋ （８）ｐＨ５．７における発育：＋ （９）クエン酸塩の利用：＋ （１０）糖類からの酸生成の有無：アラビノース、グル
コース、キシロース、マンニット：＋ （１１）ＶＰ反応：＋ （１２）デンプンの加水分解：＋ （１３）硝酸塩の還元性：＋ （１４）インドールの生成：− （１５）ゼラチンの加水分解：＋ （１６）カゼインの加水分解：＋ （１７）液体培地での被膜形成：＋ （１８）牛乳の凝固：− （１９）牛乳のペプトン化：＋ バチルス・ズブチリスのＢＴＬ抑制作用は菌株によって
多少の差異がある。本発明のＢＴＬ抑制剤の有効成分を
与えるバチルス・ズブチリスの菌株としては、バチルス
・ズブチリスＣ−３１０２（生命工学工業技術研究所寄
託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９６、寄託日１９８５年
１２月２５日）を好ましく挙げることができる。
ジーズ・マニュアル・オブ・バクテリオロジー Ｖｏ
ｌ．１１（１９８６）等に記載されている。前記生菌体
としては、具体的には例えば以下の特徴を有するものを
用いることができる。 （１）グラム陽性 （２）卵円形の芽胞を形成 （３）桿菌 （４）運動性：あり （５）好気性 （６）カタラーゼ：陽性 （７）５０℃における発育：＋ （８）ｐＨ５．７における発育：＋ （９）クエン酸塩の利用：＋ （１０）糖類からの酸生成の有無：アラビノース、グル
コース、キシロース、マンニット：＋ （１１）ＶＰ反応：＋ （１２）デンプンの加水分解：＋ （１３）硝酸塩の還元性：＋ （１４）インドールの生成：− （１５）ゼラチンの加水分解：＋ （１６）カゼインの加水分解：＋ （１７）液体培地での被膜形成：＋ （１８）牛乳の凝固：− （１９）牛乳のペプトン化：＋ バチルス・ズブチリスのＢＴＬ抑制作用は菌株によって
多少の差異がある。本発明のＢＴＬ抑制剤の有効成分を
与えるバチルス・ズブチリスの菌株としては、バチルス
・ズブチリスＣ−３１０２（生命工学工業技術研究所寄
託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９６、寄託日１９８５年
１２月２５日）を好ましく挙げることができる。
【００１７】バチルス・ズブチリスＣ−３１０２は下記
配列１及び配列２のＰＣＲプライマーを用いてＰＣＲ反
応を行うと約７００ｂｐｓの断片が増幅するという特徴
を持つ。配列１および配列２のプライマーは、本来バチ
ルス・アミロリキファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑ
ｕｅｆａｃｉｅｎｓ）のアミラーゼをコードするＤＮＡ
を増幅するプライマーとして開発されたもので、他のバ
チルス・ズブチリスでは、このＰＣＲプライマーによっ
ては増幅は起こらない。バチルス・ズブチリスＣ−３１
０２で増殖された約７００ｂｐｓの断片は、アミラーゼ
の配列と相同していないという特徴をもち、他のバチル
ス・ズブチリスと明確に識別される。 配列１：５’−ＧＣＣＣＣＧＣＡＣＡＴＡＣＧＡＡＡＡ
ＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＡ−３’ 配列２：５’−ＧＧＡＴＣＣＣＡＣＧＴＴＧＴＧＡＴＴ
ＡＡＡＡＧＣＡＧＣＧＡＴ−３’ 前記バチルス・ズブチリスは、培地として微生物培養に
通常使用される炭素源、窒素源、無機物等を含む液体培
地又は固体培地を用いて培養することができる。炭素源
としては、バチルス・ズブチリスが資化可能な炭素源で
あればよく、例えばグルコース、フルクトース、スクロ
ース、スターチ、糖蜜等を、また窒素源としては、例え
ばペプトン、カゼイン加水分解物、肉エキス、硫安等を
挙げることができる。更に、必要に応じて燐酸、カリウ
ム、マグネシウム、カルシウム、ナトリウム、鉄および
マンガン等の塩類、ビタミン類、アミノ酸類、界面活性
剤等を添加することもできる。培養条件としては、好気
的条件が好ましく、培養装置としては例えばジャーファ
ーメンターによる通気撹拌液体培養、棚式固体培養、自
動製麹培養装置等が好ましく、培養温度は２０〜５０
℃、特に３０〜４５℃が好ましく、培養時間は１２時間
〜７日間とすることができ、培養初発ｐＨはｐＨ５〜
９、特に好ましくはｐＨ６〜８とすることができる。
配列１及び配列２のＰＣＲプライマーを用いてＰＣＲ反
応を行うと約７００ｂｐｓの断片が増幅するという特徴
を持つ。配列１および配列２のプライマーは、本来バチ
ルス・アミロリキファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑ
ｕｅｆａｃｉｅｎｓ）のアミラーゼをコードするＤＮＡ
を増幅するプライマーとして開発されたもので、他のバ
チルス・ズブチリスでは、このＰＣＲプライマーによっ
ては増幅は起こらない。バチルス・ズブチリスＣ−３１
０２で増殖された約７００ｂｐｓの断片は、アミラーゼ
の配列と相同していないという特徴をもち、他のバチル
ス・ズブチリスと明確に識別される。 配列１：５’−ＧＣＣＣＣＧＣＡＣＡＴＡＣＧＡＡＡＡ
ＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＡ−３’ 配列２：５’−ＧＧＡＴＣＣＣＡＣＧＴＴＧＴＧＡＴＴ
ＡＡＡＡＧＣＡＧＣＧＡＴ−３’ 前記バチルス・ズブチリスは、培地として微生物培養に
通常使用される炭素源、窒素源、無機物等を含む液体培
地又は固体培地を用いて培養することができる。炭素源
としては、バチルス・ズブチリスが資化可能な炭素源で
あればよく、例えばグルコース、フルクトース、スクロ
ース、スターチ、糖蜜等を、また窒素源としては、例え
ばペプトン、カゼイン加水分解物、肉エキス、硫安等を
挙げることができる。更に、必要に応じて燐酸、カリウ
ム、マグネシウム、カルシウム、ナトリウム、鉄および
マンガン等の塩類、ビタミン類、アミノ酸類、界面活性
剤等を添加することもできる。培養条件としては、好気
的条件が好ましく、培養装置としては例えばジャーファ
ーメンターによる通気撹拌液体培養、棚式固体培養、自
動製麹培養装置等が好ましく、培養温度は２０〜５０
℃、特に３０〜４５℃が好ましく、培養時間は１２時間
〜７日間とすることができ、培養初発ｐＨはｐＨ５〜
９、特に好ましくはｐＨ６〜８とすることができる。
【００１８】以上の手段等により得られた培養物は、そ
れ自体を本発明のＢＴＬ抑制剤とすることができる。ま
た、前記培養物の濃縮物、前記培養物から菌体を分離し
たもの、又はこれらに賦形剤等を加えて乾燥粉末、顆
粒、錠剤等の製剤としたもの等も、本発明のＢＴＬ抑制
剤として用いることができる。前記賦形剤は特に限定さ
れないが、炭酸カルシウム、コーングリッツ、コーンフ
ラワー、脱脂米糠、ふすま、脱脂粉乳等を用いることが
できる。
れ自体を本発明のＢＴＬ抑制剤とすることができる。ま
た、前記培養物の濃縮物、前記培養物から菌体を分離し
たもの、又はこれらに賦形剤等を加えて乾燥粉末、顆
粒、錠剤等の製剤としたもの等も、本発明のＢＴＬ抑制
剤として用いることができる。前記賦形剤は特に限定さ
れないが、炭酸カルシウム、コーングリッツ、コーンフ
ラワー、脱脂米糠、ふすま、脱脂粉乳等を用いることが
できる。
【００１９】本発明のＢＴＬ抑制剤は、バチルス・ズブ
チリス生菌体、即ち芽胞及び／又は栄養細胞を１０６〜
１０１１個／ｇ含有することが好ましい。
チリス生菌体、即ち芽胞及び／又は栄養細胞を１０６〜
１０１１個／ｇ含有することが好ましい。
【００２０】本発明のＢＴＬ抑制剤の投与対象は、特に
限定されないが、牛・豚・ニワトリ等の畜肉動物、及び
ヒト等を挙げることができる。特に、これらの投与対象
のうち、腸管内細菌の異常増殖・宿主免疫能低下・絨毛
萎縮など解剖学的腸管粘膜障害など、ＢＴＬの発生のリ
スクがあるもの等が挙げられる。
限定されないが、牛・豚・ニワトリ等の畜肉動物、及び
ヒト等を挙げることができる。特に、これらの投与対象
のうち、腸管内細菌の異常増殖・宿主免疫能低下・絨毛
萎縮など解剖学的腸管粘膜障害など、ＢＴＬの発生のリ
スクがあるもの等が挙げられる。
【００２１】本発明のＢＴＬ抑制剤を投与する形態とし
ては、特に限定されないが液体、粉末、造粒物、錠剤等
とすることができる。特に投与対象がヒトである場合、
錠剤又は造粒物が、簡便に投与でき好ましい。また、投
与経路は、特に限定されないが経口投与等とすることが
できる。特に畜肉動物においては、形態を粉末として、
飼料へ混合することにより経口投与することが、取り扱
いが手やすく好ましい。
ては、特に限定されないが液体、粉末、造粒物、錠剤等
とすることができる。特に投与対象がヒトである場合、
錠剤又は造粒物が、簡便に投与でき好ましい。また、投
与経路は、特に限定されないが経口投与等とすることが
できる。特に畜肉動物においては、形態を粉末として、
飼料へ混合することにより経口投与することが、取り扱
いが手やすく好ましい。
【００２２】本発明のＢＴＬ阻害剤の投与量は、バチル
ス・ズブチリス生菌体として１０６〜１０１１個／日、
特に１０８〜１０１０個／日となることが望ましい。特
に畜肉動物においては、粉末化したＢＴＬ阻害剤を、生
菌数として１０３〜１０９個／ｇ、特に１０４〜１０７
個／ｇとなるように飼料に添加して投与するのが好まし
い。投与量を１０６個／日以上とすることにより十分な
効果を得ることができ、１０１１個／日以下とすること
により、効率的にＢＴＬ抑制効果を得ることができる。
ス・ズブチリス生菌体として１０６〜１０１１個／日、
特に１０８〜１０１０個／日となることが望ましい。特
に畜肉動物においては、粉末化したＢＴＬ阻害剤を、生
菌数として１０３〜１０９個／ｇ、特に１０４〜１０７
個／ｇとなるように飼料に添加して投与するのが好まし
い。投与量を１０６個／日以上とすることにより十分な
効果を得ることができ、１０１１個／日以下とすること
により、効率的にＢＴＬ抑制効果を得ることができる。
【００２３】
【発明の効果】本発明のＢＴＬ抑制剤は、投与対象の腸
管バリアの機能を増強し、腸管内の有害細菌が腸管膜リ
ンパ節へ侵襲することを抑制することができ、結果とし
ていわゆる日和見感染や、多臓器不全・敗血症などを予
