JP3040711B2 - 抗腫瘍剤及びその製造法 - Google Patents
抗腫瘍剤及びその製造法Info
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- JP3040711B2 JP3040711B2 JP8060147A JP6014796A JP3040711B2 JP 3040711 B2 JP3040711 B2 JP 3040711B2 JP 8060147 A JP8060147 A JP 8060147A JP 6014796 A JP6014796 A JP 6014796A JP 3040711 B2 JP3040711 B2 JP 3040711B2
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、抗腫瘍剤及びその
製造法に関するものである。
製造法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】現在主流となって使用されている抗腫瘍
剤は、細胞の増殖時にブロッキング剤として働く作用を
有するものがほとんどである。ＤＮＡ合成阻害作用を有
するアルキル化剤及び白金製剤、細胞の代謝時に取り込
まれて酵素類の働きを阻害する代謝拮抗剤、天然物由来
で代謝酵素や核酸類などに働きかけて抗腫瘍作用を示す
抗癌性抗生物質や植物アルカロイドなどがあげられる。
これらの薬剤のほとんどは、活発に細胞分裂を繰り返し
ている細胞に対して特異的に作用するため、正常細胞で
も比較的細胞分裂周期の速い骨髄細胞や腸管上皮細胞に
も、癌細胞と同様に薬剤が作用する。そのため、白血球
機能低下による免疫力の低下や消化管障害などの重篤な
副作用が見られる。
剤は、細胞の増殖時にブロッキング剤として働く作用を
有するものがほとんどである。ＤＮＡ合成阻害作用を有
するアルキル化剤及び白金製剤、細胞の代謝時に取り込
まれて酵素類の働きを阻害する代謝拮抗剤、天然物由来
で代謝酵素や核酸類などに働きかけて抗腫瘍作用を示す
抗癌性抗生物質や植物アルカロイドなどがあげられる。
これらの薬剤のほとんどは、活発に細胞分裂を繰り返し
ている細胞に対して特異的に作用するため、正常細胞で
も比較的細胞分裂周期の速い骨髄細胞や腸管上皮細胞に
も、癌細胞と同様に薬剤が作用する。そのため、白血球
機能低下による免疫力の低下や消化管障害などの重篤な
副作用が見られる。
【０００３】リンパ球などの免疫細胞には、腫瘍細胞を
認知し、傷害する作用があることが知られている。それ
を利用した治療法が、ＢＲＭ（Biological ResponseMod
ifiers）療法であり、細菌由来物質や多糖類などを投与
することによって、体内の免疫細胞、特にＴ細胞などの
エフェクター細胞を活発化させ、腫瘍細胞に対する障害
率を高める。これまで、レンチナン、ＯＫ−４３２、Ｐ
ＳＫ等の免疫賦活剤や、インターフェロンやインターロ
イキン等のサイトカインが使用されている。しかし、こ
れらの薬剤にも、発疹や薬剤過敏症、発熱などの副作用
がみられ、特に注射製剤ほど、副作用が出やすい傾向が
ある。
認知し、傷害する作用があることが知られている。それ
を利用した治療法が、ＢＲＭ（Biological ResponseMod
ifiers）療法であり、細菌由来物質や多糖類などを投与
することによって、体内の免疫細胞、特にＴ細胞などの
エフェクター細胞を活発化させ、腫瘍細胞に対する障害
率を高める。これまで、レンチナン、ＯＫ−４３２、Ｐ
ＳＫ等の免疫賦活剤や、インターフェロンやインターロ
イキン等のサイトカインが使用されている。しかし、こ
れらの薬剤にも、発疹や薬剤過敏症、発熱などの副作用
がみられ、特に注射製剤ほど、副作用が出やすい傾向が
ある。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】抗腫瘍剤として現在使
用されている化学療法剤は、作用機序上、必ず副作用が
出現する。一方でＢＲＭ製剤は、癌に羅患することによ
って低下する免疫能を回復させたり、腫瘍の増殖速度を
