JP2002142799A - 高密度リポタンパク質（ｈｄｌ）コレステロール測定用試験片 - Google Patents
高密度リポタンパク質（ｈｄｌ）コレステロール測定用試験片Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 構造が簡単であり、少量の検体量でＨＤＬコ
レステロールを簡単に測定できる試験片を提供する。 【解決手段】 支持体１の上に試薬層２を形成し、この
試薬層２にコレステロール測定用酵素試薬と、高密度リ
ポタンパク質（ＨＤＬ）以外のリポタンパク質に比べて
ＨＤＬに対する可溶化性能が高い第１の界面活性剤と、
ＨＤＬ以外のリポタンパク質の溶解を阻害する第２の界
面活性剤とを含有させる。
レステロールを簡単に測定できる試験片を提供する。 【解決手段】 支持体１の上に試薬層２を形成し、この
試薬層２にコレステロール測定用酵素試薬と、高密度リ
ポタンパク質（ＨＤＬ）以外のリポタンパク質に比べて
ＨＤＬに対する可溶化性能が高い第１の界面活性剤と、
ＨＤＬ以外のリポタンパク質の溶解を阻害する第２の界
面活性剤とを含有させる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、高密度リポタンパ
ク質（ＨＤＬ）コレステロールを測定するための試験片
に関する。
ク質（ＨＤＬ）コレステロールを測定するための試験片
に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＨＤＬコレステロールは、冠動脈疾患の
発症頻度と逆相関するという疫学的見地から、健康診断
や臨床医療の検査等において、重要な測定項目の一つと
なっている。他方、臨床検査等では、大量の検体を処理
する必要があることから、試薬をろ紙等に含浸し、これ
を乾燥させた試験片が、汎用されている。
発症頻度と逆相関するという疫学的見地から、健康診断
や臨床医療の検査等において、重要な測定項目の一つと
なっている。他方、臨床検査等では、大量の検体を処理
する必要があることから、試薬をろ紙等に含浸し、これ
を乾燥させた試験片が、汎用されている。
【０００３】ＨＤＬコレステロールの測定方法として
は、例えば、超遠心分離によりＨＤＬを他のリポタンパ
ク質（例えば、ＬＤＬ、ＶＬＤＬ等）と分離したのち、
酵素を用いて、ＨＤＬコレステロールのみを測定する方
法がある。また、電気泳動により、ＨＤＬを他のリポタ
ンパク質から分離した後、脂質の染色を行い、その発色
強度を測定する方法もある。これらは、一般的な方法で
あるが、操作が煩雑であり、多数の検体を処理すること
が困難であるため、臨床検査等で実施されることはな
い。このため、多数の検体を処理可能なＨＤＬコレステ
ロールの測定方法が、種々提案されており、一部で実施
されている。これらの方法を以下に示す。
は、例えば、超遠心分離によりＨＤＬを他のリポタンパ
ク質（例えば、ＬＤＬ、ＶＬＤＬ等）と分離したのち、
酵素を用いて、ＨＤＬコレステロールのみを測定する方
法がある。また、電気泳動により、ＨＤＬを他のリポタ
ンパク質から分離した後、脂質の染色を行い、その発色
強度を測定する方法もある。これらは、一般的な方法で
あるが、操作が煩雑であり、多数の検体を処理すること
が困難であるため、臨床検査等で実施されることはな
い。このため、多数の検体を処理可能なＨＤＬコレステ
ロールの測定方法が、種々提案されており、一部で実施
されている。これらの方法を以下に示す。
【０００４】例えば、コレステロールエステラーゼおよ
びコレステロールオキシダーゼを化学修飾し、シクロデ
キストリン等の包接化合物の存在下、ＨＤＬ中のコレス
テロールを特異的に捕らえる方法がある（特開平７−３
０１６３６号公報）。また、検体に凝集剤を加え、ＨＤ
Ｌ以外のリポタンパク質を凝集沈殿させ、上清にあるＨ
ＤＬコレステロールを測定する方法がある（例えば、特
開平８−１３１１９７号公報、特許第２６０００６５号
公報、特開平８−２０１３９３号公報、特許第２７９９
８３５号公報）。そして、界面活性剤を使用し、ＨＤＬ
コレステロールと酵素とが特異的に反応する時間を作り
出し、この時間帯において、ＨＤＬコレステロールを測
定する方法がある（特開平１１−５６３９５号公報）。
しかしながら、これらは、液系の測定方法であり、乾燥
系（ドライ系）の測定方法である試験片にそのまま適用
することはできない。
びコレステロールオキシダーゼを化学修飾し、シクロデ
キストリン等の包接化合物の存在下、ＨＤＬ中のコレス
テロールを特異的に捕らえる方法がある（特開平７−３
０１６３６号公報）。また、検体に凝集剤を加え、ＨＤ
Ｌ以外のリポタンパク質を凝集沈殿させ、上清にあるＨ
ＤＬコレステロールを測定する方法がある（例えば、特
開平８−１３１１９７号公報、特許第２６０００６５号
公報、特開平８−２０１３９３号公報、特許第２７９９
８３５号公報）。そして、界面活性剤を使用し、ＨＤＬ
コレステロールと酵素とが特異的に反応する時間を作り
出し、この時間帯において、ＨＤＬコレステロールを測
定する方法がある（特開平１１−５６３９５号公報）。
しかしながら、これらは、液系の測定方法であり、乾燥
系（ドライ系）の測定方法である試験片にそのまま適用
することはできない。
【０００５】試験片を用いた測定方法として、前記の凝
集反応を利用した測定方法がある（特開平２−２１０２
６５号公報、特開平３−９９２６８号公報等）。しかし
ながら、この方法では、ろ過分離機構等が必要となって
試験片の構造が複雑となり、また、多量の検体量を必要
とするという問題がある。
集反応を利用した測定方法がある（特開平２−２１０２
６５号公報、特開平３−９９２６８号公報等）。しかし
ながら、この方法では、ろ過分離機構等が必要となって
試験片の構造が複雑となり、また、多量の検体量を必要
とするという問題がある。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
事情に鑑みなされたもので、構造が簡単であり、少量の
検体量でＨＤＬコレステロールを簡単に測定できる試験
片の提供をその目的とする。
事情に鑑みなされたもので、構造が簡単であり、少量の
検体量でＨＤＬコレステロールを簡単に測定できる試験
片の提供をその目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】前記目的を達成するため
に、本発明のＨＤＬコレステロール測定用試験片は、コ
レステロール測定用酵素試薬と、高密度リポタンパク質
（ＨＤＬ）以外のリポタンパク質に比べてＨＤＬに対す
る可溶化性能が高い第１の界面活性剤と、ＨＤＬ以外の
リポタンパク質の溶解を阻害する第２の界面活性剤とを
有する試験片である。
に、本発明のＨＤＬコレステロール測定用試験片は、コ
レステロール測定用酵素試薬と、高密度リポタンパク質
（ＨＤＬ）以外のリポタンパク質に比べてＨＤＬに対す
る可溶化性能が高い第１の界面活性剤と、ＨＤＬ以外の
リポタンパク質の溶解を阻害する第２の界面活性剤とを
有する試験片である。
【０００８】このように、本発明の試験片は、前記２種
類の界面活性剤を有することにより、コレステロール測
定用酵素試薬で簡単にＨＤＬコレステロールを特異的に
測定することが可能である。また、この試験片では、凝
集反応等の特殊な反応を利用しないから、特別な構造を
とる必要も無く、簡単な構造が可能であり、検体量も少
量でよい。
類の界面活性剤を有することにより、コレステロール測
定用酵素試薬で簡単にＨＤＬコレステロールを特異的に
測定することが可能である。また、この試験片では、凝
集反応等の特殊な反応を利用しないから、特別な構造を
とる必要も無く、簡単な構造が可能であり、検体量も少
量でよい。
【０００９】本発明の試験片は、例えば、支持体の上に