防することができる。ヒトに投与することによって、ヒ
トの健康に貢献することができ、また、畜肉動物に投与
することによって、それらの汚染を防止して安全な食肉
を提供することができる。
管バリアの機能を増強し、腸管内の有害細菌が腸管膜リ
ンパ節へ侵襲することを抑制することができ、結果とし
ていわゆる日和見感染や、多臓器不全・敗血症などを予
防することができる。ヒトに投与することによって、ヒ
トの健康に貢献することができ、また、畜肉動物に投与
することによって、それらの汚染を防止して安全な食肉
を提供することができる。
【００２４】
【実施例】以下実施例及び比較例により更に詳細に説明
するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２５】
【実施例１】５週齢より１週間の予備飼育によって腸内
フローラを揃えた６週齢のマウス（系統名：ＩＣＲ、
雄）１８匹を対照区（１０匹）及び摂取区（８匹）の２
群に分け、対照区には日本クレア製飼料（ＣＥ−２）を
与え、摂取区には同飼料にバチルス・ズブチリスＣ−３
１０２（生命工学工業技術研究所寄託番号ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−１０９６）３×１０７ＣＦＵ／ｇを添加したものを
与えた。両群のマウスに、給与１４日目より、飲用水と
してペニシリン０．８ｍｇ／ｍｌ、ストレプトマイシン
２ｍｇ／ｍｌを含む水を与えることにより、抗生物質を
投与した。抗生物質投与開始３日目に、糞便を鏡検し腸
内菌が排除されたことを確認した後、ストレプトマイシ
ン耐性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｃ２５ ＡＴＣＣ寄託番
号ＰＴＡ−１８９６ 寄託日２０００年５月１９日）を
１０８ＣＦＵ／匹投与し、その後は飲用水としてストレ
プトマイシンのみを含む水を与えた。ストレプトマイシ
ン耐性大腸菌投与から４日後に、実施例１と同様の操作
でマウスを屠殺解体し、ＭＬＮと盲腸における菌数を測
定した。
フローラを揃えた６週齢のマウス（系統名：ＩＣＲ、
雄）１８匹を対照区（１０匹）及び摂取区（８匹）の２
群に分け、対照区には日本クレア製飼料（ＣＥ−２）を
与え、摂取区には同飼料にバチルス・ズブチリスＣ−３
１０２（生命工学工業技術研究所寄託番号ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−１０９６）３×１０７ＣＦＵ／ｇを添加したものを
与えた。両群のマウスに、給与１４日目より、飲用水と
してペニシリン０．８ｍｇ／ｍｌ、ストレプトマイシン
２ｍｇ／ｍｌを含む水を与えることにより、抗生物質を
投与した。抗生物質投与開始３日目に、糞便を鏡検し腸
内菌が排除されたことを確認した後、ストレプトマイシ
ン耐性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｃ２５ ＡＴＣＣ寄託番
号ＰＴＡ−１８９６ 寄託日２０００年５月１９日）を
１０８ＣＦＵ／匹投与し、その後は飲用水としてストレ
プトマイシンのみを含む水を与えた。ストレプトマイシ
ン耐性大腸菌投与から４日後に、実施例１と同様の操作
でマウスを屠殺解体し、ＭＬＮと盲腸における菌数を測
定した。
【００２６】盲腸中菌数は大きな差がないにもかかわら
ず、摂取区のＭＬＮ菌数は、対照区の４９％と、顕著に
減少していた。
ず、摂取区のＭＬＮ菌数は、対照区の４９％と、顕著に
減少していた。
【００２７】
【表１】
【００２８】（菌数の測定方法）マウスを、頚椎脱臼に
より屠殺し、７０％アルコールを噴霧した後、腹部外皮
を切開し、腹膜を再度７０％アルコールで消毒した後、
腹膜を切開し、ＭＬＮ及び盲腸を採取した。この際、使
用する手術器具は、切開部位がかわる毎に、１００％ア
ルコールに浸漬した後、火炎滅菌して使用した。
より屠殺し、７０％アルコールを噴霧した後、腹部外皮
を切開し、腹膜を再度７０％アルコールで消毒した後、
腹膜を切開し、ＭＬＮ及び盲腸を採取した。この際、使
用する手術器具は、切開部位がかわる毎に、１００％ア
ルコールに浸漬した後、火炎滅菌して使用した。
【００２９】採取したＭＬＮを、１ｍｌのＢＨＩ液体培
地中でホモゲナイズし、ストレプトマイシン入りＤＨＬ
培地３枚に０．２ｍｌずつ塗布して３７℃で２０時間培
養した。出現したコロニー数から、ＭＬＮ１個あたりの
菌数を算出した。
地中でホモゲナイズし、ストレプトマイシン入りＤＨＬ
培地３枚に０．２ｍｌずつ塗布して３７℃で２０時間培
養した。出現したコロニー数から、ＭＬＮ１個あたりの
菌数を算出した。
【００３０】また、採取した盲腸に、鋏で切れ目を入
れ、これをガラスビーズと１０ｍｌのＢＨＩ液体培地の
入った５０ｍｌ容試験管にとり、盲腸内容物を含む盲腸
重量を測定した後、激しく攪拌して内容物を懸濁した。
懸濁物をＰＢＳ（−）（商品名、株式会社ローマン工業
社製、９．５７ｍＭ）で１００倍希釈する操作を３回繰
り返すことにより１００万倍に希釈し、最終希釈液を