抑える作用をねらって使用されるものである。そのた
め、副作用がなく、より体内の免疫能を高め、腫瘍の増
殖を抑える効果の高い薬剤が求められている。
用されている化学療法剤は、作用機序上、必ず副作用が
出現する。一方でＢＲＭ製剤は、癌に羅患することによ
って低下する免疫能を回復させたり、腫瘍の増殖速度を
抑える作用をねらって使用されるものである。そのた
め、副作用がなく、より体内の免疫能を高め、腫瘍の増
殖を抑える効果の高い薬剤が求められている。
【０００５】
【課題を解決しようとするための手段】乳酸菌の一種で
あるエンテロコッカス属には、ＢＲＭ製剤の働き、すな
わち免疫力増強による抗腫瘍作用があることが知られて
いる（大橋ら、薬学雑誌、１１３、３９６−３９９（１
９９３））。本発明者らはこのような抗腫瘍作用のより
強い菌体又はその処理物を得るために種々検討した結
果、乳酸菌の菌体を酵素で処理して得られた菌体処理物
が、酵素非処理菌体よりもはるかに強い抗腫瘍作用を持
つことを見いだし、本発明を完成させた。
あるエンテロコッカス属には、ＢＲＭ製剤の働き、すな
わち免疫力増強による抗腫瘍作用があることが知られて
いる（大橋ら、薬学雑誌、１１３、３９６−３９９（１
９９３））。本発明者らはこのような抗腫瘍作用のより
強い菌体又はその処理物を得るために種々検討した結
果、乳酸菌の菌体を酵素で処理して得られた菌体処理物
が、酵素非処理菌体よりもはるかに強い抗腫瘍作用を持
つことを見いだし、本発明を完成させた。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明は、エンテロコッカス属に
属する乳酸菌菌体に酵素を作用させ、更に熱処理を加え
て菌体処理物を得ることを特徴とするものである。本発
明に使用される酵素は、リゾチームやキチナーゼ、Ｎ−
アセチルグルコサミニダーゼなどの溶菌酵素又は菌体表
面構造あるいは抗生物質などに対する変換又は分解酵素
であって、酵素処理によって菌体の抗腫瘍作用が増強さ
れるものであればどの酵素を使用することも可能である
が、特に有効な成績を得られるものはリゾチームであ
る。更に菌体処理条件を例示すれば、リゾチームの終濃
度１０〜３０００μｇ／ｍｌ、３７℃で１〜３時間処理
が好ましい。
属する乳酸菌菌体に酵素を作用させ、更に熱処理を加え
て菌体処理物を得ることを特徴とするものである。本発
明に使用される酵素は、リゾチームやキチナーゼ、Ｎ−
アセチルグルコサミニダーゼなどの溶菌酵素又は菌体表
面構造あるいは抗生物質などに対する変換又は分解酵素
であって、酵素処理によって菌体の抗腫瘍作用が増強さ
れるものであればどの酵素を使用することも可能である
が、特に有効な成績を得られるものはリゾチームであ
る。更に菌体処理条件を例示すれば、リゾチームの終濃
度１０〜３０００μｇ／ｍｌ、３７℃で１〜３時間処理
が好ましい。
【０００７】菌体又はその処理物を製剤するにはデンプ
ン、乳糖、大豆蛋白等の担体、賦形剤、結合剤、崩壊
剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯具剤等の添加物を用いて周
知の方法で錠剤や顆粒剤に製剤される。
ン、乳糖、大豆蛋白等の担体、賦形剤、結合剤、崩壊
剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯具剤等の添加物を用いて周
知の方法で錠剤や顆粒剤に製剤される。
【０００８】使用量は、症状、年齢等により異なるが、
有効成分として１日0.002〜0.1g/kg体重を通常成人に対
して１日１回又は数回に分けて投与することができる。
有効成分として１日0.002〜0.1g/kg体重を通常成人に対
して１日１回又は数回に分けて投与することができる。
【０００９】
【実施例】以下実施例を示すが、本発明はこれらの実施
例の記載によって何ら制限されるものではない。
例の記載によって何ら制限されるものではない。
【００１０】実施例１．（乳酸菌の培養） エンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus faecali