試薬層が形成され、この試薬層が、前記酵素試薬、前記
第１の界面活性剤および前記第２の界面活性剤を有する
という構成をとることができる。この場合、前記試薬層
は、試料供給層と検出層とを有し、前記試料供給層が前
記第１の界面活性剤および第２の界面活性剤を有し、前
記検出層が前記酵素試薬を有するという構成であっても
よい。さらに、前記試料供給層内部において、その上部
（上層）に前記第２の界面活性剤を有し、その下部（下
層）に前記第１の界面活性剤を有する構成であることが
好ましい。また、前記試料供給層が前記酵素試薬の一
部、前記第１の界面活性剤および前記第２の界面活性剤
を有し、前記検出層が、前記酵素試薬の残部を有するこ
とも好ましい。
試薬層が形成され、この試薬層が、前記酵素試薬、前記
第１の界面活性剤および前記第２の界面活性剤を有する
という構成をとることができる。この場合、前記試薬層
は、試料供給層と検出層とを有し、前記試料供給層が前
記第１の界面活性剤および第２の界面活性剤を有し、前
記検出層が前記酵素試薬を有するという構成であっても
よい。さらに、前記試料供給層内部において、その上部
（上層）に前記第２の界面活性剤を有し、その下部（下
層）に前記第１の界面活性剤を有する構成であることが
好ましい。また、前記試料供給層が前記酵素試薬の一
部、前記第１の界面活性剤および前記第２の界面活性剤
を有し、前記検出層が、前記酵素試薬の残部を有するこ
とも好ましい。
【００１０】前記第１の界面活性剤は、ポリオキシエチ
レンアルキレンフェニルエーテルおよびポリオキシエチ
レンアルキレントリベンジルフェニルエーテルが好まし
く、これらは単独で使用してもよいし、併用してもよ
い。このなかで、より好ましいのは、ポリオキシエチレ
ンアルキレントリベンジルフェニルエーテルである。
レンアルキレンフェニルエーテルおよびポリオキシエチ
レンアルキレントリベンジルフェニルエーテルが好まし
く、これらは単独で使用してもよいし、併用してもよ
い。このなかで、より好ましいのは、ポリオキシエチレ
ンアルキレントリベンジルフェニルエーテルである。
【００１１】前記第２の界面活性剤は、ポリオキシエチ
レンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフ
ェニルエーテル、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロ
ピレン縮合体、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫
酸塩およびアルキルベンゼンスルホン酸塩が好ましく、
これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用しても
よい。このなかでより好ましいのは、ポリオキシエチレ
ン−ポリオキシプロピレン縮合体である。
レンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフ
ェニルエーテル、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロ
ピレン縮合体、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫
酸塩およびアルキルベンゼンスルホン酸塩が好ましく、
これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用しても
よい。このなかでより好ましいのは、ポリオキシエチレ
ン−ポリオキシプロピレン縮合体である。
【００１２】前記酵素試薬は、コレステロールエステラ
ーゼおよびコレステロールオキシダーゼの組み合わせ、
またはコレステロールエステラーゼおよびコレステロー
ルデヒドロゲナーゼの組み合わせが好ましい。より好ま
しいのは、前者の組み合わせである。試料が添加され、
試薬と混合された際のコレステロールエステラーゼの割
合は、例えば、５〜１０００Ｕ／ｍＬの範囲、好ましく
は１０〜１００Ｕ／ｍＬの範囲、より好ましくは３０〜
７０Ｕ／ｍＬの範囲である。酵素反応時における全成分
中のコレステロールオキシダーゼの割合は、例えば、５
〜１０００Ｕ／ｍＬの範囲、好ましくは１０〜１００Ｕ
／ｍＬの範囲、より好ましくは２０〜５０Ｕ／ｍＬの範
囲である。酵素反応時における全成分中のコレステロー
ルデヒドロゲナーゼの割合は、例えば、５〜１０００Ｕ
／ｍＬの範囲、好ましくは１０〜１００Ｕ／ｍＬの範
囲、より好ましくは３０〜７０Ｕ／ｍＬの範囲である。
なお、使用する酵素としては市販のものが使用できる
が、その中でも、例えば、本発明の反応原理を鑑みて、
一連の反応を阻害する夾雑物（例えば、第一の界面活性
剤あるいは第二の界面活性剤の特性を損なうような物
質）等を含まない純正品や、遺伝子組換え製品等を好ま
しく使用することができる。また、本発明において、酵
素反応時における全成分中の割合とは、検体（試料）を
添加した場合の全成分中の割合であり、全成分とは、前
記試料、前記酵素試薬、前記第１の界面活性剤および前
記第２の界面活性剤等の酵素反応時に存在する成分全て
をいう。通常、一検体の量は、その種類により予測可能
若しくは決定可能である。
ーゼおよびコレステロールオキシダーゼの組み合わせ、
またはコレステロールエステラーゼおよびコレステロー
ルデヒドロゲナーゼの組み合わせが好ましい。より好ま
しいのは、前者の組み合わせである。試料が添加され、
試薬と混合された際のコレステロールエステラーゼの割
合は、例えば、５〜１０００Ｕ／ｍＬの範囲、好ましく
は１０〜１００Ｕ／ｍＬの範囲、より好ましくは３０〜
７０Ｕ／ｍＬの範囲である。酵素反応時における全成分
中のコレステロールオキシダーゼの割合は、例えば、５
〜１０００Ｕ／ｍＬの範囲、好ましくは１０〜１００Ｕ
／ｍＬの範囲、より好ましくは２０〜５０Ｕ／ｍＬの範
囲である。酵素反応時における全成分中のコレステロー
ルデヒドロゲナーゼの割合は、例えば、５〜１０００Ｕ
／ｍＬの範囲、好ましくは１０〜１００Ｕ／ｍＬの範
囲、より好ましくは３０〜７０Ｕ／ｍＬの範囲である。
なお、使用する酵素としては市販のものが使用できる
が、その中でも、例えば、本発明の反応原理を鑑みて、
一連の反応を阻害する夾雑物（例えば、第一の界面活性
剤あるいは第二の界面活性剤の特性を損なうような物
質）等を含まない純正品や、遺伝子組換え製品等を好ま
しく使用することができる。また、本発明において、酵
素反応時における全成分中の割合とは、検体（試料）を
添加した場合の全成分中の割合であり、全成分とは、前
記試料、前記酵素試薬、前記第１の界面活性剤および前
記第２の界面活性剤等の酵素反応時に存在する成分全て
をいう。通常、一検体の量は、その種類により予測可能
若しくは決定可能である。
【００１３】酵素反応時における全成分中の前記第１の
界面活性剤の割合は、１〜１０質量％の範囲が好まし
く、より好ましくは、３〜７質量％の範囲である。ま
た、酵素反応時における全成分中の前記第２の界面活性
剤の割合は、１〜２０質量％の範囲が好ましく、より好
ましくは７〜１３質量％の範囲である。なお、これらの
割合は、液系の場合にくらべ、かなり高濃度である。前
記第１の界面活性剤（Ａ）と前記第２の界面活性剤
（Ｂ）との質量比（Ａ／Ｂ）は、１／１０〜１／１の範
囲が好ましく、より好ましくは１／３〜２／３の範囲で
ある。また、本発明の試験片は、酵素反応時におけるｐ
ＨがｐＨ６〜９の範囲になるように調整されていること
が好ましい。前記ｐＨのより好ましい範囲はｐＨ７〜８
の範囲であり、最適にはｐＨ７．７である。
界面活性剤の割合は、１〜１０質量％の範囲が好まし
く、より好ましくは、３〜７質量％の範囲である。ま
た、酵素反応時における全成分中の前記第２の界面活性