０．１ｍｌずつストレプトマイシン入りＤＨＬ培地３枚
に塗布して３７℃で２０時間培養した。出現したコロニ
ー数から、盲腸内容物あたりの菌数を算出した。
れ、これをガラスビーズと１０ｍｌのＢＨＩ液体培地の
入った５０ｍｌ容試験管にとり、盲腸内容物を含む盲腸
重量を測定した後、激しく攪拌して内容物を懸濁した。
懸濁物をＰＢＳ（−）（商品名、株式会社ローマン工業
社製、９．５７ｍＭ）で１００倍希釈する操作を３回繰
り返すことにより１００万倍に希釈し、最終希釈液を
０．１ｍｌずつストレプトマイシン入りＤＨＬ培地３枚
に塗布して３７℃で２０時間培養した。出現したコロニ
ー数から、盲腸内容物あたりの菌数を算出した。
【００３１】
【実施例２】５週齢より１週間の予備飼育によって腸内
フローラを揃えた６週齢のマウス（系統名：ＩＣＲ、
雄）３０匹を対照区（１５匹）及び摂取区（１５匹）の
２群に分け、対照区には日本クレア製飼料（ＣＥ−２）
を与え、摂取区には同飼料にバチルス・ズブチリスＣ−
３１０２（生命工学工業技術研究所寄託番号ＦＥＲＭＢ
Ｐ−１０９６）３×１０７ＣＦＵ／ｇを添加したものを
与えた。両群のマウスに、給与１４日目より、飲用水と
してペニシリン０．８ｍｇ／ｍｌ、ストレプトマイシン
２ｍｇ／ｍｌを含む水を与えることにより、抗生物質を
投与した。抗生物質投与開始３日目に、糞便を鏡検し腸
内菌が排除されたことを確認した後、実施例１で用いた
ものと同一のストレプトマイシン耐性大腸菌を１０８Ｃ
ＦＵ／匹投与し、その後は飲用水としてストレプトマイ
シンのみを含む水を与えた。ストレプトマイシン耐性大
腸菌投与から４日後に、実施例１と同様の操作でマウス
を屠殺解体し、ＭＬＮと盲腸における菌数を測定した。
フローラを揃えた６週齢のマウス（系統名：ＩＣＲ、
雄）３０匹を対照区（１５匹）及び摂取区（１５匹）の
２群に分け、対照区には日本クレア製飼料（ＣＥ−２）
を与え、摂取区には同飼料にバチルス・ズブチリスＣ−
３１０２（生命工学工業技術研究所寄託番号ＦＥＲＭＢ
Ｐ−１０９６）３×１０７ＣＦＵ／ｇを添加したものを
与えた。両群のマウスに、給与１４日目より、飲用水と
してペニシリン０．８ｍｇ／ｍｌ、ストレプトマイシン
２ｍｇ／ｍｌを含む水を与えることにより、抗生物質を
投与した。抗生物質投与開始３日目に、糞便を鏡検し腸
内菌が排除されたことを確認した後、実施例１で用いた
ものと同一のストレプトマイシン耐性大腸菌を１０８Ｃ
ＦＵ／匹投与し、その後は飲用水としてストレプトマイ
シンのみを含む水を与えた。ストレプトマイシン耐性大
腸菌投与から４日後に、実施例１と同様の操作でマウス
を屠殺解体し、ＭＬＮと盲腸における菌数を測定した。
【００３２】盲腸中菌数は大きな差がないにもかかわら
ず、摂取区のＭＬＮ菌数は、対照区の６２％と、顕著に
減少し、危険率５％で統計的に有意な差があった。
ず、摂取区のＭＬＮ菌数は、対照区の６２％と、顕著に
減少し、危険率５％で統計的に有意な差があった。
【００３３】
【表２】
【００３４】
【実施例３】５週齢より１週間の予備飼育によって腸内
フローラを揃えた６週齢のマウス（系統名：ＩＣＲ、
雄）３９匹をＢＴＬ対照区（１８匹）、ＢＴＬ摂取区
（１７匹）、健常対照区（２匹）及び健常摂取区（２
匹）の４群に分け、ＢＴＬ対照区及び健常対照区には日
本クレア製飼料（ＣＥ−２）を与え、ＢＴＬ摂取区及び
健常摂取区には同飼料にバチルス・ズブチリスＣ−３１
０２（生命工学工業技術研究所寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ
−１０９６）３×１０７ＣＦＵ／ｇを添加したものを与
えた。ＢＴＬ対照区及びＢＴＬ摂取区のマウスに、給与
１４日目より、飲用水としてペニシリン０．８ｍｇ／ｍ
ｌ及びストレプトマイシン２．０ｍｇ／ｍｌを含む水を
与えることにより、抗生物質を投与した。抗生物質投与
開始３日目に、糞便を鏡検し腸内菌が排除されたことを
確認した後、実施例１で用いたものと同一のストレプト
マイシン耐性大腸菌を０．６３×１０８ＣＦＵ／匹投与
し、その後は飲用水としてストレプトマイシンのみを含
む水を与えた。ストレプトマイシン耐性大腸菌投与から
４日後に、マウスを屠殺解体した。健常対照区及び健常
区のマウスは、抗生物質及びストレプトマイシン耐性大
腸菌を投与せず、ＢＴＬ対照区及びＢＴＬ摂取区と同日
に屠殺解体した。回腸及び盲腸を採取し、１０容量％ホ
ルマリン緩衝液（ｐＨ７．２）に固定した。その後、常
法に従って、パラフィン包理し、５μｍの厚さに切片を
作製して、ヘマトキシリン・エオシン染色及びＰＡＳ染
色を施し、光学顕微鏡で観察した。
フローラを揃えた６週齢のマウス（系統名：ＩＣＲ、
雄）３９匹をＢＴＬ対照区（１８匹）、ＢＴＬ摂取区
（１７匹）、健常対照区（２匹）及び健常摂取区（２
匹）の４群に分け、ＢＴＬ対照区及び健常対照区には日
本クレア製飼料（ＣＥ−２）を与え、ＢＴＬ摂取区及び
健常摂取区には同飼料にバチルス・ズブチリスＣ−３１
０２（生命工学工業技術研究所寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ
−１０９６）３×１０７ＣＦＵ／ｇを添加したものを与
えた。ＢＴＬ対照区及びＢＴＬ摂取区のマウスに、給与
１４日目より、飲用水としてペニシリン０．８ｍｇ／ｍ
ｌ及びストレプトマイシン２．０ｍｇ／ｍｌを含む水を
与えることにより、抗生物質を投与した。抗生物質投与
開始３日目に、糞便を鏡検し腸内菌が排除されたことを
確認した後、実施例１で用いたものと同一のストレプト
マイシン耐性大腸菌を０．６３×１０８ＣＦＵ／匹投与
し、その後は飲用水としてストレプトマイシンのみを含
む水を与えた。ストレプトマイシン耐性大腸菌投与から
４日後に、マウスを屠殺解体した。健常対照区及び健常
区のマウスは、抗生物質及びストレプトマイシン耐性大
腸菌を投与せず、ＢＴＬ対照区及びＢＴＬ摂取区と同日
に屠殺解体した。回腸及び盲腸を採取し、１０容量％ホ
ルマリン緩衝液（ｐＨ７．２）に固定した。その後、常
法に従って、パラフィン包理し、５μｍの厚さに切片を
作製して、ヘマトキシリン・エオシン染色及びＰＡＳ染
色を施し、光学顕微鏡で観察した。
【００３５】各区の回腸及び盲腸の粘膜上皮細胞の壊死
及び剥離・脱落、並びに固有層の細胞浸潤について、無
を０、少数を１、中等度を２、多数を３としてスコア化
した平均点を求め、さらにＢＴＬ摂取区及びＢＴＬ対照
区においては偏差を求めた。結果を表３に示す。
及び剥離・脱落、並びに固有層の細胞浸潤について、無
を０、少数を１、中等度を２、多数を３としてスコア化
した平均点を求め、さらにＢＴＬ摂取区及びＢＴＬ対照
区においては偏差を求めた。結果を表３に示す。
【００３６】
【表３】
【００３７】ＢＴＬを強く惹起させたＢＴＬ摂取区及び
ＢＴＬ対照区とを対比すると、本発明のＢＴＬ抑制剤を
投与したＢＴＬ摂取区では、投与しなかったＢＴＬ対照
区に比べて、粘膜上皮細胞の壊死、剥離・脱落、及び固
有層の細胞浸潤が少なかった。ことに回腸の壊死及び盲
腸の剥離・脱落では、危険率５％の有意差が見られた。
健常摂取区でも、健常対照区に比べて、粘膜上皮細胞の
壊死、剥離・脱落、及び固有層の細胞浸潤が少なかっ
た。
ＢＴＬ対照区とを対比すると、本発明のＢＴＬ抑制剤を
投与したＢＴＬ摂取区では、投与しなかったＢＴＬ対照
区に比べて、粘膜上皮細胞の壊死、剥離・脱落、及び固
有層の細胞浸潤が少なかった。ことに回腸の壊死及び盲
腸の剥離・脱落では、危険率５％の有意差が見られた。
健常摂取区でも、健常対照区に比べて、粘膜上皮細胞の
壊死、剥離・脱落、及び固有層の細胞浸潤が少なかっ
た。
【００３８】なお、ＢＴＬ摂取区及び対照区よりも、健
常摂取区及び健常対照区において、粘膜上皮細胞の壊死
及び剥離・脱落並びに固有層の好中球とリンパ球の浸潤
が多く見られた。ＢＴＬ対照区及びＢＴＬ摂取区におい
ては、抗生物質の作用で腸管に発生した障害が、回復し
た時期に観察したためと思われる。
常摂取区及び健常対照区において、粘膜上皮細胞の壊死
及び剥離・脱落並びに固有層の好中球とリンパ球の浸潤
が多く見られた。ＢＴＬ対照区及びＢＴＬ摂取区におい
ては、抗生物質の作用で腸管に発生した障害が、回復し
た時期に観察したためと思われる。
【００３９】健常対照区及び健常摂取区の回腸の顕微鏡
写真をそれぞれ図１及び図３に示し、健常対照区及び健
常摂取区の盲腸の顕微鏡写真をそれぞれ図５及び図７に
示す。さらに、図１、３、５及び７中に観察される粘膜
上皮細胞の壊死及び剥離・脱落、並びに固有層への好中
球及びリンパ球の浸潤の位置を、それぞれ図２、４、６
及び８に図示する。
写真をそれぞれ図１及び図３に示し、健常対照区及び健
常摂取区の盲腸の顕微鏡写真をそれぞれ図５及び図７に
示す。さらに、図１、３、５及び７中に観察される粘膜
上皮細胞の壊死及び剥離・脱落、並びに固有層への好中
球及びリンパ球の浸潤の位置を、それぞれ図２、４、６
及び８に図示する。
【００４０】健常対照区の回腸及び盲腸においては粘膜
上皮細胞の壊死及び剥離・脱落が顕著で、また固有層へ
の好中球及びリンパ球の浸潤が多く見られた（図１及び
図２並びに図５及び図６参照）。これに対し、健常摂取
区の回腸及び盲腸は、健常対照区よりも粘膜上皮細胞の
壊死及び剥離・脱落、並びに固有層への好中球及びリン
パ球の浸潤が少ない傾向を示し、粘膜上皮細胞表面に輪
郭が明確な厚い糖衣が観察された（図３及び図４並びに
図７及び図８参照）。これらの結果より、本発明のＢＴ
Ｌ抑制剤を投与することにより、腸管粘膜上皮細胞の壊
死及び剥離・脱落が減少し、細菌などの腸管組織への侵
入が減少し、さらには固有層への好中球及びリンパ球の
浸潤が減少することがわかる。
上皮細胞の壊死及び剥離・脱落が顕著で、また固有層へ
の好中球及びリンパ球の浸潤が多く見られた（図１及び
図２並びに図５及び図６参照）。これに対し、健常摂取
区の回腸及び盲腸は、健常対照区よりも粘膜上皮細胞の
壊死及び剥離・脱落、並びに固有層への好中球及びリン
パ球の浸潤が少ない傾向を示し、粘膜上皮細胞表面に輪
郭が明確な厚い糖衣が観察された（図３及び図４並びに
図７及び図８参照）。これらの結果より、本発明のＢＴ