s）ＮＦ−１０１１（微工研菌寄第１２５６４号）を以
下に示す組成のロゴサ液体培地に接種し、（菌数：１０
6個/ml）、３７℃で１０〜１６時間培養し、生菌数約１
０9個/mlの培養液を得た。得られた培養液を12,000rpm
で２０分間遠心分離して集菌し、蒸留水で２回洗浄して
菌体を得た。
s）ＮＦ−１０１１（微工研菌寄第１２５６４号）を以
下に示す組成のロゴサ液体培地に接種し、（菌数：１０
6個/ml）、３７℃で１０〜１６時間培養し、生菌数約１
０9個/mlの培養液を得た。得られた培養液を12,000rpm
で２０分間遠心分離して集菌し、蒸留水で２回洗浄して
菌体を得た。
【００１１】ロゴサ液体培地の組成を示す。 トリプチケース １０ｇ 酵母エキス ５ｇ トリプトース ３ｇ リン酸一カリウム ３ｇ リン酸二カリウム ３ｇ クエン酸三アンモニウム ２ｇ ツイーン８０（界面活性剤） １ｇ グルコース ２０ｇ システイン塩酸塩 ０．２ｇ 塩類溶液（１のとおり） ５ｍｌ 蒸留水 １０００ｍｌ （ｐＨ７．０に調整、１２１℃で１５分間加熱滅菌） （１）塩類溶液：ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １１．５ｇ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．６８ｇ ＭｎＳＯ4・２Ｈ2Ｏ ２．４ｇ 蒸留水 １００ｍｌ
【００１２】実施例２．（酵素処理及び熱処理） 実施例１で得られた菌体：滅菌蒸留水＝１：１０（ｖ／
ｖ）の割合となるように再懸濁した。これにフィルター
滅菌した食添用卵白リゾチーム（太陽化学（株）製）を
最終濃度１００μｇ／ｍｌ量になるように添加し、３７
℃で２時間保温した。次に、この酵素処理した菌体を１
１０℃で１０分間オートクレーブによる熱処理を行い、
菌液が冷却した後に凍結乾燥機にて乾燥後、粉末標品を
得た。
ｖ）の割合となるように再懸濁した。これにフィルター
滅菌した食添用卵白リゾチーム（太陽化学（株）製）を
最終濃度１００μｇ／ｍｌ量になるように添加し、３７
℃で２時間保温した。次に、この酵素処理した菌体を１
１０℃で１０分間オートクレーブによる熱処理を行い、
菌液が冷却した後に凍結乾燥機にて乾燥後、粉末標品を
得た。
【００１３】実施例３．（熱処理） 実施例１で得られた菌体：滅菌蒸留水＝１：１０（ｖ／
ｖ）の割合になるよう懸濁した。これを１１０℃で１０
分間オートクレーブによる熱処理を行った後、１１０℃
で１０分間加熱して失活させた実施例２で使用の卵白リ
ゾチームを最終濃度１００μｇ／ｍｌ量に相当する量を
添加した。次に、凍結乾燥を行い粉末標品を得た。
ｖ）の割合になるよう懸濁した。これを１１０℃で１０
分間オートクレーブによる熱処理を行った後、１１０℃
で１０分間加熱して失活させた実施例２で使用の卵白リ
ゾチームを最終濃度１００μｇ／ｍｌ量に相当する量を
添加した。次に、凍結乾燥を行い粉末標品を得た。
【００１４】実施例４．（抗腫瘍効果） 日本ＳＬＣ社より購入したＣ３Ｈ／Ｈｅ Ｎ系マウス
（雄性、７週齢）を体重によって、実施例２で得た標品
投与群（Ａ群）、実施例３で得た標品投与群（Ｂ群）及
び対照群（Ｃ群）の３群（各々１０匹）に分けた。
（雄性、７週齢）を体重によって、実施例２で得た標品
投与群（Ａ群）、実施例３で得た標品投与群（Ｂ群）及
び対照群（Ｃ群）の３群（各々１０匹）に分けた。
【００１５】Ｃ３Ｈ／Ｈｅ Ｎ系マウス腹腔内にＭＭ４
６乳癌を移植し、１週間後、癌細胞を採取し、ＣａＣｌ
2とＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏを含まないリン酸緩衝生理的食
塩水（ＰＢＳ（−））に浮遊させ、７００ｒｐｍ、５分
の遠心操作を３回繰り返して細胞を洗浄した後、ＰＢＳ
（−）で細胞濃度を調整した。この細胞浮遊液を上記の
全群のマウス腹部皮内に生細胞数が１×１０6個／匹に
なるように移植した。
６乳癌を移植し、１週間後、癌細胞を採取し、ＣａＣｌ
2とＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏを含まないリン酸緩衝生理的食