剤の割合は、１〜２０質量％の範囲が好ましく、より好
ましくは７〜１３質量％の範囲である。なお、これらの
割合は、液系の場合にくらべ、かなり高濃度である。前
記第１の界面活性剤（Ａ）と前記第２の界面活性剤
（Ｂ）との質量比（Ａ／Ｂ）は、１／１０〜１／１の範
囲が好ましく、より好ましくは１／３〜２／３の範囲で
ある。また、本発明の試験片は、酵素反応時におけるｐ
ＨがｐＨ６〜９の範囲になるように調整されていること
が好ましい。前記ｐＨのより好ましい範囲はｐＨ７〜８
の範囲であり、最適にはｐＨ７．７である。
【００１４】本発明の試験片の測定対象となる検体は、
特に制限されず、例えば、全血、血漿、血清等のＨＤＬ
コレステロールを含有する可能性のある検体（特に生物
学的液体）である。
特に制限されず、例えば、全血、血漿、血清等のＨＤＬ
コレステロールを含有する可能性のある検体（特に生物
学的液体）である。
【００１５】
【発明の実施の形態】つぎに、本発明の試験片につい
て、例を挙げながら説明する。
て、例を挙げながら説明する。
【００１６】まず、本発明に使用するコレステロール測
定用酵素試薬は、例えば、前述の２つの組み合わせのも
のが挙げられ、コレステロールエステラーゼとコレステ
ロールオキシダーゼの組み合わせが好ましい。すなわ
ち、ＨＤＬコレステロールは、通常、生体内では、遊離
型状態と、脂肪酸とエステル結合している状態の二種類
に分類されるため、後者をコレステロールエステラーゼ
により、コレステロールと脂肪酸とに加水分解する。そ
して、生じたコレステロールを、コレステロールオキシ
ダーゼで処理すれば、コレステノンと過酸化水素を生じ
る。そして、この過酸化水素を測定すれば、ＨＤＬコレ
ステロール量を求めることができる。過酸化水素の測定
は、電気化学的測定もしくは化学的測定があるが、パー
オキシダーゼ（ＰＯＤ）及び、酸化されると発色する基
質（以下「酸化発色性基質」という）を用いた化学的測
定が好ましい。この場合、前記酸化発色性基質の発色を
光学的手段で測定すればよい。したがって、この場合
は、ＰＯＤと酸化発色性基質も前記酵素試薬に含まれる
ことになる。酵素反応時における全成分中のＰＯＤの割
合は、例えば、５０〜５０００Ｕ／ｍＬの範囲、好まし
くは１００〜１５００Ｕ／ｍＬの範囲、より好ましくは
７００〜８００Ｕ／ｍＬの範囲である。酵素反応時にお
ける全成分中の前記酸化発色性基質の割合は、その種類
等により適宜決定されるが、例えば、１０〜１０００ｍ
ｍｏｌ／Ｌの範囲、好ましくは２０〜２００ｍｍｏｌ／
Ｌの範囲、より好ましくは３０〜７０ｍｍｏｌ／Ｌの範
囲である。
定用酵素試薬は、例えば、前述の２つの組み合わせのも
のが挙げられ、コレステロールエステラーゼとコレステ
ロールオキシダーゼの組み合わせが好ましい。すなわ
ち、ＨＤＬコレステロールは、通常、生体内では、遊離
型状態と、脂肪酸とエステル結合している状態の二種類
に分類されるため、後者をコレステロールエステラーゼ
により、コレステロールと脂肪酸とに加水分解する。そ
して、生じたコレステロールを、コレステロールオキシ
ダーゼで処理すれば、コレステノンと過酸化水素を生じ
る。そして、この過酸化水素を測定すれば、ＨＤＬコレ
ステロール量を求めることができる。過酸化水素の測定
は、電気化学的測定もしくは化学的測定があるが、パー
オキシダーゼ（ＰＯＤ）及び、酸化されると発色する基
質（以下「酸化発色性基質」という）を用いた化学的測
定が好ましい。この場合、前記酸化発色性基質の発色を
光学的手段で測定すればよい。したがって、この場合
は、ＰＯＤと酸化発色性基質も前記酵素試薬に含まれる
ことになる。酵素反応時における全成分中のＰＯＤの割
合は、例えば、５０〜５０００Ｕ／ｍＬの範囲、好まし
くは１００〜１５００Ｕ／ｍＬの範囲、より好ましくは
７００〜８００Ｕ／ｍＬの範囲である。酵素反応時にお
ける全成分中の前記酸化発色性基質の割合は、その種類
等により適宜決定されるが、例えば、１０〜１０００ｍ
ｍｏｌ／Ｌの範囲、好ましくは２０〜２００ｍｍｏｌ／
Ｌの範囲、より好ましくは３０〜７０ｍｍｏｌ／Ｌの範
囲である。
【００１７】前記酸化発色性基質としては、例えば、Ａ
ＬＰＳ［Ｎ−Ｅｔｈｙｌ−Ｎ−（３−ｓｕｌｆｏｐｒｏ
ｐｙｌ）ａｎｉｌｉｎｅ，ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ］、
ＤＡＯＳ［Ｎ−Ｅｔｈｙｌ−Ｎ−（２−ｈｙｄｒｏｘｙ
−３−ｓｕｌｆｏｐｒｏｐｙｌ）−３，５−ｄｉｍｅｔ
ｈｏｘｙａｎｉｌｉｎｅ，ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ］、
ＭＡＯＳ［Ｎ−Ｅｔｈｙｌ−Ｎ−（２−ｈｙｄｒｏｘｙ
−３−ｓｕｌｆｏｐｒｏｐｙｌ）−３，５−ｄｉｍｅｔ
ｈｙｌａｎｉｌｉｎｅ，ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ，ｍｏ
ｎｏｈｙｄｒａｔｅ］、ＴＯＯＳ［Ｎ−Ｅｔｈｙｌ−Ｎ
−（２−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｓｕｌｆｏｐｒｏｐｙ
ｌ）−３−ｍｅｔｈｙｌａｎｉｌｉｎｅ，ｓｏｄｉｕｍ
ｓａｌｔ，ｄｉｈｙｄｒａｔｅ］、フェノール等があ
り、このなかから、測定機器が用いる波長に合う発色を
呈する基質を適宜選択することができる。
ＬＰＳ［Ｎ−Ｅｔｈｙｌ−Ｎ−（３−ｓｕｌｆｏｐｒｏ
ｐｙｌ）ａｎｉｌｉｎｅ，ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ］、
ＤＡＯＳ［Ｎ−Ｅｔｈｙｌ−Ｎ−（２−ｈｙｄｒｏｘｙ
−３−ｓｕｌｆｏｐｒｏｐｙｌ）−３，５−ｄｉｍｅｔ
ｈｏｘｙａｎｉｌｉｎｅ，ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ］、
ＭＡＯＳ［Ｎ−Ｅｔｈｙｌ−Ｎ−（２−ｈｙｄｒｏｘｙ
−３−ｓｕｌｆｏｐｒｏｐｙｌ）−３，５−ｄｉｍｅｔ
ｈｙｌａｎｉｌｉｎｅ，ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ，ｍｏ
ｎｏｈｙｄｒａｔｅ］、ＴＯＯＳ［Ｎ−Ｅｔｈｙｌ−Ｎ
−（２−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｓｕｌｆｏｐｒｏｐｙ
ｌ）−３−ｍｅｔｈｙｌａｎｉｌｉｎｅ，ｓｏｄｉｕｍ
ｓａｌｔ，ｄｉｈｙｄｒａｔｅ］、フェノール等があ
り、このなかから、測定機器が用いる波長に合う発色を
呈する基質を適宜選択することができる。
【００１８】前記第１の界面活性剤は、ＨＤＬ以外のリ
ポタンパク質（ＬＤＬやＶＬＤＬ等）に比べＨＤＬに対
する可溶化性能が高いものであれば、特に制限されな
い。この第１の界面活性剤は、ＨＤＬに内包されるコレ
ステロール若しくはコレステロールエステルを可溶化す
る働きを有し、その結果として、コレステロール若しく
はそのエステルと前記酵素試薬の反応を促進することに
なる。この第１の界面活性剤は、市販品を使用してもよ
い。ポリオキシエチレンアルキレンフェニルエーテルの
市販品としては、例えば、商品名「エマルゲンＡ−６
０」（花王社製）等があり、ポリオキシエチレンアルキ
レントリベンジルフェニルエーテルの市販品としては、
商品名「エマルゲンＢ６６」（花王社製）等がある。
ポタンパク質（ＬＤＬやＶＬＤＬ等）に比べＨＤＬに対
する可溶化性能が高いものであれば、特に制限されな
い。この第１の界面活性剤は、ＨＤＬに内包されるコレ
ステロール若しくはコレステロールエステルを可溶化す
る働きを有し、その結果として、コレステロール若しく
はそのエステルと前記酵素試薬の反応を促進することに
なる。この第１の界面活性剤は、市販品を使用してもよ