Ｌ抑制剤を投与することにより、腸管粘膜上皮細胞の壊
死及び剥離・脱落が減少し、細菌などの腸管組織への侵
入が減少し、さらには固有層への好中球及びリンパ球の
浸潤が減少することがわかる。
【００４１】
【実験例１】バチルス・ズブチリス Ｃ−３１０２株、
バチルス・アミロリキファシエンスＡＴＣＣ２３３５０
株（タイプストレイン）、バチルス・アミロリキファシ
エンスＩＦＯ１４１４１株、バチルス・アミロリキファ
シエンスＩＦＯ３０２２株、バチルス・ズブチリスＩＦ
Ｏ３００９株、バチルス・ズブチリスＩＦＯ１２１１２
株、バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ９３７２株及びバチ
ルス・ズブチリスＡＴＣＣ６０５１株（タイプストレイ
ン）の８種類の株を、それぞれ１０ｍｌのＴＳ培地で一
晩培養し、集菌・洗浄した。
バチルス・アミロリキファシエンスＡＴＣＣ２３３５０
株（タイプストレイン）、バチルス・アミロリキファシ
エンスＩＦＯ１４１４１株、バチルス・アミロリキファ
シエンスＩＦＯ３０２２株、バチルス・ズブチリスＩＦ
Ｏ３００９株、バチルス・ズブチリスＩＦＯ１２１１２
株、バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ９３７２株及びバチ
ルス・ズブチリスＡＴＣＣ６０５１株（タイプストレイ
ン）の８種類の株を、それぞれ１０ｍｌのＴＳ培地で一
晩培養し、集菌・洗浄した。
【００４２】培養したそれぞれの菌株の染色体ＤＮＡ
を、酵母・グラム陽性菌用ＤＮＡ調製キット「Ｇｅｎと
るくん」（宝酒造製）を用いて抽出・精製し、染色体Ｄ
ＮＡ溶液を得た。抽出・精製は、真空乾燥後の染色体Ｄ
ＮＡペレットを２０μｌのＴＥ緩衝液で溶解した他は、
ＤＮＡ調製キットの取扱説明書に準じて行った。
を、酵母・グラム陽性菌用ＤＮＡ調製キット「Ｇｅｎと
るくん」（宝酒造製）を用いて抽出・精製し、染色体Ｄ
ＮＡ溶液を得た。抽出・精製は、真空乾燥後の染色体Ｄ
ＮＡペレットを２０μｌのＴＥ緩衝液で溶解した他は、
ＤＮＡ調製キットの取扱説明書に準じて行った。
【００４３】得られた染色体ＤＮＡ溶液を、表４に示す
通り他の試薬と混合し、ＰＣＲ処理用試料を調製した。
通り他の試薬と混合し、ＰＣＲ処理用試料を調製した。
【００４４】
【表４】
【００４５】表４において、「１０×ＰＣＲ緩衝液」と
しては、宝酒造社製「ＴａＫａＲａＬＡ−ＰＣＲ ｋｉ
ｔ Ｖｅｒ２」に添付されていたものを用いた。また、
プライマー１及びプライマー２としては、それぞれ、前
記配列１及び配列２により示されるものを用いた。これ
らは、バチルス・アミロリキファシエンスにおいてα−
アミラーゼをコードする約２ＫＢのＤＮＡ断片を増幅す
るものとして開発された、以下に示す配列を有するＤＮ
Ａである。 配列１：５’−ＧＣＣＣＣＧＣＡＣＡＴＡＣＧＡＡＡＡ
ＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＡ−３’ 配列２：５’−ＧＧＡＴＣＣＣＡＣＧＴＴＧＴＧＡＴＴ
ＡＡＡＡＧＣＡＧＣＧＡＴ−３’ このＰＣＲ処理用試料を、宝酒造社製「ＴａＫａＲａ
ＬＡ−ＰＣＲ ｋｉｔＶｅｒ２」及びサーマルサイクラ
ー「ＴａＫａＲａＰＣＲ ＴｈｅｒｍａｌＣｙｃｌｅｒ
ＰＥＲＳＯＮＡＬ」を用いてＰＣＲ処理し、ＰＣＲ増
幅産物を得た。ＰＣＲ処理の温度条件は、表５に示す通
りとした。
しては、宝酒造社製「ＴａＫａＲａＬＡ−ＰＣＲ ｋｉ
ｔ Ｖｅｒ２」に添付されていたものを用いた。また、
プライマー１及びプライマー２としては、それぞれ、前
記配列１及び配列２により示されるものを用いた。これ
らは、バチルス・アミロリキファシエンスにおいてα−
アミラーゼをコードする約２ＫＢのＤＮＡ断片を増幅す
るものとして開発された、以下に示す配列を有するＤＮ
Ａである。 配列１：５’−ＧＣＣＣＣＧＣＡＣＡＴＡＣＧＡＡＡＡ
ＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＡ−３’ 配列２：５’−ＧＧＡＴＣＣＣＡＣＧＴＴＧＴＧＡＴＴ
ＡＡＡＡＧＣＡＧＣＧＡＴ−３’ このＰＣＲ処理用試料を、宝酒造社製「ＴａＫａＲａ
ＬＡ−ＰＣＲ ｋｉｔＶｅｒ２」及びサーマルサイクラ
ー「ＴａＫａＲａＰＣＲ ＴｈｅｒｍａｌＣｙｃｌｅｒ
ＰＥＲＳＯＮＡＬ」を用いてＰＣＲ処理し、ＰＣＲ増
幅産物を得た。ＰＣＲ処理の温度条件は、表５に示す通
りとした。
【００４６】
【表５】
【００４７】得られたＰＣＲ増幅産物を５μｌ分取し、
１．２％アガロースゲルを用いて、水平型電気泳動ユニ
ットＭｕｐｉｄ２（アドバンス社製）で電気泳動した。
なお、分子量マーカーとしてはλ−ＤＮＡのＨｉｎｄＩ
Ｉ消化物を用いた。電気泳動の結果を図９に示す。
１．２％アガロースゲルを用いて、水平型電気泳動ユニ
ットＭｕｐｉｄ２（アドバンス社製）で電気泳動した。
なお、分子量マーカーとしてはλ−ＤＮＡのＨｉｎｄＩ
Ｉ消化物を用いた。電気泳動の結果を図９に示す。
【００４８】バチルス・アミロリキファシエンスの各株