塩水（ＰＢＳ（−））に浮遊させ、７００ｒｐｍ、５分
の遠心操作を３回繰り返して細胞を洗浄した後、ＰＢＳ
（−）で細胞濃度を調整した。この細胞浮遊液を上記の
全群のマウス腹部皮内に生細胞数が１×１０6個／匹に
なるように移植した。
【００１６】実施例２及び実施例３で得た標品をそれぞ
れ、粉末飼料（ＣＥ−２：日本クレア社）に５％量配合
して配合飼料を調製した。これをＭＭ４６乳癌細胞を移
植した次の日からそれぞれのマウス群（Ａ群及びＢ群）
に連日自由摂取させた。Ｃ群には標品を含まない粉末飼
料を与えた。
れ、粉末飼料（ＣＥ−２：日本クレア社）に５％量配合
して配合飼料を調製した。これをＭＭ４６乳癌細胞を移
植した次の日からそれぞれのマウス群（Ａ群及びＢ群）
に連日自由摂取させた。Ｃ群には標品を含まない粉末飼
料を与えた。
【００１７】癌移植後、形成された腫瘍の大きさを測定
した。癌移植後４日目から３日おきに、ノギスを用いて
長径（ａ）及び短径（ｂ）を測定し、以下の計算式によ
って腫瘍の大きさ（径）を求めた。結果を図１に示す。 腫瘍径（mm）＝（ａ×ｂ）1/2
した。癌移植後４日目から３日おきに、ノギスを用いて
長径（ａ）及び短径（ｂ）を測定し、以下の計算式によ
って腫瘍の大きさ（径）を求めた。結果を図１に示す。 腫瘍径（mm）＝（ａ×ｂ）1/2
【００１８】Ａ群及びＢ群はＣ群と比較して、癌移植後
１８日から有意に腫瘍径が小さく（危険率１％〜５％）
この効果は、癌移植後３８日まで持続した。また、Ａ群
とＢ群を比較すると、Ａ群の腫瘍径が癌移植後２５日よ
り小さくなる傾向を示した。
１８日から有意に腫瘍径が小さく（危険率１％〜５％）
この効果は、癌移植後３８日まで持続した。また、Ａ群
とＢ群を比較すると、Ａ群の腫瘍径が癌移植後２５日よ
り小さくなる傾向を示した。
【００１９】癌移植後４１日に、全マウスの腫瘍部分を
摘出し重量を測定した。結果を図２に示す。Ｃ群に対し
て、Ｂ群は危険率５％で有意な重量抑制を示した。一
方、Ａ群も危険率１％で有意に腫瘍重量の抑制を示し、
Ｂ群よりも抑制効果が高かった。
摘出し重量を測定した。結果を図２に示す。Ｃ群に対し
て、Ｂ群は危険率５％で有意な重量抑制を示した。一
方、Ａ群も危険率１％で有意に腫瘍重量の抑制を示し、
Ｂ群よりも抑制効果が高かった。
【００２０】
【発明の効果】本発明で得られた乳酸菌体の酵素処理物
は、副作用もなく、又、免疫賦活効果が高いため、腫瘍
の増殖をより効率よく抑制する。又、この菌体処理物を
既存の抗癌剤と併用することも可能である。
は、副作用もなく、又、免疫賦活効果が高いため、腫瘍
の増殖をより効率よく抑制する。又、この菌体処理物を
既存の抗癌剤と併用することも可能である。
【図１】ＭＭ４６乳癌の腫瘍径の変化を表した図であ
る。
る。
【図２】マウス１匹当たりの腫瘍重量の平均を表した図
である。
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:01） (56)参考文献 特開 平８−27010（ＪＰ，Ａ) 特開 昭56−158717（ＪＰ，Ａ) 薬学雑誌，Ｖｏｌ．113，Ｎｏ．５, （1993），ｐ．396−399 日本農芸化学会誌，Ｖｏｌ．69，Ｎ ｏ．４，（1995），ｐ．443−446 岡山雑誌，Ｖｏｌ．14，（1995）, ｐ．89−105 阪大歯学雑誌，Ｖｏｌ．39，Ｎｏ. ２，（1994），ｐ．356−377 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 35/74 A61P 35/00 C12N 1/20 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (4)
- 【請求項１】有効成分としてエンテロコッカス属に属す
る微生物を溶菌酵素など菌体に作用する酵素処理と熱処
理とをした菌体処理物である抗腫瘍剤 - 【請求項２】エンテロコッカス属に属する微生物がエン
テロコッカス・フェカリスである請求項１に記載の抗腫
瘍剤 - 【請求項３】エンテロコッカス属に属する微生物の菌体