い。ポリオキシエチレンアルキレンフェニルエーテルの
市販品としては、例えば、商品名「エマルゲンＡ−６
０」（花王社製）等があり、ポリオキシエチレンアルキ
レントリベンジルフェニルエーテルの市販品としては、
商品名「エマルゲンＢ６６」（花王社製）等がある。
【００１９】前記第２の界面活性剤は、ＨＤＬ以外のリ
ポタンパク質（ＬＤＬやＶＬＤＬ等）の溶解を阻害する
ものであれば、特に制限されない。なお、この第２の界
面活性剤が溶解を阻害することにより、コレステロール
若しくはそのエステルと前記酵素試薬との反応を阻害す
ることになる。この第２の界面活性剤としては、前述の
ものが好ましく使用でき、例えば、ポリオキシエチレン
アルキルエーテルとしては、ポリオキシエチレンセチル
エーテル（例えば、商品名「エマルゲン２２０」花王社
製）が、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル
としては、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル
（例えば、商品名「エマルゲン９１３」花王社製）が、
ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン縮合物とし
ては、商品名「プルロニックＦ−８８」（旭電化社製）
が、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩として
は、ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウ
ム（例えば、商品名「エマール２０Ｃ」花王社製）が、
アルキルベンゼンスルホン酸塩としては、ドデシルベン
ゼンスルホン酸ナトリウムが、それぞれ好ましく使用で
きる。これらは単独で、若しくは2種類以上で併用でき
る。
ポタンパク質（ＬＤＬやＶＬＤＬ等）の溶解を阻害する
ものであれば、特に制限されない。なお、この第２の界
面活性剤が溶解を阻害することにより、コレステロール
若しくはそのエステルと前記酵素試薬との反応を阻害す
ることになる。この第２の界面活性剤としては、前述の
ものが好ましく使用でき、例えば、ポリオキシエチレン
アルキルエーテルとしては、ポリオキシエチレンセチル
エーテル（例えば、商品名「エマルゲン２２０」花王社
製）が、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル
としては、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル
（例えば、商品名「エマルゲン９１３」花王社製）が、
ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン縮合物とし
ては、商品名「プルロニックＦ−８８」（旭電化社製）
が、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩として
は、ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウ
ム（例えば、商品名「エマール２０Ｃ」花王社製）が、
アルキルベンゼンスルホン酸塩としては、ドデシルベン
ゼンスルホン酸ナトリウムが、それぞれ好ましく使用で
きる。これらは単独で、若しくは2種類以上で併用でき
る。
【００２０】このように、第１の界面活性剤および第２
の界面活性剤を併用することにより、ＨＤＬコレステロ
ールと前記酵素試薬とが特異的に反応する時間帯が発生
し、この時間帯に測定すれば、ＨＤＬコレステロールを
特異的に測定することができる。前記時間帯は、反応開
始後（検体添加後）から、例えば、１分経過後〜２０分
経過後の間であり、好ましくは３分経過後〜１５分経過
後の間であり、より好ましくは５分経過後〜１０分経過
後の間である。なお、本発明の試験片は、前記酵素試
薬、第１の界面活性剤および第２の界面活性剤に加え、
必要に応じ、酸化防止剤、還元防止剤、干渉物質除去試
薬等のその他の添加剤を有していてもよい。このような
添加剤の配合割合は、前記酵素試薬、第１の界面活性剤
および第２の界面活性剤の機能を損なわないような範囲
である。
の界面活性剤を併用することにより、ＨＤＬコレステロ
ールと前記酵素試薬とが特異的に反応する時間帯が発生
し、この時間帯に測定すれば、ＨＤＬコレステロールを
特異的に測定することができる。前記時間帯は、反応開
始後（検体添加後）から、例えば、１分経過後〜２０分
経過後の間であり、好ましくは３分経過後〜１５分経過
後の間であり、より好ましくは５分経過後〜１０分経過
後の間である。なお、本発明の試験片は、前記酵素試
薬、第１の界面活性剤および第２の界面活性剤に加え、
必要に応じ、酸化防止剤、還元防止剤、干渉物質除去試
薬等のその他の添加剤を有していてもよい。このような
添加剤の配合割合は、前記酵素試薬、第１の界面活性剤
および第２の界面活性剤の機能を損なわないような範囲
である。
【００２１】つぎに、本発明の試験片の構造の一例を図
１の断面図に示す。
１の断面図に示す。
【００２２】図１（Ａ）の試験片は、支持体１の上に試
薬層２が形成されているという構成である。この試薬層
２に、前記酵素試薬、前記第１の界面活性剤および前記
第２の界面活性剤が含まれる。前記支持体１は、例え
ば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリスチ
レン、ポリエステル、酢酸セルロース等の樹脂を用いて
製造でき、このなかでもＰＥＴが好ましい。支持体１の
厚みは、特に制限されないが、例えば、０．１〜１ｍｍ
の範囲、好ましくは０．１〜０．５ｍｍの範囲、より好
ましくは０．２〜０．３ｍｍの範囲である。また、試薬
層２は、例えば、前記酵素試薬、前記第１の界面活性
剤、前記第２の界面活性剤および親水性ポリマーを溶媒
に溶解して混合し、これを塗布し、その後乾燥させれば
作製できる。前記親水性ポリマーとしては、例えば、ポ
リビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、
メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリアクリ
ル酸、ゼラチン、酸加水分解ゼラチン、ポリアクリルア
ミド、アガロース等があげられる。また、前記溶媒とし
ては、例えば、リン酸緩衝液、グッドの緩衝液、トリス
塩酸緩衝液があげられ、このなかでも、グッドの緩衝液
が好ましい。グッドの緩衝液としては、例えば、ＰＩＰ
ＥＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＴＡＰＳＯ、
ＭＥＳが好ましく、より好ましくはＴＥＳである。酵素
反応時におけるｐＨが前記所定の範囲になるように、前
記緩衝液のｐＨは、ｐＨ６〜９の範囲に調整することが
好ましく、より好ましくはｐＨ７〜８の範囲に調整する
ことであり、最適にはｐＨ７．７に調整することであ
る。前記親水性ポリマーの配合割合は、塗布溶液全体に
対し、例えば、０〜４０質量％の範囲であり、好ましく
は１０〜３０質量％の範囲であり、その種類により適宜
調整できる。前記酵素試薬、前記第１の界面活性剤およ
び前記第２の界面活性剤などの試薬類は、前述の割合に
なるように予め調整して前記溶媒に配合する。塗布の方
法も特に制限されず、例えば、刷毛等を用いる方法、ス
プレーコート法、ロールコーターを用いる方法、ディッ
ピング法等がある。試薬層２の厚みは、例えば、５０〜
２５０μｍの範囲であり、好ましくは８０〜２００μｍ
の範囲であり、より好ましくは１００〜１５０μｍの範
囲である。試薬層２は、前記成分の他に、必要に応じ、
酸化防止剤等の前述の添加剤を含んでいてもよい。ま