の試料の泳動結果（レーン３，４，５）では、約２ｋｂ
の断片が増幅された。バチルス・ズブチリスＩＦＯ３０
０９株、バチルス・ズブチリスＩＦＯ１２１１２株、バ
チルス・ズブチリスＡＴＣＣ９３７２株及びバチルス・
ズブチリスＡＴＣＣ６０５１株の試料の泳動結果（レー
ン６，７，８，９）では、増幅断片は検出されなかっ
た。しかし、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株の試
料の泳動結果（レーン２）では他にはない約７００ｂｐ
の明確なバンドが確認された。
の試料の泳動結果（レーン３，４，５）では、約２ｋｂ
の断片が増幅された。バチルス・ズブチリスＩＦＯ３０
０９株、バチルス・ズブチリスＩＦＯ１２１１２株、バ
チルス・ズブチリスＡＴＣＣ９３７２株及びバチルス・
ズブチリスＡＴＣＣ６０５１株の試料の泳動結果（レー
ン６，７，８，９）では、増幅断片は検出されなかっ
た。しかし、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株の試
料の泳動結果（レーン２）では他にはない約７００ｂｐ
の明確なバンドが確認された。
【図１】実施例３における健常対照区の回腸の観察結果
を示す顕微鏡写真である。
を示す顕微鏡写真である。
【図２】図１中に観察される粘膜上皮細胞の壊死及び剥
離・脱落、並びに固有層への好中球及びリンパ球の浸潤
を説明する説明図である。
離・脱落、並びに固有層への好中球及びリンパ球の浸潤
を説明する説明図である。
【図３】実施例３における健常摂取区の回腸の観察結果
を示す顕微鏡写真である。
を示す顕微鏡写真である。
【図４】図３中に観察される粘膜上皮細胞の壊死及び剥
離・脱落、並びに固有層への好中球及びリンパ球の浸潤
を説明する説明図である。
離・脱落、並びに固有層への好中球及びリンパ球の浸潤
を説明する説明図である。
【図５】実施例３における健常対照区の盲腸の観察結果
を示す顕微鏡写真である。
を示す顕微鏡写真である。
【図６】図５中に観察される粘膜上皮細胞の壊死及び剥
離・脱落、並びに固有層への好中球及びリンパ球の浸潤
を説明する説明図である。
離・脱落、並びに固有層への好中球及びリンパ球の浸潤
を説明する説明図である。
【図７】実施例３における健常摂取区の盲腸の観察結果
を示す顕微鏡写真である。
を示す顕微鏡写真である。
【図８】図７中に観察される粘膜上皮細胞の壊死及び剥
離・脱落、並びに固有層への好中球及びリンパ球の浸潤
を説明する説明図である。
離・脱落、並びに固有層への好中球及びリンパ球の浸潤
を説明する説明図である。
【図９】実験例１における、ＰＣＲ増幅産物の電気泳動
の結果を示す泳動図である。上端の数字（１〜９）は、
レーン番号を示す。各レーンにおいては、それぞれ以下
の試料を泳動した。 レーン１ 分子量マーカー（λ−ＤＮＡＨｉｎｄＩＩ消
化物）レーン１中には６つのバンドが認められ、泳動距
離の短い３つの明るいバンドは、泳動距離の短い方から
それぞれ２３，１３０ｂｐ、９，４１６ｂｐ及び及び
６，５５７ｂｐのマーカーによるものである。続く１本
の暗いバンドは４，３６１ｂｐのマーカーによるもので
あり、それよりさらに泳動距離の長い、やや明るい２つ
のバンドは、泳動距離の短い方からそれぞれ２，３２２
ｂｐ及び２，０２７ｂｐのマーカーによるものである。 レーン２ バチルス・ズブチリス Ｃ−３１０２株由来
ＤＮＡの増幅物 レーン３ バチルス・アミロリキファシエンスＡＴＣＣ
２３３５０株（タイプストレイン）由来ＤＮＡの増幅物 レーン４ バチルス・アミロリキファシエンスＩＦＯ１
４１４１株由来ＤＮＡの増幅物 レーン５ バチルス・アミロリキファシエンスＩＦＯ３
０２２株由来ＤＮＡの増幅物 レーン６ バチルス・ズブチリスＩＦＯ３００９株由来
ＤＮＡの増幅物 レーン７ バチルス・ズブチリスＩＦＯ１２１１２株由
来ＤＮＡの増幅物 レーン８ バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ９３７２株由
来ＤＮＡの増幅物 レーン９ バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ６０５１株
（タイプストレイン）由来ＤＮＡの増幅物
の結果を示す泳動図である。上端の数字（１〜９）は、
レーン番号を示す。各レーンにおいては、それぞれ以下
の試料を泳動した。 レーン１ 分子量マーカー（λ−ＤＮＡＨｉｎｄＩＩ消
化物）レーン１中には６つのバンドが認められ、泳動距
離の短い３つの明るいバンドは、泳動距離の短い方から
それぞれ２３，１３０ｂｐ、９，４１６ｂｐ及び及び
６，５５７ｂｐのマーカーによるものである。続く１本
の暗いバンドは４，３６１ｂｐのマーカーによるもので
あり、それよりさらに泳動距離の長い、やや明るい２つ
のバンドは、泳動距離の短い方からそれぞれ２，３２２
ｂｐ及び２，０２７ｂｐのマーカーによるものである。 レーン２ バチルス・ズブチリス Ｃ−３１０２株由来
ＤＮＡの増幅物 レーン３ バチルス・アミロリキファシエンスＡＴＣＣ