を溶菌酵素など菌体に作用する酵素処理及び熱処理をす
ることを特徴とする抗腫瘍剤の製造法 - 【請求項４】エンテロコッカス属に属する微生物がエン
テロコッカス・フェカリスである請求項３に記載の抗腫
瘍剤の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8060147A JP3040711B2 (ja) | 1996-02-21 | 1996-02-21 | 抗腫瘍剤及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8060147A JP3040711B2 (ja) | 1996-02-21 | 1996-02-21 | 抗腫瘍剤及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09227392A JPH09227392A (ja) | 1997-09-02 |
| JP3040711B2 true JP3040711B2 (ja) | 2000-05-15 |
Family
ID=13133754
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8060147A Expired - Lifetime JP3040711B2 (ja) | 1996-02-21 | 1996-02-21 | 抗腫瘍剤及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3040711B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1054581C (zh) * | 1995-04-06 | 2000-07-19 | 本田技研工业株式会社 | 动力装置传动箱的防水结构 |
| JP2017001961A (ja) * | 2015-06-04 | 2017-01-05 | 学校法人同志社 | 生体抗酸化能賦活剤 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH1192389A (ja) * | 1997-09-17 | 1999-04-06 | Nichinichi Seiyaku Kk | 免疫賦活剤 |
| CN101796187A (zh) | 2007-07-04 | 2010-08-04 | 龟甲万株式会社 | 乳酸菌来源的双链rna |
| WO2015093546A1 (ja) * | 2013-12-18 | 2015-06-25 | 旭化成株式会社 | 乳汁中のストレプトコッカス属の菌を検出する方法 |
-
1996
- 1996-02-21 JP JP8060147A patent/JP3040711B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 岡山雑誌，Ｖｏｌ．１４，（１９９５），ｐ．８９−１０５ |
| 日本農芸化学会誌，Ｖｏｌ．６９，Ｎｏ．４，（１９９５），ｐ．４４３−４４６ |
| 薬学雑誌，Ｖｏｌ．１１３，Ｎｏ．５，（１９９３），ｐ．３９６−３９９ |
| 阪大歯学雑誌，Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．２，（１９９４），ｐ．３５６−３７７ |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1054581C (zh) * | 1995-04-06 | 2000-07-19 | 本田技研工业株式会社 | 动力装置传动箱的防水结构 |
| JP2017001961A (ja) * | 2015-06-04 | 2017-01-05 | 学校法人同志社 | 生体抗酸化能賦活剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH09227392A (ja) | 1997-09-02 |
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