た、この試験片の形状は特に制限されないが、通常は板
状もしくは短冊状である。短冊状の場合の大きさは、例
えば、全長５０〜１５０ｍｍの範囲で幅３〜１５ｍｍの
範囲、好ましくは、全長６０〜１００ｍｍの範囲で幅５
〜１０ｍｍの範囲である。
薬層２が形成されているという構成である。この試薬層
２に、前記酵素試薬、前記第１の界面活性剤および前記
第２の界面活性剤が含まれる。前記支持体１は、例え
ば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリスチ
レン、ポリエステル、酢酸セルロース等の樹脂を用いて
製造でき、このなかでもＰＥＴが好ましい。支持体１の
厚みは、特に制限されないが、例えば、０．１〜１ｍｍ
の範囲、好ましくは０．１〜０．５ｍｍの範囲、より好
ましくは０．２〜０．３ｍｍの範囲である。また、試薬
層２は、例えば、前記酵素試薬、前記第１の界面活性
剤、前記第２の界面活性剤および親水性ポリマーを溶媒
に溶解して混合し、これを塗布し、その後乾燥させれば
作製できる。前記親水性ポリマーとしては、例えば、ポ
リビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、
メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリアクリ
ル酸、ゼラチン、酸加水分解ゼラチン、ポリアクリルア
ミド、アガロース等があげられる。また、前記溶媒とし
ては、例えば、リン酸緩衝液、グッドの緩衝液、トリス
塩酸緩衝液があげられ、このなかでも、グッドの緩衝液
が好ましい。グッドの緩衝液としては、例えば、ＰＩＰ
ＥＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＴＡＰＳＯ、
ＭＥＳが好ましく、より好ましくはＴＥＳである。酵素
反応時におけるｐＨが前記所定の範囲になるように、前
記緩衝液のｐＨは、ｐＨ６〜９の範囲に調整することが
好ましく、より好ましくはｐＨ７〜８の範囲に調整する
ことであり、最適にはｐＨ７．７に調整することであ
る。前記親水性ポリマーの配合割合は、塗布溶液全体に
対し、例えば、０〜４０質量％の範囲であり、好ましく
は１０〜３０質量％の範囲であり、その種類により適宜
調整できる。前記酵素試薬、前記第１の界面活性剤およ
び前記第２の界面活性剤などの試薬類は、前述の割合に
なるように予め調整して前記溶媒に配合する。塗布の方
法も特に制限されず、例えば、刷毛等を用いる方法、ス
プレーコート法、ロールコーターを用いる方法、ディッ
ピング法等がある。試薬層２の厚みは、例えば、５０〜
２５０μｍの範囲であり、好ましくは８０〜２００μｍ
の範囲であり、より好ましくは１００〜１５０μｍの範
囲である。試薬層２は、前記成分の他に、必要に応じ、
酸化防止剤等の前述の添加剤を含んでいてもよい。ま
た、この試験片の形状は特に制限されないが、通常は板
状もしくは短冊状である。短冊状の場合の大きさは、例
えば、全長５０〜１５０ｍｍの範囲で幅３〜１５ｍｍの
範囲、好ましくは、全長６０〜１００ｍｍの範囲で幅５
〜１０ｍｍの範囲である。
【００２３】この試験片は、例えば、つぎのようにして
使用する。まず、試薬層２の上から、血液等の検体を滴
下する。滴下された検体は、試薬層２中の試薬と反応す
るが、第１の界面活性剤および第２の界面活性剤の作用
により、ＨＤＬコレステロールが特異的に前記酵素試薬
と反応する時間帯が生じる。そして、反応開始後（滴下
後）、前述の時間帯の間に測定する。試薬層２にＰＯＤ
と前記酸化発色性基質が含まれている場合は、分光光度
計や反射率計等の光学的測定機器により、前記基質の発
色を測定する。試料が血漿や血清の場合、支持体１が光
透過性の場合は、支持体１側又は試薬層２側から光照射
して透過光や反射光を測定することができ、支持体１が
光非透過性の場合は、試薬層２側から光照射して反射率
等を測定することが好ましい。なお、後述のように、全
血を試料とする場合には、赤血球の着色による測光妨害
のため、検出層と試料供給層との間に公知の血球遮蔽層
および光反射層を設け、光透過性支持体を用い、この支
持体側から測定することが好ましい。
使用する。まず、試薬層２の上から、血液等の検体を滴
下する。滴下された検体は、試薬層２中の試薬と反応す
るが、第１の界面活性剤および第２の界面活性剤の作用
により、ＨＤＬコレステロールが特異的に前記酵素試薬
と反応する時間帯が生じる。そして、反応開始後（滴下
後）、前述の時間帯の間に測定する。試薬層２にＰＯＤ
と前記酸化発色性基質が含まれている場合は、分光光度
計や反射率計等の光学的測定機器により、前記基質の発
色を測定する。試料が血漿や血清の場合、支持体１が光
透過性の場合は、支持体１側又は試薬層２側から光照射
して透過光や反射光を測定することができ、支持体１が
光非透過性の場合は、試薬層２側から光照射して反射率
等を測定することが好ましい。なお、後述のように、全
血を試料とする場合には、赤血球の着色による測光妨害
のため、検出層と試料供給層との間に公知の血球遮蔽層
および光反射層を設け、光透過性支持体を用い、この支
持体側から測定することが好ましい。
【００２４】つぎに、図１（Ｂ）の試験片では、支持体
１の上に、検出層２ｂが形成され、この上に試料供給層
２ａが形成され、これら両層で試薬層２が構成されてい
る。前記試料供給層２ａには、第１の界面活性剤および
第２の界面活性剤が含有されており、前記検出層２ｂに
は、前記酵素試薬が含有されている。この試薬層２は、
例えば、つぎのようにして形成できる。まず、前記酵素
試薬および親水性ポリマーを溶媒に溶解して調製した溶
液を、支持体１の上に塗布して乾燥し、検出層２ｂを形
成する。他方、第１の界面活性剤、第２の界面活性剤を
溶解した溶液を多孔性部材に含浸させ乾燥させる。そし
て、この多孔性部材を前記検出層２の上に重ね両者をラ
ミネートすると、前記多孔性部材が試料供給層２ａとな
り、試薬層２が形成される。この場合の前記親水性ポリ
マー、前記溶媒の種類や濃度などは、前述と同様であ
る。このように、試料供給層２ａは、多孔性であること
が好ましい。前記多孔性部材としては、例えば、編物が
使用できる。編物としては、例えば、ポリエチレン製編
物、ポリエステル製編物、ポリテトラフルオロエチレン
製編物、ポリスルホン製編物、ポリプロピレン製編物、
ポリビニリデンジフロライド製編物、セルロース混合エ
ステル製編物、ガラスファイバー製編物等がある。前記
試料供給層２ａの厚みは、例えば、５０〜４００μｍの
範囲、好ましくは２００〜３００μｍの範囲、より好ま
しくは２２０〜２７０μｍの範囲である。検出層２ｂの
厚みは、例えば、５〜１００μｍの範囲であり、好まし
くは５〜５０μｍの範囲であり、より好ましくは５〜２
０μｍの範囲である。この試験片の使用方法も前述の例
と同じである。なお、この試験片では、検体が、第１の
界面活性剤および第２の界面活性剤に接触した後、前記
酵素試薬に接触するので、ＨＤＬコレステロールをより
特異的に測定することが可能となる。また、前述のよう
に、前記試料供給層が前記酵素試薬の一部および前記２
種類の界面活性剤を有し、前記検出層が、前記酵素試薬
の残部を有することも好ましい。例えば、コレステロー
ルエステラーゼ、コレステロールオキシダーゼ、前記第
１の界面活性剤および前記第２の界面活性剤を試料供給
層に含有させ、ＰＯＤ、酸化発色性基質等の酵素試薬の
残りを検出層に含有させることができる。
１の上に、検出層２ｂが形成され、この上に試料供給層
２ａが形成され、これら両層で試薬層２が構成されてい
る。前記試料供給層２ａには、第１の界面活性剤および
第２の界面活性剤が含有されており、前記検出層２ｂに
は、前記酵素試薬が含有されている。この試薬層２は、