２３３５０株（タイプストレイン）由来ＤＮＡの増幅物 レーン４ バチルス・アミロリキファシエンスＩＦＯ１
４１４１株由来ＤＮＡの増幅物 レーン５ バチルス・アミロリキファシエンスＩＦＯ３
０２２株由来ＤＮＡの増幅物 レーン６ バチルス・ズブチリスＩＦＯ３００９株由来
ＤＮＡの増幅物 レーン７ バチルス・ズブチリスＩＦＯ１２１１２株由
来ＤＮＡの増幅物 レーン８ バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ９３７２株由
来ＤＮＡの増幅物 レーン９ バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ６０５１株
（タイプストレイン）由来ＤＮＡの増幅物
１１：核濃縮し、壊死し、脱落した、エオシン好性染色
された部位 １２：核消失し、壊死し、脱落した部位 １３：好中球・リンパ球の浸潤した部位 ３１：細菌 ３２：脱落した部位 ５１：細菌 ５２：壊死部位 ７１：細菌
された部位 １２：核消失し、壊死し、脱落した部位 １３：好中球・リンパ球の浸潤した部位 ３１：細菌 ３２：脱落した部位 ５１：細菌 ５２：壊死部位 ７１：細菌
【配列表】〈１１０〉Ｃａｌｐｉｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 〈１２０〉Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔ
ｉｏｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄ
ｆｏｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ
Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ 〈１６０〉２ 〈２１０〉１ 〈２１１〉３０ 〈２１２〉ＤＮＡ 〈２１３〉Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆ
ａｃｉｅｎｓ 〈４００〉ｇｃｃｃｃ ｇｃａｃａ ｔａｃｇａ ａａ
ａｇａ ｃｔｇｇｃ ｔｇａａａ３０ 〈２１０〉２ 〈２１１〉３０ 〈２１２〉ＤＮＡ 〈２１３〉Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆ
ａｃｉｅｎｓ 〈４００〉ｇｇａｔｃ ｃｃａｃｇ ｔｔｇｔｇ ａｔ
ｔａａ ａａｇｃａ ｇｃｇａｔ３０
ｉｏｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄ
ｆｏｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ
Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ 〈１６０〉２ 〈２１０〉１ 〈２１１〉３０ 〈２１２〉ＤＮＡ 〈２１３〉Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆ
ａｃｉｅｎｓ 〈４００〉ｇｃｃｃｃ ｇｃａｃａ ｔａｃｇａ ａａ
ａｇａ ｃｔｇｇｃ ｔｇａａａ３０ 〈２１０〉２ 〈２１１〉３０ 〈２１２〉ＤＮＡ 〈２１３〉Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆ
ａｃｉｅｎｓ 〈４００〉ｇｇａｔｃ ｃｃａｃｇ ｔｔｇｔｇ ａｔ
ｔａａ ａａｇｃａ ｇｃｇａｔ３０
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:125） Ｃ１２Ｒ 1:125） Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA13 GA19 HA20 4B065 AA19X AC20 BA25 CA44 4C087 AA01 AA02 BC65 CA09 MA52 NA14 ZA66 ZB35
Claims (4)
- 【請求項１】 バチルス・ズブチリスの生菌体を有効成
分として含むバクテリアル・トランスロケーション抑制
剤。 - 【請求項２】 前記バチルス・ズブチリスがバチルス・
ズブチリスＣ−３１０２（生命工学工業技術研究所寄託
番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９６）であることを特徴とす
る請求項１記載のバクテリアル・トランスロケーション
抑制剤。 - 【請求項３】 前記バチルス・ズブチリスＣ−３１０２
が、染色体ＤＮＡを抽出・精製して配列１および配列２
のプライマーを用いてＰＣＲ処理することにより、約７
００ｂｐｓの断片を生成することを特徴とする請求項２
記載のバクテリアル・トランスロケーション抑制剤。 - 【請求項４】 請求項１〜３のいずれか１項記載のバク
テリアル・トランスロケーション抑制剤を経口投与する
バクテリアル・トランスロケーション抑制方法。
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