例えば、つぎのようにして形成できる。まず、前記酵素
試薬および親水性ポリマーを溶媒に溶解して調製した溶
液を、支持体１の上に塗布して乾燥し、検出層２ｂを形
成する。他方、第１の界面活性剤、第２の界面活性剤を
溶解した溶液を多孔性部材に含浸させ乾燥させる。そし
て、この多孔性部材を前記検出層２の上に重ね両者をラ
ミネートすると、前記多孔性部材が試料供給層２ａとな
り、試薬層２が形成される。この場合の前記親水性ポリ
マー、前記溶媒の種類や濃度などは、前述と同様であ
る。このように、試料供給層２ａは、多孔性であること
が好ましい。前記多孔性部材としては、例えば、編物が
使用できる。編物としては、例えば、ポリエチレン製編
物、ポリエステル製編物、ポリテトラフルオロエチレン
製編物、ポリスルホン製編物、ポリプロピレン製編物、
ポリビニリデンジフロライド製編物、セルロース混合エ
ステル製編物、ガラスファイバー製編物等がある。前記
試料供給層２ａの厚みは、例えば、５０〜４００μｍの
範囲、好ましくは２００〜３００μｍの範囲、より好ま
しくは２２０〜２７０μｍの範囲である。検出層２ｂの
厚みは、例えば、５〜１００μｍの範囲であり、好まし
くは５〜５０μｍの範囲であり、より好ましくは５〜２
０μｍの範囲である。この試験片の使用方法も前述の例
と同じである。なお、この試験片では、検体が、第１の
界面活性剤および第２の界面活性剤に接触した後、前記
酵素試薬に接触するので、ＨＤＬコレステロールをより
特異的に測定することが可能となる。また、前述のよう
に、前記試料供給層が前記酵素試薬の一部および前記２
種類の界面活性剤を有し、前記検出層が、前記酵素試薬
の残部を有することも好ましい。例えば、コレステロー
ルエステラーゼ、コレステロールオキシダーゼ、前記第
１の界面活性剤および前記第２の界面活性剤を試料供給
層に含有させ、ＰＯＤ、酸化発色性基質等の酵素試薬の
残りを検出層に含有させることができる。
【００２５】図１（Ｂ）に示される試験片の例におい
て、試料供給層２ａは、その内部の上層に第２の界面活
性剤を含有し、その内部の下層に第１の界面活性剤を含
有していてもよい。この例を図１（Ｃ）に示す。同図に
おいて、２１が試料供給層２ａ上層であり、２２が試料
供給層２ａ下層であり、その他、図１（Ｂ）と同一部分
に同一符号を付している。このようにすれば、検体は、
まず第２の界面活性剤に接触し、ついで第１の界面活性
剤に接触し、そして前記酵素試薬と接触する。このよう
にすれば、さらにＨＤＬコレステロールを特異的に測定
することが可能となる。このような試料供給層２ａは、
例えば、前述のようにして検出層２ｂを形成した後、こ
の上に、第１の界面活性剤と親水性ポリマーを溶剤に溶
解した溶液を塗布して乾燥し、この上に、第２の界面活
性剤と親水性ポリマーを溶剤に溶解した溶液を塗布して
乾燥すれば形成できる。この場合の、親水性ポリマー、
溶媒の種類や濃度等は、前述と同様であり、塗布の方法
も前述と同様である。このとき、溶液を重層する方法の
他に、多孔性部材に第１の界面活性剤を含浸させて下層
を形成し、その片面に第２の界面活性剤を塗布すること
で上層を形成し、前記下層が検出層２ｂに接するように
ラミネートして、図１（Ｃ）に示す試験片を形成するこ
ともできる。
て、試料供給層２ａは、その内部の上層に第２の界面活
性剤を含有し、その内部の下層に第１の界面活性剤を含
有していてもよい。この例を図１（Ｃ）に示す。同図に
おいて、２１が試料供給層２ａ上層であり、２２が試料
供給層２ａ下層であり、その他、図１（Ｂ）と同一部分
に同一符号を付している。このようにすれば、検体は、
まず第２の界面活性剤に接触し、ついで第１の界面活性
剤に接触し、そして前記酵素試薬と接触する。このよう
にすれば、さらにＨＤＬコレステロールを特異的に測定
することが可能となる。このような試料供給層２ａは、
例えば、前述のようにして検出層２ｂを形成した後、こ
の上に、第１の界面活性剤と親水性ポリマーを溶剤に溶
解した溶液を塗布して乾燥し、この上に、第２の界面活
性剤と親水性ポリマーを溶剤に溶解した溶液を塗布して
乾燥すれば形成できる。この場合の、親水性ポリマー、
溶媒の種類や濃度等は、前述と同様であり、塗布の方法
も前述と同様である。このとき、溶液を重層する方法の
他に、多孔性部材に第１の界面活性剤を含浸させて下層
を形成し、その片面に第２の界面活性剤を塗布すること
で上層を形成し、前記下層が検出層２ｂに接するように
ラミネートして、図１（Ｃ）に示す試験片を形成するこ
ともできる。
【００２６】さらに、本発明の試験片は、必要に応じ、
前記試薬層の上に、血球分離層を形成してもよい。これ
は、血球をろ過できるような多孔性部材と、場合により
公知の反射層を配置すればよい。前記多孔性部材として
は、例えば、ガラスフィルターなどの公知の血球分離素
材が使用できる。このように血球分離層を備えていれ
ば、全血をそのまま供給するだけで、血清若しくは血漿
中のＨＤＬコレステロールを測定できる。
前記試薬層の上に、血球分離層を形成してもよい。これ
は、血球をろ過できるような多孔性部材と、場合により
公知の反射層を配置すればよい。前記多孔性部材として
は、例えば、ガラスフィルターなどの公知の血球分離素
材が使用できる。このように血球分離層を備えていれ
ば、全血をそのまま供給するだけで、血清若しくは血漿
中のＨＤＬコレステロールを測定できる。
【００２７】
【実施例】つぎに、実施例について比較例と併せて説明
する。なお、以下において、「Ｋ／Ｓ」値とは、下記式
で計算される変数であり、反射率（Ｒ）を濃度に換算す
る際に使用される。
する。なお、以下において、「Ｋ／Ｓ」値とは、下記式
で計算される変数であり、反射率（Ｒ）を濃度に換算す
る際に使用される。
【００２８】Ｋ／Ｓ＝（１−Ｒ）2／２Ｒ Ｒ：反射率
【００２９】（実施例１）白色ＰＥＴフィルム（厚み１
２５μｍ）の上に、下記組成の検出層形成用の溶液を厚
み１５０μｍで塗布した後、４０℃で１０分間乾燥する
ことで検出層を形成した。一方、ポリエチレン製編物
（厚み２５０μｍ）に下記組成の含浸液を含浸し、４０
℃で１０分間乾燥した。このポリエチレン製編物の片面
に下記塗工含浸液を塗布し、４０℃で１０分間乾燥し
て、試料供給層を形成した。そして、前記検出層表面に
蒸留水を噴霧し、この上に、前記試料供給層を、前記塗
工含浸液塗布面が上になるようにしてラミネートし、４
０℃で１０分間乾燥して、目的とする試験片を作製し
た。なお、この試験片は、図１（Ｃ）に示す構成であ
る。下記組成は、５μＬの試料を供給した際の最終濃度
（酵素反応時の濃度）である。また、この試験片におけ
る酵素反応時のｐＨは７．７である。
２５μｍ）の上に、下記組成の検出層形成用の溶液を厚
み１５０μｍで塗布した後、４０℃で１０分間乾燥する
ことで検出層を形成した。一方、ポリエチレン製編物
（厚み２５０μｍ）に下記組成の含浸液を含浸し、４０
℃で１０分間乾燥した。このポリエチレン製編物の片面
に下記塗工含浸液を塗布し、４０℃で１０分間乾燥し
て、試料供給層を形成した。そして、前記検出層表面に
蒸留水を噴霧し、この上に、前記試料供給層を、前記塗
工含浸液塗布面が上になるようにしてラミネートし、４
０℃で１０分間乾燥して、目的とする試験片を作製し
た。なお、この試験片は、図１（Ｃ）に示す構成であ
る。下記組成は、５μＬの試料を供給した際の最終濃度
（酵素反応時の濃度）である。また、この試験片におけ
る酵素反応時のｐＨは７．７である。
【００３０】 （含浸液の組成） ＴＥＳバッファー（同仁化学社製、ｐＨ７．７） ３０ｍｍｏｌ／Ｌ コレステロールエステラーゼ ３９Ｕ／ｍＬ コレステロールオキシダーゼ ２３Ｕ／ｍＬ ポリオキシエチレンアルキレントリベンジルフェニルエーテル ５質量％ （花王社製、商品名：エマルゲンＢ６６）
【００３１】 （塗工含浸液の組成） ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン縮合物 １０質量％ （旭電化社製、商品名：プルロニックＦ−８８）
【００３２】 （検出層形成用溶液の組成） ＰＯＤ（東洋紡社製） ６９３Ｕ／ｍＬ ４−アミノアンチピリン（キシダ化学社製） ４３ｍｍｏｌ／Ｌ ＤＡＯＳ（同仁化学社製） ５１ｍｍｏｌ／Ｌ ＴＥＳバッファー（同仁化学社製、ｐＨ７．７） ３００ｍｍｏｌ／Ｌ
【００３３】（比較例１および比較例２）ポリオキシエ
チレンアルキレントリベンジルフェニルエーテル（第１
の界面活性剤）およびポリオキシエチレン−ポリオキシ
プロピレン縮合物（第２の界面活性剤）のいずれも使用
しない以外は、実施例１と同様にして試験片を作製した
（比較例１）。また、前記第１の界面活性剤のみを使用
（前記第２の界面活性剤は不使用）した以外は、実施例
１と同様にして試験片を作製した（比較例２）。
チレンアルキレントリベンジルフェニルエーテル（第１
の界面活性剤）およびポリオキシエチレン−ポリオキシ
プロピレン縮合物（第２の界面活性剤）のいずれも使用
しない以外は、実施例１と同様にして試験片を作製した
（比較例１）。また、前記第１の界面活性剤のみを使用
（前記第２の界面活性剤は不使用）した以外は、実施例
１と同様にして試験片を作製した（比較例２）。
【００３４】このようにして得られた、実施例１、比較
例１および比較例２の試験片について、血清を検体とし
て、試験片の反射率（タイムコース）を、専用反射率計
（商品名スポットケム、アークレイ株式会社製）を用い
て測定した。測定波長は、６１０ｎｍである。この結果
を、図２のグラフに示す。このグラフにおいて、横軸が
測定時間（秒）であり、縦軸が前記Ｋ／Ｓ値である。
例１および比較例２の試験片について、血清を検体とし
て、試験片の反射率（タイムコース）を、専用反射率計
（商品名スポットケム、アークレイ株式会社製）を用い
て測定した。測定波長は、６１０ｎｍである。この結果
を、図２のグラフに示す。このグラフにおいて、横軸が
測定時間（秒）であり、縦軸が前記Ｋ／Ｓ値である。
【００３５】図２のグラフから明らかなように、第１の
界面活性剤と第２の界面活性剤とを併用している実施例
１の試験片では、早い時間で反応が終点に達し、ＨＤＬ
コレステロールのみが測定できていることが分かる。こ
れに対し、前記２つの界面活性剤を使用していない比較
例１の試験片では、反応が低く実質的にＨＤＬコレステ
ロールの測定ができなかった。また、第１の界面活性剤
のみを使用した比較例２の試験片では、ＨＤＬコレステ
ロールのみを特異的に測定できなかった。
界面活性剤と第２の界面活性剤とを併用している実施例
１の試験片では、早い時間で反応が終点に達し、ＨＤＬ
コレステロールのみが測定できていることが分かる。こ
れに対し、前記２つの界面活性剤を使用していない比較
例１の試験片では、反応が低く実質的にＨＤＬコレステ
ロールの測定ができなかった。また、第１の界面活性剤
のみを使用した比較例２の試験片では、ＨＤＬコレステ
ロールのみを特異的に測定できなかった。
【００３６】（実施例２）第１の界面活性剤および第２
の界面活性剤の最終濃度を、下記表１の割合に調整した
以外は、実施例１と同様にして3種類の試験片（Ａ、
Ｂ、Ｃ）を作製した。これらの試験片を用い、ＨＤＬコ
レステロール濃度が既知の血清試料６０検体について、
実施例１と同様にして反射率を測定し、これから前記
「Ｋ／Ｓ」値を用いてＨＤＬコレステロール量を求め
た。そして、この実測値濃度と前記既知濃度との相関関
係を調べた。この結果も同表に示す。
の界面活性剤の最終濃度を、下記表１の割合に調整した
以外は、実施例１と同様にして3種類の試験片（Ａ、
Ｂ、Ｃ）を作製した。これらの試験片を用い、ＨＤＬコ
レステロール濃度が既知の血清試料６０検体について、
実施例１と同様にして反射率を測定し、これから前記
「Ｋ／Ｓ」値を用いてＨＤＬコレステロール量を求め
た。そして、この実測値濃度と前記既知濃度との相関関
係を調べた。この結果も同表に示す。
【００３７】 （表１） 第１の界面活性剤 第２の界面活性剤 相関係数（ｒ） 試験片Ａ １質量％ １質量％ ０．８７ 試験片Ｂ ２質量％ ２質量％ ０．９４ 試験片Ｃ ４質量％ ４質量％ ０．９７
【００３８】前記表１に示すように、３つの試験片Ａ、
ＢおよびＣにおいて、高い相関係数が得られた。
ＢおよびＣにおいて、高い相関係数が得られた。
【００３９】（実施例３）実施例１と同じ試験片を作製
した。この試験片を用い、６０検体の血清試料中のＨＤ
Ｌコレステロールを実施例２と同様にして測定した。ま
た、併せて、前記試料中のＨＤＬコレステロールを下記
の凝集法および直接法により測定した。そして、前記試
験片による測定値と、前記凝集法および前記直接法によ
る測定値との相関関係を調べた。前記試験片の測定値と
前記凝集法の測定値との相関関係を図３のグラフに示
し、前記試験片の測定値と前記直接法の測定値との相関
関係を図４のグラフに示す。
した。この試験片を用い、６０検体の血清試料中のＨＤ
Ｌコレステロールを実施例２と同様にして測定した。ま
た、併せて、前記試料中のＨＤＬコレステロールを下記
の凝集法および直接法により測定した。そして、前記試
験片による測定値と、前記凝集法および前記直接法によ
る測定値との相関関係を調べた。前記試験片の測定値と
前記凝集法の測定値との相関関係を図３のグラフに示
し、前記試験片の測定値と前記直接法の測定値との相関
関係を図４のグラフに示す。
【００４０】（凝集法）市販の血清ＨＤＬコレステロー
ル測定キット（商品名ＨＤＬ−Ｃ５５５、栄研化学株式
会社製）を用い、その使用方法に従い測定を行った。試
薬と検体を混和した後に、３０００ｒｐｍで１０分間の
遠心分離を行った。
ル測定キット（商品名ＨＤＬ−Ｃ５５５、栄研化学株式
会社製）を用い、その使用方法に従い測定を行った。試
薬と検体を混和した後に、３０００ｒｐｍで１０分間の
遠心分離を行った。
【００４１】（直接法）市販の血清ＨＤＬコレステロー
ル測定キット（商品名コレステストＨＤＬ、第一化学薬
品株式会社製）を用い、その使用方法に従い測定を行っ
た。
ル測定キット（商品名コレステストＨＤＬ、第一化学薬
品株式会社製）を用い、その使用方法に従い測定を行っ
た。
【００４２】図３のグラフに示すように、前記試験片の
測定値と前記凝集法の測定値とは、良好な相関関係を示
し、その相関係数はｒ＝０．９６２であった。同様に、
図４のグラフに示すように、前記試験片の測定値と前記
直接法の測定値とは、良好な相関関係を示し、その相関
係数はｒ＝０．９７４であった。
測定値と前記凝集法の測定値とは、良好な相関関係を示
し、その相関係数はｒ＝０．９６２であった。同様に、
図４のグラフに示すように、前記試験片の測定値と前記
直接法の測定値とは、良好な相関関係を示し、その相関
係数はｒ＝０．９７４であった。
【００４３】
【発明の効果】以上のように、本発明の試験片は、構造
が簡単であり、少量の検体量でＨＤＬコレステロールを
簡単に測定できる。したがって、本発明の試験片を用い
れば、数多くの検体を短時間で処理することが可能であ
り、特に、臨床検査において検査の効率化に寄与でき
る。
が簡単であり、少量の検体量でＨＤＬコレステロールを
簡単に測定できる。したがって、本発明の試験片を用い
れば、数多くの検体を短時間で処理することが可能であ
り、特に、臨床検査において検査の効率化に寄与でき
る。
【図１】（Ａ）は、本発明の試験片の一例の構成を示す
断面図であり、（Ｂ）は、本発明の試験片のその他の例
の構成を示す断面図であり、（Ｃ）は、本発明の試験片
のさらにその他の例の構成を示す断面図である。
断面図であり、（Ｂ）は、本発明の試験片のその他の例
の構成を示す断面図であり、（Ｃ）は、本発明の試験片
のさらにその他の例の構成を示す断面図である。
【図２】本発明の試験片のさらにその他の例における反
射率のタイムコースを示すグラフである。
射率のタイムコースを示すグラフである。
【図３】本発明の試験片のさらにその他の例によるＨＤ
Ｌコレステロールの測定値と、凝集法による測定値との
相関関係を示すグラフである。
Ｌコレステロールの測定値と、凝集法による測定値との
相関関係を示すグラフである。
【図４】本発明の試験片のさらにその他の例によるＨＤ
Ｌコレステロールの測定値と、直接法による測定値との
相関関係を示すグラフである。
Ｌコレステロールの測定値と、直接法による測定値との
相関関係を示すグラフである。
１ 支持体 ２ 試薬層 ２ａ 試料供給層 ２ｂ 検出層 ２１ 上層 ２２ 下層
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/92 Ｇ０１Ｎ 33/92 Ｂ (72)発明者 西野 進 京都府京都市南区東九条西明田町57番地 アークレイ株式会社式内 (72)発明者 山口 武広 京都府京都市南区東九条西明田町57番地 アークレイ株式会社内 (72)発明者 日野 浩一 東京都中央区日本橋３丁目13番５号 第一 化学薬品株式会社内 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 CA25 CA26 DA63 FA26 FA29 FB01 FB17 GC11 4B063 QA01 QA19 QQ03 QQ76 QQ89 QR02 QR03 QR04 QR12 QR41 QR52 QR58 QR85 QS12 QS20 QS28 QS36 QX01
Claims (13)
- 【請求項１】 コレステロール測定用酵素試薬と、高密
度リポタンパク質（ＨＤＬ）以外のリポタンパク質に比
べてＨＤＬに対する可溶化性能が高い第１の界面活性剤
と、ＨＤＬ以外のリポタンパク質の溶解を阻害する第２
の界面活性剤とを有するＨＤＬコレステロール測定用試
験片。 - 【請求項２】 支持体の上に試薬層が形成され、この試
薬層が、前記酵素試薬、前記第１の界面活性剤および前
記第２の界面活性剤を有する請求項１記載の試験片。 - 【請求項３】 試薬層が、試料供給層と検出層とを有
し、前記試料供給層が前記第１の界面活性剤および第２
の界面活性剤を有し、前記検出層が前記酵素試薬を有す
る請求項２記載の試験片。 - 【請求項４】 前記試料供給層の上部に前記第２の界面
活性剤を有し、前記試料供給層の下部に前記第１の界面
活性剤を有する請求項３記載の試験片。 - 【請求項５】 前記試料供給層が、前記酵素試薬の一
部、前記第１の界面活性剤および前記第２の界面活性剤
を有し、前記検出層が、前記酵素試薬の残部を有する請
求項３または４記載の試験片。 - 【請求項６】 前記第１の界面活性剤が、ポリオキシエ
チレンアルキレンフェニルエーテルおよびポリオキシエ
チレンアルキレントリベンジルフェニルエーテルの少な
くとも一方の界面活性剤である請求項１〜５のいずれか
一項に記載の試験片。 - 【請求項７】 前記第２の界面活性剤が、ポリオキシエ
チレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキル
フェニルエーテル、ポリオキシエチレン−ポリオキシプ
ロピレン縮合体、ポリオキシエチレンアルキルエーテル
硫酸塩およびアルキルベンゼンスルホン酸塩からなる群
から選択される少なくとも一つの界面活性剤である請求
項１〜６のいずれか一項に記載の試験片。 - 【請求項８】 前記酵素試薬が、コレステロールエステ
ラーゼおよびコレステロールオキシダーゼを含む請求項
１〜７のいずれか一項に記載の試験片。 - 【請求項９】 前記酵素試薬が、コレステロールエステ
ラーゼおよびコレステロールデヒドロゲナーゼを含む請
求項１〜７のいずれか一項に記載の試験片。 - 【請求項１０】 酵素反応時における全成分中の前記第
１の界面活性剤の割合が、１〜１０質量％の範囲である
請求項１〜９のいずれか一項に記載の試験片。 - 【請求項１１】 酵素反応時における全成分中の前記第
２の界面活性剤の割合が、１〜２０質量％の範囲である
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の試験片。 - 【請求項１２】 前記第１の界面活性剤（Ａ）と前記第
２の界面活性剤（Ｂ）との質量比（Ａ／Ｂ）が、１／１
０〜１／１の範囲である請求項１〜１１のいずれか一項
に記載の試験片。 - 【請求項１３】 酵素反応時におけるｐＨがｐＨ６〜９
の範囲になるように調整されている請求項１〜１２のい
ずれか一項に記載の試験片。
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|---|---|---|---|
| JP2000340751A JP3686326B2 (ja) | 2000-11-08 | 2000-11-08 | 高密度リポタンパク質（ｈｄｌ）コレステロール測定用試験片 |
| AU2002212717A AU2002212717A1 (en) | 2000-11-08 | 2001-11-07 | Test piece for assaying high density lipoprotein (hdl) cholesterol |
| US10/415,726 US6939682B2 (en) | 2000-11-08 | 2001-11-07 | Test piece for assaying high density lipoprotein (HDL) cholesterol |
| EP01980994A EP1342792B1 (en) | 2000-11-08 | 2001-11-07 | Test element for assaying high density lipoprotein (hdl) cholesterol |
| CN01818575.4A CN1258601C (zh) | 2000-11-08 | 2001-11-07 | 高密度脂蛋白(hdl)胆固醇测定用试件 |
| PCT/JP2001/009712 WO2002038800A1 (fr) | 2000-11-08 | 2001-11-07 | Dispositif de test permettant de doser le cholesterol hdl (lipoproteine a haute densite) |
| DE60142792T DE60142792D1 (de) | 2000-11-08 | 2001-11-07 | Testvorrichtung zur bestimmung von hdl(high density lipoprotein)-cholesterin |
| US11/184,117 US7575884B2 (en) | 2000-11-08 | 2005-07-19 | Test piece for measuring high-density lipoprotein (HDL) cholesterol |
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|---|---|---|---|
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|---|---|
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|---|---|---|---|
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